Хирургическая коррекция постспленэктомического синдрома методом ксенотрансплантации культур клеток (экспериментальное исследование)

Беляева, Ирина Геннадьевна

Диссертации по медицине → Хирургия

Автореферат и диссертация по медицине (14.00.27) на тему:Хирургическая коррекция постспленэктомического синдрома методом ксенотрансплантации культур клеток (экспериментальное исследование)

ДИССЕРТАЦИЯ

Хирургическая коррекция постспленэктомического синдрома методом ксенотрансплантации культур клеток (экспериментальное исследование) - диссертация, тема по медицине

АВТОРЕФЕРАТ

Беляева, Ирина Геннадьевна Санкт-Петербург 2004 г.

Ученая степень: кандидата медицинских наук

ВАК РФ: 14.00.27

Автореферат диссертации по медицине на тему Хирургическая коррекция постспленэктомического синдрома методом ксенотрансплантации культур клеток (экспериментальное исследование)

На правах рукописи

БЕЛЯЕВА Ирина Геннадьевна

ХИРУРГИЧЕСКАЯ КОРРЕКЦИЯ ПОСТСПЛЕНЭКТОМИЧЕСКОГО СИНДРОМА МЕТОДОМ КСЕНОТРАНСПЛАНТАЦИИ КУЛЬТУР КЛЕТОК

( экспериментальное исследование)

14.00.27- хирургия

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

САНКТ- ПЕТЕРБУРГ

2004

Работа выполнена в Санкт-Петербургском государственном медицинском университете имени академика И.П.Павлова (ректор - член-корреспондент РАМН, профессор Н.А.Яицкий).

Научный руководитель: Доктор медицинских наук Олег Всеволодович Галибин

Официальные оппоненты: Доктор медицинских наук,

профессор Николай Анатольевич Майстренко

Доктор медицинских наук,

профессор Сергей Васильевич Васильев

Ведущая организация - Научно-исследовательский институт трансплантологии и искусственных органов Министерства Здравоохранения России

Защита диссертации состоится « » 200 г. в час. на заседании

Диссертационного Совета Д 208.090.05 Санкт-Петербургского государственного медицинского университета имени академика И.П.Павлова по адресу: 197089, Санкт-Петербург, ул. Л.Толстого, д.6/8

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке университета Автореферат разослан « » 2003 года.

Ученый секретарь Диссертационного Совета, доктор медицинских наук

Марина Олеговна Мясникова

2004-4

24421

_-3-

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность проблемы. Изучение возможностей коррекции нарушений иммунного ответа и системы гемостаза после спленэктомии (СЭ) остается актуальным и в настоящее время. Спленэктомия -распространенное оперативное вмешательство, показаниями к которому служат травмы, инфаркты, кисты, опухоли, абсцессы селезенки, ряд гематологических заболеваний (гемолитические и гипопластические анемии, тромбоцитопении, болезнь Ходжкина и другие) [Климанский В.А., 1991; Buntain W.L., Lynn H.B., 1979; Fotiadis С, et al., 1992; Sharma O.P., et al., 2002]. Кроме того, СЭ часто является этапом хирургического вмешательства при операциях на органах брюшной полости (при онкологическом их поражении, при ятрогенных разрывах, составляющих от 14 до 40% от общего количества травм селезенки) [Cassar К., Munro A., 2002; Sabau P.J., et al., 1999]. Ряд состояний (пожилой возраст, голодание, авитаминозы) может привести к функциональной асплении, которая, как и спленэктомия, подвергает пациента риску тяжелых инфекционных заболеваний [Бутенко Г.М, 1990]. Под термином

«постспленэктомический синдром» (ПСС) мы понимаем снижение общего тонуса и работоспособности, повышенную восприимчивость к инфекциям за счет снижения иммунорезистентности, повышение количества тромбоцитов в периферической крови, вследствие чего у больных наблюдается склонность к тромбоэмболическим осложнениям.

В настоящее время для коррекции постспленэктомического синдрома применяются консервативные (иммунокорригирующая, антиагрегантная и антикоагулянтная терапия, лечение возникших осложнений) и хирургические методы. Среди последних следует отметить метод аутотрансплантации ткани селезенки, дающий в большинстве случаев хорошие функциональные результаты [Гринев К.М., 1990; Benjamin J.T., et al., 1978; Livingston CD., et al., 1982; Patel J., et al., 1982]. Однако, в силу ряда причин, эта операция не всегда выполнима (онкологическое, септическое поражение органа, отсутствие технических возможностей) [Григорьев Е.Г. и соавт., 1996; Шабунин А.В. и соавт., 2000; Яжик СИ., Краля И.В., 2000]. Органная трансплантация селезенки - трудоемкая операция, требующая проведения иммуносупрессивной терапии в послеоперационном периоде, не получила широкого распространения [Аскерханов Р.П., Сафаров СЮ., 1987].

Таким образом, поиск новых путей компенсации ПСС продолжает оставаться актуальной проблемой современной хирургии.

ЦЕЛЬ И ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ. Целью настоящего исследования является экспериментальное обоснование метода ксенотрансплантации

j РОС.. НАЦИОНАЛЬНА.!

БИБЛИОТЕКА I СПетербу

• ОЭ

(КсТ) культур клеток селезенки для коррекции постспленэктомического синдрома (доказательство переживания и функционирования клеточного трансплантата в организме реципиента). Задачи исследования:

1. Доказать морфологическую состоятельность клеток селезенки в культуре.

2. Определить оптимальный срок культивирования клеток селезенки.

3. Доказать морфологическую и функциональную состоятельность трансплантированной культуры клеток селезенки в организме реципиента.

4. Определить срок переживания клеточного трансплантата в организме реципиента.

5. Исследовать влияние трансплантации культур клеток селезенки на течение постспленэктомического синдрома.

6. Разработать новый метод инкапсулирования культур клеток селезенки для иммунопротекции клеточного трансплантата в организме реципиента.

7. Изучить закономерности неоорганогенеза селезенки после КсТ культур клеток.

НАУЧНАЯ НОВИЗНА. Впервые предлагается новый хирургический метод коррекции постспленэктомического синдрома

ксенотрансплантацией клеточных культур.

Впервые проводится комплексная оценка морфологической и функциональной состоятельности клеток селезенки в культуре и после ее трансплантации на сроках до 6 месяцев.

Определен оптимальный срок культивирования клеток селезенки. Проведена сравнительная характеристика культур клеток селезенки, полученных от разных типов доноров.

Впервые для мониторинга за функционированием трансплантата культур клеток селезенки в организме реципиента обосновано использование определения активности комплемента по альтернативному пути.

Впервые для иммунопротекции клеточных культур был применен метод инкапсулирования при поочередном нанесении противоположно заряженных полиэлектролитов.

ОСНОВНЫЕ ПОЛОЖЕНИЯ, ВЫНОСИМЫЕ НА ЗАЩИТУ:

1. При культивировании клеток селезенки стромальные клетки обладают высокой пролиферативной активностью, в то время как лимфоциты и эритроциты донора подвергаются элиминации.

2. Оптимальный срок культивирования фетальных и неонатальных стромальных клеток селезенки составляет 8-10 суток.

-53. Доказана морфологическая и функциональная состоятельность трансплантированной культуры клеток селезенки в организме реципиента на сроках до 6 месяцев.

4. Ксенотрансплантация культур стромальных клеток селезенки приводит к коррекции постспленэктомического синдрома нормализуются показатели системы кроветворения, гемостаза, иммунного статуса.

5. Метод послойного нанесения полиэлектролитов может быть применен для инкапсулирования клеточных культур селезенки. При этом культура сохраняет свою жизнеспособность как in vitro, так и in vivo

6. В процессе переживания клеточного трансплантата, в организме реципиента формируется стромальный каркас клеток донора, заполненный кровяными клетками реципиента по типу нормального органного строения селезенки.

ПРАКТИЧЕСКАЯ ЦЕННОСТЬ РАБОТЫ. Ксенотрансплантация культур клеток селезенки является альтернативным методом коррекции ПСС. Использование клеточных культур с оптимальным сроком культивирования позволяет достичь положительных результатов трансплантации. Модифицированный метод нанокапсулирования может быть использован для иммунопротекции не только культур клеток селезенки, но и других клеточных систем.

РЕАЛИЗАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ РАБОТЫ. Результаты работы внедрены в учебный процесс кафедры общей хирургии, кафедры гематологии, трансфузиологии и трансплантологии факультета постдипломного образования и факультативного курса по трансплантологии Санкт-Петербургского Государственного Университета им.ак. И.П.Павлова; в научно-методические разработки отделов экспериментальной медицины и патоморфологии Научно-исследовательского Центра СПбГМУ им.ак. И.П.Павлова. № гос. регистрации темы 01.200.212876

АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ. Материалы и основные положения диссертации изложены: на международном симпозиуме «Биология клетки в культуре» (Санкт-Петербург, 16-18 октября 1999); на III научной конференции с международным участием «Дни иммунологии в Санкт-Петербурге '99» (Санкт-Петербург, 18-20 мая 1999); на VII межвузовской конференции СНО и молодых ученых «Вопросы прикладной анатомии и хирургии», (Санкт-Петербург, апрель 1999); на I Всеукраинской конференции студентов и молодых ученых "Трансплантология сегодня" (7-8 декабря 2000, Донецк); на IX региональной конференции молодых ученых «Вопросы прикладной анатомии и хирургии» (Санкт-Петербург,

апрель 2001); на научно-практической конференции с международным участием «Санкт-Петербургские научные чтения - 2001» (Санкт-Петербург, январь 2001); на международном симпозиуме «Биология клетки в культуре» (Санкт-Петербург, 16-18 октября 2001); на научно-практической конференции с международным участием «Санкт-Петербургские научные чтения - 2002» (Санкт-Петербург, январь 2002); на 13-й международной конференции молодых ученых «Человек. Природа. Общество» (Санкт-Петербург, 26-30 декабря 2002); на XI региональной конференции СНО и молодых ученых медицинских ВУЗов и лабораторий НИИ «Вопросы прикладной анатомии и хирургии» (Санкт-Петербург, апрель 2003); на международной конференции «Проблемы тканевой и клеточной трансплантации» (Ивано-Франковск, 3-4 сентября 2003).

СТРУКТУРА ДИССЕРТАЦИИ. Работа изложена на страницах

машинописи (без списка литературы) и состоит из введения, обзора литературы (1 глава), материалов и методов исследования (2 глава), результатов исследований (3 глава), обсуждения результатов (4 глава), заключения и выводов.

Диссертация иллюстрирована рисунками, таблицами и

диаграммами. Библиографический указатель содержит названий работ отечественных ( ) и зарубежных ( ) авторов.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

1. Характеристика донорского материала. Для приготовления культур клеток селезенки использовались четыре типа доноров: плоды человека, новорожденные поросята, взрослые человеческие доноры, половозрелые крысы. Плоды человека погибли на сроках 16-22 недели внутриутробного развития в результате операции малого кесарева сечения по медицинским и социальным показаниям. Срок тепловой ишемии фетальных донорских органов не превышал одного часа. В качестве доноров также были использованы поросята породы «Белая русская» однодневного возраста. Для приготовления культур взрослых клеток использовали органы пациентов, подвергавшихся спленэктомии по поводу травматического повреждения селезенки. Удаленную типичным способом селезенку перфузировали через культю селезеночной артерии и пульпу 0,9% раствором хлорида натрия в объеме 1000 мл с добавлением 10000 ЕД гепарина. Половозрелые крысы линии Wister были получены из питомника РАН «Рапполово».

