Автореферат и диссертация по медицине (14.00.16) на тему:Патогенетическое обоснование применения озонотерапии в послеоперационном периоде у онкогинекологических больных

На правах рукописи

КОНТОРЩИКОВА Елена Юрьевна

ПАТОГЕНЕТИЧЕСКОЕ ОБОСНОВАНИЕ ПРИМЕНЕНИЯ ОЗОНОТЕРАПИИ В ПОСЛЕОПЕРАЦИОННОМ ПЕРИОДЕ У ОНКОГИНЕКОЛОГИЧЕСКИХ БОЛЬНЫХ

14.00.16 - патологическая физиология 14.00.01 - акушерство и гинекология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Нижний Новгород 2005

Работа выполнена в Нижегородской государственной медицинской академии

Научные руководители: доктор медицинских наук,

профессор С.Б. Артифексов доктор медицинских наук, профессор Т.С. Качалина

Официальные оппоненты: доктор медицинских наук,

профессор Г.А. Бояринов доктор медицинских наук, профессор А.Ф. Добротина

Ведущее учреждение: Казанский государственный медицинский университет

Защита состоится 7 июня 2005 года в_часов на заседании

диссертационного совета К-208.061.02 при Нижегородской государственной медицинской академии (603005, г. Нижний Новгород, пл. Минина, 10/1).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Нижегородской государственной медицинской академии (г. Нижний Новгород, ул. Медицинская, 4).

Автореферат разослан «_» мая 2005 г.

Ученый секретарь диссертационного совета доктор медицинских наук

О. В. Халецкая

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Актуальность исследования. Онкогинекологические процессы составляют значительную часть в общей структуре заболеваемости и смертности у женщин разных возрастных групп. Постоянным объектом изучения онкологической гинекологии являются рак шейки матки, эндометрия и яичников, так как они составляют 95% по отношению ко всем злокачественным опухолям женских половых органов (Бохман Я.В., 2002). В комбинированном лечении онкогинекологических больных ранних стадий на первом этапе проводится хирургическое лечение с последующим назначением полихимио-, гормоно- или лучевой терапии (Бохман Я.В., 2002, Гилязутдинова З.Ш., Михайлова М.К., 2000).

Известно, что данные методы воздействия имеют целый ряд выраженных побочных эффектов: общетоксическое влияние на организм больной, иммунодепрессивное действие и нарушение баланса про- и антиоксидантных систем организма.

Учитывая вышеизложенное, в комплексное ведение послеоперационного периода весьма перспективно включать дополнительные методы лечения, уменьшающие степень интоксикации, корригирующие уровень антиоксидантной защиты, нормализующие состояние перекисного окисления липидов, модулирующие иммунологическую реактивность организма. Одним из таких методов является озонотерапия, положительный эффект применения которой отмечен при широком спектре как хирургических, так и терапевтических заболеваний (Алясова А.В., 2004, Бояринов ГА, 1999, Гречканев Г.О., 1995, Добротина А.Ф., 1995, Зуев В.М., 1995, Каткова Н.Ю., 2000, Качалина О.В., 2003, Масленников О.В., 1999).

Предпосылкой использования озона с лечебной целью являются его физико-химические и биологические свойства, определяющие бактерицидный (Carpendale M.T., 1993), дезинтоксикационный (Bocci V., 1993), противовоспалительный (Bocci V., 1996), антигипоксический (Бояринов Г.А., 1999, Конторщикова К.Н., 1992, Перетягин С.П., 1991, Viebahn R.,1985), иммунокорригирующий (Viebahn R., 1989) эффекты; а также отсутствие тератогенного и канцерогенного свойств (Blythe J.G., 1982, Schulz S., Wagner M., 1997).

Известные биологические механизмы действия озона позволяют, по нашему мнению, предположить, что его использование в послеоперационном периоде у онкогинекологических больных полезно для оптимизации основных параметров гомеостаза - это возможно расценить как предпосылку для лучшей переносимости больными полихимио- или лучевой терапии.

Цель исследования - патогенетически обосновать целесообразность использования озона в послеоперационном периоде у онкогинекологических больных в качестве метода подготовки их к последующей цитостатической или лучевой терапии.

Задачи исследования:

1. Выявить особенности клинического течения послеоперационного периода у пациенток с онкогинекологической патологией при использовании в комплексе лечения медицинского озона.

2. Изучить состояние перекисного окисления липидов и антиоксидантной системы защиты у онкогинекологических больных в послеоперационном периоде на фоне озонотерапии и традиционного лечений.

3. Провести сравнительную оценку влияния озонотерапии и традиционного лечения на показатели иммунитета у данной категории пациенток.

4. Оценить воздействие озона на некоторые биохимические показатели онкогинекологических больных в послеоперационном периоде.

Научная новизна исследования:

- Впервые патогенетически обоснована целесообразность использования озонотерапии в послеоперационном периоде у пациенток со злокачественными опухолями гениталий в качестве метода подготовки к последующей полихимио- или лучевой терапии в связи со стимулирующим влиянием озона на АОСЗ и его способностью к коррекции компонентов системы иммунитета онкогинекологических больных.

- Впервые при обследовании онкогинекологических больных выявлено нарушение соотношения мембранных и сывороточных форм антигена CD95, что свидетельствует об усилении апоптоза лимфоцитов и уходу.злокачественных клеток из-под иммунного надзора

- Впервые установлено, что введение терапевтических доз озона онкогинекологическим больным способствует нормализации уровней растворимых форм сывороточных антигенов CD95, CD38, CD50, CD54, HLA 1, НЬА11 классов.

Практическая значимость работы. Практическому

здравоохранению предложен метод подготовки хирургических онкогинекологических больных к цитостатической или лучевой терапии с использованием в послеоперационном периоде медицинского озона.

Внедрение результатов исследования в практику. Методика внутривенного капельного введения озонированного физиологического раствора в послеоперационном периоде больным со злокачественными опухолями гениталий внедрена в практическую работу гинекологической клиники Областной клинической больницы им. Н.А.Семашко.

Результаты исследования используются в учебном процессе на кафедрах акушерства и гинекологии НГМА и ЦПК и ППС.

Публикации и апробация работы. По теме диссертации опубликовано 10 печатных работ, из них 8 - в центральной печати (2 статьи, 7 тезисов, получен патент на изобретение «Способ лечения осложнений химиотерапии рака яичника» №2188647 от 10.09.2002).

Материалы диссертации доложены на XV Международном конгрессе по озону (Лондон, 2001), на II Украинско-Русской научно-практической конференции «Озон в биологии и медицине», Одесса, 2004.

Основные положения, выносимые на защиту.

1. Медицинский озон в послеоперационном периоде у онкогинекологических больных ликвидирует дисбаланс про- и антиоксидантной систем и способствует коррекции некоторых показателей клеточного и гуморального иммунитета.

2. Использование озонотерапии в послеоперационном периоде у онкогинекологических больных является предпосылкой к лучшей переносимости ими полихимио- или лучевой терапии.

Структура и объем диссертации. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, 3 глав собственных исследований, обсуждения, выводов, практических рекомендаций, списка использованной литературы. Работа изложена на 120 страницах машинописного текста, иллюстрирована 15 таблицами и 5 рисунками. Список литературы включает 210 источников, из них 62 зарубежных.

