Автореферат и диссертация по медицине (14.00.13) на тему:Перекисное окисление липидов и антиоксидантная защита при ишемическом инсульте и артериальной гипертензии

Р Г Б ОД 2 2 АПР 1396

На правах рукописи

МЕЛЬНИКОВА Елена Валентиновна

ПЕРЕКИСНОЕ ОКИСЛЕНИЕ ЛИПИДОВ И АНТИОКСИДАНТНАЯ ЗАЩИТА ПРИ ИШЕМИЧЕСКОМ ИНСУЛЬТЕ И АРТЕРИАЛЬНОЙ ГИПЕРТЕНЗИИ (КЛИНИКО-ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ)

14.00.13- нервные болезни 14.00.16- патологическая физиология

АВТОРЕФЕРАТ

лиссертании иа соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Саню-Петербург 1996

Работа выполнена и Санкт-Петербургском Государственном медицинском университете имени академика И П.Павлова

Научные руководители:

доктор медицинских наук, профессор В.А.Сорокоумои доктор медицинских наук, профессор С.А.Шестакова

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор Л.Ю.Макаров доктор медицинских наук, профессор В.В.Давыдов

Ведущее учреждение - Военно-Медицинская Академия

Защита состоится" 1996 г. в час

на заседании диссертационного совета Д 074.16.01 при Санкт-Петербургской медицинской академии последипломного образования (193015, Санкт-Петербург, ул. Салтыкова-Щедрина, 41)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке академии Автореферат разослан 996г.

Ученый секретарь диссертационного совета доктор медицинских наук, профессор

Л.А.Сайкова

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

АКТУАЛЬНОСТЬ ТЕМЫ. Изучение сосудистых заболеваний нервной системы, в частности, ишемического инсульта, остается одной из важных проблем современной медицины, что обусловлено частой заболеваемостью, стойкой утратой трудоспособности и высокой смертностью больных. В связи с этим разработка вопросов патогенеза, клиники и лечения сосудистых заболеваний головного мозга продолжает оставаться в центре внимания исследователей (Н.В.Верещагин, 1980,1995, Е.И. Гусев, Г.С. Бурд , 1993, А.И.Федин, 1995, В.А.Сорокоумов, 1993 и др.).

Установлено, что частота возникновения и тяжесть течения ишемического инсульта зависят от наличия у больных артериальной ги-пертензии (Г.А. Акимов, 1983, В.А.Гусев и соавт., 1982, В.Е.Смирнов и соавт., 1988, М.К. Кипиани и соавт., 1989 и др.). Однако причины, по которым артериальная гипертензия является фактором риска ишемического инсульта, остаются неясными. Достаточно широко изучены при артериальной гипертензии особенности церебральной гемодинамики , которые приводят к выраженным функциональным и морфологическим изменениям мозговых сосудов, способствующим разлитию ишемии головного мозга (И.В. Ганиушкина, Н.В.Лебедева, 1987, 1995, А.А. Комиссаренко, 1995, Г.Б. Вайшитейн, М.В. Воробьев, 1988, Katayama Y. et al., 1984, Susuki S. et al., 1984 и др.).

Активно изучаются метаболические нарушения, возникающие при ишемии и реперфузии головного мозга. В частности, показана важная роль расстройств регуляции перекисного окисления липидов (ПОЛ) в патогенезе церебральной ишемии. На это указывают высокая предрасположенность тканей мозга к индукции свободнорадикальных реакций и крайне низкая переносимость головным мозгом ишемии ( М.В. Биленко ,1989). Причем ряд авторов полагают, что дисбаланс в системе регуляции ПОЛ, возникающий на стадии ишемии, становится особенно значимым на стадии реперфузии (Е.В. Никушкин, 1989, Clark Lee, 1994, Globus M.Y.T., 1995). Данные о состоянии антиокси-дантной защиты мозга при ишемии и, особенно, при реперфузии весьма скудны и носят противоречивый характер. Еще меньше изучены изменения метаболизма тканей мозга, вызываемые артериальной ги-пертензией, которые могут быть причиной большей ранимости мозга при его ишемии или гипоксии. Единичные наблюдения посвящены процессам ПОЛ и антиоксидантной защите при ишемии мозга, развившейся на фоне артериальной гипертензии (Ito et al., 1993).

В свете вопросов патогенеза ишемического «¡.сушлга особый интерес представляет изучение тромбоцитарнош звена гемостаза, поскольку активация тромбоцитов а, следовательно, изменения их метаболизма при гипертонической болезни и ишемическом инсульте являются одной из причин развития тромбоза мозговых сосудов (Э.С. Габри-элян и соавт., 1985, С.Э. Акопов и соавт., 1988, В.Г. Ио;юва, З.А. Суслина, 1995). С другой стороны, тромбоциты - легко доступные для исследования клетки, которые могут служить своего рода моделью нейрона, имея ряд сходных черт, прежде всего, конечно, с серотони-нергическим нейроном, в частности, в отношении метаболизма липи-дов ( Malmgren, Hasselmark, 1988).

