Автореферат диссертации по медицине на тему Оценка динамики концентрации этанола в трупной крови при хранении ее в условиях пониженной температуры.
005051950
На правах рукописи
ЛЕСНИКОВ ВЛАДИСЛАВ ВЛАДИМИРОВИЧ
ОЦЕНКА ДИНАМИКИ КОНЦЕНТРАЦИИ ЭТАНОЛА В ТРУПНОЙ КРОВИ ПРИ ХРАНЕНИИ ЕЕ В УСЛОВИЯХ ПОНИЖЕННОЙ ТЕМПЕРАТУРЫ
14.03.05 «Судебная медицина»
Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук
1В АПР 2013
Москва 2013
005051950
Работа выполнена в Государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Ижевская государственная медицинская академия» Министерства здравоохранения Российской Федерации.
Научный руководитель: Владислав Иванович Витер,
доктор медицинских наук, профессор.
Официальные оппоненты: Евгений Михайлович Кильдюшов,
доктор медицинских наук, профессор, начальник Государственного бюджетного учреждения здравоохранения города Москвы «Бюро судебно-медицинской экспертизы Департамента здравоохранения города Москвы»
Дмитрий Вадимович Сундуков доктор медицинских наук, доцент, заведующий кафедрой судебной медицины Федерального государственного бюджетного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Российский университет дружбы народов» Министерства образования и науки Российской Федерации
Ведущая организация Государственное бюджетное образовательное
учреждение высшего профессионального образования «Московский государственный медико-стоматологический университет им. А.И. Евдокимова» Министерства здравоохранения Российской Федерации.
Защита состоится « _» (^¿/¿у^-/ 2013 года в "ff' ^^ часов на заседании диссертационного совета Д 208.070.01 при Федеральном государственном бюджетном учреждении «Российский центр судебно-медицинской экспертизы» Министерства здравоохранения Российской Федерации по адресу: 125284, г. Москва, ул. Поликарпова, д. 12/13.
С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке Федерального государственного бюджетного учреждения «Российский центр судебно-медицинской экспертизы» Министерства здравоохранения Российской Федерации по адресу 125284, г. Москва, ул. Поликарпова, д. 12/13.
Автореферат разослан «
» ^'//uV^iY 2013 г.
Ученый секретарь диссертационного совета,
кандидат медицинских наук, доцент O.A. Панфиленко
Введение:
Проведение судебно-медицинской экспертизы трупа, как правило, сопряжено с необходимостью постмортальной диагностики алкогольной интоксикации. Установление факта приема этанолсодержащих жидкостей перед наступлением смерти имеет важное значение, как для правоохранительных органов, осуществляющих расследование обстоятельств гибели граждан, так и для страховых компаний при принятии решения о выплатах в случаях смерти застрахованных лиц. Кроме этого, определение точного уровня этилового спирта в крови умерших позволяет оценить роль этанолэмии в танатогенезе при наступлении смерти от различных заболеваний.
Диагностика факта употребления этилового спирта и определение его концентрации в крови на момент наступления смерти не вызывает трудностей при проведении судебно-химического исследования крови непосредственно после ее забора в ходе секции трупа, либо в ближайшие сроки после взятия биологических объектов.
Вместе с тем, в практической деятельности многих районных судебно-медицинских отделений, по причине территориальной разобщенности, проведение судебно-химического исследования трупной крови на содержание в ней этилового алкоголя в день секционного исследования мертвого тела невозможно (Коротун В.Н., Наумова H.A., Сивогривова Н.В., 2007; Коротун В.Н., Наумова H.A., 2010).
В подобных ситуациях изучение трупной крови на наличие в ней алкоголя может проводиться спустя две, три, и более недель после смерти человека. Между тем, вопросы сохраняемости алкоголя в изолированном трупном материале при хранении его в различных температурных условиях изучены явно недостаточно (Гурочкин Ю.Д., 1986; Галицкий Ф.А., 1997). Естественно, это создает предпосылки к тому, что судебно-медицинский эксперт, оценивая результаты отсроченного судебно-химического исследования, не всегда уверен в его объективности, а следствие, формируя свое мнение о причинах и обстоятельствах происшествия, может исходить из недостаточно обоснованных экспертных данных.
Вышеизложенное определило содержание представленной работы и позволило сформулировать цель и задачи исследования.
Цель исследования:
Повышение точности установления факта употребления и концентрации этилового алкоголя в трупной крови, при ее отсроченных судеб-но-химических исследованиях, в случаях хранения объекта исследования в различных условиях его температурной консервации.
Задачи исследования:
1. На экспериментальном материале изучить возможность и закономерность новообразования этанола в образцах крови, предназначенных для судебно-химического исследования, при хранении их в условиях общей камеры холодильника и при замораживании.
2. Исследовать динамику изменения величины этанолэмии в образцах крови, изначально содержащих этиловый алкоголь, при хранении их в различных температурных условиях.
3. Проанализировать возможность влияния на модуль величины изменения концентрации этанола в образце ряда факторов (пол, возраст, причина смерти), с установлением их значимости.
4. Разработать и обосновать методику изъятия крови, обеспечивающую сохранность показателей этанолэмии объекта в случаях его отсроченного судебно-химического исследования.
5. На основе полученных данных создать рекомендации по практическому использованию разработанной методики изъятия образцов на судебно-химическое исследование в случаях, предусматривающих их длительное хранение.
Научная новизна:
На практическом экспертном материале и в ходе экспериментальных наблюдений математически описана динамика новообразования этанола в образцах крови, изначально не содержащих этанола, предназначенных для их отсроченного судебно-химического исследования.
