Автореферат и диссертация по медицине (14.03.03) на тему:Патогенетические особенности урогенитального трихомониаза в гендерном аспекте

На правах рукописи

Горчаков Дмитрий Александрович

ПАТОГЕНЕТИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ УРОГЕНИТАЛЬНОГО ТРИХОМОНИАЗА В ТЕНДЕРНОМ АСПЕКТЕ

14.03.03 - патологическая физиология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

7 АВГ 2014

005551514

Саратов-2014

005551514

Работа выполнена в Государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования Саратовский государственный медицинский университет имени В.И. Разумовского Министерства здравоохранения Российской Федерации.

Научный руководитель:

доктор медицинских наук, профессор, Луцевич Игорь Николаевич.

Официальные оппоненты:

Пучиньян Даниил Миронович, доктор медицинских наук, профессор; ФГБУ Саратовский научно-исследовательский институт травматологии и ортопедии Минздрава России; группа физиологии и патофизиологии отдела фундаментальных и клинико-экспериментальных исследований; главный научный сотрудник.

Безрукова Галина Александровна, доктор медицинских наук, доцент; ФБУН «Саратовский научно-исследовательский институт сельской гигиены» Роспотребнадзора; главный научный сотрудник.

Ведущая организация: Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования Казанский государственный медицинский университет Министерства здравоохранения Российской Федерации.

Защита диссертации состоится 10 сентября 2014 г. в /-> часов на заседании диссертационного совета Д 208.094.03 при ГБОУ ВПО Саратовский ГМУ им. В.И. Разумовского Минздрава России по адресу: 410012, г. Саратов, ул. Большая Казачья, 112.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГБОУ ВПО Саратовский ГМУ им. В.И.Разумовского Минздрава России и на сайте http://science.sgmu.ru/council/d20809403.

Автореферат разослан «~^>> 2014 г.

Ученый секретарь диссертационного совета доктор медицинских наук, профессор

Кодочигова А.И.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность исследования

Трихомониаз по-прежнему остаётся серьёзной медико-социальной проблемой, существенно снижающей репродуктивную функцию человеческих популяций. Трихомониаз, его хронические формы, значительно увеличивают предрасположенность к заражению другими инфекциями, передаваемыми половым путем (ИППП), в том числе ВИЧ-инфекцией (Аковбян В.А., 2000; Теличко И.Н., 2007; Petrin D., 1998). Актуальность проблемы урогенитального трихомониаза обусловлена отсутствием систематизированных материалов о патогенезе, высоким процентом диагностических ошибок. Недостаточно изучены гуморальный и клеточный иммунитеты при этой инвазии (Иванов A.M. с соавт., 2009); процессы перекисного окисления липидов (ПОЛ) и антиоксидантной (АО) защиты у больных трихомониазом с учётом тендерных особенностей (Колесникова Л.И. с соавт., 2011; Горчаков Д.А., Луцевич И.Н., 2013).

Показатели распространенности урогенитального трихомониаза до конца не уточнены: еще в 1962 г. О. Ировец сообщил, что трихомониазом поражено до 10% населения Земли. По официальным данным ВОЗ, в мире в настоящее время ежегодно заболевают 180-200 млн. человек. Среди проституток, а также женщин с белями, процент больных трихомониазом достигает 70-80%; при скрининговом обследовании различных контингентов выявляется до 5-30% женщин, больных урогенитальным трихомониазом, и до 6-15% мужчин - носителей инвазии (Adrian MindeletaL, 2013).

За период с 1997 года по 2008 год в России наблюдалось некоторое снижение заболеваемости трихомониазом - с 370 до 217 случаев на 100 тыс. населения (Иванова М.А. с соавт., 2005, 2009; Кисина В.И., 2005, 2010; Кубанова A.A. с соавт., 2010). С.Р. Утц с соавт. (2012) установили аналогичную динамику снижения всех ИППП, включая трихомониаз, в Саратовской области.

Несмотря на позитивную эпидемиологическую динамику, наблюдается целый ряд негативных процессов. Формируется социально-экономическая очаговость ИППП и трихомониаза, в частности. В отдельных регионах выявляется устойчиво высокий уровень заболеваемости этой протоинвазией; изменяется клиника трихомониаза; образуются резистентные популяции урогенитальной трихомонады (Захаркив Ю.Ф. с соавт., 2006; Рюмин Д.В., Сюч Н.И., 2009; Белькова Ю.А., Козлов С.Н., 2011; Van Der Pol V., 2007).

Социально-экономическая очаговость трихомониаза и целого ряда других ИППП обусловлена теми глобальными экономическими и социальными изменениями, произошедшими в нашей стране в начале XXI века (Луцевич И.Н. с соавт., 2009; Горчаков Д.А. с соавт., 2010; Кисина В.И., 2010).

Т. vaginalis, по мнению ряда авторов, обладает совершенным механизмом такого биологического феномена, как наследуемая модификационная или неканоническая изменчивость (Инге-Вечтомов С.Г., 1982; Женермон Ж., 1987; Софьин B.C. с соавт., 2005; Глыбочко П.В. с соавт., 2007; Горчаков Д.А. с соавт., 2011; Diana F. Harp, 2011). Под влиянием различных средовых факторов, в том числе и лекарственных, урогенитальная трихомонада существенным образом изменяет свой фенотип, сохраняя патогенность. Модифицированный фенотип

наследуется на протяжении нескольких поколений. Такого рода изменчивость T.vaginalis в значительной мере затрудняет диагностику трихомониаза как микроскопическими методами, так и молекулярно-генетическими, а также может лежать в основе механизмов резистентности к противопротозойным препаратам 5-НИ ряда.

Неканоническая изменчивость паразита может иметь различные проявления при паразитировании у хозяев различного тендера.

Понятие «гендер» особенно актуально при заболеваниях, передаваемых половым путем, в современных условиях сексуальной революции и распространения транссексуальности и гомосексуализма (Заславский Д.В., 2008; Пронина А.А., 2012). Венерические заболевания называют «болезнями поведения». Вероятность заражения ими во многом зависит от различных форм поведения в межличностных отношениях.

Таким образом, необходимость дальнейшего изучения проблем эпидемиологии, этиологии, патогенеза урогенитального трихомониаза, патогенетического обоснования принципов диагностики и лечения этой инвазии с учетом тендерного аспекта определили актуальность предпринятого исследования.

Цель исследования

Установить патогенетические особенности урогенитального трихомониаза с учетом тендерной принадлежности больных.

Задачи исследования:

1. Изучить тендерные особенности эпидемиологических процессов трихомониаза в Саратовской области.

2. Выявить различия в патогенезе нарушений иммунного статуса и оксидант/антиоксидантной системы у пациентов мужского и женского полов при трихомониазе.

3. Разработать рекомендации по эпидемиологическому и лабораторному мониторингам трихомониаза с учётом тендерных особенностей.

