Автореферат и диссертация по медицине (14.03.06) на тему:Оценка эффективности комплексных соединений кобальта при гнойно-воспалительных процессах

На правах рукописи

00501559В

КОСТРОВ СЕРГЕЙ ВЯЧЕСЛАВОВИЧ

ОЦЕНКА ЭФФЕКТИВНОСТИ КОМПЛЕКСНЫХ СОЕДИНЕНИИ КОБАЛЬТА ПРИ ГНОЙНО-ВОСПАЛИТЕЛЬНЫХ ПРОЦЕССАХ

14.03.06 - фармакология, клиническая фармакология

1 МАР Ж

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Курск-2012

005015598

Работа выполнена в Государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Курский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации

Научный руководитель:

доктор биологических

профессор

Официальные оппоненты:

наук,

Лазурина Людмила Петровна

доктор медицинских наук, профессор, Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Курский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации, заведующий кафедрой инфекционных болезней и эпидемиологии доктор медицинских наук, Федеральное государственное автономное образовательное учреждение «Белгородский государственный национальный исследовательский университет», профессор кафедры фармакологии и фармакологических дисциплин института последипломного медицинского образования

Провоторов Владимир Яковлевич

Покровская Татьяна Григорьевна

Ведущая организация: Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Российский национальный исследовательский медицинский университет имени Н.И. Пирогова» Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации

Защита состоится « /Г» ¿5 _ 2012 г. в ^"часов на заседании диссертационного совета Д 208.039.03 при Государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Курский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации (305041, г. Курск, ул. К. Маркса, 3).

С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке ГБОУ ВПО КГМУ Мин-здравсоцразвития России.

Автореферат разослан «

//» 03 2012 г.

Ученый секретарь диссертационного совета

Пашин Евгений Николаевич

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Несмотря на успехи, достигнутые в лечении гнойно-воспалительных процессов, вопросы раневой инфекции по-прежнему являются одной из самых сложных и актуальных проблем хирургии, занимая ведущее место в хирургической заболеваемости (до 40%) (Блатун Л.А., 2002; Гос-тищев В.К., 1996; Гуляев А.Е., 2003; Назаренко Г.И., 2002; Козлов С.Н., 2009).

Рост числа гнойно-воспалительных заболеваний и послеоперационных гнойных осложнений, ухудшение результатов лечения при гнойной хирургической инфекции (увеличение сроков лечения, случаев перехода процесса в хроническую форму, развитие осложнений токсического и аллергического характера и т.д.) привели к существенному пересмотру принципов и методов лечения гнойных ран. Основополагающими причинами, вызвавшими данные процессы, явились существенные изменения биологических свойств раневой микрофлоры и подавление уровня защитных реакций организма. Подобные неблагоприятные изменения ситуации, приобретающие медико-социальное значение, определяют необходимость поиска новых путей повышения эффективности антибактериальной терапии.

Огромный клинический опыт, накопленный хирургией в области теории и практики лечения ран, свидетельствует, что даже самые эффективные лекарственные средства в процессе их применения снижают свою активность и начинают вызывать неожиданные побочные эффекты. Широкое и нерациональное применение антибиотиков привело к ускорению формирования и распространения микробов, устойчивых к существующим лекарственным препаратам. Следствием этих изменений явилось прогрессирующее снижение эффективности антибиотикотерапии на фоне растущей аллергизации населения.

Исходя из сложного патогенеза раневого процесса с учетом его фазы, а также характера возбудителя и его чувствительности к лекарственным препаратам, необходим дифференцированный подход к выбору лекарственных средств для местного лечения инфицированных ран.

Поэтому не менее важными и актуальными являются работы в области поиска новых методов и лекарственных средств для местного лечения, обладающих многонаправленным действием, с целью дальнейшего обоснования их внедрения в практическое здравоохранение.

В настоящее время возрос интерес к изучению возможности повышения эффективности уже известных лекарственных средств, которое может осуществляться путём комплексообразования с металлами. Показано разнообразное действие металлов на активность биологических процессов в организме человека. Комплексообразование лекарственных средств с металлами может быть одним из эффективных направлений получения новых биологически активных соединений, позволяющим повысить антимикробную активность, расширить спектр действия и уменьшить токсичность исходных лиганд.

В качестве металла-комплексообразователя нами был выбран кобальт, учитывая его важную физиологическую роль в жизнедеятельности организма. Кобальт является одним из наиболее активных биоэлементов, участвующих в

развитии организма, кроветворении и тканевом дыхании, в усилении обмена белков и активации ряда ферментативных процессов. Кроме того, кобальт способен активировать фосфатазу, активно участвующую в регенерации поврежденных тканей. Кобальт отличается разнообразным влиянием на жизненные процессы, активируя деятельность ряда витаминов, гормонов, оказывая влияние на белковый, жировой, углеводный и минеральный обмен, а также на функции размножения и роста. При недостаточном поступлении кобальта в организм снижается концентрация йода в щитовидной железе. Комплексные соединения кобальта и витамина В,2 стимулируют образование антител в облученном организме. Изложенные выше данные свидетельствуют о том, насколько важной является физиологическая роль кобальта, что послужило нам основанием для изучения его в качестве металла-комплексообразователя.

В качестве лиганд для комплексообразования с кобальтом были выбраны биологически активные вещества производные адамантана, нитроимидазола, нитрофуранаи 6-пенициллановой кислоты.

Настоящая работа выполнена в соответствии с одним из научных направлений Курского государственного медицинского университета и кафедры биологической и химической технологии по проблеме «Медико-биологические информационные технологии» (№ госрегистрации ВНТИ Центра 12009565143).

Цель работы изучение сравнительной эффективности новых комплексных соединений кобальта с М-(1-адамантил)-2-гидрокси-4-оксо-4-(п-толил)-кротонамидом, 1 -(/3-оксиэтил)-2-метил-5-нитроимидазолом, №(5-нитро-2-фурфурилиден)-1-аминогидантоином и производным 6-пенициллановой кислоты при гнойно-воспалительных процессах.

Задачи исследования.

1. Провести изучение противомикробной и противогрибковой активности новых комплексных соединений кобальта с производными адамантана, 5-нитроимидазола, 5-нитрофурана и 6-пенициллановой кислоты.

2. Изучить общетоксическое, раздражающее и аллергизирующее действие некоторых комплексных соединений кобальта.

3. Изучить иммуномодулирующее и противовоспалительное действие комплексных соединений кобальта.

4. Изучить антимикробную активность комплексных соединений кобальта в составе глицерогелей, влияющих на гнойно-воспалительный процесс.

5. Изучить антимикробную активность комплексных соединений кобальта в составе комбинированных глицерогелей и их влияние на реактивные изменения в тканях при моделировании стафилококковой инфекции в эксперименте.

Научная новизна работы. Впервые установлено, что комплексные соединения кобальта с производными адамантана, нитроимидазола, нитрофурана и 6-пенициллановой кислоты обладают антимикробной и антигрибковой активностью, местным противовоспалительным и иммуномодулирующим действием и относятся к классу малотоксичных веществ. /

Установлено, что комплексные соединения кобальта с производными адамантана, 5-нитроимидазола, 5-нитрофурана и 6-пенициллановой кислоты обладают большей антимикробной активностью и более широким спектром ан-4

тимикробного действия в сравнении с лигандами и не оказывают раздражающего и аллергизирующего действия в эксперименте на животных.

Проведено сравнительное изучение эффективности новых комплексных соединений кобальта в эксперименте на течение стафилококковой и сальмонел-лёзной инфекции.

