Автореферат и диссертация по медицине (14.00.13) на тему:Последовательностьметаболических, иммунных и морфологических изменений при экспериментальном аллергическом полирадикулоневрите

ils

Ш ШСТЕРС1Е0 ЗДРАЕС0ХРЛНЕ1 й 1Я Г0ССШ1СК0Й ФЕДЕРАЦИИ Новосибирский ордена Трудового Красного Знамени медицинский институт

На правах рукописи

АЖИРОВЛ Валентина Михайловна

ПОСЛВДОВATEJ1Ы{ОСПз МЕТАБОЛИЧЕСКИХ, 1ШДОНННХ И ЬОГФОЛСШШШХ ИЗМЕНЕНИИ ЛГИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОМ AJUiEPIUMECKO!/. НСЛНРАЛИИУЛОНЕЕРИТЕ

14.00.13 - Нервные болезни

14.00.16 - Патологическая физиология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Новосибирск .- 1992

Работа выполнена на кафедре нервных болезной Томского государственного медицинского института.

Научные руководители:

доктор медицинских наук, профессор ¡1.И.Командеико доктор медицинских наук, профессор Г.В.Коновалов

Официальные оппонанты:

доктор медицинских наук, профессор БЛ1.Коваленко доктор медицинских наук, профессор Ь.11.<£одещ:ов

Идущая организация:

Ьоснно-надицннская ордена 'Ленина Краснознаменная Академия имени С.М.йирова

Защита состоится " " __ 1992 г.

В___ часов на заседании Специализированного совета

К 064.62.04 по зшцлга диссертаций при Новосибирском ордена Трудового Красного Знамени медицинском институте '/630091, г. Новосибирск, Красный проспект, Ь2/

С диссертацией кошо ознакомиться в библиотеке новосибирского ордена Трудового Красного Знамени медицинского института

Лвгорафераг. |Шосла{ " ^1932 г.

Ученый секретарь Специализированного Совета, 1 кандидат ыедицинских наук

Т.А.Донских

' ГСрОПЗвШ

- • •-

ироолоыа домшдшшзкруоцих заболеваний нервной системы, в той числа инфокцаокно-алларгичэских полирадккудоневритов, является актуальной в современной невропатологии. Частота полирадккулоневритов -lt7 случаев на IÖOOUÜ населения, летальность - а 3-1СЙ ае-

раоолевщих становятся инвалидами /Одннокова В.А., Нере*ин Б.Я., Лзрмков а,А. и др., 1ЭЬУ; Löffel П.в. et al. ,4 1977; Lud. in Н.Г., Tacksnann Wietholter H., Dichgan3 J.t 19Ö4;Schlegel U.,

Cordt Л., ii,C!<3 Я

ü последнее десятилетие рядои авторов отиечен рост заоолэваэ-udcvu ш!ф0йциошо-аллергичаским пояи.радику.чановригом, а еакже длительность воссзановитадьного периода а тяхалыэ последствия в вида вялых парезов, ооуслоздиввэдих шсокуи степень инвалидизацш /двоиович АЛ., 1973, 19УО; Нирадоа H.A., 19Л; Газяоп С., 19й9/. Основная чертой современных форм этого заболевания является медленное, затяжное, стадийное *очбние /йанелнс З.С., 19db/. Apoua гого, крайний полиморфизм клинических проявлений в ряде случаев затрудняет его диагностику.

Мнзния оо этиологии и патогенезе полирадакулоневризоз весьма разноречивы, что существенно сказывается на выоора адекватных народов лечения, широко обсуждаемая в послбдяиа год» аоория агрессивности з отношении миелина иммунных комплексов вызывает возражение ряда авторов /Зуожицкий w.ü., 1970, ^апопорз Ц.Л., 1974, Haurovita f., 19bö/. Однако в литература но приводится фактический ыаеериал, соосновывашдей эти возражения.

Определенный вклад в изучение основных вопросов этнопатогеиз-га деииединизирующих заоолеваний вносяг экспериментальные исследования первичных полирадикулоневритоз> воспроизведенных на различных видах гшвотных. Использование этой модели в значительной степени способствует правильному пониманию механизмов развития патологических изменений, лежащих в основе периаксонального процесса. Однако, несмотря на длительное изучение этой проолеыы, шогие вопроса последовательности патологического процесса в периферической нервной системе при экспериментальном аллергическом полйрадикуло-новрита /Э/iii/, остаются во многом неясными. Проведенные ракаэ экспериментальные исследования /Ашанвпзсов Х.Н., 196а, £аоотлн-ский u.M., Иоффе Б.И., 1975; Коновалов Г.Б., Saitn М.5.,

19В5; Hahn Л.Р., РеаяЬу Т.Е., 1988 и др./ били яосвящеш

изучению отдельных аспектов патологического процесса. Ь литера??-' ре практически не отражена динамика и последовательность метаболических, именных и морфологических нарушений в различные сроки ЗАП. Ьсе вышеизложенное послужило основание» для Проведения комплексного экспериментального исследования.

цель исследования

Изучить последовательность метаболических, иммунных и морфологических изменений при экспериментальном аллергическом полирадикуло-неврите у кроликов в различные периоды заболевания.

