Оценка эффективности терапии больных ревматоидным артритом с помощью антительного магнитоуправляемого сорбента к патогенетическим циркулирующим иммунным комплексам

Афанасьев, Николай Евгеньевич

Диссертации по медицине → Ревматология

Автореферат и диссертация по медицине (14.01.22) на тему:Оценка эффективности терапии больных ревматоидным артритом с помощью антительного магнитоуправляемого сорбента к патогенетическим циркулирующим иммунным комплексам

ДИССЕРТАЦИЯ

Оценка эффективности терапии больных ревматоидным артритом с помощью антительного магнитоуправляемого сорбента к патогенетическим циркулирующим иммунным комплексам - диссертация, тема по медицине

АВТОРЕФЕРАТ

Афанасьев, Николай Евгеньевич Волгоград 2010 г.

Ученая степень: кандидата медицинских наук

ВАК РФ: 14.01.22

Автореферат диссертации по медицине на тему Оценка эффективности терапии больных ревматоидным артритом с помощью антительного магнитоуправляемого сорбента к патогенетическим циркулирующим иммунным комплексам

На правах рукописи

АФАНАСЬЕВ Николай Евгеньевич

ОЦЕНКА ЭФФЕКТИВНОСТИ ТЕРАПИИ БОЛЬНЫХ РЕВМАТОИДНЫМ АРТРИТОМ С ПОМОЩЬЮ АНТИТЕЛЬНОГО МАГНИТОУПРАВЛЯЕМОГО СОРБЕНТА К ПАТОГЕНЕТИЧЕСКИМ ЦИРКУЛИРУЮЩИМ ИММУННЫМ КОМПЛЕКСАМ

14.01.22 - ревматология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

3 О СЕН 2010

Волгоград - 2010

004609709

Работа выполнена в ГОУ ВПО «Ставропольская государственная медицинская академия Росздрава»

Научный руководитель:

доктор медицинских наук, профессор БАТУРИН Владимир Александрович

Официальные оппоненты: доктор медицинских наук, профессор

ГОНТАРЬ Илья Петрович

доктор медицинских наук, профессор ЧИЖОВ Петр Александрович

Ведущая организация:

ГОУ ВПО «Ростовский-на-Дону государственный медицинский университет Росздрава»

Защита состоится «_» октября 2010 г. в_часов на заседании Диссертационного совета Д 208.008.02 при ГОУ ВПО «Волгоградский государственный медицинский университет Росздрава» по адресу: 400131, г. Волгоград, пл. Павших борцов, 1.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГОУ ВПО «Волгоградский государственный медицинский университет Росздрава».

Автореферат разослан «_»_2010 г.

Ученый секретарь

диссертационного совета Д 208.008.02 доктор медицинских наук, профессор

А.Р .Бабаева

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы

Ревматоидный артрит (РА) - одно из наиболее распространенных хронических воспалительных аутоиммунных заболеваний соединительной ткани с преимущественным поражением периферических суставов, приводящее к деструкции суставного хряща с эрозированием подлежащей костной ткани. РА страдает около 1 % населения Земного шара. В Российской Федерации среди регистрируемых нозологических форм ревматических заболеваний в 2005 г. показатель заболеваемости РА у взрослых составил 240 на 100 000 человек. Возраст большинства заболевших 20-30 лет, причем чаще он встречается у женщин (Насонов ЕЛ, 2007).

Течение и исход ревматоидного артрита во многом зависит от правильного выбора фармакотерапии и методов лечения у конкретного больного. Менее чем у 15 % больных РА протекает относительно доброкачественно, моноциклически, с редкими эпизодами обострений; в 2/3 наблюдений заболевание характеризуется медленным, но неуклонным прогрессированием с неполными ремиссиями и частыми обострениями, приводящими к ранней потере трудоспособности. Наконец, примерно в 10 - 15 % случаев наблюдается «злокачественный» вариант РА с быстрым множественным поражением суставов, резистентностью к проводимой терапии и тяжелым, потенциально смертельным нарушением функций внутренних органов, что практически не оставляет шансов на возвращение к трудовой деятельности (Кремлева О.В., 2004; Насонов ЕЛ., 2007).

Кроме того, необходимо иметь в виду, что ревматические заболевания в целом и РА, в частности, обладают высокой стоимостью лечения, которая складывается из затрат, обусловленных длительным, в подавляющем большинстве случаев - пожизненным медикаментозным лечением, а также эндопроте-зированием суставов и многочисленными непрямыми расходами.

В последнее время в данном направлении проводятся активные научные исследования: разработаны новые тест-системы для ранней диагностики заболевания, выявлены отдельные маркеры прогноза, генно-инженерным путем синтезированы лекарственные препараты нового поколения (Зборовская И.А, 1995).

разованию иммунных комплексов, патогенетическое значение которых настолько существенно, что РА часто называют болезнью иммунных комплексов. Считается, что именно мелкие и средние циркулирующие иммунные комплексы (ЦИК) наиболее патогенны и вызывают ряд цепных реакций, индуцирующих и под держивающих воспаление, определяющих прогрессирующее течение ревматоидного артрита (Константинова Н.А., 1996). Клиническое значение ЦИК состоит в том, что их значительная концентрация в крови больных РА является показателем высокой активности заболевания, а также свидетельствует о системности поражения (Насонов Е.Л., 2002).

В этом аспекте представляются перспективными исследования, направленные на изучение ЦИК при РА, как с позиций диагностики активности и формы патологического процесса, изучения отдельных звеньев патогенеза заболевания, так и возможности коррекции иммунологических нарушений, контроля эффективности проводимой терапии.

Цель исследования: разработать иммунологический тест для оценки эффективности проводимой терапии и прогнозирования течения заболевания у больных ревматоидным артритом на основе иммуномагнитной сепарации патогенетических циркулирующих иммунных комплексов и их детекции в имму-ноферментном методе анализа.

Основные задачи исследования

1. Получить антительный магнитоуправляемый сорбент на основе специфических антител к патогенетическим циркулирующим иммунным комплексам.

2. Адаптировать модифицированный иммуноферментный метод анализа для определения циркулирующих иммунных комплексов и дать его сравнительную оценку с традиционным ИФА.

3. Изучить содержание циркулирующих иммунных комплексов у доноров. Определить границы нормы.

4. Изучить содержание циркулирующих иммунных комплексов в сыворотке крови больных РА в зависимости от активности, кпинико-анатомической формы заболевания и наличия ревматоидного фактора (РФ).

5. Дать сравнительную оценку эффективности фармако- и эфферентной терапии при различных схемах лечения РА с привлечением разработанного диагностического теста.

Научная новизна исследования

• Впервые для иммунодиагностики РА создан антительный магнитоуправ-ляемый сорбент на основе специфических антител к патогенетическим циркулирующим иммунным комплексам.

• Разработан вариант ИФА с использованием данного сорбента, подобраны оптимальные условия его постановки. Применение иммуномагнитной сепарации позволило повысить специфичность и чувствительность ИФА на несколько порядков, что существенно увеличило достоверность получаемых результатов при мониторировании уровня ЦИК в крови больных РА.

• С привлечением модифицированного нами теста ИФА в сыворотках крови больных РА обнаружены патогенетические циркулирующие иммунные комплексы. Показано, что их уровень достоверно отличается от содержания ЦИК в сыворотке крови здоровых лиц.

• Выявлена корреляция ЦИК у больных РА с активностью патологического процесса, а наличие висцеральных проявлений сопровождается максимальными значениями циркулирующих иммунных комплексов.

• Динамика уровня ЦИК позволяет прогнозировать клиническое течение РА и судить об эффективности проводимой терапии.

Практическая ценность

Разработан доступный для применения в клинических лабораториях диагностический тест по определению патогенетических мелких и средних ЦИК. Выявление ЦИК в предложенной модификации ИФА может быть использовано в качестве дополнительного теста в комплексной диагностике РА для характеристики активности патологического процесса, особенно на ранних стадиях заболевания, и прогнозирования клинических форм РА. Показана эффективность включения в комплекс лечебных мероприятий методов эфферентной терапии.

Результаты исследований легли в основу методических рекомендаций «Магноиммуносорбенты в микробиологических и клинических исследованиях», одобренных Ученым советом ФГУЗ «СтавНИПЧИ» Роспотребнадзора (протокол № 9 от 27.10.2005) и утвержденных директором института.

Основные положения, выносимые на защиту

ских антител к патогенетическим циркулирующим иммунным комплексам в качестве дополнительного теста для диагностики степени активности, характера течения, формы РА, а также оценки эффективности проводимой терапии.

Внедрение в практику

Разработанный новый диагностический тест, сочетающий применение селективной иммуномагнитной сепарации циркулирующих иммунных комплексов из крови больных РА и последующее определение их уровня в иммуноферментном анализе, внедрен в практику работы Государственного учреждения здравоохранения «Ставропольский клинический центр специализированных видов медицинской помощи», Муниципального учреждения здравоохранения «Консультативно-диагностическая поликлиника» (г. Ставрополь), Муниципального учреждения города Ставрополя «Городская детская поликлиника №3».

Апробация работы. Результаты исследований по теме диссертации доложены, обсуждены, опубликованы в материалах VII Межгосударственной научно-практической конференции государств - участников СНГ «Чрезвычайные ситуации международного значения в общественном здравоохранении в решениях Санкт-Петербургского саммита «Группы восьми» и санитарная охрана территорий государств - участников содружества Независимых Государств (Оболенск, 2006); Всероссийской научной конференции, посвященной 210-й годовщине основания Военно-медицинской академии «Теоретические основы эпидемиологии. Современные эпидемиологические и профилактические аспекты инфекционных и массовых неинфекционных заболеваний» (Санкт-Петребург, 2008).

Результаты диссертации были апробированы на расширенном заседании кафедр клинической фармакологии, внутренних болезней, клинической фармакологии, бактериологии, аллергологии и иммунологии ФПДО ГОУ ВПО «Ставропольская государственная медицинская академия Росздрава» 29 мая 2010 года (Протокол № 11).

Публикация научных исследований. По теме диссертации опубликовано 17 научных работ, в том числе 6 работ - в изданиях, рекомендованных ВАК РФ.

Структура и объем работы. Диссертация изложена на 144 листах и включает следующие разделы: введение, обзор литературы, результаты собственных исследований и их обсуждение, выводы, практических рекомендации и приложение. Работа иллюстрирована 13 таблицами и 14 рисунками. Спи-

сок использованной литературы включает 197 источников, из них 94 отечественных и 103 зарубежных авторов.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Под наблюдением находились 139 больных с достоверным РА по критериям Американской коллегии ревматологов и 30 практически здоровых людей в возрасте от 24 до 46 лет (19 женщин и 11 мужчин) - доноров станции переливания крови, прошедших обычное обследование.

Среди 139 больных РА - 119 (85,6 %) женщин и 20 ( 14.4 %) мужчин. Средний возраст больных 46,6+13,2 года (М±80). Средняя продолжительность РА составила 9,4 ± 2,3 года.

Степень активности патологического процесса определялась в соответствии с диагностическими критериями и рабочей классификацией РА, на основании которых 1-ая степень (минимальная) выявлена у 28 (20,14 %), П-ая (умеренная) степень - у 77 (55,4%) и Ш-я (максимальная) - у 34 (24,46 %) больных. Взаимосвязь активности патологического процесса и возраста больных РА свидетельствует, что наиболее многочисленной была категория больных в возрасте 41-67 лет (66,9 %) (рисунок 1).

