Автореферат и диссертация по медицине (14.03.03) на тему:Патофизиологические механизмы постспленэктомических иммунологических нарушений и возможность их коррекции (клинико-экспериментальное исследование)

На прарах рук^гйси

Г,

ПОЛЯКОВ Александр Вячеславович

ПАТОФИЗИОЛОГИЧЕСКИЕ МЕХАНИЗМЫ ПОСТСПЛЕНЭКТОМИЧЕСКИХ ИММУНОЛОГИЧЕСКИХ НАРУШЕНИЙ И ВОЗМОЖНОСТЬ ИХ КОРРЕКЦИИ (клинико-эксперимептальное исследование)

14.03.03 — патологическая физиология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

10 ЯНВ 2013

Саранск - 2012

005048283

005048283

Работа выполнена в Негосударственном образовательном учреждении высшего профессионального образования Самарский медицинский институт «РЕАВИЗ»

Научный руководитель: доктор медицинских наук, профессор

Масляков Владимир Владимирович

Официальные оппоненты: Плотникова Надежда Алексеевна

доктор медицинских наук, профессор, заведующий кафедрой патологии ФГБОУ ВПО «Мордовский государственный университет имени Н.П. Огарева» Минобрнауки России;

Елисеев Юрий Юрьевич

доктор медицинских наук, профессор, заведующий кафедрой общей гигиены и экологии ГБОУ ВПО «Саратовский государственный медицинский

университет имени В.И. Разумовского» Минздравсоцразвития России

Ведущая организация: Московский областной научно-исследовательский клинический институт имени М.В. Владимирского

Защита диссертации состоится «27» декабря 2012 года в 15 часов на заседании диссертационного совета Д 212.117.08 при ФГБОУ ВПО «МГУ им. Н.П. Огарёва» по адресу: 430005, г. Саранск, ул. Большевистская, 68.

С диссертацией можно ознакомиться в Научной библиотеке имени М.М. Бахтина ФГБОУ ВПО «МГУ им. Н.П. Огарёва» (430005, г. Саранск, ул. Большевистская, 68). Автореферат размещен на сайте www.mrsu.ru.

Автореферат разослан «_» ноября 2012 г.

Ученый секретарь диссертационного совета кандидат медицинских наук, доцент

А. Г. Голубев

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы

Известно, что селезенка не является жизненно важным органом. Однако она относится к периферическим лимфоидным тканям. В ней концентрируются супрессорные, хелперные и часть эффекторных клеток, здесь же происходит процесс активного антителообразования и продукция гуморальных медиаторов [Виноградов В.В. и соавт., 1986]. В селезенке содержится приблизительно 25% лимфоцитов типа Т и около 60% лимфоцитов типа В [Барта И., 1976]. В ней протекают оба этапа дифференцировки антителообразующих клеток из костномозговых предшественников, в то время как для Т-лимфоцитов антигеннезависимый этап дифференцировки из костномозговых предшественников осуществляется в тимусе, а антигензависимый — в селезенке [Шапкин Ю.Г. и соавт., 2009].

Сложное строение лимфатических фолликулов селезенки, включающих тимусзависимые, тимуснезависимые и макрофагальные элементы, создает благоприятные условия в органе для кооперации клеток в иммунном ответе [Агеев А.К., 1976, Шапкин Ю.Г. и соавт., 2008]. В этом органе синтезируется неспецифический сывороточный, биологически активный тетрапептид тафтсин, полученный путем отщепления от IgG трипсином и названный в честь Тафтского университета, где впервые проведены эти исследования [Мироненко О.Н., 1985; Constantopoulos A. et al., 1983; Kunz Е. et al., 1990]. Он находится в составе Fd-фрагмента IgG и в незначительных дозах (0,05-0,1 мкг/мл), усиливает фагоцитоз и другие функциональные свойства макрофагов и полиморфно-ядерных лейкоцитов [Шапкин Ю.Г. и соавт., 2008]. Тафтсин представляет собой неотъемлемый компонент IgG и освобождается in vitro в виде свободного тетрапептида (Ь-Тре-Ь-Лиз-Ь-Про-Ь-Арг) после энзиматозного расщепления [Encke A. et al., 1986]. Этот тетрапептид стимулирует естественные клетки-киллеры, реализуя свое действие через нейраминовую кислоту клеточной мембраны [Шапкин Ю.Г. и соавт., 2008]. Кроме этого, тафтсин стимулирует гексозамонофосфатный шунт что, через образование активных кислородосодержащих компонентов усиливает бактерицидные и антиопухолевые свойства макрофагальных клеток [Павлова И.Е., 2007]. Установлено, что тафтсин стимулирует выделение макрофагами перекисных анионов (02) и перекиси водорода, тромбоксана В2, чем усиливает макрофагзависимую токсичность [Criado E.J. et al., 1983]. В селезенке осуществляется синтез IgM, IgC, вырабатывается СЗ- и С4-фрагменты комплемента [Чуманов А.Ю., 2011]. Кроме того, в этом органе происходит синтез компонентов комплемента, которые включаются в альтернативный путь его активации [Siuger D., 1976]. Так же в селезенке содержится большое количество пропердина [Criado E.J. et al., 1983]. Селезенке принадлежит активное участие в процессе опсонизации — изменения клеточной поверхности патогенна или других частиц, что приводит к захвату опсонированных клеток фагоцитами. По мнению EJ. Criado et al., 1983 процесс опсонизации связан с

наличием иммуноглобулинов, причем, из них, хорошо опсонирует только В системе комплемента эту функцию выполняет практически один компонент -СЗЬ, который присутствует в этом органе [Окка К.е1 а1., 1977].

Вместе с тем, несмотря на большое количество публикаций, посвященных этому вопросу, многие аспекты патогенетических нарушений иммунного статуса и способов их коррекции остаются малоизученными.

Цель исследования:

определить патофизиологические механизмы иммунологических нарушений после спленэктомии и возможность их коррекции.

Задачи исследования:

1. Изучить в условиях эксперимента влияние спленэктомии на изменения количества лимфоцитов в тимусе, лимфатических узлах и костном мозге в ближайшем послеоперационном периоде и динамику этих изменений.

2. Оценить изменения в клеточном звене системы иммунитета после спленэктомии в ближайшем послеоперационном периоде.

3. Определить влияние спленэктомии на изменения в гуморальном звене системы иммунного статуса в ближайшем послеоперационном периоде.

4. Изучить относительное содержание клеток, экспрессирующих Раз-антиген (СБ95), а так же БЛ, С025-иммуннокомпетентных клеток в ближайшем послеоперационном периоде после спленэктомии.

5. На основании полученных данных обосновать применение полиоксидония для коррекции иммунных нарушений после спленэктомии в отдаленном послеоперационном периоде.

Научная новизна

1- На основании экспериментального комплексного

иммунологического исследования установлено, что в ближайшем послеоперационном периоде после спленэктомии развиваются изменения в периферических органах иммунной системы: тимусе, где отмечается уменьшение количества Т-лимфоцитов в первые послеоперационные сутки и восстановление к десятым.

2. В костном мозге увеличение содержания лимфоцитов со вторых послеоперационных суток, частичное восстановление на седьмые послеоперационные сутки, и полное восстановление на девятые послеоперационные сутки.