4. Изучить морфо-физиологические особенности клинических изолятов этиологического объекта - Trichomonas vaginalis, полученных от пациентов мужского и женского полов в условиях стационарного и проточного культивирования.

5. Исследовать динамику развития резистентности Trichomonas vaginalis к препаратам 5-НИ ряда in vitro в тендерном аспекте для обоснования новых путей этиологической терапии.

Научная новизна исследования:

1. Впервые изучены и проанализированы тендерные особенности эпидемиологических процессов трихомониаза в Саратовской области, его социально-экономическая очаговость.

2. Впервые выявлены патогенетические особенности нарушений иммунного статуса и состояния антиоксидантной системы больных трихомониазом различного течения и тендерной принадлежности.

3. Впервые изучена фенотипическая изменчивость клинических изолятов Trichomonas vaginalis, полученных от пациентов мужского и женского полов в условиях стационарного и проточного культивирования на микроферментёре собственной конструкции.

Вьивлена динамика развитая устойчивости Trichomonas vaginalis, полученных от пациентов различного пола, и установлен один из возможных механизмов резистентности к препаратам 5-НИ ряда.

Научно-практическая ценность исследования:

Полученные экспериментальные данные свидетельствуют о наличии у Trichomonas vaginalis неканонической наследуемой модификационной изменчивости, формирование которой имеет тендерные особенности.

Выявленные тендерные отличия наследуемой модификационной изменчивости могут быть использованы при разработке алгоритмов лабораторной диагностики и критериев излечиваемости трихомониаза.

Наследуемая модификационная изменчивость влагалищной трихомонады лежит в основе формирования её лекарственной резистентности. Выявленный тендерный механизм формирования резистентности Trichomonas vaginalis к 5-НИ ряда необходимо учитывать при назначении курса лечения больным с учётом их пола.

Реализация результатов исследования

Результаты диссертационного исследования используются в лечебно-диагностическом процессе ММУП «Лечебно-консультативный центр, г. Саратов»; ГУЗ «Саратовский областной кожно-венерологический диспансер»; в клинике кожных и венерических болезней ГБОУ ВПО Саратовский ГМУ им. В.И. Разумовского Минздрава России (акты внедрения №11, №12, №13 от 18.02.2014 г.).

Основные положения работы используются при чтении лекций и проведении практических занятий на кафедрах клинической и лабораторной диагностики ФПК и ППС, кожных и венерических болезней ГБОУ ВПО Саратовский ГМУ им. В.И. Разумовского Минздрава России (акты внедрения №98, №99 от 10.01.2014 г.).

Положения, выносимые на защиту: Патогенез нарушений иммунного статуса и оксидант/антиоксидантной системы больных трихомониазом различного клинического течения имеет тендерные особенности.

Trichomonas vaginalis способна к длительным наследуемым модификационным изменениям, что объясняет многочисленные артефакты диагностики и лечения трихомониаза.

Существует тендерная зависимость патогенетичсеких механизмов формирования резистентности Trichomonas vaginalis к препаратам 5-НИ ряда.

Тендерные особенности трихомонадной инвазии должны учитываться при эпидемиологическом мониторинге и при лабораторной диагностике этого заболевания, а также при назначении методов и схем лечения с применением иммуномодуляторов.

Апробация диссертации

Материалы диссертационной работы были апробированы и представлены на объединенном Пленуме Научных советов Российской Федерации по экологии человека и охране окружающей среды и по медико-экологическим проблемам здоровья работающих «Научно-методические и законодательные основы обеспечения генетической безопасности факторов и объектов окружающей и производственной среды в целях сохранения здоровья человека» (Москва, 2010).

2. Пленуме Научного совета по экологии человека и гигиене окружающей среды Российской Федерации «Актуальные проблемы здоровья человека и среды его обитания» (Москва, 2011).

3. 2-м Континентальном Конгрессе дерматологов МОД ( СПб., 2011);

4. Конференции дерматологов и косметологов Приволжского Федерального округа (Казань, 2011).

5. Международном форуме по проблемам науки, техники и образования (Москва, 2012).

Личный вклад автора в исследование

Автор диссертационного исследования - врач-дерматовенеролог высшей категории, лично принимал участие в обследовании больных ИППП; проводил эпидемиологический анализ трихомониазной патологии на территории Саратовской области за период с 2008 по 2012 гг.; производил забор биологического материала и определение лабораторных показателей. Принимал непосредственное участие в назначении лечения больным, контроле их состояния во время и после лечения. Автор является разработчиком патента на полезную модель мужского урологического тракта для проточного культивирования патогенных микроорганизмов, на которой им лично была проведена основная часть экспериментальных исследований. В работе соискателем самостоятельно проанализированы истории болезни больных трихомониазом за 2008 - 2012 гг.; полученные в результате научного исследования материалы, выполнена статистическая обработка, сформулированы выводы и практические рекомендации.

Публикации

По материалам диссертации опубликованы 12 научных работ, из них 4 в рецензируемых журналах перечня ВАК Минобрнауки РФ, 1 монография. Получен патент на полезную модель №126703 «Модель мужского урологического тракта для проточного культивирования патогенных микроорганизмов».

Объём и структура работы

•Диссертация состоит из введения, обзора литературы, трех глав собственных исследований, обсуждения результатов, выводов и практических рекомендаций, библиографического указателя; изложена на 134 страницах, содержит 5 таблиц, иллюстрирована 14 рисунками. Список литературы включает 287 наименований (207 отечественных и 80 иностранных источников).

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Материалы и методы. В соответствии с целью и задачами настоящей работы было проведено комплексное обследование пациентов с диагнозом — «трихомониаз» (МКБ—10, А 59.0). Основные исследования по лабораторному мониторингу проводились в ММУП «Лечебно-консультативный центр, г. Саратов» в 2008-2012 годах. Для экспериментальных исследований дополнительно использовались клинико-лабораторные базы ГУЗ «Саратовский областной кожно-венерологический диспансер», клиники кожных и венерических болезней СГМУ и клиники профпатологии и гематологии СГМУ. Материалы для исследований

набирали в соответствии с протоколом информированного согласия пациентов.

Настоящее диссертационное исследование выполняли по двум направлениям. Первое - изучение тендерных аспектов динамики эпидемиологической ситуации по заболеваемости трихомониазом в Саратовской области, патогенетических механизмов тендерных особенностей изменений иммунного и антиоксидантного статусов больных с различным течением трихомониаза, а также научное обоснование тендерных принципов в эффективности диагностики этой патологии (мониторинговые исследования). Второе - экспериментальное. В условиях проточного культивирования изучали влияние препаратов 5-НИ ряда на этиологический объект - Т.vaginalis и патогенетические механизмы формирования лекарственной резистентности с учетом тендерной принадлежности.