□ - 41 -60 лет □ - 31 -40 лет

□ - меньше 30 лет □ - старше 60 лет

Рисунок 1 - Распределение больных РА в зависимости от возраста

На основании критериев Штейнброкера установлены следующие рентгенологические стадии поражения суставов: 1-ая стадия-у 14 (10,07 %), П-ая - у 82 (58,99 %), Ш-я - у 37 (26,6 %) и ГУ-я - у 6 (4,3 %) больных РА. Четкой зависимости между рентгенологической стадией поражения суставов и активностью патологического процесса выявлено не было.

По степени функциональной недостаточности суставов распределение больных было следующим: I функциональный класс (ФК) установлен у 6 (4,3 %), П-ой ФК - у 48 (34.5 %), Ш-й ФК - у 75 (53,9 %), 1У-Й ФК-у 10 (7,2 %) больных РА (таблица 1). Потеря функциональной способности пораженных суставов была более выражена при высоких степенях активности заболевания.

Таблица 1 - Взаимосвязь функциональной недостаточности суставов с активностью РА

Степень активности Количество больных Функциональная недостаточность суставов

ФК-1 ФК-11 ФК-Ш ФК-IV

I 28 3 (10,7 %) 15 (53,6 %) 10 (35,7%) -

II 77 3 (3,89 %) 26 (33,7%) 44(57,1%) 4(5,2 %)

III 34 - 7 (20,5%) 21(61,7%) 6(17,6%)

Всего: 139 6 (4,3 %) 48 (34,5 %) 75 (53,9) 10(7,2 %)

Преимущественно суставная форма РА была диагностирована у 106

(76,2 %) больных. Системные проявления РА зафиксированы у 108 (77,6 %) больных (таблица 2). Наиболее частыми из них были лимфоаденопатия (44,4 %), снижение массы тела (49,0 %), миотрофия (50,9 %), анемия (62,0 %), лихорадка (42,5 %), ревматоидные узелки (28,7 %), синдром Рейно (6,5 %). Такие системные проявления, как ревматоидный васкулит (3,7 %), диффузный интерстициальный фиброз легких (2,7 %), нефропатия (1,8 %), у обследованных больных диагностировались реже.

Таблица 2 - Системные проявления РА в группе обследованных больных

Внесуставные Проявления Количество больных (п=108) %

Миотрофия 55 50,9

Лимфоаденопатия 48 44,4

Анемия 67 62,0

Снижение массы тела 53 49,0

Лихорадка 46 42,6

Ревматоидные узелки 31 28,7

Ревматоидный васкулит 4 3,7

Синдром Рейно 7 6,5

Нефропатия 2 1.8

Диффузный интерстициальный фиброз легких 3 2.7

Полученные данные свидетельствуют о том, что наиболее часто у больных РА наблюдался суставной синдром, характеризующийся симметричным поражением суставов, включающий утреннюю скованность, боли при движениях и при пальпации, ограничение движений в пораженных суставах и их припухлость. Чаще поражались мелкие суставы кистей и стоп, лучезапястные и коленные суставы. У большинства больных (91,01%) выявлялся полиартрит. У 103 (74,1 %) больных в крови методом латекс-агглютинации был обнаружен ревматоидный фактор.

Из сопутствующих заболеваний у больных РА наиболее часто диагностировались ишемическая болезнь сердца (34,7 %), гипертоническая болезнь (35,5 %), хронический пиелонефрит (23,1 %), заболевания щитовидной железы (20,6 %) в виде диффузно-узлового нетоксического зоба и аутоиммунного тиреоидита. Указания на патологию со стороны желудочно-кишечного тракта выявлены у 41,3 % больных РА. По результатам инструментального обследования и амнестическим данным у 19,8 % пациентов диагностирован хронический гастрит, у 10,7 % - язвенная болезнь желудка и 12- перстной кишки (вне обострения), у 13,2 % - желчнокаменная болезнь. Реже встречался хронический бронхит - 10,7 % случаев, бронхиальная астма - в 1,6 % случаев. Сахарный диабет II типа наблюдался у 3,3 % больных РА. Хронический вирусный гепатит С диагностирован у 1,6 % больных.

При исследовании периферической крови у пациентов РА часто наблюдались изменения в клиническом анализе крови в виде снижения гемоглобина (52,8 %), снижения содержания эритроцитов (38,1 %) и повышения количества лейкоцитов и тромбоцитов (14,0 % и 36,3 % больных, соответственно).

При анализе биохимических показателей в сыворотке крови (таблица 3) у обследованных больных до лечения было выявлено повышенное содержание у-глобулинов, умеренная гипоальбуминемия, свидетельствующая об активности РА. Концентрация их в сыворотке крови уменьшалась по мере снижения активности иммуновоспалительного процесса.

Таблица 3 - Некоторые биохимические показатели у обследованных больных PA (М±т)

Показатели РА (п=139) Границы нормы

Общий белок, г/л 74,4±6,4 65-85

Альбумины, % 52,1+5,5 53-68

AJ1T, мккат/л 0,096+0,006 0,0278-0,189

ACT, мккат/л 0,074+0,011 0,0278-0,125

Общий билирубин, мкмоль/л 12,3+1,8 8,55-20,52

Показатели РА (п=139) Границы нормы

Мочевина, мкмоль/л 4,8±0,3 3,6-8,3

Креатинин, мкмоль/л 0,078±0,001 0,06-0,13

Щелочная фосфотаза, 1U/1 89,1 ±8,1 30-90

Глобулины, % 47,9+5,5 32-47

а2-глобулины, % 9,3±2,0 7,0-10,0

у-глобулины, % 21,6±4,3 13,0-21,0

Для выделения «среднемолекулярных» и «низкомолекулярных» патогенетических ЦИК использовали сыворотку крови больных РА, взятую в фазе обострения болезни, применив метод преципитации полиэтиленгликолем (ПЭГ-6000) в конечной концентрации - 3,85 %.

Для получения антительного магноиммуносорбента (МИС) использовали иммуноглобулины класса G, выделенные из высокоспецифичных гипериммунных сывороток, полученных по оригинальной схеме иммунизации кроликов породы «Шиншилла» патогенетическими ЦИК. Все процедуры на экспериментальных животных проводили согласно рекомендациям В.В.Карпенко, В.И.Сачковой (1985), С.А.Куфлиной, Т.Н.Павловой (1985).

Активность гипериммунной кроличьей сыворотки определяли в реакции двойной иммунодиффузии в 1 % агаровом (Difco, USA) геле по О. Ouchter-lony (1949).

Иммуноглобулины класса G (IgG) выделяли полиэтиленгликолем - 6000 (ПЭГ) по A. Potgieter, J.E. Largier (1964).

Магносорбент (МС) изготавливали на основе алюмосиликата (ТУ 3810267-84). Удельную поверхность (S, м2) полученного алюмосиликатного МС определяли по методу А.А.Клячко-Гурвич (1961). Суммарный объем и радиус пор МС определяли по методу Н.В.Кельцева (1984).

Иммунопероксидазные конъюгаты получали методом перйодатного окисления по P.K.Nakane, A.A.Kawaoi (1974). Рабочий титр и специфическую активность конъюгата определяли по методике M.Clark и A.Adams (1977) в «сэндвич» - варианте ИФА.

Очистку иммунопероксидазных конъюгатов и белковых препаратов проводили методом ультрафильтрации на хроматографической системе «Minicol-dlab» (LKB, Швеция), используя сефадекс G-100.

Количественное определение белка проводили спектрофотометрически (СФ-46) (Dawson R.M.C., Elliton D.C., Elliton W.N. et al„ 1991).

Результаты анализировали с помощью программ MS EXCEL и программы системы «STATISTICA 6.0 for Windows» (Боровиков В.П.. 1997), а также по оригинальным программам с использованием формул, приведенных в соответствующих руководствах. Представление описательных статистик и выбор статистических критериев производились, исходя из цели исследования, решаемых при этом задач и рекомендаций руководств по биостатистике.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯМ ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Сравнительный клинико-лабораторный анализ эффективности схем терапии ревматоидного артрита

Проводимая терапия больных РА заключалась в том, что 83 (59,7 %) пациента получали фармакотерапию, из них 14(16,8 %) больных РА - монотерапию (НПВП либо ГКС), а 69 (83,1 %) - комплексную фармакотерапию (НПВП. ГКС, иммунокорректор метотрексат в их различных сочетаниях) (рисунок 2). В 40,3 % (56 больных) в общую схему фармакотерапии РА включали эфферентную терапию в виде лечебного плазмафереза (рисунок 3).

Я нпвп+гкс

■ гкс+нпвп+метотрексат нпвп

Рисунок 2 - Схемы фармакотерапии больных РА

Сравнительный клинико-лабораторный анализ эффективности схем лечения терапии РА показал, что информативность используемых лабораторных методов неравнозначна, при этом имеются различия в динамике изучаемых клинико-лабораторных показателей для разных видов лечения. Так, согласно

I группа 9 (6,47

II группа - 5 (3,59 %)

IV ipyillld 14 (10,07 %)

III группа 55 (39,57 %)

VII группа

14 МП Л"7 0Х\

V группа 13 (9,35 %)

□ нпвл+гкс+метотрексат+лп

■ нпвп+гкс+лп

□ гкс+лп

VI группа 29 (20,86 %)

Рисунок 3 - Комплексные схемы фармакотерапии больных РА с ЛП

критерию БА828, в 1 и II группах отмеченные изменения были < 0,6 балла, что соответствует отсутствию эффекта, а в остальных группах больных РА наблюдался умеренный эффект от проводимой терапии. У больных 1-Ш групп не отмечено статистически достоверного изменения в показателях РФ, лейкоцитов, иммуноглобулинов, фибриногена, в I-(V группах - белка крови, в 1-11 группах -С-реактивного белка (р > 0,05).

Лишь в V, VI и VII группах больных РА на фоне статистически достоверного снижения индекса активности ОА828 (р < 0,002) было отмечено существенное снижение клинических показателей: С-реактивного белка, РФ, СОЭ, иммуноглобулинов классов А, М, в (р < 0,001). Таким образом, включение в комплексную терапию эфферентного метода лечения РА приводило к статистически достоверному снижению лабораторных показателей активности воспаления. Аналогичная динамика проявлялась и по клиническим признакам активности процесса.

Следует отметить, что, несмотря на улучшение клинического состояния пациентов и положительную динамику ряда показателей в процессе лечения, сохранение некоторых клинико-лабораторных сдвигов у больных РА при выписке из стационара свидетельствовало о неполной клинической ремиссии и необходимости наблюдения за больными на фоне продолжения курса лечения в амбулаторных условиях.

Мониторироваиие уровня содержания циркулирующих иммунных комплексов при РА с привлечением нового диагностического теста

Под влиянием проводимой терапии РА медленно поддаются коррекции различные клинико-лабораторные показатели, в то время как наиболее быстро нормализуются показатели ЦИК, являющиеся более чувствительными и информативными маркерами состояния аутоиммунного патологического процесса (Сахно Т.А., Лаврик И.В., Боголей О.М., 1999; Davidson A., Diomond В., 2001).

Кроме клинического, функционального и лабораторного обследования больных, характеризующего сдвиги их состояния и течение патологического процесса, с целью мониторирования уровня содержания циркулирующих иммунных комплексов при РА применили разработанный нами аффинный сорбент для проведения иммуномагнитной сепарации ЦИК в сыворотках крови больных РА и детекции их в иммуноферментном анализе, при этом в качестве твердой фазы вместо полистироловых микропланшет, традиционно используемых при постановке ИФА, применяли разработанный нами МИС при постановке «сэндвич»-варианта этого метода.