2. Получение культур клеток селезенки. Для приготовления культуры клеток селезенки использовалась модифицированная нами методика

выращивания клеточных культур эндокринных органов. Взвесь клеток одного органа культивировалась в 50 мл питательной среды в термостате ТПИ-01 газопроточный" при температуре 37° С со сменой питательной среды на следующий день после начала культивирования, а затем через каждые сутки. Срок культивирования составлял 6-15 дней.

3.Материалы и методы инкапсулирования культур клеток селезенки. Отработка методики послойного нанесения полиэлектролитов [Sukhorukov G.B., 2002] для инкапсулирования живых клеточных систем производилась в Институте Коллоидов и Границ Раздела Макса Планка (Потсдам, Германия). Для подбора биологически совместимых полиэлектролитных пар, способных формировать устойчивые комплексы как in vitro, так и in vivo, были исследованы возможные комбинации следующих полиэлектролитов: альгинат натрия, декстран сульфат, желатин типа А, поли-Л-лизин и хитозан. Исследование полученных инкапсулированных объектов проводилось при световой и конфокальной микроскопии.

4. Материалы и методы моделирования постспленэктомического синдрома и трансплантации культур клеток селезенки. Эксперимент по оценке морфологической состоятельности трансплантатов проводился на 200 мелких лабораторных животных (половозрелых крысах линии Wister). Животные были разделены на 5 групп:

1. Ксенотрансплантация культуры клеток селезенки, полученных от новорожденных поросят

2. Ксенотрансплантация культуры клеток селезенки, полученных от плодов человека

3. Ксенотрансплантация культуры клеток селезенки, полученных от взрослых человеческих доноров

4. Аллотрансплантация культуры клеток селезенок, полученных от взрослых крыс

5. Аллотрансплантация инкапсулированной культуры клеток селезенок, полученных от взрослых крыс

Количественное распределение животных по группам представлено в таблице № 1.

Под общей анестезией удалялась селезенка. Наложением кисетного шва из сальника формировался карман объемом около 0,5-1 см3. Через канюлю шприца вводилась культура, кисет затягивался, рана послойно ушивалась. Для оценки функциональной состоятельности трансплантата в организме реципиента 6 беспородным собакам обоего пола массой 18-20 кг после типичной спленэктомии была выполнена ксенотрансплантация культуры клеток селезенки, полученной от новорожденных поросят, в большой

сальник. Контрольную группу составили 4 беспородные собаки обоего пола массой 18-20 кг, подвергшихся спленэктомии без трансплантации. Таблица № 1. Количественное распределение животных-реципиентов клеточных культур по группам

Тип трансплантации Вид донора Количество крыс-реципиентов

Ксенотрансплантация (донорский материал, полученный от свиней) Новорожденные поросята 90

Ксенотрансплантация (человеческий донорский материал) Плоды человека 30

Операционный материал 30

Аллотрансплантация Половозрелые крысы 30

Аллотрансплантация инкапсулированной культуры Половозрелые крысы 20

5. Материалы и методы морфологической оценки культур клеток селезенки. Для оценки жизнеспособности культур клеток выполнялись морфологические исследования на сроках 3,5,7,9,11,13 и 15 суток культивирования. Забор эксцизионных препаратов трансплантатов осуществлялся на сроках 15, 30,45, 60, 75, 90 и 180 суток после операции. Микропрепараты готовились по обычной методике с окраской гематоксилин-эозином. Оценку препаратов проводили на световом микроскопе и «оптико-электронной системе для исследования малоконтрастных биологических объектов».

6. Методы оценки постспленэктомического синдрома и функции трансплантатов культур клеток. Оценка функциональных результатов ксенотрансплантации проводилась на крупных лабораторных животных (собаках). Все исследуемые параметры определялись в дооперационном периоде, затем каждый месяц после операции на протяжении 10 месяцев. Определялись следующие параметры:

1. Общее состояние животных (внешний вид, поведение, аппетит, наличие послеоперационных осложнений)

2. Общеклинические показатели (клинический анализ крови, коагулограмма). Исследования проводились в Центральной Клинико-диагностической Лаборатории СПбГМУ с использованием оборудования указанного подразделения.

3. Иммунологические показатели (поглотительная активность нейтрофилов, реакция торможения миграции лейкоцитов, активность комплемента по альтернативному пути). Два первых параметра исследовались по стандартным методикам в иммунологической лабораторш! СПбГМУ им.ак. И.П.Павлова. Уровень активности комплемента сыворотки крови определялся с использованием

фотометрической методики, разработанной на кафедре биохимии СПбГМУ им. акад. И. П. Павлова. Уровень активности комплемента оценивался по следующим параметрам: lag t - индукционный период; V-скорость комплементзависимого лизиса эритроцитов кролика; ГЕК -гемолитическая ёмкость комплемента.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ 1. Оценка морфологических показателей культур клеток селезенки до трансплантации. При исследовании микропрепаратов культур клеток, полученных от фетальных и неонатальных доноров на различных сроках было выявлено, что до 5-7 суток 95% клеток жизнеспособны, наблюдается большое количество митозов. На сроке до 3 суток в культуре присутствуют клетки стромального микроокружения, эритроциты, лейкоциты. На сроках более 3 суток при смене среды происходит элиминация эритроцитов. Лейкоциты донора переживают в культуре до 7 суток, формируя клеточные скопления округлой формы, которые затем подвергаются лизису. По периферии скоплений располагаются фибробластоподобные клетки. Клетки стромального микроокружения, располагающиеся в виде тяжей, переживают в культуре до 15 суток. Оптимальный срок культивирования составил 8-10 суток.

При исследовании культур клеток селезенки, полученных от взрослых человеческих и крысиных доноров, были выявлены следующие закономерности. Эритроциты доноров элиминируются в течение первых суток культивирования; лимфоидные скопления наблюдаются до 5-х суток. На 7 сутки культура представлена цепочками стромальных клеток селезенки. Таким образом, оптимальный срок культивирования составил 6-8 суток.

2. Инкапсулирование культуры клеток селезенки. На поверхность живой культуры клеток селезенки удалось адсорбировать следующие пары полиэлектролитов: альгинат натрия - хитозан, декстран сульфат -хитозан , альгинат натрия - поли - Л- лизин .

При микроскопическом исследовании инкапсулированных культур с использованием оптико-электронной системы на различных сроках культивирования, существенных различий с неинкапсулированными культурами выявить не удалось. Полимер распределялся по поверхности культуры, частично проникая в межклеточное пространство. Клетки сохраняли жизнеспособность, к моменту трансплантации (10 сутки культивирования) культура в основном была представлена стромальными клетками. Таким образом, была доказана жизнеспособность инкапсулированной культуры клеток.

-103. Морфологическая оценка трансплантатов культур клеток селезенки. При вскрытии животных на сроках 15-90 суток на месте пересаженных ксенокультур клеток селезенки были обнаружены васкуляризованные образования тканевой плотности розоватого цвета размером до 1 см3. В окружающих тканях признаков воспаления не выявлено.

При морфологическом исследовании эксцизионных биоптатов на сроках 15, 30, 45, 60, 75 суток и, далее, до 6 месяцев после трансплантации обнаружено, что клетки селезенки сохраняют свою жизнеспособность в организме реципиента. На ранних сроках (7-14 суток) после трансплантации на фоне жировых клеток сальника определяются стромальные кроветворные клетки и отдельные лимфоциты. После 14 суток отмечается активное прорастание кровеносных сосудов, лимфоидные клетки в окружении стромального кроветворного микроокружения формируют фолликулоподобные скопления. На сроках до 6 месяцев после трансплантации в микропрепаратах наблюдается картина органоподобного лимфоидного образования без четкого разделения на красную и белую пульпу. После 6 месяцев наблюдается деградация вновь образованной структуры - на фоне большого количества жировой и соединительной ткани определяются единичные лимфатические фолликулы. Таким образом, доказана морфологическая состоятельность клеточного ксенотрансплантата в организме реципиента на сроках до 6 месяцев. При морфологическом исследовании препаратов, приготовленных из трансплантатов культур клеток селезенки взрослых доноров, обнаружено, что процессы замещения пересаженных клеток соединительнотканными структурами происходят в значительно более ранние сроки. Образование соединительно-тканной капсулы отмечается через 14 суток после операции, на сроках более 1,5 месяцев в морфологической картине преобладает рубцовая ткань.

При эксцизии биоптатов трансплантатов инкапсулированных аллокультур признаков воспаления в окружающих тканях и спленоиде не выявлено. При микроскопической оценке препаратов обнаружено, что сроки развития инкапсулированных трансплантатов соответствуют таковым при ксенотрансплантации фетальных и неонатальных клеток. Капсула на поверхности трансплантата сохраняет свою целостность. Таким образом, при использовании метода послойного нанесения полиэлектролитов достигается иммунопротекция клеточного трансплантата.

4. Функциональная оценка модели постспленэктомического синдрома. После спленэктомии у животных было отмечено ухудшение

общего состояния: отмечалась отрицательная динамика массы тела, ухудшение аппетита, шерсть выглядела тусклой, отмечалась гиподинамия. У 3 животных контрольной группы (спленэктомия без трансплантации) в раннем послеоперационном периоде отмечались гнойно-воспалительные заболевания, потребовавшие назначение антибактериальной терапии.

У животных контрольной группы формирование

постспленэктомического синдрома было доказано лабораторными методами. В клинических анализах крови у всех животных отмечалось изменение морфологии форменных элементов крови - анизоцитоз, пойкилоцитоз, появление телец Жолли. Так же отмечалась тенденция к снижению уровня гемоглобина (НЬ) крови. В клинических анализах крови спленэктомированных животных отмечался моноцитоз. У спленэктомированных животных уже на 1-й месяц после операции количество моноцитов увеличивается более, чем в 3 раза, достигая максимума ко второму месяцу. На 3-4 месяц наступает стабилизация процесса, объясняемая, по-видимому, адаптацией кроветворной системы к новым условиям, однако к 10 месяцам количество моноцитов вновь увеличивается.

Также к признакам сформированного постспленэктомического синдрома относится прогрессирующее повышение количества тромбоцитов в периферической крови с достижением стойкого тромбоцитоза к 4 месяцу после операции (р < 0,05) (таблица № 2).

Таблица №2. Динамика количества тромбоцитов в крови собак (п=4), подвергшихся спленэктомии_

До После спленэктомии (месяцы)

опера- 1 2 3 4 10

ции

Количество 264± 515,3± 384,5± 281,5± 424,5± 437±14*

тромбоцитов 10,17 30,1* 37,4* 31,5 17,5*

*-р<0,05

Как видно из представленной таблицы, максимальное количество тромбоцитов в периферической крови наблюдается через месяц после операции, через 2-3 месяца отмечается тенденция к нормализации показателя, однако он так и не приходит к исходным значениям и после четырех месяцев у животных формируется стойкий тромбоцитоз, что может обусловливать развитие тромбоэмболических осложнений.

Склонность к гиперкоагуляции была зарегистрирована и по показателям коагулограммы - снижение показателя протромбинового времени (ПВ) и активированного парциального тромбопластинового времени (АПТВ) (таблица №3).

-12В соответствии с представленными данными, постепенное уменьшение показателей ПВ и АПТВ у спленэктомированных животных демонстрирует выраженную гиперкоагуляцию у животных с ПСС.

При оценке показателей иммунного статуса животных с моделированным ПСС были получены следующие данные. Отмечается выраженная лабильность поглотительной активности нейтрофилов (ПАН).

Таблица №3. Динамика показателей гемокоагулограммы собак (п=4), подвергшихся спленэктомии

*-р<0,05

В течение первого месяца послеоперационного периода происходит увеличение поглотительной активности нейтрофилов с 32,8±8,2% до 75±7,36% (р<0,05) с одновременным снижением эффективности внутриклеточного уничтожения микроорганизмов, что свидетельствует о снижении продукции неспецифических активаторов фагоцитоза, которая в норме осуществляется селезёнкой [Павловский М.П. и др., 1986]. Также значительное повышение ПАН было отмечено через 3 и 4 месяца после спленэктомии (68,5+12,5% и 47,5±0,5% соответственно при р<0,05).