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Материалы и методы исследования. Для решения поставленных в работе задач обследовано 100 пациенток, находившихся на лечении в гинекологической клинике Областной клинической больницы им. Н.А.Семашко.

У всех женщин была диагностирована онкогинекологическая патология различной локализации (рак тела и шейки матки, рак яичников). В группу наблюдения включены пациентки, которым на первом этапе комбинированного лечения было показано оперативное вмешательство.

Всем больным операция по поводу злокачественных опухолей гениталий проведена в плановом порядке. Вид анестезии, инфузионно -трансфузионные программы обеспечения операций, послеоперационное обезболивание были унифицированны.

В процессе проведенного исследования мы посчитали нецелесообразным распределить пациенток в зависимости от локализации опухоли, поскольку достоверных различий исходных параметров гомеостаза нами выявлено не было.

Учитывая вышеизложенное, были сформированы 2 группы больных.

В первую (основную) группу вошли 60 женщин, которым в послеоперационном периоде, наряду с общепринятым лечением, проводили озонотерапию в виде внутривенного капельного введения озонированного физиологического раствора (0,9% №0). Концентрация озона в физиологическом растворе достигала 400 мкг/л, а разовая вводимая доза озона с учетом его распада в водном растворе составляла 80 мкг. Курс включал 6 процедур по 200 мл физиологического раствора в сутки через день, начиная со 2-х послеоперационных суток. Концентрация озона, количество и кратность процедур разработаны и подтверждены как эффективные и безопасные в ранее проводимых исследованиях гинекологов (Гречканев Т.О., 1995, Добротина А.Ф., Шакутина М.К., 1995, Зуев В.М., 1995, Каткова Н.Ю., 2000, Шахова Н.М., 1996, Усачева О.Н., 1996), онкологов (Алясова А.В., 2004) и терапевтов (Масленников О.В., 1999, Главинская Т.А., 1995). Для озонирования физиологического раствора использовался озонатор фирмы «Медозонс».

Вторую (контрольную) группу составили 40 пациенток, которые получали общепринятую послеоперационную терапию без включения озона.

Все лабораторные исследования проводились больным в динамике: при поступлении в стационар до операции и при выписке после соответствующего проведенного лечения (на 11-12 послеоперационные сутки).

В плазме крови больных содержание церулоплазмина, глюкозы, мочевины, активность ферментов (аланинаминотрансферазы, аспартатаминотрансферазы, гамма-глютамилтранспептидазы), уровень общего билирубина определялись с помощью унифицированных лабораторных методов.

Оценка иммунологического статуса пациенток включала анализ клеточного и гуморального иммунитета, количества циркулирующих иммунных комплексов, определение растворимых антигенов.

Для количественной оценки иммуноглобулинов классов G, А, М применялся метод радиальной иммунодиффузии по Манчини (1964). Результаты выражались в г/л.

Для определения количества циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК) использовался тест по Хашкову. Содержание ЦИК выражались в единицах на 1 мл сыворотки (ед./мл).

При исследовании иммунного статуса использовались моноклональные антитела к дифференцировочным антигенам иммунокомпетентных клеток. При этом выделяли следующие популяций лимфоцитов: Т-клеточные - CD3, CD4, CD8, NK-клеточные - CD16, , В-клеточные - CD20, CD22.

В нашей работе содержание CD3+, CD4+, CD8+, CD16+, CD22+, CD38+, CD95+ лимфоцитов определялось непрямым иммунофлуо-ресцентным методом. Для иммунофенотипирования клеток применяли

панель моноклональных антител (МКА) со следующим набором: LT-DR, LT-3, LT-22, LT-4, LT-8, LT-16, LT-22, LT -38, LT -95 фирмы «Сорбент».

Содержание растворимых форм CD38, CD50, HLAI, CD95 антигенов определялось иммуноферментным методом с помощью поликлональных антител против поверхностных антигенов мононуклеарных клеток периферической крови здоровых доноров и моноклональных антител ИКО-20, ИКО-60, ИКО-53, ИКО-160, направленных против соответствующего антигена. Исследование проводилось с помощью серийного отечественного фотометра КАИЦ-01 при длине волн 492 нм. Полученные результаты выражали в условных единицах (U/ml). Уровень растворимых антигенов главного комплекса гистосовместимости I и II класса (HLA-I, HLA-II) определялся на базе иммунологической лаборатории НИИ эпидемиологии и микробиологии (руководитель - д.б.н. В.В.Новиков).

Уровень цитокинов - фактора некроза опухоли (ФНО) и интерлейкина-2 исследовали методом твердофазного иммуноферментного анализа с применением набора реагентов РгоСоп (Санкт-Петербург) в иммунологической лаборатории детской больницы N 27 ( завлабораторией - к.б.н. Н.И.Кубышева).

Скрининговым методом оценки активности перекисного окисления липидов явился анализ индуцированной железом и перекисью водорода биохемилюминесценции в течение 30 секунд. Для регистрации использовался прибор биохимилюминометр (БХЛ-06), разработанный Нижегородским научно-исследовательским центром

«Биофармавтоматика», сопряженный с компьютером IBM PC/AT в диалоговом режиме (Е.И.Кузьмина и др., 1983). Результат распечатывался в унифицированной форме в виде хемилюминограммы с расчетом необходимых параметров:

1.tg - 2 альфа - показатель, характеризующий скорость спада процессов свободно - радикального окисления в плазме;

2. индекс Imax (имп/сек) - максимальная интенсивность свечения, показывающая потенциальную способность биологического объекта к перекисному окислению липидов;

3. индекс S - светосумма хемилюминесценции за 30 секунд. Это величина, соответствующая обрыву цепи свободно - радикального окисления, обратно пропорциональна антиоксидантной активности пробы крови;

Наличие и количество первичных продуктов ПОЛ - диеновых конъюгатов (ДК) и триеновых конъюгатов (ТК) оценивали по ультрафиолетовому спектру поглощения раствора липидов в метанол-гексане при длинах волн, соответственно, 233 нм и 275 нм (Shenstone, 1971). Концентрацию ДК и ТК выражали в единицах оптической плотности относительно количества общих липидов (ед.опт.пл./мг ОЛ).

Содержание конечных продуктов ПОЛ - оснований Шиффа (ОШ) определяли с помощью флуориметрического метода D.L.Fletcher et al., при

g

длине волны возбуждения 365 нм и длине волны эмиссии 420 нм. Для регистрациии использовался серийный прибор «Флуориметр РФ» (Москва). Полученные результаты выражали в условных единицах свечения на мг общих липидов (усл.ед/ мг ОЛ).

Определение количества ОЛ осуществлялось по методу V.Chromy (1975) с использованием диагностических наборов фирмы «Lachema». Экстракцию липидов из анализируемого материала проводили методом J.Folchetal.(1957).

Материалом для исследования явилась сыворотка крови больных, взятой натощак.