При проведении сочетанного метода МИС + ИФА циркулирующие иммунные комплексы, содержащиеся в исследуемых сыворотках крови больных РА, специфически взаимодействовали с иммуноглобулинами класса G против ЦИК, иммобилизованными на МИС. Образовавшийся комплекс «антиген - антитело» выявляли с помощью конъюгата пероксидазного иммуноглобулиново-го (IgG против ЦИК, иммобилизованные с пероксидазой хрена), изготовленного нами, который катализировал расщепление хромогена - ортофенилендиами-на. Количество связавшегося конъюгата определяли цветной реакцией с использованием субстрата пероксидазы - перекиси водорода и хромогена. При этом интенсивность окрашивания пропорциональна количеству содержащихся ЦИК в исследуемом образце сыворотки крови. Учет результатов проводили на регистрирующем фотометре ИФА - ОЭП при длине волны 492 нм. Положительными считали пробы, если их оптическая плотность (DOP) в 1,5 и более превышала показатель DOP отрицательного контроля.

Время постановки ИФА с применением МИС составило 50-60 мин, а традиционным методом, учитывая 18-ти часовую сенсибилизацию микропланшет -20-21ч. При раститровке в качестве антигена ЦИК показано, что чувстви-

тельность традиционного ИФА составила 15 м к г/мл (по белку), а чувствительность ИФА + МИС - 100 - 50 нгУмл.

Таким образом, при использовании МИС в ИФА для проведения реакции не требовались полистироловые планшеты, сокращалось время сенсибилизации твердой фазы в 15 раз, значительно увеличивался срок хранения сенсибилизированной твердой фазы (с 20 дней до 2-х лет и более); время проведения анализа сокращалось в 1,5 раза, а чувствительность повышалась на несколько порядков по сравнению с общепринятым ИФА.

Для сравнения чувствительности ИФА в традиционной постановке в полистироловых планшетах и ИФА с применением антительного магнитоуправляемо-го сорбента к патогенетическим циркулирующим иммунным комплексам мы отобрали 30 сывороток крови больных РА со И-ой - III-ей степенями активности процесса, быстропрогрессирующим характером течения заболевания, Н-ой - IV-ой стадиями патологического процесса, наличием различных висцеральных поражений внутренних органов. Исследования показали, что чувствительность предложенного нами варианта иммуноферментного метода лабораторного анализа с использованием иммобилизованных специфических IgG против патогенетических ЦИК увеличилась не менее, чем в 32 раза по сравнению с традиционным вариантом ИФА с применением полистироловых микроплат.

При сопоставлении двух методов отмечались более высокие средние значения DOP для ИФА+МИС по сравнению с традиционным ИФА. Данная закономерность соблюдалась на всем диапазоне разведений. Кроме того, значения коэффициентов вариации (С) для ИФА+МИС существенно превышали таковые для традиционного ИФА на всем диапазоне разведений. Для традиционного ИФА абсолютные значения коэффициентов вариации варьировали от 13,04 до 63,20 %, существенно увеличиваясь при разведениях более 1:51200. В противоположность этому, диапазон колебаний коэффициентов вариации для ИФА+МИС составлял от 4,17 до 11,41 %, превышение десятипроцентного порога отмечалось для разведений более 1:51200.

4Определение аналитической чувствительности сопоставляемых методов производили путем попарного сравнения средних значений оптической плотности для последовательных разведений. Появление статистически значимых различий между последними считали эквивалентом порогового значения чувствительности. Для ИФА+МИС данный порог отмечался при разведении 1:800

(различия между разведениями 1:400 и 1:800 недостоверны, р=0,070; различия между разведениями 1:800 и 1:1600 достоверны, р=0,045), а для традиционного ИФА - при разведении 1:6400 (различия между разведениями 1:3200 и 1:6400 недостоверны, р=0,063; различия между разведениями 1:6400 и 1:12800 достоверны, р=0,030) (рисунок 4).

Рисунок 4 - Калибровочные кривые изучаемых методов измерения уровня содержания ЦИК Для контроля специфичности модифицированного ИФА с МИС исследовали 30 сывороток крови практически здоровых лиц (доноров крови) и установили, что при определении ЦИК значение DOP, равное 0,131+0,006, в ИФА - тесте с использованием магнитоуправляемого сорбента является верхней границей нормы (показатели, превышающие эти значения, считались положительными). При анализе полученных результатов не выявлено достоверных различия уровней показателей между возрастом и полом (р > 0,1).

Дальнейшая работа была связана с применением разработанного диагностического теста для мониторирования уровня содержания ЦИК при оценке активности патологического процесса, эффективности проводимой терапии и прогнозировании течения заболевания при РА.

При поступлении на стационарное лечение у больных РА (группа в целом) в 100 % случаев обнаружены патогенетические ЦИК, при этом у пациентов с 1-ой степенью активности заболевания (28 пациентов - 20,14 %) средний DOP составлял 0,221+0,006, со 11-ой степенью (77 больных - 55,4 %) - 0,261+ 0,005, а с Ш-ей степенью (34 человека - 24,46 %) - 0,267±0,007. Таким образом, было от-

мечено достоверное увеличение уровня исследуемого показателя по сравнению со здоровыми лицами (р < 0,001). Повышенный уровень ЦИК определяли у 100 % пациентов с суставной формой (106 больных) и у 100 % больных (108 пациентов) с системными проявлениями РА. При поступлении на стационарное лечение у больных с суставной формой средний DOP составлял 0,243+0,006, а с системными проявлениями - 0,260 ±0,005 (р < 0,0001) (таблица 4).

Таблица 4 - Показатели оптической плотности уровня ЦИК в сыворотке крови больных РА в зависимости от активности патологического процесса и клинико-анатомической формы заболевания (М+т)

Контингент обследуемых N Показатель оптической плотности (DOP)

Здоровые 30 0,131 ±0,003

Активность ревматоидного артрита

1 степень 28 0,221 +0,006

11 степень 77 0,261 ±0.005

111 степень 34 0,267 ±0,007

Форма ревматоидного артрита

Суставная 106 0,243 ±0,006

С системными проявлениями 108 0,260 ±0,005

У больных с 1-ой степенью активности, в отличие от пациентов со Н-ой и Ш-ей степенями активности заболевания, не отмечено статистически значимой корреляции уровня ЦИК в сыворотке больных РА по DOP с таким лабораторным тестом, как ревматоидный фактор (р > 0,05).

Проведенные исследования свидетельствуют о том, что в ряде случаев, особенно на ранних стадиях заболевания, из-за недостаточной выраженности клинических проявлений, может быть полезным применение дополнительных лабораторных методов исследования, позволяющих поставить диагноз в более ранние сроки и своевременно назначить адекватную терапию. Определение уровня содержания патогенетических ЦИК в сыворотке крови больных РА в методе ИФА с применением иммуномагнитной сепарации может стать тестом, который позволит расширить возможности клинической лабораторной диагностики, особенно в таких сложных диагностических случаях, когда другие серологические показатели, например, ревматоидный фактор, не определяются.

При поступлении в стационар (первое исследование) у больных РА с III-ей степенью активности патологического процесса в сыворотках крови методом ИФА с применением МИС в 100 % случаев выявляли патогенетические ЦИК, при этом показатели DOP составляли 0,267 ± 0,007. В процессе лечения, проводимого в условиях стационара, состоящего из комплексной фармакотера-

пии и фармакотерапии в сочетании с лечебным плазмаферезом в первой группе больных наблюдалось достоверное снижение DOP в среднем до 0,161 ± 0,003, а у второй группы - до 0,135 ± 0,003 (р < 0,001). Включение в схему фармакотерапии лечебного плазмафереза существенно оказывало коррегирующее влияние на показатели уровня ЦИК, при этом коэффициент снижения DOP составлял 1,9-2,0 (таблица 5).

Таблица 5 - Изучение уровня циркулирующих иммунных комплексов в крови больных РА с Ш-ей степенью активности до и после лечения

Терапия Кол-во обследованных больных Время обследования Показатель оптической плотности DOP (М±ш) Коэффициент снижения DOP*

гкс+нпвп 6 А 0,267±0,003 1,6

Б 0,1б8±0,006

ГКС+ НПВП+ метотрексат 9 А 0,^67 ± 0,003 1,7

Б 0,154±0,004

ГКС + НПВП+ЛП 12 А 0,265±0,005 1,9

Б 0,138±0,003

1KC+HI1B1I+ метотрексат +ЛП 7 А 0,267±0,003 2,0

Б 0,133±0,003

А - при поступлении, Б - при выписке

""Коэффициент снижения уровня ЦИК вычисляли по следующей формуле: Е DOP до лечения

К =--------------------------------, где

Z DOP после лечения

К - коэффициент снижения DOP, £ - сумма показателей DOP.

Наибольшую группу составили больные (77 пациентов - 55,4 %) со П-ой степенью активности РА. При исследовании уровня ЦИК в крови больных до начала лечения показатель оптической плотности в среднем составлял 0,261 ± 0,005. Одна часть пациентов, составившая 54 (70,13%) больных, получала комплексную фармакотерапию, остальная (23 (29,87 %) пациента) - комплексную фармако- и эфферентную терапию. К моменту выписки из стационара у больных первой группы показатель оптической плотности достоверно снижался в среднем до 0,199 ± 0,006 (р < 0,001), а у второй группы - до 0,137 ± 0,005 (р < 0,0001). У обследованных больных РА со П-ой степенью активности заболевания включение в схему терапии ЛП приводило к значительному снижению показателей оптической плотности ЦИК, а коэффициент снижения составлял 2,0 - 2,2 (таблица 6).

Таблица 6 - Изучение уровня циркулирующих иммунных комплексов в крови больных РА со П-ой степенью активности до и после лечения

Терапия Кол-во обследованных больных Время обследования Показатель оптической плотности DOP (M±m) Коэффициент снижения DOP

ГКС+НПВП 49 А 0,259±0,007 1,3

Б 0,162±0,007

ГКС+НПВП+ЛП 17 А 0,262±0,006 2,0

Б 0,131 ±0,005

ГКС+НПВП+мето-трексат 5 А 0,265±0,003 1,7

Б 0,155±0,006

ГКС+НПВП+мето-трексат+ЛП 6 А 0,267±0,002 2,2

Б 0,123 ±0,002

А - при поступлении, Б - при выписке Нами наблюдались 28 (20,14 %) больных с 1-ой степенью активности РА.

Из них у 14 (50 %) человек применялась лишь монофармакотерапия. Другая половина наряду с монотерапией получала процедуры лечебного плазмафереза. При поступлении в стационар изучение уровня патогенетических ЦИК показало, что DOP в среднем составлял 0,221 ± 0,006, а при выписке - 0,200 ±0,006. При этом можно отметить, что коэффициент снижения DOP был ниже достоверного уровня 1,5 (р > 0,05). Это свидетельствовало о недостаточной эффективности проведенной терапии и возможном развитии рецидива. Однако, включение в схему монотерапии лечебного плазмафереза существенно снижало патогенетические циркулирующие иммунные комплексы, а коэффициент снижения составлял 1,6-1,9 (р < 0,05) (таблица 7).

Таблица 7 - Изучение уровня циркулирующих иммунных комплексов в крови больных РА с 1-ой степенью активности до и после лечения

Терапия Кол-во обследованных больных Время обследования Показатель оптической плотности DOP (М ± ГТ1) Коэффициент снижения DOP

нпвп 9 А 0,251 ±0,006 1,3

Б 0,200+0,006

гке 5 А 0,248±0Д)7 1,2

Б 0,202±0,006

гкс+ли 14 А 0,258±0,006 1,6

Б 0,159±ü,0ü7

А - при поступлении, Б - при выписке

Таким образом, разработанный нами модифицированный метод иммуно-ферментного анализа с применением магнитоуправляемого антительного сорбента может использоваться для уточнения отдельных звеньев иммунопатоге-неза РА, улучшения качества диагностики данного заболевания. Контроль динамики уровня патогенетических ЦИК в крови больных РА может использоваться для прогнозирования клинического течения болезни и дает возможность судить об эффективности проводимой терапии.

