Автореферат и диссертация по медицине (14.01.02) на тему:Полиморфные генетические маркеры сахарного диабета 2-го типа и их ассоциации с клинико-метаболическими показателями в русской популяции

На правах рукописи

ВАХРОМЕЕВА Ксения Александровна

ПОЛИМОРФНЫЕ ГЕНЕТИЧЕСКИЕ МАРКЕРЫ САХАРНОГО ДИАБЕТА 2-го ТИПА И ИХ АССОЦИАЦИИ С КЛИНИКО-МЕТАБОЛИЧЕСКИМИ ПОКАЗАТЕЛЯМИ В РУССКОЙ ПОПУЛЯЦИИ

14.01.02 - эндокринология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Тюмень - 2015

2 2 АПР 2015

005567608

Работа выполнена в государственном бюджетном образовательном учреждении

высшего профессионального образования «Тюменская государственная медицинская академия» Министерства здравоохранения Российской Федерации

Научный руководитель:

доктор медицинских наук, профессор Сунютоса Людмила Александровна

Научный консультант:

доктор биологических наук, профессор Носиков Валерий Вячеславович

Официальные оппоненты:

Бирюкова Елена Валерьевна

доктор медицинских наук, профессор кафедры эндокринологии и диабетологии ГБОУ ВПО МГМСУ им. А.И. Евдокимова Минздрава России

Петунина Нина Александровна

доктор медицинских наук, профессор, зав. кафедрой эндокринологии Института профессионального образования ГБОУ ВПО Первый МГМУ им. И.М. Сеченова Минздрава России

Ведущая организация: Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Российский национальный исследовательский медицинский университет имени Н.И. Пирогова» Министерства здравоохранения Российской Федерации

Защита диссертации состоится 12 мая 2015 года в 10:00 па заседании диссертационного совета Д 208.101.02 при ГБОУ ВПО ТюмГМА Минздрава России, по адресу: г. Тюмень, ул. Одесская. 54.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке и на сайте ГБОУ ВПО ТюмГМА Минздрава России \v\vw.t\ umsma.ru.

Автореферат разослан »^¿^с/^^/Ы^О15 г.

Ученый секретарь диссертационного совета доктор медицинских наук

Л. В. Вихарева

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы

В настоящее время сахарныП диабет 2-го типа (СД2) является наиболее частой формой сахарного диабета и характеризуется развитием специфических микро- и макрососудистых осложнений, приводящих к ранней инвалидизации и преждевременной смерти пациентов. Медицинская и социальная значимость СД2 обусловливает особую роль мероприятий по его профилактике, ранней диагностике и предупреждению осложнений (Morrish et al., 2001; IDF Diabetes Atlas. 2013).

По своей природе СД2 - генетически детерминированное заболевание с полигенным типом наследования. Сегодня вследствие активного внедрения в клиническую практику технологических достижений современной медицинской науки, в частности, методов молекулярно-генетического анализа, становится возможным формирование подходов к профилактике и доклинической диагностике СД2, базирующихся на понимании молекулярных основ его этиологии и патогенеза. В последние годы активно изучаются генетические аспекты развития СД2, его осложнений и сопутствующих метаболических нарушений во многих популяциях. В настоящий момент во французской (Sladek et al., 2007). финской и шведской (Saxena et al., 2007), британской (Zeggini et al., 2007). исландской (Steinthoarsdottir et al., 2007), китайской (Tsai et al., 2010), японской (Yamauclii et al., 2010) популяциях установлены группы полиморфных генетических маркеров, ассоциированных с развитием СД2. Однако несмотря на понимание значительной роли наследственных факторов в формировании СД2, генетическая составляющая, ответственная за его развитие, до сих пор полностью не установлена. Объединение в мета-анализы популяционных данных также не дало однозначного ответа на вопрос о генетических дефектах при СД2 (Billings et al., 2010; Herder et al., 2011). Очевидно, это связано с его сложной природой, как многофакторного заболевания, то есть с необходимостью исследования роли большого числа полиморфных генетических маркеров. их взаимодействий, а также взаимосвязей между наследственной предрасположенностью и средовыми факторами. Разнообразие генетических маркеров, характерных для различных популяционных групп, подтверждает особую значимость этнической составляющей для выявления наследственных рисков. В русской популяции исследованы отдельные гены-кандидаты (Майоров А.Ю., 2009; Чистяков Д.А. с соав., 2010; Потапов В.А., 2010; Рожнова H.A., 2011; Бондарь H.A. с соав., 2014), что определяет актуальность и необходимость подробного, комплексного изучения генетических основ СД2 в русской популяции, с учетом тестирования многих аллельных вариантов генов-кандидатов, анализа их сочетаний, а также ассоциаций с клиническими и гормонально-метаболическими проявлениями. Настоящее исследование выполнено в рамках государственного контракта по программе «СТАРТ-12», при государственной поддержке в форме субсидии за счет средств бюджета Тюменской области на создание опытного образца технологической инновации, при грантовой поддержке Тюменского регионального медицинского общества в области исследований и внедрения инновационных технологий в области здравоохранения.

Цель исследования: установить ассоциации полиморфных генетических маркеров с СД2 и клинико-метаболическими факторами риска развития заболевания в русской популяцип Тюменской области.

Задачи исследования:

1. Изучить ассоциации 96 полиморфных генетических маркеров с развитием СД2 в русской популяции Тюменской области.

2. Оценить риски развития СД2 у носителей различных аллелей и генотипов изучаемых полиморфных генетических маркеров, ассоциированных с СД2.

3. Определить вклад в развитие СД2 сочетаний аллелей и генотипов полиморфных генетических маркеров, ассоциированных с СД2. с помощью полигенного анализа.

4. Провести анализ ассоциации 96 полиморфных генетических маркеров с клиническими и метаболическими факторами риска СД2.

Научная новизна исследования

Впервые в русской популяции Тюменской области установлены ассоциации с СД2 полиморфных маркеров rsl 1642841 гена FTO. ассоциированного с жировой массой и ожирением, rs571312 гена рецептора меланокортина-4 (MC4R), rs2943634 гена субстрата инсулинового рецептора-1 (1RS1). rs 1470579 гена белка 2, связывающего инсулиноподобный фактор роста-2 (IGF2BP2). rsl63184 rem, кодирующего субъединицу-1 канала, зависимого от ионов калия (KCNQ1), rs! 1924032 гена внутриклеточного транспортера глюкозы типа 2 (SLC2A2), rsl 1634397гена, кодирующего домен 6 цинкового пальца (ZFAND6), rs7172432 гена, кодирующего домен С2, зависимый от ионов кальция (C2CD4A).

Впервые получены данные, свидетельствующие, что повышают риск развития СД2 в русской популяции Тюменской области аллель . I и генотип .1.1 маркера rs571312 гена MC4R, аллель С и генотип СС маркера rs2943634 гена 1RS1, аллель С маркера rs ¡470579 гена IGF2BP2, генотип GG маркера rs 163184 гена KCNQL аллель .1 маркера rs7172432 гена C2CD4A.

Впервые выявлено, что с пониженным риском развития СД2 в русской популяции Тюменской области ассоциированы генотип маркера rsl 1642S4I гена FТО, аллель С и генотип СС маркера rs57!312 гена MC4R. аллель А и генотип АС маркера rs2943634 гена IRS1, аллель А маркера rsl470579 гена IGF2BP2, генотип AG маркера rsl 1924032 гена SLC2A2, аллель G маркера rs7172432 гена C2CD4A, генотип AG маркера rsl 1634397гена ZFAND6.

