Автореферат и диссертация по медицине (14.00.16) на тему:Патофизиологическое обоснование местного применения комплекса фуллерена С#360#1 с N-поливинилпирролидоном при раневом процессе

На правах рукописи

тюнин

Михаил Александрович

Патофизиологическое обоснование местного применения комплекса фуллерена Сбо с 1Ч-поливинил1шрролидоном при раневом процессе

(экспериментальное исследование) 14.00.16 - патологическая физиология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Санкт-Петербург 2009

003462791

Работа выполнена в Военно-медицинской академии им. С.М. Кирова

Научный руководитель:

доктор медицинских наук профессор Попов Владислав Александрович

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук профессор Митрейкин Владимир Филиппович доктор медицинских наук профессор Николаев Валентин Николаевич

Ведущая организация:

ГОУ ВПО Санкт-Петербургская государственная педиатрическая медицинская академия

Защита диссертации состоится " 17 " марта 2009 г. в " 10 " часов на заседании диссертационного совета Д 215.002.03 при Военно-медицинской академии им. С.М. Кирова (194С44, Санкт-Петербург, ул. Академика Лебедева, дом 6)

С диссертацией можно ознакомиться в фундаментальной библиотеке Военно-медицинской академии им. С.М. Кирова (ул. Академика Лебедева,

Д. 6)

Автореферат разослан « № » февраля_2009 г.

Ученый секретарь диссертационного совета

доктор медицинских наук профессор

Анатолий Владимирович Дергунов

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность исследования. Проблема лечения ран остается одной из самых актуальных в современной медицине. Общее число больных и пострадавших с гнойно-деструктивными процессами мягких тканей и их осложнениями составляет 30-35 % (С.Г. Измайлов, 1999; И.Г. Лещенко, 2003; М.П.Толстых и соавт., 2007). Наиболее часто такие процессы наблюдаются при механической травме, в том числе, при огнестрельных ранениях, вызванных снарядами с высокой кинетической энергией, а также при термической и электротравме (В.А. Попов, 2003; Г,И. Назаренко, 2007). Данные виды патологии отличаются длительными сроками заживления ран, высокой частотой неблагоприятных исходов в виде генерализации патологического процесса, инвалидизации, стойкого ограничения трудоспособности (М.П. Толстых, 2002; Ю.К. Аба-ев, 2003).

Современные достижения в области молекулярной биологии и патофизиологии позволили более глубоко раскрыть ранее неизвестные механизмы патогенеза воспалительного и, в частности, раневого процесса (М.И.Кузин, 1990; С.Л. Вялов и соавт., 1999; А.Ш. Зайчик, 2005; П.Ф. Литвицкий, 2007; С.С. Johnstone, 2005; J. Li, 2007). Показано, что причиной нарушения регуляции заживления ран, его осложненного течения, перехода ран в разряд долго не заживающих является вторичная альтерация, в основе которой лежит нарушение баланса систем продукции активных форм кислорода и эндогенной антиоксидантной защиты (В.А. Попов, 2003; М.П. Толстых, 2002, 2004, 2007; M.J. White, 1990; A. Shukla, 1997). Образующиеся при этом свободные радикалы и перекиси на фоне нарастающего протеолиза и местного ацидоза вызывают формирование вторичных некрозов и приводят к увеличению объема повреждения (В.В. Воробьев, 1995; Г.Н. Берченко.. 1997; В.В. Михайлов, 2001; В.А. Попов, 2003; М.П. Толстых, 2004, S.L. Edwards, 2006). В связи с этим перспективным и патогенетически обоснованным направлением местного медикаментозного лечения ран различной этиологии считается совместное применение анти-оксидантов с антибактериальными, некролитическими, антиферментными и другими препаратами, которые за счет синергетического действия на основные звенья раневого процесса способны предупредить его осложненное течение и сократить сроки заживления: ран (М.П. Толстых, 2002; С.Р. Никитин, 2004; Л.И. Вардаев, 2005). Такое комплексное медикаментозное воздействие на раневой процесс достигается использованием раневых покрытий, мазевых и гидрогелевых композиций, физико-химические свойства которых позволяют совместить в одной лекарственной форме различные комбинации фармакологически активных веществ и, создавая их депо в раневой полости, обеспечивать длительный лечебный эффект (Г.И. Назаренко, 2002; А.И. Гусейнов, 2006).

В то же время, несмотря на большое количество известных химических соединений, обладающих способностью ингибировать свободноради-

; с*,./

кальные процессы, арсенал эффективных антиоксидантных средств для местного лечения ран не велик (Б.А. Парамонов и соавт., 2002). Это связано с тем, что часть известных широко используемых препаратов являются жирорастворимыми веществами, что резко ограничивает возможность их применения в первой фазе раневою процесса (A.C. Рожков, 1994; Б.М. Да-ценко, 1995; Г.И. Назаренко, 2002). Поэтому актуальной задачей современной медицинскрй науки является поиск новых химических соединений, сочетающих в себе выраженную антиоксидантную активность и способность растворяться в полярных растворителях.

В данных условиях обращают на себя внимание сообщения о биологических свойствах наночастиц, а именно фуллерена С6о- Проведенные рядом авторов исследования позволяют утверждать, что в связи с уникальными химическими и физическими свойствами производные фуллерена C«) являются перспективным материалом для создания высокотехнологичных медицинских материалов и лекарственных препаратов (Л.Б. Пиотровский, 2006; S. Bosi, 2003). Установлено, что производные фуллерена С6о проявляют антиоксидантную, мембранотропную, иммунотропную, противовирусную, фотодинамическую активность, способны инактивировать ферменты (A.W. Jensen, 1996; M. Satoh, 2006). Экспериментально показано стимулирующие влияние фуллеренсодержащих мазевых композиций на основе вазелина на процессы посправматической регенерации кожных ран (Л.А.Крылова, 2003).

Однако неспособность фуллеренов растворяться в полярных растворителях затрудняет исследование их репаративных свойств и создание современных эффективных средств лечения ран на их основе (R.S. Ruoff, 1993; M. Beck, 1997; S. Deguchi, 2001). Кроме того, остается открытым вопрос токсикологии производных фуллерена С60- Ряд авторов отмечают отсутствие как острого, так и хронического токсического действия фуллеренов на организм при различных способах введения (Л.Б. Пиотровский, 2006; F. Moussa, 2005; Т. Mori, 2006). Другие, наоборот, в своих работах указывают на выраженные токсические эффекты фуллеренов на клетки кожи человека и головного мозга рыб (Е. Oberdörster, 2004; С.М. Sayes, 2004). Не менее важными являются сообщения о возможности накопления фуллеренов в тканях печени и селезенки при внутривенном введении (R. Bullard-Dillard, 1996). Несмотря на то, что авторы этих исследований отрицают возможность включения фуллеренов в процессы метаболизма, последствия депонирования их во внутренних органах требуют дополнительных исследований.

С учетом возможной перспективы использования фуллеренов в качестве антиоксидантов отмеченные обстоятельства определяют актуальность исследования биологических свойств водорастворимого комплекса фуллерена Сбо с N-поливинилпирролидоном (ПВП), а именно, изучение его антиоксидантных и общерезорбтивных свойств, влияния на течение раневого процесса.

Цель исследования: патофизиологическое обоснование местного применения -комплекса фуллерена С«> с N-поливинилпирролидоном (Сб(/ПВП) при раневом процессе и разработка на его основе биоактивного раневого покрытия для лечения ран различной этиологии.

Задачи исследования:

Для достижения поставленной цели были определены следующие задачи:

1. Изучить антиоксидантные свойства водных растворов комплекса фуллерена С6о/ПВП;

2. Исследовать морфофункциональные изменения в тканях внутренних органов и динамику биохимических показателей крови при парентеральном введении комплекса Сбо/ПВП;

3. Изучить влияние комплекса Сда/ПВП на течение раневого процесса;

4. Разработать биоактивное фуллеренсодержащее губчатое раневое покрытие для лечения ран различной этиологии, способное оказывать комплексное воздействие на раневой процесс - как в первой, так и во второй его стадиях, и экспериментально изучить его эффективность на моделях условно асептических кожно-плоскостных ран и гранулирующих ран после глубоких ожогов.

Научная новизна.

Путем определения антирадикальной активности и сулероксидпро-дуцирующей активности тканевых макрофагов исследованы антиоксидантные свойства комплекса Сбо/ПВП.

Исследование общерезорбтивных свойств комплекса С6с/ПВП показало, что морфологические изменения в тканях внутренних органов, влияние на активность мембранных ферментов связаны с негативным действием N-поливинилпирролидона. Установлено, что фуллерен Cf,o в составе комплекса проявляет цитопротективную активность, уменьшая отрицательное действие ПВП.

Выявлено стимулирующее влияние комплекса Сбо/ПВП на течение раневого процесса.

Разработано биоактивное фуллеренсодержащее губчатое раневое покрытие, обладающее высокой сорбционной, антисептической, антиокси-дантной, антиферментной активностью й способное оказывать комплексное воздействие на основные звенья патогенеза раневого процесса как в первой, так и во второй его стадиях (приоритетная справка №2007119822 от 28.05.07). Экспериментально установлена эффективность местного применения биоактивного фуллеренсодержащего губчатого раневого покрытия при лечении условно асептических кожно-плоскостных ран и гранулирующих ран после глубоких ожогов.

Теоретическая и практическая ценность.

Установленные антирадикальная активность и влияние на суперок-сиданионпродуцирующую активность тканевых макрофагов обуславливают целесообразность применения комплекса С «/ПВП в качестве антиок-сидантного препарата.

Выявленные морфологические и биохимические изменения при парентеральном введении Свс/ПВП подтверждают данные о негативном действии ПВП и свидетельствуют о цнтопротективной активности фуллере-наС«,.