Эпидемиологические исследования проводили на основании официальных статистических отчётов дерматовенерологической службы Саратовской области (ф.9 и ф.34 МЗ РФ), а также отчётов работы частных клиник и частно практикующих врачей-дерматовенерологов и урологов. С этой целью изучено 1356 историй болезни пациентов с диагнозом «урогенитальный трихомониаз» за период с 2006 по 2012 гг.

Обследованы 393 пациента - 210 женского пола и 183 мужского в возрасте от 18 до 42 лет. Все обследованные больные были с первично выявленным острым трихомониазом (уретрит, кольпит) и хроническими субманифестными и асимптомными формами. Диагноз обследованного контингента больных ставили на основании клинических данных, результатов микроскопии нативного (влажного) и окрашенного мазков, материалов культуральных и молекулярно-генетических исследований методом полимеразной цепной реакции (ПЦР), метода иммуноферментного анализа (ИФА). С использованием ИФА были обследованы 149 больных мужского и 152 пациента женского пола, согласившихся на данный вид исследования.

В аналитическую обработку не включали клинический материал от пациентов с идиосинкразией к препаратам 5-НИ ряда, самостоятельно принимавших антибиотики до обращения в медицинское учреждение, а также пациентов, страдавших почечной и печёночной недостаточностью; не исследовали материал пациентов с микст-инфекциями и инвазиями.

Техника взятия инокулята была стандартная и соответствовала регламентирующим инструкциям и приказам МЗ РФ. Для исследований материал у больных брали до лечения. Забор крови осуществляли в те же сроки по общепринятой методике в количестве, необходимом для проведения конкретных анализов.

Обнаружение специфических антител к Т. vaginalis проводили методом ИФА на тест-системах «ТрихомоноБест-lgG-CTpnn» производства ЗАО «Вектор-Бест». Подготовка анализов соответствовала нструкциям фирмы-производителя. Определение сывороточных иммуноглобулинов IgA, IgG, IgM выполняли по методу Манчини. Определение количества клеток популяций и субпопуляций лимфоцитов осуществлялось методом проточной цитометрии с использованием моноклональных антител (многоцветный анализ) и проточных цитометров EPICS XL (четырехцветный) фирмы Beckman Coulter; FACS Calibur (четырехцветный) и CantoII (шестицветный) производства фирмы Becton Dickinson безотмывочным,

двухплатформенным методом. Гейтирование проводили по CD45. Состояние оксидант/антиоксидантной системы оценивали по уровню малонового диальдегида в мембранах эритроцитов по методу Ishichara Minora (1978); концентрацию а-токоферола определяли по методу Р.Н. Черняускене (1984) с последующим расчётом антиоксидантного коэффициента (АОК) по методу Б.В.Давыдова (1991).

Особую роль в исследованиях играл молекулярно-генетический метод полимеразной цепной реакции (ПЦР). С одной стороны, он использовался как диагностический тест, и в этом случае мы применяли технологию реал-тайма, с другой, - служил основным методом при изучении экзогенного воздействия протистоцидных препаратов на паразита in vitro. В этом случае использовали классическую схему ПЦР с электрофорезной детекцией. Диагностику в режиме реал-тайма проводили на персональной системе ПЦР в реальном времени Dtlite производства НПФ «ДНК технология». В исследованиях методом ПЦР по классической схеме применяли тест-систему «АмплиСенс» производства ЗАО «Вектор-Бест».

Экспериментальные исследования были направлены на изучение жизнедеятельности урогенитальной трихомонады in vitro в условиях непрерывного культивирования на среде CDC-199. В ходе экспериментов оценивали изменение барьерных функций мембран, заключающееся в измерении утечки УФ-поглощающих веществ до и после обработки 5-НИ. Измерение утечки УФ-поглощающих веществ выполняли путем определения оптической плотности супернатанта при 260 нм в 1 см кювете на спектрофотометре СФ-2000. В качестве УФ-поглощающего агента использовали оксид железа III (Fe203). Контролем служил супернатант культур, не подвергавшихся действию 5-НИ.

Проточное культивирование разворачивали на микроферментёре собственной конструкции (рис. 1). Оригинальная установка предназначена для проточного культивирования патогенных микроорганизмов с целью изучения их жизнедеятельности. Техническая эффективность прибора заключается в достаточно точном, приближенном к натуре моделировании физиологических параметров человеческого организма - температуры, внутренней среды, объемных характеристик и, что особенно важно, циркуляции жидкости в органах урогенитального тракта мужчин. Материалом для культуры клеток служили биопсийные образцы простаты пациентов с ДГПЖ, полученные от мужчин разного возраста (39 лет и старше). Образцы ткани помещали во флаконы с питательной средой ДМЕМ (модифицированная по способу Дульбекко питательная среда Игла), содержащей антибиотики: гентамицин (150 мкг/мл) и амфотерицин Б (10 мкг/мл) тотчас же транспортировали в лабораторию и хранили при +40°С не более 4 часов. При использовании в качестве питательной среды Дульбекко модифицированную среду Игла с низким содержанием кальция и магния и 10%-ной сыворотки эмбрионов коров, а также добавлением KGF в дозе 20 нг/мл обеспечивали интенсивный рост и пролиферацию клеток.

Статистический анализ результатов проводили с помощью программы STATISTICA 7.0 (StatSoft Inc., США). Исследованные величины были представлены в виде выборочного среднего значения ± ошибка выборочной средней. Достоверность различий средних величин оценивали с помощью t-критерия Стьюдента.

Описание прибора:

1 - термостат;

2 - люк;

3 - резервуар для питательной среды;

4 - клапан;

5 - ферментёр;

6 - люк;

7 - выводной проток;

8 - клапан;

9 - ёмкость для сбора анализируемой среды;

10 - блок управления

Патент на полезную модель № 126703от 23.11.2012г.

Рис. I. Принципиальная схема действующей модели мужского урологического тракта для культивирования патогенных микроорганизмов.

Результаты исследований

Мониторный раздел работы

Эпидемиологические исследования показали, что в половой структуре заболевших трихомониазом в Саратовской области за изучаемый период отмечалось явное преобладание лиц женского пола. Так, в 2006 году процент заболевших женщин составил 77,9%, а в 2012 - 86,2%, мужчин, соответственно, - 22,1% и 13,8% (р<0,05). Установлены динамичное увеличение случаев заболеваемости трихомониазом среди женщин и снижение случаев заболеваемости среди мужчин (рис. 2).

Возрастная структура заболеваемости урогенитальным трихомониазом среди мужчин и женщин Саратовской области также имеет тендерные особенности: если большинство заболевших мужчин относится к возрастной категории 20-29 лет (максимальная половая активность), то возрастной состав заболевших женщин длится от 20 до 40 лет и более (рис. 3,4).