Впервые показано выраженное антимикробное действие некоторых комплексных соединений кобальта в составе глицерогелей.

Впервые показано антимикробное, противовоспалительное и ранозажив-ляющее действие комплексных соединений кобальта в многокомпонентных глицерогелях при моделировании гнойной раны.

Практическая значимость работы. Проведенные исследования позволяют прогнозировать поиск путей модификации известных лекарственных средств и биологически активных соединений с целью получения безопасных и эффективных антимикробных препаратов, не подавляющих естественный иммунитет человека. Установленная антимикробная и противовоспалительная активность новых комплексных соединений кобальта, отсутствие раздражающего и аллергизирующего действия на кожу позволяют рекомендовать их для дальнейшего изучения в качестве препаратов выбора при лечении инфицированных ран и воспалительных заболеваний кожи.

Комплексные соединения кобальта в составе комбинированных глицерогелей обеспечивают выраженный антимикробный, обезболивающий, раноза-живляющий и регенерирующий эффекты. Результаты исследования являются научно-экспериментальным обоснованием применения глицерогелей для лечения и профилактики инфицированных ран.

Материалы диссертации используются в научно-исследовательской работе и учебном процессе на кафедрах биологической и химической технологии, микробиологии, вирусологии, иммунологии, фармакологии, фармацевтической, токсикологической и аналитической химии Курского государственного медицинского университета.

Основные положения, выносимые на защиту.

1. Комплексные соединения кобальта обладают антимикробной и антигрибковой активностью, противовоспалительным действием.

2. 0,1-10,0% растворы комплексных соединений кобальта не вызывают раздражающего и аллергизирующего эффекта, не проявляют общетоксического действия и не оказывают воздействия на морфологическую структуру кожи и органов экспериментальных животных, индекс активности комплексных соединений кобальта повышается при экспериментальной стафилококковой инфекции в 2-3,5 раза, а при сальмонеллёзной инфекции в 2,5-4 раза.

3. Комплексные соединения кобальта стимулируют факторы неспецифической резистентности: увеличивают фагоцитарную активность макрофагов, активность кислородзависимых бактерицидных систем фагоцитов, завершенность фагоцитоза, увеличивают уровень сывороточного лизоцима, бактерицидную активность сыворотки крови; количество антителообразующих клеток в 1,5-2 раза.

4. Комплексные соединения кобальта в составе глицерогелей (0,25-0,5%), содержащих в качестве вспомогательных веществ димексид, анестетик и глицерин, обеспечивают выраженную антимикробную активность, обладают обезболивающим эффектом и не проявляют кожно-раздражающего действия.

5. Комбинированные глицерогели, содержащие в своем составе комплексные соединения кобальта, проявляют высокую антимикробную активность, обладают противовоспалительным, обезболивающим, ранозаживляю-щим эффектами и стимулируют процессы регенерации поврежденных тканей, сокращают сроки заживления кожных инфицированных ран.

Личный вклад автора. Автором проанализированы отечественные и зарубежные источники по теме диссертационного исследования, проведены серии экспериментов, получены и обобщены результаты исследования, проведена статистическая обработка и анализ полученных данных.

В публикациях № 12 и № 18 автором лично проведено моделирование дизайна исследования, научное обоснование и обобщение полученных результатов, в № 19 - статистическая обработка и обобщение полученных результатов.

Апробация работы. Основные положения работы представлены на научных конференциях Курского государственного медицинского университета (2006-2010 гг.), межвузовских конференциях студентов и молодых ученых Курского государственного медицинского университета (2007-2009 гг.), Всероссийской конференции «Гомеостаз и инфекционный процесс» (Москва, 2006 г.), международной конференции «Современные медицинские технологии (диагностика, терапия, реабилитация и профилактика)» (Хорватия, 2006 г.), межкафедральной конференции Курского государственного университета (2011 г.).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 19 работ, в том числе три из них в научных журналах, рекомендованных ВАК РФ для публикации основных научных результатов диссертации на соискание ученой степени, и подана заявка на патент (№ 2011136317(053969)).

Структура и объем работы. Диссертационная работа состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследования, 3 глав собственных исследований, заключения, выводов и списка литературы. Она изложена на 149 страницах компьютерного текста, содержит 46 таблиц и 10 рисунков. Библиографический указатель включает 175 отечественных и 66 зарубежных литературных Источников.

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Материалы и методы исследования Дизайн эксперимента

Все экспериментальные работы проводили согласно «Руководству по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ» (В.П. Фисенко, Е.В. Арзамасцев, Э.А. Бабаян) с определением LD5o (М.А. Беленький, Е.В. Арзамасцев), «Руководству по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ (под редакцией Хабриева Р.У.), «Методическим рекомендациям по экспериментальному

(доклиническому) изучению лекарственных препаратов для местного лечения гнойных ран» (Б.М. Даценко, Н.Ф. Калиниченко, В.К. Лепехин), «Методическим рекомендациям по экспериментальному изучению местноанестезирую-щих средств (Ю.Д. Игнатов, Ю.Н. Васильев, В.Н. Жуков), «Методическим рекомендациям по выведению животных из эксперимента» (С.А. Куфлина), «Руководству для врачей» (под редакцией М.И. Кузина, Б.М. Костюченок).

Изучение биологической активности комплексных соединений кобальта проводили в экспериментах in vitro и in vivo с установлением антимикробной, антигрибковой и иммуномодулирующей активности. С целью установления характера, выраженности повреждающего действия и оценки безопасности комплексных соединений кобальта и предлагаемых глицерогелей изучено общетоксическое действие: острая токсичность, раздражающее и аллергизирующее действие.

Изучение специфической фармакологической активности многокомпонентных гелей проводили в эксперименте на совместимость и биофармацевтическую доступность ингредиентов и с использованием адекватных экспериментальных моделей лабораторных животных. Лабораторные образцы изучали в процессе заживления экспериментальной инфицированной раны. Работа выполнялась стандартными методами in vitro и in vivo на микроорганизмах.

В процессе экспериментальных исследований комплексных соединений кобальта были использованы теплокровные животные 4 видов (белые мыши массой 18-20 г, белые крысы линии Вистар массой 100-120 г и 180-220 г, кролики породы Шиншилла массой 2,5-3,0 кг, морские свинки массой 320-350 г) обоего пола, полученные из Центрального питомника лабораторных животных «Столбовая», Московской области. Теплокровные животные содержались при температуре 18-21°С в условиях естественного светового цикла на стандартном рационе вивария, при свободном доступе к воде и пище. Все исследования проводились в соответствии с «Правилами проведения работ с использованием экспериментальных животных», утвержденными Приказом МЗ СССР № 75 от 12.08.1977 г.

Для решения поставленных задач применен комплекс современных микробиологических, иммунологических, физико-химических, гистологических и математических методов. Объектами исследования являлись: соединения, синтезированные на кафедре аналитической химии ММА им. И.М. Сеченова, в Пермской медицинской академии и на кафедре биологической и химической технологии КГМУ под лабораторными шифрами: PAd, PAdCo, PMn, PMnCo, PFd, PFdCo, PAm, PAmCo; образцы цельной крови, некоторые органы (селезенка, печень, почки) и биологические ткани экспериментальных животных. Растворы лиганд и изучаемых комплексных соединений готовили на стерильном физиологическом растворе натрия хлорида, готовили суспензии в твине-80 и физиологическом растворе натрия хлорида, воде для инъекций и вводили внут-рибрюшинно и внутримышечно (мыши, крысы, морские свинки), а также наносили в виде растворов и накожных аппликаций на эпилированные участки кожи спины (мыши, крысы, морские свинки) и аппликаций на роговицу глаза (кролики). Контрольные группы животных получали физиологический раствор в эквивалентном объеме.