Результаты исследования антиоксидантной активности, влияния на раневой процесс комплекса Сбо/ПВП позволяют патогенетически обосновать возможность его местного применения при лечении ран различной этиологии.

Разработанное биоактивное фуллеренсодержащее раневое покрытие на основе желатиновой губки, обладающее высокой сорбционной, антиоксидантной, антисептической и антиферментной активностью, способствует оптимизации раневого процесса при лечении неинфицированных ран и гранулирующих ран после глубоких ожогов и сокращает сроки их заживления. Раневое покрытие показано для местного лечения неинфицированных и инфицированных ран, том числе гнойных, огнестрельных и длительно не заживающих, термических ожогов За степени, гранулирующих ран после глубоких ожогов, трофических язв и пролежней.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Фуллерен С6о в составе комплекса с Ы-поливинилпирролидоном проявляет антиоксидантную активность, которая имеет максимальные значения в водных растворах с 3-6 % содержанием Сб</ПВП.

2. Парентеральное введение комплекса С6</ПВП вызывает во внутренних органах дистрофические явления, нарушения микроциркуляции и реакцию со стороны тканевых макрофагов (набухание, образование гиган-токлеточных гранулем типа инородных тел), особенно в селезенке, печени и миокарде. Указанные изменения связаны с действием ]№• поливинилпирролидона. Фуллерен С® в составе комплекса С6(/ПВП снижает негативное действие ПВП.

3. Водорастворимый комплекс Сб(/ПВП оказывает стимулирующее влияние на течение раневого процесса. Усиление репаративных процессов под действием комплекса происходит в первой фазе раневого процесса и сокращает срок заживления неинфицированных ран.

4. Биоактивное фуллеренсодержащее губчатое раневое покрытие с иммобилизованными в его составе комплексом Сбо/ПВП, антисептическим (диоксидин) и антиферментным (Е-аминокапроновая кислота) препаратами является эффективным средством местного лечения неинфицированных ран и гранулирующих ран после глубоких ожогов. Его применение предупреждает осложненное течение раневого процесса и сокращает сроки заживления ран на 20 %.

Реализация работы. По теме исследования опубликовано 16 печатных работ. Подана заявка для получения патента на изобретение: "Губчатый биоактивный препарат для местного лечения ран" (приоритетная справка №2007119822 от 28.05.2007). Получен патент на полезную модель: «Гидро-гелевое лечебное покрытие» (патент № 73198 от 09.01.2008). Зарегистрировано 12 рационализаторских .предложений. Результаты исследований внедрены в учебный процесс кафедры патологической физиологии ВМедА.

Апробация работы. Основные положения диссертационного исследования представлены в докладах на итоговых научных конференциях курсантов и слушателей ВМедА (2005, 20Об, 2007, 2008), на 1-й Международной научно-практической конференции "Современные полимерные материалы в медицине и медицинской технике" (Санкт-Петербург, 2005), в работе Российской школы-конференции молодых ученых и преподавателей «Биосовместимые наноструктурные материалы и покрытия медицинского назначения» (Белгород, 2006), на Международной выставке-конгрессе по развитию и исследованию нанотехнологий и наноматериалов в Санкт-Петербурге и Северо-Западном ФО (Санкт-Петербург, 2008), на Экофоруме «Окружающая среда и здоровье» (Санкт-Петербург, 2008).

Результаты работы представлены в постерных докладах на Международных Салонах промышленной собственности «Архимед» в 2005 и в 2007 гг., 10-й Международной выставке-конгрессе РЕСТЕК "Высокие технологии. Инновации. Инвестиции" (Санкт-Петербург, 2005), 7-й Международной специализированной выставке "Экспо-Химия" (Санкт-Петербург, 2005) и на 36-м Международном конгрессе по военной медицине (Санкт-Петербург, 2005), на 8-ом Международном конгрессе «Фуллерены и атомные кластеры» (Санкт-Петербург, 2007).

Объем и структура диссертации. Материалы диссертационного исследования изложены на 141 странице машинописного текста. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, 4 глав собственных лабораторных и экспериментальных исследований, выполненных на 30 кроликах и 160 крысах, заключения, выводов, практических рекомендаций, списка литературы и приложения. Работа содержит 31 рисунок и 13 таблиц. Список литературы включает 195 источников, из них 89 отечественных и 106 иностранных авторов.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Материалы и методы исследования

Для решения поставленных задач в работе проведены лабораторные, экспериментальные, биохимические и морфологические исследования.

Лабораторные исследования. В лабораторных условиях на базе кафедры синтетических каучуков и элементоорганических соединений СПб Технологического института и Отдела нейрофармакологии Института экспериментальной медицины РАМН проведена разработка биоактивного фуллер гнсодержащего губчатого раневого покрытия для местного лечения ран, исследовано влияние фуллерена Сбо в составе комплекса с N-поливинилпирролидона на физические свойства имплантатов на основе водорастворимых полимеров - ПВС(поливиниловый спирт)-желатиновых и ПВС-коллагеновых пластин.

Биоактивное фуллеренсодержащее губчатое раневое покрытие для местного лечения ран изготавливали на основе желатиновой губки, в составе которой, помимо комплекса С60/ПВП, были иммобилизованы антибактериальный препарат - диоксидин, антиферментный и гемостатический препарат - Е-аминокапроновая кислота, пенообразователь - сульфанол, дубящий компонент - глутаровый альдегид.

Губчатый препарат получали методом механического диспергирования воздуха в исходный раствор в течение 10 мин с помощью аппарата-мешалки (скорость 2000 оборотов в мин). Полученную вязкую пену с кратностью, равной 4 (отношение конечного к исходному объему) разливали в полиэтиленовые формы и подвергали лиофильной сушке в течение суток в аппарате "LabConco". После высушивания происходило образование мелкоячеистой плотно-эластичной и упругой губки. Определены ее адсорбционная способность, плотность и набухаемость.

Губчатый фуллеренсодержащий препарат упаковывали в двойную полиэтиленовую упаковку и стерилизовали гамма-облучением (ГОСТ ИСО 11737-2-2003 - 2,5 Мрад, ОАО "Медполимер", Санкт-Петербург).

Изменение физических свойств имплантатов на основе водорастворимых полимеров - ПВС-желатиновых и ПВС-коллагеновых пластин под действием фуллерена С60 в составе комплекса с N-поливинилпирролидона оценивали путём измерения показателей прочности на разрыв и эластичности на машине РМИ-5. Всего проведено более 200 лабораторных опытов.

Экспериментальные исследования. Общее количество животных, использованных в экспериментальной части работы составило 30 кроликов породы шиншилла весом 3-4 кг и 160 крыс-самок линии Вистар весом 180200 г. Содержание экспериментов на животных представлено на таблице 1. Эксперименты на кроликах производили под местной инфильтрационной анестезией 0,5 % раствором новокаина. Эксперименты на крысах выполняли под эфирным наркозом (полуоткрытый контур). Кроликов выводили из

опыта с помощью передозировки эфирного наркоза, крыс - путем декапи-тадии.

Таблица 1 - Экспериментальные исследования, выполненные в работе

Цель исследования и характер оперативного вмешательства Количество животных

Влияние комплекса Сб(/ПВП на супероксиданион-продуцирующую активность тканевых макрофагов 20 крыс

Морфофункциональные изменения в тканях внутренних органов при парентеральном введении комплекса СбоЯТВП: - внутрибрюшинное введение - внутривенное 70 крыс 15 кроликов

Влияние комплекса фуллерена Сбс/ПВП на процессы посттравмагической регенерации на модели условно асептических кожно-плоскостных ран 20 крыс

Эффективность биоактивного фуллеренсодержащего губчатого раневого покрытия при местном лечении: - условно асептических кожно-плоскостных ран - гранулирующих ран после глубоких ожогов 50 крыс 15 кроликов

После операций животные находились под динамическим наблюдением в условиях вивария. Содержание животных осуществляли в соответствии с «Правилами проведения научных исследований с использованием экспериментальных животных» (Распоряжение Президиума АН СССР № 120002496 от 02.04.80 г.) и с приказом МО РФ от 19 июня 2003 г. № 267 «Об утверждении правил лабораторной практики». Результаты экспериментов оценивали по клиническому течению послеоперационного периода (активность, поведение, отношение к пище, мочеотделение, состояние послеоперационной раны).

Изучение влияния комплекса фуллерена Сбс/ПВП на течение раневого процесса проведено на модели кожно-плоскостных условно асептических ран спины крыс. В исследовании использовали комплекс СбоДТВП в виде крупнодисперсного порошка с содержанием Сбо 0,5 %. Для воспроизведения модели у крыс под эфирным наркозом выстригали шерсть в проекции будущей раны и по трафарету до фасции иссекали квадратный участок кожи размером 2,0 х 2,0 см. Рану осушали, осуществляли гемостаз и обрабатывали антисептиком. Животные были разделены на 2 группы (по 10 в каждой). Крысам 1 группы проводили аппликацию на раны мелкодисперсного порошка комплекса С6<уТ1ВП. У животных 2 группы (контроль) раны покрывали мелкодисперсным порошком ПВП (препарат «Знтеро-дез»). Критериями эффективности служили скорость, срок полного заживления и гистоморфологическая картина ран на 7,10,14 и 21 сутки.