Для достижения поставленной цели решались следующие задачи: I. Изучить метаболизм липидов, холестерина, фосфолипидов, а «акке уровень диеновых коньюгатов в спинальных ганглиях и корешках при развитии ЭА11. с. Дать сравнительную характеристику степени выраженности нарушений дипидного ооывна после введения миелина в полном адызванте шрайн-да в различные сроки патологичаского процесса, о. Исследовать сроки накопления иммуноглобулинов у животных с &АД

в различных отделах периферической нервной системы. 4. йыявить динамику изменений активности щелочной фосфатазы в

чувствительных ганглиях кроликов в различные периоды ВАЛ. о. Изучить морфологические проявления аллергического полцрадикуло-

неврита у кроликов в инкубационный период и в разгар оолезни. о. Проследить динамику и последовательность развития биохимических, иммунных и морфологических изменений при <Ы1.

Научная новизна

¿¡первые в изучении патогенеза экспериментального аллергического по-лирадикулоневрита получены данные, отражайте развитие ЗА11 с ранних его стадий и кончая возникновением развернутой картины заболевания. Цри этом прослежена последовательность наступления и характер метаболических, иммунных и морфологических изменений в периферической нервной системе.

Определенную новизну представляет изучение липидного метаболизма спинальных ганглиев и кореаков при ЭлЛ. и помощью современных биохимических методов дана детальная характеристика динамики изменений уровня липидных и фосфолипидных компонентов в ответ на введение антигенного раздражителя. При этом выявлено, что нарушения

t>

в состава и соотношении лилцдов, фосфолипидов и их отдельных фракций, а такяе интенсификация переписного окисления липидов /:ЮЛ/ в изученных отделах периферической нарвной системы предшествует другим патологическим изменениям в чувствительных ганглиях и корешках При Э/Ш.

Выявлено, что фиксированные на шшлиношх оОолочках антитела оонаруживалзтея на фоне предшествующих оиохимических изменений и нарушения пршшцаемости сосудов ганглиев и корешков. Морфологические признаки полирадикулоневрита появляются к концу ин-куоационного периода и в острый период зпоолевания. Они проявляются в нарушении проницаемости гемато-нершюго оарьера, демиелинизации и воспалительной инфильтрации в чувствительных ганглиях и корешках, а также пролиферации и гипертрофии авш-шовских клеток.

Практическая значимость раооты

Проведенные исследования дополняют имеющиеся сведения о патогенезе экспериментального полирадикулоневрита, являющегося приближенной моделью полирадикулоневрита у человека, Получены ноша, ранее неизвестные сведения, которые конкретизируют представления о последовательности развития изменений в нервной гкани при периаксональ-ном процесса.

Впервые составлена комплексная картина развития аллергического полирадикулоневрита, вскрыты его тонкие механизш.

Результаты диссертации используются в учооном процессе при чтении лекций студентам на кафедре нэрвных оолезней Томского и Но-восиоирского медицинских институтов.

Апрооация материалов диссертации

Основные положения диссертации доложеш и оосуждекы на меяинсгитут-ской научной конференции. "Морфология сосудистой системы в норма и патологии" /Томск, 199и/; Научно-практических конференциях: "Меди-ко-оиологичзские аспекты нейро-гуморальноЯ регуляции" /аомск, 199и/; "Фундаментальные науки - медицине" /Томск, Î99ÙJ Всесоюзной Локфе-ронции, посвященной памяти заслуженного деяяэля науки РсФиР академика АШ UJGP о.и.дойникова /Ленинград, 1991/; заседании Томского филиала Всесоюзного научно-практического оощества невропатологов /Томск, 1931/.

Пуоликации результатов исследования

До семе диссертации опубликовано о работ, приняты в центральную печать а раооты. Полечено удостоверение на рационализаторское предложение местного значения.

Ооъем и структура диссертации

Текстовая часть диссертации излоиояа на 147 страницах машинописи, состоит из введения, 3 глав, заключения, выводов, списка литературы. Раоота иллюстрирована 13 таолицаш, 34 микрофотографиями. Указатель литературы включает 13У источников на русском языке и 11& на иностранных языках.' Весь материал, представленный в диссертации, получен, ооработан к проанализирован лично автором.

положения, наносимые на защиту

I. Нарушения метаболизма липидов, холестерина, фосфолипидов и их отдельных компонентов, а также интенсификация процессов перекисно-го окисления липидов являются первичными в цепи происходящих патологических изменений при ЭЯП. й. выявленные методом им>^унофлюоресценции фиксированные антитела определяются в периферической нервной системе после оиохимических изменений в чувствительных ганглиях и корешках иммунизированных животных и повышенной проницаемости геыато-нервного оарьера.

3. Морфологические проявления Эяй характеризуются нарушением проницаемости гемато-нервного оарьера, сегментарной демиэлинизацией интраганглионарных и корешковых волокон, а также воспалительной инфильтрацией,

4. Аарактер и степень выраженности неврологический проявлений поли-радикулоневрита определяются стадией периаксонального процесса.

иэдвржание работы

Материал и методы исследования. Для решения поставленных задач Оыло проведано комплексное обследование 102 кроликов-самцов породы "шишила", кассой И,0-3 кг, которые оылк разделены на три группы.