Впервые при анализе многих генов установлены ассоциации сочетаний аллелей А маркера rsl 1642841 гена FTO и аплеля А маркера rs7172432 гена C2CD4AZ повышенным риском развития СД2 в русской популяции Тюменской области.

Впервые получены данные о распределении частот аллелей и генотипов полиморфных маркеров rsl2779790 (CDC123/CAMK1D). rsl63184. rs231262 и rs2237892 (KCNQ1), rs7593730 (RBMS1-ITGB6). rs2943634 (1RS1). rsW830963 и rs1387153 (MTNR1B), rsl 1708067 (ADCY5). rs340874 (PROXl). rs2191349 и rsl0244051 (DGKB-TMEMI95). rs7957197 (HNF1A). rsl531343 (HMG.A2). rsl3292136 (CHCHD9), rs243021 (BCLllA), rs4457053 (ZBED3). rs972283

(KLF14). rs896854 (TP53¡KPI). rs/552224 (CENTD2), rs8042680 (PRC!)

rs5945326 (DUSP9). rs 124547!2 (BCL2), rs16906158 (FOLH/), rs11671664

(CI PR), rs! ¡924032 (SLC2A2). rs7172432 ( C2CD4A-C2CD4B), rs6815464

(МЛЕЛ). rs7041S47 (GLIS3). rs6017317 ( FITM2-R3 HDML-HNF4A ) rs831571

(PSMD6). rs9470794 (ZFAND3), rs3786897 (PEPD), rsll9->0090 (SLC2A2)

rs560887 (G6PC2). rs7034200 (GL/S3), rs!0885122 (ADRA2A) rsl ¡60594

(CR)2). rs7944584 (MADD). rs/74550 (FADS1). rs35767 (1GF1). rsll071657

(C2CD4B). rs 16926246 (HK1 ), rsl046896 (FN3K), rsl800562 (HFE) rs855791

(TMPRSS6). rs4737009 (Ah'Kl), rs552976 (G6PC2), rsl/642841 и rsl\\S'902

(FTO). rs2S67!25 (TMEM18). rs571312 (MC4R), rs 10938397 (GNPDA) rs646776

(CELSR2-PSRCI -SOR TI ). rs579459 (ABO), rsl2413409 (C\P ¡7A1-CNNXP-

,\T.->C2). rs964!84 (ZNF259-APOA5-A4-C3-. il). rs! 122608 и rs222S671 (LDl.R) у

пациентов с СД2 и контрольной группы в русской популяции Тюменской области.

Впервые установлено, что в русской популяции Тюменской области повышающими риск развития ожирения являются аллель А маркера rsl 1642841 гена FTO. аллель А маркера rsl558902 гена FTO, аллель А и генотип АЛ маркера rs243021 гена BCL11А а снижающими риск являются аллель С и генотип СС маркера rsl ¡642841 гена FTO, аллель Г маркера rs¡558902 гена FTO аллель G маркера rs24302l гена BCLI/А

Впервые обнаружено, что с риском развития ИР в русской популяции Тюменской области ассоциированы аллель Л маркера rsl ¡642841 гена F ТО генотип АС маркера rs8050136 гена F ТО. аллель Л маркера rs7172432 гена C2CD4A, аллель А и генотип А А маркера rs571312 гена MC4R. аллель Смаркера rs7593730 в ооласти RBMSI-ITGB6, аллель А маркера rs7¡72432 гена C2CD4.A а со снижением риска развития ИР связаны аллель С маркера rs7¡72412 гена C2CD4A аллель С и генотип СС маркера rsl ¡642841 гена F ТО, аллель Гмарке-ра rs7^93730 в области RBMSI-ITGB6, аллель Г и генотип СС маркера rsW/3/i гена A ¡C4R.

Теоретическая п практическая значимость исследования

Полученные данные расширяют наши представления о генетике СД2 в русской популяции. Сбор и анализ данных о распределении частот аллелей и генотипов полиморфных маркеров СД2, расчет относительных рисков носи-тельства определенных аллелей, генотипов и их сочетаний в конкретных популяциях являются основой развития методов персонифицированной медицины. Так. по результатам выполненной диссертационной работы в Федеральной службе по интеллектуальной собственности получено свидетельство о регистрации базы данных «Набор генетических полиморфизмов для проведения генетического тестирования индивидуальной предрасположенности к сахарному диабету 2 типа» (№ 2014620078 от 13.01.14). Выявленные ассоциации полиморфных генетических маркеров с клинико-метаболическими показателями в перспективе могут быть использованы для формирования групп пациентов с высоким риском развития СД2, требующих применения индивидуальных программ профилактики.

Псложения, выносимые ня защиту:

1. Развитие СД2 в русской популяции Тюменской области ассоциировано с полиморфными маркерами гб294364! и гя2943634 гена 1К$1. гя8050136 и Г511642841 гена ТТО. гб5713!2 гена МС4Я. Г51470579 гена ЮТ2ВР2. Г5163184 гена КС,\0/, гб1 1924032 гена БГС2А2. Г5 11634397 гена ТЛ\'06. гз7172432 гена С2СП4Л

2. Развитие ожирения в русской популяции Тюменской области связано с носительством г$8050136, к 11642841 и Г51558902 гена Г /О. гб224!766 гена ЛО1РО0. г.ч243021 гена ВСША

3. Полиморфные маркеры гб8050136 и гб11642841 гена ¡ ГО. гя7/72932 гена С2С04А2, гя571312 г ена МС4Р. г516928751 гена ЛВ1РОК2 и п759373О в области РВМ51-1ТСВ6ассоциированы с развитием ИР в русской популяции Тюменской области.

Внедрение результатов исследования

Результаты исследования внедрены в работу эндокринологического отделения ГБУЗ ТО «Областная клиническая больница № 1». Полученные данные используются в учебно-педагогической работе кафедры терапии с курсом эндокринологии ФПК и ППС ГБОУ ВПО ТюмГМА Минздрава России.

Апробация результатов исследования

Основные аспекты диссертационной работы были представлены и обсуждались на 54-й научно-практической конференции студентов и молодых ученых с международным участием (Астана, 2012), на VI Всероссийском конгрессе эндокринологов (Москва, 2012), на конгрессе «Человек и лекарство. Урал-2012» (Тюмень, 2012), на ХШ-ой Всероссийской Выставке Научно-технического творчества молодежи (Москва, 2013), на I научно-практической конференции «Клинические наблюдения и научные исследования аспирантов, интернов и ординаторов» (Тюмень, 2014), на выставке «Информационные технологии в медицине» (Москва, 2012, 2014). Результаты работы отмечены дипломом 1-й степени на 54-й научно-практической конференции студентов и молодых ученых с международным участием (Астана, 2012). дипломом 1-й степени на I научно-практической конференции «Клинические наблюдения и научные исследования аспирантов, интернов и ординаторов» (Тюмень, 2014). медалью ВВЦ «За успехи в научно-техническом творчестве» (Москва. 2013). Официальная апробация диссертации состоялась на заседании проблемной комиссии «Современные технологии диагностики, лечения и профилактики внутренних заболеваний (эндокринология, неврология, дерматовенерология, психиатрия, офтальмология) - терапевтические аспекты» в ГБОУ ВПО ТюмГМА Минздрава России (протокол № 3 от 12.11.14).

Публикации

Материалы диссертации отражены в 13 научных публикациях, из них 3 статьи опубликованы в журналах из перечня Всероссийской аттестационной комиссии.