Исследование эффективности губчатого биоактивного фуллеренсо-держащего раневого покрытия с разной концентрацией фуллерена (0,05 %, 0,1% и 0,5 %) проведено на модели кожно-плоскостных условно асептических ран (50 крыс). Животные были разделены на 5 групп по 10 в каждой. Для воспроизведения модели кожно-плоскостной раны животным под эфирным наркозом по трафарету иссекали квадратный участок кожи до фасции размером 1,0 х 1,0 см. Раны обрабатывали 3 % раствором перекиси водорода. В качестве контроля служили раны, заживление которых происходило без лечения. В опытных группах на раны наносили соответствующие раневые покрытия. Фиксацию раневых покрытий осуществляли наложением контурной марлевой асептической повязкой. Перевязки выполняли через день.

Исследование эффективности фуллеренсодержащего губчатого раневого покрытия с 0,05 % содержанием С60 при лечении гранулирующих ран после глубоких ожогов выполнены на 15 кроликах. Глубокий ожог моделировали специальным устройством. В качестве обжигающей поверхности использовали медную пластину размером 2,0 х 2,0 см с температурой нагрева 180°С. Ожог наносили контактным способом в течение 10 сек. Через сутки под местной анестезией выполняли некрэктомию ожогового струпа, обработку раны 3 % раствором перекиси водорода, аппликацию раневого покрытия и его фиксацию с помощью асептической повязки.

Критериями эффективности служили скорость заживления ран, сроки полного заживления и гистоморфологическая картина ран на 7, 10, 14 и 21 сутки.

Скорость заживления ран оценивали планиметрическим методом по Л.Н. Поповой. При контрольных измерениях на рану накладывали стерильную пленку целлофана и на нее наносили контуры раны. Рисунок переносили на миллиметровую бумагу и подсчитывали площадь. Уменьшение площади раневой поверхности в процентном отношении к начальным размерам раны определяли по формуле (8=(8-8п) х 100/8), где Бп - величина площади раны при данном измерении, К - начальная площадь раны. Скорость заживления определяли по формуле (У= 81-52/ Т), где 81 -уменьшение площади раневой поверхности в процентах при предшествующем измерении, в2 - уменьшение площади раневой поверхности в процентах при данном измерении, Т - число дней между измерениями.

Биохимические исследования. Антирадикальную активность водного раствора комплекса фуллерена Сбо/ПВП исследовали методом определения антирадикальной активности с использованием ДФПГ (1,1-дифенил-2-пикрилгидразила) (А.В. Арутюнян и соавт., 2002).

Супероксидпродуцирутощую способность тканевых макрофагов методом биохемилюминесценции (БХЛ) исследовали на базе кафедры нормальной физиологии ВМедА им. С.М. Кирова совместно с Е.В. Антоненковой. Путем регистрации спонтанной БХЛ клеток определяли уровень продукции фагоцитами реактивных форм кислорода, прежде всего, супероксидного анион-радикала ((V) (Ю.А. Владимиров, М.П.

Шерстнев, 1989; Б.Т. Величковский, 2003). В эксперименте использовали альвеолярные и перитонеальные макрофаги. По интенсивности наработки О2' можно оценить степень активности клетки и ее функциональный потенциал при применении препарата. Биохемилюминесценцшо регистрировали на приборе «Хемилюм-1» (Россия) с кюветой, термостатируемой при 37 ± 0,5 С и мешалкой. Для усиления биохемилюминесценции макрофагов применяли люцигенин [Бис(Ы-метилакридиний)] («Sigma»), обладающий свойством окисляться под влиянием кислородных метаболитов и генерировать квант света, что существенно повышает уровень и чувствительность реакции.

При выделении макрофагов использовали раствор Хенкса (рН 7,4). После предварительного прогрева хемилюминометра при 37°С в течение 1 часа в измерительную пластиковую одноразовую кювету вносили 0,2 мл суспензии макрофагов, содержащей 107 клеток, 0,1 мл раствора люцигени-на (ЮОмкМ/л) и 0,1 мл физиологического раствора с соответствующими дозами тестируемых препаратов (в контроле - ОД мл физиологического раствора). Время инкубации составляло 20 мин.

Уровень спонтанной БХЛ измеряли в течение 5 мин при постоянном перемешивании. После графической регистрации результатов на компьютере с помощью оригинальной программы вычисляли интенсивность БХЛ (интегральный показатель) и по высоте пика полученных кривых БХЛ отмечали величину максимума интенсивности свечения. Показатели спонтанной БХЛ в контрольной группе (макрофаги + физиологический раствор) принимали за 100 %, а показатели БХЛ, полученные в опытных группах (макрофаги + препарат), рассчитывали в процентах от контроля.

При исследовании морфофункциональных изменений в тканях внутренних органов при различных вариантах парентерального введения СбоЛТВП проводили следующее биохимические исследования. При внут-рибрюшинном способе введения определяли показатели активности мембранных ферментов - сахаразы, мальтазы, аминопептидазы М, щелочной фосфатазы, глицил-Ь-лейциндипептидазы, и содержание общего белка в слизистой тощей кишки и в тканях печени и почки. При внутривенном варианте введения регистрирован уровень следующих биохимических показателей сыворотки крови: креатинин, глюкоза, общей белок, аланинами-нотрансфераза (АЛТ), аепартатаминотрансфераза (ACT), гамма-глутаматтранспептидаза (ГТТП).

Исследование активности мембранных ферментов проведено на базе Лаборатории физиологии питания Института физиологии им. И.П. Павлова РАН. Экспериментальные животные были разделены на 7 групп по 5 крыс в каждой. Крысы 1-й группы являлись интактными и служили контролем. Крысам 2, 3 и 4 групп внутрибрюшинно соответственно вводили по 1 мл 10 % водного раствора ПВП, 10 % водного раствора комплекса Сбо /ПВП и 25 % водного раствора комплекса С6о /ПВП. Животных 2-4 групп выводили из опыта на 3 сутки после введения препаратов. Крысам 5, 6 и 7 групп вводили те же препараты и выводили из опыта на 7 сутки. Актив-

ность сахаразы определяли модифицированным методом Нельсона (А.М. Уголев, 1969), мальтазы - глгокозооксидазным методом (A. Dahlqvist, 1964), аминопептидазы M - методом Фарра (W. Farr, 1968), щелочной фос-фатазы - с использованием в качестве субстрата р-нитрофенилфс>сфата натрия, дипептидазы - по приросту глицина (А.М. Уголев, 1969), содержание белка - по методу Лоури (О.Н. Lowiy, 1951). Активность ферментов определяли в мкмолях продуктов гидролиза, образующихся за 1 мин., в расчете на 1 г ткани.

Морфологические исследования. Морфологические методы использовали при исследовании морфофункциональных изменений в тканях внутренних органов при различных вариантах парентерального введения комплекса Сб(Д1ВП, при исследовании влияния комплекса на течение раневого процесса и при исследовании эффективности биоактивного фулле-ренсодержащего губчатого раневого покрытия при лечении условно асептических ран и гранулирующих ран после глубоких ожогов.

Для оценки гистоморфологических изменений при парентеральном введении Сбо/ПВП у всех животных после выведения из опыта производили забор тканей головного мозга, миокарда, легких, печени, селезенки и почек. Для исследования гистоморфологической картины ран забор материала проводили в различных топографических зонах, как по горизонтали, так и по вертикали. Морфологический материал фиксировали в 10 % нейтральном формалине, обезвоживали в спиртах, заключали в парафин, серийные срезы окрашивали гематоксилин-эозином и изучали методом световой микроскопии.

Методы статистической обработки данных. Все результаты исследований были подвергнуты статистической обработке (В.И. Юнкеров, 2002). Статистическую значимость различий в сравниваемых выборках оценивали при помощи t-критерия Стьюдента и критерия Фишера, статистически достоверными считали различия при р<0,05 (Г.Г. Автадинов, 1990).

Накопление базы данных и её информационно-аналитическую переработку, вычислительные операции и графическое изображение результатов исследований осуществляли на Pentium с использованием электронных таблиц Microsoft Excel 2003 для Windows ХР.

Результаты исследования и их обсуждение

Антиоксидантные свойства комплекса фуллерена Сбо с N-поливи-нилпирролидоном. Известно, что фуллерен Сбо проявляет антиоксидант-ную активность, которая обуславливает его нейропротективные, гепато-протективные и радиопротективные свойства (Л.Б. Пиотровский, 2006; H.S. Lin, 2001; S. Bosi, 2003). Выраженность перечисленных свойств у различных производных фуллерена Сбо может варьироваться в широком диапазоне или вообще отсутствовать. Наиболее изученными по отношению антиоксидантных свойств являются химически модифицированные производные фуллерена и его коллоидные растворы. Об антиоксидантной

активности исследуемого комплекса С6о/ПВП в литературе не сообщается. В связи с этим для обоснования механизма стимулирующего влияния на репаративные процессы нами были исследованы антиоксидантные свойства комплекса Сбо/ПВП путем определения антирадикалыюй активности и влияния на супероксидпродуцирующую активность тканевых макрофагов.

С целью определения антирадикальной активности были исследованы водные растворы С«)/ПВП с 0,01 %, 0,02 % и 0,03 % концентрацией С6о- В результате было установлено, что комплекс С60/ПВП обладает ан-тиоксидангной активностью, которая возрастает пропорционально увеличению его концентрации в растворе (таблица 2). Так, антирадикальная активность раствора с 0,01 % содержанием фуллерена Qo составила 1,35 ±0,04 ммоль/л, в растворах с концентрацией Сбо 0,02 % и 0,03 % - 1,46±0,07 ммоль/л и 1,84+0,03 ммоль/л соответственно. Показатель активности в контрольной группе, где исследовали 0,03 % раствор поливинилпирролидона, составил 0,91±0,05 ммоль/л.