Исследованиями выявлены стойкие очаги напряжённой эпидемиологической обстановки по трихомониазу в 7 районах Саратовской области (из 38 районов), в которых заболеваемость различными формами этой патологии в 2012 г. достигала 370 случаев на 100 тыс. населения (Саратовском, Балаковском, Вольском, Марксовском, Пугачёвском, Ртищевском и Энгельсском), при 96 случаях в среднем по области. В 4 районах (Аркадакском, Дергачёвском, Турковском и Романовском) заболеваемость трихомониазом снижалась до 57 случаев на 100 тыс. населения.

9

0% 2006 г. 2007 г. 2008 г. 2009 г. 2010 г. 2011 г. 2012 г.

■ 5 77,90% 78,90% 80,50% 82% 85,40% 85,90% 86,20%

■ <? 22,10% 21,10% 19,50% 18% 14,60% 14,10% 13,80%

Рис. 2. Распределение больных трихомониазом по полу в Саратовской области (2006-2012 гг.).

Рис.3. Возрастная структура заболеваемости урогенитальным трихомониазом среди мужчин Саратовской области (2008-2012 гг.).

Рис.4. Возрастная структура заболеваемости урогенитальным трихомониазом среди женщин Саратовской области (2008-2012 гг.).

Установлена сильная прямая достоверная корреляционная зависимость между уровнем заболеваемости урогенитальным трихомониазом в районах Саратовской области с высоким социально-экономическим потенциалом и существенно низкими показателями экономического развития (гху = + 0,99, р> 99,9%). Значимыми причинами такой очаговости, по нашему мнению, являются различный тендерный состав этих регионов, а также их социально-экономическая структура, уровень медицинского обеспечения и его спектр (бюджетная медицина - внебюджетная) и даже генофонд популяций.

В работе изучали патогенетические особенности трихомониаза различного клинического течения в тендерном аспекте - исследовались процессы

иммуногенеза и оксидант/антиоксидантный статус больных.

Исследованиями доказано, что у пациентов женского пола при остром урогенитальном трихомониазе показатели С03+, С04+, С08+, СО)6+ были в пределах референтных значений. Однако отмечалось незначительное снижение абсолютных показателей С 0,9 , В-лимфоцитов на 20%. Это, по нашему мнению, свидетельствовало о малоэффективной активации Т-клеточного звена иммунитета женского организма. Изменений в соотношениях (индексах) субпопуляций лимфоцитов с референтными значениями показателей выявлено не было (табл. 1).

Показатели гуморального иммунитета у пациентов женского тендера также понижались: ^ А - на 15,4%; ^ в - на 21,3%; уровень ^ М оставался в пределах референтных значений.

Показатели фагоцитарной активности нейтрофилов в крови пациенток при острой форме трихомониаза были выше референтных значений: ФИ - на 2,5%, активированный НСТ-тест- на 24,0% и спонтанный НСТ-тест- на 28,5%.

Тендерные отличия клеточного и гуморального иммунитета при остром урогенитальном трихомониазе (М±ш)

Показатели, единицы измерения Женщины (п=87) Мужчины (п=74) Референтные значения показателей**

СПзь абс. кол-во клеток *109/л 1,13±0,09* 1,78±0,14 1,1-1,7

СТ>4+, абс. кол-во клеток хю'/л 0,77±0,02* 1,32±0,10 0,7 -1,1

СЭвь абс. кол-во клеток х10% 0,53±0,01* 0,59±0,02 0,5-0,9

СЭ16+, абс. кол-во клеток хю% 0,18±0,009* 0,67±0,03 0,2-0,4

С019+, абс. кол-во клеток хЮ5/л 0,12±0,01* 0,23±0,09 0,15-0,4

С04*/С03+, у.е. 0,68±0,03 0,74±0,04 0,63 - 0,65

СОя^СЭзь у.е. 0,46±0,03* 0,33±0,02 0,45-0,52

С04^'С08+, у.е. 1,45±0,06 1,29±0,11 1,5-2,5

СБ]б+/СОз+, у.е. 0,16±0,012* 0,38±0,014 0,18-0,24

1Я А, г/л 1,1±0,08* 2,6±0,22 1,3-3,1

1Я в, г/л б,3±0,04* 7,5±0,11 8,0-13,0

1« М, г/л 0,94±0,04* 1,7±0,06 0,9-1,5

Фагоцитарный индекс, % 83±4,2* 45±3,7 60-80

Активированный НСТ-тест, % 62±5,4* 33±2,9 30-50

Спонтанный НСТ-тест, % 9±0,8* 3±0,1 3-7

Примечание: * - р<0,05; ** - здоровые мужчины и женщины 18-42 лет по данным КДЛ ММУП «ЛКЦ, г.Саратов».

У мужчин выявлено относительное увеличение показателей С03+ и С04+ субпопуляций лимфоцитов, что свидетельствовало об активации Т-хелперного звена Т-клеточного иммунитета. В субпопуляции СО]6+ лимфоцитов (ИК) отмечали увеличение значений в 1,67 раза, что, соответственно, приводило к увеличению С01б+УС03+ - индекса реактивности Т-киллерного звена клеточного иммунитета на 36,8%. Субпопуляции лимфоцитов СВ8+, СБ^ находились в пределах референтных значений, отражая незначительную степень активации Т-супрессорного и В-лимфоцитарного звеньев клеточного иммунитета.

Гуморальное звено иммунитета у пациентов мужского пола характеризовалось соответствующими референтным значениями ^ А, в то время как выработка ^ в была ниже на 6,3%, а продукция Ц М увеличивалась на 11,2%.

Показатели фагоцитарной активности нейтрофилов у больных мужского пола при остром трихомониазе были снижены или находились на границе минимальных референтных значений: ФИ - снижался на 25%, активированный НСТ-тест и спонтанный НСТ-тест находились в пределах нижних границ референтных значений.

В результате иммунологического обследования установлено, что у больных острым урогенитальным трихомониазом различного пола показатели клеточного и гуморального иммунитета имели статистически значимые отличия (р<0,05). Так, кластеры дифференцировки (С03+, С04+, СЭ8+, С016+, СО,9+) у женщин были ниже! чем у мужчин, а соотношения между субпопуляциями (С08+/С03+) С0,6^С03+) -выше. Уровни иммуноглобулинов в сыворотке крови (1§ А - в 2,4 раза, ^ в - в 1,2 раза, М — в 1,8 раза) ниже, а фагоцитарная активность нейтрофилов в 2 раза выше у женщин, чем у мужчин.

У пациентов женского гендера при хроническом урогенитальном трихомониазе кластеры дифференцировки: С03+, СБ4ъ СБ16+ находились в пределах референтных значений, а уровень Т-цитотоксических супрессоров (СБ8+) снижался на 20% (табл. 2).