После спленэктомии произошло ухудшение показателей гуморального неспецифического иммунного ответа: снижение гемолитической емкости комплемента и скорости лизиса, увеличение индукционного периода активации комплемента ко второму месяцу после спленэктомии. 5. Оценка функциональных показателей у реципиентов после трансплантации культур клеток селезенки. У животных, подвергшихся спленэктомии с последующей КсТ, послеоперационный период протекал без осложнений.

Согласно полученным результатам на сроках до 6 мес. после ксенотрансплантации клеток селезёнки у собак наблюдалась нормализация морфологической картины форменных элементов крови и количественных показателей гемопоэза.

Отмечалось достоверное повышение уровня гемоглобина до нормальных значений (таблица №4). Некоторое снижение уровня гемоглобина через месяц после операции может объясняться кровопотерей во время оперативного вмешательства. Кроме того, в течение первого месяца после операции процессы неоорганогенеза еще не

завершены, и трансплантат не может проявлять функциональную активность. К 6 месяцам содержание гемоглобина начинает постепенно снижаться, не достигая, однако, значений контрольной группы.

Таблица № 4. Динамика содержания гемоглобина в крови собак (п=6), подвергшихся спленэктомии с последующей ксенотрансплантацией._

Контроль* Срок после ксенотрансплантации (месяцы)

1 2 3 6

нь (е/а\) 13,25± 0,45 13,12±0,б 14,07± 14,13±0,2** 13,8± 0,25

0,17**

*- показатели животных через 10 месяцев после СЭ; **-р<0,05

После ксенотрансплантации содержание моноцитов в периферической крови приходит к нормальным значениям (таблица№5). Таблица №5. Динамика количества моноцитов в крови собак (п=6), подвергшихся спленэктомии с последующей ксенотрансплантацией

Контроль* Срок после ксенотрансплантации (месяцы)

1 2 3 4 6

Количество 1,85±0,25 2,13± 0,76± 0,73± 0,63± 0,6±

моноцитов 0,63 0,15** 0,23** 0,03** 0,04**

*- показатели животных через 10 месяцев после СЭ, **-р<0,05

Как видно из представленной таблицы, ко второму месяцу после ксенотрансплантации количество моноцитов снижается вдвое и к 6 месяцам достигает нормальных значений. Через 2 месяца после ксенотрансплантации культур клеток селезёнки наблюдалось снижение количества тромбоцитов в периферической крови (таблица №6). Таблица № 6. Динамика количества тромбоцитов в крови собак (п=6),

подвергшихся спленэкто мии с последующей ксенотрансплантацией

Контроль* Срок после ксенотрансплантации (месяцы)

1 2 3 6

Количество тромбоцитов 437±14 428,5± 37,4 359,3±20,8** 269,8± 28** 246± 16**

*- показатели животных через 10 месяцев после СЭ; **-р<0,05 Отсутствие склонности к гиперкоагуляции можно доказать анализом показателей АПТВ и ПВ у животных, подвергшихся спленэктомии с последующей КсТ (таблица №7). Таблица №7. Динамика показателей гемокоагулограммы собак (п=6),

Конт- Срок после ксенотрансплантации (месяцы)

роль* 1 2 3 4 6

ПВ 6,52± 7,46±0Д1** 8,28 8,43± 8Д± 8Д± 0,2**

0,42 Ш4" 0,32* * 0,45**

АПТВ 16±1 20,16±3,3** 21,55± 20,75± 20,5± 18,1±1,9

2,86** 3,03** 1,5**

*- показатели животных через 10 месяцев после СЭ, **- р<0,05

После ксенотрансплантации культур клеток селезенки наблюдается повышение показателей протромбинового времени и активированного парциального тромбопластинового времени до значений, близких к исходным.

Показатели снижения поглотительной активности нейтрофилов после ксенотрансплантации стабилизируются, чего не наблюдалось после спленэктомии. Активность комплемента по альтернативному пути изменилась следующим образом: произошло повышение гемолитической емкости комплемента и скорости лизиса, снижение длительности индукционного периода активации комплемента. На пятый месяц после трансплантации скорость лизиса резко увеличивается, после чего на шестой месяц показатель приходит к минимальным значениям. Индукционный период уменьшается после 5 месяцев и приходит к максимальным значениям через полгода от момента трансплантации.

Таким образом, ксенотрансплантация культур клеток селезёнки позволяет эффективно корригировать ПСС, уменьшает вероятность послеоперационных септических и тромбоэмболических осложнений и повышает иммунную резистентность организма.

ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ. Целью нашего исследования было экспериментальное обоснование метода ксенотрансплантации культур клеток селезенки для коррекции постспленэктомического синдрома, являющегося комплексом функциональных изменений кроветворной, гемостатической и иммунной систем. Были исследованы культуры клеток, полученные от разных типов доноров: взрослых, фетальных и неонатальных. Показана принципиальная возможность культивирования клеток, полученных от взрослых доноров, однако, срок переживания таких клеток в культуре снижен по сравнению с фетальными и неонатальными клетками в связи с их низкой пролиферативной активностью и способностью к автономному росту. Из культуры' фетальных и неонатальных клеток селезенки к 7 суткам вымываются высокодифференцированные клеточные элементы -эритроциты и клетки лимфоидного ряда, стромальные клетки сохраняют жизнеспособность до 14 суток. Клеткам стромального микроокружения селезенки придается большое значение, поскольку, продуцируя ряд цитокинов и интерлейкинов, они оказывают регуляторное влияние на пролиферацию и дифференцировку гемопоэтических и

иммунокомпетентных клеток. Кроме того, стромальное кроветворное микроокружение при трансплантации стимулирует неоангиогенез и миграцию форменных элементов крови во вновь образованный орган [Гринев К.М, 1990; Ьейпег йа1., 1994]. Таким образом, оптимальный

срок культивирования фетальных и неонатальных клеток (8-10 суток) обусловлен высоким процентным содержанием стромальных клеток и почти полной элиминацией клеток лимфоидного ряда. При культивировании клеток, полученных от взрослых доноров, данный показатель, также обусловленный оптимальным соотношением лимфоидных и стромальных элементов, составил 6-8 суток.

В качестве органа-депо для трансплантации нами был выбран большой сальник. Большой сальник, являясь хорошо васкуляризованным образованием, обеспечивает диффузию питательных веществ к трансплантату до прорастания в него кровеносных сосудов и способствует образованию капиллярной сети спленоидов. Ксенотрансплантированные стромальные клетки делятся путем митоза и, выделяя различные биологически активные молекулы, стимулируют пpopacтание капилляров из органа-депо (сальник). Затем часть капилляров трансформируются в более крупные сосуды (артериолы), строма формирует разветвленную сеть и соединительно-тканную капсулу. Далее, продуцируя цитокины и интерлейкины, стромальные клетки привлекают из кровеносного русла кроветворные и лимфоидные клетки реципиента и способствуют их дальнейшей пролиферации и дифференцировке. Через месяц после операции образуется спленоид, состоящий из стромальной сети, заполненной фолликулоподобными скоплениями лимфоцитов. Формирования красной пульпы во вновь образованном органе отмечено не было. Таким образом, после трансплантации клеток последовательность и общий алгоритм процессов соответствует таковому при органогенезе. При трансплантации культур клеток, полученных от взрослых доноров, все процессы неоорганогенеза ускоряются, что обусловлено высокой иммуногенностью материала.

Была проведена функциональная оценка моделированного ПСС до и после трансплантации культур стромальных клеток селезенки. Показано, что после КсТ спленэктомированным животным функциональные показатели гемопоэтической, гемостатической и иммунной систем приближаются к исходным (до спленэктомии). Результаты сравнивались с контрольными, полученными через 10 месяцев после СЭ, когда показатели исследуемых систем приобретают стабильно отличные от исходных значения. На протяжении первых четырех месяцев после трансплантации отмечается стабильный эффект операции - значения лабораторных показателей близки к исходным, но через 6 месяцев длительность некоторых из них (ПВ) начинает уменьшаться. Именно в это время происходит значительное изменение показателей комплемента

(скорость лизиса резко увеличивается, после чего на шестой месяц показатель приходит к минимальным значениям; индукционный период же напротив - уменьшается после 5 месяцев и приходит к максимальным значениям через полгода от момента трансплантации). Это можно объяснить постепенным разрушением трансплантата

иммуноэффекторными агентами, что сопровождается замещением трансплантата соединительной тканью. Таким образом, изменение показателей активности комплемента по альтернативному пути является ранним признаком прекращения функции трансплантата. Удлинение срока переживания клеточного трансплантата в организме реципиента возможно при применении различных способов иммунопротекции, в том числе и инкапсулирования. Комплексная оценка морфологических данных, полученных при трансплантации инкапсулированных аллотрансплантатов культур стромальных клеток селезенки, позволяет сделать вывод о достаточной эффективности данного метода для коррекции постспленэктомического синдрома.

ВЫВОДЫ

1.При культивировании клеток селезенки стромальные клетки обладают наибольшей жизнеспособностью, переживая в культуре до 15 суток, в то время как форменные клеточные элементы (лимфоциты и эритроциты) подвергаются элиминации на более ранних сроках.

2. Оптимальный срок культивирования фетальных и неонатальных клеток селезенки составляет 8-10 суток, а клеток, полученных от взрослых доноров - 6-8 суток.

3.Фетальные и неонатальные клеточные трансплантаты переживают в организме реципиента до 6 месяцев, после чего их функциональная активность начинает снижаться

4. Ксенотрансплантация культур стромальных клеток селезенки нормализует показатели системы кроветворения, гемостаза, иммунного статуса, что приводит к эффективной коррекции постспленэктомического синдрома.

5. Для увеличения срока переживаемости клеточных трансплантатов может быть применен способ инкапсулирования клеточных культур селезенки послойным нанесением полиэлектролитов.

6. После трансплантации стромальных клеток селезенки ретикулярная сеть заполняется кроветворными клетками реципиента, образуя спленоид -органоподобное образование, восполняющее утраченные функции селезенки.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Метод трансплантации фетальных и неонатальных клеток селезенки может быть рекомендован в клиническую практику для коррекции постспленэктомического синдрома.

2. Для достижения положительного эффекта трансплантации необходимо использовать режим культивирования клеток селезенки в течение 8-10 суток для фетальных и неонатальных культур.

3. Метод инкапсулирования культур клеток при послойном нанесении полиэлектролитов может быть применен для иммунопротекции различных клеточных трансплантатов.

4. В качестве маркера эффективности операции мы предлагаем динамическое исследование активности комплемента по альтернативному пути, что позволяет выявить на ранних сроках прекращение функционирования трансплантата.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО МАТЕРИАЛАМ ДИССЕРТАЦИИ

1. Доильницына О.В., Беляева И.Г. Динамика уровня активности комплемента в сыворотке реципиентов клеточных культур. //В сб.: «Актуальные проблемы внутренней медицины и стоматологии». - Санкт-Петербург. - 1997. - С. 36-37.

2. Доильницына О.В., Беляева И.Г., Кузнецова М.Ю. Определение уровня активности системы комплемента в сыворотке больных, подвергшихся имплантации культур клеток эндокринных желез. // В сб.: «Актуальные проблемы внутренней медицины и стоматологии». - Санкт-Петербург. - 1997. - С. 37-38.