ВЫВОДЫ

1. Разработан новый диагностический тест, включающий предварительное применение селективной иммуномагнитной сепарации низко- и сред-немолекулярных патогенетических циркулирующих иммунных комплексов из крови больных РА с последующим определением их уровня в иммунофермент-ном анализе.

2. Применение антительного магнитоуправляемого сорбента позволило увеличить чувствительность иммуноферментного метода анализа в 32 раза по сравнению с традиционным вариантом и применить его при амбулаторном мониторировании больных РА.

3. Определен высокий уровень корреляционной связи показателей содержания ЦИК в крови больных РА, определяемых с помощью модифицированного иммуноферментного метода анализа, с активностью патологического процесса, клинико-анатомической формой и наличием ревматоидного фактора.

4. Применение комплексной фармакотерапии показало высокую степень корреляции динамики содержания патогенетических ЦИК, определенных методом ИФА + МИС, с клинико-лабораторными показателями состояния больных РА.

5. Значительное снижение концентрации ЦИК в ходе лечебного плаз-мафереза регистрируется уже в начале проведения цикла эфферентной терапии методом иммуноферментного анализа с применением магноиммуносорбента.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Разработана технология получения магнитоуправляемого сорбента на основе алюмосиликатной матрицы, который рекомендуется использовать для выявления и определения уровня патогенетических ЦИК у больных РА в иммуноферментном методе лабораторного анализа.

2. При определении уровня ЦИК иммуноферментным методом с использованием МИС за норму следует считать показатель оптической плотности (DOP) здоровых лиц - 0,131±0,006.

3. Превышение показателя оптической плотности (DOP) уровня ЦИК в 1,5 раза и выше по отношению к DOP здоровых лиц свидетельствует об активном патологическом процессе и тяжести заболевания.

4. При оценке эффективности терапии и прогнозировании течения РА достоверной следует считать величину коэффициента снижения DOP до лечения и после у больных РА в 1,5 и более раз, свидетельствующую о правильности проводимого лечения.

5. Выявление высокого уровня ЦИК у больных РА при DOP, превышающем 0,250, позволяет рекомендовать включение в комплексную терапию эфферентных методов.

ПУБЛИКАЦИИ

1. Афанасьев, Н.Е. Опыт получения гипериммунных сывороток против иммунных комплексов, циркулирующих при ревматоидном артрите / Н.Е. Афанасьев, И.С.Тюменцева // Чрезвычайные ситуации международного значения в общественном здравоохранении в решениях Санкт-Петербургского саммита «Группы восьми» и санитарная охрана территорий государств-участников Содружества Независимых Государств: Материалы VII Межгосударственной науч.-практ. конф. (3-5 октября, 2006, Оболенск). Оболенск, 2006. -С. 177-178.

2. Афанасьев, Н.Е. Анализ сложившейся практики фармакотерапии ревматоидного артрита в Ставропольском крае /Н.Е.Афанасьев, Д.П.Харченко //Сборник науч. тр. «Фундаментальные исследования в биологии и медицине. -Ставрополь, 2006. - С. 116-117.

3. Афанасьев, Н.Е. Конструирование аффинного магнитного сорбента и его применение в ИФА для контроля циркулирующих иммунных комплексов при лечении ревматоидного артрита /Н.Е.Афанасьев, И.С.Тюменцева, В.А.Батурин, И.В.Жарникова // Ставрополь, 2007. - 10 с. - Деп. в ВИНИТИ 23.01.07.-№65-В2007.

4. Афанасьев, Н.Е. Биотехнологические аспекты получения сырья для конструирования иммунохимических тест-систем, выявляющих циркулирую-

щие комплексы при ревматоидном артрите /Н.Е.Афанасьев, И.С.Тюменцева // Ставрополь, 2007. - 8 с. - Деп. в ВИНИТИ 14.03.07. - №252-В2007.

5. Афанасьев, Н.Е. Изучение эффективности терапии при ревматоидном артрите с привлечением нового иммунологического теста /Н.Е. Афанасьев, В.И.Ефременко, И.С.Тюменцева, В.А.Батурин // Ставрополь, 2007. - 13с. - Деп. в ВИНИТИ 11.07.07. - №716-В2007.

6. Афанасьев, Н.Е. Ревматоидный артрит. Современное состояние проблемы. Обзор литературы /Н.Е.Афанасьев // Ставрополь, 2007. - 41 с. -Деп. в ВИНИТИ 15.06.07. - №640-В2007.

7. Афанасьев, Н.Е. К вопросу о применении плазмафереза в комплексной терапии ревматоидного артрита в Ставропольском крае /Н.Е.Афанасьев, А.Ю.Гуров //Сб. науч. тр. «Фундаментальные исследования в биологии и медицине». - Ставрополь, 2007. - С. 120-123.

8. Афанасьев, Н.Е. О возможности использования аффинных сорбентов для контроля эффективности терапии некоторых аутоиммунных заболеваний / Н.Е.Афанасьев, М.П.Лаврешин //Сб. науч. тр. «Фундаментальные исследования в биологии и медицине». - Ставрополь, 2007. - С. 204-209.

9. Афанасьев, Н.Е Разработка магноиммуносорбентной тест-системы для определения циркулирующих иммунных комплексов у больных РА /Н.Е.Афанасьев // Вестник Ставропольской ГМА. - Выпуск 3. - Ставрополь,

2007. - С. 14-16.

10. Афанасьев, Н.Е. Биотехнологические аспекты получения сырья для конструирования иммунохимических тест-систем, выявляющих циркулирующие комплексы при ревматоидном артрите / Н.Е. Афанасьев, И.С. Тюменцева //Ставрополь, 2007. - 8 с. - Деп. в ВИНИТИ 14.03.07. - № 252 - В2007.

11. Жарникова, И.В. Разработка и применение иммобилизованных систем для экспресс-диагностики различных заболеваний /И.В.Жарникова, И.С.Тюменцева, Е.Н.Афанасьев, В.И.Ефременко, Е.В.Жданова, Т.В. Жарникова, Е.Е. Афанасьева, Т.Н.Орлова, Д.В. Ефременко, Н.Е.Афанасьев, М.ПЛаврешин, Н.В. Левченко, А.А.Семирчева, С.А.Курчева, А.М.Бабий //Вестник Российской военно-медицинской академии. - Санкт-Петербург,

2008. - Приложение №2(22). - 4.1. - С.180-181.

12. Алиева, Е.В. Опыт применения твердофазных иммобилизованных систем с магнитными свойствами в экспрессных иммуноанализах некоторых

заболеваний инфекционной и неинфекционной природы/ Е.В.Алиева, И.С.Тюменцева, Е.Н.Афанасьев, М.П. Лаврешин, Н.Е. Афанасьев, Т.Н.Орлова //Технологии живых систем. - Т 5, № 2-3. - 2008. - С. 47-50.

13. Алиева, Е.В. Аффинные сорбенты для экспресс-диагностики различных заболеваний /Е.В.Алиева, И.С.Тюменцева, Е.Н.Афанасьев, Н.Е.Афанасьев, М.П.Лаврешин, Е.Е.Афанасьева, Т.Н.Орлова, А.Ю. Миронов //Курский научно-практический вестник «Человек и его здоровье». - 2008. - №1. - С.5-9.

14. Тюменцева, И.С. Разработка рациональной биотехнологии получения диагностических иммунных сывороток / И.С. Тюменцева, E.H. Афанасьев, Е.В. Жданова, И.В. Жарникова, Н.Е. Афанасьев, Н.П. Лаврешин, Е.А. Горобец, С.А. Курчева, A.A. Семирчева // Вестник Российской военно-медицинской академии. - Санкт-Петербург, 2008. - Приложение. - № 2(22). - 4.1. -С.210-211.

15. Афанасьев, Н.Е. Опыт применения твердофазных тест-систем с магнитными свойствами в иммунологических методах исследования некоторых аутоиммунных заболеваниях /Н.Е.Афанасьев, М.П. Лаврешин, И.С.Тюменцева) // Вестник Российской военно-медицинской академии. - Санкт-Петербург, 2008. - Приложение. - № 2(22). - 4.1. - С.223- 224.

16. Алиева, Е.В. Опыт получения иммунных сывороток для производства диагностических препаратов / Е.В. Алиева, И.С. Тюменцева, E.H. Афанасьев, М.П. Лаврешин, Н.Е. Афанасьев, Е.А. Горобец, A.A. Семирчева, А.Ю. Миронов // Курский научно-практический вестник «Человек и его здоровье». - 2008. - №1. - С.10-13.

17. Афанасьев, Н.Е. Современные подходы к терапии ревматоидного артрита и оценка их эффективности /Н.Е. Афанасьев, A.B. Ягода, В.А. Батурин // Сб. науч. статей, посвящ. 35-летию кафедры анатомии, физиологии и гигиены человека и 85-летию со дня рождения основателя кафедры, заслуженного деятеля науки РФ, доктора медицинских наук, профессора Држевецкой И.А. «Физиологические проблемы адаптации». - Ставрополь, 2008. - С.13-15.

Печать офсетная. Бумага офсетная. Формат 60x84/16 Физ. печ. л. - 1,2 Усл. печ. л. - 1,3

Заказ-276 Тираж-100 Отпечатано в оперативной полиграфии отдела информации и региональной статистики Ставропольстата г. Ставрополь, ул. Пушкина,4

Оглавление диссертации Афанасьев, Николай Евгеньевич :: 2010 :: Волгоград

ВВЕДЕНИЕ.

ЧАСТЫ: ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

Глава 1. Современные аспекты этиопатогенеза и терапии РА

Глава 2. Лабораторные исследования при ревматоидном артрите

Глава 3. Метод иммуномагнитной сепарации в медикобиологических исследованиях.

ЧАСТЬ II: СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ.

Глава 4. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ. •

4.1. Получение образцов исследуемого материала.

4.2. Выделение антигена (циркулирующих иммунных комплексов.

4.3. Лабораторные животные, использованные в эксперименте

4.4. Получение иммунной сыворотки.

4.5. Выделение иммуноглобулинов.

4.6. Физико-химические методы.

4.7. Получение иммуноферментного конъюгата и его харак- 49 теристика в традиционной постановке ИФА.

4.8. Получение антительного магнитоуправляемого сорбента к патогенетическим циркулирующим иммунным комплексам

4.9. Модифицированный ИФА для определения патогенетических ЦИК с использованием магноиммуносорбента.

4.10. Лиофилизация биологического материала (циркулирующие иммунные комплексы, иммунная сыворотка, специфические иммуноглобулины, иммуноферментный коньюгат).

4.11. Основные химические реактивы.

4.12. Аппаратное оснащение исследований.

4.13. Статистическая обработка полученных данных.

Глава 5. КЛИНИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА БОЛЬНЫХ

5.1. Больные ревматоидным артритом.

5.2. Здоровые лица.

Глава 6. СРАВНИТЕЛЬНЫЙ КЛИНИКО-ЛАБОРАТОРНЫЙ

АНАЛИЗ ЭФФЕКТИВНОСТИ СХЕМ ТЕРАПИИ

РЕВМАТОИДНОГО АРТРИТА.

Глава 7. МОНИТОРИРОВАНИЕ УРОВНЯ СОДЕРЖАНИЯ

ЦИРКУЛИРУЮЩИХ ИММУННЫХ КОМПЛЕКСОВ ПРИ ЛЕЧЕНИИ РА С ПРИВЛЕЧЕНИЕМ НОВОГО ДИАГНОСТИЧЕСКОГО ТЕСТА.

7.1. Сравнительный анализ чувствительности традиционного и предложенного метода иммуноферментного анализа

7.2 Содержание ЦИК у здоровых лиц, определение границ нормы.