Объем исследования биологической активности составил 314 проб (кровь, ткани и органы животных), 115 объектов для гистологического и 591 проба для микробиологического исследования синтезированных комплексных соединений и гелей, т.е. всего 1020 биопроб.

В экспериментах использовались субстанции комплексных соединений кобальта и их глицерогели, а также субстанции вспомогательных веществ, полученные с заводов-изготовителей с соответствующими протоколами анализа по требованиям НД (ГФ СССР X и XI изданий, отдельных ВФС и ФС, ГОСТ, ОСТ и ТУ).

Антимикробную активность изучали в отношении облигатных анаэробных микроорганизмов методом двухслойной агаровой культуры. Для исследования антимикробного действия в отношении анаэробных микроорганизмов были использованы как спорообразующие, так и неспорообразующие тест-культуры микроорганизмов из коллекции ГИСК им. JI.A. Тарасевича (г. Москва). Спорообразующий штамм - Clostridium perfringens 271, неспоро-образующие бактерии - Bacteroides fragilis 323, Bacteroides melaninogenicus 1011, Fusobacterium necrophorum VPJ 2523, Peptococcus magnus 336, Peptostreptococcus HC.

Антибактериальную активность растворов лиганд, их комплексных соединений с кобальтом и глицерогелей, приготовленных на их основе, в отношении факультативно-анаэробных микроорганизмов определяли in vitro методом диффузии в агар (Государственная фармакопея XI, 1990 г.). Для оценки активности новых комплексных соединений в качестве тест-культур использовали штаммы аэробных бактерий и грибов из коллекции ГИСК им. JI.A. Тарасевича (Москва): Staphylococcus aureus АТС С 25923, Staphylococcus aureus 209-Р, Bacillus subtilis АТСС 6633, Bacillus cereus АТСС 10702, Escherichia coli АТСС 25922, Proteus vulgaris АТСС 4636, Pseudomonas aeruginosa АТСС 27853, Candida albicans NCTC 2625, Candida tropicalis, Cryptococcus neoformans, Trichophyton mentagrophytes, Trichophyton rubrun, Microsporum canis, Aspergillus fumigates, Penicillium granulatum, Emmonsia crescens, Hormodendron perdosoi, Sporo-trix schenckii, Salmonella typhimurium № 7.

Активность биокомплексов in vivo изучали на белых мышах (при моделировании стафилококковой инфекции и сальмонеллезного энтероколита). Для этого мышей внутрибрюшинно заражали суточной агаровой культурой Staphylococcus aureus № 554, в дозе, вызывающей гибель 50% мышей в течение 7 суток (1х107 микробных тел/мл), и через сутки после заражения в течение 7 дней ежедневно вводили внутримышечно (0,1 мл) исследуемые препараты. Терапевтическую эффективность биокомплексов оценивали по выживаемости животных. Модель сальмонеллёзного энтероколита создавали на мышах весом 18-20 г, которых внутрибрюшинно заражали взвесью суточной культуры Salmonella typhimurium № 7 в количестве 8,75*103 микробных тел/мл, вызывавшей гибель 50% мышей в течение 7 суток. Через сутки после заражения в течение

7 дней ежедневно мышам вводили внутримышечно (0,1 мл) изучаемые лиганды и их биокомплексы. В экспериментальных исследованиях in vivo комплексные соединения кобальта вводили внутримышечно в дозах 5% от ДД50, что состав-

ляло 70 мг/кг для производного 5-нитроимидазола; 9 мг/кг для производного 5-нитрофурана; 40 мг/кг для производного адамантана; 256 мг/кг для производного 6-пенициллановой кислоты.

Терапевтическую эффективность оценивали по выживаемости животных. Определение острой токсичности биокомплексов проводили на мышах при внутрибрюшинном способе введения (Беленький М.А., 1963; Arzamastsev E.V., 1988) свежеприготовленных подогретых водных растворов металлокомплексов. Длительность наблюдения за подопытными животными после введения составила 14 дней. Определение показателей токсичности соединений проводилось с использованием комбинированного метода определения ЛД50. Местноанестези-рующую активность разрабатываемых глицерогелей изучали в опытах in vivo методом Ренье-Валета, в основе которого лежит изменение чувствительности роговицы глаза кролика при нанесении на нее исследуемого образца, выражающееся в ответной реакции на раздражитель в виде смыкания века (Игнатов Ю.Д., Васильев Ю.Н., Жуков В.Н., 1990). Высвобождение лекарственных веществ из полимерных основ проводили методом диализа (Государственная фармакопея XI, 1990 г.).

Для изучения действия новых биокомплексов на гуморальный иммунный ответ крысам линии Вистар внутримышечно вводили исследуемые препараты в твине и физиологическом растворе натрия хлорида 1 раз в сутки в течение 5 дней с последующей иммунизацией животных эритроцитами барана и определением уровня развития гуморального иммунного ответа путем определения в селезенке количества антителообразующих клеток (Мальберг К., Зигль Э., 1987).

Изучение влияния биокомплексов на показатели врожденного иммунитета проведено на крысах линии Вистар массой 180-220 г. Препараты вводили внутримышечно один раз в сутки в течение 11 дней. По истечении определенного времени животных усыпляли эфиром, вскрывали грудную полость и производили забор крови из нисходящей части грудной аорты. Из факторов неспецифической защиты определяли фагоцитарную активность лейкоцитов, активность бактерицидных систем фагоцитов (кислородзависимых и кислороднеза-висимых), резервную функцию системы фагоцитоза, уровень сывороточного лизоцима и бактерицидную активность сыворотки крови (БАС). Фагоцитарную реакцию оценивали в отношении S. aureus 209-Р с определением процента активных фагоцитов (фагоцитарный индекс) и числа поглощенных частиц в пересчете на 1 фагоцитирующую клетку (фагоцитарное число). Завершенность фагоцитоза определяли как процент микробных клеток, подвергшихся разрушению фагоцитами при двухчасовом инкубировании. Состояние кислородзависимых бактерицидных систем фагоцитов оценивали in vitro с помощью НСТ-теста, отражающего способность супероксиданиона восстанавливать нитроси-ний тетразолий в диформазан. НСТ-тест оценивали по степени восстановления нитросинего тетразолия в спонтанной и продигиозан-стимулированной реакциях при учете внутриклеточных отложений диформазана. В работе использовали HCT фирмы "Lachema" (Чехия). Резервную функцию системы фагоцитоза оценивали как разницу между показателями стимулированного и спонтанного тес-

та (Виксман М.Е., Маянский А.Н., 1979). Уровень лизоцима определяли нефе-лометрическим методом (Дорофейчук В.Г., 1968).

Изучено общетоксическое, кожно-раздражающее и аллергизирующее действие на кожу экспериментальных морских свинок согласно «Инструкции по экспериментально-клинической апробации косметических средств» (Ю.Г. Бобков); влияние на некоторые обменные процессы в коже (уровень нуклеиновых кислот, содержание суммарных липидов, общих и растворимых белков.