В последние годы при лечении ряда заболеваний, в том числе ише-мического инсульта, внимание клиницистов привлекают лечебные средства из группы блокаторов медленных кальциевых каналов (Marshall R.S., Mohr J.P., 1993, Л.Г. Ерохина, 1995 ). Нарушения го-меостаза внутринейрональных ионов кальция имеют существенное значение для активации ПОЛ в нервной ткани (Е.В. Никушкин, 1989) Однако, сведений об антиоксидантном эффекте этих лечебных средств при коррекции ими ишемических повреждений головного мозга на фоне артериальной гипертензии в доступной нам литературе не имеется.

ЦЕЛЬ ИССЛЕДОВАНИЯ. Цель настоящей работы - повысить эффективность лечения больных ишемическим церебральным инсультом на фоне гипертонической болезни, воздействуя на патогенетические механизмы, связанные с изменениями процессов перекисного окисления липидов и антиоксидантной защиты в тканях головного мозга, тромбоцитах и плазме крови, с помощью блокатора медленных кальциевых каналов нимодипина.

ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ:

1. Изучить состояние перекисного окисления липидов (по уровню -малонового диальдегида ) и активности супероксиддисмутазы, как показателя антиоксидантной защиты, в тканях головного мозга крыс со спонтанной и реноваскулярной артериальной гипертензией.

2. Изучить состояние перекисного окисления липидов и антиоксидантной защиты при ишемическом и реперфузионном повреждении головного мозга на фоне хронической реноваскулярной артериальной гипертензии у крыс.

3. Оценить влияние блокатора медленных кальциевых каналов нимодипина на уровень малонового диальдегида и активность супероксиддисмутазы при ишемическом и реперфузионном повреждении головного мозга.

4. Исследовать АДФ- и адреналин- индуцированную агрегацию тромбоцитов в группах больных гипертонической болезнью, больных

ишемическим инсультом на фоне гипертонической болезни и у больных ишемическим инсультом, получавших Нимотоп 8 (нимодипин).

5. Определить содержание малонового диальдегида в тромбоцитах, как показатель интенсивности метаболизма арахидоновой кислоты в этих клетках, у больных гипертонической болезнью, у больных ишемическим инсультом на фоне гипертонической болезни, и у больных ишемическим инсультом, получавших Нимотоп в.

6. Изучить активность супероксиддисмутазы, как показатель антиоксидантной защиты, в тромбоцитах, плазме крови в динамике ишемического инсульта у больных гипертонической болезнью.

7. Дать общую клиническую оценку эффективности применения Нимотоп Б при ишемическом инсульте на фоне гипертонической болезни.

НАУЧНАЯ НОВИЗНА РЕЗУЛЬТАТОВ. Впервые получены данные о состояния перекисного окисления липидов и антиоксидантной защиты при ишемическом инсульте и артериальной гипертензии в различных средах и тканях организма (ткани мозга, тромбоциты и плазма крови в эксперименте, плазма крови, тромбоциты у больных людей). Получены данные об изменении активности супероксиддисмутазы при реперфузии ишемизированного участка мозга в условиях артериальной нормо- и гипертензии. Сопоставлена функциональная и метаболическая активность тромбоцитов, а также исследовано состояние ПОЛ и антиоксидантной зашиты в плазме крови в динамике ишемического инсульта, развившегося на фоне гипертонической болезни. Впервые показано влияние нимодипина на уровень МДА и активность СОД в тканях мозга, тромбоцитах и плазме крови при ишемическом инсульте, и, таким образом, возможность коррекции имеющихся нарушений процессов ПОЛ при данном заболевании путем блокады медленных кальциевых каналов.

ТЕОРЕТИЧЕСКАЯ И ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ РАБОТЫ Проведенное исследование дополняет и углубляет современные представления о значении расстройств регуляции ПОЛ в патогенезе ишемического и реперфузионного повреждения головного мозга в условиях артериальной гипертензии. Выявлены усиление процессов ПОЛ и ослабление антиоксидантной зашиты тканей мозга при хронической артериальной гипертензии, что позволяет приблизиться к пониманию механизмов повреждающего влияния повышенного АД на нейрон и окружающие его ткани. Комплексный подход в изучении функциональной и метаболической активности тромбоцитов при гипертонической болезни и ишемическом инсульте, развившемся 11а фоне гипертонической болезни, позволил выявить наличие пула гиперреак-типимх тромбоцитов при эгих состояниях, что дополняет существую-

щие представления о роли системы гемостаза, в частности ее тромбо-цитарного звена, в патогенезе ишемических осложнений гипертонической болезни.