Тендерные отличия клеточного и гуморального иммунитета при хроническом урогенитальном трихомониазе (М±т)

Показатели, единицы измерения Женщины (п=81) Мужчины (п=75) Референтные значения показателей**

СОз+, абс. кол-во клеток хю'/л 1,17±0,09* 0,91±0,08 1,1-1,7

С04+, абс. кол-во клеток * 109/л 0,81±0,07* 0,66±0,02 0,7-1,1

С08+, абс. кол-во клеток х109/л 0,40±0,032* 0,89±0,041 0,5-0,9

С016+, абс. кол-во клеток х109/л 0,28±0,019 0,32±0,015 0,2-0,4

СО^, абс. кол-во клеток хЮ'/л 0,48±0,013* 0,19±0,005 0,15-0,4

СЭ4+/СПЗЬ У-е. 0,51±0,012* 0,72±0,032 0,63-0,65

С08+/С03+, у.е. 0,35±0,01* 0,97±0,0б 0,45-0,52

С04+/С08ь у.е. 2,03±0,14* 0,74±0,06 1,5-2,5

С016+УС03ь у.е. 0,24±0,017* 0,35±0,013 0,18-0,24

^ А, г/л 2,9±0,27* 2,0±0,04 1,3-3,1

^ О, г/л 12,9±0,32 14,2±1,2 8,0-13,0

^ М, г/л 1,0±0,04* 1,4±0,11 0,9-1,5

Фагоцитарный индекс, % 42±3,8* 88±4,7 60-80

Активированный НСТ-тест, % 26±2,1* 62±3,8 30-50

Спонтанный НСТ-тест, % 7,5±0,2* 10±1,2 3-7

Примечание: * - р<0,05; ** - здоровые мужчшш и женщины 18-42 лег по данным КДЛ ММУП «ЛКЦ, г.Саратов».

В-клеточное звено иммунитета (С019+), напротив, увеличивалось до 21%. Соотношение СБ8+/С03+ уменьшалось (32%). Соотношения СБ4+УС08+ (основной индекс активности Т-клеточного звена) и С016+УС03+ находились в пределах референтных значений.

Показатели гуморального иммунитета у женщин были в пределах референтных значений.

Уровень фагоцитарной активности нейтрофилов у пациентов женского пола при хронической форме трихомониаза был снижен по сравнению с референтными значениями (ФИ - на 30%, активированный НСТ-тест - на 13,3%, спонтанный НСТ-тест - на 7,1% от максимальных референтных значений показателей).

У пациентов мужского тендера при хронической патологии отмечали тенденцию к истощению Т-клеточного звена иммунитета, о чём свидетельствовало снижение количества СЭз+ (17,3%) и С04+ (6%). Субпопуляции лимфоцитов С08+, СЭ19+ находились в пределах референтных значений. Соотношения субпопуляций: С04+/С031, СО«,/СОи, СО|6+/СЭз+ превышали рефферентные значения соответственно на 10,7%, 86,5%, 45,8%, а иммунорегуляторный индекс С04+/С08+ снижался практически в 2 раза.

Гуморальное звено иммунитета у пациентов мужского пола при хроническом трихомониазе характеризовалось соответствующими референтным значениями ^ А и ^ М, а выработка ^ в увеличилась на 9,2%.

Показатели фагоцитарной активности нейтрофилов у больных мужского пола с хроническим течением трихомониаза были увеличены: ФИ - на 10 %, активированный НСТ-тест и спонтанный НСТ-тест - на 24% и 43% соответственно.

Таким образом, иммунограммы больных хроническим трихомониазом мужского и женского пола имели существенные отличия (р<0,05). Субпопуляции лимфоцитов СЭ3+, СЭ4+ у женщин были выше, чем у мужчин, а СВ8+ - ниже. В количестве ЫК-клеток достоверной разницы отмечено не было. Индексы соотношений субпопуляций (С047С0,Н СО^/СЭ^, СОк,+/СОз^ у женщин статистически значимо ниже, а С04+/СВ8+ - выше, чем у мужчин. В гуморальном звене иммунитета у женщин концентрация ^ А была выше, а ^ М - ниже (соответственно 2,9±0,27 и 2,0±0,04, р<0,05; 1,0±0,04 и 1,4±0,11, р<0,05). Достоверной разницы в концентрациях ^ О отмечено не было. Фагоцитарное звено иммунитета у мужчин статистически значимо преобладало над женским.

Анализируя тендерные особенности системного иммунного ответа при урогенитальном трихомониазе различных форм течения, следует отметить, что выявленные изменения затронули все звенья иммунитета, включая иммунные расстройства клеточного звена, гуморального и фагоцитарного, которые статистически значимо отличались у пациентов женского и мужского тендеров.

В патогенезе урогенитального трихомониаза также ведущую роль играют нарушения ряда универсальных общепатологических механизмов: активация процессов перекисного окисления липидов и дефицит компонентов антиокислительной системы с комплексным поражением мембран клеток и субклеточных структур, сдвиги нейрогуморальной регуляции, расстройства микрогемодинамики. В результате развивается циркуляторная гипоксия, продуцируется патогенная концентрация активных кислородных метаболитов (АКМ), усиливается приток нейтрофилов и макрофагов в очаг воспаления, происходит дальнейшая эскалация АКМ.

При остром манифестном трихомониазе у женщин наблюдали существенное увеличение количества МДА при одновременном снижении концентрации токоферола, что свидетельствовало о нарушении антиоксидантной защиты. У

мужчин нарушения баланса в системе оксидант/антиоксидант не установлено (табл. 3).

Показатели оксидант/антиоксидантного статусов женщин и мужчин при остром трихомониазе (М±т)

Показатели, единицы измерения Женщины Мужчины

Здоровые (п=62) Больные (п=87) Здоровые (п=58) Больные (п=74)

МДА, мкмоль/л 2,9±0,12 8,4±0,59*(**) 2,7±0,16 3,2±0,24

а-ТФ, мкмоль/л 21,61 ±0,9 14,78±1,01*(**) 10,2±0,64 11,2±0,52

АОК, у.е. 7,45 1,75 3,8 3,5

Примечание: * - р<0,05 (здоровые - больные); (**) - р<0,05 (больные женщины - больные мужчины).

При хроническом трихомониазе у женщин отмечали снижение уровня МДА и повышение концетрации токоферола по сравнению с показателями при острой патологии, а у мужчин, напротив, наблюдали увеличение количества МДА (р<0,05) и снижение (р<0,05) уровня витамина Е (табл. 4).

Показатели оксидант/антиоксидантного статуса женщин и мужчин при хроническом трихомониазе (М±т)

Показатели, единицы измерения Женщины Мужчины

Здоровые (п=52) Больные (п=81) Здоровые (п=68) Больные (п=75)

МДА, мкмоль/л 2,9±0,12 5,6±0,09*(**) 2,7±0,16 7,3±0,21 *

а-ТФ, мкмоль/л 21,61 ±0,9 17,01±1,13*(**) 10,2±0,64 8,2±0,14*

АОК, у.е. 7,45 3,0 3,8 1,1

Примечание: * - р<0,05 (здоровые - больные); (**) - р<0,05 (больные женщины - больные мужчины).