Б 1-ой группе животных /хЗ/ исследовали чувствительные ганглии и корешки шейного, грудного и пояснично-крестцового отделов спинного мозга, «ригеминальные узлы, а также нервные стволы конечностей с целью изучения физиологических структурных процессов у интактных животных /контроль 1/.

вторую группу /2и/ составили кроли.<и, которым оыл введен толь-

ко одъхшаш' йрейнда. 5)1'а группа гшвотных оыла исследовала с целю изучения возможного влияния стимулятора иммушого отвага на развитие аутоиммунного процесса /контроль П/.

В третьей группе кивотных /Ь9/ с помощью однократно введенной смеси очищенной фракции миаляна /4 иг на кг кассы/ в полном адья-ванте ФрейндаСпХЫосЬет, шА/ моделировали экспериментальный аллергический полирадикулоневрит по оощепринятой методика В.Макзтаап, я.лаатз, 1уаб; Г.В.лонов^ов, ¿»/¡э. На воспроизведенной ыодели изучали оиохимическиа, иммунные и морфологические показатели в вышеуказанных отделах периферической нервной систем.

Все яссладозания проводили на 2,4,0,0,10,12,14,16,1В сутки после введения антигена. Животных умерщвляли методом воздушной эмоолии оез применения Наркотизирующих средств.

Ооъектами биохимического исследования являлись чувствительные ганглии и корешки шейного и поясннчно-крестцового отделов.

В лнпиднон экстракта, полученном из опинальных ганглиев опре-ляли оощие липиды, холестерин, фосфолипиды и их отдельные компоненты, а также продукты перекисного окисления липидов - диеновые коньюгаты. Получение и очищение липидного экстракта проводили по общепринятой и унифицированной методике Фолча с соавторами /1957/, Экстракцию липидов и фосфояипидов осуществляли холодным спосоОом в течение '¿А часов»

содержание оОщих фосфолипидов в спинальных ганглиях и корешках проводили по методу згег/ягъ /19Ы)/, основанному на спосоонос-ти фосфолипидов оеразОЕЫвать гидрофобные комплексы с ферротиоциа-наТом ашонйя. Ддо разделения фосфошшидных компонентов использовали метод тонкослойной хроматографии на пластинках зииГо1 тг - ¿£4 /ЧССР/* Для получения фосфолипидного спектра использсвалл смеси растворителей хдороформ-метанол-вода /65:25:4/. Ь результате исследования получали следующие фракции: сфингомиелин, фосфа-тидилхолин, фосфатидилсерин, фосфатидилэтаноламт!, полиглицеро-фосфагы и фосфатидкко кислоты. Идентификацию этих компонентов 4 проводили с помощью цветных реакций, позволяющих выявить характерные для определенных фосфолипидов функциональные группы, а такие путем сравнения величины яг с данными литературы /Прохорова М.Н., хупикова З.Ь., 1УоО} Строев Е.А., 19ВЬ/.

Определение общих липидов проводили по Блвру в- модификации орегдон /19оУ/ с использованием раствора хромовой кислоты.

Общий холестерин определяли унифицированным методом Илька, в основу которого взя*а цветная реакция Лииерыана-Бурхарда. Опредвлиние диеновых коныэгатов в спинальных ганглиях и корешках проводили по методу А.в.Косухина, Б.С.Ахматовой

Объектами г л сто дог никого исследования являлись чувствительные ганглии я кореши шейного, грудного, пояс-лично-крестцового отделов, а также узлы тройничных нервов и нервные стволы конечностей. Органы фиксировали в 12% нейтральном формалине, жидкостиОрта, Уо° спирте.

Для шявления основного процесса - демиелинизацш» использована методика Марки, в основа которой лежит спосооность возникающих в результате распада гранул миелина импрегнироваться расгво-ром осмия в черный цвв*. и цельо изучения хрона*офильного вещества в нервных кдвтках и клеточной воспалительной инфильтрации использовали метод йиссдя. депарафинированные срезы окрашивали *ак-ке гематоксилином и эозином. Для исследования состояния осевых цилиндров изучали срезы, приготовленные с помощь» замораживающего микротома из фиксированного в 12& нейтральном формалине материала, импрегнированные азотнокислым сервором по оильшовскому-Гросс в модификации А.И.Шжова /19оо/.

На криостдоных срезах /10 мкЦ/, приготовленных из хранившихся в видком азоте спинальных ганглиев и корешков, выявляли активность щелочной фосфатазы по Берстону /19оУ/. цигофотометрическому анализу подвергали активность щелочной фосфатазы в эндотелии капилляров чувствительных ганглиев, цитофотометрию проводили плаг-мето-дом на ,1лШлЫг-]4-3. Активность фермента выражали в относительных единицах оптической плотности, с целью стандартизации толщины срезов для сравниваемости результатов цитофотоыетрического анализа использовали технику совмещенных блоков.

Проводили ыорфоколичвственшй анализ изменения эльцгольцевских телец с помощью окулярной измерительной сетки площадью мм^.