Таблица 2- Антирадикальная активность комплекса фуллерена С «/ПВП

Концентрация растворов, % Комплекс фуллерен С6о/ПВП Контроль (ПВП)

0,01 % 0,02 % 0,03 %

Антирадикальная: активность, ммоль/л 1,35 ±0,04* 1,4610,07* 1,84*0,03* 0,91±0,05

Примечание: * - различия с показателем соответствующего раствора ПВП достоверны при р<0,05.

Для определения влияния С6(/ПВП на супероксидпродуцирующую активность альвеолярных и перитонеальных макрофагов были исследованы водные растворы комплекга С60/ПВП и ПВП, каждый в концентрации 1,5%, 3%, 6,5%, 12,5% и 25%. Для растворов, содержащих комплекс С60/ПВП, это соответствовало 0,0075 %, 0,015 %, 0,03 %, 0,06 % и 0,125 % содержанию фуллерена Сбо. В результате эксперимента было установлено, что супероксидпродуцирующая активность перитонеальных макрофагов (рисунок 1) под влиянием растворов ПВП составила 185,6±0,7 при 1,5 % содержании ПВП; 247,8±0,5 в 3 % растворе, 510,2+1,1 при 6,5 % концентрации ПВП, 306,4+0,7 и 6,4+0,5 при 12,5 % и 25 % концентрации ПВП соответственно. В растворах комплекса СбУПВП супероксидпродуцирующая активность перитонеальных макрофагов составила 173,7+1,2 при 1,5 % содержании С60/ПВП; 76,4±0,8 при 3%, 213,9±1/7 при 6,5%, 290,2±0,б и 9,9+0,2 при 12,5 % и 25 % содержании соответственно. Анализ полученных результатов показал, что фуллерен Сбо в растворах проявляет антиок-сидантный эффект и снижает активность макрофагов в растворах с 1,5 % содержанием - на 6,4 % (в 1,1. раз); с 3 % содержанием - на 69,2 % (в 3,2 раза); с 6,5 % содержанием - на 58,2 % (в 2,4 раза); с 12,5 % содержанием

Рисунок 1 - Супероксидпродуцирующая активность перитонеальных макрофагов (Ц- раствор ПВП, 11 - раствор С60/ПВП). По оси абсцисс концентрация препаратов в %, в скобках содержание фуллерсна С<ю в %.

Рисунок 2 - Супероксидпродуцирующая активность альвеолярных макрофагов (Ц- раствор ПВП, ® - раствор С60/ПВП). По оси абсцисс концентрация препаратов в %, в скобках содержание фуллерена С6о в%.

- на 5,3 % (в 1,05 раза). Максимальное снижение показателей активности зарегистрировано в 3% растворе комплекса Сбо/ПВП, что соответствует 0,015 % содержанию фуллерена Ceo- В растворах, с 25 % содержанием образцов значения активности были минимальными, что объясняется отсутствием биохемилюминесценции, свидетельствующей, на наш взгляд, о гибели макрофагов под влиянием исследуемых препаратов.

Супероксидпроцуцирующая активность альвеолярных макрофагов (рисунок 2) в растворах ПВП составила 117,3+0,9 при 1,5 %, 256,9±1,1 при 3 %, 238,7±0,7 при 6,5 % содержании ПВП, !73,9±0,9 и 1,3±0,1 при 12,5 % и 25 % содержании ПВП соответственно. В растворах комплекса С№/ПВП супероксидпродуцирующая активность альвеолярных макрофагов составила 112,2+2,1 при 1,5% содержании С60/ПВП, 166,5+0,8 при 3 %, 187,4+1,2 при 6,5 %, 188,9+0,6 и 1,9±0,2 при 12,5 % и 25 % содержании соответственно. Сравнительный анализ полученных результатов показал, что фуллерен Ссо в растворах с 1,5 % и 12,5 % содержанием растворенных веществ не изменяет активность альвеолярных макрофагов. В 3 % и 6,5 % растворах присутствие фуллерена С«> вызывает снижение супероксидпро-дуцирующей активности на 35,2 % (в 1,5 раза) и на 21,5 % (в 1,3 раза) соответственно. Минимальное значение показателей активности зарегистрировано в 1,5 % растворе комплекса Сбо/ПВП. В 25 % растворах значения активности были также минимальными, что, на наш взгляд, объясняется, как и в случае с перитонеальными макрофагами, их гибелью под влиянием исследуемых препаратов. Низкие показатели супероксидпродуцирующей активности тканевых макрофагов и отсутствие ее изменений под влиянием фуллерена Сбо в растворах с 1,5 % содержанием исследуемых препаратов

объясняется, во-первых, малым содержанием ПВП, который, сам по себе, является сильным индуктором фагоцитоза и синтеза активных форм кислорода макрофагами, и во-вторых, малым количеством фуллерена С<ю, содержание которого в данных растворах составляет 0,0075 %.

Таким образом, исследование антиоксидантных свойств С60Я1ВП показало, что фуллерен С6о в составе комплекса проявляет антиоксидантную активность, которая максимальна в растворах с его содержанием от 0,015 до 0,03 %. Полученные данные свидетельствуют об обоснованности местного применения комплекса С60/ПВП в качестве антиоксиданта для коррекции процессов вторичной альтерации и обуславливают целесообразность экспериментального исследования его влияния на течение раневого процесса.

Общерезорбтивное действие комплекса Ся/ПВП. Общерезор-бтивные свойства комплекса С60/ПВП исследовали при различных вариантах системного введения - внутрибрюшинном и внутривенном.

В ходе исследования проводили оценку общего состояния животных (особенности поведения, питания, двигательная активность, состояние волосяного и кожного покровов, видимых слизистых оболочек). Различное введение растворов комплекса Сво/ПВП не вызывало изменений в состоянии животных. Масса тела экспериментальных животных во всех грушах имела устойчивую положительную динамику. Потребление животными жидкости и пищи нарушено не было.

Исследование активности мембранных ферментов при внутрибрюшинном введении исследуемых растворов показало достоверное увеличение активности сахаразы и мальтазы в слизистой тонкой кишки, аминопеп-тидазы и глицил-Ь-лейциндипептидазы в печени и почке при введении 25 % раствора Сбо/ПВП (рисунок 3 и 4). У животных других опытных групп (введение 10% раствора ПВП и 10% раствора С6(/ПВП) изменения активности ферментов являлись незначительными и находились в диапа-

Рисунок 3 - Активность мальтазы в слизистой тонкой кишки в % к контролю (--

10 % р-р ПВП;----10 % р-р Сбо/ПВП; -

- - 25 % р-р Сбо/ПВП)

Рисунок 4 - Активность глицил-Ь-лей-цин-дипептидазы в ткани почки в % к контролю ( --10 % р-р ПВП;---- 10 % р-р

Сбо/ПВП;---25 % р-р С60/ПВП)

зоне нормальных значений в соответствии с данными других авторов (А.М. Уголев, 1991; A.M. Уголев и соавт., 1992).

Гистоморфологическое исследование внутренних органов как после внутрибрюшинного так и после внутривенного введения образцов выявило у животных во всех опытных группах схожие изменения, которые характеризовались формированием дистрофических явлений, нарушением микроциркуляции в виде полнокровия капилляров, переваскулярного отека, диа-педезных кровоизлияний, а также реакцией со стороны тканевых макрофагов, выражавшейся в набухании клеток, усиленном формировании гигантских многоядерных клеток и в отдельных участках появлением гиганток-леточных гранулем типа инородных тел.

В миокарде на 3 сутки наблюдали контрактурные сокращения групп кардиом:иоцитов, ядра части из них при этом были деформированы, смещены к периферии, пикноморфны, сосудистые расстройства проявлялись незначительным отеком межуточной ткани, полнокровием капилляров и геморрагиями (рисунок 5). Для ткани головного мозга было характерно расширение перивазальных и перицеллюлярных пространств, набухание нейропиля, нейронофагия отдельных нейронов. В селезенке на 3 сутки в красной и белой пульпе отмечено скопление гигантских многоядерных клеток (ГМК) типа инородных тел преимущественно периартериально и в маргинальной зоне фолликулов. В цитоплазме ГМК были видны базо-фильные глыбчатые массы с вакуолями различной формы (рисунок 6). Контуры некоторых клеток плохо прослеживались, что расценивали как проявления деструкции. В отдельных участках наблюдали формирование гигантоклеточных гранулем типа инородных тел. В почках определяли полнокровие капиллярных петель, зернистую дистрофию нефротелия. Ткань легких характеризовалась неравномерной воздушностью, в некоторых участках отмечали очаговые диапедезные кровоизлияния. В печени наблюдши нормальную архитектонику, формирование гидропической и баллонной дистрофии гепатоцитов, умеренную перипортальную лимфо-гистиоцитарная инфильтрацию (рисунок 8). В различных отделах наблюдали очаговые некрозы гепатоцитов и резкое набухание звездчатых рети-кулоэндотелиоцитов (рисунок 7). В микроциркуляторном русле определяли умеренно выраженные изменения в виде расширения синусоид и центральных вен.

Сравнительный анализ выявленных морфологических изменений показал, что наиболее выраженный характер они носили у животных, которым вводили 25% раствор С6</Г1ВП. Также было отмечено, что фулле-рен Сбо в составе комплекса СсУПВП снижает негативные проявления ПВП.

Исследование биохимических показателей плазмы крови после внутривенного введения растворов Сбо/Г1ВП и ПВП не выявило патологических изменений. Значения показателей во всех опытных группах находились в пределах нормальных значений на протяжении всего периода наблюдения.

Рисунок 5 - Диапедезные кровоизлияния (стрелка 1), разволокнение и фрагментация кардиомиоцитов (стрелка 2) в миокарде на 3 сутки после введения 10 % р-ра Сбо/ПВП. Окраска гематоксилином и эозином. Ув. х 250.