Выявленные закономерности подтверждают различные патогенетические механизмы развития общей ответной реакции женского и мужского организмов на трихомонадную инвазию, а также предполагают различную тендерную стратегию назначения антиоксидантов при лечении пациентов с острым и хроническим трихомониазом.

При выполнении настоящей работы изучали эффективность методов лабораторной диагностики трихомониаза у пациентов мужского и женского тендеров. Анализ результатов исследований показал, что в разработке алгоритмов диагностических мероприятий при трихомониазе различных форм течения у мужчин приоритетными являются ИФА и молекулярно-генетические методы диагностики, а у женщин - микроскопия и культуральный метод (табл. 5).

Сравнение эффективности методов лабораторной диагностики трихомониаза

Методы Чувствительность, % Специфичность, %

Мужчины Женщины Мужчины Женщины

Микроскопия 39,8 94,1 25,2 90,0

Культуральный метод 85,7 94,3 92,8 99,6

ПЦР 86,9 72,8 97,6 63,7

ИФА 57,6 39,4 100,0 100,0

Экспериментальный раздел работы

1. Выращивание урогенитальных трихомонад, полученных от пациентов различного гендера, в условиях проточного культивирования.

Забор материала осуществляли от пациентов с острой формой трихомониаза. Инокуляционная доза составляла 500 клеток/мл. В ходе эксперимента с субстратом-носителем Вк^^в была установлена динамика роста трихомонад, полученных от больных женского пола, которая отличалась от таковой больных мужского пола и характеризовалась более интенсивными темпами роста в течение первых 3-6 суток. Максимальные значения роста достигались на 6-9-е сутки: (З,1±0,28)х103 клеток/мл. Культура урогенитальных трихомонад, взятых от мужчин, росла достоверно медленнее (р<0,05) и достигала максимальных значений на 10-12-е сутки культивирования: (3,2±0,31)х103 клеток/мл (рис. 5).

3500 3000 2500 Д 2000 ас о £ 1500 1000 500 0

3 6 9 С утк 12 и 15 18 21

Рис.5. Динамика роста культуры T.vaginalis клинических изолятов различного гендера в условиях проточного культивирования.

2. Изучение патогенетических механизмов формирования резистентности к препаратам 5-НИ ряда в условиях проточного культивирования.

Исследования были направлены на выявление особенностей формирования фенотипа простейшего и его модификационной изменчивости в зависимости от тендера хозяина.

В качестве основного фактора, влияющего на изменчивость урогенитальной трихомонады, рассматривали формирование её резистентности к препаратам 5-НИ ряда в условиях проточного культивирования. В схему экспериментов входило изучение культур трихомонад, полученных от пациентов мужского и женского тендеров.

При изучении культуральных свойств клинических изолятов, полученных от пациентов мужского пола, было проведено две серии опытов. В первой серии опытов инокулят для культивирования получали от двух групп пациентов мужского тендера в возрасте наибольшей сексуальной активности (32 человека, 1839 лет): 1-я группа - пациенты с низкой комплаентностью, наблюдавшиеся у специалиста (26 человек); 2-я группа - с заболеванием, не поддающимся лечению длительное время (6 человек).

У больных имели место различные клинические проявления, согласно которым им в разное время ставили диагноз «урогениталъный трихомониаз» (А 59.0 по МКБ-Х). Предположительно именно эти категории больных или заражены резистентными формами Trichomonas vaginalis, или сами создали условия для образования таких штаммов. Инокуляционная доза составляла 500 клеток/мл.

В ходе этой серии опытов проводили длительное стационарное с пересевом культивирование паразита на среде Vagicult. В результате были получены чистые культуры Т .vaginalis.

Затем каждую из 32 культур обрабатывали трихомонацидными концентрациями метронидазола и тинидазола в условиях проточного культивирования. Используемые концентрации (метронидазол - 2,0 мкг/мл; тинидазол - 1,0 мкг/мл) были получены методом серийных разведений. Исходная концентрация препаратов составляла 1:1000, а каждая последующая в 2 раза ниже, чем предыдущая. Длительность культивирования в первой серии опытов зависела от группы пациентов и составляла от 7 до 21 суток.

Для второй серии опытов инокулят брали у пациентов также мужского тендера (18 человек), ранее не получавших лечение противопротозойными препаратами, обратившихся в лечебное учреждение впервые, и которым на основании клинических и лабораторных исследований был поставлен диагноз «урогениталъный трихомониаз» (А 59.0 по МКБ-Х). Инокуляционная доза в этой серии опытов, так же как и в первой, составляла 500 клеток/мл.

Культивирование во второй серии опытов с материалом, полученным от пациентов, не проходивших специфического лечения, проводили также с пересевом со стационарной среды на проточную среду в течение 21 суток.

В первой серии опытов наблюдали элиминациию паразита при воздействии на него противопротозойными препаратами согласно схемам лечения, рекомендованным ВОЗ (рис. 6).

При концентрации метронидазола - 2,0 мкг/мл гибель Т. vaginalis происходила

на 14-е сутки в изолятах от 21 пациента 1-й группы и 4 пациентов 2-й группы, что составило 78% от всех культур. В остальных изолятах наблюдали умеренный рост простейшего. Эти штаммы были подвергнуты действию тинидазола в концентрации, равной 1,0 мкг/мл, в течение 5 суток, после чего наблюдали элиминацию паразита на 19-й день опыта в изолятах, взятых у 5 больных из 1-й группы и одного больного из 2-й группы соответственно, составляющих в целом 19 % от всех культур.

Рис. 6. Элиминация T.vaginalis в проточных культурах при воздействии препаратами 5-НИ ряда в первой серии опытов.

В одном изоляте (3 % от всех культур) от пациента 2-й группы отмечали продолжение роста и жизнедеятельности T.vaginalis, несмотря на проводимую противопротозойную терапию, что является следствием развития резистентности простейшего в данной культуре. Эксперимент был завершён на 21-е сутки.

Во второй серии опытов при воздействии только метронидазолом на изоляты наблюдали экспоненциальное снижение количества клеток простейшего на выходе из ферментёра с дальнейшей тотальной элиминацией на 14-17-е сутки.

На 21-е сутки в отделяемом из ферментёра клетки простейшего не определяли, но выявляли паразитов из субстратов носителей ферментёра (СПос1ех 3, с коллагеном) в количестве 300-380 клеток/мл. Они имели округлую форму и размеры 8-10 мкм. Пересев этих штаммов на стационарную среду давал рост трихомонад, устойчивых к метронидазолу. Дальнейшее выращивание полученных штаммов T.vagina¡is в условиях проточного культивирования при отсутствии экзогенных лекарственных воздействий на 40-60-е сутки приводило к возвращению чувствительности паразита к 5-НИ.