С целью исследования гемато-нервного оарьера животным вводили внутривенно за 10-2и минут до умерщвления 1% раствор ЭЕанса синего,приготовленный на 2% альоумине. Проницаемость сосудов оценивали по наличию ярко-красного окрашивания в срезах чувствительных ганглиев и корешков.

Накопление иммуноглооулинов у кроликов с ЭлИ в различных отделах периферической нервной системы исследовали с помощью прямого метода аунса /фриыель Я., 1уЪУ/.

У

Электронно-иикроскопичбсков исследование проведено на маге-риале 15 кроликов, включая ...контрольных, d эксперименте были исследованы спинальные ганглии верного н пояснично-крестцового отделов в различные периода ЭаЦ. Дяя этого материал фиксировали 0,5% гло-таральдегидом на фосфатной буфере pH 7,3-7,4, дофиксировайи осмиевым фиксатором, обезволивали а спиртах восходящей концентрации и заливали в аралдит по общепринятой методике /Уикли Б., 1У75/. Шдутонкие и ультратонкие срезы изготавливали На ультратоме uitracut: в /Reichert, Австрия/. Лолугонхие срезы для прицельной ультратомии окрашивали метиленовым синим. Ультратонкие срезы контрастировали по Уотсону и Рейнольдсу и просматривали в электронном микроскопе JEM - Iiaj GX /JSol, Япония/.

Материалы биохимических, цитофотометрических и морфоколичест-венных исследований обрабатывали по правилам параметрической статистики с использованием критерия Стьюдента /Лакин Г.Ф., 1990/ на ЭйМ НАИРи-К и Üi-Ol.

Результаты- исследования и их обсуждение

Установлено, что после введения очищенной фракции миелина /4 мг на кг массы тела/ в полном адъюванте фрейнда у кроликов развивался аллергический полирадикулоневрит. llepwe симптомы заболевания появлялись через 14-lb дней. Средняя длительность инкубационного периода составила 14,у2 - 0,03 дня. b разгар болезни обнаруживались различной степени двигательные расстройства. Степень тяжести 3Ail оценивали по критериям, разработанным в институте экспериментальной медицины АШ СССР /Таранова H.Ü., i9ö8/. Легкая форма /16,1%/ характеризовалась малоподвижностью животных, слабостью мышц, особенно задних конечностей. При ЭАЦ средней степени тяжести /74,2%/ наблюдалась выраженная слабость мышц конечностей, обусловливающая их парезы, затруднения при движениях, а также потеря мас-ся тела. При тяжелой форме /9,7%/ выявляла исхудание» глубокие парезы и параличи конечностей, вынужденные поза, нарушение дыхания.

У большинства животных /63,9%/ зарегистрированы вялые татра-парезы с преимущественным поражением задних конечностей.

Результаты исследования метаболизма липидов, холестерина, фосфолипидов и их фракций, а также ШЛ в спинальных ганглиях и корешках шейного и пояснично-крестцового отделов показали, что на 2-4 сутки после введения антигенной смеси существенных изменений

стих показателей на определялось. Однако на 6-е сутки эксперимента в шейной отделе отмечалась тенденция к увеличению количества общих, дшищов. В этих ее условиях существенно повышалось содержание холестерина /15,01 - О,84 мг/г пробив контроля 6,69 £ 0,34; р / 0,001/. Возрастал уровень обцих фосфолипидов до 64,48 - 3,ЬУ иг/г /в контроле I - 65,16 £ 2,55; р ¿^ 0,01/. Повышенна последних в шейных сшщальшх ганглиях и коращках обусловлено накоплением сфангоииелина /он выше контрольных показателей на 28,3%/, а также шсокш содержанием фосфакидилзтаноламина, прешаающны исходный фон на 36,6%-и ыетаболически активной фракции фосфатидилсерина. Последняя увеличена на 40,7%, а фракция фосфатидилхолина - на

Количество полиглидерофосфатов и фосфатчдных кислот колебалось а пределах норыальшх величин, ь эти же сроки экспоршента отмечалось накопление диеновых коньюгатов в шейных ганглиях и ко-рашках более чеы в два раза, что свидетельствует об интенсификации процессов Шл.

Цри иммунизации аивотшх только адъювантом Фрейнда в этих условиях количество общих липидов иа менялось, отмечалась линь теи-денцйя к увеличению количества холестерина и общих фосфолипидов. Содержание отдельных фосфолипвдшх компонентов не отличалось от контрольных цифр.

В поясничном отделе в ати ке сроки эксперимента после введение ыиелвна обращал на себя внимание рост уровня общих липидов /133,50 * 5,38 ыг/г; в контроле I - 111,37 £ 5,08; р / и,0Ь. Количество холестерина в сшщальшх ганглиях увеличивалось до 16 ,Ы - 0,74 ыг/г по сравнении с группой штактного контроля /10,12 - 0,32 мг/г; р / 0,001/. Существенно повжалось содержание общих фосфолипидов в этом же отделе /102,76 £ 3,22 ыг/г; в контролю I. - 74,97 £ 5,17; р / 0,001/, что обусловлено накоплением сфингоииелина, количество которого возрастало на 36,3%», фосфати— днаэтанолсыина, увеличивающегося на 37,2%. а меньшей степени отмечался рост уровня фосфатидилсерина /на 30,4,2/, полиглицерофос-фа*ов и фосфатидных кислот /на 27,1%/, а таккз фосфатидилхолина /ла 1У ,4,'ь/. Количество диеновых коньюгатов было пошвано в спи-калы1нх ганглиях и корешках па 63,6%.