3. В лимфатических узлах начиная с третьих суток, отмечается уменьшение количества лимфоцитов, частичное восстановление этих показателей происходит к девятым суткам.

4. Установлено, что удаление селезенки в ближайшем

послеоперационном периоде ведет к нарушениям как в клеточном звене системы иммунитета, где происходит снижение абсолютного содержания лимфоцитов несущих рецепторы CD3, CD4 и CD 16, которые прогрессивно снижаются на пятые послеоперационные сутки, так и в гуморальном звене системы иммунитета, где развивается Т-клеточный дефицит, увеличивается содержание активированных Т-клеток, повышается продукция ИНФу, ИЛ-2, ИЛ-6, ФНОа, снижается концентрация IgM в сыворотке. Кроме того, спленэктомия приводит к повышению Fas-антиген-положительных клеток.

Практическая значимость

Полученные экспериментальные данные о развитии иммунологических нарушений в ближайшем послеоперационном периоде после удаления селезенки следует учитывать при выборе терапевтического лечения таких больных. На основании полученных данных доказано применение иммуномодуляторов для лечения иммунных осложнений. При этом предпочтение следует отдавать полиоксидонию, данный препарат способствует восстановление как гуморального, так и клеточного звена иммунитета. Доказано, что введение полиоксидония приводит к восстановлению следующих показателей клеточного звена системы иммунитета: CD3 и CD4. В гуморальном звене системы после введения этого препарата происходит восстановление следующих показателей: IgE и IgM, ЦИК, а также количество цитокинов ФНОа, HJIip, ИЛ-6, ИЛ-2, ИЛИ, ИНФу, это приводит к мобилизации всех адаптационных и защитных сил организма в борьбе с патогенном.

Основные положения диссертации, выносимые на защиту

1. В клеточном звене иммунитета удаление селезенки приводит к снижению CD3, CD4 и CD16. В гуморальном звене системы иммунитета увеличивается содержание ИНФу, ИЛ-1 р, ИЛ-2, ИЛ-6, ФНОа, снижается количество IgM, IgG, общего количества комплемента, его СЗ- и С4-фракций.

2. В результате применения полиоксидоний в дозе внутримышечно в дозе 12 мг один раз в сутки ежедневно, общим курсом 9 инъекций происходит восстановление как клеточного - CD3 и CD4, так и гуморального - IgE и IgM, ЦИК, а также количество цитокинов ФНОа, ИЛ1Р, ИЛ-6, ИЛ-2, ИЛ-4, ИНФу звеньев системы иммунитета.

Реализация результатов исследования

Результаты диссертационного исследования внедрены в практику МУЗ «Городская больница №1 г. Энгельса», ФГБУ «354 Окружной военный клинический госпиталь МО РФ», используются при чтении лекций и на практических занятиях НОУ ВПО СМИ «РЕАВИЗ», ГБОУ ВПО «Саратовский государственный медицинский университет».

Апробация диссертации

Материалы диссертации доложены на Первом съезде амбулаторных хирургов (С-Петербург, 2004). Материалы работы обсуждены на заседании кафедр хирургии НОУ ВПО Саратовский филиал Самарского медицинского института «РЕАВИЗ», кафедры патологической физиологии ГБОУ ВПО «Саратовский государственный медицинский университет».

Публикации

По теме диссертации опубликовано 7 научных работ, из них 3 - в журналах, входящих в Перечень рекомендованных ВАК РФ.

Объем и структура диссертации

Диссертация изложена на 122 страницах компьютерного текста и состоит из введения, 4 глав (обзор литературы, собственные результаты и их обсуждение), заключения, выводов, практических рекомендаций, списка литературы из 230 источников (126 отечественных и 104 зарубежных авторов). Работа иллюстрирована 16 таблицами и 8 рисунками.

СОДЕРЖАНИЕ ДИССЕРТАЦИИ МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Исследования проводились на 762 неинбредных белых крысах обоего пола, крысах популяции Wistar и на 77 беспородных белых мышах обоего пола, а также на мышах линии СВА. Масса крыс составляла 180-240 г. Интактные животные составили группу из 18 крыс.

Эксперименты на животных проводили в соответствии с требованиями Женевской конвенции "International Guiding Principles for Biomedical Research Inroling Animals" (Geneva, 1990). В соответствии со стандартами Этического комитета все оперативные вмешательства и эвтаназия производились при обезболивании. Спленэктомию проводили при верхней срединной лапаротомии, с последующим выведением селезенки на желудочно-селезеночной связке через операционную рану. На селезеночную вену, артерию и некоторые ее ветви (короткие артерии желудка, сальниковые и поджелудочные ветви) накладывались двойные лигатуры, между которыми производилось пересечение сосудов. Затем пересекались связки селезенки, и она удалялась. Операционная рана ушивалась послойно хирургическим шелком и обрабатывалась 5% спиртовым раствором йода. Аналогичным способом у контрольных животных проводились ложные операции с имитацией удаления селезенки.

В качестве иммуностимуляторов использовали имунофан (20 мкг/кг) и полиоксидоний (700 мкг/кг), которые вводили внутримышечно ежедневно в течение 4 сут. Дозы иммуностимуляторов, которые применялись в эквитерапевтических дозах. Для крыс обоснованы данными литературы и

6

расчетами по общепринятым методам вычисления [Рыболовлев Ю.Р., 1982].

Кроме того, в исследованиях приняли участие 45 пациентов, которым была выполнена спленэктомия по поводу ее травмы в ближайшем послеоперационном периоде, 15 пациентам применяли полиоксидоний внутримышечно в дозе 12 мг один раз в сутки ежедневно, общим курсом 9 инъекций. Вторую группу составили 15 пациентов после спленэктомии, которым вводили имунофан внутримышечно в дозе 50 мкг, ежедневно, общим курсом 9 инъекций. Группу сравнения составили 15 пациентов без применения иммуномодулятора. Все пациенты были мужского пола, возраст - 34 ± 2 года.

Содержание Т-клеток в тимусе крыс определяли общепринятым методом подсчета ядросодержащих клеток в органе, учитывая то обстоятельство, что лимфоциты в вилочковой железе представлены в основном (около 90%) Т- популяцией [Ройт А. и соавт., 2000; Хаитов Р. М. и соавт., 2002]. Лимфоциты в лимфатических узлах (для изучения брали паховые лимфоузлы) и костном мозге (исследовали клетки костного мозга бедренной кости) подсчитывали, исходя из их относительного содержания в мазках данного органа, окрашенных по Романовскому-Гимзе. Для определения содержания в лимфоидных органах лимфоцитов клеточные суспензии из тимуса, костного мозга и паховых лимфоузлов крыс готовили через 1-10 сут. после операции. Содержание лейкоцитов и лимфоцитов в крови крыс после спленэктомии определяли общепринятыми методами [Гембицкий Е.В. и совт., 1987].