Установлены особенности изменения концентрации этанола в объектах крови, изначально содержащих некоторое количество этилового спирта, при их хранении, как в условиях общей камеры холодильника, так и при замораживании.
Изучены влияния на модуль величины изменения концентрации этанола в объекте комплекса факторов, обусловливающих индивидуаль-
ность субъекта, от которого взята кровь для ее исследования (пол, возраст, причина смерти, давность ее наступления).
Обоснована методика изъятия и длительного хранения крови, обеспечивающая сохранность показателей этанолэмии при ее отсроченном судебно-химическом исследовании.
Практическая значимость:
Разработана методика изъятия крови на судебно-химическое исследование, и длительного хранения ее образцов, обеспечивающая сохранность показателей этанолэмии в объекте, в случаях отсроченных судебно-химических исследований.
Основные ноложения, выносимые на защиту:
1. Установлено, что при изъятии жидкой крови, изначально не содержащей этилового спирта, при хранении образца в нестерильной таре в условиях общей камеры холодильника происходит новообразование этанола, достигающее значений, которые могут послужить основанием для ошибочного вывода о факте употребления умершим этилового спирта перед наступлением его смерти. При заморозке объекта изначально не содержащего этанол, на сроках хранения до одного месяца, образования этилового спирта в нем не отмечено.
2. В образцах, изначально содержащих этиловый спирт, взятых в нестерильную емкость, при их хранении происходят стохастические процессы, выражающиеся в существенных изменениях величины этанолэмии (до ±0,6-0,8%о), не поддающиеся описанию каким либо математическим законом, что не позволяет рекомендовать традиционное изъятие крови в качестве метода, применимого в случаях отсроченных судебно-химических исследований.
3. Модуль изменения концентрации этанола в образце является величиной, не зависящей от факторов обусловливающих индивидуальность субъекта, от которого взята кровь (пол, возраст, причина смерти, давность ее наступления), что позволяет не учитывать их в ходе создания методики, применимой для изъятия и длительного сохранения образца жидкой крови.
4. В образцах крови, находящихся на длительном хранении в вакуумных стерильных пробирках Ьпргоуастйег® производства фирмы
«Guangzhou Improve Medical Instruments Co. Ltd» , содержащих в качестве стабилизатора глюкозы флюорид натрия, изменения величины этано-лэмии не превышают границ статистической погрешности метода (до ±0,2-0,3%о), что повышает точность диагностики алкогольной интоксикации при отсроченных судебно-химических исследованиях.
Апробация диссертации:
Результаты исследования докладывались на заседаниях кафедры судебной медицины ГБОУ ВПО «Ижевская государственная медицинская академия» (Ижевск, 2011), обсуждались на заседаниях методического совета ГКУЗОТ «Пермское краевое бюро судебно-медицинской экспертизы» (Пермь, 2011), сессиях Приволжско-Уральской ассоциации судебно-медицинских экспертов(2010-2012).
Личное участие автора
Весь материал, представленный в работе, получен, проанализирован и обработан лично автором.
Реализация результатов исследования:
Результаты исследования внедрены в учебный процесс кафедры судебной медицины ГБОУ ВПО «Ижевская государственная медицинская академия» Минздравсоцразвития, в практическую деятельность БУЗ УР «Бюро судебно-медицинской экспертизы МЗ Удмуртской Республики», ГКУЗОТ «Пермское краевое бюро судебно-медицинской экспертизы» о чем имеются акты внедрения.
Публикации:
По теме диссертации опубликовано 8 научных работ, из них 3 в журналах, включенных в Перечень ведущих рецензируемых научных журналов ВАК Минобрнауки РФ и в 2 зарубежных сборниках.
Структура и объем диссертации:
Диссертация изложена на 124 листах. Состоит из введения, обзора литературы, главы о материале и методах исследования, 2-х глав собственных исследований, заключения, выводов, практических рекомендаций, списка использованной литературы, включающего 188 источников, в том числе 34 зарубежных. Диссертация содержит 39 рисунков и 48 таблиц. Приложение оформлено в виде сводных таблиц.
СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ
Материал, методы и этапы исследования:
Работа выполнена на практическом судебно-медицинском материале Государственного казенного учреждения здравоохранения особого типа «Пермское краевое бюро судебно-медицинской экспертизы» (ГКУЗОТ «ПКБСМЭ») в период с 2008 по 2012 гг.
В процессе работы изучены свыше 500 объектов жидкой крови от 205 трупов лиц обоего пола в возрасте от 23 до 88 лет.
Кровь изучена как объект, методика исследования которого для целей диагностики алкогольной интоксикации, хорошо разработана, легко применима на практике любого судебно-медицинского учреждения и предусмотрена действующим законодательством (Приказ № 346н);
Забор крови производился в ходе секционного исследования трупа следующими способами:
В нестерильную тару:
- после вскрытия черепной коробки угловым или кольцевым распилом (без повреждения твердой мозговой оболочки) и удаления костей свода черепа производился прокол сагиттального синуса одноразовым медицинским шприцем объемом 20 мл. В шприц набиралась кровь в количестве 10-20 мл и переливалась в чистый стеклянный флакон емкостью 12 мл до его заполнения, герметично укупориваемый резиновой пробкой. От одного трупа набиралось 9 флаконов с кровью.
В стерильную тару:
- после вскрытия черепной коробки угловым или кольцевым распилом (без повреждения твердой мозговой оболочки) и удаления костей свода черепа производился прокол сагиттального синуса одноразовым медицинским шприцем объемом 20 мл. В шприц набиралась кровь в количестве 10-20 мл. Изъятая кровь вводилась в вакуумную стерильную пробирку Ітргоуасійег® проколом резинового уплотнителя до ее заполнения. От одного трупа набиралось 8 пробирок с кровью.