7.3 Содержание циркулирующих иммунных комплексов в сыворотке крови больных РА в зависимости от активности, клинико-анатомической формы и наличия ревматоидного фаКТОра J,)))5J,,5,,,,,,,5,,,,,35,,,,5J5J33535)555JJJ5J55?5??)55J5J

7.4. Оценка эффективности терапии больных РА с помощью антительного магнитоуправляемого сорбента к патогенетическим ЦИК.

Введение диссертации по теме "Ревматология", Афанасьев, Николай Евгеньевич, автореферат

Актуальность проблемы

Течение и исход ревматоидного артрита во многом зависит от правильного выбора фармакотерапии и методов лечения у конкретного больного. Менее чем у 15 % больных РА протекает относительно доброкачественно, моноциклически, с редкими эпизодами обострений; в 2/3 наблюдений заболевание характеризуется медленным, но неуклонным прогрессированием с неполными ремиссиями и частыми обострениями, приводящими к ранней потере трудоспособности. Наконец, примерно в 10 — 15 % случаев .наблюдается «злокачественный» вариант РА с быстрым множественным поражением суставов, резистентностью к проводимой терапии и тяжелым, потенциально смертельным нарушением функций внутренних органов, что практически не оставляет шансов на возвращение к трудовой деятельности [33, 66].

Кроме того, необходимо иметь в виду, что ревматические заболевания в целом и РА, в частности, обладают высокой стоимостью лечения, которая складывается из затрат, обусловленных длительным, в подавляющем большинстве случаев - пожизненным медикаментозным лечением, а также эндо-протезированием суставов и многочисленными непрямыми расходами.

Ведущая роль в патогенезе РА принадлежит иммунокомплексному поражению с выраженными гуморальными и клеточными реакциями организма. Взаимодействие ревматоидного фактора с иммуноглобулинами приводит к образованию иммунных комплексов, патогенетическое значение которых настолько существенно, что РА часто называют болезнью иммунных комплексов. Считается, что именно мелкие и средние циркулирующие иммунные комплексы (ЦИК) наиболее патогенны и вызывают ряд цепных реакций, индуцирующих и поддерживающих воспаление, определяющих прогрессирующее течение ревматоидного артрита [32] Клиническое значение ЦИК состоит в том, что их значительная концентрация в крови больных РА является показателем высокой активности заболевания, а также свидетельствует о системности поражения [63].

Цель исследования: разработать иммунологический тест для оценки эффективности проводимой терапии и прогнозирования течения заболевания у больных ревматоидным артритом на основе иммуномагнитной сепарации патогенетических циркулирующих иммунных комплексов и их детекции в иммуноферментном методе анализа.

Основные задачи исследования

3. Изучить содержание циркулирующих иммунных комплексов-у доноров. Определить границы нормы.

4. Изучить содержание циркулирующих иммунных комплексов в сыворотке крови больных РА в зависимости от активности, клинико-анатомической формы заболевания и наличия ревматоидного фактора (РФ).

Научная новизна исследования

• Впервые для иммунодиагностики РА создан антительный магнито-управляемый сорбент на основе специфических антител к патогенетическим циркулирующим иммунным комплексам.

• Разработан вариант ИФА с использованием данного сорбента, подобраны оптимальные условия его постановки; Применение иммуномагнитной сепарации позволило повысить специфичность и чувствительность ИФА на несколько порядков, что существенно увеличило достоверность получаемых результатов при мониторировании уровня ЦИК в крови больных РА.

Практическая ценность

Основные положения, выносимые на защиту

На защиту выносится положение о возможности использования определения циркулирующих иммунных комплексов иммуноферментным методом с помощью антительного магнитоуправляемого сорбента на основе специфических антител к патогенетическим, циркулирующим иммунным комплексам в качестве дополнительного теста для диагностики степени активности, характера-течения, формы РА, а также оценки эффективности проводимой терапии.

Внедрение в практику

Разработанный новый диагностический тест, сочетающий применение селективной иммуномагнитной сепарации циркулирующих иммуннь1х комплексов из крови больных РА и последующее определение их уровня в им-муноферментном анализе, внедрен в практику работы Государственного учреждения здравоохранения «Ставропольский клинический центр специализированных видов медицинской помощи», Муниципального учреждения здравоохранения «Консультативно-диагностическая поликлиника» г.Ставрополь), Муниципального учреждения города Ставрополя «Городская детская поликлиника №3».

Апробация работы. Результаты исследований по теме диссертации доложены, обсуждены, опубликованы в материалах VII Межгосударственной научно-практической конференции государств - участников СНГ «Чрезвычайные ситуации международного значения в общественном здравоохранении в решениях Санкт-Петербургского саммита «Группы восьми» и санитарная охрана территорий государств — участников содружества Независимых Государств (Оболенск, 2006); Всероссийской научной конференции, посвященной 210-й годовщине основания Военно-медицинской академии «Теоретические основы эпидемиологии. Современные эпидемиологические и профилактические аспекты инфекционных и массовых неинфекционных заболеваний» (Санкт-Петребург, 2008).

Заключение диссертационного исследования на тему "Оценка эффективности терапии больных ревматоидным артритом с помощью антительного магнитоуправляемого сорбента к патогенетическим циркулирующим иммунным комплексам"

Результаты исследования уровня ЦИК в сыворотке крови до и после лечения показали, что их уровень снизился в 2 раза, что свидетельствовало об эффективности проводимой терапии и достижении контроля над активностью заболевания.

Больная Д. (ист. болезни № 1104Ф) ИФА-ОЭП 7.1 ПРОГРАММА: 1 (N1) БЛАНК : 1 AI = 0.047

ТАБЛ. 1 1 2 3 4

А 0.000 0.265 0.126 А1 - стоп-реагент

В 0.145 0.263 В1,С1,01,Е1-(К-)

С 0.145 0.260 Р1,01,Н1, А2-(К+)

D 0.144 0.258 В2, С2, И2, Е2 - сыворотка

Е 0.145 0.255 больного до лечения (двукрат

F 0.265 0.135 ные разведения)

G 0.265 0.130 ¥2, 02, Н2, АЗ - сыворотка

Н 0.267 0.128 больного после лечения двукратные разведения)

Наибольшую группу составили больные (77 пациентов - 55,4 %) со 11-ой степенью активности РА. При исследовании уровня ЦИК в крови больных до начала лечения показатель оптической плотности в среднем составлял 0,261 ± 0,005. Одна часть пациентов, составившая 54 (70,13%) больных, получала комплексную фармакотерапию, остальная (23 (29,87 %) пациента) -комплексную фармако- и эфферентную терапию. К моменту выписки из стационара у больных первой группы показатель оптической плотности достоверно снижался в среднем до 0,199 ± 0,006 (р < 0,001), а у второй группы - до 0,137 ± 0,005 (р < 0,0001) (таблица 11). Как следует из таблицы, у обследованных больных РА со П-ой степенью активности заболевания включение в схему терапии лечебного плазмафереза приводило к значительному

Список использованной литературы по медицине, диссертация 2010 года, Афанасьев, Николай Евгеньевич

1. Аполлонова, J1.A. Исследование резервов железа при анемиях различной этиологии: Автореф. дис. . канд. мед. наук: /Л.А. Аполлонова . -М., 1970.-22 с.

2. Асеева Е.А. Экстракорпоральная терапия ревматоидного артрита /Е.А. Асеева, С.К. Соловьев, A.C. Чикмикчи // Тер. арх. 2001. - Т.73, № 6. -С. 70-75.

3. Афанасьев, E.H. Научно-методические аспекты экспресс-диагностики возбудителей особо опасных зоонозных инфекций (чума, бруцеллез, сибирская язва): Автореф. дис. . д-ра мед. наук: /E.H. Афанасьев. Ростов-на-Дону, 2000. - 45с.

4. Баймухамедова, P.O. Стресс как один из механизмов развития ревматоидного артрита / P.O. Баймухамедова // Здравоохранение Казахстана. -1991.-№4. -С. 38-39.

5. Балабанова, P.M. Ревматоидный артрит / P.M. Балабанова // Ревматические болезни. М.: Медицина, 1997. - С. 257-294.

6. Беленький, А.Г. Нестероидные противовоспалительные препараты как инструмент дифференциальной диагностики при суставном синдроме / А.Г. Беленький // РМЖ. 2003. - Т. 11, № 15. - С. 49-51.

7. Беневоленская, Л.И. Ревматоидный артрит / Л.И. Беневоленская // Клинико-генетические аспекты ревматических болезней. М.: Медицина. -1989.-С. 98-145.

8. Беневоленская, Л.И. Эпидемиология ревматических болезней /Л.И. Беневоленская, М.М. Бржезовский. М., 1988. - С. 100-110.

9. Беневоленская, Л.И. Исследование генетической детерминации ревматоидного артрита / Л.И. Беневоленская, С.А. Финогенова, Л.И. Алексеева//Генетика. 1991. - Т.27, № 1. - С. 138-146.

10. Применение опросника SF-36 для оценки качества жизни при внутренних заболеваниях / H.H. Бримкулов и др. // Хирургия в период экономических реформ. — Бишкек, 2001 С. 113-117.

11. Брыкалов, A.B. Получение биопрепаратов на основе методов аффинной сорбции и иммобилизации: Дис. . д-ра хим. наук: /A.B. Брыкалов. Санкт-Петербург, 1993. - 330 с.

12. Активность сывороток, полученных по различным схемам иммунизации / А.Е. Волков и др. // Особо опасные и редко встречающиеся тропические инфекции: Тез. докл. Волгоград, 1980. - С. 14-15.

13. Гонтарь, И.П. Выявление антител к эритроцитарной супероксиддисмутазе на её активность в крови больных РА / И.П. Г онтарь, JI.H. Боброва, И.А. Зборовская // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. - 1995. - № 10. - С. 391-393.

14. Гонтарь, И.П. Диагностические препараты с магнитными свойствами в ревматологии / И.П. Гонтарь // III Национальный конгресс по ревматологии с международным участием. София, 1989. - С. 48.

15. Горячев, Д.В. Роль вирусов в развитии ревматоидного артрита / Д.В. Горячев, О.Н. Егорова, P.M. Балабанова // Тер. арх. 2001. - Т 73, № 2. -С. 72-75.

16. Гузов, И.И. Современные представления об этиологии, патогенезе и лечении ревматоидного артрита / И.И. Гузов // Клиническая медицина. 1985. - Т.63, № 7 - С. 24-28.

17. Влияние тимических иммуномодуляторов на систему циклических нуклеотидов Т-лимфоцитов селезенки при вакцинации БЦЖ / C.B. Демидов и др. // Проблемы туберкулеза. 1990. - № 10. - С. 63-65.

18. Дормидонтов, E.H. Ревматоидный артрит / E.H. Дормидонтов, Н.И. Коршунов, Б.Н. Фризен. М.: Медицина, - 1981. - 175 с.

19. Дубровина, H.A. Случай многолетнего эффективного применения плазмафереза у больной ревматоидным артритом / H.A.

20. Дубровина, H.H. Калинин, В.И. Петров // Клиническая медицина. 1991. -Т.69, № 6. - С. 96-98.

21. Ефременко, В.И. Магносорбенты в микробиологических исследованиях / В.И. Ефременко. Ставрополь: «Ставрополье», 1996. - 131с.

22. Жуковская, Г.Н. Ревматоидный артрит с преобладанием поражения мышц / Г.Н. Жуковская // Клиническая медицина. 1987. - Т.65, № 8. - С. 132-133.

23. Зборовская И.А. „ Клинико-патогенетическое значение антиоксидантной системы крови при воспалительных ревматических заболеваниях: Дис. д-ра мед.наук. Волгоград, 1995.-З49'с.