При изучении иммунного статуса определялись следующие показатели: субпопуляции Т- и B-лимфоцитов: количество в периферической крови лимфоцитов, несущих медиаторы CD3 (зрелые Т-лимфоциты); CD4 (Т-хелперы); CD8 (цитотоксические Т-клетки); CD16 (натуральные киллеры); CD20 (B-клетки), а также соотношение CD4 / CD8. Изучение названных показателей выполнялось с помощью проточной цитофлюрометрии с моноклональными антителами. CD25- рецептор к ИЛ-2, маркер активации Т- и B-лимфоцитов, CD95- Fas-антиген, HLA-DR - маркер активации Т-лимфоцитов) в микроварианте комплементзависимого лимфоцитотоксического теста [Тотолян A.A. с соавт. 1999];

Определение циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК) проводилось турбодиметрическим методом. Для этого исследования применяли 3,5% раствор полиэтиленгликоля с молекулярной массой 6000 Д (США) в фосфатном буфере (pH 8,4). Результаты учитывали на спектрометре СФ-46 при длине волны 450 нм и выражали в условных единицах. Общее содержание IgG, М, А — по методу простой радиальной иммуннодиффузии по Mancini и соавторам, а так же IgE, определяемый по методу ИФА. Содержание СЗ-, С4-компонентов комплемента, ФНОа, ИЛ-lß, ИЛ-2, ИЛ-6, ИЛ-8, интерферона-у (ИНФу), ИЛ-4, ИЛ-10 в плазме крови определяли с помощью набора реагентов РгоСоп (ООО «Протеиновый контур» г. Санкт-Петербург [Караулов A.B., 2008].

Активность и интенсивность фагоцитоза нейтрофилов периферической крови оценивалось по фагоцитарному индексу (ФИ) и фагоцитарному числу

(ФЧ) [Медведев А.Н. и соавт., 1991]. Активность кислородсодержащих систем нейтрофилов оценивалась по реакции восстановления нитросинего тетразолия спонтанного (НСТ-сп.) и стимулированного (НСИ-ст.) зимозаном [Виксман М.Е. и соавт., 1979; Щербаков В.И., 1989].

Статистическая обработка полученных данных проводилась при помощи непараметрического метода U -критерия теста Mann-Whitney (пакет программ Statistica 6.О.). Непараметрические методы заменяют реальные значения признака рангами, что способствует сохранению большей части информации о распределении. В данном случае не имеют значения ни параметры этого распределения, ни равенство дисперсий. Остается в силе только предложение, что тип распределения во всех случаях одинаков. Изложенный вариант критерия известен как U -критерий теста Mann-Whitney.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

С целью изучения влияния спленэктомии на содержание лимфоцитов в тимусе, костном мозге и периферических лимфатических узлах, нами проведено изучение содержания Т-лимфоцитов в этих органах на 1-10 послеоперационные сутки, для проведения опытов использовались от 7 до 10 крыс. В результате исследования установлено, что в тимусе после операции отмечается прогрессивное, статистически достоверное снижение количества Т-лимфоцитов, которые постепенно стали восстанавливаться с пятых суток и полностью восстановились к десятым послеоперационным суткам. Так, на первые послеоперационные сутки количество Т-лимфоцитов в тимусе составило 27,2±3,0-107, на 2-4 сутки - 23,1 ± 0,3-107, а начиная с пятых суток, отмечается увеличение этого показателя. В костном мозге после спленэктомии у крыс отмечается статистически достоверное увеличение содержания лимфоцитов в костном мозге. Причем на первые послеоперационные сутки полученные показатели соответствовали данным, полученным в группе сравнения. На вторые сутки отмечается увеличение содержания количества лимфоцитов в 1,3 раза по сравнению с контролем. На третьи четвертые сутки — выявлено прогрессивное увеличение этих показателей в 2,3 раза. На пятые-шестые сутки увеличение показателей лимфоцитов в 2,8 раза по сравнению с данными контроля. Снижение этих показателей отмечалось с 7 суток, и восстанавливались к девятым суткам. При изучении количества Т-лимфоцитов в периферических лимфатических узлах у животных после спленэктомии начиная с третьих суток, отмечается статистически достоверное уменьшение количества лимфоцитов по сравнению с группой контроля. На 4-5 сутки зарегистрировано прогрессивное уменьшение этих показателей по сравнению с группой контроля. На 7-8 сутки количество лимфоцитов в лимфоузлах составило 1,8 ± 0,3 х-107; в группе сравнения - 2,15 ± 0,3-х 107 (р<0,05). Частичное восстановление этих показателей зарегистрировано к девятым суткам, однако, полного восстановления не происходило и к десятым послеоперационным суткам.

В периферической крови после спленэктомии в 1-2 сутки количество

лимфоцитов в периферической крови крыс не изменялось и соответствовало данным, полученным в группе сравнения. Начиная с 3-х суток, выявлено незначительное, но статистически достоверное уменьшение лимфоцитов в периферической крови. Однако количество лимфоцитов в периферической крови животных восстанавливалось к восьмым суткам.

При изучении показателей клеточного звена иммунного статуса оперированных пациентов установлено, что на первые послеоперационные сутки изменений в клеточном звене системы иммунитета не происходит, все полученные показатели в основной группе соответствовали данным группы сравнения. На третьи послеоперационные сутки у пациентов после спленэктомии зарегистрировано снижение абсолютного содержания зрелых Т-лимфоцитов, Т-хелперов и натуральных киллеров (табл. 1).

Таблица 1

Показатели клеточного звена системы иммунитета у пациентов после

спленэктомии на третьи послеоперационные сутки (М ± т)

Показатель Результаты в группах Р*

сравнения (п = 15) после спленэктомии (п = 15)

% абс. число % абс. число

СБЗ 61 ±0,3 1,6 ± 0,4x107л 56 ±0,1 1,4±0,4х107л <0,05

СБ4 48 ± 0,4 1,3±0,3х107л 45 ± 0,2 1,0±0,5х107л <0,05

СБ8 15 ±0,6 0,4 ± 0,2x10% 15 ±0,4 0,4 ± 0,2x107л >0,05

СБ16 15 ±0,4 0,5± 0,3x107л 13 ±0,5 0,2±0,01х107л <0,05

СОЮ 8 ± 0,1 0,3 ± 0,2x107л 9 ±0,3 0,4±0,1х107л >0,05

СБ4/СБ8 1,6 ±0,3 1,7 ±0,4 >0,05

Примечание: * - статистически достоверные величины по отношению к группе сравнения

На пятые послеоперационные сутки отмечается статистически достоверное снижение относительно группы сравнения зрелых Т-лимфоцитов, Т-хелперов, Т-натуральных киллеров (табл. 2).

Таблица 2

Показатели клеточного звена системы иммунитета у пациентов после

спленэктомии на пятые послеоперационные сутки (М ± ш)

Показатель Результаты в группах Р*

сравнения (п = 15) после спленэктомии (п = 15)

% абс. число % абс. число

СБЗ 61 ± 0,3 1,6 ± 0,4x107л 56 ±0,1 1,3 ± 0,4 х107л <0,05

СБ4 48 ±0,4 1,3 ± 0,3x107л 45 ± 0,2 1,0 ± 0,5x107л <0,05

СБ 8 15 ±0,6 0,4 ± 0,2x107л 15 ±0,4 0,4 ± 0,2x107л >0,05

С016 15 ±0,4 0,5± 0,3x107л 13 ±0,5 0,1 ±0,01х107л <0,05

СБ20 8 ±0,1 0,3 ± 0,2x107л 5 ±0,3 0,3±0,1х107л >0,05

СБ4/СБ8 1,6 ±0,3 1,3 ±0,4 >0,05

Результаты исследования клеточного звена системы иммунного статуса после спленэктомии, полученные на седьмые и десятые послеоперационные сутки, были идентичны результатам, полученным на пятые послеоперационные сутки.