Структура и объем диссертации

Диссертация изложена на 131 странице машинописного текста. Состоит из введения, обзора литературы, описания материалов исследования, трех глав собственных исследований, заключения, выводов, практических рекомендаций и списка литературы. Работа иллюстрирована 37 таблицами и 7 рисунками. Список литературы включает 241 наименование, в том числе 65 отечественных и 176 зарубежных источников.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Материалы и методы исследования

Диссертационная работа выполнена на базе ГБОУ ВПО ТюмГМА Минздрава России (ректор - член-корр. РАН И.В. Медведева) в соответствии с положениями Конституции Российской Федерации и Хельсинской декларацией Всемирной медицинской ассоциации «Рекомендации для врачей, занимающихся биомедицинскими исследованиями с участием людей».

В исследование при добровольном информированном согласии были включены 192 неродственных испытуемых женского (п=120) и мужского (п=72) пола. Набор пациентов проведен в Многопрофильной клинике ГБОУ ВПО ТюмГМА Минздрава России (главный врач - Р.Н. Багиров), а также ГБУЗ ТО «Областная клиническая больница № 1» (главный врач - С.Е. Ярцев). В соответствии с дизайном исследования сформированы 2 группы испытуемых (рис. 1). В основную группу были включены 36 (37.5%) мужчин и 60 (62.5%) женщин всего 96 пациентов с СД2. В основной группе средний возраст на момент обследования составлял 52,5 [44,5; 62.0] года, а стаж СД2 - 4,0 [2,0; 9,0] года. Группа контроля представлена 96 условно здоровыми индивидами, из них 36 (37.5%) мужчин и 60 (62.5%) женщин русской национальности, без ожирения. имеющих показатели общего холестерина и толерантность к глюкозе в пределах нормы. Средний возраст в группе контроля составил 47.0 [30,0; 74,0] лет и был сопоставим с основной группой (р=0,29).

Основная группа Группа контроля

п=96 п=96

Медиана возраста Медиана возраста;

52.5 [44.5. 62.0] 4".0 [30.0; 74.0]

Обшеклнннческое обследование измерение роста, веса. ОТ. ОБ в АД

Определение ПМТ. ОТ/ОБ

Лабораторные тесты ПГТТ. л »килограмма. НЬА1 с

ПРИ. С-пептнла (баз., стнм.). НОМА-Ж. НОМА-В

I сно нитрование 96 полиморфных генетических маркеров с использованием ДНКоиочнпа (111ипна. 1пс)

Рис. 1. Схема исследования полиморфных генетических маркеров сахарного диабета 2-го типа

Критерии включения в исследование: мужчины и женщины с установленным согласно критериям ВОЗ (1999) диагнозом СД2. русской национальности, проживающие на территории Тюменской области. Этническую принадлежность выясняли путем индивидуального опроса, учитывая данные до третьего поколения.

Критерии исключения из исследования: пациенты с подтвержденным диагнозом сахарного диабета 1-го типа, больные гестационным диабетом, а также индивиды, имеющие клинические симптомы вторичного диабета.

Все участники проходили общеклиническое обследование с оценкой жалоб, изучением анамнеза заболевания, наследственности и объективных данных клинического осмотра. Постановку клинического диагноза СД2 проводили согласно критериям ВОЗ (1999). Оценка массы тела осуществлялась с использованием индекса массы тела, установление типа распределения жировой клетчатки осуществлялось по индексу отношения объема талии к бедрам согласно рекомендациям ВОЗ (1997). Артериальная гипертензия была верифицирована в соответствии с рекомендациями Всероссийского национального общества кардиологов (2008). Лабораторная диагностика проводилась в клинико-биохимической лаборатории Многопрофильной клиники ГБОУ ВПО ТюмГМА Минздрава России (зав. лабораторией - Н.Ю. Южакова). Для оценки состояния углеводного обмена применялся пероральный глюкозо-толерантный тест с исследованием базальной и стимулированной концентрации глюкозы («Glucose», Biosystems), иммунореактивного инсулина («DRG Insulin ELISA EIA-2935») и С-пептида («Bermgwerke-AG»). Дополнительно исследовались уровни аспартатаминотранефера!ы и аланинаминотрансферазы («ACT», Biocon), липидограмма («Холестерол». Biosystems; «Триглицериды», Biocon; «HDL холестерин». Human). Уровни гликированного гемоглобина (HbAIc) определяли на анализаторе DCA2000+ (Bayer). Для определения ИР и функциональной активности В-клеток поджелудочной железы применялась математическая модель оценки гомеостаза (Homeostasis Model Assessment - НОМА), в частности, индекс HOMA-IR и индекс НОМА-В.

Генотипирование образцов ДНК 192 участников исследования проведено в лаборатории ЗАО «Геноаналитика» (директор по науке - к. ф-м. н. A.M. Ма-зур) научного парка МГУ, г. Москва (лицензия № J10-77-01-005379). Идентификация генотипов полиморфных маркеров проводилась по протоколу BeadCliip GoldenGate Illumina (http://support.illumina.com/downloads/goldengate genotypingassayguide (15004006 b).ilmn) с использованием синтезированного ДНК-биочипа, содержащего 96 однонуклеотидных полиморфизмов, ассоциированных с СД2 в европейской популяции rs1801282 (PPARG), rs5219 (KC\'JI !). rs7903146 и rs 12255372 (TCF7L2), rs13266634 (SLC30A8). rsl 111875 и rs50!5480 (HHEX). rs7754840 (CDKALl), rs4402960 и rsl470579 (IGF2BP2). rs 10811661 (CDKN2AB). rsl801214 и rs 10010131 (WFSl). rs757210\\ rs4430796 (HNFIB), rs796158l (TSPAN8). rs4607103 (ADAMTS9). rsl0923931 (h'OTCH2). rsl2779790 (CDC123/CAMK! D). rs7578597 (THADA). rs864745 (JAZFi). rsl631S4, rs231262 и rs2237892 (KCNQD. rs7593730 (RBMSI-ITGB6). rs2943641

и г$2943634 (IRS1). rs 10830963. rs!387153 (MTNRIB). rsl 1708067 (ADCY5). rs340874 (PROXI). rs4607517\\ rsl799884 (GCK). rs780094 (GCKR), rs2l9l349\\ rsl0244051 (DGKB-TMEMI95). rs7957!97 (HNF1A). rsl531343 (HMGA2). rsl3292136 (CHCHD9). rs24302l (BCLI1A). rs4457053 (ZBED3), rs972283 (KLF14). rsS96854 (TP53INP1). rs!552224 (CENTD2). rs8042680 (PRC!h rs5945326 (DUSP9). rs379499l (GATAD2A), rs!0770141 (TH/INS), rs!24547l2 (BCL2). rsl6906158 (FOLH1). rsl 1671664 (G1PR), rsl 1924032 (SLC2A2), rsl 1061971 и rs 16928751 (ADIPOR2), rs2241766 и rs 1501299 (ADIPOQ), rs7756992 и rsl0946398 (CDKAL1), с СД2 в азиатских популяциях rs76124633 (URE2E2). rs7172432 (C2CD4A-C2CD4B), rs2237892 (KCNQ1), rs6815464 (MAEA), rs7041847 (GLIS3). rs60l7317 (FITM2-R3HDML-HNF4A), rs83!57l (PSMD6). rs9470794 (ZFAND3), rs3786897 (PEPD); с различными нарушениями углеводного обмена rsl 1920090 (SLC2A2), rs560887 (G6PC2), rs7034200 (GLIS3). rsl0885/22 (ADRA2A), rsl 1605924 (CRY2), rs7944584 (MADD), rsl74550 (FADS1). rs35767 (1GF1), rsll071657 (C2CD4B), rsl6926246 (HK1), rsl046896 (FN3K), rsl800562 (HFE), rs855791 (TMPRSS6), rs4737009 (ANK1), rs552976 (G6PC2). rsl799884 (GCK), rsl387153 (MNTRIB); с ожирением rs8050136. rs! 1642841 и rs 1558902 (FTO), rs2867125 (TMEM18), rs571312 (MC4R). rs 10938397 (GNPDA), а также с нарушенным липидным обменом и артериальной гипертонией rs646776 (CELSR2-PSRC1-SORTI), rs3798220 (LPA). rs579459 (ABO). rsl2413409 (C)P 17A1-CNNM2-NT5C2), rs964184 (ZNF259-APO.A5-A4-C3-AI). rsl 122608. rs222S671 (LDLR). При этом данных, полученных в ходе генотипирования полиморфизмов rs5219 ( KCNJ11 ), rsl0770141 (TH/INS). rs3794991 (GATAD2A). rs37982220 (LPA), rs76l24633 (URE2E2). rs7961581 (TSPAN9). было недостаточно для статистической обработки. Вследствие чего перечисленные позиции в дальнейшем не исследовались.