Нестерильный стеклянный флакон, не имел каких-либо консервирующих веществ. В вакуумной стерильной пробирке Ітргоуасігіег® на-
ходился флюорид натрия (фторид натрия - NaF), являющийся стабилизатором глюкозы крови (пробирка серого цвета).
Один объект жидкой крови (стеклянный нестерильный флакон) исследовался на содержание в нем алкоголя непосредственно сразу после изъятия крови от трупа. Прочие помещались на хранение в условия комнатной температуры (4 вакуумные стерильные пробирки, температура хранения +18-20 °С), в общую камеру холодильника (4 нестерильных стеклянных флакона и 4 вакуумные стерильные пробирки, температура хранения +5 °С) и в морозильную камеру холодильника (4 нестерильных стеклянных флакона, температура хранения -18 °С).
Объекты крови исследовались на содержание в них этанола через одну, две, три и четыре недели хранения из каждых температурных условий. Каждый объект крови исследовался однократно. Разморозка объекта с последующим повторным его замораживанием не производились!
Изучение крови на содержание в ней этилового алкоголя осуществлялось газохроматографическим методом по методикам, традиционно применяемым в судебно-химических отделениях бюро судебно-медицинской экспертизы.
Формирование базы данных (БД), процесс их статистической обработки и оформление полученных результатов осуществлялось с помощью программы обработки электронных таблиц «Microsoft Excel», пакета статистического анализа «SPSS for Windows» и текстового редактора «Microsoft Word». Анализ полученных результатов осуществлялся методами стандартной количественной статистики (Гланц С., 1999).
РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
Как показали исследования образцов крови, изначально не содержащих этилового алкоголя, уже через 1 неделю после их хранения в нестерильной таре в условиях общей камеры холодильника, в них обнаруживается незначительное количество (0,01 %о) алкоголя.
В последующем его концентрация нарастает и к 4-ой неделе достигает величины в 0,09 %о (рис. 1).
а. ю о
0,10 0,08 0,06 0,04 0,02 0,00
0,09±0,015 А
0,03±0,010
0,00±0,00
0,01±0,004
Рис.
0 т
0 нед 1 нед 2 нед 3 нед 4 нед Длительность хранения, нед.
1. Величина этанола в образце, при хранении его в условиях общей камеры холодильника
Для подтверждения установленных различий проведено парное межгрупповое сравнение величин концентраций этанола в объектах различного срока хранения. В качестве инструмента сравнения выбран критерий Ньюмена-Кейлса. Проведение сравнительного анализа подтвердило достоверность образования этанола в образце.
Наиболее точно описывающим выявленные изменения явился линейный тренд (достоверность аппроксимации более 99 %), позволяющий использовать его в качестве основы определения исходного состояния объекта путем обратной экстраполяции результатов судебно-хими-ческого исследования (рис. 2).
ц
ф
со
1 нед
2 нед
3 нед
4 нед
Длительность хранения, нед.
Рис. 2. Границы доверительного интервала величины этанола в образце при хранении его в условиях общей камеры холодильника
После определения границ доверительного интервала для Р > 95, в которых может находиться величина алкоголя в образце (рис. 2), при хранении его в условиях общей камеры холодильника, было получено следующее неравенство:
0,023хДЮ-0,02<Сх <0,031хДТО + 0,02 (1)
где Сх - концентрация этанола в образце, %0;
ДХО - длительность хранения образца, недель.
Хранение же объектов крови, изначально не содержащих этилового алкоголя, в условиях морозильной камеры холодильника (заморозка), не сопровождалось образованием этанола. Соответственно, подобные условия хранения образцов крови следует считать перспективными в плане «консервации» объекта, сохранения его первоначального статуса.
Таким образом, на первом этапе исследования представляется возможным ряд выводов:
- замораживание образца крови, изначально не содержащей алкоголя, позволяет длительно сохранять его исходное состояние;
- «традиционное» хранение образца крови в общей камере холодильника приводит к образованию алкоголя со скоростью, прямо пропорциональной времени хранения образца. При этом концентрация алкоголя в образце увеличивается по линейному закону, математически выражаемому неравенством (1).
Второй этап работы был посвящен случаям исходного наличия некоторой концентрации этанола в крови умершего лица. Основным затруднением явилось значительное колебание исходного уровня этанола в крови исследованных субъектов и, как следствие, значительная неоднородность исследовательских групп. Это привело к выводу о невозможности работы непосредственно с абсолютными значениями этанолэмии. Тем не менее, в некоторых случаях (группа исходной величины этанола в крови 2,01-2,50 %о) обнаружены достоверные изменения содержания этанола в объектах.
Следовательно, несмотря на единичность случая, не исключена возможность изменения исходного уровня этанола в объекте крови, вызванного длительным его хранением и заморозкой.
Установлено, что в ходе длительного хранения образца жидкой крови, уровень алкоголя в нем, относительно первоначальной концентрации,
изменяется в достаточно широких пределах, как в сторону увеличения, так и в сторону уменьшения.
Причем данное утверждение справедливо как для хранения образца в общей камере холодильника (рис. 3), так и для его заморозки (рис. 4).
о нед. 1 нед. 2 нед. 3 нед. 4 нед.
Длительность хранения, нед.
Рис. 3. Динамика изменения величины этанола в объектах при их хранении в условиях общей камеры холодильника
-0,80----——------------------
о нед. 1 нед. 2 нед. 3 нед. 4 нед.
Длительность хранения, нед.
Рис. 4. Динамика изменения величины этанола в объектах при их хранении в условиях морозильной камеры холодильника
Таким образом, эффект «консервирующего» действия холода на уровень этанола в объекте жидкой крови, изъятой традиционно использующимся в судебной медицине способом, выражен недостаточно и реко-
мендации по замораживанию крови не могут быть приняты в качестве основы объективного суждения об уровне алкоголя в крови субъекта при ее отсроченном судебно-химическом исследовании.