Таким образом, изучение субпопуляционного состава периферических иммунокомпетентных клеток в группе пациентов позволило установить, что спленэктомия в ближайшем послеоперационном периоде приводит к дефициту Т-клеток (CD3) за счет редукции Т-хелперов (CD4), а также Т-киллеров (CD16). Остальные показатели не изменялись и соответствовали данным, полученным в группе сравнения. Необходимо отметить, что выявленные изменения в клеточном звене системы иммунитета развивались не сразу, а начиная с третьих послеоперационных суток, было зарегистрировано снижение абсолютного содержания CD3 (зрелых Т-лимфоциты), CD4 (Т-хелперс>в) и CD16 (Т-киллеров), количество которых прогрессивно уменьшалось к пятым послеоперационным суткам.

При изучении содержания активированных Т-лимфоцитов (DR), а также CD25 клеток, нами установлено, что на 1-3 послеоперационные сутки данный показатель не изменялся и соответствовал показателям группы сравнения (рис. 1). Значительное увеличение содержания CD25 клеток регистрировалось на 5 послеоперационные сутки (рис. 2). При дальнейшем изучении этих показателей динами отмечено не было.

Выявленные изменения могут быть обусловлены тем, что в норме селезенка является местом взаимодействия иммунокомпетентных клеток с антигенами, циркулирующими в крови, то в случае ее отсутствия с такими антигенами взаимодействуют периферические иммунокомпетентные клетки, что и вызывает их активацию [Павлова И.Е., 2007].

Рис. 1. Содержание DR, С025-иммуннокомпетентных клеток после спленэктомии на 1-3 послеоперационные сутки, %

CD25

я Контроль ш Спленэктомии

О f^

Ж Контроль * Слленэктомия

С025

Рис. 2. Содержание DR, С025-иммуннокомпетентных клеток после спленэктомии на 5 послеоперационные сутки, %

При изучении относительного содержания клеток, экспрессирующих Fas-антиген (CD95), определяющий готовность клеток к апоптозу в ближайшем послеоперационном периоде в динамике, нами установлено, что на 1-3 послеоперационные сутки содержание этих клеток не изменялось и соответствовало данным, полученным в группе сравнения, и значительно возрастал, начиная с четвертых послеоперационных суток. Повышенное этих клеток может быть обусловлено, во-первых, высоким уровнем активированных Т-лимфоцитов, поскольку известно, что молекула CD95 экспрессирована в основном на примированных Т-клетках (CD3, CD4 и CD3, CD8 -лимфоцитах), и его экспрессия возрастает при активации [Ярилин A.A., 2001; Павлова И.Е., 2007], а во-вторых, нарушением соотношения Fas-антигенЛ-аз-лиганд, так как установлено, что Fas-лиганд конститутивно экспрессируется на иммунокомпетентных клетках селезенки [Потапнев М.П., 2002; Павлова И.Е., 2007]. Поскольку известно, что эффекторные и регуляторные функции иммунной системы опосредованы молекулами цитокинов [Тотолян А. А., 2001; Козлов В.А., 2002; Симбирцев A.C., 2002; Павлова И.Е., 2007], которые являются продуктами иммунокомпетентных клеток, и в тоже время сами иммунокомпетентные клетки служат мишенями действия цитокинов. Основными продуцентами цитокинов являются активированные иммунокомпетентные клетки, число которых, как нами установлено, увеличивается после частичного или полного удаления ткани селезенки. Регуляторные эффекты цитокиновой сети построены на равновесии оппозитных пулов молекул, нарушение которого, по всей видимости, может приводить к патологии [Фрейдлин И.С., Тотолян A.A., 2001; Павлова И.Е., 2007].

Изучение влияния спленэктомии на гуморальное звено иммунитета проводилось на первые, третьи, пятые, седьмые и десятые послеоперационные сутки.

Таблица 3

Показатели гуморального звена иммунитета после спленэктомии на седьмые послеоперационные сутки (М ± т)_

Название показателей Группа сравнения (п = 15) После спленэктомии (п = 15) Р

А, г/л 1,3 ±0,2 1,4 ±0,9 > 0,05

в, г/л 6,3 ±0,4 4,6 ± 0,2 <0,05

^ М, г/л 2,4 ±0,3 1,3 ±0,3 <0,05

Е, г/л 1,4 ±0,3 1,3 ±0,6 >0,05

Общее количество комплемента, МЕ/мл 221 ± 0,4 110 ± 0,2 <0,05

СЗ - фракция комплемента, г/л 12,5 ±0,6 9,5 ± 0,4 <0,05

С4 — фракция комплемента, г/л 0,18 ±0,6 0,08 ± 0,3 <0,05

С1-инг. нг/мл 220,4 ± 0,4 220 ±0,1 <0,05

ЦИК, у. е. 30 ± 0,4 40,1 ±0,1 >0,05

ФНОа, пг/мл 3,69 ± 0,2 4,08 ± 0,2 <0,05

ИЛ 10, пг/мл 5,94 ±0,1 9,04 ± 0,2 <0,05

ИЛ-6, пг/мл 1,48 ±0,2 2,09 ±0,1 <0,05

ИЛ-8, пг/мл 26,1 ±0,2 26,1 ±0,03 >0,05

ИЛ-4, пг/мл 0,81 ±0,1 0,80 ±0,1 >0,05

ИЛ-10, пг/мл 29,8 ± 0,3 29,7 ± 0,2 >0,05

ИЛ-2, пг/мл 0,08 ± 0,1 0,41 ±0,1 <0,05

ИНФу, пг/мл 4,02 ± 0,1 6,18 ±0,01 <0,05

Фактор Н, нг/мл 32,8 ± 0,3 32,1 ±0,2 >0,05

ФИ,% 53,2 ± 11 53,1 ±0,2 >0,05

ФЧ, абс. 5,81 ±0,1 5,82 ± 0,03 >0,05

НСТ-сп., % 25,1 ± 0,2 24,6 ±0,1 >0,05'

НСТ-ст., % 31,4 ±0,3 31,3 ± 0,1 >0,05

В результате проведенного исследования установлено, что после спленэктомии на первые послеоперационные сутки, показатели гуморального звена системы иммунного статуса не изменялись и соответствовали данным группы сравнения. На третьи послеоперационные сутки спленэктомия приводит к увеличению провоспалительных цитокинов: ИНФу, ИЛ-1Р, ИЛ-2, ИЛ-6, ФНОа периферическими иммунокомпетентными клетками, кроме того отмечается увеличение ЦИК. На пятые послеоперационные сутки в группе пациентов после спленэктомии зарегистрировано снижение количества 1§М, При этом отмечается увеличение провоспалительных цитокинов: ИНФу,

ИЛ-1р, ИЛ-2, ИЛ-6, ФНОа, отмечалось увеличение ЦИК. На седьмые послеоперационные сутки в группе пациентов после спленэктомии зарегистрировано уменьшение общего количества комплемента, его СЗ- и С4-фракции. При этом оставалось сниженным количество 1§М, ^О, увеличение провоспалительных цитокинов: ИНФу, ИЛ-1(3, ИЛ-2, ИЛ-6, ФНОа и ЦИК (табл. 3). На десятые послеоперационные сутки показатели гуморального звена иммунитета не изменялись и соответствовали данным, полученным на седьмые послеоперационные сутки.