Определена целесообразность исследования агрегационной функции, содержания МДА и активности СОД тромбоцитов для оценки имеющихся нарушений тромбоцитарногс звена гемостаза и эффективности проводимой антиагрегантной терапии. Показана эффективность применения нимодипина - блокатора медленных кальциевых каналов для лечения ишемических повреждений головного мозга. Применение нимодипина при ишемическом инсульте отчетливо уменьшает выраженность процессов ПОЛ, снижая уровень МДА, как при артериальной нормотензии, так и при гипертензии, нормализует АД, снижает агрегационную функцию тромбоцитов, обеспечивает регресс неврологических расстройств. Разработана схема лечения больных в острой фазе ишемического инсульта, включающая внутривенную ин-фузию и последующий перорапьный прием Нимотопа Б.

• ОСНОВНЫЕ ПОЛОЖЕНИЯ, ВЫНОСИМЫЕ НА ЗАЩИТУ

1. При хронической артериальной гипертензии в.коре головного мозга крыс со спонтанной и реноваскулярной артериальной гипертен-зией отмечается усиление процессов перекисного окисления липидов, сочетающееся со снижением активности супероксиддисмутазы, что свидетельствует об ослаблении антиоксидантной защиты.

2. Ишемия головного мозга и, особенно, реперфузия, развившиеся на фоне реноваскулярной артериальной гипертензии приводят к более выраженным изменениям процессов перекисного окисления липидов в ишемизированных участках мозга, чем при церебральной ишемии-реперфузии у нормотензивного контроля.

3. У больных гипертонической болезнью II стадии отмечается усиление агрегационной функции тромбоцитов, в частности АДФ- и адреналин- индуцированной агрегации, а также увеличение в тромбоцитах уровня малонового диальдегида с одновременным усилением активности антиоксидантого фермента супероксиддисмутазы. При ишемическом инсульте, развившемся на фоне гипертонической болезни еще большее усиление агрегационной функции тромбоцитов и процесса перекисного окисления липидов в них происходит на фоне сниженной по сравнению с исходной активност и супероксиддисмутазы.

4. Нимодипин.блокатор медленных кальциевых каналов, обладает при ишемическом инсульте на фоне артериальной гипертензии ан-тиоксидантным эффектом, снижая уровень малонового диальдегида в тканях мозга, тромбоцитах и плазме крови.

АПРОБАЦИЯ И ВНЕДРЕНИЕ РАБОТЫ В ПРАКТИКУ. Диссертация выполнена в соответствии с планом научных исследований по

проблеме " Заболевания сердечно-сосудистой системы" , разрабатываемой в Санкт-Петербургском Государственном медицинском Университете им. акад. И.П.Павлова в рамках программы ГКНТ Российской Академии наук, номер государственной регистрации 01.94.0001562, шифр темы А.01.0021.

Материалы диссертации доложены и обсуждены на: 1) Заседании Санкт-Петербургской Ассоциации Неврологов ( январь 1995г.),

2) Всероссийской конференции "Артериальная гипертензия. Экспериментальные и клинические аспекты" ( Санкт-Петербург, май 1995 г),

3) Конференции молодых физиологов и биохимиков России

(Санкт-Петербург, сентябрь 1995 г), 4) Конференции "Физиологические основы гемостаза" (Санкт-Петербург, ноябрь 1995 г).

Диссертация апробирована на совместном заседании проблемной комиссии "Заболевания сердечно-сосудистой системы" и кафедр неврологии и нейрохирургии и патофизиологии СПбГМУ им. акад. И.П. Павлова (январь 1996 г).

Результаты диссертационной работы внедрены в практику клиники и кафедры неврологии и нейрохирургии СПбГМУ им.акад. И.П. Павлова и городской больницы N2 г. Санкт-Петербурга.

ПУБЛИКАЦИИ. По теме диссертации опубликовано 9 научных работ, список которых приведен в конце автореферата.

СТРУКТУРА И ОБЪЕМ ДИССЕРТАЦИИ. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, обшей характеристики материала и методов исследования, трех глав, содержащих изложение результатов собственных исследований, заключения, выводов и практических рекомендаций. Указатель литературы содержит 301 источник, из них 210 зарубежных, 91 отечественных. Объем текста диссертационной работы 123 стр., общий объем 200 стр. Работа иллюстрирована 32 таблицами и 1 Урисунками.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

МА ТЕР И АЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Экспериментальные исследования выполнены на 114 нелинейных белых крысах-самцах, 20 крысах-самцах со спонтанной гипертензией (SHR, линия Окомото) в возрасте 18-20 недель и 20 крысах-самцах линии Wistar Kyoto (WKY), служивших нормотензивным контролем.

Реноваскулярную артериальную гипертензию (РАГ) у нелинейных крыс воспроизводили по Rojo-Ortega (1968) путем перевязки аорты между ветвями почечных артерий таким образом, что левая почка находилась в условиях ишемии.

Для создания церебральной ишемии у нелинейных крыс производили двухстороннюю перевязку общих сонных артерий, ' роком на 4 часа, что позволяло получить так называемую "неполную" ишемию, преимущественно в передних отделах коры головного мозга ( H.H. Боголепов, 1979, Yamomotoet al.,1983). Через 4 часа кровоток в артериях восстанавливали на 15 минут. Затем животное забизали путем декапитации. Для воспроизведения ишемии-реперфузии головного мозга использовали как гипертензивных животных с РАГ, так и соответствующих нормотензивных контрольных крыс.