Это позволило предположить, что перспективным может явиться изучение особенностей изменения концентрации алкоголя в объектах, подвергающихся хранению, установление факторов, влияющих на этот процесс, математическое описание степени этих влияний с целью создания способов их учета и расчета исходного уровня этанола в объекте, в зависимости от срока и условий его хранения.
Изучая влияние фактора половой принадлежности субъекта на величину значения модуля изменений концентрации этанола в образцах длительного хранения, было установлено, что различий между «мужской» и «женской» группами не существует.
Этот вывод справедлив как в отношении хранения объектов в общей камере холодильника, так и для их заморозки.
Аналогичные результаты были получены в ходе исследования влияния возраста умершего лица, оцениваемого с помощью критерия Пирсона, устанавливающего линейную зависимость между двумя радами динамически изменяющихся численных характеристик.
Давность смерти субъекта, труп которого находится в производстве судебно-медицинской экспертизы, является одним из важнейших факторов, обусловливающих состояние его биологических структур и сохранность веществ, находящихся в организме человека на момент его смерти.
Тем не менее, в наших исследованиях не было установлено влияния давности смерти человека, на значение изменений концентрации этанола в его крови.
Справедливость данного утверждения подтверждена статистически путем множественных парных сравнений анализируемых групп между собой по критерию Ньюмена-Кейлса.
Ряд причин смерти, выделенных нами к изучению (странгуляцион-ная асфиксия, утопление, обильная кровопотеря, отравления алкоголем, заболевания сердечно-сосудистой системы, несовместимая с жизнью механическая травма), так же не оказывал существенного влияния на динамику изменения концентрации этанола в объектах длительного хранения. Это позволило утверждать, что изменения содержания этанола в образцах жидкой крови, находящихся на хранении, как в условиях общей ка-
меры холодильника, так и подвергнутые заморозке, не зависят от причины смерти человека..
Таким образом, в ходе последовательных исследований, мы пришли к общему заключению, что традиционное изъятие крови от трупа не способно длительно сохранять ее в исходном состоянии, даже путем применения низкотемпературных условий хранения объектов. В основе всех выявляемых нами изменений лежит попадание микроорганизмов в кровь и деятельность их в последующем (Томилин В.В. и соавт., 1985; Гуроч-кин Ю.Д., 1986; Kasaka Y., 1970; Nanikawa R., Moiya F., Hashimoto Y., 1988). Традиционное изъятие крови всегда сопровождается попаданием микроорганизмов в кровь, т.к. не предусматривает соблюдения правил асептики. Для судебно-химических исследований, следующих по времени непосредственно за вскрытием мертвого тела, это не критично, но, как показали наши изучения, имеет существенное значение при отсроченном проведении экспертизы.
В связи с этим, последним этапом нашей работы явилось изучение динамики этанола в стерильной медицинской таре, кровь в которую помещалась после изъятия из трупа с соблюдением правил асептики.
Стерильные пробирки с изъятой в них кровью длительно хранились при комнатной температуре и в условиях общей камеры холодильника. В ходе применения этих пробирок мы стремились создать комплекс условий, который, по нашему мнению, мог бы обеспечить сохраняемость этанола в образце крови:
- минимизация бактериального «обсеменения» образца;
- стабилизация глюкозы крови флюоридом натрия;
- консервация температурой.
Установлено, что и в стерильных пробирках, находящихся на длительном хранении в условиях комнатной температуры среды, происходит постепенное нарастание уровня этилового алкоголя (рис. 5).
Обусловлено это, конечно же, тем, что достичь абсолютной стерильности нам не удалось, и единичные микроорганизмы все же попадали в образец жидкой крови.
Тем не менее, следует отметить, что даже через 4 недели хранения образца концентрация этанола в нем не превышала 0,12 %о (и это без консервирующего действия низкой температуры!).
0,12 0,10-'
ф г
I 0,08
ю о ш я с
0
1
ге
й
0,06 0,04 0,02
ц
Ш 0,00
1 нед
2 нед
0,12±0,|
.....0,08±0,01
0,02±0,01 Я Я
» I
3 нед
4 нед
Рис. 5. Величина этанола в образце, при хранении его в условиях комнатной температуры
Если же кровь первоначально содержала некоторое количество алкоголя (рис. 6), концентрация его несколько меняется, но эти изменения укладываются в границы статистической погрешности метода (±0,30 %о).
0,30
о. 0,10
0,00
-0,10
-0,30
0 нед.
1 нед.
2 нед.
3 нед.
4 нед.
Рис. 6. Значения изменений величины этанола в образце крови (хранение образца при комнатной температуре)
Таким образом, использование стерильных вакуумных пробирок в случаях отсроченных судебно-химических исследований является предпочтительным, т.к. при хранении крови в них, даже при комнатной температуре хранения образца, изменения величины этилового алкоголя не выходят за пределы статистической погрешности измерений.
Если же кровь, изъятая с применением правил асептики, хранилась в стерильной таре в условиях пониженной (общая камера холодильника) температуры среды, в ней наблюдались меньшие изменения первоначального уровня этанола (рис. 7). Отклонения концентрации этанола в объекте длительного хранения в общей камере холодильника находятся в пределах ±0,20 %о. Это позволяет утверждать о достижении полной консервации объекта, т.к. установленные колебания, по нашему мнению, вполне могли быть обусловлены точностью использованной нами методики газожидкостного хроматографического исследования.