Таким образом, проведенные исследования показывают, что спленэктомия приводит к следующим изменениям в гуморальном звене системы иммунитета: на первые послеоперационные сутки — изменений в гуморальном звене системы иммунитета не происходит. На третьи послеоперационные сутки регистрируется увеличение провоспалительных цитокинов: ИНФу, ИЛ-1р, ИЛ-2, ИЛ-6, ФНОа периферическими иммунокомпетентными клетками, кроме того отмечается увеличение ЦИК. На пятые послеоперационные сутки происходит снижение количества ^М, и дальнейшее увеличение провоспалительных цитокинов: ИНФу, ИЛ-1 р, ИЛ-2, ИЛ-6, ФНОа и ЦИК, а к седьмым послеоперационным суткам - уменьшение общего количества комплемента, его СЗ- и С4-фракций. Остальные показатели не изменялись и соответствовали данным группы сравнения.

Из представленных данных следует, что для коррекции иммунных нарушений предпочтительно использовать иммунокорректоры действующие на клетки моноцитарно-макрофагального ряда, но не являющиеся индукторами синтеза провоспалительных цитокинов, а также препараты, содержащие ^М (например, полиоксидоний).

С целью изучения влияния полиоксидония на изменения иммунного статуса после спленэктомии нами проведены ряд исследований, как на белых крысах, так и на людях. В исследовании приняли участие 15 пациентов, после спленэктомии в сроки позже 12 мес. после операции. Группу сравнения составили 15 относительно здоровых доноров. Препарат вводили внутримышечно в дозе 12 мг один раз в сутки ежедневно, общим курсом 9 инъекций. При изучении иммуностимулирующих свойств полиоксидония учитывались основные показатели иммунного статуса.

В результате проведенных исследований установлено, что после введения полиоксидония в дозе 12 мг отмечается восстановление таких показателей клеточного звена системы иммунитета как зрелые Т-лимфоциты (СБЗ); Т-хелперов (СБ4). В тоже время в анализируемой группе зарегистрировано снижение показателей лимфоцитов несущих рецепторы СБ 16 — натуральные киллеры (табл. 4).

Отсюда следует, что применение полиоксидония в рекомендуемой дозе после спленэктомии предотвращает изменения в клеточном звене системы иммунитета.

Таблица 4

Показатели клеточного звена системы иммунитета в группе пациентов после _ введения полиоксидония в дозе 12 мг (М ± ш)_

Результаты в группах

Показатель сравнения после спленэктомии п*

(п = 15) (п = 15) Р

% абс. число % абс. число

СБЗ 61 ±0,3 1,6±0,4х107л 60 ±0,1 1,4 ± 0,4 хЮ7л >0,05

СБ4 48 ± 0,4 1,3±0,3х107л 47 ± 0,2 1,3 ± 0,5x107л >0,05

СЭ8 15 ±0,6 0,4 ± 0,2x107л 15 ±0,4 0,4 ± 0,2x107л >0,05

СБ16 15 ±0,4 0,5± 0,3x107л 13 ±0,5 0,1±0,1х107л <0,05

СБ20 8 ±0,1 0,3 ± 0,2x107л 5 ±0,3 0,3±0,1хЮ7л >0,05

СБ4/СБ8 1,6 ±0,3 1,5 ±0,4 >0,05

~ — * ' Примечание: * - статистически достоверные величины по отношению к группе сравнения

Таблица 5

Показатели клеточного звена системы иммунитета в группе пациентов после _ введения имунофана в дозе 50 мкг (М ± т)_

Результаты в группах

Показатель сравнения после спленэктомии п*

(п = 15) (п = 15) р

% абс. число . % абс. число

СБЗ 61 ± 0,3 1,6 ± 0,4x107л 56 ±0,1 1,3 ±0,4 х107л <0,05

С04 48 ± 0,4 1,3±0,3х107л 45 ± 0,2 1,0 ± 0,5x107л <0,05

СБ 8 15 ±0,6 0,4 ± 0,2x107л 15 ±0,4 0,4 ± 0,2x107л >0,05

СБ16 15 ±0,4 0,5± 0,ЗхЮ7л 13 ±0,5 0,1±0,1х107л <0,05

СБ20 8 ± 0,1 0,3 ±0,2x107л 5 ±0,3 0,3±0,1х107л >0,05

СИ4/СБ8 1,6 ±0,3 1,3 ±0,4 >0,05

-—-:-______!__* — "> 1 ^ у,у.

Примечание: * - статистически достоверные величины по отношению к группе сравнешм

При изучении клеточного звена системы иммунитета в группе пациентов, которым вводили имунофан в дозе 50 мкг изменений в клеточном звене системы иммунитета не получено, все показатели в группе пациентов после введения этого препарата соответствовали данным, полученным в группе пациентов без введения имунофана. Отсюда следует, что введение имунофана в дозе 50 мкг после спленэктомии не приводит к коррекции иммунологических нарушений в клеточном звене системы иммунитета (табл. 5).

Из представленных данных можно сделать заключение, что с целью коррекции постпленэктомических нарушений в клеточном звене системы иммунитета предпочтение следует отдавать полиоксидонию.

Таблица 6

Показатели гуморального звена иммунитета после спленэктомии и введения полиоксидоний в дозе 12 мг мкг (М ± ш)_

Название показателей Группа сравнения (п = 15) После спленэктомии (п = 15) Р

А, г/л 1,3 ±0,2 1,4 ±0,9 >0,05

1ц в, г/л 6,3 ±0,4 4,6 ±0,2 <0,05

1й М, г/л 2,4 ±0,3 2,3 ±0,3 >0,05

Е, г/л 1,4 ±0,3 1,3 ±0,6 >0,05

Общее количество комплемента, МЕ/мл 221 ± 0,4 115 ±0,2 < 0,05

СЗ - фракция комплемента, г/л 12,5 ±0,6 0,65 ± 0,4 <0,05

С 4 — фракция комплемента, г/л 0,18 ±0,6 0,6 ± 0,3 <0,05

С1-инг. нг/мл 220,4 ± 0,4 120 ±0,1 <0,05

ЦИК, у. е. 30 ± 0,4 29,7 ± 0,1 >0,05

ФНОа, пг/мл 3,69 ± 0,2 3,69 ± 0,2 >0,05

ИЛ1Р, пг/мл 5,94 ±0,1 5,71 ±0,2 >0,05

ИЛ-6, пг/мл 1,48 ±0,2 1,35 ±0,1 >0,05

ИЛ-8, пг/мл 26,1 ± 0,2 21,7 ±0,03 <0,05

ИЛ-4, пг/мл 0,81 ±0,1 0,80 ±0,1 >0,05

ИЛ-10, пг/мл 29,8 ± 0,3 20,1 ±0,2 <0,05

ИЛ-2, пг/мл 0,08 ± 0,1 0,08 ± 0,1 >0,05

ИНФу, пг/мл 4,02 ± 0,1 4,01 ±0,01 >0,05

Фактор Н, нг/мл 32,8 ± 0,3 21,1 ±0,2 <0,05

ФИ, % 53,2 ± 11 31 ±0,2 <0,05

ФЧ, абс. 5,81 ±0,1 1,23 ±0,03 <0,05

НСТ-сп., % 25,1 ± 0,2 23,6 ±0,1 <0,05

НСТ-ст., % 31,4 ±0,3 21,3 ± 0,1 <0,05

При проведении анализа гуморального звена системы иммунитета установлено, что в группе пациентов после введения полиоксидония в дозе 12 мг зарегистрированы следующие изменения: количество 1§Е и соответствовали нормальным величинам; нормализовалось количество ЦИК; количество ФНОа, ИЛ1Р, ИЛ-6, ИЛ-2, ИЛ-4, ИНФу стали соответствовать данным, полученным в группе сравнения здоровых людей. В тоже время показатели общего количества комплемента, его СЗ- и С4-фракций,

фактора Н, ФИ, ФЧ абс., НСТ-сп., НСТ-ст. не изменялись и оставались пониженными (табл. 6).