С целью изучения терапевтической эффективности полимерных лекарственных средств, содержащих новые комплексные соединения, на крысах-самцах линии Вистар моделировали инфицированную гнойную рану. Под наркозом в асептических условиях наносили рану по паравертебральной линии 2x2 см2, которую инфицировали 0,2 мл взвеси суточной агаровой культуры 5. aureus № 554, содержащей 1х109 микробных тел/мл. На 3 сутки от момента инфицирования развивалось острое гнойное воспаление, формировался выраженный воспалительный процесс с отеком и гиперемией кожи. Начиная с 3 суток проводили лечение раны разработанными составами гелей. Морфологические исследования тканей раны, изучение обсемененности производили после декапитации животных на 3, 5, 7, 9, 14 и 21 сутки. Динамику репаративных процессов в ране оценивали с учетом наличия и характера воспалительной реакции, состояния краев и дна раны, сроков очищения раны от некротических тканей и появления грануляций, сроков эпителизации раны. Скорость заживления раны определяли в динамике заживления путем измерения площади раны. Гистоструктурные изменения в раневых биоптатах изучали при исследовании препаратов, окрашенных гематоксилин-эозином.

Результаты исследований и их обсуждение

Проблема поиска и разработки эффективных лекарственных средств для лечения гнойных ран продолжает оставаться одной из актуальных проблем здравоохранения. Анализ многочисленных исследований, выполненных в разных странах, показывает, что клиническая эффективность антибиотиков достигла предела, а возможность открытия новых препаратов практически исчерпана. Поэтому модификация широко использующихся антимикробных препаратов становится одним из актуальных вопросов современной медицины, так как распространение гнойно-воспалительных заболеваний с годами не уменьшается, а тяжесть их течения может приводить к летальным исходам. В связи с этим оправданно повысился интерес к наиболее рациональному использованию уже известных лекарственных средств, в частности, к созданию комплексных соединений с жизненно важными металлами, так как рядом исследователей показано, что такие соединения могут обладать не только большей биологической активностью по сравнению с исходными лигандами, но иметь более широкий спектр действия и обладать меньшей токсичностью.

С этой целью был синтезирован ряд комплексных соединений кобальта с производными адамантана, нитроимидазола, нитрофурана и 6-пенициллановой кислоты и изучена их биологическая активность, так как её определение является важной задачей не только в связи с возможностью их практического ис-10

пользования, но и может служить теоретической основой для целенаправленного синтеза соединений с заданными свойствами. Структура полученных соединений доказана с привлечением данных химического и элементного анализа, ИК-спектроскопии, а новизна подтверждена патентами.

Учитывая перспективность исследуемых комплексных соединений кобальта в качестве биологически активных веществ, синтезированные соединения были подвергнуты компьютерному скринингу спектра биологической активности с помощью программы прогноза спектра биологической активности PASS (Prediction of Activity Spectra for Substances), которая может прогнозировать 900 видов биологической активности по структурной формуле химического вещества, включая основные и побочные фармакологические эффекты и механизмы действия. Данные прогноза свидетельствуют не только о возможности проявления более высокой антимикробной и противовоспалительной активности комплексных соединений кобальта, но и появления новых активностей, например, дерматологической, противоаллергической, противоязвенной, антими-котической, анальгезирующей, противовирусной и др., с вероятностью около 85%.

Антимикробная активность комплексных соединений была исследована в отношении тест-штаммов микроорганизмов, рекомендованных ГФ-XI. Исследование противомикробного действия комплексных соединений кобальта по отношению к облигатно-анаэробным микроорганизмам показало отсутствие достоверных различий по сравнению с лигандами. Таким образом, комплексо-образование кобальта с изучаемыми лигандами не оказало отрицательного влияния на активность лиганд в отношение основных мишеней действия препарата.

Проведенные сравнительные исследования по изучению антимикробной активности лиганд и их комплексных соединений кобальта в отношении факультативно-анаэробных микроорганизмов позволили установить, что они обладают выраженной антимикробной активностью, так как зона задержки роста в отношении изученных микроорганизмов значимо увеличивалась (табл. 1).

Комплексное соединение PAdCo проявляло наиболее выраженное антимикробное действие по сравнению с лигандом PAd в отношении S. aureus, В. subtilis, В. cereus, т.к. зона задержки роста микроорганизмов составляла 16,3±0,4 мм, 14,2±0,3 мм и 14,1±0,2 мм соответственно. Изучаемые комплексные соединения PMnCo, PAmCo, PFdCo обладали более выраженной антимикробной активностью по сравнению с лигандами и по сравнению с комплексным соединением PAdCo. Комплексное соединение РМпСо проявило выраженную антимикробную активность в отношении всех изученных штаммов микроорганизмов. Соединение РАшСо обладает более широким спектром антимикробной активности по сравнению с лигандом, т.к. диаметр зоны задержки роста в отношении P. aeruginosa составил 13,1±0,2 мм, а в отношении С. albicans -12,4±0,3 мм. Соединение PFdCo наиболее выраженную антимикробную активность проявило в отношении Е. coli, диаметр зоны задержки роста этого штамма микроорганизма составил -18,1±0,3 мм.

Таблица 1

Антимикробная активность лиганд и их комплексных соединений

кобальта в отношении факультативно-анаэробных микроорганизмов

№ Лабора- Диаметр зоны задержки роста бактерий в мм (М±т)

п/п торный S. aureus S. aureus В. subtilis В. cereus Е. coli Р. aeru- С. albi-

шифр AT СС 209-Р АТСС АТСС АТСС ginosa cans

образцов 25923 6633 10702 25922 АТСС NCTC

1 PAd 8,9±0,3 8,2±0,3 7,9+0,3 7,010,2 5,6±0,2 5,4±0,2 5,0+0,2

2 PAdCo 16,3±0,4' 14,6±0,2' 14,2+0,3' 14,1+0,2' 8,410,31 8,6±0,2' 9,110,2'

3 РМп 6,1+0,2 7,0±0,2 9,8+0,2 6,8±0,3 16,1±0,3 7,0±0,2 8,0+ 0,2

4 РМпСо )7,1±0,33 18,1+0,23 21,7±0,33 14,510,33 25,0±0,23 14,0±0,33 14,0+0,23

5 РАш 5,3±0,2 5,5±0,3 25,3±0,3 16,1±0,2 26,4+0,4 0 0

6 РАтСо 15,2±0,35 15,0±0,25 35,1±0,45 27,0+0,5' 34,5±0,35 13,1±0,25 12,4+0,35

7 PFd 9,8±0,3 8,9+0,2 9,7±0,2 7,5+0,3 6,8±0,2 7,3±0,3 5,210,3

8 PFdCo 16,9±0,27 17,3±0,27 18,5+0,37 17,9+0,37 18,1±0,37 16,2+0,27 14,5+0,27

Примечание: PAd - производное адамантана; PAd Со - биокомплекс кобальта с производным адамантана; I - различия средних по отношению к производному адамантану достоверно (р<0,05); РМп - производное нит-роимидазола; РМпСо - биокомплекс кобальта с производным нитроимидазола; 3 - различия средних по отношению к производному нитроимидазола достоверно (р<0,05); РАт - производное 6-пенициллановой кислоты; РАтСо - биокомплекс кобальта с производным 6-пенициллановой кислоты; 5 - различия средних по отношению к производному 6-пенициллановой кислоты достоверно (р<0,05); PFd - производное нитрофурана; PFdCo - биокомплекс кобальта с производным нитрофурана; 7 - различия средних по отношению к производному нитрофурана достоверно (р<0,05).

С целью установления более полной характеристики антимикробного действия изучаемых биокомплексов в отношении указанных тест-штаммов факультативно-анаэробных бактерий определены их минимальные подавляющие концентрации.