При изучении культуральных свойств клинических изолятов, полученных от пациентов женского пола, также было проведено две серии опытов. Для первой серии опытов биоматериал для культивирования брали от двух групп пациентов женского тендера (всего 47 человек) в возрасте от 18 до 49 лет: 1-я группа -пациенты с низкой комплаентностью, наблюдающиеся у специалиста (13 человек);

18

г

2-я группа - больные, не поддающееся лечению длительное время (34 человека). Инокуляционная доза составляла 500 клеток/мл.

Схема проведения опытов с материалом, полученным от больных женского тендера, была аналогичной опытам с мужским биоматериалом.

Для проведения второй серии опытов забор материала производили у пациенток (II человек) в возрасте от 18 до 49 лег, ранее не получавших лечение противопротозойными препаратами, обратившихся в лечебное учреждение впервые, и которым на основании клинических и лабораторных исследований был поставлен диагноз «урогенитальный трихомониаз» (А 59.0 по МКБ-Х). Инокуляционная доза в этой серии опытов, так же как и в первой, составляла 500 клеток/мл.

В двух сериях опытов наблюдали элиминацию паразита на 7-е сутки при воздействии на него противопротозойными препаратами согласно схемам лечения, рекомендованным ВОЗ. Клетки урогенитальной трихомонады, полученные из ферментёра, имели амёбовидную форму размером 15-17 мкм. Формирования резистентных популяций при культивировании трихомонад, полученных от женщин, больных трихомониазом различного клинического течения, не наблюдали.

В опытах на резистентных штаммах трихомонад по измерению утечки УФ-поглощающего вещества (Fe203) было установлено, что в супернатанте концентрация этого соединения была выше на 22% (р<0,05), чем в культурах с нерезистентными штаммами. Этот факт подтвердил усиление барьерной функции мембран клеток простейшего и уменьшение диффузии оксида железа в цитоплазму. Возможно, причинами являются изменение вязкости липидных компонентов мембран и энергетической активности мембран, которые обусловлены пребыванием T.vaginalis в организме мужского тендера. Под комплексным действием внутренней среды мужского тендера и препаратов 5-НИ ряда изменяется форма билипидного слоя клеточных мембран, что приводит к переориентации головок липидов и, как следствие, уменьшению диффузной проницаемости. Перечисленные механизмы могут лежать в основе феномена наследуемой модификационной изменчивости, приводящей к временной резистентности трихомонад к препаратам 5-НИ ряда.

Анализируя результаты экспериментов на проточных культурах урогенитальных трихомонад, полученных от больных мужского тендера, можно утверждать, что низкая комплаентность пациентов и хронические формы трихомониаза не являются достоверной причиной формирования резистентности урогенитальной трихомонады к препаратам 5-НИ ряда. Проведение опытов на практически стерильной среде в виде монокультуры позволило подтвердить выводы ряда авторов о «непричастности» сопутствующей в обычных условиях in vivo микрофлоры в формировании устойчивости трихомонад к метронидазолу и его производным. У резистентных к препаратам 5-НИ ряда изолятов наблюдали увеличение барьерных функций цитоплазматических мембран, что позволило установить причинно-следственную связь. Резистентность носила временный характер, что обуславливалось модификационной изменчивостью, характерной для Подцарства Простейших.

выводы

1. В результате эпидемиологического мониторинга (2006-2012 гг.) установлены тендерные особенности в структуре заболеваемости трихомониазом, значимое (р<0,05) преобладание, а также динамическое увеличение этой патологии в Саратовской области среди женщин и снижение среди мужчин. В 2006 г. процент заболевших женщин составил 77,9% (мужчин - 22,1%), а в 2012 г. - 86,2% (мужчин -13,8%) соответственно. Основные возрастные категории больных: среди мужчин 20-29 лет, женщин - от 20 до 40 лет и старше.

2. Исследованиями выявлена сильная прямая достоверная корреляционная зависимость (гет = +0,99, р>99,9%) между уровнем заболеваемости урогенитальным трихомониазом в районах Саратовской области с высоким социально-экономическим потенциалом (Саратовском, Балаковском, Вольском, Марксовском, Пугачёвском, Ртащевском и Энгельсском - до 370 случаев на 100 тыс. населения) и значительно низкими показателями экономического развития (Аркадакском, Дергачёвском, Турковском и Романовском районах - до 57 случаев на 100 тыс. населения). Значимыми причинами такой очаговости, по нашему мнению, являются различный тендерный состав населения этих регионов, а также их социально-экономическая структура, уровень медицинского обеспечения и его спектр (бюджетная медицина - внебюджетная) и даже генофонд популяций.

3. Анализ тендерных особенностей патогенетических механизмов системного иммунного ответа при урогенитальном трихомониазе различных форм течения показал, что все изученные иммунные реакции клеточного, гуморального иммунитета, фагоцитарной активности статистически значимо (р<0,05) отличались у пациентов женского и мужского тендеров.

Патогенетические механизмы нарушений антиоксидантной защиты при остром и хроническом урогенитальном трихомониазе у пациентов различного тендера также имели существенные различия. При острой патологии у женщин наблюдали существенное увеличение количества МДА и одновременное снижение концентрации токоферола (р<0,05), что свидетельствовало о нарушении антиоксидантной защиты. У мужчин нарушения баланса в системе оксидант/антиоксидант не установлено. При хроническом трихомониазе у женщин отмечали снижение уровня МДА и повышение концентрации токоферола по сравнению с показателями при острой патологии, а у мужчин, напротив, наблюдали увеличение количества МДА (р<0,05) и снижение (р<0,05) уровня витамина Е.

4. Эпидемиологический и лабораторный мониторинга, изучение эффективности основных методов диагностики трихомониаза с учётом тендера позволяют рекомендовать при разработке алгоритмов диагностических мероприятий у мужчин преимущественно использовать ИФА (чувствительность -57,6%, специфичность - 100,0%) и молекулярно-генетические методы диагностики (чувствительность - 86,9%, специфичность - 97,6%), а у женщин - микроскопию (чувствительность - 94,1%, специфичность - 90,0%) и культуральный метод (чувствительность - 94,3%, специфичность - 99,6%).

5. В эксперименте по изучению морфо-физиологических особенностей клинических изолятов этиологического объекта - Trichomonas vaginalis,

полученных от пациентов мужского и женского полов при различных формах течения патологии в условиях стационарного и проточного культивирования доказано, что темпы роста трихомонад, полученных от пациенток, были достоверно выше (р<0,05) - максимальное значение роста на 6±0,52 сутки, чем при культивировании трихомонад, полученных от больных мужчин - максимальное значение роста на 11±1,21 сутки. При культивировании клинических изолятов, полученных от больных различного тендера с хроническим течением трихомониаза, достоверных различий в динамике накопления T.vaginalis отмечено не было.