■аввжр""

Рисунок б - Гигантские многоядерные клетки в ткани селезенки на 7 сутки после введения 25 % р-ра С60/ПВП. Окраска гематоксилином и эозином. Ув. х 400.

Рисунок 7 - Набухание звездчатых рети- Рисунок 8 - Вакуольная дистрофия гепа-кулоэндотелиоцитов (указано стрелками) тоцитов и лимфо-гистиоцитарная ин-в печени на 7 сутки после введения 10% фильтрация в ткани печени через 15 суток р-ра Сбо/ПВП. Окраска гематоксилином и после в/в введения 25 % р-ра Сбо/ПВП. эозином. Ув. х 250. Окраска гематоксилином и эозином. Ув. х

400.

Таким образом, полученные данные свидетельствуют об определяющей роли К1-поливинилпирролидона в общерезорбтивных свойствах комплекса Сбо/ПВП. Выявленные морфофункциональные изменения во внутренних органах связаны с -действием Ы-поливинилпирролидона, что подтверждается данными литературы (К.А. Галахин, 2006; П.А. Самохин, 1984; Т.Т. Кио, 1984), согласно которым ПВП, являясь синтетическим полимером, плохо элиминируется из организма, вызывает выраженные расстройства кровообращения в сердце и печени в ранние сроки после введения и кумулируется в печени, костном мозге, почках, строме лёгких и сердца с локализацией в цитоплазме макрофагов, а также внеклеточно,

приводя к развитию тезаурисмозов. Степень выраженности указанных изменений носит дозозависимый характер и обусловлена количеством ПВП, что подтверждается результатами исследования активности мембранных ферментов, значимые изменения которой отмечены при введении 25 % раствора Сбс/ПВП. Установлено, что фуллерен Сбо в составе комплекса Сбо/ПВП снижает негативные проявления ПВП.

Влияние комплекса Сбо/ПВП на течение раневого процесса. Данные литературы о репаративных свойствах мазевых композиций фуллере-на Сбо на основе вазелина (Д.А. Крылова, 2003) подтверждают перспективность его использования при местном лечении ран. Однако неспособность Сбо растворяться в воде и других полярных растворителях затрудняет создание на его основе современных гидрофильных мазевых композиций и раневых покрытий. Вышеуказанные обстоятельства и результаты исследования антиоксидантных и общерезорбтивных свойств водорастворимого комплекса Сбо/ПВП определили целесообразность изучения его влияния на раневой процесс, в результате которого было установлено стимулирующее действие С6(/ПВП на его течение (рисунок 9 и 10).

Рисунок 9 - Рана на 14 сутки на фо- Рисунок 10-Ранана 14 сутки на не аппликации комплекса Сбс/ПВП фоне аппликации ПВП

Данные планиметрического исследования (таблица 3) показали, что процесс заживления условно асептических ран в опытной группе протекал быстрее в течение первых 7 дней, что по срокам соответствует первой фазе раневого процесса - фазе воспаления. Усиление репаративных процессов под действием комплекса фуллерена С6о/ПВП в ранний срок, по-видимому, связано с антиоксидантной активностью препарата, которая предотвращает повреждение клеток и тканей продуктами вторичной альтерации. При этом происходит интенсификация общего хода раневого процесса, что было подтверждено данными морфологического исследования и проявляется усилением пролиферации фибробластов, активацией синтеза коллагена и фиб-риллогенеза, образования и созревания грануляционной ткани, более быстрым рубцеванием и эпителизацией раны.

Таблица 3 - Планиметрические показатели динамики заживления ран при аппликации Г1ВП (контроль) и С60/ПВП (опыт)

Срок наблю- Контроль Опыт

дения 1 2 1 2

7 сутки 16,4±0,9 2,4±0,1 49,7±1,7* 7,1 ±0,2*

10 сутки 46,2±2,5 9,9±0,8 65,9±0,9* 5,4±0,7*

14 сутки 73,4±1,4 6,8±0,9 88,4±1,2* 5,6±0,5

21 сутки 85,7±0,7 1,8±0,2 - 1,9±0,2

Срок заживления 28,2±0,4 20,0±0,3*

Примечание: * - различия с контрольной группой достоверны при <0,05;

1 - уменьшение площади раневой поверхности в процентном отношении к начальным размерам раны;

2 - скорость заживления (°7день).

Биоактивное фуллеренсодержащее губчатое раневое покрытие. Выявленные антиоксидантные, общерезорбтивные и репаративные свойства комплекса Сбо/ПВП определили целесообразность разработки ка его основе биоактивного губчатого раневого покрытия для местного лечения ран различной этиологии. В результате проведенных лабораторных опытов было разработано биоактивное губчатое фуллеренсодержащее раневое покрытие для местного лечения ран различной этиологии (рисунок 11). В матричной основе разработанного раневого покрытия были иммобилизованы патогенетически обоснованные лекарственные препараты: антибактериальный препарат - диоксидин, антиферментный и гемостатнческий препарат - Е-аминокапроновая кислота и фуллерен С6й в составе комплекса с К-поливинилпирролидоном.

Рисунок 11 - Биоактивное губчатое фуллеренсодержащее раневое покрытие для местного лечения ран различной этиологии

Предварительно на этапе лабораторных исследований было изучено влияние фуллерена С® на физические свойства композиций на основе поливинилового спирта (ПВС), желатина и коллагена. С этой целью были изготовлены ПВС-желатиновые и ПВС-коллагеновые пластины, в состав

Таблица 4 - Влияние комплекса С6о/ПВП на физические свойства ПВС-желатиновых и ПВС-коллагеновых пластин

Образец Толщина, мм Прочность на разрыв, кг Прочность, кг/мм Эластичность, %

ПВС-желатиновая пластина 0,8 4,380 5,28 0

Фуллерен ПВС-желатиновая пластина 0,8 >5 >6,23 50

ПВС-коллагеновая пластина 0,8 3,83 4,79 0

Фуллерен ПВС-коллагеновая пластина 0,8 >5 >6,23 40

которых был включен фуллерен С6о- Физические свойства пластин оценивали с помощью измерения показателей прочности на разрыв и эластичности. Как видно из таблицы 4, введение фуллерена в состав данных полимерных композиций увеличивало показатели прочности на разрыв и эластичности.

Исследование эффективности губчатого фуллеренсодержащего раневого покрытия (ФРП) с 0,05 %, 0,1 % и 0,5 % содержанием фуллерена показало, что наиболее выраженным ранозаживляющим эффектом обладает раневое покрытие с 0,05 % содержанием фуллерена С6о (таблица 5).

Таблица 5 - Показатели планиметрического исследования ран на фоне фуллеренсодержащего раневого покрытия с разным содержанием фуллерена Сбо

Раневое покрытие Показатель Срок наблюдения Срок заживления

7 сутки 10 сутки 14 сутки

Контроль 1 34,9±1,6 62,9±1,3 71,2±0,9 20,8±0,2

2 5,0±0,2 9,3±0,8 2,1 ±0,3

РП 1 38,5±0,8 66,9±0,9* 75,2±2,7 20,2±0,5

2 5,5±0,1* 9,5±0,3 2,1±0,7

ФРГ! 0,05 % 1 65,4±1,7*/| 96,5±0,7*/f - 12,4±0,2

2 9,3±0,2*/'t 10,4±0,5 -

ФРП 0,1 % 1 46,2±0,9*/| 75,3±0,4*/f 92,4±l,2*/t 16,4±0,2

2 6,6±0,l*/f 9,7±0,3 4,3±0,3*/|

ФРП 0,5% 1 36,3±1,1 65,1±2,1 73,8±1,8 20,5±0,4

2 5,2±0,2 9,6±0,8 2,2±0,6

Примечание: * - различия с контролем достоверны при р<0,05; | - различия достоверны с РП при р<0,05;

1 - уменьшение площади раневой поверхности в процентном отношении к начальным размерам раны;

2 - скорость заживления (%/день).

Данные планиметрического исследования свидетельствуют о том, что интенсификация заживления ран на фоне применения ФРП 0,05 % и ФРП 0,1 % происходила в первые 7 суток. Так показатель скорости заживления ран в эти сроки при использовании ФРП 0,05 % и ФРП 0,1 % составил 9,3±0,2 и 6,6±0,1 соответственно, а в контрольной группе и опытных группах, где применяли раневое покрытие без включения фуллерена Сбо (РП) и ФРП 0,5 % 5,0+0,2, 5,5+0,1 и 5,2±0,2 соответственно. Показатели скорости заживления на 10 и 14 сутки во всех группах были сравнимы.

Исследование эффективности губчатого биоактивного фуллеренсо-держащего раневого покрытия при местном лечении глубоких ожогов показало, что темпы сокращения размеров ран в опытной серии заметно выше, чем в контрольной (рисунок 12). Так, под влиянием 0,05 % ФРП процент уменьшения площади раневого дефекта к исходной на 7 сутки составил - 45,7±0,9 %, на 10 сутки - 65,9+1,6 %, на 14 сутки - 90,4+0,5 %, а срок полного заживление ран - 20,0+0,5 суток. В контрольной серии, где применяли РП, эти показатели б или следующими: на 7 сутки - 17,4+2,3 %, на 10 сутки - 49,6±1,1 %, на 14 сутки - 72,8+2,1 %, на 21 сутки - 93,2±1,7 %, срок полного заживления ран составил 25,6+0,4 суток.

Рисунок 12 - Динамика уменьшения площади раневого дефекта глубоких ожогов на фоне применения фуллеренсодержащего раневого покрытия (--рП;-----ФРП)

Таким образом, разработанное фуллеренсодержащее раневое покрытие, обладая сорбционной, антибактериальной, антиферментной и антиок-сидантной активностью оказывает комплексное действие на первую стадию раневого процесса и способствует его неосложненному течению. Наиболее эффективным при местном лечении неинфицированных ран и глубоких ожогов оказалось ФРП с 0,05 % содержанием фуллерена, применение которого сокращает сроки заживления ран, в среднем, на 20 %.