3. Галибин О.В., Доильницина О.В., Беляева И.Г. Динамика иммунологических показателей в сыворотке реципиентов клеточных культур. // Информационный бюллетень «Клеточные культуры». - Выпуск 14. - Санкт-Петербург. - 1999. - С.35 - 37.

4. Галибин О.В., Доильницина О.В., Беляева И.Г. Динамика иммунологических показателей в сыворотке реципиентов клеточных культур. //В сб.: «60 лет содружества СПбГМУ им. акад. И.П.Павлова и больницы Святого Великомученника Георгия». - Санкт-Петербург: Изд. СПб ГМУ им. акад. И.П.Павлова. - 1998. - С.78 - 81.

5. Галибин О.В., Прокопчук С.Н., Доильницина О.В., Беляева И.Г. Динамика иммунологических показателей в сыворотке реципиентов клеточных культур. // Медицинская иммунология. - Материалы третьей научной конференции с международным участием "Дни иммунологии в Санкт-Петербурге'99" (Санкт-Петербург, 18-20 мая 1999). -Том 1. - №3-4. - 1999. - С.54-55.

6. Доильницына О.В., Беляева И.Г., Ледяева С.Я. Методы коррекции постспленэктомического синдрома. // В сб. «Актуальные вопросы современной медицины». -Санкт-Петербург - 1999г. - С. 101 -102.

7. Доильницына О.В., Беляева И.Г. Динамика иммунологических показателей крови пациентов, подверженных трансплантации клеточных культур. // В сб.: «Актуальные вопросы современной медицины». - Санкт-Петербург. - 1999.- С. 102-103

8. Беляева И.Г., Доильницына О.В., Ледяева СЛ. Методы коррекции постспленэктомического синдрома. // Вопросы прикладной анатомии и хирургии, материалы VII межвузовской конференции СНО и молодых ученых. - Санкт-Петербург. - 1999. - С.63-64.

-189. Галибин О.В., Галкина О.В., Прокопчук С.Н., Доильницына О.В., Беляева И.Г. Определение уровня активности комплемента в сыворотке крови больных, перенесших имплантацию культур клеток эндокринных органов. // Цитология. - № 3-4. - 1999. - С.265.

10. Беляева И.Г. Хирургическая коррекция постспленэктомического синдрома // Програма та тези I Всеукрашсько1 конференци студента i молодих вчених з питань трансплантологи "Трансплантолопя сьогодш". - 7-8 грудня 2000.- Донецьк - С. 18.

11. Беляева И.Г., Лыгина А.В. Экспериментальное обоснование ксенотрансплантации культур клеток селезенки для коррекции постспленэктомического синдрома // Вопросы прикладной анатомии и хирургии, материалы IX региональной конференции молодых ученых. - Санкт-Петербург. - 2001. - С.81-83.

12. Беляева И.П, Доильницына О.В. Аллотрансплантация культур клеток селезенки для лечения постспленэктомического синдрома. // Санкт-Петербургские научные чтения - 2001, тезисы научно-практической конференции с международным участием. - Санкт-Петербург. -2001.- С.48-49.

13. Беляева И.Г., Доильницына О.В., Лыгина А.В., Еремеева Е.В., Чжан Ц. Методы коррекции постспленэктомического синдрома. // Санкт-Петербургские научные чтения -

2001, тезисы научно-практической конференции с международным участием. - Санкт-Петербург. -2001.- С. 49-51.

14. Галибин О.В., Беляева И.Г., Доильницына О.В. Хирургическая коррекция постспленэктомического синдрома//Цитология - 2001- Т.43. - №4.-С.332.

15. Галибин О.В., Беляева И.Г., Лыгина А.В. Использование ксенотрансплантации культур клеток селезенки для коррекции постспленэктомического синдрома. // Цитология. - 2001. -Т.43.-№9.-С.847.

16. Галибин О.В., Вавилов А.Г., Прокопчук С.Н., Беляева И.Г. Коррекция гипотиреоза и надлочечниковой недостаточности трансплантацией культур клеток.// Актуальные вопросы современной эндокринологии, Тезисы 4 всероссийского конгресса эндокринологов. - Санкт-Петербург. - 2001. - С. 285.

17. Беляева И.Г., Лыгина А.В., Чиховская Ю.В. Морфологическое обоснование ксенотрансплантации культур клеток селезенки. // Санкт-Петербургские научные чтения -

2002, тезисы научно-практической конференции с международным участием. - Санкт-Петербург. - 2002. - С. 129-130.

18. Галибин О.В., Беляева И.Г. Лечение гипотиреоза и надлочечниковой недостаточности, включающее аллотрансплантацию культур клеток. // Актуальные вопросы эндокринологии, тезисы докладов 4-й Всероссийской научно-практической конференции. - Пермь. - 2002. - С. 95.

19. Беляева И.Г., Чиховская Ю.В. Коррекция некоторых патологических состояний человека трансплантацией клеточных культур. // «Человек. Природа. Общество» Материалы XIII международной конференции молодых ученых (26-30 декабря 2002). - Санкт-Петербург. - 2002. - С.822-824.

20. Беляева И.Г., Галибин О.В., Чиховская Ю.В. Морфологическое обоснование ксенотрансплантации культуры клеток для коррекции постспленэктомического синдрома. // Ученые записки. - Т. 10. - №2. - 2003. - С.50-54.

21. Беляева И.Г., Чиховская Ю.В., Герасимова А.С. Морфологическое и функциональное обоснование ксенотрансплантации культур клеток селезенки для коррекции постспленэктомического синдрома. // Вопросы прикладной анатомии и оперативной хирургии, материалы IX регинальной конференции СНО и молодых ученых медицинских ВУЗов и лабораторий НИИ. // Санкт-Петербург. - 2003. - С.36-38.

22. Галибин О.В., Беляева ИГ., Аганезов С.А. Морфологическое и функциональное обоснование трансплантации культур клеток селезенки для коррекции постспленэктомического синдрома. // Трансплантология. - 2003. - Т.4. - №1. - С.66-68.

Р- -684

РНБ Русский фонд

2004-4 24421

Лицензия от ИД № 00597 от 15.12.99 Подписано в печать 23.12.2003. Усл. печ. л. 1,0 Формат 60x84 1/16 Печать офсетная Тираж 100 экз. Заказ 637/03 197089, Санкт-Петербург, ул. Л. Толстого 6/8 Издательство СПбГМУ

Оглавление диссертации Беляева, Ирина Геннадьевна :: 2004 :: Санкт-Петербург

СОКРАЩЕНИЯ, ИСПОЛЬЗУЕМЫЕ В РАБОТЕ

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Развитие, строение и функции селезенки

1.2. Спленэктомия и ее осложнения

1.3. Консервативные методы профилактики и лечения постспленэктомичского синдрома

1.4. Хирургические методы профилактики и коррекции постспленэктомического синдрома

1.5. Культивирование клеток селезенки

1.6. Методы снижения иммуногенности клеточных трансплантатов

ГЛАВА И. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

II. 1. Характеристика донорского материала

11.2. Получение культур клеток селезенки

11.3. Материалы и методы инкапсулирования культур клеток селезенки

П.3.1. Инкапсулирование модельных клеточных систем

И.3.2. Инкапсулирование культур клеток селезенки 38 И.4. Материалы и методы моделирования постспленэктомического синдрома и трансплантации культур клеток селезенки

11.4.1. Оперативные вмешательства на мелких лабораторных животных

11.4.2. Оперативные вмешательства на крупных лабораторных животных

11.5. Материалы и методы морфологической оценки культур клеток селезенки

11.6. Методы оценки постспленэктомического синдрома и функции трансплантатов культур клеток селезенки в организме реципиента

11.7. Статистическая обработка данных

ГЛАВА III. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ 46 III. 1. Оценка морфологических показателей культур клеток селезенки до трансплантации 46 III. 1.1. Фетальные и неонатальные культуры клеток 46 III. 1.2. Культуры клеток, полученные от взрослых доноров

111.2. Инкапсулирование клеточных модельных систем и культуры клеток селезенки

111.3. Морфологическая оценка состоятельности трансплантатов культур клеток селезенки

111.3.1. Морфологическая оценка состоятельности трансплантатов фетальных и неонатальных культур клеток селезенки

111.3.2. Морфологическая оценка состоятельности трансплантатов культур клеток селезенки, полученных от взрослых доноров

111.4. Функциональная оценка модели постспленэктомического синдрома 64 III.4. 1. Данные объективного обследования 64 III.4. 2. Характеристика системы гемопоэза 65 III.4. 3. Характеристика системы гемостаза

Ш.4. 4. Характеристика иммунной системы 68 Ш.5. Оценка функциональных показателей у реципиентов после трансплантации культур клеток селезенки

Ш. 5. 1. Данные объективного обследования

Ш. 5. 2. Характеристика системы гемопоэза

Ш. 5. 3. Характеристика системы гемостаза

Ш. 5. 4. Характеристика иммунной системы

ГЛАВА IV. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ

Введение диссертации по теме "Хирургия", Беляева, Ирина Геннадьевна, автореферат

постспленэктомический синдром» (ПСС) включает снижение общего тонуса и работоспособности, повышенную восприимчивость к инфекциям за счет снижения иммунорезистентности, повышение количества тромбоцитов в периферической крови, вследствие чего у больных наблюдается повышенная склонность к тромбоэмболическим осложнениям.

Наиболее частыми возбудителями инфекций у больных, подвергшихся СЭ, являются Streptococcus pneumoniae, Haemophilus influenzae и Neisseria meningitis [Аверин В.И., Катько В.A., 1988; Ejstrud P., et al., 2000; Hansen К., Singer D.B., 2001; Machesky K.K., Cushing R.D., 1998; Malcolm L., et al., 1999; Rodriguez Gomez M., et al., 1997; Selby С., et al., 1987]. Клинически эти инфекции протекают по типу криптогенпого сепсиса с коротким и неспецифическим продромальным периодом. Затем следуют септический шок и симптомы диссеминированного внутрисосудистого свертывания крови [Cotran R.S. et al., 1999; Hansen К., Singer D.B., 2001; Parrillo J.E., 1993]. Несмотря на интенсивные лечебные мероприятия, смертность составляет 50% [Иванов В., 1996].

В настоящее время для коррекции постспленэктомического синдрома применяются консервативные (иммунокоррегирующая, антиагрегантная и антикоагулянтная терапия, лечение возникших осложнений) и хирургические методы. Среди последних следует отметить метод аутотрансплантации (АтТ) ткани селезенки, дающий в большинстве случаев хорошие функциональные результаты [Гринев K.M., 1990; Benjamin J.T., et al., 1978; Livingston C.D., et al., 1982; Patel J., et al., 1982]. Однако, в силу ряда причин, эта операция не всегда выполнима (онкологическое, септическое поражение органа, отсутствие технических возможностей) [Григорьев Е.Г. и соавт., 1996; Шабунин A.B. и соавт., 2000; Яжик С.И., Краля И.В., 2000]. Органная трансплантация селезенки - трудоемкая операция, требующая проведения иммуносупрессивной терапии в послеоперационном периоде, не получила широкого распространения [Аскерханов Р.П., Сафаров С.Ю., 1987].

ЦЕЛЬ И ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ Целью настоящего исследования является экспериментальное обоснование метода ксенотрансплантации (КсТ) культур клеток селезенки для коррекции постспленэктомического синдрома (доказательство переживания и функционирования клеточного трансплантата в организме реципиента).

Задачи исследования:

1. Доказать морфологическую состоятельность клеток селезенки в культуре.

2. Определить оптимальный срок культивирования клеток селезенки.

4. Определить срок переживания клеточного трансплантата в организме реципиента.

5. Исследовать влияние трансплантации культур клеток селезенки на течение постспленэктомического синдрома.