Комплексное соединение PAdCo оказывало подавляющее действие на все тест-культуры независимо от структуры клеточной стенки в дозах 1,252,5 мг/мл. Минимальные подавляющие концентрации комплекса РМпСо в отношении изучаемых микроорганизмов изменялись в диапазоне от 0,63 до 1,25 мг/мл. Для комплекса кобальта PFdCo наименьшая подавляющая концентрация была установлена 0,31-1,25 мг/мл, а комплекс кобальта РАтСо оказывал подавляющее действие на все тест-культуры в дозах 0,31-2,50 мг/мл.

Изучение противогрибковой активности новых комплексных соединений кобальта показало, что эти соединения можно отнести к биологически активным веществам с умеренной антимикотической активностью.

Так как все исследованные комплексы обладали выраженной активностью в отношении стафилококков, которые имеют наибольшее клиническое значение, то нами были проведены исследования протективной активности комплексов кобальта в опытах на мышах при внутрибрюшинном их заражении культурой S. aureus № 554, а также при моделировании сальмонеллёзного энтероколита. Полученные данные позволили установить увеличение терапевтической активности комплексов кобальта in vivo по сравнению с лигандами и контролем, так как индекс активности возрастал при стафилоккоковой инфекции для PAdCo и PFdCo в 1,9-2 раза, а для РАтСо и РМпСо в 3-3,5 раза, а при сальмонелезной активности для PAdCo и PFdCo в 2,3 раза, а для РАтСо и РМпСо - в 3-4 раза соответственно.

Таким образом, комплексообразование металлов с уже известными лекарственными средствами может быть одним из путей повышения биологической активности, т.к. способствует повышению противомикробной и противогрибковой активности и расширению спектра действия, что позволило рекомендовать данные комплексные соединения для дальнейшего изучения в качестве антимикробных лекарственных средств.

Результаты исследования, позволили сделать вывод, что комплексные соединения относятся к классу малотоксичных веществ. Установлено, что биокомплексы кобальта с изучаемыми лигандами не обладали раздражающим и аллергизирующим действием на кожу морских свинок в 0,1-10,0% концентрациях, не оказывали отрицательного воздействия на морфологическую структуру кожи и печени - аппетит, привес, реактивность, подвижность, состояние кожи и шерсти не отличались от контроля. Комплексные соединения кобальта РМпСо, РАс1Со, РАшСо (0,5% водные растворы), а в случае с биокомплексом РРёСо (0,25%-ного раствора) оказывали эффективное противовоспалительное действие - угнетение воспаления через 1 час составляло 33%, 30%, 35% к 37%; через 2 часа - 40%, 38%, 42% и 45% и через 3 часа - 66%, 62%, 68% и 70% соответственно.

Комплексные соединения кобальта в концентрациях 0,1-0,5% оказывают влияние на метаболизм нуклеиновых кислот, липидов и белков, что нашло подтверждение при проведении гистологических исследований.

С целью определения безвредности металлокомплексов было проведено изучение острой токсичности, так как без этого невозможно их применение в лечебной практике. Исследования, проведенные на белых нелинейных мышах (самцы и самки) при внутрибрюшинном способе введения, позволили установить ЛД50±ш для производного адамантана - 800±54 мг/кг, для производного 5-нитроимидазола - 1400±112 мг/кг, для производного 5-нитрофурана - 167±13 мг/кг, для производного 6-пенициллановой кислоты - 5300±414 мг/кг, а для комплексных соединений кобальта соответственно: 520±45 мг/кг, 659± 52 мг/кг, 97±7 мг/кг и 2304±16 мг/кг.

Одной из главных причин, осложняющей ситуацию в хирургии, являются неблагоприятные изменения иммунобиологической реактивности организма, так как лекарственные препараты обладают побочным действием на организм и, в частности, могут оказывать отрицательное влияние на различные звенья иммунной системы. В нашей работе представлены данные изучения новых комплексных соединений на показатели иммунного ответа. Установлено, что изучаемые лиганды не оказывали существенного влияния на формирование гуморального иммунного ответа, индуцированного эритроцитами барана, а введение комплексных соединений кобальта повышало иммуномодулируюшее действие, так как количество антителообразующих клеток возрастало в 1,52 раза.

Одним из факторов антиинфекционной защиты, определяющим дальнейшее развитие инфекционного процесса, является ее неспецифическое звено. Результаты изучения влияния комплексных соединений кобальта на функциональную активность лейкоцитов позволили выявить достоверно более высокие

значения показателей фагоцитоза в группах животных, которым вводили комплексные соединения кобальта, по сравнению с показателями как контрольной группы, которым вводили физиологический раствор натрия хлорида, так и групп, которым вводили лиганды (производные адамантана, нитроимидазола, нитрофурана и 6-пенициллановой кислоты). Активность кислородзависимых бактерицидных систем нейтрофилов в тесте восстановления нитросинего тетра-золия (НСТ-тест) также свидетельствовала о стимулирующем влиянии исследуемых комплексных соединений. Стимуляция бактерицидных систем нейтрофилов послужила, по нашему мнению, причиной усиления завершенности фагоцитоза под действием комплексных соединений.

Проведенные нами исследования позволили сделать вывод о необходимости изучения противомикробной активности комплексных соединений кобальта в полимерных лекарственных формах для лечения инфицированных ран. Разработки новых лекарственных препаратов и составов для местного лечения раневой инфекции актуальны, а использование для этих целей гидрофильных основ может обеспечить создание необходимой и удобной, в каждом конкретном случае, консистенции, хорошо фиксирующейся на поверхности, что будет способствовать локализации препарата на определенном участке. Для разработки иммобилизированных лекарственных форм для лечения ран большой интерес представляют производные целлюлозы, так как они имеют ряд преимуществ: лекарственные вещества в них хорошо и равномерно распределяются; не обладают аллергизирующими свойствами; более устойчивы к действию микроорганизмов; способствуют лучшему контактированию лекарственных веществ с пораженным участком и т.д. В нашем случае мягкие лекарственные формы готовили на основах гидрофильной природы: 3-5% гели метилцеллюлозы (МЦ), натриевой соли карбоксиметилцеллюлозы (Na-КМЦ) и гидроксипропил-метилцеллюлозы ГМПЦ). Антимикробную активность гелей изучали в опытах in vitro методом диффузии в агар. Установлено, что использование гидрофильных основ в виде глицерогелей не препятствовало проявлению противомикробной активности как лиганд, так и их комплексных соединений кобальта в отношении изученных тест-микроорганизмов, так как диаметр зоны задержки роста тест-микробов для глицерогелей, содержащих (0,25-1,0%) биокомплексы кобальта, значимо превышал зону угнетения тест-штаммов в случае использования полимерных гелей, содержащих только исходные лиганды.

Изучаемые основы не препятствовали высвобождению комплексных соединений кобальта, о чем свидетельствовало постоянное нарастание их концентрации в диализате до 89,5±0,73 - 94,6±0,84% к 3-4 часам эксперимента, что коррелировало с данными, полученными при изучении противомикробной активности гелей.

К современным лекарственным формам для местного лечения гнойно-воспалительных заболеваний предъявляются особые требования, чтобы они обладали максимально пролонгированным и комплексным воздействием, минимальным числом побочных эффектов и аллергических реакций.