ВЫВОДЫ

1. Водорастворимый комплекс фуллерена С60 с N-поливинилпирролидоном обладает антиоксидантной активностью, показатели которой максимальны в водных растворах с 3-6 % содержанием Сб(/ПВП.

2. Парентеральное введение комплекса С№/ПВП вызывает дистрофические изменения (гидропическая и вакуольная дистрофия), нарушение микроциркуляции (полнокровие, периваскулярный отек, диапедезные кровоизлияния) и реакцию со стороны тканевых макрофагов (набухание, образование гигантоклеточных гранулем типа инородных тел) во внутренних органах, особенно в селезенке, печени и миокарде. Указанные изменения связаны с действием ПВП и носят дозозависимый характер. Фуллерен С60 и составе комплекса СеоЯТВП снижает негативное действие ПВП.

3. Водорастворимый комплекс Сбо/ПВП оказывает стимулирующее влияние на течение раневого процесса. Усиление репаративных процессов под действием комплекса происходит в первой фазе раневого процесса и ускоряет его естественный ход.

4. Фуллерен С6о изменяет физические свойства композиций на основе водорастворимых полимеров (поливиниловый спирт, желатин, коллаген), повышает их прочность и эластичность.

5. Разработанное фуллеренсодержащее раневое покрытие на основе желатиновой губки с иммобилизированными в ее составе комплексом СбоЯТВП, антисептическим (диоксидин) и антиферментным (Е-аминокап-роновая кислота) препаратами является эффективным средством местного лечения ран. Наиболее эффективным является фуллеренсодержащее покрытие с 0,05 % содержанием фуллерена Сбо- Местное применение фулле-ренсодержащего раневого покрытия при лечении неинфицированных ран и гранулирующих ран после глубоких ожогов предупреждает осложненное течение раневого процесса и сокращает сроки заживления ран на 20 %.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Водорастворимый комплекс фуллерена Сбо с N-поливинилпирролидоном является биоактивным соединением, обладающим антиоксидантной активностью. Максимальные значения активности проявляет 3-6 % водный раствор С6о/ПВП что позволяет рекомендовать его использование в качестве антиоксидантного препарата.

2. Местное применение комплекса С6о/ПВП в качестве антиоксидан-га для лечения ран различной этиологии предупреждает увеличение объема повреждения и формирование вторичных некрозов в результате активации свободнорадикального окисления в первой стадии раневого процесса и обеспечивает оптимизирующее влияние на его течение.

3. Для коррекции процессов вторичной альтерации в первой фазе раневого процесса целесообразно совместное применение в составе раневых покрытий антиоксидантного, антиферментного и антисептического препа-

ратов, которые за счет синергетического действия на основные звенья патогенеза способны предупредить осложненное течение раневого процесса и сократить сроки заживления ран.

4. Включение фуллерена С№ в составе комплекса Qo/ПВП в основу изделий медицинского назначения, изготовленных из водорастворимых полимеров (ПВС, желатин, коллаген), повышает их прочность на разрыв и эластичность.

5. Разработанное раневое покрытие на основе желатиновой губки, обладающее высокими сорбционными свойствами, с иммобилизованными в ее составе комплексом С60/ПВП в качестве антиоксиданта, диоксидина, как антисептического препарата, и Е-аминокапроновой кислоты - антиферментного и гемостатического препарата, способствует оптимизации раневого процесса при лечении неинфицированных ран и гранулирующих ран после глубоких ожогов и сокращает сроки их заживления на 20 %. Наиболее эффективным является раневое покрытие с 0,05 % содержанием фуллерена С№.

6. Биоактивное фуллеренсодержащее раневое покрытие может быть рекомендовано для местного лечения неинфицированных и инфицированных ран, в том числе гнойных, огнестрельных и длительно не заживающих, термических ожогов За степени, гранулирующих ран после глубоких ожогов, трофических язв и пролежней.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Попов, В.А. Полимер - иммобилизованные композиции и их применение в хирургии / В.А. Попов, М.Н. Бояркин, М.А. Тюнин [и др.] // 1-й Международная научно-практическая конференция «Современные полимерные материалы в медицине и медицинской технике». - СПб, 2005.-С. 133-137.

2. Попов, В.А. Патогенетическое обоснование включения фуллере-нов в матричную основу полимер-иммобшшзованных имплантатов / В.А. Попов, М.А. Тюнин, Е.А. Чернявский, Р.Х. Караев И Усовершенствование способов и аппаратуры, применяемых в учебном процессе, медико-биологических исследованиях и клинической практике: сборник изобретений и рационализаторских предложений. - Спб., 2006. — С. 89-90.

3. Тюнин, М.А. Влияние комплекса фуллерена С<ю с поливинилпир-ролидоном на активность мембранных ферментов во внутренних органов при его внутрибрюшинном введении / М.А. Тюнин, В.А. Попов, О.Б. Зайцева, Р.Х. Караев //Клиническая патофизиология. - 2006. - № 2. - С. 44-45.

4. Попов, В.А. Морфологические изменения в тканях внутренних органов при внутрибрюшинном введении комплекса фуллерена Сбо с по-ливинилпирролидоном / В.А. Попов, О.Б. Зайцева, М.А. Тюнин // Клиническая патофизиология. - 2006. - № 2. - С. 56-57.

5. Тюнин, М.А. Способ изготовления плазможелатиновой композиции с биоактивными препаратами / М.А. Тюнин, Е.А. Чернявский,

Р.Х. Караев // Усовершенствование способов и аппаратуры, применяемых в учебном процессе, медико-биологических исследованиях и клинической практике: сборник изобретений и рационализаторских предложений, -Спб., 2006. - С. 88.

6. Тюнин, М.А. Активность мембранных ферментов в пищеварительных и непищеварительных органах при внутрибрюшинном введении комплекса С6о с поливинилпирролидоном / В.А. Попов, М.А. Тюнии, Л.Б. Пиотровский [и др.] // Сборник научных трудов Российской школы-конференции молодых ученых и преподавателей «Биосовместимые нано-структурные материалы и покрытия медицинского назначения». - Белгород, 2006. - С. 381-385.

7. Успенская, М.В. Модифицированные фуллереном сорбирующие полимерные композиции / М.В. Успенская, В.А. Попов, М.А. Тюнин, Н.В. Сиротинкин [и др.] // Сборник научных трудов Российской школы-конференции молодых ученых и преподавателей «Биосовместимые нано-структурные материалы и покрьггия медицинского назначения». - Белгород, 2006.-С. 232-235.

8. Попов, В.А. Морфологические изменения во внутренних органах при внутрибрюшинном введении комплекса фуллерена С6о с поливинилпирролидоном / В.А. Попов, М.А. Тюнин, О.Б. Зайцева// Вестник Российской Военно-медицинской академии,- 2007.- Т. 17, №1, прилож. -С. 580.

9. Попов, В.А. Биологическая активность фуллеренов и их применение при раневом процессе / В.А.Попов, М.А. Тюнин, Н.Г. Венгерович [и др.] // Асклепейон. - 2008. - Т.1-4 . - С. 28-32.

1 O.Popov, V.A. New adhesive bioactive compositions and technologies in surgery / V.A. Popov, M.N. Boyarkin, M.A. Tuynin [et al.] //Scientific abstracts of XXXVI World Congress on Military Medicine. - St. Petersburg., 2005. -P. 105.

11. Influence of Сбс/PVP complex on the healing of wounds and the toxicity in the experiments in vivo / Book of Abstracts 8th Biennial International Workshop «Fullerenes and Atomic Clusters»,2-6 july 2007, St. Petersburg, Russia.-P. 224.

12.Piotrovsky, L.B. Qr/PVP complex — No Toxicity after Intraperitoneal Injection to Rats / L.B. Piotiovsky, V.A. Popov, M.A. Tuynin [et al.] // Fullerenes, Nanotubes and Carbon Nanostructures. - 2008,- Vol. 16, N5.-P. 693 —697.

РАБОТЫ В ЖУРНАЛАХ, РЕКОМЕНДОВАННЫХ ВАК

1. Попов, В.А. Обоснование местного применения фуллеренов для стимуляции репаративных процессов / В.А. Попов, М.А. Тюнин // Вестник Российской Военно-медицинской академии. - 2007. - Т. 17, № 1. - С. 580.

2. Тюнин, М.А. Патофизиологическое обоснование местного применения фуллеренов при раневом процессе / А.Б. Белевитин,

В.А. Попов, H.H. Зыбина, Е.В. Антоненкова, О.Б. Зайцева // Вестник Российской Военно-медицинской академии. - 2008. - Т. 22, № 2. - С. 80-84.

3. Попов, В.А. Антиоксидантная активность комплекса фуллерена Сбо с N-поливинилпирролидоном / В.А. Попов, М.А. Тюнин, H.H. Зыбина, Е.В. Антоненкова, Л.Б. Пиотровский // Вестник Российской Военно-медицинской академии. - 2008. - Т. 23, № 3. - С. 487.

4. Попов, В.А. Морфофункциональные изменения во внутренних органах экспериментальных животных при внутрибрюшинном введении комплекса С60 с N-поливинилпирролидоном / В.А. Попов, М.А. Тюнин, О.Б. Зайцева, Д.Н. Николаев, Л.Б. Пиотровский // Вестник Российской Военно-медицинской академии. — 2008. - Т. 23, № 3. - С. 484.