Влияние нимодипина, блокатора медленных кальциевых каналов группы дигидропиридина, исследовали на моделях ишемии-реперфузии головного мозга. Для этого вводили препарат в дозе 5 мг/кг за 15 минут до восстановления кровотока, т.е. за 30 минут до декапитации.

В гомогенатах передних отделов коры головного мозга определяли уровень МДА (нмоль/ мг липвдов) по методу Stuart (1975) в модификации С.Г. Конюховой и соавт. (1989), а также активность СОД (усл.ед./мг белка) кверцетановым методом в модификации В.А. Костюк и соавт. (1990).

Клинические исследования выполнены у 26 здоровых добровольцев, 16 больных гипертонической болезнью (ГБ) II стадии и 53 больных ишемическим инсультом на фоне гипертонической болезни. Возраст обследуемых (45-65 лет) не отличался достоверно во всех группах. Уровень систолического АД в группах больных ГБ и больных ишемическим инсультом также статистически не отличался и составлял 171.5± 5,2 мм рт. ст. и 168.7 ± 5.6 мм рт. сг. соответственно.

Здоровым добровольцам и больным ГБ, не получавшим до исследования медикаментозного лечения, производили однократное определение следующих показателей: уровня МДА в плазме крови и тромбоцитах, активности СОД в плазме крови и тромбоцитах с использованием вышеуказанных методов, а также агрегационной функции тромбоцитов, индуцированной АДФ и адреналином, фотометрическим методом (Вот, 1962).

Подбор больных в основную группу осуществлялся по следующим критериям: 1) Диагноз - острое нарушение мозгового кровообращения по ишемическому типу в каротидном бассейне, срок 1- 2е сутки. 2) Отсутствие тяжелой сопутствующей патологии ( сахарный диабет, ревматизм, острые инфекции, цирроз печени, алкоголизм). 3) Отсутствие выраженной хронической дисциркуляторной энцефалопатии. 4) Наличие в анамнезе ГБ. 5) Отсутствие резкого ухудшения сердечной деятельности 6) Отсутствие или умеренная выраженность общемозговой симптоматики.

В группе больных ншемнческим инсультом всем больным проводилась клиническая оценка состояния ЦНС, производились общепринятые анализы, исследование спинномозговой жидкости, глазного дна, эхо-энцефалоскопия, в диагностически сложных случаях - компьютерная томография.

Больные ишемическим инсультом были разделены на две группы: 23 человека получали общепринятую терапию с использованием физиологического раствора, эуфиллина, хлорида калия, сульфата магния, ноотропила, диуретиков. 30 человек получали курс лечения с использованием препарата Нимотоп S (фирма Bayer). В первые - третьи сутки инсульта больные получали препарат внутривенно, затем в таб-летированной форме.

Внутривенную инфузию производили с помощью шприцевого дозатора ПШВ-1, доза однократной иифузии составляла 10 мг. Вводился препарат со скоростью 1 мг/час - в первые 2 часа и 2 мг/час - в остальные 4 часа инфузии, в качестве коинфузионного раствора использовалось 800-1000 мл физиологического раствора. Последующий перораль-ный прием составлял 240 мг/сут. ( 2 таблетки по 30 мг - 4 раза в день).

Биохимические исследования в этой группе больных осуществлялись в первые сутки (до начала лечения), во вторые сутки, на 14е и 28е сутки течения инсульта.

Статистическая обработка данных осуществлялась параметрическими методами с использованием критерия Стьюдента, непараметрическим методом Вилкоксона-Уилш, а также с использованием линейной регрессии и коэффициента корреляции г.

РЕЗУЛЬ ГА ТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

По полученным в эксперименте данным ишемия и ишемия-репер-фузия мозга у нормотензивньгх крыс вызывают значимое усиление процессов ПОЛ ( по уровню МДА в ишемизированном участке мозга). Активность СОД в ишемизированном участке мозга возрастает и при последующей реперфузии эти изменения нивелируются ( рис. 1 и 2).

В серии с воспроизведением реноваскулярной артериальной гипер-тензии (РА Г) выявлено усиление процессов ПОЛ (по уровню МДА) на фоне снижения активности СОД в передних отделах коры головного мозга. Аналогичный характер изменений ( повышение уровня МДА и снижение активности СОД ) в передних отделах коры головного мозга был обнаружен у крыс со спонтанной гипертензией (БНЯ) (табл. 1 и 2).

Таблица 1. Уровень МДА и активность СОД в гомогенатах мозга крыс

линий ШУиЯНК.