Изучена противомикробная активность комплексных соединений кобальта в составе глицерогелей, содержащих анестетик, димексид, глицерин, влия-14

ющих на гноеродную микрофлору. Установлено, что введение в состав глице-рогелей тримекаина (3%) не оказывало отрицательного действия на высвобождение комплексных соединений кобальта, не снижало их антимикробную активность, но снимало болевой эффект, т.к. это является одной из основных задач местного лечения инфицированных ран. Наибольшие показатели силы (индекс Ренье 1300±2,6 усл. ед.) и продолжительности анестезии (98,2± 1,84 и 99,8±3,84 мин) имели место при одновременном сочетании в гелях тримекаина, производного нитроимидазола и его комплексного соединения с кобальтом, а время наступления анестезии было во всех случаях одинаково. Для повышения степени высвобождения из гелей комплексных соединений кобальта была изучена возможность добавления активатора чрескожного всасывания - димексида на противомикробную активность. Проведенные исследования показали, что увеличение концентрации димексида более 20% нецелесообразно, а увеличение концентрации димексида до 15% способствует увеличению комплексных соединений кобальта в диализате, что позволяет характеризовать изучаемые гли-церогели как лекарственные формы с пролонгированным действием.

В настоящее время при осложненных инфекциях рекомендуются препараты группы нитроимидазола, т.к. они являются одними из высокоактивных лекарственных препаратов с выраженным влиянием на смешанные инфекции, осложненные анаэробными инфекциями. Недостаточно изучена возможность использования их в лекарственных формах комбинированного состава. Ком-плексообразование лекарственных средств различных фармакологических групп с разным механизмом действия способно обеспечить потенцированный синергизм, что позволит снизить дозу и лекарственную нагрузку на организм при оптимизации фармакологического эффекта.

С учетом вышеизложенного проведено изучение влияния вспомогательных веществ (тримекаин, димексид, глицерин) на антимикробную активность глицерогелей с концентрацией комплексных соединений 0,25-0,5% (табл. 2,3).

Таблица 2

Антимикробная активность глицерогелей_

№ гр. Состав глицерогелей Диаметр зоны задержки роста тест-штаммов, мм (М±т)

5. аигеш АТСС 209-Р Е. соЦ АТСС 25922 В. зиЫШз АТСС 6633 В. сегеш АТСС 10702 С. ЫЫсагк ЫСТС 2625

1 РА<1*, Тримекаин, Димексид, МЦ, Глицерин 12,5±0,3 11,8+0,3 13,7±0,3 13,6±0,2 12,5+0,3

2 РАйСо*, Тримекаин, Димексид, МЦ, Глицерин 16,5±0,4' 15,6±0,2' 17,4+0,3' 16,8±0,21 14,8±0,2'

3 РМп*,Тримекаин, Димексид, МЦ, Глицерин 17,1 ±0,4 14,7+0,3 16,0±0,3 16,5+0,2 14,6+0,3

4 РМпСо* .Тримекаин, Димексид, МЦ, Глицерин 19,6±0,3! 17,0±0,25 19,1±0,3' 19,2±0,2"' 16,5+0,2'

Примечание: РАб - производное адамаигана; РАёСо - биокомплекс кобальта с производным адамантака; РМп -производное нитроимидазола; РМпСо - биокомплекс кобальта с производным нитроимидазола; I - достоверность различий средних относительно 1-й группы (р<0,05); 3 - достоверность различий средних относительно 3-й группы (р<0,05); * концентрация комплекса кобальта в глицерогелях - 0,5%.

Таблица 3

Антимикробная активность глицерогелей_

№ гр. Состав глицерогелей Диаметр зоны задержки роста тест-штаммов, мм (М±ш)

5'. аигем АТС С 209-Р Е. соИ АТСС 25922 В. ¡иЬиИз АТСС 6633 В. сегеиз АТСС 10702 С. а1Ыссии ЫСТС 2625

1 ррй*^ Тримекаин, Димексид, МЦ, Глицерин 19,3±0,3 19,1±0,3 20,2+0,2 19,5+0,3 17,4+0,3

2 Тримекаин, Димексид, МЦ, Глицерин 21,2±0.4' 21,5+0,2' 22,0±0,3' 21,7+0,4' 19,5+0,3'

3 РАт*. Тримекаин, Димексид, МЦ, Глицерин 18,9+0,3 20,0±0,3 21,2+0,2 18,5±0,3 2,6+0,3

4 РАтСо*. Тримекаин, Димексид, МЦ, Глицерин 20,9±0,43 21,7±0,23 23,4±0,33 20,9±0,43 12,1±0,33

Примечание: РРс1 - производное нигрофурана; РГс!Со - биокомплекс кобальта с производным нитрофурана; РАт - производное 6-пенициллановой кислоты; РАтСо - биокомплекс кобальта с производным 6-пенииилламовой кислоты; I - достоверность различий средних относительно 1-й группы (р<0,05); 3 -достоверность различий средних относительно 3-й группы (р<0,05); * концентрация комплекса кобальта в гли-церогелнх - 0,5%; ** концентрация комплекса кобальта в глицерогелях - 0,25%.

Установлено, что антимикробная активность многокомпонентных гелей, содержащих комплексные соединения кобальта, достоверно увеличивалась при включении в их состав димексида, тримекаина и глицерина по сравнению с контролем и глицерогелями, содержащими только лиганды. Полученные результаты показали целесообразность использования многокомпонентных составов, обладающих разнонаправленным действием.

Гелеобразная лекарственная форма выгодно отличается от растворов лекарственных средств, так как для своевременной диагностики и терапии воспалительного процесса, независимо от его топографии и стадии, необходимы фармакологически активные средства с максимальной фиксацией в воспалительном очаге.

В результате проведения комплексного исследования нами изучено влияние комплексных соединений кобальта в составе комбинированных глицерогелей на антимикробную активность, которые способные обеспечить многонаправленное действие в терапии местных гнойно-воспалительных процессов. Эффективность разработанных составов глицерогеля основана на сочетании новых биокомплексов кобальта с производными, нитроимидазола (0,25), нитрофурана (0,25)* и б-пенициллановой кислоты (0,25), местного анестетика (3,00)*, пластификатора (10,00)*, димексида (1,00)*, гидрофильной основы (водорастворимые производные целлюлозы) (3,00-5,00) и воды очищенной (до 100,00) , оказывающих выраженное антимикробное, пролонгированное и регенерирующее действие.

Установлено, что комбинированные глицерогели высокоэффективны с точки зрения биологической активности и доступности, обладают многонаправленным терапевтическим действием на гнойно-воспалительные процессы, улучшают регенерирующее действие и повышают атравматичность лечения ран, в соответствии с требованиями Государственной фармакопеи XI, подавление гноеродной микрофлоры раневого процесса, способны обеспечить достаточную антимикробную активность.

Имеющийся арсенал лекарственных форм метронидазола представлен преимущественно зарубежными производителями, что отличает их не только высоким качеством, но и ценой. Нами проведены исследования по созданию отечественных наружных лекарственных средств, обладающих дерматотропной активностью, комбинированных по составу, с поливалентным механизмом действия, проявляющих антибактериальный эффект (табл. 4).