7. Изучить закономерности неоорганогенеза селезенки после КсТ культур клеток

НАУЧНАЯ НОВИЗНА Впервые предлагается новый хирургический метод коррекции постспленэктомического синдрома ксенотрансплантацией клеточных культур.

ОСНОВНЫЕ ПОЛОЖЕНИЯ, ВЫНОСИМЫЕ НА ЗАЩИТУ

3. Доказана морфологическая и функциональная состоятельность трансплантированной культуры клеток селезенки в организме реципиента на сроках до 6 месяцев.

4. Ксенотрансплантация культур стромальных клеток селезенки приводит к коррекции постспленэктомического синдрома - нормализуются показатели системы кроветворения, гемостаза, иммунного статуса.

ПРАКТИЧЕСКАЯ ЦЕННОСТЬ РАБОТЫ

Ксенотрансплантация культур клеток селезенки является альтернативным методом коррекции ПСС. Использование клеточных культур с оптимальным сроком культивирования позволяет достичь положительных результатов трансплантации. Модифицированный метод нанокапсулирования может быть использован для иммунопротекции не только культур клеток селезенки, но и других клеточных систем.

РЕАЛИЗАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ РАБОТЫ Результаты работы внедрены в учебный процесс кафедры общей хирургии, кафедры гематологии, трансфузиологии и трансплантологии факультета постдипломного образования и факультативного курса по трансплантологии Санкт-Петербургского Государственного Университета им.ак. И.П.Павлова; в научно-методические разработки отделов экспериментальной медицины и патоморфологии Научно-исследовательского Центра СПбГМУ им.ак. И.П.Павлова.

АПРОБАЦРШ РАБОТЫ Материалы и основные положения диссертации изложены: на международном симпозиуме «Биология клетки в культуре» (Санкт-Петербург, 16-18 октября 1999); на III научной конференции с международным участием «Дни иммунологии в Санкт-Петербурге '99» (Санкт-Петербург, 18-20 мая 1999); на VII межвузовской конференции СНО и молодых ученых «Вопросы прикладной анатомии и хирургии», (Санкт-Петербург, апрель 1999г); на I Всеукраинской конференции студентов и молодых ученых "Трансплантология сегодня" (7-8 декабря 2000 г., Донецк); на IX региональной конференции молодых ученых «Вопросы прикладной анатомии и хирургии» (Санкт-Петербург, апрель 2001 г); на научно-практической конференции с международным участием «Санкт-Петербургские научные чтения — 2001» (Санкт-Петербург, январь 2001г.); на международном симпозиуме «Биология клетки в культуре» (Санкт-Петербург, 16-18 октября 2001); на научно-практической конференции с международным участием «Санкт-Петербургские научные чтения — 2002» (Санкт-Петербург, январь 2002г.); на 13-й международной конференции молодых ученых «Человек. Природа. Общество» (Санкт-Петербург, 26-30 декабря 2002 года); на XI региональной конференции СНО и молодых ученых медицинских ВУЗов и лабораторий НИИ «Вопросы прикладной анатомии и хирургии» (Санкт-Петербург, апрель 2003г); на международной конференции «Проблемы тканевой и клеточной трансплантации» (Ивано-Франковск, 3-4 сентября 2003 года).

Заключение диссертационного исследования на тему "Хирургическая коррекция постспленэктомического синдрома методом ксенотрансплантации культур клеток (экспериментальное исследование)"

ВЫВОДЫ

1. При культивировании клеток селезенки стромальные клетки обладают наибольшей жизнеспособностью, переживая в культуре до 15 суток, в то время как форменные клеточные элементы (лимфоциты и эритроциты) подвергаются элиминации на более ранних сроках.

3. Фетальные и неонатальные клеточные трансплантаты переживают в организме реципиента до 6 месяцев, после чего их функциональная активность начинает снижаться.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Метод трансплантации фетальных и неонатальных клеток селезенки может быть рекомендован в клиническую практику для коррекции постспленэктомического синдрома

3. Метод инкапсулирования культур клеток при послойном нанесении полиэлектролитов может быть применен для иммунопротекции различных клеточных трансплантатов

Список использованной литературы по медицине, диссертация 2004 года, Беляева, Ирина Геннадьевна

1. Аверин В.И., Катько В.А. Аутотранплантация селезенки при ее травматических повреждениях у детей.// Здравоохранение Белоруссии -1988.-№ 11.-С. 49-51

2. Алексеева Л.А., Лусев O.A., Кочорова Л.В. и др. Основные методы статистического исследования // Метод, указ. для студентов, клин, ординаторов и аспирантов. СПб., 1997. - 102 с.

3. Аскерханов Р.П., Сафаров С.Ю. Современное состояние трансплантационной хирургии селезенки.// Вестник хирургии . 1987. -Т. 120. - №4. - С. 136-140

4. Бабаджанов Б.Р., Эшчанов А.Р. Эхинококкоз селезенки // Анн. Хир. Гепатол.- 2000.- Т.5. №2.- С.266-267

5. Баранов В.Н. Современные представления о тонкой структуре селезенки. // Арх. Анат. 1974. -Т.67.-В.12. - С.91-100

6. Барсуков А.Н., Федоров Г.Н., Семенков В.Ф. Влияние ожоговой травмы на реактивность клеток селезенки мышей разных генотипов в регионарной реакции трансплантат против хозяина // Бюлл. экспер. биол. и мед.- 1990.-№ 6.- С.592-594

7. Батырбеков A.A., Манько В.М., Руднева Т.Б., Халатян H.A. Влияние спленэктомии на дифференцировку гемопоэтических стволовых клеток и функциональную активность Т-дифференцирующих лимфоцитов.// Иммунология.- 1985.- №5- С.41-44

8. Беляева И.Г., Доильницына О.В., Ледяева С.Я. Методы коррекции постспленэктомического синдрома.// Вопросы прикладной анатомии и хирургии, материалы VII межвузовской конференции СНО и молодых ученых, Санкт-Петербург, 1999г., с.63-64.

9. Ю.Блюмкин В.Н. Трансплантация поджелудочной железы // Итоги науки и техники. ВИНИТИ. Морфология человека и животных. 1984. - Т.11.- С. 164-247.

10. Блюмкин В.Н., Скалецкий H.H. Флотирующие культуры клеток поджелудочной железы плода // Бюлл. эксп. биологии и мед. 1984.- Т. 97.- №6.-С. 764-766

11. Борисов А.Е., Жидков К.П., Дмитриев Н.В. и др. Методика экстракорпоральной перфузии срезов ксеногенной селезенки // Вестн. хир. им. Грекова 1989.- №7.- С.24-25

12. Бородин Ю.И., Любарский М.С., Смагин A.A. и др. Способ приготовления взвеси ксеноклеток свиной селезенки для применения в лечении больных с патологическими изменениями в иммунном статусе // Патент РФ 96114525/14, 1998 г.

13. Бородин Ю.И., Любарский М.С., Майбородин И.В. и др. К проблеме искусственного лимфатического узла // Морфология 1999.- Т.116. - №6.-С.38-42

14. Булгаков Г.А. Резекция селезенки с применением сшивающего аппарата // Хирургия. 1990. - №5. - С.147-148

15. Бутенко Г.М., Харази А.И., Пишель И.Н. Влияние возраста реципиента на эффект трансплантации димфоидных органов новорожденных доноров// Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. 1990. -Т. 109.-№2.-С. 182-183

16. Быков B.JI. Частная гистология человека.// СПб, Сотис, 1999 С. 32-35

17. Волков И.Э. Комплексное лечение инсулинзависимого сахарного диабета у детей с использованием ксеногенной трансплантации культур островковых клеток поджелудочной железы новорожденных кроликов // Автореф. Дисс.к.м.н. Москва. - 1999. - 27 с.

18. Волкова О.В., Пекарский М.И. Эмбриогенез и возрастные гистология внутренних органов человека.// М., 1976

19. Гаджиев Д.Н. Сберегающие операции при травмах селезенки // Анн. Хир. Гепатол.-2000.-Т.5. №2.-С.271

20. Галебская JI.B., Рюмина Е.В. Биохимия системы комплемента // Метод, указания для студентов. СПб, 1999. - 45 с.

21. Галибин О.В., Доильницина О.В., Беляева И.Г. Динамика иммунологических показателей в сыворотке реципиентов клеточных культур. // Информационный бюллетень «Клеточные культуры» Выпуск 14. - Санкт-Петербург. - 1999. - С.35 - 37.

22. Гафаров О. Состояния нейтрофильного фагоцитоза у спленэктомированных детей // Здравоохранение Таджикистана.- 1990.-№4.- С.45-49

23. Григорьев Е.Г., Чикотеев С.П., Г.К.Белых, Черкшин А.Ф. Сохранение селезенки при ее повреждении // Вестник хирургии. 1988. - №11. -С.68-69.

24. Григорьев Е.Г., Апарцин К.А., Белых Г.К. Хирургия повреждений селезенки. Иркутск, 1996. - 126 с.

25. Гринев K.M. Хирургическая коррекция постспленэктомического иммунодефицита// Автореф. дисс.к.м.н. 1990г- 20 с.

26. Гусейнов А.Х., Загаров М.З. Органосохраняющая операция при разрыве селезенки в раннем детском возрасте. // Вестн. Хир.- 1992.- №3.- С.316-317

27. Давронов Р., Ботирова З.Б., Кахарбекова А.К. Морфофункциональные особенности иммунокомпетентных клеток селезенки в ходе антигенного воздействия" // В сб.: "Компенсаторно-приспособительные процессы в клетках внутренней среды. Ташкент, 1988. - С. 11-14

28. Доильницына О.В., Беляева И.Г. Динамика уровня активности комплемента в сыворотке реципиентов клеточных культур. // "Актуальные проблемы внутренней медицины и стоматологии" Санкт-Петербург. - 1997. - С. 36-37.

29. Жаворонков H.A., Перельман М.И. Ксенотрансплантация органов (обзор). // Хирургия. 1993. - №6. - С.89-94

30. Жарикова H.A. Периферические органы системы иммунитета.// Минск, "Беларусь". 1979.-207 с.

31. Жидков К.П., Медведев Ю.А., Добрынский Е.К. и др. Экстракорпоральная перфузия ксеноселезенки в лечении гнойных хирургических заболеваний //Вестн. хир. 1986.-№11.- С.86-91

32. Иванов В. Ведение больных после спленэктомии// РМЖ -1996, Т.4 №8.

33. Ионкин Д.А., Кубышкин В.А., Елагина JI.B. и др. Отдаленные результаты вмешательства на селезенке // Анн. Хир. Гепатол.- 2000.- Т.5 №2.- С.275-276

34. Казимиров Л.И., Горохов A.M., Киреева Н.Б. Субтотальная резекция селезенки как альтернатива спленэктомии при гематологических заболеваниях у детей // Нижегород. Мед. журн.- 1992.- №4.- С.53-56

35. Климанский В.А. Спленэктомия в гематологии: показания, риск и альтернативы хирургическому вмешательству. // Тер.архив. 1991. -63(7).-С. 14-8

36. Коваленко П.П. Клиническая трансплантология. // Ростов-на-Дону. -1976.

37. Комахидзе М.Э. Селезенка. // Наука. 1971. - 253 с.