Рис. 7. Значения изменений величины этанола в образце крови (хранение образца в общей камере холодильника)
Полученные в ходе исследований результаты позволили придти к ряду выводов и сформировать практические рекомендации, в виде алгоритма последовательных действий, регламентирующих процедуру изъятия и хранения трупной крови в случаях, когда планируется ее отсроченное судебно-химическое исследование на наличие и концентрацию этилового алкоголя.
выводы
1. В объектах жидкой крови, изначально не содержащих этилового спирта, изъятых без соблюдения правил асептики и подвергнутых длительному хранению в нестерильной таре в условиях общей камеры холодильника, происходит новообразование этанола, к концу 4-ой недели достигающее величины 0,09±0,015 %о. При этом динамика нарастания величины этанола в образце наиболее точно описывается математически выражением:
Сх =0,027х ДХО-0,021
где Сх — концентрация этанола в образце, %о;
ДХО - длительность хранения образца, недель с достоверностью Р > 95, находясь в границах, устанавливаемых неравенством:
0,023 х ДХО - 0,02 < Сх <0,031х ДГО + 0,02
где Сх — концентрация этанола в образце, %о;
ДХО - длительность хранения образца, недель.
В тех же случаях когда объект исследования подвергался заморозке, на сроках хранения до одного месяца появления этанола в нем не отмечено.
2. В образцах крови, изначально содержащих этиловый спирт, хранящихся в нестерильной таре, как в условиях общей камеры холодильника, так и при заморозке, происходят изменения величины этанолэмии, по своему характеру являющиеся стохастическими. В связи с этим традиционное изъятие образца крови в нестерильную тару не рекомендуется в случаях, предполагающих его длительное хранение, из-за возможности появления ошибки определения величины этанолэмии (до ±0,6-0,8 %о) и, как следствие, ошибочного определения факта наличия и концентрации алкоголя в крови субъекта на момент его смерти.
3. Величина изменения концентрации этанола в образце длительного хранения не зависит от комплекса учитываемых факторов (пол, возраст, причина смерти, давность ее наступления), обусловливающих индивидуальность субъекта, от которого взята кровь, что позволяет в ходе созда-
ния методики, применимой для изъятия и длительного сохранения образца жидкой крови, не учитывать их.
4. Соблюдение правил асептики при заборе крови от трупа, использование низкотемпературной ее консервации в вакуумных стерильных пробирках Improvacuter®, применение стабилизатора уровня глюкозы крови (флюорид натрия) позволяет сохранить исходный уровень этанола в объекте (колебания этанола в объекте ±0,2%о при его хранении до 4-х недель), что повышает точность определения факта употребления умершим человеком алкоголя перед смертью и установление степени этано-лэмии при отсроченных судебно-медицинских исследованиях.
ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ
При проведении судебно-медицинской экспертизы трупа и исследования на наличие и концентрацию этилового алкоголя в случаях, когда планируется длительное хранение образца жидкой крови и его отсроченное судебно-химическое исследование, рекомендуется использование вакуумных стерильных пробирок Improvacuter® производства фирмы «Guangzhou Improve Medical Instruments Co., Ltd» или аналогичных другого производителя.
Общие алгоритм действий судебно-медицинского эксперта может быть представлен следующим образом:
1. Изъятие жидкой крови от трупа производится следующим способом:
- после вскрытия черепной коробки угловым или кольцевым распилом (без повреждения твердой мозговой оболочки) и удаления костей свода черепа производится прокол сагиттального синуса одноразовым медицинским шприцем объемом 20 мл. В шприц набирается кровь в количестве 10-20 мл.
Изъятая кровь из шприца вводится в вакуумную стерильную пробирку Improvacuter® до ее заполнения.
2. Вакуумная стерильная пробирка с находящейся в ней кровью в случаях необходимости ее длительного хранения и отсроченного исследования помещается на хранение в общую камеру холодильника.
3. Перед проведением судебно-химического исследования вакуумная стерильная пробирка с содержащейся в ней кровью извлекается из общей камеры холодильника и интенсивно встряхивается не менее 10-и раз для предотвращения расслаивания содержимого на фракции.
4. Судебно-химическое исследование объекта жидкой крови на наличие и концентрацию в ней этилового алкоголя осуществляется по традиционным методикам.
5. При обнаружении этанола в объекте крови длительного хранения заключение о факте употребления умершим лицом алкоголя перед смертью может иметь категорический характер. Указание на величину содержания этанола в крови человека на момент его смерти производится с погрешностью ±0,2 %о.
СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ
1. Коротун В.Н., Наумова H.A., Лесников В.В. Ретроспективная оценка уровня эндогенного этанола в трупном материале при отсроченном его исследовании // Материалы Межрегиональной научно-практической конференции с международным участием «Актуальные вопросы судебно-медицинской теории и практики». Киров, 2010. - С. 138-139.
2. Коротун В.Н., Лесников В.В. Целесообразность разработки критериев постмортальной оценки алкогольной интоксикации при отсроченном исследовании объектов // Современные вопросы судебно-медицинской науки и практики. - Екатеринбург, 2010. - С. 103-106.
3. Коротун В.Н., Лесников В.В. Актуальность разработки критериев постмортальной оценки алкогольной интоксикации при отсроченном исследовании объектов // Медицинская экспертиза и право. - 2010. - № 6. -С. 22-23.
4. Витер В.И., Коротун В.Н., Лесников В.В., Наумова H.A., Поздеев А.Р. Оценка концентрации этанола в тканях и биологических жидкостях трупов при отсроченном судебно-химическом исследовании // Судебная экспертиза. - Воронеж, 2012. - № 1. - С. 34-38.
5. Лесников В.В., Витер В.И., Коротун В.Н. Оптимизация методики забора и хранения трупной крови для выявления в ней этанола // Медицинская экспертиза и право. - М., 2012. - № 6 - С. 42-44.