В группе пациентов после спленэктомии и введения имунофана отмечается восстановление таких показателей, как общего количества

комплимента, его СЗ- и С4-фракций. Все остальные показатели не изменялись, и

соответствовали данным, полученным в группе пациентов после спленэктомии без введения этого препарата (табл. 7).

Таблица 7

Показатели гуморального звена иммунитета после спленэктомии

Название показателей Группа сравнения (п = 15) После спленэктомии (п = 15) Р

^ А, г/л 1,3 ±0,2 1,4 ±0,9 >0,05

в, г/л 6,3 ±0,4 4,6 ±0,2 <0,05

Л% М, г/л 2,4 ± 0,3 0,3 ±0,3 <0,05

Е, г/л 1,4 ±0,3 1,3 ±0,6 <0,05

Общее количество комплемента, МЕ/мл 221 ± 0,4 115 ±0,2 < 0,05

СЗ - фракция комплемента, г/л 12,5 ±0,6 0,65 ± 0,4 <0,05

С4 — фракция комплемента, г/л 0,18 ±0,6 0,6 ± 0,3 <0,05

С1-инг. нг/мл 220,4 ± 0,4 120 ±0,1 <0,05

ЦИК, у. е. 30 ± 0,4 46,7 ±0,1 <0,05

ФНОа, пг/мл 3,69 ± 0,2 1,2 ±0,2 <0,05

ИЛ1Р, пг/мл 5,94 ± ОД 3,21 ±0,2 <0,05

ИЛ-6, пг/мл 1,48 ±0,2 0,22 ± ОД <0,05

ИЛ-8, пг/мл 26,1 ±0,2 21,7 ±0,03 <0,05

ИЛ-4, пг/мл 0,81 ±0,1 0,60 ± ОД <0,05

ИЛ-10, пг/мл 29,8 ± 0,3 20,1 ±0,2 <0,05

ИЛ-2, пг/мл 0,08 ± ОД 0,01 ±0,1 <0,05

ИНФу, пг/мл 4,02 ±0,1 2,01 ± 0,01 <0,05

Фактор Н, нг/мл 32,8 ± 0,3 21,1 ±0,2 <0,05

ФИ, % 53,2 ± 11 31 ±0,2 <0,05

ФЧ, абс. 5,81 ±0,1 1,23 ±0,03 <0,05

НСТ-сп., % 25,1 ± 0,2 23,6 ±0,1 <0,05

НСТ-ст., % 31,4 ±0,3 21,3 ± ОД <0,05

Из этого можно сделать заключение, что введение имунопрофана не приводит к коррекции иммунологических нарушений после спленэктомии в отдаленном послеоперационном периоде.

Таким образом, полученные в ходе исследования результаты показывают, что с целью коррекции иммунологических нарушений после спленэктомии можно применять такой иммуностимулятор, как полиоксидония в дозе 12 мг. Применение этого препарата позволяет корректировать большинство изменений, как в клеточном, так и в гуморальном звене системы иммунитета.

выводы

1. Количество Т-лимфоцитов в тимусе после спленэктомии уменьшается в первые сутки после операции и восстанавливается к десятым. В лимфатических узлах после спленэктомии, начиная с третьих суток, отмечается уменьшение количества лимфоцитов, частичное восстановление этих показателей происходит к девятым суткам. В костном мозге происходит увеличение содержания лимфоцитов со вторых послеоперационных суток, частичное восстановление на седьмые сутки, и полное восстановление на девятые сутки.

2. В клеточном звене иммунитета, начиная с третьих суток после операции, происходит снижение абсолютного содержания лимфоцитов, несущих рецепторы СОЗ, СБ4 и СБ 16, которые прогрессивно снижаются на пятые послеоперационные сутки.

3. В гуморальном звене системы иммунитета начиная, с третьих суток после операции, регистрируется увеличение провоспалительных цитокинов: ИНФу, ИЛ-ф, ИЛ-2, ИЛ-6, ФНОа периферическими иммунокомпетентными клетками, кроме того, отмечается увеличение ЦИК. На . пятые послеоперационные сутки происходят снижение количества и дальнейшее увеличение цитокинов: ИНФу, ИЛ-1Р, ИЛ-2, ИЛ-6, ФНОа и ЦИК, а к седьмым послеоперационным суткам — уменьшение общего количества комплемента, его СЗ- и С4-фракций. Отсюда следует, что удаление селезенки приводит к Т-клеточному дефициту, увеличению содержания активированных Т-клеток, повышенной продукции ИНФу, ИЛ-2, ИЛ-6, ФНОа, снижению концентрации 1§М в сыворотке.

4. В ближайшем послеоперационном периоде на 1-3 сутки после операции содержание относительное содержание клеток, экспрессирующих Раз-антиген (СЮ95) не изменялось, значительно возрастая, начиная с четвертых по седьмые сутки. Содержание активированных Т-лимфоцитов (1Ж), а также СБ25 клеток на 1-3 сутки не изменяется и увеличивается на 5 сутки.

5. В отдаленном послеоперационном после спленэктомии введение полиоксидония в дозе 12 мг приводит к восстановлению СБЗ и С04; 1§Е и ^М, ЦИК, а также количество цитокинов ФНОа, ИЛ1р, ИЛ-6, ИЛ-2, ИЛ-4, ИНФу, что мобилизует адаптационные и защитные силы организма в борьбе с патогенном.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Полученные данные о развитии иммунологических нарушений в ближайшем послеоперационном периоде после удаления селезенки рекомендуем учитывать при выборе терапевтической коррекции пациентов после спленэктомии.

2. С целью коррекции постспленэктомических иммунологических осложнений в отдаленном послеоперационном периоде рекомендуем использовать иммуностимуляторы, из которых предпочтение следует отдавать полиоксидонию, который способствует восстановлению как гуморального, так и клеточного звена иммунитета.

3. Полиоксидоний следует применять внутримышечно в дозе 12 мг один раз в сутки ежедневно, общим курсом 9 инъекций.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Поляков A.B. Изменения некоторых показателей иммунного сталуса у пациентов после спленэктомии в ближайшем послеоперационном периоде // Актуальные вопросы военной медицины (сборник тезисов). СПб, 2006 - С. 12.