38. Кошелев В.Н., Чалык Ю.В., Давыдов Н.Я. Экспериментально-клиническое обоснование параметров кислотного лазера при операциях на печени и селезенке // Вестн. Хир.- 1990.- №8.- С.46-47

39. Кудряшов Б. А., Ашмарин И.П., Ляпина Л. А., Пасторова В.Е. Фибринолитические и антикоагулянтные комплексы низкомолекулярного гепарина с тафтсином// Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. 1992. - 114 (12). - С.609-611

40. Кузин М.И., Данилов М.В., Скуба Н.Д., Дурдыев М.Д. Аутотрансплантация ткани селезенки после спленэктомии.// Клиническая медицина 1985. - № 3.- С.34-39

41. Кузин М.И., Руднева В.Г., Дурдыев М.Д., Шимкевич Л.Л. Состояние тромбоцитарного компонента гемостаза у больных после спленэктомии и реимплантации фрагментов селезенки.// Гематология и трансфузиология -1985. №8. - С.26-29.

42. Кущ Н.Л., Журило И.П., Варенко Ю.С. Влияние спленэктомии на иммунологическую реактивность организма детей // Клин, хирургия.-1987.-№1.-С. 11-13.

43. Кущ Н.Л., Журило И.П., Джансыз H.H. Аутотрансплантация селезеночной ткани при спленэктомии по поводу травмы селезенки у детей // Вестник хирургии. 1989. - №6. - С.76-79

44. Литвин A.A., Цыбуляк Г.Н. Местный гемостаз в хирургии повреждений печени и селезенки // Хирургия.- 2000 №4.- С.74-76

45. Ляпина Л.А., Пасторова В.Е., Кондашевская М.В., Кудряшов Б.А., Каликевич В.Н., Ашмарин И.П. Антитромботическая и тромболитическая активность тафтсина// Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. 1993. - 116(11). - С. 451-452

46. Малайцев В.В., Богданова И.М. Электрофоретическая и иммунологическая характеристика Fc+ и Fe- -фракций клеток селезенки мышей СВА //Бюлл. экспер. Биол. и мед.- 1977.-N« 10.- С.451-454

47. Маремшаов A.M. Использование пептидов донорской селезенки для коррекции восстановительных процессов в органах при критических состояниях (клинико-экспериментальное исследование) // Автореф. дисс.к.м.н.-Москва-2001.-31 с.

48. Маховский В.З., Маховский B.B. Резекция селезенки с пластикой мышечным лоскутом в эксперименте // Хирургия.- 1999 №11.- С.20-22

49. Мироненко О.Н., Абакаров М.Х. Морфологическое обоснование к аутотрансплантации ткани селезенки // Врачебное дело. 1985. - № 11.-С.71-74

50. Нурмаков Д.А. Клинико-иммунологическое обоснование аутотрансплантации ткани селезенки после вынужденной посттравматической спленэктомии // Автореф. дисс. к.м.н. -Республика Казахстан Алматы - 2001. - 26 с.

51. Павловский М.П., Чуклин С.Н., Орел Г.Л. Влияние спленэктомии на иммунологическую реактивность: Обзор // Хирургия .- 1986.- №6.- С. 136141.

52. Питкин З.Ш. Разработка критериев вирусологической безопасности для клинического использования свиных гепатоцитов в аппарате

53. Вспомогательная печень» // Автореф. дисс.к.б.н. 2002 - Санкт1. Петербург. 25 с.

54. Питкин З.Ш., Галибин О.В., Киселев О.И. Вирусологическая безопасность применения свиных гепатоцитов в системе «Вспомогательная печень» для клинической практики// Санкт-Петеребург. 2002. - 48 с.

55. Подпрятов С.Е., Фалюш В.А., Лопушанский Я.М. и др. Методика экстракорпорального подключения селезенки свиньи // Клин. хир. 1987.-№1.- С.6-9

56. Поташов Л.В., Галибин О.В. Некоторые результаты применения клеточных культур в Санкт-Петербурге // Трансплантология и искусственные органы. 1998. - №4. - С.68-69

57. Поташов JI.B., Галибин O.B. Коррекция некоторых эндокринопатий трансплантацией клеточных культур. // Ученые записки. Том 4. - №3. -1999. — С.35-37

58. Прокопьев М.В. Применение ксенотрансплантации криоконсервированных клеток селезенки для коррекции постспленэктомического гипоспленизма (экспериментальное исследование)// Дисс.к.м.н. Иркутск - 2001

59. Раевская М.В. Получение B-клеточной линии из селезенки мышей и ее характеристика // Бюлл. экспер. биол. и мед.- 1995.-№ 2.- С. 183-186

60. Сапожникова М.А., Тверитнева Л.Ф., Ильницкая Т.И. Морфологические изменения аутотрансплантатов ткани селезенки после спленэктомии в клинике и в эксперименте// Архив патологии. 1987. - Вып. 12. - С.31-37

61. Скалецкий H.H. Культуры островковых клеток поджелудочной железы и их трансплантация в эксперименте и клинике. // Дисс. в виде научного доклада.д.м.н. Москва. - 1999. - 69 с.

62. Скуба НД., Дурдыев М.Д. Морфологическая оценка аутотрансплантации фрагментов селезенки.//Бюллетень экспериментальной биологии. 1984. - №8. - С.237 - 240.

63. Советова Г.П., Амченкова A.M., Бочаров А.Ф.; Делимбетова Г.И. Получение и характеристика перевиваемой культуры клеток селезенки человека // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. 1976. -Т. 82. -№8.-С. 995-998

64. Сорокин А.П., Полянкин Н.Я., Федонюк Я.И. Клиническая морфология селезенки.//М.: Медицина. 1989.- 156 с.

65. Сухих Г.Т. Трансплантация фетальных клеток в медицине: настоящее и будущее. // Бюл. эксперим. биологии и медицины. — 1998. Т. 126. -Прилож. 1. - С.3-13

66. Толпекин В.Е., Онищенко H.A., Хубутия А.Ш., Богданова Н.В. Ксеноорганы и ткани в трансплантологии. // Трансплантология: руководство под ред. Шумакова В.И. М: Медицина - 1995. - 391 с.

67. Турчин И.С., Комиссаренко И.В., Бугаев В.Н., Рыбаков С.И. Итоги и перспективы трансплантации органных культур эндокринных органов // Трансплантология и искусственные органы. 1998 - № 4. - С. 63-64

68. Уракчеев Ш.К., Шахназаров С.Р., Котов П.В. Некоторые вопросы хирургической тактики при повреждении селезенки. // Вестник хирургии. -Т. 155 №6. -С.66 - 68

69. Усольцев Ю.К. Атипичная резекция селезенки: Дис. канд. мед. наук. -Иркутск, 1999.- 135с.

70. Фриденштейн А.Я., Горская Ю.Ф., Лациник Н.В. и др. Возрастные изменения содержания стромальных клоногенных клеток в кроветворных и лимфоидных органах // Бюлл. экспер. биол. и мед.- 1999.-№ 5.- С.550-553

71. Хлистова З.С., Шмелева С.П., Рябчиков О.П., Чуич H.A. Структура человеческой селезенки и иммуноморфологические показатели лимфоцитов во время эмбриогенеза.// Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. -1981, декабрь. 92( 12). - С. 728-31

72. Хлистова З.С. , Шмелева С.П., Рябчиков О.П., Чуич H.A. Развитие лимфатических фолликулов и дифференцировка селезеночныхлимфоцитов человеческих плодов.// Архив анатомии, гистологии и эмбриологии. 1982, май. - 82(5). - С. 77-83

73. Цыпин А.Б., Шумаков В.И., Макаров A.A. и др. Лечение септических заболеваний подключением селезенки // Метод, реком. Гл. упр. леч.-проф. помощи Минздрава СССР.- М.: Медбиоэкономика 1988.- 20 с.

74. Цыпин А.Б., Шумаков В.И., Онищенко H.A. и др. Пептиды, обладающие иммуностимулирующей активностью, способ их получения, лекарственный препарат на их основе Спленопид и его применение // Патент РФ 98106075, 2000 г.

75. Черникова М.В., Прокопчук С.Н., Протасов М.В. Экспересс- метод получения гистологических препаратов клеточных культур //Рационализаторское предложение №1353 от 16.05.2001

76. Чертков И.Л., Фриденштейн А .Я. Клеточные основы кроветворения. // М.,1977

77. Четвертакова Л.В. О тканевой природе выстилки синусов лимфатических узлов. // В кн.: Иммуногенез и клеточная дифференцировка. — М.,1978. -С.102-127

78. Чуич H.A. Иммуноглобулинпозитивные клетки человеческой селезенки и тимуса в эмбриогенезе. // Бюллетень эксперимент, биологии и медицины, 1980.-89(1).-С. 38-40

79. Шабунин A.B., Лукин А.Ю., Бедин В.В. и др. Хирургическое лечение травматических повреждений поджелудочной железы // Анн. Хир. Гепатол.- 2000.- Т.5. №2.- С.201

80. Шарецкий А.Н., Цыганков А.П., Цыганкова В.А. Зависимость функциональной активности иммунокомпетентных клеток селезенки мышей от их гемопоэтического окружения // Бюлл. экспер. биол. и мед.-1979.-№ 3.- С.260-263

81. Швец В.Н. Радиочувствительность и направление дифференцировки колониеобразующих клеток селезенки // Бюлл. экспер. Биол. и мед.-1976.-№ 1.- С.74-76

82. Шумаков В.И., Блюмкин В.Н., Скалецкий H.H., Игнатенко С.Н., Шальнев Б.И., Галибин О.В. Трансплантация островковых клеток поджелудочной железы (очерки) //М.: Канон.- 1995.- 383 с.

83. Шумаков В.И. , Цыпин А.Б. Аллотрансплантация селезенки. Применение ксеноселезенки при гнойно-септических и аутоиммунных заболеваниях // В кн.: «Трансплантология» под ред. Шумакова В.И. М.: Медицина. -1995.-391 с.

84. Ягафаров И.Р. Клинико-экспериментальное обоснование органозамещающих операций при повреждении селезенки (клиникоэкспериментальное обоснование) // Автореф. дисс.к.м.н. Уфа. 2001.-23 с.

85. Яжик С.И., Краля И.В. Травматические повреждения поджелудочной железы // Анн. Хир. Гепатол.- 2000.- Т.5 №2.- С.202

86. Aargerge I.S., Heier H.E., Hem E., Giercksky Y., Grong E.C. IgM and IgG response to pneumococcal polysaccharide vaccine in normal individuals and individuals splenectomyzed due to trauma.// Acta Path Microbiol Immunol ScandSect- 1984.- V.92-P. 11-16

87. Anderson A.O. Structure and organization of the lymphatic system //Oxford University Press, NY, 2001, P.14-45

88. Balzan S.M., Riedner C.E., Santos L.M., Pazzinatto M.C., Fontes P.R. Posttraumatic splenic cysts and partial splenectomy: report of a case. Surg Today 2001 -31 (3) P. 262-265

89. Benjamin J.T., Komp D.M., Shaw A., Mcmillan W. Alternatives to total splenectomy: two case reports // J. Pediatr. Surg. 1978. - V. 13 - P. 137

90. Berry M.F., Rosato E.F., Williams N.N. Dexon mesh splenorrhaphy for intraoperative splenic injuries// Am Surg 2003 Feb. - 69(2) - P. 176-801

91. Blok-Perkowska D., Muzalewski F., Konopin'ska D. Antibacterial properties of tuftsin and its analogs. //Antimicrob Agents Chemother 1984 - 25 - P. 134-6

92. Bohmer R., Ostendorf P.C. Status of current knowledge of the pathogenesis and prevention of postsplenectomy infection (OPSI or "overwhelming post-splenectomy infection" // Internist (Berl)- 1987 Dec 28(12) - P.777-82

93. Brady M.S., Dent L.L., Man H.S. Effect of splenectomy on morbility and survival following curative gastrectomy for carcinoma // Arch. Surg.- 1991.-Vol. 126.- P. 359-362

94. Briard D., Brouty-Boye D., Azzarone B., Jasmin C. Fibroblasts from human spleen regulate NK cell differentiation from blood CD34(+) progenitors via cell surface IL-15. // J Immunol- 2002 May. 168(9). -P.4326-32

95. Bridgen M.L., Pattullo A.L. Prevention and management of overwhelming postsplenectomy infection—an update.// Crit Care Med 1999. -V. 27 -P. 836-842.