6. Лесников В.В., Витер В.И., Коротун В.Н., Вавилов А.Ю. Методика температурной консервации алкоголя в трупной крови для ее отсроченного судебно-химического исследования // Проблемы экспертизы в медицине. - Ижевск, 2012. - № 3-4 (47-48). - С. 17-19.
7. Korotun V.N., Lesnikov V.V. Postmortem changes in the concentration of ethanol in the blood under different conditions and shelf life. // "Science, Technology and Higher Education": materials of the international research and practice conference. Vol. 1. Westwood, llth-12th December, 2012 / publishing office Accent Graphics communication. - Westwood, Canada. - 2012. -P. 555-559.
8. Korotun V.N., Lesnikov V.V. Effect of storage conditions and terms of blood samples for the synthesis of ethanol in them. // "European Applied Sciences: modern approaches in scientific researches": papers of the 1st International Scientific Conference. December 17-19, 2012, ORT Publishing, Stuttgart, Germany. 2012. - P. 97-100.
Лесников Владислав Владимирович Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук
Подписано в печать 14.03.13 г. Формат 60x84/16 Гарнитура Times New Roman. Тираж 100 экз. Зак. 857
Отпечатано в РИО ГБОУ ВПО ИГМА 426034, г. Ижевск, ул. Коммунаров, 281
Текст научной работы по медицине, диссертация 2013 года, Лесников, Владислав Владимирович
МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ
ГБОУ ВПО «ИЖЕВСКАЯ ГОСУДАРСТВЕННАЯ МЕДИЦИНСКАЯ АКАДЕМИЯ»
На правах рукописи
ЛЕСНИКОВ ВЛАДИСЛАВ ВЛАДИМИРОВИЧ
ОЦЕНКА ДИНАМИКИ КОНЦЕНТРАЦИИ ЭТАНОЛА В ТРУПНОЙ КРОВИ ПРИ ХРАНЕНИИ ЕЕ В УСЛОВИЯХ ПОНИЖЕННОЙ ТЕМПЕРАТУРЫ
14.03.05 - «Судебная медицина»
Диссертация на соискание ученой степени кандидата медицинских наук
Научный руководитель: Доктор медицинских наук,
профессор В.И. Витер
Ижевск 2013
ОГЛАВЛЕНИЕ
Стр.
Введение..................................................................... 4
Глава 1. Исторические аспекты развития научных исследований алкогольной интоксикации
(Обзор литературы)........................................................ 9
Глава 2. Материал и методы исследования.......................... 24
2.1 Характеристика изученного материала и этапы его исследования.................................................................. 24
2.2 Методы обработки результатов исследования
материала...................................................................... 28
2.2.1 Описательные статистики.............................................. 28
2.2.2 Проверка формы распределения выборки....................... 29
2.2.3 Сравнительный межгрупповой анализ.......................... 31
2.2.4 Корреляционно-регрессионный анализ.......................... 31
Результаты собственных исследований
Глава 3. Динамика концентрации этанола в объектах крови при их хранении в нестерильной таре и отсроченном судебно-хими-ческом исследовании............................................................... 33
3.1 Исследование образцов крови, изначально не содержащих этилового спирта............................................................ 34
3.2 Исследование обоазпов коови. изначально солеожаших
' ' ± ' А у л.
Некоторое количество этилового спирта............................... 39
3.2.1 Хранение объектов крови в общей камере холодильника............................................................................. 40
3.2.2 Заморозка объектов крови.......................................... 50
3.3 Изучение динамики изменений величины этанолэмии при хранении образцов........................................................ 59
Глава 4.Влияния учитываемых факторов на показатели концентрации этанола в объектах жидкой крови..................................... 64
4.1 Относительные величины изменения концентрации этанола в образце, находящемся на хранении длительное время в нестерильной таре............................................................ 64
4.2 Исследование влияния половозрастного фактора............... 68
4.2.1 Исследование половой принадлежности........................ 68
4.2.2 Исследование влияния возраста умершего лица................ 70
4.3 Исследование влияния давности смерти............................ 72
4.4 Исследование влияния причины смерти............................ 76
4.5 Исследование крови, находящейся в стерильных вакуумных пробирках............................................................• 82
4.5.1 Исследование образцов крови, изначально не содержащих этилового спирта............................................................. 83
4.5.2 Исследование образцов крови, изначально содержащих
некоторое количество этилового спирта................................ 86
Заключение..................................................................... 93
Выводы......................................................................... 99
Практические рекомендации............................................. 101
Список литературы......................................................... 103
Приложение.................................................................... 125
ВВЕДЕНИЕ
Проведение судебно-медицинской экспертизы трупа, как правило, сопряжено с необходимостью постмортальной диагностики алкогольной интоксикации. Установление факта приема этанол содержащих жидкостей перед наступлением смерти имеет важное значение, как для правоохранительных органов, осуществляющих расследование обстоятельств гибели граждан, так и для страховых компаний при принятии решения о выплатах в случаях смерти застрахованных лиц. Кроме этого, определение точного уровня этилового спирта в крови умерших позволяет оценить роль этано-лэмии в танатогенезе при наступлении смерти от различных заболеваний.
Диагностика факта употребления этилового спирта и определение его концентрации в крови на момент наступления смерти не вызывает трудностей при проведении судебно-химического исследования крови непосредственно после ее забора в ходе секции трупа, либо в ближайшие сроки после взятия биологических объектов. Вместе с тем опыт практической деятельности показывает, что возможность проведения судебно-химического исследования крови в короткие сроки после вскрытия трупа имеется не всегда. В первую очередь это обусловлено сроками доставки биологических объектов в судебно-химические отделения бюро из отдаленных районов.