24. Зборовский, А.Б. Перспективы применения магнитосорбентов в иммунодиагностике и лечении системной красной волчанки и ревматоидного артрита / А.Б. Зборовский, И.П. Гонтарь // Клиническая медицина. Т. 79, №2.-2001.-С. 42-45.

25. Динамика уровня антител к коллагену II типа как критерий эффективности терапии ревматоидного артрита / А.Б. Зборовский и др. //Клиническая фармакология и терапия. 1994. - № 1. — С. 29-31.

26. Клиническая иммунология и аллергология: Пер. с нем. / Под ред. Л. Йегера. М., 1990. - Т.2. - С. 55-65.

27. Карпенко, B.B. Обезболивание животных в эксперименте: Метод, рек. / В.В. Карпенко, В.И. Сачков. М., 1985. - 53 с.

28. Кирдей, Е.Г. Иммунология. Избранные лекции по общей, частной и клинической иммунологии / Е.Г. Кирдей. Иркутск: ИГМУ, 2000. -231 с.

29. Кирикова, C.B. Иммунопатологические механизмы различий серопозитивного и серонегативного ревматоидного артрита / C.B. Кирикова, B.C. Ширинский // Иммунология. 1993. - №3. - С. 44-47.

30. Клячко-Гурвич, A.A. Методы определения удельной поверхности / A.A. Клячко-Гурвич. М.: Изд-во АН СССР, 1964. - № 10. - С. 1885.

31. Константинова Н. А. Иммунные комплексы и повреждение тканей / Монография. М.: Медицина, 1996. — 256 с.

32. Кремлева, О.В. Ревматоидный, артрит: влияние болезни на социальные аспекты качества жизни /О.В. Кремлева, Г.Б. Колотова // Научно-практич. ревматол., 2004, 2, 14-18.

33. Влияние иммунных комплексов, выделенных из плазмы больных ревматоидным артритом на секрецию провоспалительных и противовоспалительных цитонинов клетками?крови здоровых доноров / С.А. Кузнецова и-др. // Иммунология. №4. - С.48-53.

34. Куфлина, С.А. Эвтаназия экспериментальных животных: Метод, рек. по выведению животных для экспериментов / С.А. Куфлина, Т.Н. Павлова.-М., 1985.-9 с.

35. Лила, A.M. Иммунологические исследования при ревматоидном артрите (обзор литературы) / A.M. Лила, В.И. Мазуров, И.П. Блохин //Клиническая лаб. диагностика. — 1993. № 6. — С. 55-60.

36. Лозовой, В.П. Некоторые проблемы иммунопатологии ревматоидного артрита / В.П. Лозовой, B.C. Ширинский // Тер. арх. — 1981. — Т.53, № 3. С. 33-42.

37. Мазуров, В.И. Клиническая иммунология / В.И. Мазуров, В.Г. Морозов. СПб., 1991. - 240 с.

38. Методика исследования суставов у больных с ревматическими заболеваниями: Учебное пособие / В.И. Мазуров и др. СПб, 1999. - 40 с.

39. Определение этиопатогенетических механизмов развития заболеваний суставов при вирусных инфекциях / И.А. Мальчиков и др. //Вестник Российской военно-медицинской академии. 2008. - №2(22). -Приложение. - 4.II. - С.656-657.

40. Антигенный состав иммунных комплексов циркулирующих при ревматоидном артрите / А.Н. Маянский и др. // Иммунология. 1985. - № З.-С. 80-81.

41. Клиническая лабораторная аналитика. Том 1. Основы клинического лабораторного анализа / Под ред. Меньшикова В.В. М.: Агат-Мед, 2002. - 860 с.

42. Лабораторные методы исследования в клинике / Под ред. В.В. Меньшикова, Л.Н. Делекторской, Р.П. Золотницкой. М.: Медицина, 1987. -368 с.

43. Обеспечение качества лабораторных исследований. Справочное пособие / Под ред. Меньшикова B.B. М.: Лабинформ, 1999. - 458 с.

44. Анемия при ревматоидном артрите / Ю.Г. Митерев и др. //Ревматология. 1985. - № 1. - С. 12-13.

45. Михайлова, H.A. Каскадное применение плазмафереза и плазмафильтрации в лечении ревматоидного артрита /Н.А.Михайлова, Г.А. Коновалов, Л.И.Мазнева //Тех.арх., 1987. №5. - С. 67-70.

46. Метод определения иммунных комплексов при помощи реакции с полиэтиленгликолем / Б.А. Молотилов и др. // Казанский мед. журнал. -1982.-№2.-С. 10-13.

47. Морозов, В.Г. Роль пептидных биорегуляторов тимуса в патогенез иммунодефицитов: Автореф. дис. . д-ра мед. наук: В.Г. Морозов. Ташкент, 1990. - 42 с.

48. Мулик, А.Б. Информативность методов оценки иммунологической реактивности животных-продуцентов / А.Б. Мулик, Н.Г. Тихонов, Н.Я. Кулаков // Генетика и биохимия вирулентности возбудителей ООИ: Тезисы докладов. Волгоград, 1992. - С. 200.

49. Мулик, А.Б. Метод коррекции формирования адаптационных реакций организма при гипериммунизации / А.Б. Мулик, Н.Г. Тихонов //Генетика и биохимия вирулентности возбудителей ООИ: Тезисы докладов. -Волгоград, 1992.-С. 199.

50. Муравьев Ю.В. Дискуссионные вопросы отечественной классификации ревматоидного артрита // Научно-практическая ревматология, 2007.- №2.-С. 80-83.

51. Циркулирующие иммунные комплексы при ревматоидном артрите / Е.Л.Насонов и др. //Тер. арх., 1981. №12. - С.119-127.

52. Насонов, Е.Л. Клиническая ревматология / Е.Л. Насонов, М.Г. Астапенко. М., 1989. - С. 28-53.

53. Насонов, Е.Л. Противовоспалительная терапия ревматических болезней / Е.Л. Насонов. М.: М-СИТИ, 1996. - 345 с.

54. Насонов, Е.Л. Базисная терапия ревматоидного артрита / Е.Л. Насонов, Я.А. Сигидин // Тер. арх. 1996. - Т.5, № 7. - С. 5-8.

55. Новые аспекты противовоспалительной терапии ревматических заболеваний: теоретические предпосылки и клиническое применение мелоксикама / Е.Л. Насонов и др. // Клиничсеская медицина. 1996. -Вып.4. - С. 4.

56. Насонов, E.J1. Ревматические болезни / В.А. Насонов, E.JI. Бунчук. М., 1997.-С. 341.

57. Насонов, E.JL Лечение ревматоидного артрита: роль глюкокортикоидов / Е.Л. Насонов // Клиническая медицина. 1999. - № 4. -С. 4-8.

58. Насонов, Е.Л. Ревматоидный артрит: терапевтические перспективы / Е.Л. Насонов, Н.В. Чичасова // Врач. 1999. - № 5. - С. 7-10.

59. Насонов, Е.Л. Перспективы применения нового нестероидного противовоспалительного препарата нимесулид / Е.Л. Насонов // Клин. фарм. терапия. 1999. - Т.8 (1). - С. 65-69.

60. Насонов, Е.Л. Нестероидные противовоспалительные препараты (Перспективы применения в медицине) / Е.Л. Насонов. М.: Анко, 2000. - С. 143.

61. Насонов, Е.Л. Почему необходима ранняя диагностика и лечение ревматоидного артрита? / Е.Л. Насонов // РМЖ. 2002. - Т. 10, № 22. - С. 1009-1014.

62. Насонов, Е.Л. Фармакотерапия ревматоидного артрита с позиций доказательной медицины: новые рекомендации / Е.Л. Насонов // РМЖ. -2002. Т. 10, № 6. - С. 294-301.

63. Насонов, Е.Л. Глюкокортикоиды при ревматоидном артрите: за и против / Е.Л. Насонов, Н.В. Чичасова, Е.В. Супоницкая // РМЖ. 2004. -Т.12, № 6. - С. 408-413.

64. Справочник специализированной ревматологической помощи взрослым и детям Российской Федерации. Проект федеральной целевой программы «Ревматические болезни 2008-2012 гг.» /Е.Л.Насонов и др. //Научно-практическая ревматология. 2007. - №2. - С. 4-7.

65. Неоптерин: лабораторный маркер активации клеточного иммунитета при ревматоидном артрите / E.H. Немчинов и др. // Тер. Арх. -1998. Т.70, № 5. — С. 28-31.

66. Приказ № 1179 от 10 октября 1983 г. Об утверждении нормативов затрат кормов для лабораторных животных в учреждениях здравоохранения. Москва, 1983.

67. Пяй, JI.T. Основы клинической ревматологии / JI.T. Пяй. -Таллин, 1987.-256 с.

68. Салихов, И.Г. Показатели гуморального и клеточного иммунитета у больных реавматоидным артритом / И.Г. Салихов, H.A. Мифтахов, М.М. Мангушева // Казанский мед. журнал. 1987. - Т. 68, № 1. -С. 9-14.

69. Сахно, Т.А. Иммунодиагностика ювенильного ревматоидного артрита у детей / Т.А. Сахно, И.В. Лаврик, О.М. Боголей // Клиническая лаб. диагностика. 1999. - № 11. - С. 40.

70. Особенности течения ревматоидного артрита, сочетающегося с патологией щитовидной железы / В.Г. Серебряков и др. // Тер. арх. 1990. - Т.62, № 5. - С. 48-51.

71. Сигидин, Я. А. Базисная (патогенетическая) терапия ревматоидного артрита / Я.А. Сигидин, Г.В. Лукина. М.: «Novartis», 2000. -100 с.

72. Сигидин, Я.А. Диффузные болезни соединительной ткани / Я.А. Сигидин, Н.Г. Гусева, М.М. Иванова. М.: Медицина, 1994. - 185 с.

73. Сигидин, Я.А. О базисных свойствах глюкокортикостероидов при ревматоидном артрите / Я.А. Сигидин, Г.В. Лукина, Д.Е. Гусев //Клиническая фармакотерапия и терапия. — 2000. — Т.9, № 4. — С. 55-57.

74. Сигидин, Я.А. Ревматоидный артрит / Я.А. Сигидин, Г.В. Лукина. М.: АНКО. -2001. - 328 с.

75. Смердова, М.А. Ревматоидный фактор в лабораторной практике / М.А. Смердова, Е.Ю. Косова // Информационный бюллетень «Новости «Вектор-Бест». 2000. - № 3. - С.19-20.

76. Научные основы производства диагностических препаратов (Сыворотки для идентификации энтеробактерий) / В.В.Смирнов и др. -Киев: Наукова Думка, 1980. 195с.

77. Сорока, Н.Ф. Диклофенак натрия (Диклоген) «золотой стандарт» в лечении заболеваний суставов / Н.Ф. Сорока и др. // РМЖ. -2001.-Т. 9, №7-8.- С. 114-116.

78. Сперанский, А.И. Аутоиммунные болезни (клинические и теоретические аспекты) / А.И. Сперанский, С.М. Иванова // Аллергология и иммунол. 2002. - № 3 (1). - С. 62-83.

79. Струков, А.И. Механизмы иммунного воспаления / А.И. Струков // Вестник АМН СССР. 1979. - № 11. - С. 76-85.

80. Генетическая предрасположенность к ревматоидному артриту: роль генов и галлотипов HLA класса II / Т.А. Суслова и др. // Иммунология. Т.29, №3. - 2008. - С. 137-140.

81. Сучков, C.B. ДНК-абзимы и их каталитические свойства / C.B. Сучков, А.Г. Габибов, Н.В. Гнучев // Журн. биол. мед. и фармац. химии. -2001. -№3. С. 114-119.