ИЗОБРЕТЕНИЯ

1. Заявка на получение патента на изобретение, приоритетная справка № 2007119822, МПК A61L 15.00. Губчатый биоактивный препарат для местного лечения ран / В.А. Попов, М.А. Тюнин, Л.Б. Пиотровский, Н.В. Сиротинкин: опубл. 28.05.2007 г.

2. Патент на полезную модель № 73198, МПК A61L15.00. Гядроге-левое лечебное покрытие / В. А. Попов, Л.Б. Пиотровский, Н.В. Сиротинкин, Д.Н. Макин, Н.В. Успенская, Т.С. Филиппенко, Н.Г. Венгерович: опубл. 20.05.2008 г.

3. Патент на полезную модель № 64895, МПК A61BI7.03. Устройство для гемостаза при операциях на паренхиматозных органах / В.А. Попов, М.Н. Бояркин, М.А. Тюнин: опубл. 27.07.2007 г.

РАЦИОНАЛИЗАТОРСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. Рац. предложение № 9394/2. Способ остановки кровотечения при травме паренхиматозных органов с помощью сочетанного применения компрессионных пластин и гемостатического тампона / В.А. Попов, М.Н. Бояркин, М.А. Тюнин: опубл. 18.03.2005 г.

2. Рац. предложение № 9395/8. Способ изготовления фуллерен-ПВП-коллагеновых пластин для внешней компрессии при операциях на паренхиматозных органах / В.А. Попов, М.Н. Бояркин, М.А. Тюнин: опубл. 15.05.2005 г.

3. Рац. предложение № 9396/2. Способ изготовления фуллерен-ПВС-желатиновых пластин для внешней компрессии паренхиматозных органов / В.А. Попов, М.Н. Бояркин, М.А. Тюнин: опубл. 18.03.2005 г.

4. Рац. предложение № 9397/2. Способ изготовления ПВС-желатиновых пластин для внешней компрессии при операциях на паренхиматозных органах / В.А. Попов, М.Н. Бояркин, М.А. Тюнин: опубл. 18.03.2005 г.

5. Рац. предложение № 9398/2. Способ изготовления ПВС-коллагеновых пленок для пластического закрытия поверхности ран паренхиматозных органов / В.А. Попов, М.Н. Бояркин, М.А. Тюнин: опубл. 18.03.2005 г.

6. Рац. предложение № 9399/2. Способ активизации фуллеренов с помощью производного винилового ряда / В.А. Попов, М.Н. Бояркин, М.А. Тюнин: опубл. 18.03.2005 г.

7. Рац. предложение № 9400/2. Способ изготовления плазможелати-новой композиции с биоактивными добавками / В.А. Попов, М.Н. Бояркин, М.А. Тюнин: опубл. 18.03.2005 г.

8. Рац. предложение № 9401/2. Плазможелатиновый гемостатиче-ский тампон с биоактивными добавками / В.А. Попов, М.Н. Бояркин, М.А. Тюнин: опубл. 18.03.2005 г.

9. Рац. предложение № 10537/4. Биоактивное раневое покрытие на основе акрилатного гидрогеля / В.А. Попов, М.А. Тюнин, Н.Г. Венгерович: опубл. 18.07.2007 г.

10. Рац. предложение № № 10536/4. Абсорбент акрилатный мелкодисперсный / В.А. Попов, М.А. Тюнин, Н.Г. Венгерович: опубл. 18.07.2007 г.

11. Рац. предложение № 10535/4. Гидрогелевый акрилатный абсорбент / В .А. Попов, М.А. Тюнин, Н.Г. Венгерович: опубл. 18.07.2007 г.

12. Рац. предложение № 10535/4. Фуллерен-содержащее раневое покрытие / В.А. Попов, М.А, Тюнин, Н.Г. Венгерович: опубл. 18.07.2007 г.

Подписано в печать 06.02.09

Объем 1 п.л. Тираж юо экз.

Формат 60x84/16 Заказ № 186

Типография BMA им. С.М. Кирова 194044, СПб., ул. Академика Лебедева, 6

Актуальность. Проблема лечения ран остается одной из самых актуальных в современной медицине. Общее число больных и пострадавших с гнойно-деструктивными процессами мягких тканей и их осложнениями составляет 30-35 % [30, 41, 79]. Наиболее часто такие процессы наблюдаются при механической травме, в том числе, при огнестрельных ранениях, вызванных снарядами с высокой кинетической энергией, а также при термической и электротравме [52, 64]. Данные виды патологии отличаются длительными сроками заживления ран, высокой частотой неблагоприятных исходов в виде генерализации патологического процесса, инвалидизации, стойкого ограничения трудоспособности [1, 78].

Как замечено академиком А.М. У голевым (1972), «когда врач начинает лечение больных, он независимо от его узких научных интересов пытается восстановить или, по крайней мере, улучшить нарушенный процесс и, следовательно, понять сам процесс и составляющих его звеньев». С нашей точки зрения, оптимизация раневого процесса является одной из наиболее актуальных проблем военно-полевой и гнойной хирургии. Современные достижения патофизиологии и более глубокие представления об основных звеньях патогенеза воспаления, возникающего после травмы, позволили усовершенствовать содержание комплексной местной медикаментозной коррекции расстройств в тканях, окружающих рану [79, 193].

В последние годы активно изучается роль процессов вторичной альтерации в патогенезе раневого процесса [64, 76, 148]. Показано, что в основе формирования вторичных повреждений тканей в зоне воспаления, особенно в случае огнестрельных, гнойных ран, лежит активация процессов перекисного окисления липидов и нарушение функционирования системы эндогенной ан-тиоксидантной защиты [75, 176, 185]. Образующиеся при этом свободные радикалы и перекиси, нарастающий протеолиз и местный ацидоз усиливают деструкцию клеток, дистрофические процессы и приводят к увеличению объема повреждения, формированию вторичных некрозов, усилению микроцир-куляторных расстройств [9]. В связи с этим перспективным и патогенетически обоснованным направлением местного медикаментозного лечения ран различной этиологии следует считать совместное применение антиоксидантов с антибактериальными, некролитическими, антиферментными и другими препаратами, которые за счет синергетического действия на основные звенья раневого процесса способны предупредить его осложненное течение и сократить сроки заживления ран [11, 53, 66, 78]. Такое комплексное медикаментозное воздействие на раневой процесс достигается использованием раневых покрытий, мазевых и гидрогелевых композиций, физико-химические свойства которых позволяют совместить в одной лекарственной форме различные комбинации фармакологически активных веществ и, создавая их депо в раневой полости, обеспечивать длительный лечебный эффект [10, 20, 51].

В то же время, несмотря на большое количество известных химических соединений, обладающих способностью ингибировать свободнорадикальные процессы, арсенал эффективных антиоксидантных средств для местного лечения ран не велик [58]. Это связано с тем, что часть известных широко используемых препаратов являются жирорастворимыми веществами, что резко ограничивает возможность их применения в первой фазе раневого процесса [23, 51, 65]. Поэтому актуальной задачей современной медицинской науки является поиск новых химических соединений, сочетающих в себе выраженную антиоксидантную активность и способность растворяться в полярных растворителях.

В данных условиях обращают на себя внимание сообщения о биологических свойствах наночастиц, а именно фуллерена С60- Проведенные рядом авторов исследования позволяют утверждать, что в связи с уникальными химическими и физическими свойствами производные фуллерена Сбо являются перспективным материалом для создания высокотехнологичных медицинских материалов и лекарственных препаратов [63, 98]. Установлено, что производные фуллерена Сбо проявляют антиоксидантную, мембранотропную, иммунотропную, противовирусную, фотодинамическую активность, способны инактивировать ферменты [135, 170]. Экспериментально показано стимулирующие влияние фуллеренсодержащих мазевых композиций на основе вазелина на процессы посттравматической регенерации кожных ран [37].

Однако неспособность фуллеренов растворяться в полярных растворителях [94, 111, 169] затрудняет исследование их репаративных свойств и создание современных эффективных средств лечения ран на их основе. Кроме того, остается открытым вопрос токсикологии производных фуллерена Cgo-Ряд авторов отмечают отсутствие как острого, так и хронического токсического действия фуллеренов на организм при различных способах введения [157, 159, 164]. Другие, наоборот, в своих работах указывают на выраженные токсические эффекты фуллеренов на клетки кожи человека и головного мозга рыб [161, 171]. Не менее важными являются сообщения о возможности накопления фуллеренов в тканях печени и селезенки при внутривенном введении [100]. Несмотря на то, что авторы этих исследований отрицают возможность включения фуллеренов в процессы метаболизма, последствия депонирования их во внутренних органах требуют дополнительных исследований.

Отмеченные обстоятельства определили необходимость комплексного исследования биологических свойств водорастворимого комплекса Сбо с N-поливинилпирролидоном (ПВП), а именно, изучение антиоксидантных свойств, возможности или отсутствия его токсичности, общерезорбтивных свойств, влияния на течение раневого процесса.

Цель исследования: патофизиологическое обоснование местного применения комплекса фуллерена Сбо с N-поливинилпирролидоном при раневом процессе и разработка на его основе биоактивного раневого покрытия для лечения ран различной этиологии.

Задачи исследования:

1. Изучить антиоксидантные свойства водных растворов комплекса фуллерена С6о/ПВП;

2. Исследовать морфофункциональные изменения в тканях внутренних органов и динамику биохимических показателей крови при парентеральном введении комплекса Сбо/ПВП;

3. Изучить влияние комплекса Сбо/ПВП на течение раневого процесса;

4. Разработать биоактивное фуллеренсодержащее губчатое раневое покрытие для лечения ран различной этиологии, способное оказывать комплексное воздействие на раневой процесс - как в первой, так и во второй его стадиях, и экспериментально изучить его эффективность на моделях условно асептических кожно-плоскостных ран и гранулирующих ран после глубоких ожогов.

Научная новизна:

Путем определения антирадикальной активности и супероксидпроду-цирующей активности тканевых макрофагов исследованы антиоксидантные свойства комплекса Сбо/ПВП.

Исследование общерезорбтивных свойств комплекса Сбо/ПВП показало, что морфологические изменения в тканях внутренних органов, влияние на активность мембранных ферментов связаны с негативным действием Ы-поливинилпирролидона. Установлено, что фуллерен Сбо в составе комплекса проявляет цитопротективную активность, уменьшая отрицательное действие ПВП.

Выявлено стимулирующее влияние комплекса С60/ПВП на течение раневого процесса.

Разработано биоактивное фуллеренсодержащее губчатое раневое покрытие, обладающее высокой сорбционной, антисептической, антиоксидант-ной, антиферментной активностью, способное оказывать комплексное воздействие на основные звенья патогенеза раневого процесса как в первой, так и во второй его стадиях (приоритетная справка №2007119822 от 28.05.07).

Экспериментально установлена эффективность местного применения биоактивного фуллеренсодержащего губчатого раневого покрытия при лечении условно асептических кожно-плоскостных ран и гранулирующих ран после глубоких ожогов.

Теоретическая и практическая ценность:

Проведенные исследования антирадикальной активности и влияния на супероксиданионпродуцирующую активность тканевых макрофагов обуславливают целесообразность применения комплекса С60/ПВП в качестве ан-тиоксидантного препарата.

Выявленные морфологические и биохимические изменения при парентеральном введении Сб(/ПВП подтверждают данные о негативном действии ПВП и свидетельствуют о цитопротективной активности фуллерена Сбо

Результаты исследования антиоксидантной активности, влияния на раневой процесс комплекса Сб(/ПВП позволяют патогенетически обосновать возможность его местного применения при лечении ран различной этиологии.

Разработанное биоактивное фуллеренсодержащее раневое покрытие на основе желатиновой губки, обладающее высокой сорбционной, антиоксидантной, антисептической и антиферментной активностью, способствует оптимизации раневого процесса при лечении неинфицированных ран и гранулирующих ран после глубоких ожогов и сокращает сроки их заживления. Раневое покрытие показано для местного лечения неинфицированных и инфицированных ран, в том числе гнойных, огнестрельных, ожогов, пролежней и трофических язв.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Фуллерен Сбо в составе комплекса с И-поливинилпирролидоном проявляет антиоксидантную активность, которая имеет максимальные значения в водных растворах с 3-6 % содержанием Сбо/ПВП.

2. Парентеральное введение комплекса Сбо/ПВП вызывает дистрофические явления, нарушения микроциркуляции и реакцию со стороны тканевых макрофагов (набухание, образование гигантоклеточных гранулем типа инородных тел) во внутренних органах, особенно в селезенке, печени и миокарде. Указанные изменения связаны с действием 1Ч-поливинилпирролидона. Фуллерен Сбо в составе комплекса Сбо/ПВП снижает негативное действие ПВП.

3. Водорастворимый комплекс Сбо/ПВП оказывает стимулирующее влияние на течение раневого процесса. Усиление репаративных процессов под действием комплекса происходит в первой фазе раневого процесса и сокращает срок заживления неинфицированных ран.

4. Биоактивное фуллеренсодержащее губчатое раневое покрытие с иммобилизованными в его составе комплексом Сбо/ПВП, антисептическим (ди-оксидин) и антиферментным (Е-аминокапроновая кислота) препаратами является эффективным средством местного лечения неинфицированных ран и гранулирующих ран после глубоких ожогов. Его применение предупреждает осложненное течение раневого процесса и сокращает сроки заживления ран на 20 %.

Реализация работы. По теме исследования опубликовано 16 печатных работ. Подана заявка для получения патента на изобретение: "Губчатый биоактивный препарат для местного лечения ран" (приоритетная справка №2007119822 от 28.05.2007). Получен патент на полезную модель: «Гидроге-левое лечебное покрытие» (патент № 73198 от 09.01.2008). Зарегистрировано 12 рационализаторских предложений. Результаты исследований внедрены в учебный процесс кафедры патологической физиологии ВМедА.

Апробация работы. Основные положения диссертационного исследования доложены в докладах на итоговых научных конференциях курсантов и слушателей ВМедА (2005, 2006, 2007, 2008), на 1-й Международной научно-практической конференции "Современные полимерные материалы в медицине и медицинской технике" (Санкт-Петербург, 2005), в работе Российской школы-конференции молодых ученых и преподавателей «Биосовместимые наноструктурные материалы и покрытия медицинского назначения» (Белгород, 2006), на Международной выставке-конгрессе по развитию и исследованию нанотехнологий и наноматериалов в Санкт-Петербурге и Северо-Западном ФО (Санкт-Петербург, 2008), на Экофоруме «Окружающая среда и здоровье» (Санкт-Петербург, 2008).

Результаты работы представлены в виде постерных докладов на Международных Салонах промышленной собственности - "Архимед 2005 и 2007", 10-й Международной выставке-конгрессе РЕСТЕК "Высокие технологии. Инновации. Инвестиции" (Санкт-Петербург, 2005), 7-й Международной специализированной выставке "Экспо-Химия" (Санкт-Петербург, 2005) и на 36-м Международном конгрессе по военной медицине (Санкт-Петербург, 2005), на 8-ом международном конгрессе «Фуллерены и атомные кластеры» (Санкт-Петербург, 2007).

Объем и структура диссертации. Материалы диссертационного исследования представлены на 141 странице машинописного текста. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, 4 глав собственных лабораторных и экспериментальных исследований, выполненных на 30 кроликах, 160 крысах, заключения, выводов, практических рекомендаций, списка литературы и приложения. Работа содержит 31 рисунок и 13 таблиц. Список литературы включает 195 источников, из них 89 отечественных и 106 иностранных авторов.

выводы

1. Водорастворимый комплекс фуллерена Сбо с N-поливи-иилпирролидоном обладает аитиоксидантиой активностью, показатели которой максимальны в водных растворах с 3-6 % содержанием Сбо/ПВП.

2. Парентеральное введение комплекса Сбо/ПВП вызывает дистрофические изменения (гидропическая и вакуольная дистрофия), нарушение микроциркуляции (полнокровие, переваскулярный отек, диапедезные кровоизлияния) и реакцию со стороны тканевых макрофагов (набухание, образование гигантоклеточных гранулем типа инородных тел) во внутренних органах, особенно в селезенке, печени и миокарде. Указанные изменения связаны с действием ПВП и носят дозозависимый характер. Фуллерен Сбо в составе комплекса Сбо/ПВП снижает негативное действие ПВП.

3. Водорастворимый комплекс Сбо/ПВП оказывает стимулирующее влияние на течение раневого процесса. Усиление репаративных процессов под действием комплекса происходит в первой фазе раневого процесса и ускоряет его естественный ход.

4. Фуллерен Сбо изменяет физические свойства композиций на основе водорастворимых полимеров (поливиниловый спирт, желатин, коллаген), повышает их прочность и эластичность.

5. Разработанное фуллеренсодержащее раневое покрытие на основе желатиновой губки с иммобилизованными в ее составе комплексом С6о/ПВП, антисептическим (диоксидин) и антиферментным (Е-аминокапроновая кислота) препаратами является эффективным средством местного лечения ран. Наиболее эффективным является фуллеренсодержащее покрытие с 0,05 % содержанием фуллерена Сбо- Местное применение фуллеренсодержащего раневого покрытия при лечении неинфицированных ран и ран после глубоких ожогов предупреждает осложненное течение раневого процесса и сокращает сроки заживления ран на 20 %.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Водорастворимый комплекс фуллерена Сбо с 14-поливинилпирролидоном является биоактивным соединением, обладающим антиоксидантной активностью. Максимальные значения активности проявляет 3-6 % водный раствор Сб(/ПВЦ что позволяет рекомендовать его использование в качестве антиоксидантного препарата.

2. Местное применение комплекса Сбо/ПВП в качестве антиоксиданта для лечения ран различной этиологии предупреждает увеличение объема по- э вреждения и формирование вторичных некрозов в результате активации сво-боднорадикальных процессов в первой стадии раневого процесса и обеспечивает стимулирующее влияние на его общий ход.

3. Для коррекции процессов вторичной альтерации в первой фазе раневого процесса целесообразно совместное применение антиоксидантного, антиферментного и антисептического препаратов, которые за счет синергети-ческого действия на основные звенья патогенеза способны предупредить осложненное течение раневого процесса и сократить сроки заживления ран.

4. Включение фуллерена Сбо в составе комплекса Сб(/ПВП в основу изделий медицинского назначения изготовленных из водорастворимых полимеров (ПВС, желатин, коллаген) повышает их прочность на разрыв и эластичность.

5. Разработанное раневое покрытие на основе желатиновой губки, обладающее высокими сорбционными свойствами, с иммобилизованными в ее составе комплексом Сбо/ПВП в качестве антиоксиданта, диоксидина, как антисептического препарата, и Е-аминокапроновой кислоты - антиферментного и гемостатического препарата, способствует оптимизации раневого процесса при лечении неинфицированных ран и гранулирующих ран после глубоких ожогов и сокращает сроки их заживления на 20 %. Наиболее эффективным является раневое покрытие с 0,05 % содержанием фуллерена Сбо

6. Биоактивное фуллеренсодержащее раневое покрытие может быть рекомендовано для местного лечения неинфицированных и инфицированных ран, в том числе гнойных, огнестрельных и длительно не заживающих, термических ожогов За степени, гранулирующих ран после глубоких ожогов, трофических язв и пролежней.