Таблица 4

Антимикробная активность комбинированных глицерогелей

№ гр. Состав гелей Диаметр зоны задержки роста тест-штаммов, мм (М±т)

5. аигею АТСС 209-Р £ соН АТСС 25922 В. йиЫШй АТСС 6633 В. сегеия АТСС 10702 С. а1Ь:саж ЫСТС 2625

1 РМп, Тримекаин, Димексид, глицерин, МЦ 17,1 ±0,4 14,7+0,3 16,0±0,3 16,5±0,2 !4,6±0,3

2 РМпСо, РРсЮо, Тримекаин, Димексид, Глицерин, МЦ 30,2±0,5' 25,5±0,4' 23,7±0,3' 23,1 ±0.4' 21,6±0.2'

3 РМпСо, РАтСо, Тримекаин, Димексид, Глицерин, МЦ 31,7±0,4' 27,5±0,5' 26,3+0,4' 25,2±0,3' 19,3±0.2'

Примечание: РМп -производное нитроимедазола; РМпСо - биокомплекс кобальта с производным нитро-имидазола; Р1:с1Со - биокомплекс кобальта с производным нитрофурана; РАтСо - биокомплекс кобальта с производным 6-пенициллановой кислоты; 1 - достоверность различий средних относительно 1-й группы (р<0,05).

Как показали проведенные исследования, комбинирование в гелях комплексных соединений кобальта: РМпСо с РРс1Со; РМпСо с РАтСо достоверно увеличивало антимикробную активность гелей, так как зоны задержки роста изучаемых тест-микрорганизмов значимо возрастали.

В эксперименте на животных (крысы) при инфицированном процессе (модель полнослойной гнойной раны) изучено ранозаживляющее действие глицерогелей, содержащих комплексные соединения кобальта РМпСо и глицерогели в комбинации РМпСо с РИйСо, а также РМпСо с РАтСо. В качестве групп сравнения использовали глицерогели с РМп и готовую мазь «Левомеколь», широко применяемую для лечения местной гнойной инфекции (рис. 1-3).

Рис. I Ткани раневого дефек- Рис. 2 Ткани раневого дефекта Рис. 3 Ткани раневого дефекта 1

та (5 сутки). Серия 2 - гель, (5 сутки). Серия 3 - гель, со- (5 сутки). Серия 4 - гель, со-

содержащий РМп. Гематок- держащий РМпСо и РРс)Со. держащий РМпСо и РАтСо. I

силин-эозин. Ув. 8x10. Гематоксилин-эозин. Ув. 8x10. Гематоксилин-эозин. Ув. 8x10. 1

Установлено, что использование в составе глицерогелей комплексных со- | единений кобальта быстрее купировало воспалительный процесс, оказывало стимулирующее влияние на процессы восстановления поврежденной ткани, что проявлялось в активизации образования демаркационной линии очага воспаления, более быстром развитии грануляционной соединительной ткани по сравнению с контролем, и позволило получить хороший эффект при лечении гнойных раневых процессов стафилококковой этиологии. Введение в состав гелей дополнительно тримекаина, димексида и глицерина усиливало их антимикробную активность, ранозаживляющее и регенерирующее действие, а также позволило сократить сроки лечения с 14 суток до 10-11 суток. Суммарный процент уменьшения площади раны в динамике в опытной группе к 12-м суткам экспе- | римента составил 90,7%, в группах сравнения - 63,6 и 62,5% и в контрольной группе - 45,4%.

Гистологическая картина раневого материала хорошо коррелировала со скоростью заживления ран и изменением площади раневой поверхности. Цито-грамма клеток подтверждала ускорение процессов очищения раны и ее регенерации: уменьшение количества нейтрофилов в поле зрения в 1,5 раза, увеличе- 1 ние числа макрофагов и фибробластов в 2 раза.

Данные динамики изменения площади ран, клинических, микробиологических и гистологических показателей свидетельствуют о выраженном терапевтическом действии комбинированного глицерогеля по сравнению с официальной мазью «Левомеколь». Предложенные составы гелей эффективны при лечении ран в первой фазе воспалительного процесса и способствуют сокращению сроков заживления.

Таким образом, применение глицерогелей, содержащих биокомплексы кобальта, позволяет получить хороший эффект при лечении гнойных раневых процессов стафилококковой этиологии в эксперименте, обеспечивая высокую антимикробную активность, местноанестезирующее и ранозаживляющее действие, сокращает сроки лечения и расширяет ассортимент лекарственных средств, применяющихся для лечения местных гнойно-воспалительных процессов кожи.

выводы

1. Комплексные соединения кобальта с 1 -адамантил)-2-гидрокси-4-оксо-4-(п-толил)-кротонамида, 1-(/3-оксиэтил)-2-метил-5-нитроимидазола, N-(5-нитро-2-фурфурилиден)-1-аминогидантоином и производным 6-пенициллановой кислоты обладают антимикробным, противогрибковым действием, превосходя по активности исходные лиганды; увеличивают индекс активности при экспериментальной стафилококковой в 2-3,5 раза и при сальмонеллёзной инфекции в 2,5- 4 раза.

2. Комплексные соединения кобальта не вызывают раздражающего и аллер-гизирующего эффекта, не оказывают отрицательного воздействия на морфологическую структуру кожи и печени, не проявляют общетоксического действия на экспериментальных животных.

3. Комплексообразование кобальта стимулируют факторы неспецифической резистентности (увеличивают фагоцитарную активность макрофагов, активность кислородзависимых бактерицидных систем фагоцитов, завершенность фагоцитоза, повышают уровень сывороточного лизоцима, бактерицидную активность сыворотки крови, гуморального и клеточного иммунитета (значимо увеличивая количество антителообразующих клеток в 1,5-2 раза).

4. Глицерогели, содержащие комплексные соединения кобальта (0,25-0,5%), димексид, антисептик и глицерин проявляют противомикробную активность, обладают обезболивающим эффектом и не вызывают кожно-раздражающего действия.

5. Комбинированные глицерогели, содержащие в своем составе сочетание комплексных соединений кобальта, местный анестетик, пластификатор, димексид и гидрофильную основу, оказывают многонаправленное действие в терапии местных гнойно-воспалительных процессов, стимулируют влияние на процессы восстановления поврежденных тканей, заключающиеся в активизации образования демаркационной линии очага воспаления и более быстром развитии грануляционной соединительной ткани по сравнению с контролем и подтверждающиеся уменьшением количества нейтрофилов в 1,5 раза и увеличением в 2 раза макрофагов и фибробластов.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Костров, C.B. Изучение антимикробной активности многокомпонентных гелей, содержащих новые биокомплексы металлов с производными нитро-фурана / Л.П. Лазурина, И.В. Самохвалова, A.A. Краснов, Д.А. Хапчаева, C.B. Костров, Е.В. Букреева, A.B. Заикин // «Современные наукоемкие технологи. - М, 2006, № 5. - С. 66-67.

2. Костров, C.B. Изучение ранозаживляющего и иммуномодулирующего действия некоторых новых биокомплексов металлов / И.В. Самохвалова, Д.А. Хапчаева, C.B. Костров, Е.М. Букреева, A.B. Заикин, Л.П. Лазурина, A.A. Краснов // «Современные проблемы науки и образования». - М., 2006, № 5. - С. 97-98.

3. Костров, C.B. Разработка и исследование полимерных пленочных материалов с некоторыми производными 5-нитрофурана / Л.П. Лазурина, И.В. Самохвалова, Д.А. Хапчаева, A.A. Краснов, C.B. Костров, Е.И. Лизун // «Фундаментальные и прикладные исследования». - М., 2006, № 11. - С. 52.

4. Костров, C.B. К вопросу получения материалов медицинского назначения / О.И. Басарева, Л.П. Лазурина, C.B. Костров, Д.А. Хапчаева // Университетская наука: Взгляд в будущее. Сборник трудов 72-й научной конференции КГМУ и сессии Центрально-Черноземного научного центра РАМН. В 3 т. -Курск: КГМУ, 2007.-T. II!.- С. 153-154.