У животных, получавших только едъювант йрейнда, достоверннх отличий от штактных кроликов не отмечали.

К концу инкубационного периода /10-12 сутки/ в шейных спиналь-ных ганглиях и корзлках розко возрастало количество общих липидов

/на о9,Ъ%/. .Холестерин увеличивался почти вдвое /на 98,6$/. В связи с тем, что холестерин может проявлять свойства антиоксиданта, обеспечивая защиту клеточных структур от перекисной деструкции /Алешина h.Т., Бурлакова й.Б., Терехова C.B., 1976/, увеличение содержания холестерина в нервной ткани можно рассматривать как одну из защитных реакций организма, направлениях на стабилизацию и подцеряаше функциональной активности ыеыбранкых структур. Высоким оставалось содержание об^их фосфолипидов. Они возрастали до 97,06 ± 7,78 ыг/г /в контроле I - bo,I6 ± 2,55; р /_ 0,01/. Это обусловлено накоплением фосфатидилсорина /на 68,4$/» фосфатидилэта-нолаыина /на Ь7,t%/, сфингошшлина /на 6Ь,Ь%/, фосфатидилхолина /на 46,4$/. Нз отмечалось сущестаонных изменений лииь в количества полиглицерофосфатов и фосфатидашх кислот. ¿Сак и в предыдущие сроки опыта уровень диеновых конъагатов оставался достоверно повышенным /на 00,0?.'/.

В спинальных ганглиях и корешках поясничного отдела на 10-12 сутки эксперимента количество общее липидов составило 131,72 -4,10 нг/г /в контроле I - 111,3? - 5,0В; р / 0,01/. Достоверно увеличивалось содержание холестерина /на 70,8$ от исходных показателей/, а также общих фосфолипидов. Также как и в предадут« сро- г ки опыта накопление последних происходило в основном за счет фос-фатидилзтанолаиина, которой увеличивался на 62,6% и сфингомиелина, возросаего на 41,9$. Остальные фракции не претерпевали существенных изменений. Уровень диеновых конъюгатов на 45,был шые контрольного.

При рассмотрении показателей липидного обмена кроликов, которым был введен лишь полный адыовант Шрейнда, наблюдалась тенденция к увеличению общих липидов и фосфолипидов, а такие фосфатидилхолина в поясничных ганглиях, в шейных - незначительное увеличение общи фосфолипидов, холестерина, сфингомкелина и фосфатиднлсерина. Однако эти различал недостоверны.

Таким образом, уже в инкубационной период ЭМ1 происходили существенные изменения липидного и фосфолтщдного обмена в ткани чузствительшх ганглиев и корешков изучзших отделов. Это выражалось в повышении уровня общее липидов, холесгерина, обща, фосфоли« пидов и отдельных фракций. Кроме-того, структурные изменения клеточных мембран, вызваншэ в периферической нервной система активацией передиского окисления липидов, могли привести к повреждении иембр&носвязанных ферментов. Следовательно, усиление активности

ЮЛ в инкубационный период Э<Ш, можно рассматривать как один из начальных этаповповреждения неубранных структур различных элементов нервной ткани в ранний период сенсибилизации кивогшх миелином.

й период клинических проявлений полиредикулоневрита у кроликов также были виявлвт нарушения метаболизма липидов в спиналь-ных ганглиях и корешках шейного и пояснично-крестцового отделов. -Так, при ЭлЦ легкой степени увеличивалось количество холестерина в шейном отделе более чей вдвое /на 113 ,ь%/. общие дилиды и фосфо-липиды не претерпевали существенных отклонений от контрольных показателей. Однако в составе отдельных фосфолипидных компонентов наблюдались определенные изменения, ¿осфатидилэт&ноламин был увеличен на 37,3$, сфингомиелин на 21,1%. Уровень других фракций, а также диеновых коныогатов достоверно на отличались от исходного фона. Б поясничном отделе на увеличивался холестерин и имела место тенденция к росту фосфатидмлэтанолаыина /0,0& $ 0,1/, а также диеновых коньвгатов.

У животных с клинической картиной заболевания, расцененной как Эл|1 средней степени тяжести, в иейных спииальшх ганглиях и корейках наблюдались более выраженные нарушения метаболизма липидов, чем при ЭД11 легкой степени. Существенно повышался уровень общих лилидоз в ткани /на Зи,и%/. Резко возрастало количество сфингомиели-на /на 49,4$ от исходных величин/, фосфатидилэтаноламина /на 27,7%/. в.то же время содержание полиглицерофосфатов и фосфатидных кислот снижалось на 33,1%. Уровень диеновых коныогатов обнаруживал юн-денцию к снижению /и,2У £ 0,02 против контроля и,4Ь 1 и,07 мкмоль/мг липидов, при этом о,Х р о,оо/.