группа животных МДА нмоль/мг липидов СОД усл. сд./мг белка

\УКУп= 20 БНИ. п= 20 0.95 ±0.12 1.67 ±0.08*** 4.7 ± 0.14 .. 2.8 ± 0.18***

*** - р< 0.001

Таблица 2. Уровень МДА и активность СОД в плазме крови крыс линий ШУиЯНЯ.

группа животных МДА нмоль/мг липидов СОД усл.ед./мг белка

МУКУ п= 20 БНИ п= 20 3.14 ±0.35 6.15 ±0.38*** 0.88 ±0.24 1.21+0.13

***-р< 0.001

Ранее было показано, что хроническая артериальная гипертензия приводит к изменению морфофункциональных характеристик микрососудов и нейронных структур головного мозга ( В.А. Сорокоумов, 1993) и возрастанием активности основных ферментов энергетического метаболизма ( Е.Р. Баранцевич, 1986). По-видимому, выявленные нами интенсификация ПОЛ и снижение антиоксидантной защиты являются одним из компонентов повреждения головного мозга при артериальной гипертензии, включающего в себя нарушения его кровообращения и различных звеньев метаболизма нервной ткани.

При ишемии и, особенно, при ишемии-реперфузии на фоне РАГ усиление ПОЛ выявляется особенно резко. Активность СОД при ишемии мозга на фоне РАГ возрастает, и при последующей реперфузии этот эффект усиливается.

Введение нимодипина нормотензивным животным с ишемией-реперфузией головного мозга вызывает снижение повышенного в этих условиях уровня МДА в передних отделах коры до контрольных цифр и не влияет на активность СОД. Введение нимодипина в аналогичных условиях гипертензивным животным также вызывало снижение уровня МДА, однако выраженное в меньшей степени, чем у нор-мотензивных животных. Одновременно наблюдалось снижение активности СОД в гомогенатах передних отделов коры головного мозга.

□ нормотензивные

крысы В крысы с РАГ

И н Р И.Р и Н

К - контрольная серия И - крысы с ишемией мозга

И и Р - крысы с кшемическим и реперфуэионным повреждением головного мозга И и Р, Н - крысы с ншемией-реперфузней головного мозга и введением нимодипи-на

Рис. 1. Уровень МДА в гомогенатах мозга крыс ( нмолы/мг тлпидов )

□ нормотензивные

крысы В крысы с РАГ

И и Р И, Р11II

К - контрольная серия И - крысы с ишемией мозга

И и Р - крысы с ишемичесхим и реперфузиотгым повреждением головного мозга И и Р, Н - крысы с ишемией-реперфузней головного мозга и введением нимодшш-на

Рис.2 Активность СОД в гомогенатах мозга крыс ( усл. ед./мг белка )

Выявленные изменения уровня МДА при ишемии-реперфузии головного мозга у нормотензивных животных имеют свое подтаерждение в литературе (М.В. Биленко,1989, Е.В.Никушкин,1989). Большая степень активации ПОЛ у крыс с ишемией-реперфузией головного мозга на фоне РАГ определяется более высокими фоновыми значениями уровня МДА у гипертензивных крыс по сравнению с нормотензигшыми животными.

В соответствии с общепринятым взглядом на СОД, как на адапта-ционый фермент, активность которого направлена на снижение интенсивности ПОЛ, нужно отметить, что изменение его активности не всегда соответствовало интенсивности процессов ПОЛ. Так, у нормотензивных животных относительно небольшое увеличение уровня МДА при ишемии вызывало значительный подъем активности СОД, а в условиях постишемической реперфузии при наибольшей интенсив- ' ности ПОЛ активность СОД не превышала стационарного уровня.

Механизм этого явления может быть связан с первичным усилением ПОЛ и вторичным истощением СОД. С другой стороны, возможно первичное снижение активности СОД, идущее параллельно с активацией ПОЛ. Снижение активности СОД может быть связано также с ин-гибирующим влиянием высоких концентраций продуктов ПОЛ. -

Что касается изменений активности СОД в тканях головного мозга крыс со спонтанной гипертензией (SHR) и хронической РАГ, можно предположить, что снижение активности фермента при гипертензии является одним из механизмов прогрессирования болезни и может способствовать развитию осложнений ГБ, в том числе и ишемических.

Наше предположение о возможности влияния на процессы ПОЛ в ишемизированном мозге путем блокады медленных кальциевых каналов подтвердилось, так как в обеих группах ( нормотензивные животные и крысы с РАГ) введение нимодипина вызвало снижение уровня МДА. Известно, что повышение внутриклеточного кальция является ведущим фактором повреждения нейронов как в ишемическом, так и в постишемическом периодах. Усиление процессов ПОЛ под влиянием Са2+ объясняют рядом причин, среди которых наиболее важным можно считать способность Са2+ активировать Fe24, переводя его из связанной в свободную форму, усиливать конверсию ксантиндегидрогена-зы в ксантиноксидазу, активировать фосфолипазный гидролиз фос-фолипидов, в свою очередь способствующий активации процессов ПОЛ ( Siesjo, 1989, Siman et al., 1988, Hong et al., 1994 ).