96. Buchbinder J.H., Lipkoff C.J. Splenosis: multiple peritoneal splenic implant following abdominal injury. A report of a case and review of the literature.// Surgery. 1939.-V. 6 -P.927-934

97. Buchino J.J., Buchino J.J. Thoracic splenosis. // South Med J 1998. -V. 91-P. 1054-1056

98. Buntain W.L., Lynn H.B. Splenorraphy: changing concepts for the traumatized spleen. // Surgery 1979. - V.86. -P.748-760

99. Burke A., Cunha M. Infections in nonleukopenic compromised hosts (diabetes mellitus, Steroides and asplenia) in critical care //- J. Critical Care Clinics.- 1998.- V.14.- P.263-282

100. Caplan E, Boltonsky H, Snyder M. Response of traumatized splenectomized patients to immediate vaccination with polyvalent pneumococcal vaccine. // J Trauma. 1983. -V.23 — P.801-805.

101. Cassar K., Munro A. Iatrogenic splenic injury. // J.R.Coll.Surg. Edinb. -2002 Dec. -V. 47(6) -P. 731-41

102. Catane R., Schlanger S., Weiss L., Penchas S., Fuks Z., Treves A.J., Gottlieb P., Fridkin M. Toxicology and antitumor activity of tuftsin. // Ann NY AcadSci- 1983. -V. 419 -P.251- 60

103. Chabaud O., Chambard M., Gaudry N., Mauchamp J. Thyrotrophin and cyclic AMP regulation of thy roglobulin gene expression in cultured porcine thyroid cells // J Endocrinol .-1988.-V.116.- P.25-33

104. Chari R. Et al. Treartment of hepatic failure with ex vivo pig liver perfusion followed by liver transplantation. // New England Journal of medicine. 1994. - V.331. - P.234-237

105. Chattopadhyay B. Splenectomy, pneumococcal vaccination and antibiotic prophylaxis. // Br J Hosp Med. 1989. - V.41 - P. 172-174.

106. Cole R.J. Regulatory functions of microenviromental and hormonal factors in pre-natell haemopoitic tissues.// Early Develop Mammals. Cambrigt e.a., 1975.-P. 335-358

107. Constantopoulos A., Najjar V.A. Tuftsin, a natural and general phagocytosis-stimulating peptide affecting macrophages and polymorphonuclear granulocytes.// Cytobios 1972. - V. 6 - P. 97-100

108. Constantopoulos A. Congenital tuftsin deficiency. // Ann NY Acad Sci. -1983.-V. 419-P. 214-219

109. Corazza G.R., Tarozzi C., Vaira D., Frisoni M., Gasbarrini G. Return of splenic function after splenectomy: how much tissue is needed?// BMJ 1984 -V. 289-P. 861-864

110. Corraza G.R., Zoli G., Ginaldi 1., Cancellier C., Profeta V., Gasparrini G., Quaglino D. Tuftsin deficiency in AIDS// Lancet 1991. - V. 337 - P. 1213

111. Cotran R.S., Kumar V., Collins T., eds. Robbins pathologic basis of disease// 6th ed. Philadelphia: W.B. Saunders 1999 - P. 134-136.

112. Crowley M.T., Reilly C.R., Lo D. Influence of lymphocytes on the presence and organization of dendritic cell subsets in the spleen// The Journal of Immunology 1999. - V. 163 -P. 4894-4900

113. Daar A.S. Animal-to-human organ transplants// Bulletin of the Wotld Health Organization. 1999. - V. 77- 1 - P. 54-62

114. Davidson R.N., Wall R.A. Prevention and management of infections in patients without a spleen. // Clin Microbiol Infect 2001 Dec -V. 7(12). - P. 657-60

115. Donath E., Sukhorukov G.B., Mohwald H. Submicrometric and micrometric polyelectrolyte capsules// Nachrichten aus Chemie Technik und Laboratorium 1999 - V.47 - P.400-405

116. Dukor P., Miller J.F., House W., Allman V. Regeneration of thymus grafts. I. Histological and cytological aspects. // Transplantation. 1965 Sep -V.3(5) - P. 639-68.

117. Ejstrud P., Kristensen B., Hansen J.B. et al. Risk and patterns of bacteraemia after splenectomy: a population-based study // Scand. J. Infect. Dis. 2000. - V.32. - №5. - P.521-525

118. Ekkad H., Sass W., Colberg A. et al New arguments to explain the high infection rate in posttraumatic spleenless patients // Zentralbl. Chir. 1997. -V.122. - №10. -P.909-913.

119. Feder HM Jr, Pearson HA. Assessment of splenic function in familial asplenia.// N Engl J Med 1999. -V. 341 -P. 210-212

120. Federlin K.F., Jahr H., Bretzel R.G. Islet transplantation as treatment of type 1 diabetes: from experimental beginnings to clinical application.// Exp Clin Endocrinol Diabetes 2001. - V.109. - Suppl 2 - P. 373-83

121. Ferguson A. Hazards of hyposplenism.// BMJ- 1982. -V.285 P. 13751376

122. Fotiadis C., Kontzoglou C., Dousaitou P., Sehas M., Skalkeas G.R. Indications and early results of splenectomy in hematologic diseases // Chirurgie- 1992. V. 118(5) - P.309-14

123. Fox I.J., Langnas A.N., Ozaki C.F. et al. Succesful application of extracorporal liver perfusion for the treatment of fulminant hepatic failure: a technology whose time has come// Am. Gastroenterol. 1993. - V.88. -P. 1876-1881

124. Garside P., Ingulli E., Merica R., Johnson J., Noelle R., Jenkins M. Visualization of specific B and T lymphocyte interactions in the lymph node.// Science -1998. V. 281 - P. 96

125. Gopal V., Bisno A.L. Fulminant pneumococcal infection in 'normal' asplenic hosts// Arch Intern Med. 1977. - V.137-P. 1526-1530

126. Gray D.W., McShane P., Fairbrother B., Morris P.J. The use of spleen transplantation and cyclosporine treatment to induce unresponsiveness topancreatic islet transplantation in rats.// J Surg Res- 1986 Jan.- V.40(l) -P. 7784

127. Griffini L., Tizzoni G. Etude expérimentale sur la rérpoduction partielle de la rate.// Arch Ital Biol 1883. - V. 4 -P.303-306

128. Hansen K., Singer D.B. Asplenic-hyposplenic overwhelming sepsis: postsplenectomy sepsis revisited// Pediatric and Developmental Pathology -2001.-V. 4-P. 105-121

129. Hathaway J.M., Harley R.A., Sally S., Schiffman G., Virella G. Immunological function in post-traumatic splenosis.// Clin Immunol Immunopathol. 1995. - V. 74 -P. 143-150

130. Hemmila M.R., Foley D.S., Castle V.P. et al. The response to splenectomy in pediatric patients with idiopathic thrombocytopenic purpura who fail high-dose intravenous immune globulin // J. Pediatr. Surg. 2000. -V.35. - №6. - P.967-971

131. Hoch J., Hochov I., Siminovske V. Portal vein thrombosis after splenectomy // Rozhl. Chir. 1997. - V.76. - № 4. - P. 192-195.

132. Iinuma H., Okinaga K., Sato S., Tomioka M., Matsumoto K. Optimal site and amount of splenic tissue for autotransplantation.// J Surg Res -1992 Aug-V. 53(2)-P. 109-16

133. Ivemark B.I.' Implications of agenesis of the spleen on the pathogenesis of cono-truncus anomalies in childhood.// Acta Paediatr 1955 -V. 44(Suppl 104)-P. 1-110

134. Kanzler B., Dear T.N. Hoxll acts cell autonomously in spleen development and its absence results in altered cell fate of mesenchymal spleen precursors// Dev. Biol. 2001 Jun.l - V.234(l)-P. 231-43

135. Kemahli S., Canatan D., Cin S., Uysal Z., Akar N., Arcasoy A. Postsplenectomy thrombosis and haemolytic anaemias. Br J Haemtol 1997 V. 97-P.504-510

136. King H., Shumacher H.B. Susceptibility to infection after splenectomy performed in infancy.// Ann Surg -1952. -V. 136 -P.239-242

137. Knezevic S., Stefanovic D., Petrovic M., Djordjevic Z., Matic S., Artiko V., Milovanovic A., Popovic M. Autotransplantation of the spleen// Acta Chir Iugosl 2002. -V. 49(3) -P. 101 -6

138. Knyszynski A., Gottlieb P., Fridkin M. Inhibition by tuftsin of Rauscher virus leukemia development in mice. // J Natl Cancer Inst -1983 V. 71 - P. 87-90

139. Koren A., Haasz R., Tiatler A., Katzuni E. Serum immunoglobulin levels in children after splenectomy // Amer. J. Dis. Child.- 1984.- V.138.- P.53-55.

140. Kragballe K., Lanng N.J., Soiling J., Monocite cytotoxyty after splenectomy// Scand. J. Haematol.- 1981.-V.27.-P. 271-278.

141. Krivit W., Giebink G.S., Leonard A.S. Overwhelming posrsplenectomy infection // Surg. Clin North Am 1979. - V.59 - P.223-233

142. Lanza Robert P., Langer Robert, William L. Chick Principles of tissue engineering // R.G.Landes Company/ Austin, Texas 1997 - 1200 p.

143. Leitner W.,' Bergmann E.S., Thalhamer J. Regeneration of splenic stromal elements.// Res Exp Med (Berl) -1994 V. 194(4) -P.221-30

144. Leonard A.S., Giebink G.S., Basel J.J., Krivit W. The overwhelming postsplenectomy sepsis problem. // World J Surg. 1980. - V.4. - P.423-432

145. Linn L.X., Ou-cong H.E., Wang S.L.: Spleen transplantation. Experimental observations on autotransplantation of splenic tissue into omental pouch. //Acta Acad. Med. Wuhan 1985 - V.5 - P. 185

146. Livingston C.D., Levine В.A., Sirinek K.R. Preservation of splenic tissue prevents postsplenectomy pulmonary sepsis following bacterial challenge.// J Surg Res -1982 V.33 - P.356-361

147. Long Z.Etal.//Hum. GeneTher- 1998 V.9. -P.l 165

148. Machesky K.K., Cushing R.D. Overwhelming postsplenectomy infection in patient with penicillin-resistant Streptococcus pneumoniae.//Arch Fam Med 1998. - V.7 - №2. - P.l78-180

149. Malangoni M.A., Dawes L.G., Droege E.A., Rao S.A., Collier B.D., Almagro U.A. Splenic phagocytic function after partial splenectomy and splenic autotransplantation.// Arch Surg 1985-V. 120 -P.275-278

150. Malangoni M.A., Evers B.M., Peyton J.C., Wellhausen S.R. Reticuloendothelial clearance and splenic mononuclear cell populations after resection and autotransplantation.// Am J Surg -1988 V.155 - P. 298-302

151. Malcolm L., Brigden M.D., Andy L. et al. Prevention and management of overwhelming postsplenectomy infection // J. Critical Care Medicine.-1999.-V.27.-P.836-842

152. Markmann J.F., Tomaszewski J., Posselt A.M. et al The effect of islet cell culture in vitro at 24 С on graft survival and MHC antigen expression // Transplantation.- 1990. V. 49 - N 2. - P. 272 - 277

153. Marques R.G., Petroianu A., Coelho J.M., Portela M.C. Regeneration of splenic autotransplants// Ann Hematol. -2002, Nov V. 81(11) - P. 622-6.