82. Сучков, C.B. Механизмы цитотоксичности анти-ДНК-аутоантител / C.B. Сучков // Бюл. экспер. биол. 2001. - Т.131 (5). - С. 560563.

83. Современная модель патогенеза ревматоидного артрита и ее место в клинической практике / C.B. Сучков и др. // Тер.арх. 2004. - Т.76, № 12.-С. 83-87.

84. Тамбовцев, Е.П. Методы статистической обработки результатов серологических исследований /Е.П.Тамбовцев, С.Г. Ахметкалиев, Н.Н. Пятницкий //ЖМЭИ. 1969. - №10. - С. 26-31.

85. Уоллис, Д. Аутоиммунные заболевания // Клиническая иммунология и аллергология / Д. Уоллис, А. Метцгер, Р. Эшман. М.: Практика, 2000. - С. 410-481.

86. Фримель, Г. Иммунологические методы / Г. Фримель. М., 1987. - С.120-128.

87. Хавинсон, В.Х. Тималин иммуномодулирующий препарат из тимуса / В.Х. Хавинсон, В.Г. Морозов // Тимус и его влияние на организм. -Томск: Изд-во Томского университета, 1982. - С. 201-203.

88. Чард, Т. Радиоиммунологические методы / Т. Чард. М.: Мир, 1981.-246с.

89. Шамов, И. Ревматоидный артрит (лекции) / И. Шамов // Врач. -1997.-№ 12.-С. 5-8.

90. Модифицированный метод определения циркулирующих иммунных комплексов в тесте связывания комплемента ПЭГ преципитатом / Б.Б. Шойбонов и др. // Клиническая лабораторная диагностика. - 2007. -JN25.-C.29-3 5.

91. Яременко, О.Б. Гемодинамическая составляющая лечебного действия эфферентных процедур при ревматоидном артрите /О.Б.Яременко, О.П. Борткевич //Украинский ревматологический журнал, 2000. №1. - С.47-50.

92. Abel, J. Plasma removal with return of corpusebes / J. Abel, L. Rowntree, B. Turner // J. Pharmacol. Exp. Ther. 1914. - Vol. 5. - P. 625-641.

93. Isolation and culture of synovial microvascular endothelial cells: characterization and asseeement of adhesion molecule expression / S.T. Abbot et al. // Arthritis Rheum. 1992. - Vol. 35. - P. 401-406.

94. Clinical and radiographic outcomes of rheumatoid arthritis patients not treated with disease-modifying drugs / M. Abu-Shakra et al. // Arthritis Rheum. 1998. - Vol. 41. - P. 1190-1195.

95. Alarcon, G.S. Epidemiology of rheumatoid arthritis / G.S. Alarcon //Rheum. Dis. Clin. North Am. 1995. - Vol. 21. - P. 589-604.

96. Alarson, G.S. Predictive factors in rheumatoid arthritis /G.S. Alarcon // American Journal of Medicine. -1997. Vol. 103 (6A). - P. 19-24.

97. Alexiou, C.R. Medical applications of magnetic nanoparticles / C.R. Alexiou, R. Jurgons, C. Seliger // J. Nanosci Nanothenol. 2006. - Vol. 6, № 9-10.-P. 2762-2768.

98. American College of Rheumatology Ad Hoc Committee on Clinical Guidelines. Guidelines for the management of rheumatoid arthritis // Arthritis Rheum. 1996. - Vol. 39. - P. 713 -722.

99. Andriopoluos N.F., Mestecky J., Miller N. et al.//Clin. Immunol. Immunopathol. 1976. - Vol. 6. - P.209-212.

100. Epstein-Barr virus load in the peripheral blood with rheumatoid arthritis: accurate quantification using real-time polymerase chain reaction / N. Balandraud et al. //Arthritis Rheum. 2003. - Vol. 48 (5). - P. 1223-1228.

101. Bangs, L.B. New developments in particle-based immunoassays:.B introduction / L.B. Bangs // Pure & Appl. Chem. 1996. - Vol. 68, № 10. - P. 1873 - 1879.

102. Baugh, J.A. Mechanisms for modulating TNF alpha in immune and inflammatory disease / J.A. Baugh, R. Bucala // Curr. Opin. Drug. Discov. Dev. -2001. Vol. 4(5). - P. 635-650.

103. Benoist, C. Autoimmunity provoked by infection: how good is the case for T cell epitope mimicry? / C. Benoist, D. Mathis // Nature Immunol. -2001. Vol. 2(9). - P. 797-801.

104. Glucocorticoids in the treatment of early and late RA / J.W. Bijsma et al. // Arthritis Rheun. 2003. - Vol. 62. - P. 1033-1037.

105. Detection and enrichment of disseminated renal carcinoma cells from peripheral blood by immunomagnetic cell separation / U. Bilkenroth et al. // Int. J. Cancer. 2002. - Vol. 92, № 4. - P. 577-582.

106. Inhibitory effect of TNF-a antibodies on synovial c ell interleukin-1 production in rheumatoid arthritis / F.M. Brennan et al. // Lancet. 2001. - Vol. 2. - P. 244-247.

107. Detection and manipulation of biomolecules by magnetic carriers /M. Brzeska et al. // J. Biotechnol. 2004. - Vol. 112, № 1-2. - P. 25 - 23.

108. Brooks, P.M. Treatment of rheumatoid arthritis: from symptomatic relife to potential cure / P.M. Brooks // J. Rheumatol. 1998. - Vol. 37. - P. 12651271.

109. Burwell, R.L. Modified silica gels as adsorbents and catalysis / R.L. Burwell // Chem. Technol. 1974. - Vol. 15, № 1. - P. 370-377.

110. New trends in immunoassays /C.P.Chan et al. //Adv Biochem Eng Biotechnol. 2008. -Vol. 109. - P. 123 - 154.

111. Chang, D. Different genotypes of human polyomaviroses found in patients with autoimmune diseases in Taiwan / D. Chang, R.T. Tsai, M. Wang // J. med. Virol. 1996. - Vol. 48 (2). - P.204-209.

112. Chia, D. et al. // Ibid. 1979. - Vol. 37. - P. 399.

113. Clark, M.F. Characteristics of the microplate method of enzyme-linked immunosorbent assay for the detection of plant virus / M.F. Clark, A.N. Adams // J. Gen. Virol. 1977. - Vol.36, № 3. - P.475-483.

114. Clare, H.W. Mynocycline and rheumatoid arthritis revisited (Letter) /H.W. Clare // Ann Intern. Med. 1995. - Vol. 123. - P. 393.

115. Conn, D.L. New role for an old friend; prednisone is a disease-midifying agent in early rheumatoid arthritis / D.L. Conn, S.S. Lim // Curr. Opin. Rheumatol. 2003. - Vol. 15. - P. 193-198.

116. Conn, D.L. Resolved: low-dose prednisone is indicated as a standard treatment in patients with rheumatoid arthritis / D.L. Conn // Arthritis Care&Res. -2001. Vol. 45. - P. 462-467.

117. Cosserat, J. Immunological disorders in С virus-chronic hepatitis / J. Cosserat, P. Cacoub, O. Blotry // Nephrol. Dial. Transplant. 1996. - Vol. 11 (suppl.4). - P. 31-35.

118. Cunnane, G. Infections and biological therapy in rheumatoid arthritis / G. Cunnane, M. Doran, B. Bresnihan // Best Pract. Res. Clin. Reumatol. 2003. -Vol. 17 (2).-P. 345-363.

119. Curtis, J. Leukopheresis therapy of chronic lymphocytic leukemia /J. Curtis, E.Hersh, E. Freireich // Blood, 1972. Vol. 39, N 2. - P. 163-175.

120. D'Cruz, D. Testing for autoimmunity in humans. Toxicol / D. D'Cruz // Lett. 2002. - 127 (1-3). - P. 93-100.

121. Davidson, A. Autoimmune diseases. N. / A. Davidson, B. Diamond // Engl. J. Med. 2001. - Vol. 345 (5). - P. 340-350.

122. Dayer, J.M. The pivotal role of interleukin-1 in the clinical manifestations of rheumatoid arthritis / J.M. Dayer // Reumatol. 2003. - Vol. 42 (suppl.2). - P. 3-10.

123. Справочник биохимика / Dowson Rex. M.C. et al. (Досон P. [и др.]) М.:Мир, 1991. - C.464.

124. Edworthy, S.M. Morning stiffness: sharpening an old saw? / S.M. Edworth//J. Rheumatol. 1999. - Vol. 26.-P. 1015-1017.

125. Methotrexate inhibits the first commited step of purine biosynthesis in mitogen-stimulated human T-lymphocytes: a metabolic basis for efflcacyinrheumatoid arthritis / I.D. Fairbanks et al. // Biochem. J. 1999. - Vol. 342, №4 (Pt.l).-P. 143-152.

126. Firestein, G.S. Evolving concepts of rheumatoid arthritis / G.S. Firestein//Nature. 2003. - Vol. 423 (6937). - P. 356-361.

127. Genestier, I. Immunosuppressive proerties of methotrexate: apoptosis and clonal detion of activated peripheral T-cells / I. Genestier, R. Paillot, S. Fournel // J. Clin. Invest. 1998. - Vol. 102, № 7. - P. 322-328.

128. Gijs, M.A. Magnetic particle handling Microsystems for miniaturized analytical applicatons / M.A. Gijs // Conf. Proc. IEEE Eng. Med. Biol. Soc. -2007. P. 4088-4089.

129. Echocardiographic and Doppler findings in long-term treated rheumatoid arthritis patients without clinically evident cardiovascular disease / C. Gonzales-Juanatey et al. // Semin. Arthr. Rheum. 2004. - Vol. 33 (4). - P. 231238.

130. Gontar, I.P. Magnetic sorbents in medicine of hfthogenetic therapy in rheumatoid arthritis patients / I.P. Gontar, A.V. Aleksandrov, A.K. Jhalal // 26-th Scandinavian Congrass of Rheumatology Reykjavik, 1996. - P. 58.

131. Immunosorbtion as a stage in immunomodultion therapy of rheumatoid arthritia / I.P. Gontar et al. // 10th Symposium of the European League against Rhumatism. Vienna-Austria, 1997. - P. 29.

132. Rheumatoid arthritis associated antibodies in patients with synovitis of recent onset / R. Goldbach-Mansky et al. // Arthritis Res. 2000. - Vol. 2. -P.236-243.

133. Grinde, B. Sensitive detection of group A rotaviruses by immunomagnetic separationand reverse transcription-polimerase chain / B. Grinde, T.O. Johanssen, H. Ushijima // J. Virol. Methods. 1995. - Vol. 55, № 3. - P. 32738.

134. Medical application of functional9zed magnetic nanaparticles / A. Ito et al. // J. Biosci. Bioeng. 2005. - Vol.100, № 1. - P.l-11

135. Long-term exposure to methatrexate induces immunophenotypic changes, decreased met of hotrexate uptake and increased dihydrofolate gene copy number in Jurkat T cell / MJ. Hall et al. // Int. J. Immunopharmacol. 1977. -Vol. 102, №6.-P. 709-720.

136. Harris, E.D. Rheumatoid arthritis: pathophysiology and implications for therapy / E.D. Harris // N. Engl. J. Med. 1990. - Vol. 322. - P. 1277-1289.

137. Hartl, W. / W. Hartl, E. Genth, E. Genth //Diagnostic 1977. -Bd. 10. - S.80-85.

138. Haukanes, B.I. Application of magnetic beads in bioassays / B.I. Haukanes, C. Kyam // Biotechnology (NY). 1993. - Vol. 11, № 1. - P. 60-63.

139. Anti-tumor necrosis factor a therapy in rheumatoid arthritis: an apdate on safety / K.L. Hyrich et al. // Ann. Rheum. Dis. 2004. - Vol. 63. - P. 1538-43.