В "поясничном отдела количество холестерина снижалось на 1Ь,и%, а полиглицерофосфатов и фосфатидных кислот на 2£>,3%. остальные показатели не отличались достоверно от контрольных.

При тяжелом течении полирадикулоневрита наблюдались грубые нарушения метаболизма липидов в спинальных ганглиях и корешках как шейного, так и поясничного отделов. Гак, в шейных сегментах возрастало количество общих фосфолипидов, что обусловлено, вероятно, повышением в этой группе животных сфингомиелила /на 33,Ул/, фосфатидилхолина /43,фосфатидилэтаноламина /22,у£/. Обращало на себя внимание резкое, почти вдвое, снижение холестерина, что свидетельствует, по-видимому, о деструкции миелиновых оболочек. Дри Э«и1 с тяжелыми признаками заболевания зарегистрировано некото-

рое угнетение процессов ШЛ.так как уровень диеновых коньюгатов обнаруживал тенденцию к уменьшения»

Ь поясничных спинальных ганглиях и корешках этой группы кроликов уровень холестерина был снижен более чем в 3 раза, достоверно снижалось содержание фосфатидилс ерина /2Ъ,3%/, полиглицерофосфатов и фосфатидшх кислот /на фосфатидилэтанолаыина /на IV ,3,4/.

Наши исследования свидетельствуют о том, что изменения состава липидов и, в частности, холестерина и фосфолипидов, преобладающих а структуре мембран, характерно для больных полирадикулоневри-том животных. Известно, что холестерин в миелине поддерживает жидкокристаллическое состояние липидов, находясь в определенном взаимодействии с фосфолипидами /Горанова h.ii., läbö; Хухо й.,

Хохлов л.il., Савченко ¡D.h., 1Удо/. he исключено, что нарушение взаимоотношения холестерина и фосфолипидов в острый период способствует, возможно, переходу миелина в гелеобразное состояние, что, в свою очередь, и приводит к нарушению проведения нервного импульса.

накопление имунноглобулинов у экспериментальных животных в различных отделах периферической нервной системы изучено с помощью прямого метода иунса. Установлено, что в ответ на введение антигенного раздражителя на b-з сутки от момента инокуляции невриго-генной смеси преимущественно в чувствительных ганглиях пояснично-крестцового и шейного отделов обнаруживали антитела, которые имели желто-зеленый цвет и хорошо контрастировали на фоне клеток, окрашенных синькой Эванса в красно-бурый цвет. К концу инкубационного периода /на 1и-Х2 сутки/ интенсивность специфического свечения реьло возрастала, и грудном отделе флюоресценция обнаруживалась реже. 6 единичных препаратах специфическое свечение иммуноглобулинов наблюдалось на большом расстоянии вдоль, миелиновой оболочки.

Ь разгар заболевания фиксированные антитела были обнаружены, в спинальных ганглиях и корешках пояснично-крестцового, шейного, реже грудного отделов, а также тригеминальных узлах. В периферических нервах специфическое свечение на выявлено, начиная с Ö-9 суток после введения миелина были обнаружены.также свечение иммуноглобулина в клетках плазмоцитарного ряда и внеклеточная флюоресценция в ткани ганглиев.

Таким образом, фиксация иммуноглобулинов происходит уже в ранние сроки развития Энн, начиная с 6-9 суток. Антитела локализуются на миелиновга оболочках преимущественно интраганглионарных

волокон тригеминальшх узлов, а также пояснично-кресгцовых, шейных и реже грудных ганглиев.

Сешм ранним морфологическим признаком развития периаксональ-ного процесса явилось нарушение проницаемости гемато-нервного барьера. Начиная с Ь-го дня, еще до развития клинической картины полирадикулоневрита, альбумин, окрашеншй раствором Эванса синего, обнаруживался в эндоневрии чувствительных узлов пояснично-крестцового, шейного отделов спинного мозга, а также г ал глнев тройничного нерва и значительно реже в грудных сегментах. Это проявлялось наличием ярко-красного свечения в них. Наиболее выраженные изменения отмечались к 10-14 дням от момента введения миелина и в разгар болезни. и периферических нервах не отмечено свечения, свидетельствующего о проникновении маркера, b период клинических проявлений полирадикулоневрита в чувствительных ганглиях обнаруживали признаки ге-ыодинамических сосудистых нарушений, проявляющиеся венозным полнокровием, расширением капилляров и стазом форменных элементов крови. Развивались периваскулярные отеки.