Установленные в экспериментах различия в интенсивности роста трихомонад, полученных от пациентов различного тендера при остром трихомониазе, свидетельствовали о том, что макроорганизм может оказывать специфическое, модифицирующее действие на биологию простейшего. При хроническом течении заболевания паразит адаптируется к условиям существования, и его модификации исчезают.

6. Экспериментальные исследования in vitro показали, что резистентные популяции урогенитальной трихомонады формируются из клинических изолятов, полученных от пациентов только мужского пола. Одним из механизмов формирования резистентности к препаратам 5-НИ ряда является уменьшение проницаемости цитоплазматической мембраны простейшего. Установленный факт резистентности носил временный характер, что свойственно Trichomonas vaginalis, которая обладает модификационной изменчивостью.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. При эпидемиологических исследованиях трихомониаза рекомендуется учитывать социально-экономическую очаговость, обусловленную тендерной стратификацией.

2. Лабораторную диагностику урогенитального трихомониаза рекомендуется направить на оптимизацию алгоритма методологических приёмов выявления возбудителя у пациентов различного тендера.

3. При разработке новых противопротозойных препаратов и создании схем лечения целесообразно дифференцировать тендерные реакции на специфическую терапию возбудителя.

4. Для повышения эффективности диагностики и ведения больных трихомониазом рекомендуется определение показателей оксидант/антиоксидантной и иммунной систем с учетом тендерной принадлежности.

СПИСОК НАУЧНЫХ РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Использование простейших в качестве тест-объектов по изучению модифицирующего и мутагенного действия электромагнитных излучений различного диапазона/ Д.А. Горчаков, И.Н. Луцевич, B.C. Софьин, A.B. Кобзева И Научно-методические и законодательные основы обеспечения генетической безопасности факторов и объектов окружающей и производственной

среды в целях сохранения здоровья человека: Материалы объединённого Пленума Научных советов Российской Федерации по экологии человека и охране окружающей среды и по медико-экологическим проблемам здоровья работающих. М„ 2010.- С.104-105.

2. Луцевич И.Н., Горчаков Д.А., Софьин B.C. Роль гигиенического воспитания населения в профилактике инфекций, передаваемых половым путем// Здравоохранение Российской Федерации.- 2011.-№5. - С.41-42.

3. Социально-экономическая очаговость заболеваний при инфекциях, передаваемых половым путем / Д.А. Горчаков, И.Н. Луцевич, А.И. Завьялов, B.C. Софьин // Актуальные проблемы здоровья человека и среды его обитания: Материалы Пленума Научного совета по экологии человека и гигиене окружающей среды Российской Федерации. М., 2011.-С. 252-253.

4. Горчаков Д.А., Кобзева A.B., Софьин B.C. Мониторинг диагностических признаков Trichomonas vaginalis на проточной культуре // Тез. докл. конференции дерматологов и косметологов Приволжского Федерального округа,- Казань, 2011.-С.37-38.

5. Модификационная изменчивость простейших как причина появления атипичных форм Trichomonas vaginalis / Д.А. Горчаков, И.Н. Луцевич, A.B. Кобзева, B.C. Софьин // Тез. докл. 2-го Континентального Конгресса дерматологов МОД.-СПб., 2011,- С.213-214.

6. Горчаков Д.А., Володько В.Р., Софьина A.B. Изучение формирования лекарственной резистентности урогенитальной трихомонады в условиях проточного культивирования // Труды Международного форума по проблемам науки, техники и образования / Под ред. В.А. Малинникова, В.В. Вишневского,-М., 2012.-С.122-123.

7. Изучение социально-экономической очаговости заболеваемости инфекциями, передаваемыми половым путем / Д.А.Горчаков, И.Н. Луцевич, О. В. Музалевская [и др.] // Современные проблемы науки и образования,-2012.- №2; URL: www.science-education.ru/102-5652 (дата обращения: 10.12.2012).

8. Лекарственная устойчивость TRICHOMONAS VAGINALIS как проявление наследуемой модификационной изменчивости у простейших / Д.А. Горчаков, И.Н. Луцевич, A.B. Софьина, B.C. Софьин // Фундаментальные исследования. - 2012. - № 12 (часть 1). - С. 40-43.

9. Горчаков Д.А., Луцевич И.Н. Тендерные особенности иммунного статуса и оксидант/антиоксидантной системы при трихомонадной инвазии // Современные проблемы науки и образования. — 2013. — № 3; URL: www.science-education.ru/109-9285 (дата обращения: 07.06.2013).

10. Тендерные аспекты эпидемиологии и лабораторной диагностики урогенитального трихомониаза (обзор) / Д.А. Горчаков, И.Н. Луцевич, B.C. Софьин, С.И. Луцевич// Саратовский научно-медицинский журнал. - 2013. -Том 9. - №4. - С. 663-667.

11. Урогенитальный трихомониаз: История, медико-биологические и социальные аспекты/ Д.А. Горчаков, А.И. Завьялов, И.Н. Луцевич [и др.]; под ред. С.Р.Утца. -Саратов: Изд-во СГМУ, 2014. - 167 с.

ИЗОБРЕТЕНИЯ

1. Модель мужского урологического тракта для проточного культивирования патогенных микроорганизмов: пат. № 126703 Рос. Федерация. № 2012150072; заявл. 23.11.2012 г.; опубл. 10.04.2013 г. Бюл. № 4.

СПИСОК ПРИНЯТЫХ СОКРАЩЕНИЙ

АКМ —активные кислородные метаболиты АО — антиоксидантная защита АОК - антиоксидантный коэффициент ВИЧ — вирус иммунодефицита человека ВОЗ — Всемирная организация здравоохранения ДГПЖ — доброкачественная гиперплазия предстательной железы ДМЕМ - модифицированная по способу Дульбекко питательная среда Игла ДНК — дезоксирибонуклеиновая кислота ИППП - инфекции, передаваемые половым путем ИФА — метод иммуноферментного анализа МДА — малоновый диальдегид НСТ - нитросиний тетразолий ПОЛ — перекисное окисление липидов ПЦР - метод полимеразной цепной реакции УФ —ультрафиолет ФИ - фагоцитарный индекс 5-НИ — 5-нитроимидазол ^А - иммуноглобулины класса А - иммуноглобулины класса в 1§М - иммуноглобулины класса М СО — кластеры детерминант а-ТФ — токоферол ацетат

Подписано в печать 23.05.2014 г. О&ьем- 1 печ. л. Тираж 100. Заказ № 59. Отпечатано в типографии ООО "Новый ветер" по адресу: 410012, г. Саратов, ул. Астраханская, 79.