2. Поляков A.B. Показатели гуморального звена системы иммунитета после спленэктомии в ближайшем послеоперационном периоде // Актуальные вопросы военной медицины (сборник тезисов). СПб, 2006 - С. 15.

3. Масляков В.В., Ермилов П.В., Поляков A.B. Виды операций не селезенке при ее травме // Успехи современного естествознания— 2012. -№7. -С. 29-35.

4. Масляков В.В., Поляков A.B. Изменения микрофлоры у больных, оперированных на поврежденной селезенке // Успехи современного естествознания -2012. - №10. - С. 23-25.

5. Масляков В.В., Киричук В.Ф., Громов М.С., Поляков A.B. Изменения иммунного статуса у пациентов с повреждениями селезенки в зависимости от выполненной операции // Современные проблемы науки и образования — 2012. - №4 (Электронный журнал). URL: www.science-education.ru/95-4S69 (дата обращения: 01.04.2012).

6. Масляков В.В., Громов М.С., Киричук В.Ф., Поляков A.B. Способ коррекции иммунологических осложнений после спленэкгомпи // Фундаментальные исследования - 2012. - №5. - С. 80-85.

7. Масляков В.В., Киричук В.Ф., Громов М.С., Поляков A.B. Выбор хирургической тактики у пациентов с повреждениями селезенки с позиций изменений иммунного статуса организма // Военно-медицинский журнал - 2012 - №11. - С. 34-38.

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

CD 16 - натуральные киллеры

CD20 - В-клетки

CD3 - зрелые Т-лимфоциты

CD4 - Т-хелперы

CD8 — цитотоксические Т-клетки

АЗКЦ — антителозависимая клеточная цитотоксичность

АОК - антигенобразующие клетки

ГЗТ — гиперчуствительность замедленного типа

ЕКК - естественные клетоки-киллеры

ИЛ-1 (2 и т.д.) - интерлейкин-1 (2 и т.д.)

ИНФу - интерферон у

НСИ-ст. реакция восстановления нитросинего тетразолия стимулированного зимозаном

НСТ-сп. - реакция восстановления нитросинего тетразолия спонтанного

ФИ — фагоцитарный индекс

ФЧ - фагоцитарное число

ЦИК — циркулирующие иммунные комплексы

Автореферат

ПОЛЯКОВ Александр Вячеславович

ПАТОФИЗИОЛОГИЧЕСКИЕ МЕХАНИЗМЫ ПОСТСПЛЕНЭКТОМИЧЕСКИХ ИММУНОЛОГИЧЕСКИХ НАРУШЕНИЙ И ВОЗМОЖНОСТЬ ИХ КОРРЕКЦИИ (клинико-эксперимеигалыюе исследование)

Отпечатано в типографии «Новый проект» г. Саратов, Московская, 160 тел.: 26-38-48 sar-print.ru

Актуальность темы. Многочисленными исследованиями доказано, что спленэктомия, несомненно, приводит к снижению иммунной защиты организма, что проявляется развитием гнойно-септических осложнений, которые в некоторых случаях могут привести к летальному исходу (Seifrt J. et al., 2006). По данным В.В. Маслякова и соавт. (2011) у 16 - 55% оперированных больных возникают разнообразные гнойно-септические осложнения. Из них более часто наблюдают пневмонии (33%), абсцессы брюшной полости (11%) и нагноения послеоперационных ран (Усов Д.В., 1985; Fri D.E. et al., 2005). По данным, представленным В. Ly et D. Alberechstn (2001), послеоперационные осложнения в связи с травмами селезенки встречались у 49 (22%) больных. Из них в 17% наблюдений отмечено развитие гнойно-септических осложнений: пневмонии, септицемии, нагноение послеоперационных швов, абсцессы брюшной полости.

Сложное строение лимфатических фолликулов селезенки, включающих тимусзависимые, тимуснезависимые и макрофагальные элементы, создает благоприятные условия в органе для кооперации клеток в иммунном ответе [Агеев А.К., 1976, Шапкин Ю.Г. и соавт., 2008]. В этом органе синтезируется неспецифический сывороточный, биологически активный тетрапептид тафтсин, полученный путем отщепления от IgG трипсином и названный в честь Тафтского университета, где впервые проведены эти исследования [Мироненко О.Н., 1985; Constantopoulos A. et al., 1983; Kunz Е. et al., 1990]. Он находится в составе Fd-фрагмента IgG и в незначительных дозах (0,05-0,1 мкг/мл), усиливает фагоцитоз и другие функциональные свойства макрофагов и полиморфно-ядерных лейкоцитов [Шапкин Ю.Г. и соавт., 2008]. Тафтсин представляет собой неотъемлемый компонент IgG и освобождается in vitro в виде свободного тетрапептида (Ь-Тре-Ь-Лиз-Ь-Про-Ь-Арг) после энзиматозного расщепления [Encke A. et al., 1986]. Этот тетрапептид стимулирует естественные клетки-киллеры, реализуя свое действие через нейраминовую кислоту клеточной мембраны [Шапкин Ю.Г. и соавт., 2008]. Кроме этого, тафтсин стимулирует гексозамонофосфатный шунт что, через образование активных кислородосодержащих компонентов усиливает бактерицидные и антиопухолевые свойства макрофагальных клеток [Павлова И.Е., 2007]. Установлено, что тафтсин стимулирует выделение макрофагами перекисных анионов (02) и перекиси водорода, тромбоксана Вг, чем усиливает макрофагзависимую токсичность [Criado E.J. et al., 1983]. В селезенке осуществляется синтез IgM, IgC, вырабатывается СЗ- и С4-фрагменты комплемента [Чуманов А.Ю., 2011]. Кроме того, в этом органе происходит синтез компонентов комплемента, которые включаются в альтернативный путь его активации [Siuger D., 1976]. Так же в селезенке содержится большое количество пропердина [Criado E.J. et al., 1983]. Селезенке принадлежит активное участие в процессе опсонизации - изменения клеточной поверхности патогенна или других частиц, что приводит к захвату опсонированных клеток фагоцитами. По мнению E.J. Criado et al., 1983 процесс опсонизации связан с наличием иммуноглобулинов, причем, из них, хорошо опсонирует только IgG. В системе комплемента эту функцию выполняет практически один компонент -СЗЬ, который присутствует в этом органе [Okita K.et al., 1977].

Вместе с тем, несмотря на большое количество публикаций, посвященных этому вопросу, многие аспекты патогенетических нарушений иммунного статуса и способов их коррекции остаются малоизученными.

Цель исследования: определить патофизиологические механизмы иммунологических нарушений после спленэктомии и возможность их коррекции.

Задачи исследования: 1. Изучить в условиях эксперимента влияние спленэктомии на изменения количества лимфоцитов в тимусе, лимфатических узлах и костном мозге в ближайшем послеоперационном периоде и динамику этих изменений.

2. Оценить изменения в клеточном звене иммунитета после спленэктомии в ближайшем послеоперационном периоде.

3. Определить влияние спленэктомии на изменения в гуморальном звене иммуннитета в ближайшем послеоперационном периоде.

4. Изучить относительное содержание клеток, экспрессирующих Раэ-антиген (С095+), а так же С025+-иммуннокомпетентных клеток в ближайшем послеоперационном периоде после спленэктомии.