Полученные в результате исследования цифровые данные обработаны методом вариационной статистики с. вычислением средних величин, средней ошибки. Достоверность различий средних величин оценивали с помощью параметрического критерия Стьюдента и признавали достоверным при р<0,05. Статистическую обработку материала проводили с помощью программного продукта «Microsoft Excel».

Для установления связи между двумя признаками определялся коэффициент ранговой корреляции Спирмена.

Результаты исследований и их обсуждение

Анализ клинического течения послеоперационного периода обследованных женщин показал, что у больных основной группы он был гладким в 96,7% случаев, и только у 2-х больных (3,3%) имело место ПГВО: у одной больной нагноение послеоперационной раны и у одной -перикультит. Отмеченные пациентки относились к группе риска по возникновению ПГВО, так как имели в анамнезе сахарный диабет продолжительностью более 10 лет.

В контрольной группе процент ПГВО был значительно выше -12,5%, при этом структура их была следующей: 7,5% - перикультит, 5% -нагноение послеоперационной раны. Полученные нами данные коррелируют с результатами исследований Качалиной О.В. (2003).

Помимо самого факта развития ПГВО, отмечено, что на фоне озонотерапии у онкогинекологических больных на 1-2 дня быстрее улучшается самочувствие и общее состояние, восстанавливается функция кишечника, нормализуются сон и аппетит, быстрее устанавливается нормотермия. Это также согласуется с данными литературы (Кудрявцев Б.П., Снигоренко А.С., 1998).

У всех наблюдаемых нами больных проводились биохимические анализы крови, включающие оценку уровней мочевины, церулоплазмина, билирубина, активности печеночных ферментов. Достоверно выраженных изменений в содержании и активности этих параметров после проведенного лечения как у больных контрольной группы, так и группы испытания выявлено не было.

В настоящее время накоплено большое количество данных о том, что нарушение баланса про- и антиоксидантных систем занимает существенное место в генезе и течении многих заболеваний, в том числе и онкологических.

Как отмечают НА Зенков и соавт. (2001), в результате окислительного стресса в организме накапливаются токсичные продукты ПОЛ, вызывающие разбалансировку регуляции гомеостаза, серьезные метаболические нарушения, изменения метаболического статуса, сдвиги в функциональном состоянии различных систем организма.

В.Х.Хавинсон., В.А.Баринов (2003) установили, что на начальных стадиях образования злокачественных опухолей происходит усиление инициации свободно - радикальных реакций, что нашло подтверждение и в наших исследованиях.

При анализе полученных результатов прежде всего обращает на себя внимание довольно большой разброс показателей перекисного окисления липидов среди женщин со злокачественными опухолями гениталий, что можно объяснить индивидуальными особенностями организма и ответной реакцией на основное заболевание. Сыворотка крови, взятая у больных для анализа только приблизительно отражает процессы ПОЛ, которые протекают в пораженном органе, и обусловлена реакцией клеток неспецифической системы защиты (прежде всего нейтрофилов) и выработкой оксида азота (Конторщикова К.Н., 1992).

Наши исследования показали, что в целом исходное состояние показателей про- и антиоксидантной системы у онкогинекологических больных нарушено и требует соответствующей коррекции (таблица 1). Так, уровень показателя S, представляющего собой величину, обратную ОАОА, был достоверно (р<0,05) выше нормы в обеих группах больных -18,42+0,738 rav в контрольной и 19,37+0,im0 в основной.

У больных контрольной группы после операции и стандартной послеоперационной терапии отмечалось достоверное увеличение показателя I max (р<0,05) с 1,54+0,106 mv до 2,13+0,110 mv.

Что касается величины параметра S , то имела место тенденция к его увеличению (от 18,42+0,738 до 19,56+0,815 mv), а показатель tg(-2a) достоверно (р<0,05) увеличился по сравнению с исходным уровнем на 57,7% (от -0,324+-0,007 до -0,511+-0,0069). При одновременном повышении показателя Imax это свидетельствовало о продолжающемся снижении активности антиоксидантной системы, вызванной как самой операцией, так и ведением послеоперационного периода без адекватной антиоксидантной поддержки.

Параллельно имела место тенденция к повышению уровней молекулярных продуктов ПОЛ - ДК и ТК. Показатель ОШ достоверно (р<0,05) увеличился по сравнению с исходно повышенным состоянием на 20%, что является прогностически неблагоприятным признаком для

дальнейшей переносимости этими больными лучевой терапии и химиотерапии.

Следует заметить, что в связи с неустойчивостью соединений ТК и ДК и постепенным превращениям их в конечные продукты - ОШ, судить о состоянии ПОЛ и эффективности того или иного вида терапии только по первичным продуктам не совсем верно (Котов С.А., 1996). Наиболее информативным критерием интенсификации ПОЛ является концентрация конечных продуктов - ОШ, а с учетом их жесткой структуры и токсичности в отношении клеточных мембран и прогностически более ценным.

В результате проведения озонотерапии исходно достоверно более высокие уровни конечных продуктов ПОЛ - ОШ, у больных основной группы снизились незначительно, только на 4%, но с учетом значительной активации ОАОА можно ожидать дальнейшего постепенного их снижения. В контрольной же группе произошло достоверное увеличение их количества. Полученные нами данные соответствуют результатам исследований ряда авторов (Туганбеков Т.У., 1997, Хышиктуев Б.С., 1993), изучавших влияние хирургического вмешательства на свободно -радикальные реакции у больных раком легкого и прямой кишки. В обеих работах отмечено повышение концентрации молекулярных продуктов ПОЛ после оперативного вмешательства.

После проведения курса озонотерапии в сыворотке крови больных основной группы наблюдалось усиление антиоксидантной системы защиты, поскольку уровень показателя 8 достоверно (р<0,05) снизился на 15% и достиг нормы (с 19,37+0,810 шу до 16,49+0,724 шу), а tg (-2а) также достоверно (р<0,05) снизился на 26% - с -0,346+-0,006 до 0,257+~0,0049.

Результатом активации антиоксидантной системы защиты явилось достоверное (р<0,05) снижение величины параметра I тах на 26% (с 1,79+0,101 шу до 1,33+0,100 шу) и связаное с этим достоверное (р<0,05) уменьшение количества первичных продуктов перекисного окисления липидов ТК на 47% (с 0,056+0,0085 до 0,030+0,0071ед.опт.пл./мг ОЛ). Содержание ДК осталось неизменным - 0,157+0,024 ед.опт.пл/мг ОЛ. Количество конечных продуктов ПОЛ - ОШ снизилось несущественно (с 4,98+0,59 до 4,82+0,62усл.ед./мгОЛ).

Полученные изменения в состоянии показателей свободно -радикального окисления на ранних сроках после проведения озонотерапии, проявляющиеся увеличением антиоксидантной активности при снижении ряда показателей ПОЛ, свидетельствуют о формировании запаса прочности организма.

Очевидно, что включение озонотерапии в комплексное ведение послеоперационного периода у онкогинекологических больных практически ликвидирует дисбаланс про- и антиоксидантных систем, что проявляется в снижении интенсивности процессов перекисного окисления липидов и повышении антиоксидантной активности сыворотки крови.