Статистический анализ полученных данных проведен с применением пакета прикладных программ STATISTICA 6.0, SPSS 13.0. Количественные показатели. подчиняющиеся нормальному распределению, представлены в виде среднего значения и стандартного отклонения. При распределении, отличном от нормального, количественные показатели представлены в виде медианы и интерквартнлыюго размаха (Me (25%; 75%)). При сравнении средних значений двух независимых выборок, подчиняющихся нормальному распределению, применялся статистический тест Стьюдента. Сравнение двух независимых выборок с непараметрическим распределением проводилось с помощью теста Колмогорова-Смирнова и U-теста по методу Манна-Унтнп. Для определения взаимосвязи качественных и/или количественных показателей применялся коэффициент корреляции Спирмена. Анализ качественных показателей проведен методом подсчета абсолютных и относительных частот с построением таблиц сопряженности. Достоверность различий частот в изучаемых признаках оценивалась с помощью критерия уг, для малых выборок рассчитывался непараметрический точный критерий Фишера. Различия считались достоверными при р<0,05.

Относительный риск заболевания по конкретному аллелю или генотипу вычисляли как отношение шансов. Значения отношения шансов рассчитывали с

помощью программы «Калькулятор для расчета отношения шансов» (http://gen-exp.ru/calculator_or.php). Для установления значимых связей СД2 и носительст-ва сочетаний аллелей и/или генотипов (полнгенный анализ) применяли оригинальное программное обеспечение APSampler (http://code.google.eom/p/apsampler/), использующее метод Монте-Карло марковскими цепями и байесовскую непараметрическую статистику.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ II ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Характеристика клинических п гормонально-метаболических показателей в исследуемых группах

В результате проведенного обследования установлено, что все участники основной группы (100%) имели избыток массы тела или ожирение (среднее значение ИМТ - 36±5,8 кг), при этом преобладало распределение жировой ткани по абдоминальному типу (88,54%). Пациенты основной группы в 65,6% случаев имели отягощенную по СД2 наследственность, преимущественно по материнской линии (30,2%). Диабетическая ретинопатия диагностирована в 44.79% случаев, полинейропатия - в 55,2%, а диабетическая нефропатия - у 38.54% больных. Гликемия натощак, постпрандиальная гликемия, уровни ИРИ и С-пептида являются основными характеристиками течения и прогрессирования СД2. Проведенный сравнительный анализ установил, что пациенты с СД2 имели более высокие показатели (р<0,001) как базального, так и стимулированного уровня глюкозы 5,6 [4,9; 7,1] и 7,11 [5,6; 13,3] ммоль/л, чем в группе контроля: 4,95 [4,69; 5,35] и 5,0 [4,5; 5,79] ммоль/л соответственно (рис. 2).

о •

Глюкоза оазальная Глюкоза стимулированная

Основная группа ■ Группа контроля

Рис. 2. Медиана концентраций базального и стимулированного уровней глюкозы в группах исследования (р<0.0001)

Базальный и стимулированный уровни гликемии влияют на показатели гли-кированного гемоглобина, являющегося так же. как и постпрандиальная гликемия. индикатором риска развития сосудистых осложнений. В основной группе НЬА1с менее 7% имели 66,7% пациентов, более 7% - 33.3%. Среднее значение уровня НЬА 1с в основной группе - 7.05 [6,4; 8.3]%.

Сравнительный анализ показателей функциональной активности В-клеток (ИРИ и С-пептида) представлен на рис. 3.

Пациенты основной группы имели более высокие и базапьные. и стимулированные значения ИРИ (16.0 [10.1: 19.9] и 31.0 [19.6: 47.2] мкЕд/мл). С-

пептида (2.8 [19.1; 4.7] и 5.8 [2.9; 8,5] нг/мл), чем в группе контроля: 8.5 [6,4; 10.9] и 21.4 [12,7: 30,5] мкЕд/мл, а также 1,7 [1,4; 2,5] и 4,7 [3,2; 6,7] соответственно (р<0.001).

Щ-9 Ь

ИРНбазалькый 11РИ стнмутрованный

Основная группа -Группа контроля Основная гртапа • Группа контроля

Рис. 3. Медианы концентраций базального и стимулированного уровней ИРИ и С-пептида в группах исследования (р<0.0001)

У пациентов с СД2 обнаружено (рис. 4) снижение функциональной активности В-клеток (индекс НОМА-В - 80,95 [56,41; 129,74]%) на фоне возрастающей ИР (индекс НОМАМИ - 4.8 [3,4; 8.2]) по сравнению с группой контроля: 109.3 [67.64; 156.36]% и 1,9 [1.6; 2,3] соответственно (р<0,0001).

11П=] НОМА-1Д —»—НОМА э |

Рис. 4. Сравнительная характеристика индексов НОМА-В и НОМА-1Я в группах исследования (р<0.05)

Таким образом, установлено, что для пациентов с СД2 типично наличие ожирения с распределением жировой ткани по абдоминальному типу. При сравнительной характеристике гормонально-метаболических показателей выявлено. что среди больных СД2, в отличие от группы контроля, характерны более высокие значения индекса НОМА-1Я. показателей уровня гликемии, С-пептида. а также ИРИ. который носит компенсаторный характер и направлен на поддержание эугликемии.

Анализ ассоциаций исследуемых полиморфных генетических маркеров с сахарным диабетом 2-го типа, его клиническими и метаболическими показателями

В процессе обработки данных, полученных при генотипировании образцов ДНК 192 участников исследования, отмечено, что распределение частот

аллелей и генотипов полиморфных маркеров rs!80!214 и rslOOIOI3l (WFSI). rsl0946398 (CDK.AL1). rs 13292136 (CHCHD9). rsl6926246 (HKI). rs5945326 (DUSP9), rs85579l (TMPRSS6) не соответствует равновесию Харди-Вайнберга. В дальнейшем относительные риски носительства данных маркеров не рассчитывались. Установлено, что в русской популяции Тюменской области с СД2 ассоциированы полиморфные маркеры rs2943641 и rs2943634 (IRSI). rs8050136 и rs! 164284! (FTO), rs571312 (MC4R). rsl470579 (1GF2BP2). rsl63184 (KCNQ1), rsl 1924032 (SLC2A2). rsl 1634397 (ZFAND6). rs7172432 (C2CD4A). Дополнительно, с целью выявления в русской популяции взаимосвязей исследуемых полиморфных генетических маркеров с клиническими и метаболическими показателями СД2. проведен анализ ассоциаций изучаемых однонуклео-тидных полиморфизмов с ожирением и ИР. При исследовании ассоциаций изучаемых полиморфных генетических маркеров с ожирением испытуемые основной группы (п=96) сравнивались с пациентами нормальной массы тела из группы контроля (n=71). При исследовании ассоциаций с ИР группы испытуемых были разделены на подгруппу пациентов с СД2 и ИР (п=65) и подгруппу пациентов без СД2 и без ИР (п=81). В результате в русской популяции Тюменской области установлены связи полиморфных маркеров rs8050!36 и rsl 1642841 (FTO), rs7172432 (C2CD4A) и rs571312 (MC4R). rsl6928751 (ADIPOR2), rs7593730 (PBMS1-ITGB6) с ИР. Сравнение пациентов с избытком массы тела и ожирением и участников контрольной группы с нормальной массой тела выявило ассоциации полиморфных маркеров rs8050136, rsl 1642841 и rs1558902 (FTO), rs224l766 (ADIPOQ), rs243021 (BCL11A) с ожирением.