для более детального изучения роли сосудистого фактора в тканевых механизмах при ЭаЦ исследована динамика активности щелочной фосфатазы, фермента, весьма часто используемого в гистологии в качестве одного из показателей трансмембранного гемато-тканевого транспорта. Исследованы чувствительные ганглии шейного, грудного, пояснично-крестцового отделов, а также тригеыинаяьше. Цитофотомег-рический анализ показал, что на 2-4 сутки после введения антигенного раздражителя активность щелочной фосфатазы не отличалась от исходного фона. Однако на о день эксперимента она возрастала в спинаиьных ганглиях шейного отдела на 6Ь,0$, грудного - на 36,<$, пояснично-крестцового - на Ы ,9?а. Активность фермента была достоверно повьшвна и на 8-е сутки, за исключением узлов грудного отдела. На Iü-e сутки показатели эти колебались в пределах нормальных величин, за исключением шейных чувствительных ганглиев, где активность фермента выше исходного фона на ЗЬ,0%. возможно, снижение интенсивности реакции связано с включением компенсаторно-приспосо-оительных механизмов у подопытных животных в ответ на введение антигенного раздражителя. Однако к концу инкубационного периода /12-14 сутки/ и в разгар болезни /14-ItJ сутки/ была отмечена высокая активность щелочной фосфатазы во. всех изученных отделах периферической нервной системы. Очевидно, это свидетельствует об изменении проницаемости клеточных мембран и является важным показате-

лам перехода физиологической реактивности в патологическую /¿енг-линская hj.А. с соавторами, 1УЬ2/. Наиболее существенные изменения при этом наблюдались в шейном и пояснично-крестцовом отделах, что вероятно, обусловливает большую их ранимость.

При введении кивогным только адъюванта Фрейнда в сопостави-ше с экспериментальными сроки не отмечено существенных изменений активности щелочной фосфатазы.

Таким образом, полученные результаты свидетельствуют о выраженном влиянии антигенного раздражителя на сосудистые эле?ленгы чувствительных ганглиев.

При изучении морфологических изменений при ЭАП было обращено внимание на состояние шванновских клеток, играющих важцую роль в миелиногенезе /Жаботинский Ю.М., 1975; Таранова H.H., 1968 и др./. Установлено, что в начальные сроки эксперимента /2-8 сутки/ клетки иванновской нейроглии в большинстве объектов сохраняли нормальное строение, лишь незначительная часть глиоцитов была снабжена укрупненными гиперхромными ядрами, л концу же инкубационного периода /IU-I4 сутки/ и в разгар заболевания обращала на себя внимание выраженная глиальная реакция, заключавшаяся в повышении пролифора-тивной активности и гипертрофии шванновских клеток. При электронно-микроскопическом исследовании на 10 сутки эксперимента выявлена выраженная степень осмиофилии цитоплазмы нейролеммоцитов, которые сопровождали интактные осевые цилиндры, набухание митохондрий, увеличение доли эндоплазматического ретикулума, нарастание количества рибосом, полисом. Кроме того, при изучении периаксонального процесса мы обратили внимание на наличие эльцгольцевских телец. Эти включения расположены в цитоплазме шванновских клеток и свидетельствуют, по-видимому, о нарушении метаболизма последних. Результатами гистоколичественного анализа установлено, что увеличение эльцгольцевских телец было выявлено на Ь-е сутки после введения антигена и сохранялось До конца инкубационного периода в тайных и поясничных спинальных ганглиях, причем на 12-е сутки их количество возрастало более чем вдвое.

Основным морфологическим проявлением полирадикулоневрита является демиолшшзацил, которая выявлялась в конце инкубационного периода и в инициальной стадии полирадикулоневрита и зависела от тяжести процесса. Наиболее выраженные изменения были в шейных и поясннчцо-крестцовых спинальных ганглиях, где в отдельных случаях были выявлены обширные очаги с грубы» распадом миелина. Нервные

.волокна при этом поражалась неравномерно, й грудном отделе деыие-лкнизация выявлялась раке и интенсивность ее была менее выражена. На электроннограммах определялось расщепление ламелл миелина в сторожу аксона или гипертрофированной цитоплазмы нейролеымоцита. В разгар болезни происходила локальная, а затеи тотальная демие-линизация осевых цилиндров, ¡продукты распада в виде различной формы гранул, пластинчатых фигур обнаруживались в цитоплазме ней-ролеммоцита, что подчаркяааат особое их значение в выполнении функции фагоцитоза при периаксональноы процессе.

11а фона повышения сосудистой проницаемости в спинальных -ганглиях,'а такае тригсминальных уздах отмечалось появление пери-Еаскуляршх, перинэвральшх инфильтратов, состошдих из лимфоцитов и моноцитов. Ьа высоте раави'лш полирадикулоневрита встречались нейтрофйльные гранолоциш. Кроме того, было выявлено большое количество макрофагов, что, по-видимому, способствует быстрейшей ликвидации последствий альтерации /Струков А.И., соавт., 1962/. Ьа 14-1Ь сутки после введения антигена были обнаружены плазматические клетки, что является косвенный признаком активации местных иммунных процессов.

• Б инкубационный период ЭАИ и в разгар болезни на найдено грубых изменений аксонов. О.здвко при импрегнации серебром наблюдались некоторые изменения дргентофилии в нервных элементах, что свидетельствует об их раздражении. Осевые цилиндры почти всегда сохраняли свою непрерывность. Однако в единичных случаях у кроликов с выраженной картиной полирадикулоневрита, с грубыми паралитическими расстройствами б конечностях были выявлены отчетливые изменения; дисхроыия осевых цилиндров, повышенная их извитость.

Ь части клеток спинальных ганглиев на 12-1В сутки наблюдались явления центрального хроматолиза или укрупнение глыбок хроматофиль-ной субстанции Иерикарионы единичных найроцитов были подвержены вакуолизации. встречались явления перицалдюлярного отека.