Полученный результат можно считать предпосылкой для повышения защитных сил организма и лучшей переносимости в дальнейшем полихимио- или лучевой терапии

Таблица 1

Показатели хемилюминограммы и содержание продуктов ПОЛ у онкогинекологических больных до и после лечения

Группы больных Показатели Контрольная группа N=40 Основная группа N=60 Норма

I гпах (шУ) до лечения 1,74+0,106* 1,79+0,101* 1,0-1,5

после лечения * 2,13+0,110** 1,33+0,100**

в (шУ) до лечения 18,42+0,738* 19,37+0,810* 12-15

после лечения 19,56+0,815* 16,49±0,724*

до лечения 0,324+0,007 0,346+0,006 0,28-0,5

после лечения ** 0,511±0,0069* ** 0,257+0,0049

дк (ед.опт.пл 7мг ОЛ) до лечения 0,183+0,027 0,157+0,026 0,15 - 0,18

после лечения 0,218±0,031* 0,157+0,024

ТК (ед.опт.пл ./мг ОЛ) до лечения 0,061+0,0094* 0,056+0,0085* 0,025-0,035

после лечения 0,064+0,0089* 0,030+0,0071**

ОШ (усл.ед./м гОЛ) до лечения 3,50+0,51 3,98+0,59 2,5-4

после лечения 4,93+0,41** 3,82+0,62

Примечание:

* - достоверность различий по сравнению с нормой (р<0,05), ** - достоверность различий по сравнению с исходным состоянием ф<0,05).

При исследовании состояния иммунитета больных со злокачественными опухолями гениталий ранних стадий мы установили изменения, сходные с представленными в работе А.В. Алясовой (2004), изучавшей иммунный статус у больных раком молочной железы.

В наших исследованиях отмечена тенденция к снижению уровня CD4+ антигена при одновременном повышении CD8+ антигена и нарастание уровня цитокина ФНО. Т - хелперы или CD4+ - это клетки, регулирующие силу иммунного ответа организма на чужеродный антиген, контролирующие постоянство внутренней среды организма (антигенный гомеостаз) и обусловливающие повышенную выработку антител. CD8+ - Т - лимфоциты - супрессоры, тормозящие иммунный ответ организма. Т -супрессоры тормозят выработку антител вследствие задержки пролиферации и дифференцировки В-лимфоцитов и развитие гиперчувствительности замедленного типа. Увеличение количества CD8+ в крови свидетельствует о недостаточности иммунитета.

Как отмечают А.А. Ярилин и соавт.(1999), в оценке состояния иммунной системы ведущее значение имеет соотношение Т-лимфоцитов, обладающих хелперной и супрессорной активностью в периферической крови, так называемый индекс CD4+/CD8+ или иммунорегуляторный индекс (ИРИ). При расчете величины этого показателя нами установлено, что в среднем у больных основной группы ИРИ составил 1,7, в контрольной группе - 1,9, то есть в обеих группах больных был выше нормы.

Как известно, натуральные киллеры (CD16+) - клетки-эффекторы, ответственные за противоопухолевый, противовирусный, трансплантационный иммунитет. В обеих группах обследованных женщин содержание CD16+ в среднем достоверно (р<0,05) было выше нормы (28,2+1,9 — в контрольной группе и 27,1+1,6 — в основной), причем повышалось у 75% больных основной и у 70% женщин контрольной групп, у 25 % пациенток основной и у 30% контрольной групп находилось в пределах нормы.

Как полагают А.Ю. Барышников, Ю.В. Шишкин и соавт., увеличение относительного количества CD16+ клеток происходит во всех случаях массивного поступления антигена, в том числе в условиях опухолевого роста, когда, кроме антиген-специфических механизмов элиминации патогена, задействованы антиген-неспецифические. Отличительной способностью CD 16+ клеток является их способность лизировать клетки-мишени без предварительной сенсибилизации.

По всей видимости, в наших исследованиях в условиях дефицита CD4+ увеличение клеток CD16+ носит компенсаторный характер и имеет значение в противоопухолевой защите. В настоящее время установлена важная функция CD16+ клеток как индукторов FAS - опосредованного апоптоза.

Значительная роль в противоопухолевом иммунитете принадлежит В - лимфоцитам. В отличие от Т-лимфоцитов, активация которых происходит на ранних этапах опухолевого роста, В - лимфоциты способны активироваться постоянно. В - лимфоциты представлены в нашем исследовании субпопуляциями CD22+ и HLA-DR (HLA II класса) клеток. Уровень CD22+ ЛФ в среднем был повышен у больных обеих групп (22,3+2,5% в основной группе и 23,5+2,9% - в контрольной), хотя это повышение не было достоверным. Одновременно с этим среди 75% больных основной и 70% - контрольной групп имело место увеличение HLA-DR+ клеток. Этот антиген экспрессирован на В - клетках всех этапов дифференцировки, а также на моноцитах и на активированных Т-лимфоцитах. Поскольку В - лимфоциты и частично Т- лимфоциты участвуют в представлении антигена, повышение уровня HLA-DR+ клеток отражает активный иммунный ответ на чужеродный антиген.

В процессе формирования иммунного ответа необходимо поддержание кооперативных межклеточных взаимодействий. Одним из факторов, участвующих в их регуляции, является трансмембранный рецептор CD38+, способный передавать сигналы, определяющие пролиферацию и дифференцировку Т - и В - лимфоцитов. Исходные средние показатели CD38+ были достоверно (р<0,01) увеличены у больных обеих групп в среднем на 88%. Следует полагать, что повышение содержания CD38+ клеток отражает мобилизацию резервов иммунной системы этих больных.

К активационным маркерам иммунокомпетентных клеток относят и нелинейный антиген CD95+. Как полагают А.В. Караулов и соавт.(2000), экспрессия на клеточной поверхности протеина CD95+ (FAS/APO-1) характеризует способность клетки вступать в апоптоз. В нашем исследовании уровней СD95+-лимфоцитов у онкогинекологических больных показано достоверное (р<0,01) повышение количества клеток, несущих этот маркер в обеих группах пациенток - на 15% в основной группе и на 39 % - в опытной. Предполагается, что взаимодействие FASL, локализованного на поверхности опухолевой клетки, с FAS (CD95+) -положительными цитотоксическими Т-лимфоцитами и NK- клетками индуцирует апоптоз последних, что приводит к подавлению противоопухолевых клеточных реакций и способствует ускользанию опухоли из-под иммунного надзора.

Как известно, возможность полноценного иммунного ответа в значительной степени обусловлена экспрессией антигенов главного комплекса гистосовместимости и, прежде всего, молекул 1 класса. Дефекты в генах HLA1 класса, нарушение их регуляции могут лежать в основе быстрого развития и плохого прогноза онкологического заболевания. У онкогинекологических больных достоверное (р<0,01) исходное повышение содержания HLAI клеток наблюдалось в обеих группах.