Далее для каждого из установленных полиморфных генетических маркеров рассчитаны показатели отношения шансов и определены аллели и генотипы. ассоциированные с повышенным и с пониженным риском развития СД2. ИР и ожирения.\

Ассоциации полиморфных маркеров rsl470579 гена IGF2BP2, rsl63184 гена KCNQ1, rs2943642 и rs2943634 гена IRSI, rsl 1924032 гена SLC2A2 и rsl 1634397гена ZFAND6 с сахарным диабетом 2-го тина

Расчет отношения шансов позволил выявить ассоциации с СД2 полиморфного маркера rs 1470579 гена 1GF2BP2, впервые исследованного в русской популяции. Представленный ген 1GF2BP2 кодирует белок 2. связывающий ин-сулиноподобный фактор роста-2 - один из трех агентов, регулирующих трансляцию ИФР-2, как главного фактора роста плода (Nielsen et al., 1999). Эксперименты на мышах, посвященные изучению апоптоза B-клеток и ИФР-2. как фактору их выживания, показали, что гибель B-клеток связана с падением экспрессии ИФР-2 в постнатальном периоде, что. вероятно, связано с ингибирующим влиянием фактора 1GF2BP2 (Petrik et al., 1999). Согласно результатам проведенного анализа в русской популяции Тюменской области с риском СД2 ассоциирован аллель С (OR=T,59 [1.01-2.48]; р=0,04), а со снижением риска развития СД2 связан аллель Я (OR=0.63 [0,40-0.99]; р^0.04) полиморфного маркера rs!470579гена IGF2BP2(рис. 5).

Ассоциация полиморфного маркера rs/63184 гена KCNQI. кодирующего субъединицу-1 канала, зависимого от ионов калия, дефекты которого в подже-

лудочной железе влияют на режим секреции инсулина (АЬ^у^ е1 а!.. 2011). в российской популяции представлена впервые. Показатель отношения шансов генотипа СС полиморфного маркера гб163184 гена А'СМр/ составил 3,45 ([1,209.96]: р=0.03). что позволило отнести данный генотип к маркерам повышенного риска развития СД2 (рис. 5).

,00 гЯ1470579 (ЮР2ВР2) ' „163184 (КС>01)

25,11 1

52.1 5«

| | I I

Основная фунпа ■ Группа кощро.1»

Рис. 5. Распределение частот аллелей и генотипов гб 1470579 гена ЮР2ВР2 и гб 163184 гена А.'С/Ч'С/ у пациентов с сахарным диабетом 2-го типа и в группе контроля

Относительно гена /РБ/ - гена субстрата инсулинового рецептора-1, запускающего внутриклеточные процессы усвоения глюкозы (АИтнпс! й а1., 1993), установлено, что повышающими риск развития СД2 являются аллель С (ОЯ=1.6 [1.08-2.57]; р=0.03) и генотип СС (ОЯ=2,24 [1,24-4.03]; р=0,03) полиморфного маркера ге2943641 гена //?5/ и аллель С (ОЯ=1,67 [1,05-2,66]; р=0,03) и генотип С' (ОЯ=2,3 [1,23-4,32]: р=0.03) полиморфного маркера гэ2943634 гена а снижающими риск - аллель Г (011=0,60 [0,39-0,93]; р=0,03) и генотип ТС (0я=0.50 [0.28-0.90]: р=0,03) полиморфного маркера г¡294364! гена МБ/ и аллель А (0я=0,60 [0,38-0.95]; р=0,03) и генотип АС (0(1=0,48 [0,26-0,89]; р=0.03) полиморфного маркера гз2943634 гена /РБ/ (рис.6).

Основная группа ■ Группа ко!про.£я

Рис. 6. Распределение частот аллелей и генотипов к2943641 гена /РЬ/ и /\ч2943634 гена /РЯ/ у пациентов с сахарным диабетом 2-го типа и в группе контроля

Ген Б1,С2А2 кодирует внутриклеточный транспортер глюкозы типа 2. переносящий глюкозу через мембрану в кишечнике, почках. В-клетках поджелудочной железы против градиента концентрации (71ес]§е е! а!.. 1991). При расчете отношения шансов установлено, что с пониженным риском развития СД2 ассоциирован генотип ,46(011=0,43 [0,20-0,91]; р=0,04) полиморфного маркера гб1 1924032 гена БЬС2А2(рис.7).

I ,„ Гв11924и32 (5ГС2А2) ,„ г511634397 &¥ЛГ*В6)

г о.и

».к

I Лг

101ППШ1 А( ,* 1СН1П-И1Т (КI

Основная группа ■ Группа юпггро.ы

Рис. 7. Распределение частот аллелей и генотипов п11924032гена Л'С'1.2Л2и п11634397гена ¿РАЬЮб у пациентов с сахарным диабетом 2-го типа и в группе контроля

Носительство генотипа АС маркера п11634397 гена Z/:'/l^V£>6. функция которого требует уточнения, ассоциировано (рис. 7) с пониженным риском развития СД2 (0я=0,47 [0.26-0.84]; р=0.03). Следует отметить тот факт, что в русской популяции ассоциации полиморфного маркера гб 11634397 гена Z/г.4Л<Dí> с СД2 установлены впервые.

Ассоциации полиморфных маркеров г б 7593730 в области ЯВМБ1-1ТОВ6 и гэ16928751 гена А01РСЖ2 с инсулииорезистентностыо

В ходе анализа ассоциации исследуемых полиморфных генетических маркеров с метаболическими показателями СД2 установлена связь с развитием ИР полиморфного маркера п16928751 гена рецептора адипонектина АЭ1РОР2 и полиморфного маркера п7593730. располагающегося между генами РВМБ/ и 1ТСВ6в локусе 2q24 (рис. 8).