Следовательно, снижение внутриклеточной концентрации Са2+ в нейронах под действием нимодипина косвенным образом предотвращает аномальное усиление ПОЛ, способствуя увеличению ан-

тиоксидантной защиты тканей мозга в условиях ишемии и нос ^дующей реперфузии как при нормальном уровне АД, так и при артериальной гипертензии.

В клинических исследованиях при изучении агреганионной функции тромбоцитов у здоровых добровольцев, больных ГБ и больных ишемическим инсультом на фоне ГБ было выявлено усиление АДФ-индуцированной агрегации тромбоцитов при ГБ и ишемическом инсульте (повышение максимальной амплитуды агрегации, укорочение времени максимальной скорости агрегации и времени достижения максимальной агрегации).

При изучении адреналин-индуцированной агрегации тромбоцитов также прослеживалось усиление агреганионной активности тромбоцитов при ишемическом инсульте и при ГБ, однако, выраженное в меньшей степени при ишемическом инсульте, что может быть связано с появлением пула "истощенных" тромбоцитов при этом заболевании.

Для изучения, процессов ПОЛ и антиоксидантной защиты при ГБ и ишемическом инсульте мы начали свои исследования с определения уровня МДА и активности СОД в плазме крови, так как эти показатели в плазме крови отражают как состояние ПОЛ в различных тканях организма, так и процесс перекисного окисления липидов плазмы. При ГБ и ишемическои инсульте отмечено значимое увеличение уровня МДА по сравнению с контролем. Активность СОД в плазме крови у больных ГБ снижалась более чем в 5 раз, и была еще более сниженной при ишемическом инсульте (табл. 3).

Таблица 3. Уровень МДА и активность СОД в плазме крови больных ишемическим инсультом и ГБ._

группа больных МДА мкмоль/мг липидов СОД усл.ед./ г белка

контроль п= 26 ГБ л=16 Инсульт п=53 1.46 ±0.01 4.05 ± 0.45 5.3 ±0.04 *** ААА 39.0 ± 0.8 .7.0 ±0.7 5.8+0.03 ААА

*** - р< 0.001 по сравнению с контрольной группой ААА - р< 0.001 по сравнению с группой больных ГБ

При изучении процессов ПОЛ в тромбоцитах было выявлено статистически достоверное повышение (почти в 9 раз) уровня МДА у больных ГБ и еще большее повышение (почти в 12 раз) у больных с ишемическим инсультом, развившемся на фоне ГБ, что свидетельствует об активации тромбоцитов при данных заболеваниях, особенно при ишемическом инсульте. Активность СОД в тромбоцитах при ГБ была более высокой, чем в контроле, тогда как при ишемическом инсульте она снижалась до величин ниже контрольных, что г оворит о недоста-

точной антиоксидантной завдте тромбоцитов при ишемии мозга. Отмечалась положительная корреляция между уровнем МДА и активностью СОД в тромбоцитах в группе больных ГБ (г=0,5893), а также между величиной активности СОД продолжительностью гипер-тензии (г=0,7921). Достоверных корреляционных зависимостей в группе больных с ишемическим инсультом обнаружено не было ( табл.4).

Таблица 4. Уровень МДА и активность СОД в тромбоцитах больных ишемическим иисультом и ГБ,

группа больных МДА нмоль/1010 клеток СОД усл. ед.Л 0® клеток

контроль 11=26 0.25 ± 0.05...................................5.2 ± 0.38............

ГБ п=16 2.36 ± 0.38*** 7.8 ± 0.64***

инсульт п=53 3.07 ± 0.04*** ААЛ_4.7±0.04ААА_

*** - р< 0.001 по сравнению с контрольной группой а а а . р < 0.001 по сравнению с группой больных ГБ

Таким образом, выявлено значимое усиление процессов ПОЛ (по уровню МДА) при ГБ и при ишсмичсском инсульте, как в тромбоцитах, так и в плазме крови. Причем, при ишемическом инсульте имелась тенденция к еще большему усилению процессов ПОЛ по сравнению с таковыми при ГБ. Активность СОД в тромбоцитах при ГБ повышалась, а в плазме крови • снижалась. При ишемическом инсульте активность СОД была сниженной и в тромбоцитах, и в плазме крови по сравнению с исходными значениями.