5. На основании полученных данных обосновать применение полиоксидония для коррекции иммунных нарушений после спленэктомии в отдаленном послеоперационном периоде.

Научная новизна

1. На основании экспериментального комплексного иммунологического исследования установлено, что в ближайшем послеоперационном периоде после спленэктомии развиваются изменения в периферических органах иммунной системы: тимусе, где отмечается уменьшение количества Т-лимфоцитов в первые послеоперационные сутки и восстановление к десятым.

2. В костном мозге происходит увеличение содержания лимфоцитов со вторых послеоперационных суток, частичное восстановление регистрируется на седьмые послеоперационные сутки, и полное восстановление на девятые послеоперационные сутки.

3. В лимфатических узлах, начиная с третьих суток, отмечается уменьшение количества лимфоцитов, частичное восстановление которых происходит к девятым суткам.

4. Установлено, что удаление селезенки в ближайшем послеоперационном периоде ведет к нарушениям как в клеточном звене системы иммунитета, где происходит снижение абсолютного содержания лимфоцитов несущих и СО 16 рецепторы, которые прогрессивно снижаются на пятые послеоперационные сутки, так и в гуморальном звене системы иммунитета, где развивается Т-клеточный дефицит, увеличивается содержание активированных Т-клеток, повышается продукция ИНФу, ИЛ-2, ИЛ-6, ФНОа, снижается концентрация ^М в сыворотке. Кроме того, спленэктомия приводит к повышению БаБ-антиген-положительных клеток. Практическая значимость Полученные экспериментальные данные о развитии иммунологических нарушений в ближайшем послеоперационном периоде после удаления селезенки следует учитывать при выборе терапевтического лечения таких больных. На основании полученных данных доказано применение иммуномодуляторов для лечения иммунных рассройств. При этом предпочтение следует отдавать полиоксидонию, данный препарат способствует восстановление как гуморального, так и клеточного звена иммунитета. Доказано, что введение полиоксидония приводит к восстановлению следующих показателей клеточного звена системы иммунитета: лимфоцитов, несущих рецепторы СБЗ+ и С04+. В гуморальном звене системы после введения этого препарата происходит восстановление следующих показателей: ^Е и ^М, ЦИК, а также цитокинов ФНОа, ИЛ 1(3, ИЛ-6, ИЛ-2, ИЛ-4, ИНФу, это приводит к мобилизации всех адаптационных и защитных сил организма в борьбе с патогеном.

Основные положения диссертации, выносимые на защиту

1. В клеточном звене иммунитета удаление селезенки по поводу ее травмы у пациентов приводит к снижению СБЗ+, С04+ и СБ16+. В гуморальном звене системы иммунитета увеличивается содержание ИНФу, ИЛ-1(3, ИЛ-2, ИЛ-6, ФНОа, снижается количество ^М, общего количества комплемента, его СЗ- и С4-фракций.

2. В результате применения полиоксидоний в дозе внутримышечно в дозе 12 мг один раз в сутки ежедневно, общим курсом 9 инъекций происходит восстановление как клеточного - СЭЗ+ и СЭ4+, так и гуморального - ^Е и ^М, ЦИК, а также количество цитокинов ФНОа, ИЛ 1(3, ИЛ-6, ИЛ-2, ИЛ-4, ИНФу звеньев системы иммунитета.

Реализация результатов исследования

Результаты диссертационного исследования внедрены в практику МУЗ «Городская больница №1 г. Энгельса», ФГБУ «354 Окружной военный клинический госпиталь МО РФ», используются при чтении лекций и на практических занятиях НОУ ВПО СМИ «РЕАВИЗ», ГБОУ ВПО «Саратовский государственный медицинский университет».

Апробация диссертации

Материалы диссертации доложены на Первом съезде амбулаторных хирургов (С-Петсрбург, 2004). Материалы работы обсуждены на заседании кафедр хирургии НОУ ВПО Саратовский филиал Самарского медицинского института «РЕАВИЗ», кафедры патологической физиологии ГБОУ ВПО «Саратовский государственный медицинский университет».

Публикации

По теме диссертации опубликовано 7 научных работ, из них 3 - в журналах, входящих в Перечень рекомендованных ВАК РФ.

Объем и структура диссертации

ВЫВОДЫ

1. Количество Т-лимфоцитов в тимусе после спленэктомии уменьшается в первые сутки после операции и восстанавливается к десятым. В лимфатических узлах после спленэктомии, начиная с третьих суток, отмечается уменьшение количества лимфоцитов, частичное восстановление этих показателей происходит к девятым суткам. В костном мозге происходит увеличение содержания лимфоцитов со вторых послеоперационных суток, частичное восстановление на седьмые сутки, и полное восстановление на девятые сутки.

2. В клеточном звене иммунитета, начиная с третьих суток после операции, происходит снижение абсолютного содержания лимфоцитов, несущих рецепторы СБЗ, СБ4 и СБ 16, которые прогрессивно снижаются на пятые послеоперационные сутки.

3. В гуморальном звене системы иммунитета начиная, с третьих суток после операции, регистрируется увеличение провоспалительных цитокинов: ИНФу, ИЛ-1Р, ИЛ-2, ИЛ-6, ФНОа периферическими иммунокомпетентными клетками, кроме того, отмечается увеличение ЦИК. На пятые послеоперационные сутки происходят снижение количества и дальнейшее увеличение цитокинов: ИНФу, ИЛ-1|3, ИЛ-2, ИЛ-6, ФНОа и ЦИК, а к седьмым послеоперационным суткам -уменьшение общего количества комплемента, его СЗ- и С4-фракций. Отсюда следует, что удаление селезенки приводит к Т-клеточному дефициту, увеличению содержания активированных Т-клеток, повышенной продукции ИНФу, ИЛ-2, ИЛ-6, ФНОа, снижению концентрации ^М в сыворотке.

4. В ближайшем послеоперационном периоде на 1-3 сутки после операции содержание относительное содержание клеток, экспрессирующих Раз-антиген (СБ95) не изменялось, значительно возрастая, начиная с четвертых по седьмые сутки. Содержание активированных Т-лимфоцитов (БЛ), а также СБ25 клеток на 1-3 сутки не изменяется и увеличивается на 5 сутки.

5. В отдаленном послеоперационном после спленэктомии введение полиоксидония в дозе 12 мг приводит к восстановлению СЭЗ и СБ4; ^Е и ^М, ЦИК, а также количество цитокинов ФНОа, ИЛ 1(3, ИЛ-6, ИЛ-2, ИЛ-4, ИНФу, что мобилизирует адаптационные и защитные силы организма в борьбе с патогеном.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Полученные данные о развитии иммунологических нарушений в ближайшем послеоперационном периоде после удаления селезенки рекомендуем учитывать при выборе терапевтической коррекции пациентов после спленэктомии.

2. С целью коррекции постспленэктомических иммунологических осложнений в отдаленном послеоперационном периоде рекомендуем использовать иммуномодуляторы, из которых предпочтение следует отдавать полиоксидонию, который способствует восстановлению как гуморального, так и клеточного звена иммунитета.

3. Полиоксидоний следует применять внутримышечно в дозе 12 мг один раз в сутки ежедневно, общим курсом 9 инъекций.