Маркерами, связанными с повышенным риском формирования ИР. являются аллель А полиморфного маркера п16928751 гена АО/РОР2 (ОЯг 1,71 [1,02-2,87]; р=0.04) и аллель С полиморфного маркера г¡7593730 в области РВМБ1-1ТСВ6(ОЯ=1,58 [1,01-2.46]; р=0,04). Аллель С (п16928751) и аллель Т (п7593730) ассоциированы со сниженным риском ИР (0я=0.58 [0.35-0.98]; р=0.04) и (011=0,63 [0,41-0,99]; р=0,04). Полиморфный маркер /-¡7593730 в области РВМБ1-!ТСВ6ъ русской популяции исследован впервые.

rs7593730 (RBMS1-ITCB6)

••„».,л, г<мм | / ™ 74.5

| » I | 64.9

i: Ч? I Л Г Ь

j I j IL11.....1

Основная ipynna ■ Группа контроля

Рис. 8. Распределение частот аллелей и генотипов rsl692875l гена ADIPOR2 и rs7593730 в области RBMS1-ITGB61 у пациентов с сахарным диабетом 2-го типа

и в группе контроля

Ассоциации полиморфных маркеров rsl558902гена FTO, rs2241766гена ADIPOQ и rs243021 гена BCL11A с ожирением

Дополнительно, в ходе изучения исследуемых генетических маркеров, выявлены ассоциации с ожирением полиморфного маркера rsl558902 гена FTO. ассоциированного с жировой массой и ожирением, полиморфного маркера rs224/766 гена гормона висцеральной жировой ткани - адипонектина ADIPOQ и полиморфного маркера rs24302l гена В-клеточной лимфомы BCLI/А (рис. 9). Установлены взаимосвязи с повышенным риском развития ожирения аллеля ,4(OR~l.61 [1,03-2,52]; р=0,04) полиморфного маркера rsl558902 гена FTO и аллеля 7"(OR=2,07 [1.04-4,14]; р=0,04) полиморфного маркера rs2241766 гена ADIPOQ.

rj1558902 (FTO)

lli ]

Основная ipynna ■ Группа контроля

Рис. 9. Распределение частот аллелей и генотипов rsl558902 гена FTO. rs2241766 гена .ADIPOQ и rs24302l гена ВСШАу пациентов с сахарным диабетом 2-го типа и в группе контроля

Также связь со сниженными рисками ожирения аллеля 7~((Ж=0.62 [0.400.97]; р=0.04) rsl558902 гена FTO, аллеля С (СЖ=0,48 [0,24-0.96]; р=0,04) rs224l 766 гена ADIPOQ.

rsl 6928751 (ADIPOR2)

rw II 11

rs2241766 (ADIPOQ)

Впервые в русской популяции установлены ассоциации с ожирением полиморфного маркера гб243021 гена ВСЬ!/А В исследовании 01АСЯАМ+ указанный полиморфный маркер ген отмечен как маркер риска развития СД2 (011=1,08 [1,06-1,10]) (\'о1§1ц й а1., 2010). В настоящем исследовании расчет отношения шансов выявил, что аллель,) (СЖ=1,66 [1.07-2.56]: р=0.02) и генотип АА (СЖ=2,50 [1,07-5,84]; р=0,03) полиморфного маркера гб243021 гена ВСП1А ассоциированы с повышенным риском возникновения ожирения, а аллель С полиморфного маркера гэ243021 гена ВСЫ1А - со снижением рисков ((Ж=0,6 [0,39-0,93]; р=0,02).

Перекрестные ассоциации полиморфных маркеров 1642841 и Г58050136 гена РТО, п7172432 гена С2СП4А и ге571312 гена МС4Я с сахарным диабетом 2-го типа, инсулинорезистснптостыо и ожирением

Следует особо отметить, что часть исследуемых полиморфных генетических маркеров продемонстрировали связи не только с СД2, но и с развитием ИР и ожирением (табл. 1). Так, получены данные о перекрестных ассоциациях полиморфных маркеров гб71 72932 гена С2СР4А2 н гз571312 гена ¡\1C4R с ИР и СД2, а гз8050136 и Г5/1642841 гена РТО с ожирением, ИР и СД2, что. вероятно, свидетельствует о патогенетической взаимосвязи и сходной генетической природе этих состояний.

Таблица I

Риски развития сахарного диабета 2-го типа, ппсу.ппюрсшстсптностп и ожирения у носителей различных аллелей и генотипов исследуемых полиморфных генетических маркеров в русской популяции Тюменской области

Ассоциированы с повышенным риском Ассоциированы с пониженным риском

Г511642841 (ГТО) гвН0501.15 (ТТО) 172412 (С2СП4Л) 15571312 (МС4Ю 7-5//642X41 <ГТО) пиИМ/М ИГО) гя717242-2 (С2СП4М п5712<12 Г\1С4К)

СД2 Л А С, С

АЛ СС с с СС

ИР А А А С а с

АС АА СС с с СС

Ожирение А А С с

СС СС

В отношении полиморфного маркера гз57!312 гена рецептора меланокор-тина-4 \1C4Rустановлено, что со снижением риска развития ИР и СД2 связаны аллель С ((Ж=0,37 [0,20-0,69]; р=0,002 и СЖ=0,51 [0,30-0.87]; р=0,01) и генотип СС (011=0,42 [0,20-0,87]; р=0,01 и 011=0,56 [0.30-1.05]; р=0.03). а аллель А (ОЯ=2,71 [1,44-5,09]; р=0,002 и ОЯ=1,96 [1,15-3,34]; р=0,01) и генотип АА (ОЯ= 10,76 [1,31-88,60]; р=0,01 и (Ж=8,86 [1.08-72.31]; р=0.03) ассоциированы с повышенным риском развития ИР и СД2. Точная роль полиморфных маркеров генов РТО и \1C4Rb формировании ожирения и СД2 требует дальнейшего изучения. Однако уже сегодня появляются данные о том. что возможен кумулятивный эффект сочетания различных полиморфных маркеров данных генов. Так СаисЫ с соавторами в 2008 году подтвердил сочетанный эффект г.ч 1421085

гена FTO и rsl77823l3 гена MC4R на формирование ожирения у европейцев (Chauchi et al., 2008).

Расчет отношения шансов для аллелей и генотипов rsl 164284! п rsS050l36 гена FTO показал, что в русской популяции с пониженным риском развития СД2 ассоциированы генотип СС полиморфного маркера rs8050!36 (C>R=0.45 [0.24-0.87]: р=0.05) и генотип СС маркера rsl 164284! (C>R=0,44 [0,230.84]: р=0,04). При исследовании распределения частот аллелей и генотипов полиморфного маркера rs8050136 гена FTO у пациентов с избытком массы тела и ожирением, страдающих СД2, и в группе испытуемых с нормальной массой тела без СД2 выявлено, что с повышенным риском развития ожирения связан аллель Л (OR=l,92 [1.22-3,02]; р=0,005), снижают риск развития заболевания аллель С (C)R=0,52 [0,33-0,82]; р=0,005) и генотип СС((Ж=0,35 [0,18-0,70]; р=0,009). При анализе распределения частот аллелей и генотипов в группе пациентов с ИР и СД2 и у испытуемых без СД2 и ИР также были получены ассоциации с маркером rs8050136 гена FTO. В соответствии с общей тенденцией рисковым, ассоциированным с ИР является генотип AC (C)R=2,10 [1,06-4,17]; р=0.03). а со снижением риска развития ИР связан генотип СС (OR=0,36 [0,160.79]: р=0,03). Для полиморфного маркера rsl 1642841 гена FTO в русской популяции Тюменской области повышающим риск развития ожирения является аллель A (OR=1.64 [1,02-2,65]; р=0,007), а понижающими риск - аллель С и генотип СС (C)R=0,61 [0,38-0,98]; р=0,004 и C)R=0,37 [0,17-0,82]; р=0,004). Повышающим риск формирования ИР является аллель A (OR=l,88 [1,19-2,96]; р=0.007) полиморфного маркера rsl 1642841 гена FTO, снижают риск ИР аллель С (OR=0.61 [0,38-0,98]; р=0,04) и генотип СС (OR=0,37 [0,17-0.82]; р=0.04).

Ассоциации с СД2 и ИР полиморфного маркера rs7172432 гена C2CD4A впервые исследованы в русской популяции. Точная роль продукта гена C2CD4A в формировании нарушений углеводного обмена не установлена, однако при расчете отношения шансов в русской популяции Тюменской области аллель. 1 показал ассоциации с повышенным риском развития СД2 (OR=1,60 [1.01-2.52]; р=0.04). Ассоциированным с ИР также является аллель A (OR=1.65 [1.05-2.58]; р=0,03). Аллель С полиморфного маркера rs7172432 гена C2CD4A связан с пониженным риском развития СД2 (OR=0,63 [0,40-0,99]; р=0,04) и ИР (C)R=0.61 [0.39-0,95]: р=0.03).