Однако не только мутации или потеря белков ИЬА1 класса приводят к нарушению взаимодействия опухолевой клетки с иммуноцитами организма-хозяина. В обеспечении физического контакта между клетками важная роль принадлежит молекулам адгезии. Поскольку эти белки являются неотъемлемой частью многих классических иммунных реакций, в том числе апоптоза лимфоцитов, изменение их экспрессии может нарушать иммунный гомеостаз и вести к развитию тяжелой патологии (8сЬопЬет С, 1969). Исследование содержания клеток, несущих нелинейный СБ50+ антиген, показало повышение их уровня у 21% больных основной и 25% - контрольной групп, снижение - в 15% и 18%, соответственно. Как отмечает Новиков В.В.(1999), молекула СБ50+ (1САМ-3) участвует в инициации иммунного ответа и обеспечивает первичную реакцию между лимфоцитами и антиген-презентирующими клетками. Снижение экспрессии белка СБ50 приводит к нарушению адгезии клеток и миграции В-лимфоцитов в лимфатические узлы, что является плохим прогностическим критерием.

При исследовании уровня цитокинов, в частности фактора некроза опухоли и интерлейкина-2, нами было выявлено повышение этих показателей до лечения. Фактор некроза опухоли (ФИО) исходно повышался достоверно (р<0,001) у больных обеих групп (188,6+16,6 пкг/мл в основной и пкг/мл - в контрольной группе). Уровень

интерлейкина-2 в основной группе в среднем достоверно (р<0,001) был выше нормы и составлял 792,7+31,2 пкг/мл, причем этот показатель был увеличен у 92% больных этой группы. В контрольной группе также средний уровень интерлейкина-2 достоверно (р<0,001) превышал норму и составлял 392,5+19,1 пкг/мл, причем у 75% пациенток этой группы этот показатель был повышен и только у 15% находился в пределах нормы.

При анализе сывороточных концентраций растворимых факторов периферической крови онкогинекологических больных нами были выявлены следующие особенности: содержание зСБ95 в среднем в обеих группах было достоверно (р<0,01) повышено: в основной группе 856,4+61,2, в контрольной - 1470+191; показатель зСБ50 в среднем в обеих группах находился в пределах нормы: в основной группе 432,8+75,3, в контрольной - 383,8+85,1; уровень зСБ38 в основной группе исходно достоверно (р<0,01) превышал норму и составлял 410,2+43,4, в контрольной - 550,1+91,8, уровни ИЬА I и ИЬА II в обеих исследуемых группах больных исходно до лечения были достоверно (р<0,01) повышены. Эти данные согласуются со сведениями других авторов о роли растворимых факторов в альтерации гомеостаза на примере неоплазии (Тагиров О.Т., 2003).

Показатели гуморального иммунитета исходно до операции в обеих группах обследованных больных находились в среднем в пределах нормальных значений, но необходимо отметить, что у 3% женщин основной и у 5% - контрольной группы содержание ^ А было ниже

нормы, а у 5% пациенток основной и у 7% - контрольной группы этот показатель находился выше нормальных значений. Уровни ^ О в обеих группах обследуемых больных исходно находились на верхней границе нормы, причем у 24% женщин основной и у 15% - контрольной групп этот показатель превышал норму. Средний уровень ЦИК, хотя и оставался в пределах нормальных значений, но у 35% больных основной и у 33% -контрольной групп превышал норму.

Таким образом, представленные данные свидетельствуют о том, что иммунная система онкогинекологических больных ранних стадий достаточно сохранна и, наряду с депрессией некоторых ее компонентов, в целом носит черты активации. Однако, учитывая тот факт, что проведение химио-лучевой терапии оказывает депрессивное действие на состояние иммунологической реактивности пациенток, нами было сделано предположение, что проведение в послеоперационном периоде иммуномодулирующей терапии будет способствовать не только повышению качества жизни больных, но и улучшит переносимость и эффективность специфического лечения.

Иммуномодулирующее действие озонотерапии описано в работах отечественных и зарубежных ученых (Васин Н.И., 2000, Босс1 V., 1993,1994), в связи с чем в собственных исследованиях мы рассчитывали на подобный эффект озонотерапии.

При изучении состояния клеточного иммунитета в послеоперационном периоде нами были получены следующие результаты: содержание общей популяции Т-лимфоцитов (С03+) у больных основной группы увеличилось на 6%, в то время как в контрольной группе, напротив, произошло снижение этого показателя на 7%. Повышение численности С03+ в основной группе позволяет судить о сохраненной функциональной реактивности клеток по сравнению с пациентками контрольной группы, у которых клеточный ответ был выражен слабо, что говорит о резистентности клеточных мембран и митохондрий.

Содержание СБ4+ клеток у больных основной группы в среднем не изменялось (43,5+3,1% д о лечения 43,6+3,4% - после), а у пациенток контрольной группы отмечалось даже незначительное (на 3%) уменьшение содержания этих клеток.

Одновременно с этим в обеих группах больных имело место снижение уровня С08+ клеток: в основной группе на 8%, в контрольной -на 12%, что вызывало изменение ИРИ. В основной группе больных он составил 1,9, а в контрольной возрос до 2,2. Как отмечает А.В. Алясова (2004), повышение уровня ИРИ у онкологических больных можно рассматривать как прогностически неблагоприятный фактор. Содержание С016+ клеток достоверно (р<0,05) снижалось у больных основной группы и приближалось к нормальным показателям. У больных контрольной группы это снижение было недостоверным и составило лишь 12%.

Среди показателей гуморального иммунитета обращает на себя внимание достоверное (р<0,05) снижение в 1,5 раза количества ЦИК в

ответ на введение озона при убедительном (р<0,05) увеличении этого показателя в контрольной группе пациенток. Это можно объяснить активацией фагоцитоза под влиянием озонотерапии, который и элиминирует избыток ЦИК (Константинова НА, 1985). Кроме того, после лечения у больных основной группы достоверно уменьшалось количество Ig G, в контрольной же группе наблюдалась тенденция к их увеличению.

Показатели уровня цитокинов, как ко-факторов воспаления, также достоверно снижались у больных основной группы. Так, уровень ФНО под влиянием озонотерапии в среднем достоверно падал на 28%. В контрольной группе, напротив, происходило значительное (р<0,01) увеличение этого показателя на 19%. Подобные изменения наблюдались и в уровнях интерлейкина-2. У больных обеих групп исходно этот показатель был достоверно (р<0,001) выше нормы. После лечения у пациенток основной группы отмечалось снижение (р<0,05) уровня интерлейкина-2 на 19%, а в контрольной группе больных наблюдалась тенденция к повышению этого показателя (на 4%). Полученные данные можно объяснить противовоспалительными свойствами озонотерапии.

У больных основной группы после лечения наблюдалось снижение на 36% уровня растворимого CD50 антигена (432,8+75,3 U/ml до операции и 278,3+69,7 U/ml). В контрольной же группе отмечалась тенденция к повышению экспрессии этого белка.

Количество растворимого CD95 антигена у больных основной группы достоверно снижалось на 54% и приближалось к норме, в контрольной группе показатель уменьшался на 16%. Так, наблюдаемое нами существенное снижение растворимого CD95 под влиянием озонотерапии антигена наряду с повышением его мембранной формы свидетельствует о стабилизации клеточной мембраны лимфоцитов, несущих данный антиген. Как отмечает В.В. Новиков (1999), в результате этого протеин CD95 не отрывается от мембраны. Одновременное снижение ФНО свидетельствует о снижении активности апоптоза лимфоцитов и, следовательно, о сохранности функциональных свойств иммунных клеток, направленных на борьбу со злокачественными клетками.