В подобных ситуациях судебно-химическое исследование трупной крови на наличие в ней алкоголя может проводиться спустя две, три, и более недель после смерти человека. Между тем, вопросы сохраняемости алкоголя в изолированном трупном материале при хранении его в различных температурных условиях изучены явно недостаточно [37, 65, 106]. Естественно, это создает предпосылки к тому, что судебно-медицинский эксперт, оценивая результаты отсроченного судебно-химического исследования, не всегда уверен в его объективности, а следствие, формируя свое мнение о
причинах и обстоятельствах происшествия, может исходить из недостаточно обоснованных экспертных данных.
Вышеизложенное определило содержание представленной работы и позволило сформулировать цель и задачи исследования.
Цель исследования
Целью исследования явилось повышение точности установления факта употребления и концентрации этилового алкоголя в трупной крови, при ее отсроченных судебно-химических исследованиях, в случаях хранения объекта исследования в различных условиях его температурной консервации.
Задачи исследования
Достижение намеченной цели осуществлялось путем реализации следующих задач:
1. На экспериментальном материале изучить возможность и закономерность новообразования этанола в образцах крови, предназначенных для судебно-химического исследования, при хранении их в условиях общей камеры холодильника и при замораживании.
2. Исследовать динамику изменения величины этанолэмии в образцах крови, изначально содержащих этиловый алкоголь, при хранении их в различных температурных условиях.
3. Проанализировать возможность влияния на модуль величины изменения концентрации этанола в образце ряда факторов (пол, возраст, причина смерти), с установлением их значимости.
4. Разработать и обосновать методику изъятия крови, обеспечивающую сохранность показателей этанолэмии объекта в случаях его отсроченного судебно-химического исследования.
5. На основе полученных данных создать рекомендации по практическому использованию разработанной методики изъятия образцов
Научная новизна
На практическом экспертном материале и в ходе экспериментальных наблюдений математически описана динамика новообразования этанола в образцах крови, изначально не содержащих этанола, предназначенных для их отсроченного судебно-химического исследования.
Установлены особенности изменения концентрации этанола в объектах крови, изначально содержащих некоторое количество этилового спирта, при их хранении, как в условиях общей камеры холодильника, так и при замораживании.
Изучены влияния на модуль величины изменения концентрации этанола в объекте комплекса факторов, обусловливающих индивидуальность субъекта, от которого взята кровь для ее исследования (пол, возраст, причина смерти, давность ее наступления).
Обоснована методика изъятия и длительного хранения крови, обеспечивающая сохранность показателей этанолэмии при ее отсроченном су-дебно-химическом исследовании.
Практическая значимость
Практическая значимость работы заключается в разработке методики изъятия крови на судебно-химическое исследование, и длительного хранения ее образцов, обеспечивающей сохранность показателей этанолэмии в объекте, в случаях отсроченных судебно-химических исследований.
Положения, выносимые на защиту
На защиту выносятся следующие положения:
1. Установлено, что при изъятии жидкой крови, изначально не содержащей этилового спирта, при хранении образца в нестерильной таре в условиях общей камеры холодильника происходит новообразование этанола, достигающее значений, которые могут послужить основанием для
ошибочного вывода о факте употребления умершим этилового спирта перед наступлением его смерти. При заморозке объекта изначально не содержащего этанол, на сроках хранения до одного месяца, образования этилового спирта в нем не отмечено.
2. В образцах, изначально содержащих этиловый спирт, взятых в нестерильную емкость, при их хранении происходят стохастические процессы, выражающиеся в существенных изменениях величины этанолэмии (до ±0,6-0,8%о), не поддающиеся описанию каким либо математическим законом, что не позволяет рекомендовать традиционное изъятие крови в качестве метода, применимого в случаях отсроченных судебно-химических исследований.
3. Модуль изменения концентрации этанола в образце является величиной, не зависящей от факторов обусловливающих индивидуальность субъекта, от которого взята кровь (пол, возраст, причина смерти, давность ее наступления), что позволяет не учитывать их в ходе создания методики, применимой для изъятия и длительного сохранения образца жидкой крови.
4. В образцах крови, находящихся на длительном хранении в вакуумных стерильных пробирках Improvacuter® производства фирмы «Guangzhou Improve Medical Instruments Co. Ltd» , содержащих в качестве стабилизатора глюкозы флюорид натрия, изменения величины этанолэмии не превышают границ статистической погрешности метода (до ±0,2-0,3%о), что повышает точность диагностики алкогольной интоксикации при отсроченных судебно-химических исследованиях.
Апробация диссертации
Результаты исследования докладывались на заседаниях кафедры судебной медицины ГБОУ ВПО «Ижевская государственная медицинская академия» (Ижевск, 2011), обсуждались на заседаниях методического совета ГКУЗОТ «Пермское краевое бюро судебно-медицинской экспертизы» (Пермь, 2011), сессиях Приволжско-Уральской ассоциации судебно-медицинских экспертов (2010-2012).
Личное участие автора
Весь материал, представленный в работе, получен, проанализирован и обработан лично автором.
Реализация результатов исследования
Результаты исследования внедрены в учебный процесс кафедры судебной медицины ГБОУ ВПО «Ижевская государственная медицинская академия» Минздравсоцразвития, в практическую деятельность БУЗ УР «Бюро судебно-медицинской экспертизы» МЗ Удмуртской республики, ГКУЗОТ «Пермское краевое бюро судебно-медицинской экспертизы» о чем имеются акты внедрения.