Отдельного внимания заслуживает тот факт, что при полигенном анализе выявлена ассоциация с СД2 сочетания аллелей полиморфных маркеров генов FTO и C2CD4A С помощью программного обеспечения на основе алгоритма APSampler. основанного на динамическом методе Монте-Карло, выполнен комплексный анализ кумулятивного эффекта носительства сочетаний двух и более полиморфных генетических маркеров на формирование СД2. Исследовались сочетания ачлелей и генотипов полиморфных генетических маркеров rsS0S0/36 и rsl 1642841 (FTO), rs57!312 (MC4R), rs2943641 и rs2943634 (IRSI), rs7172432 (C2CD4A). rsl470579 (1GF2BP2), rsl63I84 (KCNQ1), rsl!924032 (SLC2A2). rsl 1634397 (ZFAND6), уже показавшие ассоциации с СД2 в изучаемой популяции. Выявлена биаллельная комбинация аллеля А полиморфного

маркера rs8050136 гена FTO и аллеля А полиморфного маркера rs7172432 гена C2CD4A Аллель А полиморфного маркера rsS050l36 гена FTO самостоятельно не был значимо ассоциирован с развитием СД2 (ассоциацию со сниженным риском развития СД2 продемонстрировал гомозиготный генотип СС (C)R=0.45 [0,24-0,87]; р=0,05), однако его роль выявлена в составе комбинации с аллелем А полиморфного маркера rs7172432 гена C2CD4A. носительство которого по данным настоящего исследования связано с повышенной предрасположенностью к СД2 (OR=I,60 [1,01-2,52]; р=0,04). При анализе ассоциаций сочетаний аллелей исследуемых генов установлено, что совместное носительство комбинации аллеля А полиморфного маркера rs8050i36 гена FTO и аллеля А полиморфного маркера rs7I72432 гена C2CD4A ассоциировано с повышенными рисками формирования СД2 (OR=l,97 [1,18-3,29]; р=0.006). При этом выявленное сочетание аллелей характеризуется большей значимостью ассоциации, чем входящие в сочетание аллели по одиночке, следовательно, полученные результаты соответствуют критерию минимального множества аллелей, и данную комбинацию можно отнести к дополнительным значимым маркерам генетического риска СД2.

ВЫВОДЫ

1. В русской популяции Тюменской области с СД2 ассоциированы полиморфные маркеры rs8050l36 и rsl 1642841 гена FTO. rs294364l и rs2943634 гена IRSI. rs57!3!2 гена MC4R, rsl470579 гена IGF2BP2. rsl63184 гена KCNQ1, rs 11924032 гена SLC2A2, rsl 1634397 гена ZFAND6, rs7172432 гена C2CD4A

2. Повышают риск развития СД2 в русской популяции Тюменской области аллель A (OR=l,96; р=0,01) и генотип A A (OR=8,86; р=0,03) маркера rs57l3l2 гена MC4R, аллель С (OR=l,55; р=0.03) и генотип CC(OR=2,24; р=0,03) маркера rs2943641 гена IRSI и аллель С (OR=l,67; р=0.03) и генотип СС (OR=2,3; р=0,03) маркера rs2943634 гена IRSI, аллель C(OR=1.59: р=0,04) маркера rsl470579 гена IGF2BP2, генотип GG (OR -3.45: р=0.03) маркера rs!63184 гена KCNQ1. аллель A (OR=1.6; р=0.04) маркера rs7172432 гена C2CD4A

3. С пониженным риском развития СД2 в русской популяции Тюменской области ассоциированы генотип СС (OR=0,45; р=0.05) маркера rs8050I36 гена FTO, генотип СС (OR=0,44; р=0,04) маркера rsl 1642841 гена FTO. аллель С (OR=0,51; р=0,01) маркера rs57!312 гена MC4R, аллель Т (OR=0,6; р=0,03) и генотип ТС (OR=0,5; р=0,03) маркера rs2943641 гена 1RS1. аллель A (OR=0,6; р=0,03) и генотип AC (OR=0,48; р=0,03) маркера rs2943634 гена IRSI. аллель A (OR=0,63; р=0,04) маркера rs/470579 гена 1GF2BP2, генотип /1C(OR-(),43; р=0,04) маркера rsl 1924031 гена SLC2A2. аллель G(OR=0,63; р=0,04) маркера rs7172432 гена C2CD4A генотип AG (OR=0,47; р=0,03) маркера rsl 1634397гена ZFAND6.

4. Сочетание аллелей А маркера rsl 1642841 гена FTO и аллеля А маркера rs7172432 гена C2CD4A при полигенном анализе ассоциировано в русской

популяции Тюменской области с повышенным риском развития СД2 (OR = l ,97; р=0,006).

5. В русской популяции Тюменской области повышающими риск развития ожирения являются аллель A (OR=l,92; р=0,005) маркера rs8050136 гена FTO. аллель ,1 (OR=1.88; р=0,007) маркера rs11642841 гена FTO. аллель А (OR=l.6l: р=0.04) маркера rsl558902 гена FTO, аллель Г (СЖ=2,07; р=0.04) маркера rs2241766 гена ADIPOQ, аллель A (OR=l,66; р=0,02) и генотип АА (OR=2,5; р=0.03) гена BCL11A а снижающими риск являются аллель С (OR=0.52; р=0,005) и генотип СС (OR=0,35; р=0,009) маркера rs8050136 гена FTO, аллель С (OR=0,53; р=0,007) и генотип СС (OR=0,34; р=0.008) маркера rs! 1642841 гена FTO, аллель 7(OR=0,62; р=0,04) маркера rsl558902 гена FTO, аллель C7(OR=0,48; р=0,04) маркера rs2241766 гена ADIPOQ, аллель G(OR=0,6; р=0,02) маркера rs243021 гена BCL11A.

6. С риском развития ИР ассоциированы генотип AC (OR=l,36; р=0,03) маркера rs8050136 гена FTO, аллель A (OR=!,64; р=0,04) маркера rs11642841 гена FTO. аллель A (OR=2,71; р=0,002) и генотип АА (OR=10,76; р=0,01) маркера rs571312 гена Л 1С4Р. аллель С (OR=l,58; р=0,04) маркера гs7593750 в области RBMS1-ITGB6, аллель A (OR=l,71; р=0,04) маркера rs!6928751 гена AD1POR2, аллель ,1 (OR=1,65; р=0,03) маркера rs7172432 гена C2CD4A а со снижением риска развития ИР связаны аллель С (OR=0.61; р=0,04) и генотип СС (OR=0,37; р=0,04) маркера rs! 1642841 гена FTO, аллель С (OR=0,37; р=0,002) и генотип ГС (OR=0,42; р=0,01) маркера rs5713¡2 гена MC4R, аллель 7"(C)R=0,63; р=0,04) маркера rs7593730 в области RBMS1-1TGB6, аллель G (OR=0,58; р=0,04) маркера rsl6928751 гена AD1POP2, аллель G (OR=0,61; р=0,03) маркера rs7172432 гена C2CD4A.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Молекулярно-генетическое тестирование полиморфных маркеров rs8050136\\ rsl 1642841 гена, ассоциированного с жировой массой и ожирением (FTO), rs2943641 и rs2943634 гена субстрата инсулинового рецептора-1 (IRS1), rs571312 гена рецептора меланокортина-4 (MC4R), rs/470579 гена белка 2, связывающего инсулиноподобный фактор роста-2 (1GF2BP2). rs 163184 гена, кодирующего субъединицу-1 канала, зависимого от ионов калия (KCMQ1), rsl 1924032 гена внутриклеточного транспортера глюкозы типа 2 (SLC2A2), rsl 1634397 гена, кодирующего домен 6 цинкового пальца (ZFAND6), rs7172432 гена, кодирующего домен С2, зависимый от нонов кальция (C2CD4Á) может быть использовано для формирования группы риска по развитию СД2.