Уровни HLAII перед выпиской в обеих группах больных снижались, но только в основной группе это было достоверно (р<0,05) - с 175,7+30,3 U/ml до 105,8+28,5 U/ml. Сходные изменения прослеживались и в уровнях показателя HLAI: после лечения у больных основной группы происходит достоверное (р<0,05) снижение среднего уровня этого показателя на 27%, тогда как в контрольной группе — на 13% (р<0,05).

Как указывают О.Т. Тагиров и соавт. (2003), источником повышенного уровня растворимых форм АГ могут быть не только иммунокомпетентные клетки, но и опухолевые, что и объясняет повышенное исходное содержание их у онкогинекологических больных до операции. В послеоперационном периоде должно происходить снижение уровня, что и показали данные собственных исследований. Но достоверное

уменьшение уровня растворимых форм АГ нами отмечены только у тех больных, которым проводили в послеоперационном периоде озонотерапию.

Таким образом, исходя из полученных данных, можно сказать, что ОФР оказывал стимулирующее влияние на показатели как клеточного, так и гуморального звеньев иммунитета. По-видимому, в основе иммунокорригирующего действия ОФР лежит улучшение метаболизма иммунокомпетентных клеток, что способствует повышению их толерантности к токсическому действию последующей цитостатической или лучевой терапии.

О положительном влиянии озонотерапии на про- и антиоксидантный статус организма и на состояние иммунной системы свидетельствуют достоверно выраженные коэффициенты корреляции между показателями ПОЛ и иммунного статуса. Так, выявлены достоверные положительные корреляции между показателями, характеризующими растворимые формы антигенов, и параметрами общей антиоксидантной системы защиты ^ и tg (-2а)) и достоверные отрицательные корреляции с параметрами, представляющими ПОЛ -Imax, ДК, ТК и ОШ (таблица 2).

Таблица 2

Коэффициенты корреляции между показателями ПОЛ и иммунного статуса

I тах 8 18(-2а) ДК ТК ОШ

СЭ95 -0,4 +0,42 +0,4 +0,15 -0,5 -0,5

-БС095 +0,4 -0,35 +0,5 +0,2 +0,4 +0,6

-вС038 -0,25 +0,3 +0,3 -0,2 -0,4 -0,3

-яСП50 -0,28 +0,3 +0,4 -0,18 -0,22 -0,25

-зСБ54 -0,6 +0,5 +0,5 -0,3 -0,5 -0,6

НЬА1 -0,62 +0,45 +0,62 -0,25 -0,45 -0,4

НЬАП -0,61 +0,4 +0,55 -0,3 -0,6 -0,5

ФНО -0,7 +0,45 +0,6 -0,4 -0,6 -0,7

интерлей кин - 2 -0,6 +0,42 +0,5 -0,40 -0,54 -0,62

Данные корреляционного анализа подтверждают наше предположение о том, что использование медицинского озона в послеоперационном периоде прежде всего восстанавливает про- и антиоксидантный статус организма. За счет восстановления антиоксидантной активности нормализуются уровни продуктов липопероксидации, в том числе и токсичные - ОШ, что оказывает положительное влияние на структуру и функцию всех клеток организма, в том числе и клеток иммунной системы. В результате снижается избыточная активность моноцитов и макрофагов по выработке прооксидантных цитокинов - ФНО и интерлейкина 2, восстанавливается структура и функция лимфоцитов, несущих различные антигены, что проявляется в нормализации уровней их растворимых форм и, следовательно, в восстановлении регуляции иммунного ответа.

Данный факт является убедительным подтверждением целесообразности озонотерапиии в послеоперационном периоде у онкогинекологических больных.

Учитывая вышеизложенное, следует полагать, что применение озонотерапии в послеоперационном периоде у больных со злокачественными опухолями гениталий патогенетически обосновано и может быть рекомендовано для практического использования как метод подготовки к последующей полихимио- или лучевой терапии.

ВЫВОДЫ

1. Применение озонотерапии в послеоперационном периоде у онкогинекологических больных в виде внутривенного капельного введения озонированного физиологического раствора с концентрацией озона 400 мкг/л оказывает положительное воздействие на клиническое течение послеоперационного периода, а именно быстрее происходит улучшение общего состояния, восстанавливается функция кишечника, нормализуются сон и аппетит, уменьшается выраженность болевого синдрома.

2. Исходное состояние про- и антиоксидантной системы у больных со злокачественными опухолями гениталий нарушено, а именно наблюдается выраженное снижение антиоксидантной защиты и повышение уровней ПОЛ. Включение озонотерапии в комплексное ведение послеоперационного периода у онкогинекологических больных ликвидирует дисбаланс про- и антиоксидантных систем, что проявляется спадом интенсивности свободно - радикальных реакций (снижение показателя 1тах на 26%), снижением уровня молекулярных продуктов липопероксидации (ТК на 47%) и повышением общей антиоксидантной активности (8 на 15% и tg2a на 26%).

3. Проведение в послеоперационном периоде онкогинекологическим больным озонотерапии проявляется иммуномодулирующим действием, заключающимся в коррекции соотношения лимфоцитов различных морфологических фенотипов (CD3,

СБ4, СБ8, СБ 16, СБ22, СБ95, зСБ95, зСБ38, зСБ50, зСБ54, ИЬА и ИЬАП) и цитокинов - интерлейкина 2 и фактора некроза опухоли.

4. Между показателями гомеостаза, характеризующими про- и антиоксидантный баланс и иммунный статус онкогинекологических больных до и после проведенного лечения, имеются достоверно выраженные корреляции, что свидетельствует об их функциональной взаимосвязи. Установлены положительные достоверные корреляции между показателями, характеризующими иммунный ответ организма ^СБ95, зСБ38, 8СБ50, 8СБ54,ША1 класса ША11 класса, ФНО и интерлейкина-2) и активность общей антиоксидантной системы (8 и tg(-2а)) и отрицательные достоверные корреляции с показателями ПОЛ (!тах, ДК, ТК, ОШ). Между показателем СБ95 и ОАОА имеются, напротив, отрицательные корреляции, а между показателями СБ95 и ПОЛ -положительные, что свидетельствует о влиянии про- и антиоксидантных систем организма на состояние клеточных мембран лимфоцитов. Выявленные корреляционные связи подтверждают патогенетическое обоснование включения озонотерапии в комплексное ведение послеоперационного периода у онкогинекологических больных.

5. У больных со злокачественными опухолями гениталий ранних стадий функция печени и почек достоверно не страдает. Озонотерапия в послеоперационном периоде данной категории пациенток не оказывает влияния на уровни основных биохимических показателей, которые исходно не отличаются от физиологических.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Для подготовки онкогинекологических больных ранних стадий к цитостатической или лучевой терапии в послеоперационном периоде рекомендуется использовать озонотерапию в виде внутривенного капельного введения озонированного физиологического раствора (0,9% раствора №С1). Обработку физиологического раствора следует осуществлять барботажем озоно-кислородной газовой смесью с концентрацией озона 1600 мкг/л, при этом концентрация озона в растворе достигает 400 мкг/л, а разовая вводимая доза озона с учетом его распада в водном растворе составляет 80 мкг.

2. Нормализацию показателей состояния процессов перекисного окисления липидов и антиоксидантной системы защиты, а именно параметры хемилюминограммы (!тах, 8 и 1§(-2а)) и содержание продуктов ПОЛ (ДК, ТК и ОШ); а также состояние некоторых параметров клеточного и гуморального иммунитета - СБ4+, СБ8+, СБ16+, СБ95+, Ig в, ЦИК, уровень цитокинов (ФНО и интерлейкина-2), зСБ38, зСБ95, ИЬМ и ИЬАП - следует рассматривать как благоприятный фон для проведения в послеоперационном периоде онкогинекологическим больным полихимио- или лучевой терапии.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Медицинский озон в лечении осложнений химиотерапии рака яичников// Сборник научных трудов 1 международной НПК «Местное и парентеральное применение озонотерапии в медицине» - Украина, Харьков, 2001, С.94-97/ В соавт. с Гречканевым Г.О.

2. Патофизиологическое обоснование включения озонотерапии в комплексное лечение больных раком яичников// Шестая Нижегородская сессия молодых ученых. Сборник тезисов докладов, 2001, С. 167.

3. Индуцированная биохемилюминесценция - скрининговый метод контроля озонотерапии у онкологических больных// Клиническая лабораторная диагностика, 2001, №9, С.46. /В соавт. с Алясовой А.В., Конторщиковой К.Н.

4. Способ лечения осложнений химиотерапии рака яичников// Патент на изобретение №2188647, от 10.09.2002/В соавт. с Гречканевым Г.О., Качалиной Т.С., Повещенко О.А

5. Изменение показателей перекисного окисления липидов под влиянием озона у онкогинекологических больных в послеоперационном периоде// Тезисы V Всероссийской научно-практической конференции «Озон в биологии и медицине», Нижегородский медицинский журнал, приложение к НМЖ, 2003, С. 125-126 / В соавт. с Качалиной Т.С., Гречканевым Г.О.

6. Предварительная оценка влияния озона на показатели перекисного окисления липидов у онкогинекологических больных в послеоперационном периоде// Сборник, посвященный памяти Добротина Святослава Сергеевича - Нижний Новгород, 2003 / В соавт. с Качалиной Т.С., Гречканевым Г.О.

7. Опыт применения озонотерапии в комплексном ведении послеоперационного периода у онкогинекологических больных// Вестник физиотерапии и курортологии, 2004, №5, С.23-24.

8. Влияние озонированного физиологического раствора на иммунологические показатели онкогинекологических больных// Вестник физиотерапии и курортологии, 2004, №5, С.53-54 / В соавт. с Янченко О.С., Крыжановой М.А., Кубышевой Н.И.

9. Medical Ozone for Prophylaxis and Treatment of Complications associated by Chemotherapy of Ovary Cancer// Proceeding of 15th World Conqress of International Ozone Association - London, 2001, P.204-207/ В соавт. С. Гречканевым Г.О., Качалиной Т.С., Конторщиковой К.Н., Хусейн Эль-Хассун

10. The efficiency of ozonotherapy in complex treatment of patient with oncogynecological diseases// Международная конференция по озонотерапии - Куба, 2004/ В соавт. с Конторщиковой К.Н.,

Новиковым Н.Н., Крыжановой М.А., Качалиной Т.С., Гречканевым Г. О.

СПИСОК ПРИНЯТЫХСОКРАЩЕНИЙ АГ - антиген(ы)

АлАт - аланинаминотрансфераза

АО - антиоксидант(ы)

АОСЗ - антиоксидантная система защиты

АсАт - аспартатаминотрансфераза

у-ГТП - гамма-глутамилтранспептидаза

ДК - диеновые конъюгаты

ИМ — иммуномодуляторы

ИК - иммунокомпетентные клетки

ИРИ - иммунорегуляторный индекс

ИФ - инерферон

ЛФ - лимфоциты

МКА - моноклональные антитела

ОАОА - общая антиоксидантная активность

ОЛ - общие липиды

ОТ - озонотерапия

ОФР - озонированный физиологический раствор ОШ—основания Шиффа

ПГВО - послеоперационное гнойно-воспалительное осложнение

ПОЛ - перекисное окисление липидов

ТК - триеновые конъюгаты

ЦИК - циркулирующие иммунные комплексы

НЬА1 - молекула гистосовместимости I функционального класса

НЬАБЯ (НЬАП) - молекула гистосовместимости

II функционального класса

8-форма - растворимая форма антигена

Конторщикова Елена Юрьевна

Патогенетическое обоснование применения озонотерапии в послеоперационном периоде у онкогинекологических больных

Автореферат диссертации на соисканиеученой степени кандидатамедицинскихнаук

Подписано в печать 28 04.2005 г. Формат 60x90/16. Печать трафаретная. Бумага офсетная. Усл. п. л. 1.5. Тираж 100 экз. Заказ 06/0405

Отпечатано с готового оригинал-макета изд. Ю.А.Николаевым 603073, Н.Новгород, Taганская, 6-29

0 7 МАЙ 2005V

Актуальность проблемы. Онкогинекологические процессы составляют значительную часть в общей структуре заболеваемости и смертности у женщин разных возрастных групп. Постоянным объектом изучения онкологической гинекологии являются рак шейки матки, эндометрия и яичников, так как они составляют 95% по отношению ко всем злокачественным опухолям женских половых органов (17).

В комбинированном лечении онкогинекологических больных ранних стадий на первом этапе проводится хирургическое лечение с последующим назначением полихимио-, гормоно- или лучевой терапии (17,98).

Известно, что данные методы воздействия имеют целый ряд выраженных побочных эффектов: общетоксическое влияние на организм больной, иммунодепрессивное действие и нарушение баланса про- и антиоксидантных систем организма.

В связи с этим, в комплексное ведение послеоперационного периода весьма перспективно включать дополнительные методы лечения, уменьшающие степень интоксикации, корригирующие уровень антиоксидантной защиты, нормализующие состояние перекисного окисления липидов, модулирующие иммунологическую реактивность организма. Одним из таких методов является озонотерапия, положительный эффект применения которой отмечен при широком спектре как хирургических, так и терапевтических заболеваний (3,4,38,42,57,64,65,104,118).

Предпосылкой использования озона с лечебной целью являются его физико-химические и биологические свойства, определяющие бактерицидный (158), дезинтоксикационный (3,197), противовоспалительный (152), антигипоксический (20,73,101,204), иммунокорригирующий (205) эффекты, а также отсутствие тератогенного и канцерогенного свойств (6,142,151,191).

Известные биологические механизмы действия озона позволяют, по нашему мнению, предположить, что его использование в послеоперационном периоде у онкогинекологических больных полезно для оптимизации основных параметров гомеостаза - это возможно расценить как предпосылку для лучшей переносимости больными полихимио- или лучевой терапии.

Цель научного исследования - патогенетически обосновать целесообразность использования озона в послеоперационном периоде у онкогинекологических больных в качестве метода подготовки их к последующей цитостатической или лучевой терапии.

Задачи исследования:

1. Выявить особенности клинического течения послеоперационного периода у пациенток с онкогинекологической патологией при использовании в комплексе лечения медицинского озона.

2. Изучить состояние перекисного окисления липидов и антиоксидантной системы защиты у онкогинекологических больных в послеоперационном периоде на фоне озонотерапии и традиционного лечения.

3. Провести сравнительную оценку влияния озонотерапии и традиционного лечения на показатели иммунитета у данной категории пациенток.

4. Оценить воздействие озона на некоторые биохимические показатели у онкогинекологических больных в послеоперационном периоде.

Научная новизна исследования

- Патогенетически обоснована целесообразность использования озонотерапии в послеоперационном периоде у пациенток со злокачественными опухолями гениталий в качестве метода подготовки к последующей полихимио- или лучевой терапии, в связи со стимулирующим влиянием озона на АОСЗ и его способностью к коррекции компонентов системы иммунитета онкогинекологических больных.

- Впервые при обследовании онкогинекологических больных установлено нарушение соотношения мембранных и сывороточных форм антигена CD95, что свидетельствует об усилении апоптоза лимфоцитов и уходу злокачественных клеток из-под иммунного надзора

- Впервые установлено, что введение терапевтических доз озона онкогинекологическим больным способствует нормализации уровней растворимых форм сывороточных антигенов CD95, CD38, CD50, CD54, HLA 1, HLA11 классов.

Практическая значимость работы Практическому здравоохранению предложен метод подготовки хирургических онкогинекологических больных к цитостатической или лучевой терапии с использованием в послеоперационном периоде медицинского озона.

Внедрение результатов исследования в практику Методика внутривенного капельного введения озонированного физиологического раствора в послеоперационном периоде больным со злокачественными опухолями гениталий внедрена в практическую работу гинекологической клиники Областной клинической больницы им. Н.А.Семашко. Результаты исследования используются в учебном процессе на кафедрах акушерства и гинекологии НГМА и ЦПК и ППС.

Публикации и апробация работы По теме диссертации опубликовано 10 печатных работ, из них 8 - в центральной печати (2 статьи, 7 тезисов, получен патент на изобретение «Способ лечения осложнений химиотерапии рака яичника» №2188647 от 10.09.2002).

Материалы диссертации доложены на XV Международном конгрессе по озону (Лондон, 2001), на II Украинско-Русской научно-практической конференции «Озон в биологии и медицине», Одесса, 2004.

Положения, выносимые на защиту

1. Медицинский озон в послеоперационном периоде у онкогинекологических больных ликвидирует дисбаланс про- и антиоксидантной систем и способствует коррекции некоторых показателей клеточного и гуморального иммунитета.

2. Использование озонотерапии в послеоперационном периоде у онкогинекологических больных является предпосылкой к лучшей переносимости ими полихимио- или лучевой терапии

Структура и объем диссертации Диссертация состоит из введения, обзора литературы, 3 глав, выводов, практических рекомендаций, списка использованной литературы. Работа изложена на 120 страницах машинописного текста, иллюстрирована 15 таблицами и 5 рисунками. Список литературы включает 210 источников, из них 62 зарубежных.

ВЫВОДЫ

1. Применение озонотерапии в послеоперационном периоде у онкогинекологических больных в виде внутривенного капельного введения озонированного физиологического раствора с концентрацией озона 400 мкг/л оказывает положительное воздействие на клиническое течение послеоперационного периода, а именно быстрее происходит улучшение общего состояния, восстанавливается функция кишечника, нормализуются сон и аппетит, уменьшается выраженность болевого синдрома.

2. Исходное состояние про- и антиоксидантной системы у больных со злокачественными опухолями гениталий нарушено, а именно наблюдается выраженное снижение антиоксидантной защиты и повышение уровней ПОЛ. Включение озонотерапии в комплексное ведение послеоперационного периода у онкогинекологических больных ликвидирует дисбаланс про- и антиоксидантных систем, что проявляется спадом интенсивности свободно - радикальных реакций (снижение показателя Imax на 26%), снижением уровня молекулярных продуктов липопероксидации (ТК на 47%) и повышением общей антиоксидантной активности (S на 15% и tg2a на 26%).

3. Озонотерапия, проведенная в послеоперационном периоде онкогинекологическим больным обладает иммуномодулирующим действием, заключающемся в коррекции соотношения лимфоцитов различных морфологических фенотипов (CD3, CD4, CD8, CD 16, CD22, CD95, sCD95, sCD38, sCD50, sCD54, HLAI и HLAII) и цитокинов -интерлейкина 2 и фактора некроза опухоли.

4. Между показателями гомеостаза, характеризующими про- и антиоксидантный баланс и иммунный статус онкогинекологических больных до и после проведенного лечения, имеются достоверно выраженные корреляции, что свидетельствует об их функциональной взаимосвязи. Установлены положительные достоверные корреляции между показателями, характеризующими иммунный ответ организма (sCD95, sCD38, sCD50, sCD54,HLAl класса HLA11 класса, ФНО и интерлейкина-2) и активностью общей антиоксидантной системы (S и tg(-2а)) и отрицательные достоверные корреляции с показателями ПОЛ (Imax, ДК, ТК, ОШ). Между показателем CD95 и ОАО А имеются, напротив, отрицательные корреляции, а между показателями CD95 и ПОЛ -положительные, что свидетельствует о влиянии про- и антиоксидантных систем организма на состояние клеточных мембран лимфоцитов. Выявленные корреляционные связи подтверждают патогенетическое обоснование включения озонотерапии в комплексное ведение послеоперационного периода у онкогинекологических больных.

5. У больных со злокачественными опухолями гениталий ранних стадий функция печени и почек достоверно не страдает. Озонотерапия в послеоперационном периоде данной категории пациенток не оказывает влияния на уровни основных биохимических показателей, которые исходно не отличаются от физиологических.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Для подготовки онкогинекологических больных ранних стадий к цитостатической или лучевой терапии в послеоперационном периоде рекомендуется использовать озонотерапию в виде внутривенного капельного введения озонированного физиологического раствора (0,9% раствора NaCl). Обработку физиологического раствора следует осуществлять барботажем озоно-кислородной газовой смесью с концентрацией озона 1600 мкг/л, при этом концентрация озона в растворе достигает 400 мкг/л, а разовая вводимая доза озона с учетом его распада в водном растворе составляет 80 мкг.

2. Нормализацию показателей состояния процессов перекисного окисления липидов и антиоксидантной системы защиты, а именно параметры хемилюминограммы (Imax, S и tg(-2a)) и содержание продуктов ПОЛ (ДК, ТК и ОШ); а также состояние некоторых параметров клеточного и гуморального иммунитета - CD4+, CD8+, CD 16+, CD95+, Ig G, ЦИК, уровень цитокинов (ФНО и интерлейкина-2), sCD38, sCD95, HLAI и HLAII - следует рассматривать как благоприятный фон для проведения в послеоперационном периоде онкогинекологическим больным полихимио- или лучевой терапии.