Больные ишемическим инсультом были разделены на две группы по видам лечения. 23 пациентам ( 7 женщин и 16 мужчин) проведен курс общепринятой терапии, и 30 человек ( 6 женщин и 24 мужчины) получили курс лечения Нимотопом Б. В группе больных, получавших Ни-мотоп Б, не наблюдались какие-либо побочные эффекты данного лекарственного средства. Больные хорошо переносили внутривенную ин-фузию, у них отмечались улучшение настроения, легкая никотинопо-добная реакция в виде гиперемии лица, не было углубления расстройств сознания. АД снижалось не более чем на 20 мм рт. ст. от исходного, затем устанавливалось на привычных для больного цифрах. Отчетливый регресс неврологической симптоматики наблюдался уже в первые трое суток введения препарата и сохранялся у всех пациентов, получавших Нимотоп Б: исчезала общемозговая симптоматика, нарастала мышечная сила в паретичных конечностях, уменьшались и исчезали расстройства чувствительности, при левосторонних очагах -уменьшались зфатические расстройства. Прием таблстированнмх форм Нимотона Э не сопровождался какими-либо побочными леи-

ствиями. АД несущественно колебалось возле установившего*} уровня, сохранялся регресс неврологических симптомов. При сравнении двух групп больных был выявлен более быстрый регресс неврологических расстройств в группе больных, получавших Нимотоп S.

При исследовании АДФ- и адреналин-индуцировашшй агрегации тромбоцитов у больных ишемическим инсультом в динамике заболевания не было выявлено значимых различий в агрегационной активности тромбоцитов в 1 с, 14е и 28е сутки наблюдения у больных, получавших "обычную" терапию. У больных, получавших Нимотоп S, ан-тиагрегантный эффект препарата обнаруживался уже на 2е сутки его применения и сохранялся в последующем.

Показатели ПОЛ и антиоксидантной защиты в тромбоцитах и плазме крови при ин: омическом инсульте, на фоне "обычной" терапии существенно не изменялись на 14е и 28е сутки течения заболевания. При применении Нимотопа S уровень МДА в тромбоцитах снижался во вторые сутки и оставался на таком же уровне в 14е и 28е сутан инсульта, что свидетельствует о выраженном антиокидантиом эффекте препарата. На это же указывает снижение уровня МДА в плазме крови (те же сроки) и ликворе (2е сутки инсульта) больных, получавших Нимотоп S (рис. 3).

100 90 80 70 60 50 40 30 20 10 0

1йдень 2йдень Мйдекь 28 день

\

\

\

ь» ^^

^ —- —1

"тромбоциты * ■ плазма кропи

Рис. 3. Уровень МДА в тромбоцитах и плазме крот в динамике инсульта трм лечении Нимотопом S ( в % от исходного)

Антиоксидантный и антиагрсгантный эффекты Нимотопа Б, по-видимому, связаны с блокадой медленных кальциевых каналов, поскольку повышенное поступление Са2* в Тромбоциты стимулирует не только контрактильные процессы, связанные с агрегацией и секрецией, но и активность фосфолипазы А2, высвобождающей из мембранных фосфолипидов жирные кислоты, главным образом, арахи-доновую кислоту. Полилснасыщснныс жирные кислоты, находяишеся в свободном состоянии, окисляются с существенно большей скоростью, чем эстерифицированные, что ведет к активации ПОЛ в тромбоцитах. Соответственно, снижение концентрации внутриклеточного Са2+ под влиянием Нимотопа Б вызывает снижение интенсивности ПОЛ в тромбоцитах.

ВЫВОДЫ

1.При хронической артериальной гипертензии в коре передних отделов головного мозга содержание малонового диальдегида увеличено, а активность суперокснддисмутазы снижена по сравнению с соответствующим контролем, что указывает на интенсификацию процессов перскисного окисления липидов , связанную с ослаблением механизмов антиоксидантной зашиты тканей мозга.

2. При ишемии-реперфузии головного мозга на фоне хронической реноваскулярной артериальной гипертензии в ишемизированных участках коры увеличено содержание малонового диальдегида и увеличена активность супероксиддисмутазы по сравнению с исходными значениями, что свидетельствует об активации процессов перекисного окисления липидов и компенсаторном усилении антиоксидантной защиты в этих условиях.

3. При ишемии-реперфузии головного мозга у крыс с хронической реноваскулярной артериальной гипертензией и у нормотензивных животных введение нимодипина приводило к снижению уровня малонового диальдегида в ишемизированном участке мозга, что свидетельствует о выраженном антаоксидантном эффекте данного лекарственного средства.

4. При спонтанной артериальной гипертензии у крыс содержание малонового диальдегида в плазме крови увеличено в 2 раза по сравнению с соответствующим контролем. У больных гипертонической болезнью II стадии содержание малонового диальдегида в плазме крови повышено в 2.5 раза, а у больных нОсмическим инсультом на фоне гипертонической болезни - в 3.5 раза по сравнению с контролем. Это сви-

детсльствует об общей интенсификации перекисного окнслени^лшш-дов при данных патологических состояниях.

5. У больных гипертонической болезнью II стадии АДФ- и адрена-лин-нндуцированная агрегация тромбоцитов усиливается но сравнению с контрольной группой. Еще большее усиление агрегации тромбоцитов отмечено у больных ишемичеким инсультом на фоне гипертонической болезни. Проведенное лечение Нимотопом S нормализует агрегационную функцию тромбоцитов у больных ишемическим инсультом на фоне гипертонической болезни.