2. Выявление носительства рисковой комбинации аплеля А полиморфного маркера rs8050I36 гена FTO и аллеля А полиморфного маркера rs7172432 гена C2CD4A обосновывает включение пациентов в группу высокого риска и необходимость проведения профилактических мероприятий по предупреждению СД2.

Список опубликованных работ и свидетельств о регистрации объекта интеллектуальной собственности . Суплотова Л.А., Сметашша С.А.. Плотников Н.В.. Мурычева (Вахромее-ва) К.А. Клинико-метаболические и молекулярно-генетические ассоциации у женщин репродуктивного возраста при инсулинорезистентности ожирении и метаболическом синдроме // Медицинская наука и образование Урала. -2013. -№№ 2 (74). - С. 84-91

Мурычева (Вахромеева) К.А., Бельчпкова Л.Н.. Суплотова Л.А.. Носиков В.В. Значение однонуклеотидных полиморфизмов rs52!9 гена KCMJ11 и rsl 1061971 гена ADIPOR2 в формировании риска сахарного диабета 2 типа // Материалы 54-ой научно-практической конференции студентов и молодых ученых с международным участием, АО "Медицинский университет Астана". - 2012. -С. 129-130.

Суплотова Л.А., Бельчпкова Л.Н., Мурычева (Вахромеева) К.А., Носиков В.В. Ассоциация полиморфного маркера rsl 1061971 гена AD1POR2 с сахарным диабетом 2 типа // Проблемы эндокринологии - 2012 - №4 - Выпуск 2. - С. 8.

Суплотова Л.А., Бельчпкова Л.Н., Мурычева (Вахромеева) К.А.. Носиков В.В. Ассоциация однонуклеотидного полиморфизма rs5219 гена KC\'Jlh сахарным диабетом 2 типа // Материалы И научно-практической конференции эндокринологов УрФО «Актуальные проблемы современной эндокринологии». Екатеринбург. - 2012. - С. 19-20.

Суплотова Л.А., Бельчпкова Л.Н„ Мурычева (Вахромеева) К.А., Рожнова Н.А., Носиков В.В. Изучение ассоциаций генетического полиморфизма rs5219 гена KCNJ11 с сахарным диабетом 2 типа в русской популяции // Материалы научно-практической конференции с международным участием «Терапевтическая школа С.П. Боткина и ее вклад в развитие отечественной клинической медицины». СПб. - 2012. - С. 13-14. Суплотова Л.А., Бельчпкова Л.Н., Мурычева (Вахромеева) К.А.. Носиков В.В. Ассоциация полиморфного маркера rsl 1061971 гена AD1POR2 с сахарным диабетом 2-го типа/ // Сборник тезисов VI Всероссийского конгресса эндокринологов. Москва. - 2012. - С. 29.

Мурычева (Вахромеева) К.А. Genetics of Type 2 Diabetes: Insulin Resistance // Материалы 46 Всероссийской научной конференции с международным участием студентов и молодых ученых «Актуарные проблемы теоретической, экспериментальной, клинической медицины и фармации» Тюмень. - 2012. - С. 146-147.

Суплотова Л.А., Бельчпкова Л.Н., Мурычева (Вахромеева) К.А. Эпидемиологическая характеристика показателей распространенности и заболеваемости сахарным диабетом 2 типа в Тюменской области по данным регионального регистра за 2002-2012 гг. // Сборник тезисов VI Всероссийского диабетологического конгресса. Москва. - 2013. - С. 36 Мурычева (Вахромеева) К.А., Суплотова Л.А., Бельчпкова Л.Н Ассоциации полиморфных генетических маркеров с сахарным диабетом "> типа в русской популяции // Сборник тезисов II Всероссийского конгресса Ин-

с

новационные технологии в эндокринологии с участием стран СНГ. Москва. - 2014. - С. 71.

10. Мурмчева (Вахромсева) К.Л.. Суплотова Л.А., Бельчикова Л.Н. Ассоциации полиморфного маркера rs163184 гена KCNQ1 с сахарным диабетом 2 типа // Материалы «Человек и лекарство. Урал 2014». Тюмень. - 2014. -С. 65-66.

11. Мурычева (Вахромеева) К.А. Ассоциации полиморфных маркеров rs294364l и rs2943634 гена IRSI с сахарным диабетом 2 типа // Материалы 48 Всероссийской научной конференции с международным участием студентов и молодых ученых «Актуальные проблемы теоретической, экспериментальной, клинической медицины и фармации». Тюмень. - 2014. - С. 114-115.

12. Суплотова Л.А., Вахромеева К.А., Бельчикова Л.Н., Носиков В.В. Поиск ассоциации полиморфных генетических маркеров с сахарным диабетом 2 типа в русской популяции // Медицинская паука и образование Урала. -2014. -№4.-С. 79-85.

13. Суплотова Л.А., Вахромеева К.А., Бельчикова Л.Н., Носиков В.В. Ассоциации полиморфных генетических маркеров гена FTO с сахарным диабетом 2 типа в русской популяции Тюменской области // Медицинская наука и образование Урала. - 2014. - №4. - С. 25-29.

14. Свидетельство о регистрации базы данных «Набор генетических полиморфизмов для проведения генетического тестирования индивидуальной предрасположенности к сахарному диабету 2 типа». Автор: Мурычева (Вахромеева) К.А. № 2014620078 от 13.01.14.

15. Свидетельство о регистрации базы данных «Генетические полиморфизмы, ассоциированные с сахарным диабетом 2 типа». Автор: Мурычева (Вахромеева) К.А. № 2012620304 от 23.03.12.

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ И УСЛОВНЫХ ОБОЗНАЧЕНИЙ

АД - артериальное давление

ВОЗ - Всемирная организация здравоохранения

ДНК - дезоксирибонуклеииовая кислота

имт - индекс массы тела

ИР - инсулинорезистентность

ИРИ - иммунореактивный инсулин

ИФР-2 - инсулиноподобный фактор роста-2

ОБ - окружность бедер

ОТ - окружность талии

ПССП - пероральные сахароснижающие препараты

пгтт - пероральный глюкозо-толерантный тест

СД2 - сахарный диабет 2-го типа

НОМА-В - индекс функциональной активности В-клеток

поджелудочной железы

НОМА-1Я - индекс инсулинорезистентности

ВАХРОМЕЕВА Ксения Александровна

ПОЛИМОРФНЫЕ ГЕНЕТИЧЕСКИЕ МАРКЕРЫ САХАРНОГО ДИАБЕТА 2-го ТИПА И ИХ АССОЦИАЦИИ С КЛИНИКО-МЕТАБОЛИЧЕСКИМИ ПОКАЗАТЕЛЯМИ В РУССКОЙ ПОПУЛЯЦИИ

14.01.02 - эндокринология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Подписано в печать 4.03.2015 г. Формат 60x80/16. Печ. л. 1,0. Печать цифровая. Тираж 100. Зак. № 14.

Типография ООО «Максимус», Тюмень, ул. 50 лет ВЛКСМ, 51 корп., оф. 524. Тел. (3452) 55-23-52.