140. Henderson, B. Mechanisms and models in rheumatoid arthritis / B. Henderson , J.C.W. Edwards, E.R. Pettipher // Academic Press INC. San Diego, 1995. - 548 p.

141. Tumor necrosis factor (TNF) production by T-cell receptor-primed T lymphocytes is a target for low dose methotrexate in rheunatol arthritia / K. Hildner et al. // Clin. Exp. Immunol. 1999. - Vol. 118, № 10. - P. 137-146.

142. Jaffe, I.A. Comprasion of the effect of plasmapheresis and penicillamine on the level of circulating rheumatoid factor / I.A. Jaffe // Ann. Rheum. Dis. 1963. - Vol. 22. - P. 71-76.

143. Keitel, W. / W. Keitel // Z. Rheumaforch. 1986. - Bd. 25. - S.2732.

144. Kemshead, J.T. Magnetic separation techniques: their application to medicine / J.T. Kemshead, J. Ugelstad // Mol. Cell. Biochem. 1985. - Vol. 67, № l.-P. 11-18.

145. Magnetic monosired polymer pasticles for fast, and specific fractionation of human mononuclear cells / T. Lea et al. // J. Immunol. 1985. -Vol. 22, №2-P. 207-216.

146. Prognostic laboratory markers of joint damage in rheumatoid arthritis / E. Lindqvist et al. // Ann. Rheum. Dis. 2005. - Vol. 64(2). - P. 196-201.

147. Lovy, M.R. Hepatitis C virus infection with rheumatic manifestations: a mimic of rheumatoid arthritis / M.R. Lovy, G. Starkebaum, S.J. Uberoi // J. Rheumatol. 1996. - Vol. 23 (6). - P. 979-983.

148. Magnani, M. The use of magnetic nanoparticales in the development of new molecular detection systems / M. Magnani, L. Galluzzi, I.J. Bruce // J. Nanotechnol. 2006. - Vol. 6, № 8. - P. 2302-2311.

149. Recovery of Cryptosporidium oocysts and cysts from source water concentrates using immunomagnetic separation / R.M. McCuin et al. // J. Microbiol. Methods. 2001. - Vol. 45, № 2. - P. 69-76.

150. McMurray, R.W. Hepatitis C infection and antoimmunity / R.W. McMurray, K. Elbourne // Semin. Arthr. Rheum. -1997. Vol. 26 (4). - P. 689701.

151. Recovery of Cryptosporidium oocysts and cysts from source water concentrates using immunomagnetic separation / R.M. Mc Cuin et al. // J. Microbiol. Methods. 2001. - Vol. 45, № 2. - P. 69-76.

152. Menzel, J. / J. Menzel, C. Steffen, J. Smolen // Z. Rheum. 1978. -Bd. 36.-S. 137-139.

153. Moreland, L.W. Glucocorticoids and rheumatoid arthritis. Back to the future? / L.W. Moreland, J.R. CTDell // Arthritis Rheum. 2002. - Vol. 40. - P. 2553-2563.

154. Repeadet leukapheresis of patients with chronic myelocytic leukemia IE. Morse et al. //Transfusion, 1966. -N 6(3). P. 175-187.

155. Banatvala, Rapid diagnosis of enterovirus infection by magnetic bead extraction and polymerase chain reaction derection of enterovirus RNA in clinical specimens /P.F. Muir et al. //J. Clin. Microbiol. 1993. - Vol. 31, N1. - P. 31 -38.

156. Comparison of the immune response to Epstein Barr virus and cytomegalovirus in sera and synovial fluids of patiens with rheumatoid arthritis M. Musiani et al. // Ann. Rheum. Dis. - 1987. - Vol. 46. - P. 837-842.

157. Nakane, P.K. Peroxidase-labelled antibody a new method of conjugation / P. K. Nakane, A. Kawaoi // J. Histochem. Cytochem. — 1974. Vol. 22, №4.-P. 506-508.

158. HLA genes associated with rheumatoid arthritis: identification of susceptibility alleles using specific oligonucleotide probes / G. T. Nepom et al. //Arthritis Rheum. 1989. - Vol. 32. - P. 15-21.

159. Neser, G. In vitro effects of methotrexate on polyamine levels in lymphocytes from rheumatoid arthritis patients / G. Neser, T.G. Osdorn, T.L. Moore // Ckin. Exp. Rheumatol. 1996. - Vol. 342, № 4 (Ptl). - P. 395-399.

160. O'Dell Treading rheumatoid arthritis early: a window of opportunity? / O'Dell // Arthritis Rheum. 2002. - Vol. 46. - P. 283-285.

161. Magnetic separation techniques in diagnostic microbiology / O. Olsvik et al. // Clin. Microbiol. Rev. 1994. - № 7(1). - P. 43 - 54.

162. Ouchterlony, O. Antigen-antibody reactions in gel / O. Ouchterlony // Arkiv forKemi. Mineral. O Ged. 1949. - Vol. 261, № 14. - P. 1-9.

163. A case report: thoracic duct lymphocyte drainage in rheumatoid arthritis / H. Paulus et al. // Clin. Immunol. Immunopathol. 1973. - Vol. 1. - P. 173-181.

164. Pearson, C. The role of the lymphocyte and its products in the prapagation of joint disease / C. Pearson, H. Paulus, H. Machleder // Ann. N. Y. Acad. Sci. 1975.-Vol. 256.-P. 150-168.

165. Peruski, A.H. Immunological methods for detection and identification of infectious disease and biological warfare agents / A.H. Peruski, L.E. Peruski // Clin. Diagn. Lab. Immunol. 2003 - Vol. 10, № 4. - P. 506-513.

166. Pincus, Т. Are long-term very low doses of prednisolon for patients with rheumatoid arthritis as helpful as high doses are harmful? / T. Pincus, T. Sakka, C.M. Stein // Ann Intern Med. 2002. - Vol. 136. - P. 76-78.

167. Poison, A. The fractionation of protein mixtures by linear polymers of higth molecular weigh / A. Poison, G.M. Potgieter, J.E. Largier // Biochem. Biophis. Acta. 1964. - Vol. 82. - P. 463-475.

168. Rabson, А. Основы медицинской иммунологии / A. Rabson, I.M. Poitt, P.G. Delves (А. Рабсон, А. Ройт, П. Делвз). M.: Мир, 2006 - С.289.

169. Report of IUIS / WHO Working Group // Clin. Exp. Immunol. -1981.-Vol. 46.-P. 662-674.

170. Rider, J.R. Human citomegalovirus infection and systemic lupus erythematosus / J.R. Rider, W.E. Oliver, R.J. Lock // Clin. Exp. Rheumatol. -1997.-Vol. 15 (4).-P. 405-409.

171. Piroxicam — a literature review of new results from laboratory and clinical studies / D.L. Robbins et al. // Eur. J. Rheumatol. Inflam. 1983. - Vol. 163.-P. 3-23.

172. Pilot scale affinity chromatography: puritication of beta-galactosidase /P.J. Robinson et al. //Biotechnol. Bioeng. 1974. - Vol. 16, N 8. - P. 11031112.

173. Increase of dihydrofolate reductase in peripheral blood lymphocytes of rheumatoid arthritis patents freated with low dose oral methotrexate / S. Rodenhuis, J.M. Kremer, J.R. Bertino // Arhtritis Rheum. 1987. - Vol. 30, № 4. -P. 369-374.

174. Saag, K.G. Resolved: low-dose glucocorticoids are neither safe nor effective for long-term treatment of rheumatoid arthritis / K.G. Saag // Arthritis Care&Res. 2001. - Vol. 45. - P. 468-471.

175. Scot, D. The diagnosis and prognosis early arthritis: rationale for new prognostic criteria / D. Scot // Arhtritis Rheum. 2002. - Vol. 46. - P. 286-290.

176. Shinkai, M. Functional magnetic particles for medical application / M. Shinkai, A. Ito //And. Biochem. Eng. Biotechnol. 2004. - Vol. 91. - P. 191220.

177. Silman, A.I. Epidemiology of the rheumatic diseases / A.I. Silman, M.C. Hochberg. Oxford, 1993. - P. 45.

178. Smith, K.O. Magnetic transfer devices for use in solid-phase radioimmunoassays and enzym-linked immunosorbent assay / K.O. Smith, W.D. Gehl // J. Infect. Dis. 1977. - Vol. 136.-P. 5328-5336.

179. A simplified disease activity index for rheumatoid arthritis for use in clinical practice /I.S. Smolen I.S. et al. // Rheumatology. 2003. - Vol.42. -P.144-257.

180. Influence of proinflammatory (IL-1 -alpha, IL-6, TNF-alpha, IFN-gamma) and anti-inflammatory (IL-4) cytokines on chondrocyte function / A.J. Schuerwegh et al. // Osteoarthr. Cartilage. 2003. - Vol. 11 (9). - P. 681-687.

181. Taylor, P.C. Anti-cytokines and cytokines in the treatment of rheumatoid arthritis / P.C. Taylor // Curr. Pharm. Des. 2003. - Vol. 9 (14). - P. 1095-1106.

182. The infects of nonsteroidal anti-inflammatory drug therapy in early rheumatoid arthritis on serum levels of soluble interleukin 2 receptor, CD4 and CD8 / P.C. Taylor et al. // J. rheumatol. 1992. - Vol. 143, № 11. - P. 18571862.

183. Immunopharmacological studies of new 3-benzoyl-4-mercaptobutiric acids. Immunodulating affects / K. Takeshita et al. // Arzeneimittelforschung. -1988. Bd.163, № 4. - S.537-542.

184. Theofilopoulos, A.N. Manual of Clinical Laboratory Immunology /A.N. Theofilopoulos, M.T. Aduado //Washington, 1992. P. 104-109.

185. Minocicline in rheumatoid arthritis. A 48-week, double blind, placebo controlled trial MIRA Trial Group. Intern / C.B. Tilley et al. // Med. 1995. -Vol. 122.-P. 81-89.

186. Ugescr Laeger. Kidney function problems in rheumatoid arthritis /Ugescr Laeger. 1996. - Vol. 158 (22). - P. 3137-3140.

187. The effect of Thoracic duct drainage on lymphocyte dynamics and clinical symptoms in patients with rheumatoid arthritis / T. Ueo et al. // Arthr. and Rheum. 1979. - Vol. 22. - P. 1405-1412.

188. Wadsworth, S.A. , Cavender D.E. Beers S.A. et al. // Dig. Dis. Sci.- 1987.- Vol. 291,N6.-P. 51-56.

189. Warburg, O. Isolierung und Kristallisation des Garugstermets Enolase /0. Warburg, W. Christian //Biochem. Z. 1941. - Vol. 310. - P. 384421.

190. Fistula of the report: thoracic duct as immunosuppressive treatment in rheumatoid arthritis / O. Wegelius et al. // Acta Med. Scand. 1970. - Vol. 187. -P. 539-544.

191. Zhou, Z. Autoantigenetic posttranslational modifications of proteins: does it apply to rheumatoid arthritis? / Z. Zhou, H.A. Menard // Curr. Opin. Rheumatol, 2002. Vol. 14 (3). - P. 250-253.

192. Ziolkowska, M. Laboratory changes on antitumor necrosis factor treatment in rheumatoid arthritis / M. Ziolkowska, W. Maslinski // Curr. Opin. Rheumatol. 2003. - Vol. 15 (3). - P. 267-273.

Оглавление диссертации Афанасьев, Николай Евгеньевич :: 2010 :: Волгоград

Введение диссертации по теме "Ревматология", Афанасьев, Николай Евгеньевич, автореферат

Список использованной литературы по медицине, диссертация 2010 года, Афанасьев, Николай Евгеньевич

Похожие научные работы

Каталог диссертаций