154. Miko I., Bra'th E., Furka I., Kova J., Kelvin D. Zhong R. Spleen allotransplantation in mice: a novel experimental model for immunology study // Microsurgery. 2001. - V.21 - P. 140-142

155. Mizukami T., Yokoyama H., Okamura Y. et al. Splenectomy attenuates superoxide anion release into the hepatic sinusoids after lipopolysaccharide challenge. //J. Hepatol.- 1999.- №31(2).- P.235-241.

156. Moore F.A., Moore E.E., Moore G.E., Erdoes L. Fivefold enlargement of implants in a splenic autotransplant recipient.// Surgery 1993 - V.l 13 -P. 462-465

157. Morgenstern L., Shapiro S.J. Techniques of splenic conservation.// Arch Surg 1979 - V. 114 -P.449-454

158. Najjar V.A. Biological and biochemical characteristics of the tetrapeptide tuftsin, Thr-Lys-Pro-Arg.// Adv Exp Med Biol -1980. -V. 121A (Macrophages Lymphocytes, Pt. A) P. 131- 47

159. Neu B., Voigt A., Mitlohner R., Leporatti S., Donath E., Gao C.Y., Kiesewetter H., Mohwald H., Meiselman H.J., Baumler H. Biological cells as templares for hollow microcapsules // .^Microencapsulation 2001 - V.l8. — P.385-395

160. Nishioka K., Amoscato A.A., Babcock G.F., Banks R.A., Phillip J.H. Immunomodulating peptide hormone and its clinical potential as a natural biological response modifier. Cancer Ivest. 1984- V. 2 - P.39-49

161. Nolte M.A., Hoen E.N.M., van Stijn A., Kraal G., Mebius R.E. Isolation of the intact white pulp. Quantitative and qualitative analysis of the cellular composition of the splenic compartments // Eur. J. Immunol.- 2000 V. 3- P. 626-634

162. Noyes R.D., Babcock G.F., Nishioka K. Antitumor activity of tuftsin on murine melanoma in vivo.// Cancer Treat Rep -1981. V.65. - P.673-5;

163. Oppenheim J.J. Overview of chemokines.// Adv. Exp. Med. Biol. 1993. -V.351.-P. 183-186

164. Pabst R., Reilmann H. Regeneration of heterotopically transplanted autologous splenic tissue.// Cell Tissue Res 1980. - V.209 -P. 137-143

165. Pabst R., Westermann, J. and Rothkotter, H.J., Immunoarchitecture of regenerated splenic and lymph node transplants. // Int. Rev. Cytol. 1991. -V. 128-P. 215-260

166. Pachter H:L., Hofstetter S.R., Spencer F.C. Evolving concepts in splenic surgery: splenorrhaphy vs. splenectomy and postsplenectomy drainage: esperience in 105 patients.// Ann Surg 1981 - V. 194 - P. 262-268

167. Paradis K., Langford G., Long Z., Heneine W., Sandstrom P., Switzer W.M. et al. // Science. 1999. - V.285. - P.1236-1241

168. Parker H.H., Bynoe R.P., Nottingham J.M. Thrombosis of the portal venous system after splenectomy for trauma.// J Trauma.- 2003, Jan. V. 54(1) -P. 193-6

169. Parrillo J.E. Mechanisms of disease: pathogenetic mechanisms of septic shock.// N Engl J Med 1993. - V.328 -P. 1471-1477.

170. Patel J., Williams J.S., Shimigel B., Hinshaw J.R. Preservation of splenic function by autotransplantation of traumatized spleen in man. //Surgery 1982 - V. 90 - P. 683

171. Patel J.M., Williams J.S., Nairn J.O., Hinshaw J.R. The effect of site and technique of splenic tissue reimplantation on pneumococcal clearance from the blood. //J Pediatr Surg 1986-V. 21 - P. 877-880

172. Patience C., Takeuchi Y., Weiss R. Infection of human cells by an endogenouse virus of pigs. // Nature Medicine. 1997. — V.3. - P.282-286

173. Pearson HA, Johnston D, Smith KA, Touloukian RJ The born-again spleen. Return of splenic function after splenectomy of trauma.// N Engl J Med 1978 - V.298-P. 1389-1392

174. Pearson H.A. The spleen and disturbances of splenic function. // In: Nathan D.G., Oski F.A., eds. Hematology of Infancy and Childhood, 4th edition.// Philadelphia: WB Saunders 1992-P. 1063-1064.

175. Perloff L.J., Ali Naji, Silvers W.K. Vascularised pancreas versus isolated islet allografts: an immunological comparison // Surgery. 1980. - V. 88. - N 2. - P. 222 - 230

176. Pirenne J., D'Silva M., Jacquet N. Use of spleen transplantation and cyclosporine A treatment to ameliorate survival after small bowel transplantation.// Transplant Proc -1993 Feb V. 25(1 Pt 2) - P.1206

177. Rice H.M., James P.D. Ectopic splenic tissue failed to prevent fatal pneumococcal septicaemia after splenectomy for trauma.//Lancet 1980 — V.l -P. 565-566

178. Rickert C.H., Maasjosthusmann U., Probst-Cousin S., August C., Gullotta F. A unique case of cerebral spleen. //Am J Surg Pathol 1998 V. 22 — P. 894-896

179. Rodgers B.M., Tribble C., Joob A. Partial splenectomy for Gaucher's disease.// Ann Surg 1987. - V. 205 -P. 693-699

180. Rodriguez Gomez M., Oehler U., Helpar B. Fulminant infection outcome after splenectomy // Patholog. 1997. - V. 18. - №3. - P.257-260

181. Rubinstein E., Rubinovitch B. Treatment of severe infections caused by penicillin-resistant pneumococci: role of third generation cephalosporins// Infection (Munchen).- 1994-V. 22-P. 161-166.

182. SabauPJ., Gomez P.M.I., Galindo C.R., Melero P.J.R., Palanca M.J. Splenectomy indications at a general hospital// Rev Clin Esp 1999 Mar -V. 199(3)-P. 126-31

183. Sasaki K., Kiuchi Y., Sato Y., Yamamori S. Morphological analysis of neovascularization at early stages of rat splenic autografts in comparison with tumor angiogenesis.// Cell Tissue Res 1991 - V. 265 - P. 503-510

184. Selby C., Hart S., Ispahani P., Toghill P.J. Bacteraemia in adults after splenectomy or splenic irradiation // Q. J. Med. 1987. - Vol.63. - №242. -P.523-530.

185. Siemion I.Z., KluczykA. Tuftsin: On the 30-year anniversary of Victor Najjar's discovery// Peptides 1999 - V.20. - P. 645-674

186. Singer D.B. Postsplenectomy sepsis.// Perspect Pediatr Pathol -1973 -V. 1 -P. 285-311.

187. Sharma O.P., Vucinic V., James D.S., Splenectomy in sarcoidosis: indications, complications, and long-term follow-up.// Sarcoidosis Vase Diffuse Lung Dis 2002 Mar. - V. 19(1) -P. 66-70

188. Smith E., De Young N.J., Drew P.A. Immune cell subpopulations in regenerated splenic tissue in rats. //Aust N Z J Surg 1999 - V. 69. - P. 522525

189. Sok J., Su' W., Hopkins M.A. Portal vein thrombosis following laparoscopic splenectomy for beta-thalassemia: a case study.// Surg Endosc -2001 Dec-V. 15(12)-P.1489

190. Steiniger B., Barth P., Hellinger A., The perifollicular and marginal • zones of the human splenic white pulp : do fibroblasts guide lymphocyte immigration?//Am J Pathol 2001 Aug. - V. 159(2) - P.501-12

191. Suehiro S., Nagasue N., Ogawa Y. et al. The negative effect of splenectomy on the prognosis of gastric cancer // Amer. J. Surg.- 1984.-V.148.- P.645-648

192. Sukhorukov G.B. Multilayer hollow microspheres// Citus Books, 2002 -MML Series V.5 - P. 112-145

193. Suzuki H., Li X.H., Miyamoto M., Sano T., Hattori Y., Yamashita A. Induction of transplantation tolerance in adult rats by vascularized spleen ransplantation. //Transplantation -1997- Aug 27 V. 64(4) - P. 650-4

194. Tang W., Wu F., Huang M., Friess H. Splenic tissue autotransplantation in rabbits: no restoration of host defense // Langenbecks Arch Surg —2003 V. 387-P. 379-385

195. Tavassoli M., Ratzan R.J., Crosby W.H. Studies on regeneration of heterotopic splenic autotransplants.// Blood 1973 -V. 41 -P. 701-709

196. Thoma R., Postel J. Fulminant sepsis following posttraumatic splenectomy-OPSI (overwhelming postsplenectomy infection) syndrome// Anaesthesist -1989 Jul V. 38(7) -pp. 379-82;

197. Tulikoura I., Lassus J., Konttinen Y.T., Juutilainen T., Santavirta S. A safe surgical technique for the partial resection of the ruptured spleen. A clinical report.// Injury 1999Dec - V.30(10) - P.693-7

198. Van Wyck D.B., Witte M.H., Witte C.L., Thies A.C. Jr. Critical splenic mass for survival from experimental pneumococcemia.// J Surg Res 1980 -V. 28 — P.14-17

199. Vilesov A.D., Zhuravsky E.P., Vilessova M.S., Netchaeva E.A., Ayzenshtadt N.I., Stankevich R.P., Isidorov R.V. New-types apparatus for producting microcapsules and microgranules// Int. J. Pharmaceutics — 2002 -V. 242-P.101-106

200. Wadham B.M., Adams P.B., Johnson M.A. Incidence and location of accessory spleens. //N Engl J Med 1981 - V.304 - p. 1111.

201. Watanabe F.D., Mulon C., Hewitt W.R. et al. Clinical experience with a bioartifical liver in the treatment of sever liver failure; a phase I clinical trial. // Ann. Surg. 1997. - V.225. - P.484 - 491

202. Weber T., Hanisch E., Baum R.P., Seufert R.M. Late Results of Heterotopic Autotransplantation of Splenic Tissue into the Greater Omentum // World J. Surg. 1998 - V. 22 -P. 883-889

203. Weibel R.E., Vella P.P., Mclaren A.A., Woodhour A.F., Davidson W.L., Hilleman M.R. Studies in human subjects of polyvalent pneumococcal vaccines.//ProcSoc Exp Bio Med.-1977.- V. 156-P. 144-150

204. Williams D.N., Kaur B. Postsplenectomy care. Postgraduate Medicine -1996-V. 100-P. 1

205. Winslow E.R., Brunt L.M., Drebin J.A., Soper N.J., Klingensmith M.E. Portal vein thrombosis after splenectomy.// Am J Surg- 2002 Dec. V. 184(6) -P. 631-5

206. XiangW.Z., JieZ.W., Sheng X.C. Clinical observation on hemophilia a treatment by cadaveric spleen transplantation// Transplantation Proceedings -2002-V. 34 (5)-P. 1929-1931

207. Zer M., Freud E. Subtotal splenectomy in Gaucher's disease: towards a definition of critical splenic mass.// Br J Surg 1992 -V.79 -P. 742-744

208. Zoli G., Corrazza G.R., D, Amato G. Splenic autotransplantation after splenectomy: tuftsin activity correlates with residual splenic function // Br. J. Surg. 1994. - V.81. - №5. - P.716-718

Оглавление диссертации Беляева, Ирина Геннадьевна :: 2004 :: Санкт-Петербург

Введение диссертации по теме "Хирургия", Беляева, Ирина Геннадьевна, автореферат

Список использованной литературы по медицине, диссертация 2004 года, Беляева, Ирина Геннадьевна

Похожие научные работы

Каталог диссертаций