5. Костров, C.B. Синтез и биологическая активность новых комплексных соединений металлов // Университетская наука: Взгляд в будущее. Сборник трудов 72-й научной конференции КГМУ и сессии Центрально-Черноземного научного центра РАМН. В 3 томах. - Курск: КГМУ, 2007. - Т. III. - С. 160-161.

6. Костров, C.B. Изучение возможности разработки пролонгированной лекарственной формы, содержащей новые комплексные соединения антимикробного действия / Е.М. Букреева, A.B. Заикин, C.B. Костров, A.A. Колоколов, О.Н. Карпова, Д.А. Хапчаева // Молодежная наука и современность. 72-я итоговая межвузовская конференция студентов и молодых ученых. В 2 ч. Часть II. -Курск: КГМУ, 2007. - С. 102.

7. Костров, C.B. Антимикробная и иммунологическая активность комплексных соединений металлов с производными азолов / О.Н. Карпова, Е.М. Букреева, A.B. Заикин, C.B. Костров, A.C. Колоколов, Т.Ю. Рыкова// Молодежная наука и современность. 72-я итоговая межвузовская конференция студентов и молодых ученых. В 2 ч. Часть II. - Курск: КГМУ, 2007. -С. 117-118.

8. Костров, C.B. Апробация компьютерной системы PASS на примере прогноза фармакологической активности веществ / A.A. Краснов, C.B. Костров, A.B. Заикин, О.С. Лосицкая, М.Т. Шехине, Д.А. Хапчаева // Молодежная наука и современность. 72-я итоговая межвузовская конференция студентов и молодых ученых. В 2 ч. Часть II. - Курск: КГМУ, 2007. - С. 131-132.

9. Костров, C.B. Экспериментальные исследования процесса переноса жидких сред при вибрационных воздействиях / М.Т. Шехине, Д.А. Хапчаева, A.A. Колоколов, Е.М. Букреева, Е.С. Калиберда// Молодежная наука и совре-

менность. 72-я итоговая межвузовская конференция студентов и молодых ученых. В 2 ч. Часть II. - Курск: КГМУ, 2007. - С. 164.

10. Костров, C.B. К вопросу повышения биологической активности лекарственных средств, используемых для лечения инфицированных ран / О.Н. Карпова, A.A. Колоколов, C.B. Костров, A.B. Заикин, Л.П. Лазурина, Д.А. Хапчаева // «Современные наукоемкие технологии». - М., 2007, № 7. - С. 90-91.

11. Костров, C.B. Реактивные изменения клетки под влиянием биокомплекса цинка / Л.Н. Моралев, Л.П. Лазурина, Е.М. Букреева, A.B. Заикин, C.B. Костров, О.С. Лосицкая // « Успехи современного естествознания». - М. - 2007, № 7. - С. 54-55.

12. Костров, C.B. Изучение биологической активности комплексных соединений металлов с некоторыми антимикробными средствами / О.И. Басарева, A.B. Заикин, Д.А. Хапчаева, C.B. Костров, Е.М. Букреева, П.В. Калуцкий, Л.П. Лазурина // Курский научно-практический вестник «Человек и его здоровье», 2007, № 4. - С. 5-11.

13. Костров, C.B. Роль координационых соединений металлов в повышении биологической активности лекарственных средств / Л.П. Лазурина, О.В. Лосицкая, Д.А. Хапчаева, C.B. Костров, А.П. Чудиновский, М.Т. Шехине // Сб. материалов пятого съезда общества биотехнологов России им. Ю.А. Овчинникова. -М„ 2008. - С. 232-234

14. Костров, C.B. Изучение биологической активности комплексных соединений цинка с некоторыми антимикробными средствами / A.A. Краснов, Л.П. Лазурина, Е.М. Букреева, C.B. Костров, A.C. Самофалов // Сборник трудов Всероссийской научно-практической конференции «Биомедицинская инженерия и биотехнология», посвященной 10-летию биотехнологического факультета Курского государственного медицинского университета. - Курск: ГОУ ВПО КГМУ Росздрава, 2008. - С. 163-165.

15. Костров, C.B. Преимущества полимерных матриц на основе коллагена при лечении ран / О.С. Лосицкая, Д.А. Старкова, Д.А. Хапчаева, C.B. Костров, А.П. Чудиновский // Сборник трудов Всероссийской научно-практической конференции «Биомедицинская инженерия и биотехнология», посвященной 10-летию биотехнологического факультета Курского государственного медицинского университета. - Курск: ГОУ ВПО КГМУ Росздрава, 2008. - С. 169-171.

16. Костров, C.B. Метод обнаружения биокомплесов метронидазола и ди-оксидина с ионами металлов / М.В. Рымарова, Л.П. Лазурина, C.B. Костров, A.B. Заикин, Е.В. Толстая // Сборник трудов Всероссийской научно-практической конференции «Биомедицинская инженерия и биотехнология», посвященной 10-летию биотехнологического факультета Курского государственного медицинского университета. - Курск: ГОУ ВПО КГМУ Росздрава, 2008. -С. 192-194.

17. Костров, C.B. Разработка технологии быстрорастворимых таблеток с витаминами группы В / Г.Н. Шубина, C.B. Костров, Я.В. Зимина, Ю.С. При-луцкая // Сборник трудов Всероссийской научно-практической конференции «Биотехнология. Биомедицинская инженерия и технология современных социальных практик». - Курск: ГОУ ВПО КГМУ Росздрава, 2009. - С. 178-180.

18. Костров, C.B. Изучение биологической активности некоторых комплексных соединений металлов / C.B. Костров, Л.П. Лазурина, П.В. Калуцкий, О.И. Басарева, Д.А. Хапчаева, Е.М. Букреева, О.С. Лосиц-кая II Научно-практический журнал «Врач-аспирант», 2010, № 3.1(40). -С. 129-137.

19. Костров, C.B. Сравнительный анализ антимикробной активности новых биологически активных соединений и лекарственных форм на их основе / C.B. Костров, О.И. Басарева, Е.М. Букреева, Д.А. Хапчаева, О.С. Лосицкая, Я.В. Зимина // Современные проблемы науки и образования. - 2011. - № 5. URL: www.science-education.ru/99-4815.

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

РАс! - производное адамантана

РАс1Со - биокомплекс кобальта с производным адамантана РМп - производное 5-нитроимидазола

РМпСо - биокомплекс кобальта с производным 5-нитроимидазола РРс1 - производное 5-нитрофурана

РРсЮо - биокомплекс кобальта с производным 5-нитрофурана РАт - производное 6-пенициллановой кислоты РАтСо - биокомплекс кобальта с производным 6-пенициллановой кислоты

НСТ - нитросиний тетразолий

МПК - минимальная подавляющая концентрация

АОК - антителообразующие клетки

ДНК - дезоксирибонуклеиновая кислота

РНК - рибонуклеиновая кислота

МЦ - метилцеллюлоза

Ыа-КМЦ - натриевая соль корбоксиметилцеллюлозы ГМПЦ - гидроксипропилметилцеллюлоза

СТАТИСТИЧЕСКИЕ ПОКАЗАТЕЛИ

р - уровень статистической значимости, р<0,05

Лицензия ЛР № 020862 от 30.04.99 г. Сдано в набор 09.02.2012 г. Подписано в печать 10.02.2012 г. Формат 30х42'/8, Бумага офсетная. Гарнитура Times New Rom. Печать офсетная. Усл. печ. л. 1,0. Тираж 100 экз. Заказ № 190"А". Издательство Курского государственного медицинского университета 305041, г. Курск, ул. К. Маркса, 3.