Таким образом, морфологические изменения при Элл характеризуются полиморфизмом. Натоморфология периаксонального процесса, вклвчая топографию демиединизации, определяет неврологическую картину заболевания.

Представленные результаты исследования свидетельствуют о том, что введение антигена вначале приводит к существенным сдвигам в дипидноы и фосфолилидном спектре чувствительных ганглиев и корешков, что, вероятно, приводит к изменении жесткости мембран, нару-

шэнию га конформационных и конфигурационных перестроек. На фоне нарушенных обмена липидов, фосфолипидов и интенсификации ПОЛ повышается проницаемость гемато-нервного барьера. Фиксация иммуноглобулинов происходит на увд измененной миелиновой оболочке волокон чувствительных узлов и корешков. Полученные в процессе исследования данные указывают, что в основе разрушения миелиновой оболочки изначально лежат биохимические изменения в ней и, возможно, патология нейролеммоцитов, обусловленные реакцией на вводимый антиген. Однако этот процесс цукдается в дальнейшем изучении.

хе

В Д В О Д ti

$. Парзичкым званом в развитии экспериментального аллергического 1 аодирадикулоневрига является изменение метаболизма общих яипи-дов, холестерина, фосфолипидов к их фракций спинальных ганглиев и корешков, а также интенсификация процессов перекисного окисления якпидов. Эти изменения выявляются.ужа ка 6-е сутки эксперимента. В эти г/.в сроки в изученных отделах периферической нервной систеи; увеличивается активность щелочной фосфата-зы,

Z. С В-х суаок после введения антигенного.раздрагателя происходит наруыенмо защитной фушщии гемато-нервного барьера, проявляющееся б повышонии проницаемости сосудов спинальных ганглиев, а такав тригеминальных узлов.

3. &йксцрозашые антитела, локализующиеся на ыиелиновой оболочке преимущественно кнтраганглионарных волокон поясничного и шейного сегментов, тригеминальных узлов и реже грудного отдела выявляются после биохимических изменений и поеышэния проницаемости сосудов ганглиев и кораажов.

4. Процесс десталинизации и воспалительной инфильтрации выявляется к концу инкубационного периода и на фоне неврологических проявлений полирадикулоневрита у кроликов..

Ь. Наиболее существенные изменения метаболизма лилидов, фосфолипи-дов, а гакаа морфологические проявления пориаксснального процесса рэгиетрируются в чувствительных ганглиях и корешках.пояс-нмвш-г.рссгцового отдела. Эти показатели коррелируют с неврологическими признаками полнрадккулоневрита.

6. Примерно одинаковые сроки возникновения после инфекции полира-дикулоневритов у лвдей и после введения незритогена у кроликов делает весьма вероятной подобнуи последовательность патологически изменений в периферической нервной системе при рассматриваемом заболевании и у человека.

ПЕРЕЧЕНЬ раоог, опуОлшсовангшх по таш днссзртщии

1. Аляфирова В.Ы., Команденло НЛ1.

Имцунофлиорасцзнтша показатели экспэрнмэнгального аллергического полираднкулонаБрига //еундаиаиталыша науки - медицине: Материалы конференции. - юиск, 1У90.-С.43-4В.

2. Апифирова В.Ы., соснмна Н.В., лоыанденко-H.il., Сапрыкина Э.В. Матаболизы лшидов спинномозговых ганглнэз и корешков при экспериментальном аллергической полираднкулоневрите у кроликов //Медико-оиологические аспекты нейро-гуыораяьяой регуляции: Сб.научн.трудов. - Выпуск I.-Томск, 1990.-С.90-92. ллифирова'В.Н., Командвнко И.И., Коновалов Г.В. Проницаемость гемато-нарвного оарьара при экспериментальном аллергическом полирздикулонезрита у кроликов //йорфология сосудистой системы э нории и патологии: Сб.науч.трудов. - В.-¿'сыск, 19УО.-0.40-43.

4. Алифирова в.й. .

' Экспериментальные исследования ранинх стадий первичного полира-дикулоневрита //ДоЯниковскиа чтения: Тезисы докл.научной конференции .-Ленинград, 1991.-и.9.

5. Алифирова й.Ы.

Морфологические изменения при экспериментальном аллергическом полирадошулонэврита //Медгесо-Оиологичэскиа.аспекты нвйро-гуно-ральной регуляции: 00.научн.трудов.-Выпуск ¡1.-Томск, 1992 -

Ь. нлифирова В.к., сапршша а.В., Сосшша Н.В.

Роль метаболических нарушений в механизмах развития окспериыан-тального аллергического полиродикулоневрата //Кэдико-оиологн-чоскиа аспекты найро-гуыоральной рагуляции:Сб.научи.трудов. -шп.И. -Томск, 1992.-и.' -Г&.

7. Алифирова В.Ы., Сапрыкина Э.а., соснина Н.В.

опосоо получения сотого лшидного экстракта из ткани спинномозговых ганглиев и корешков у кроликов. /Удостоверение ЕР*13 Томского государственного медицинского института У 602 от 2Ь.оЗ.19У1.

Соискатель * ь.к.Аяифироза

ЗГ- 31