6. При гипертонической болезни II стадии в тромбоцитах повышено содержание малонового диальдегида, что свидетельствует об усилении интенсивности обмена арахидоновой кислоты в этих клетках in vivo. При ишемическом инсульте на фоне гипертонической болезни содержание малонового диаиьдегида еще более увеличено. Применение Нимотопа S у больных ишемическим инсультом приводит к снижению уровня малонового диальдегида в тромбоцитах до контрольных величин.

7. Активность супероксиддисмутаэы, как показатель антноксндант-ной защиты, снижена в плазме крови и повышена в тромбоци тах у больных гипертонической болезнью II стадии. У больных ишемическим инсультом на фоне гипертонической болезни в динамике инсульта (в первые, 14-е и 28-е сутки) и в плазме крови и в тромбоцитах снижена по сравнению с исходной, что свидетельствует о снижении ан-тиоксидаитной защиты при данной патологии.

8. Нимотоп S является эффективным средством для лечения в острой стадии ишемического церебрального инсульта, так. как улучшает клиническую картину инсульта, обладает антиоксидантнмм н анти-агрегантным эффектами.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Изучение агрегационной функции тромбоцитов, содержания в них малонового диальдегида и активности супероксидцисмутазы являются дополнительными информативными данными для диагностики нарушений тромбоцитарного звена гемостаза при ишемическом инсульте, а также методами контроля за эффективностью антиагрегат -ной терапии.

2. Развитие артериальной гипертензни сопровождается выраженными изменениями процессов перекисното окисления липидов и ан-тиоксидантной защиты в ткани головного мозга, которые нуждаются в фармакологической коррекции, поскольку является причиной большей ранимости головного мозга при его ишемии.

IS

3. Применение антагониста кальция нимодипина целесообразно для лечения в острсйшсм и остром периодах ишемического церебрального инсульта. Разработанная схема лечения больных в острой фазе ишемического инсульта, включающая трехдневную внутривенную ин-фузию и последующий пероральный прием Нимотопа Б, может быть рекомендована для применения в неврологических стационарах.

СПИСОК ПУБЛИКАЦИЙ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Ангиагрегаитная активность сосудов головного мозга в норме н нри ишемии II Физиологический журнал СССР им. Сеченова 1989, т. 75, с. 1515-1520 ( в соавг. H.H. Петрищев, С.А. Шестакова, Л.Н. Дорохова)

2. Простациклиноподобная активность аорты крыс при ишеми-ческом инсульте и введении пираистама // В сб." Морфофункциональ-ные особенности адаптации организма" Л. 1988, с. 52-56 ( в соавт. Е.Р. Баранцевич).

3. Антиагрсгантная активность аорты крыс при острой ишемии головного мозга и артериальной гипертензии IIВ кн. " Механизмы нарушения тромбоцитарно-сосудистого гемостаза" Л. 1988, с. 9-16 (в соавт. С.А. Шестакова).

4. Изменения уровня малонового диальдегида и активности супе-роксиддисмутазы в ткани головного мозга крыс с реноваскулярной артериальной гипертензией и ишемией мозга // Тезисы докл. конференции " Артериальная гипертензия. Экспериментальные и клинические аспекты" С.-Петербург, 1995, с.59-61 (в соавт. В.А. Сорокоумов, Л.А. Александрова).

5. Применение нимодипина при лечении ишемического инсульта у больных гипертонической болезнью - там же, с.61-62 (в соавт. В.А. Сорокоумов, Л.А. Александрова, Р.В. Голикова, Л.А. Коренко).

6. Влияние нимотопа на динамику перекисиого окисления липидов в тромбоцитах у больных с ишемическим инсультом // "Актуальные вопросы гематологии" - сборник тезисов докладов Всеармейской научной конференции 26-27 октября 1995 г.. С.-Петербург, 1995, с.104.

7. Перекиснос окисление липидов в тромбоцитах больных гипертонической болезнью и ишемическим инсультом -там же, с. 105 (в соавт. Р.В. Голикова).

8. Состояние перекисного окисл01ия липидов и ан шоксидантной защиты у крыс с реноваскулярной артериальной гипертензией при ишгмическом и реисрфузиошюм повреждении головного мозга - в кн. "Биохимические и биофизические механизмы физиологических функции", С.-Петербург. 1995, с.17.7.

9. Метаболическая и функциональная активность тромбонами u an намике ишемического инсульта у больных гипертонической болезнью -труды I Российского конгресса по патофизиологии - в нсчаш ( в со-авт. С.А. ШестаковаДА. Сорокоумов).

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

АД - артериальное давление

АДФ - аденозинфосфат

ГБ - гипертоническая болезнь

ИИ - ишемический инсульт

МДА - малоновый диальдегид

ПОЛ - перекисное окисление липидов

РАГ- реноваскулярная артериальная гипертензия

СМЖ - спинномозговая жидкость

СОД - супероксиддисмутаза

SHR - Spontaneously Hypertensive Rats

WKY - линия крыс Wistar- Kyoto