Структура и объем диссертации
Диссертация изложена на 124 листах. Состоит из введения, обзора литературы, главы о материале и методах исследования, 2-х глав собственных исследований, заключения, выводов, практических рекомендаций, списка использованной литературы, включающего 188 источников, в том числе 34 зарубежных. Диссертация содержит 39 рисунков и 48 таблиц. Приложение оформлено в виде сводных таблиц на 17 листах.
ГЛАВА 1.
ИСТОРИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ РАЗВИТИЯ НАУЧНЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ АЛКОГОЛЬНОЙ ИНТОКСИКАЦИИ
(Обзор литературы)
Установление факта употребления человеком алкоголя незадолго до наступления его смерти имеет огромное значение для правильного понимания причины гибели, как единичного конкретного лица, так и группы лиц, при катастрофах с большим количеством пострадавших [31, 107]. Именно данное обстоятельство обусловливает существование постоянной заинтересованности следствия в установлении наличия (либо отсутствия) алкоголя в крови трупа при его судебно-медицинском исследовании. Это же объясняет и постоянное внимание к проблеме посмертной диагностики алкогольной интоксикации со стороны отечественных и зарубежных ученых.
В настоящее время вопросы констатации факта алкогольной интоксикации, наиболее часто изучаются в рамках проведения судебно-медицинской экспертизы [149], а количественное определение этилового спирта составляет около 80% от общего объема всех судебно-химических исследований [128].
Известно, что проблема экспертизы алкогольного опьянения и диагностики смерти в результате употребления алкоголя разрабатывается судебными медиками достаточно давно, начиная с 18-19 века [87, 109, 113, 148]. За последние же 50 лет этому вопросу было посвящено более тысячи статей, несколько монографий [15, 110, 116, 134] и руководство по судебно-медицинской экспертизе отравлений [16], защищены ряд диссертаций на соискание ученой степени кандидата и доктора медицинских наук [35, 66, 120, 126, 150, 151].
В ходе проведения судебно-медицинской экспертизы установление наличия этилового алкоголя в тканях и биологических жидкостях трупа является обязательным исследованием [123]. Для этого использовались различные методы.
Значительное развитие экспертиза количественного определения этилового спирта во внутренних органах трупа получила с появлением метода, предложенного Е. Видмарком в 1932 г. [11, 19], который, однако, был недостаточно специфичен и имел ряд существенных недостатков с пределом точности 0,1%о [15].
Известен метод высаливания А.И. Гринберг [42] и его модификация по В.В. Кравченко [89], спектрофотометрический метод [6, 11].
Хорошо зарекомендовал себя фотометрический метод количественного определения этилового алкоголя в биологических объектах по В.М. Колосовой [81], рекомендованный к практическому применению методическими письмами [51, 96].
Среди физических методов, используемых для определения этилового алкоголя в биологическом материале, наиболее эффективным, давшим очередной толчок развития исследования алкогольной интоксикации, явился метод газожидкостной хроматографии, предложенный в 1965 г. А.Г. Глущенко и В.Ф. Пономаревым [39]. Он дал возможность значительно ускорить проведение исследования [91, 154] и имел небольшую погрешность ПЗ. 1731. Данный метоп явился основополагаюшим в оазвитии и ис-
|_ ? J Г 1 ' ' А
пользовании других физических методов [32]: масс-газоспектрографии, электрокаталитического сжигания [75], метод автоматической ультрамик-роперегонки [157], полуавтоматический метод алкогольдегидрогеназы [158, 172] и ферментный метод, результаты которых достаточно хорошо коррелируют с методом газожидкостной хроматографии [184].
Несмотря на эффективность используемых методик, было выявлено недостаточное качество проводимых экспертиз [103, 115]. Основной при-
чиной этого являлись ошибки экспертов в правилах забора материала и их транспортировке, что зачастую приводило к неверной оценке полученных данных и служило наиболее частой причиной последующих диагностических ошибок в экспертизе алкогольной интоксикации [18].
Значительные трудности в интерпретации результатов исследования трупного материала вызывают происходящие в нем аутолитические процессы. Это послужило причиной, как изучения изменений содержания этанола в объектах в различные сроки постмортального периода, так и исследований по поиску других - альтернативных объектов, которые можно было бы использовать вместо крови, или наряду с ней, для более достоверной и объективной диагностики алкогольной интоксикации [61, 64, 72, 95, 147, 165, 166].
Наибольшее количество работ по судебно-медицинской токсикологии, посвященных изучению данного вопроса, пришлось на конец 80-ых, начало 90-ых годов XX века [68, 69, 77, 145]. По данным В.И. Витера и A.B. Пермякова [29] в это время было опубликовано свыше 260-и научных работ, основная доля которых была посвящена вопросам метаболизма этанола и его распределения в организме.
Установлено, что интенсивность всасывания этилового алкоголя имеет прямую зависимость от таких факторов: как наличие или отсутствие, количество, консистенция, состав принимаемой с ним пищи, а так же общее количество, время, количество однократного приема этилового алкоголя [15].
Имеется множество публикаций, посвященных вопросу распределения этилового спирта в тканях и жидкостях организма. Еще в 1927 г. иностранными учеными рекомендовалось для решения вопроса о состоянии алкогольного опьянения проводить исследования одновременно нескольких объектов (почка, моча, печень, мозг и содержимое желудка). По данным многих исследователей, наиболее отчетливо динамика этилового ал-
коголя в организме проявляется в соотношениях концентраций спирта в крови, моче, ликворе [36, 110]. Этими же авторами, была подтверждена результативность метода Видмарка в модификации Шоймоша при исследовании трупа без видимых аутолитических процессов и рекомендован способ для его практического применения при количественном определении алкоголя в жидкостях и тканях трупа (кровь, моча, ликвор, содержимое желудка, головной мозг, почки, печень, скелетные мышцы). