Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.05) на тему:Иммунотропные свойства антигистаминной сыворотки при раневом процессе у крупного рогатого скота

УРАЛЬСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ ИНСТИТУТ ВЕТЕРИНАРНОЙ МЕДИЦИНЫ

сАММт&/1 ЛМШ ОКЛЖСОИК:/!

ИММУНОТРОПНЫЕ СВОЙСТВА

АНТИГИСТАМИННОИ СЫВОРОТКИ ПРИ РАНЕВОМ ПРОЦЕССЕ У КРУПНОЕО РОЕАТОЕО СКОТА

16.00.05. - ветеринарная хирургия

Диссертация на соискание учёной степени кандидата ветеринарных наук

Научный руководитель : академик АЕ, доктор вет. наук, профессор МОЛОКАНОВ В.А. Научный консультант : кандидат биол. наук, доцент БЕЗИН А.Н.

На правах рукописи

Троицк - 1999

ОГЛАВЛЕНИЕ

стр.

ВВЕДЕНИЕ...............................................................................4

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ............................................................9

1.1. Классификация раневого процесса ....'....................................9

1.2. Патогенез раневого процесса..............................................12

1.2.1. Химические медиаторы раневого процесса.........................14

1.2.2. Биогенные амины. Гистамин и его биологическая роль

в организме..................................................................16

1.2.3. Иммунная реактивность организма и репаративная регенерация..................................................................24

1.2.4. Сущность и механизм развития аутоиммунизации................31

1.3. Иммунопрофилактика и иммунотерапия раневой болезни.........38

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ...........................................50

2.1. Материал и методика исследований....................................50

2.2. Результаты собственных исследований.................................61

2.2.1. Влияние различных доз антигистаминной сыворотки на иммунобиохимический статус клинически

здоровых телят.............................................................61

2.2.2. Состояние клинико-иммунологического статуса у животных при раневом процессе........................................71

2.2.3. Иммунотерапия раневой болезни у животных с применением антигистаминной сыворотки...........................88

2.2.3.1. Изучение иммунотропных свойств антигистаминной сыворотки при раневом процессе......................................89

2.2.3.2. Клинические результаты применения антигистаминной сыворотки при лечении септических

процессов у животных.................................................101

2.2.3.2.1. Влияние антигистаминной сыворотки на течение септических абсцессов у телят....................................102

2.2.3.2.2. Влияние антигистаминной сыворотки на течение

септических процессов у собак..................................109

3. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЙ...................114

4. ВЫВОДЫ........................................................................... 121

5. ПРАКТИЧЕСКОЕ ПРЕДЛОЖЕНИЕ........................................123

6. СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ.......................................................124

ПРИЛОЖЕНИЯ

Список условных сокращений в диссертации

АГС - антигистаминная сыворотка

РНГА - реакция непрямой гемагглютинации

ФЕА - фитогемагглютинин

ЦИК - циркулирующие иммунные комплексы

П - приложение

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность. Высокая заболеваемость и гибель сельскохозяйственных животных, особенно молодняка, в значительной степени препятствует росту отечественного производства животноводческой продукции. Поэтому улучшение ветеринарного обслуживания животноводства, разработка наиболее эффективных методов и средств лечения широко распространенных заболеваний сельскохозяйственных животных является актуальной научной задачей. Мировой опыт борьбы с заболеваниями животных показал, что основная роль при этом отводится лекарственной терапии и профилактике, позволяющей значительно снизить наносимый экономический ущерб (М.И.Немченко,1984; Б.М.Анохин, 1985).

Одним из препятствий на пути увеличения продуктивности животных являются незаразные болезни, составляющие 94-97% общей заболеваемости животных. Хирургические болезни составляют около 40 % от общего числа незаразных болезней. Особенно большой урон животноводству причиняет травматизм от погрешностей содержания, кормления, эксплуатации и транспортировки животных. Очень часто травмы носят характер открытых повреждений, которые в большей половине случаев осложняются раневой инфекцией (Г.С.Кузнецов, 1980). Положение осложняется тем, что в современных комплексах из-за наличия совокупности условий, обуславливающих заражение среды микроорганизмами, развитие их устойчивости к антимикробным препаратам и изменчивости их свойств, качественно изменились условия взаимодействия между макро- и микроорганизмами. В таких случаях раневая инфекция является, как правило, постоянным спутником каждого меха-

нического повреждения тканей животного и, тем самым, наносит животноводству значительный ущерб (П.П. Герцен, 1981).

Известно, что в последние годы отмечается значительное изменение иммунологической реактивности животных, вызванной как аллергизирующим влиянием многих факторов внешней среды, так и применением различных лекарственных препаратов.

Пути коррекции иммунной недостаточности при травмах существенно зависят от периода раневой болезни, и могут быть совершенно различными. Весьма перспективными в клинической иммунологии являются средства, непосредственно влияющие на иммунную реактивность и связанные с фармакологической стимуляцией иммунитета, либо с трансплантацией иммунокомпетентных клеток (И.И.Долгушин, 1989).

В арсенале отечественных ветеринарных практиков, особенно в хирургии, количество применяемых иммуностимуляторов ограничено. Это свидетельствует о том, что ещё не найдено в достаточной мере эффективных, экологически чистых способов лечения животных при гнойных заболеваниях. В этой связи имеет актуальное значение поиск эффективных, экономичных и технически простых способов комплексного лечения с одновременным воздействием как на местный воспалительный процесс так и на иммунную систему организма животных экологически чистыми стимуляторами. Этим требованиям отвечает, в частности, анти-гистаминная сыворотка (АГС).

Цель и задачи исследований. Основной целью работы явилось изучение влияния АГС на некоторые иммунобиохимические показатели при раневой болезни у телят. Для достижения данной цели были поставленны следующие задачи:

1. изучить влияние различных доз АГС на формирование

иммунобиохимического статуса клинически здоровых телят 30-дневного возраста и определить оптимальную дозу сыворотки для животных данного вида и возраста ;

2. изучить развитие реакций иммунной системы при раневой болезни и септических процессах у телят ;

3. оценить иммунотропные свойства АГС в процессе лечения ран и септических процессов;

4. на основании комплексных экспериментальных исследований разработать способ лечения ран и септических процессов с использованием АГС.

Научная новизна. Впервые изучено формирование иммунобиохимического статуса у телят при раневой болезни и септических процессах на фоне инъекций АГС . Изученно сосотояние некоторых показателей клеточного и гуморального звеньев иммунной системы у телят с гнойными хирургическими воспалительными процессами. Нами впервые использована АГС при лечении ран, абсцессов и флегмон, изучено её коррегирующее влияние на иммунобиохимический статус, в том числе на явления аутоиммунизации.

Разработан способ лечения крупного рогатого скота с септическими воспалительными процессами (положительное решение на выдачу патента № 97113666/13 (014530), от 24.09.98 г.).

Теоретическое и практическое значение работы. Изучена реакция организма клинически здоровых телят месячного возраста на введение различных доз антигистаминной сыворотки. Установлено содержание в сыворотке крови свободного гистамина, лизоцима, Т- и В-лимфоцитов, иммуноглобулинов классов М и О, аутоиммунных процессов при раневой болезни у телят до и в процессе лечения. Наряду с этим изучено морфофункциональное

состояние тканей в зоне ранения на фоне применения АГС. Впервые применена АГС при раневой болезни и септических процессах у телят и собак , и обоснована ее лечебная эффективность. Полученные данные по аутоиммунизации могут быть использованы для оценки эффективности мероприятий при терапии данного заболевания.

На защиту выносятся следующие вопросы

1. Определение оптимальной дозы АГС для молодняка крупного рогатого скота 30 - дневного возраста путем изучения воздействия различных доз на иммунобиохимический статус организма клинически здоровых телят.

2. Выраженность процессов аутоиммунизации при раневой болезни у телят.

3. Применение АГС для коррекции иммунобиохими-ческого статуса организма телят при раневой болезни.

4. Рекомендации по лечению септических воспалительных процессов на основе метода повышения общей реактивности организма путем применения АГС.

Апробация работы. Материалы диссертации были доложены: на международной конференции "Загрязненность экологических систем токсикантами и актуальные вопросы современной фармакологии и токсикологии. Подготовка кадров. " (Троицк, 1996); на научно-практической конференции молодых ученых и специалистов УГИВМ (Челябинск, 1997); на межкафедральном совещании профессорско-преподавательского коллектива УГИВМ.

Объем и структура работы. Диссертация изложена на страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, описания собственных исследований, обсуждения полученных результатов, выводов, практического предложения,

списка литературы и приложений. Список литературы включает 233 источника, в том числе 89 зарубежных авторов.

Материал иллюстрирован 16 таблицами и 15 рисунками.

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1. 1. Классификация раневого процесса

У большинства исследователей не существует единого мнения по вопросу классификации раневого процесса.

E.Howes et al. (1929), основываясь на данные об изменении силы натяжения раны, различают три фазы заживления: 1 - латентная, в течение которой сила натяжения снижается или не меняется; 2 - фаза фиброплазии, характеризующаяся нарастанием силы натяжения до 10-14 суток с момента ранения; 3 - фазу созревания, укрепления рубца.

Этого же мнения придерживается и Е. Peacock (1973), но он подчеркивает, что в течение латентного периода (4-6 суток после ранения) возникает воспалительная реакция, подготавливающая рану к последовательному заживлению путем удаления некротических тканей.

Многие исследования указывают, что процесс заживления начинается уже в момент травмы. Именно в 1 фазе происходят существенные метаболические сдвиги, которые лежат в основе очевидных, гистологически определяемых процессов, происходящих в более поздних стадиях ( J. Vilijanto, 1964; J. Raekallio, 1970).

На основании клинических признаков Н.П.Пирогов выделял три стадии раневого процесса: 1 - отека, 2 - очищения раны ( первые 4-14 дней) и 3 -гранулирования.

М.Ф.Камаев (1970) учитывая цитологические и патологические изменения, подразделял раневой процесс на периоды и фазы: 1 - ранний период (около 12 час) - первичные признаки воспаления и контаминации флоры; 2 - дегенеративно-воспалительный период; 3 - регенеративный период, включающий три фазы, направленные на освобождение раны от некротических тканей, образование грануляционной ткани, эпидермизацию и нормализацию состояния раневого процесса.

Клинически более обоснованной, является классификация С.С.Гирголава (1956), разделявшего три фазы заживления: 1 фаза - подготовительный период, период воспаления, в течение которого происходят сложные биохимические и патофизиологические процессы, подготавливающие следующий регенеративный процесс ( в этот период морфологические признаки регенерации не определяются ); 2 фаза - период регенерации, заканчивающийся выполнением полости раны новообразованной тканью; 3 фаза - период оформления рубца.

Практически сходную, но более лаконичную классификацию предложил Р.Росс (1970): первая фаза - воспаление; вторая фаза -пролиферация; третья фаза - реорганизация рубца. Первые две фазы связаны в основном с образованием грануляционной ткани, последняя означает созревание рубцовой ткани. В.И.Стручков и соавт. (1975), выделяют те же стадии раневого процесса - стадию воспаления и стадию образования и созревания грануляционной ткани, но третью фазу заживления они определяют как стадию эпителизации.

М.И.Кузин и соавт. (1977) предложили в классификации выделять следующие основные периоды течения раневого процес-

са: 1 - фазу воспаления, делящуюся на период сосудистых изменений и период очищения раны от некротических (погибших) тканей; 2 - фазу регенерации, образования и созревания грануляционной ткани; 3 - фазу реорганизации рубца и эпителизации. В данной классификации основным моментом является разделение 1 фазы заживления на два периода. Первый период отражает сумму последовательных сосудистых реакций, характеризующих механизм воспаления, второй период - очищения от погибших тканей - очень важен с клинической точки зрения, так как определяет нормальное течение регенерации и всего заживления.

Разделение фазы воспаления на два периода акцентирует патогенетическую направленность лечебных мероприятий в 1 стадии раневого процесса - купирование воспалительных изменений и ускорение очищения раны.

Реорганизация рубца и эпителизация являются основными компонентами, завершающими течение раневого процесса, и совмещение их представляется вполне оправданным ( 3 фаза заживления ).

На основании биофизико-химических данных, протекающих в ране И.Т. Руфанов разделил раневой процесс на фазу гидратации, или биологического очищения раны, и фазу дегидратации, или регенеративно-восстановительных явлений. Такое деление позволяет более правильно и углубленно понять основные закономерности раневого процесса и целенаправленно влиять на него комплексом хирургических и этиопатогенетичесних воздействий (А.Д.Белов, М.В.Плахотин в соавт., 1990).

1.2. Патогенез раневого процесса

Раневой процесс - сложный комплекс биологических реакций

в ответ на повреждение органов и тканей, заканчивающийся обычно их заживлением. В ходе его имеют место деструктивные и восстановительные изменения со стороны тканей, образующих рану и прилегающих к ней соединительной, эпителиальной, нервной, мышечной; важная роль принадлежит форменным элементам крови. В связи с этим в патогенезе раневого процесса находят свое отражение проблемы воспаления, регенерации, антителообразования, химии биологически активных вешеств и многие другие.

Раневой процесс представляет собой сочетание местных последовательных изменений и связанных с ними многочисленных общих реакицй (М.И.Кузин, Л.Л.Шимкевич, 1990).

Общие реакции организма протекают в неосложненных случаях в две фазы. В первой фазе (1-2-й день после травмы) общая реакция развивается по пути усиления жизнедеятельности, что проявляется повышением температуры, основного обмена, снижением массы тела, повышением распада белков, жиров, углеводов, снижением проницаемости клеточных мембран, подавлением синтеза белков и регенерации.

В основе указанных механизмов лежит повышение функции симптомато-адреналовой системы, усиление выброса адреналина ("гормона пожара"), приводящее к мобилизации запасов гликогена и ускорению его распада, стимуляции гликолиза, повышению вязкости и свертываемости крови с последующим тромбообразованием (А.М.Светухин в соавт.,1992).

Во второй стадии (4-10-й день) преобладает влияние пара-

симпатической системы и увеличение действия таких гормонов и медиаторов, как минералокортикостероиды, альдостерон, ацетил-холин. Повышается масса тела, нормализуются белковый обмен и процессы регенерации.

Таким образом, все направлено на усиление защитных реакций организма, проявляющихся в известном адаптационном синдроме. Если рассматривать местные проявления раневого процесса с этой же точки зрения, то можно в них также увидеть те же закономерности: проявление реакций, направленных на защиту внутренней среды и на ликвидацию последствий травмы.

Как отмечает А.Е. Вершигора (1989), отек тканей приводит к сдавливанию сосудов и прекращению кровотечения из них, кроме того, он сдавливает лимфатические протоки и тем самым снижает общую интоксикацию от возможного проникновения токсических веществ. Экссудация приводит к разведению токсинов и их выведению из раны, лизису некротических элементов в ней. Сгусток крови, покрытый фибринной пленкой, появляющийся сразу после травмы, является первым, хотя и слабым, защитным барьером между внутренней и внешней средой. В конечном счете на месте раны появляется соединительнотканный рубец, прочно скрепляющий края поврежденных тканей и хорошо защищающий внутреннюю среду от внешних отрицательных влияний.

Таким образом, как указывает В.П.Котельников (1991) на всех этапах раневого процесса ведущее значение имеет система микроциркуляции, ибо в первые фазы она способствует очищению раны, а в последующем процессу регенерации соединительной ткани и образованию рубца.

Метаморфозы микроциркуляции сводятся к изменению самих сосудов, внутрисосудистым и внесосудистым изменениям.

В связи с большим разнообразием ран невозможно определить и точные сроки течения фаз местного раневого процесса - экссудации, воспалительной инфильтрации, очищения и репарации. Существенным является т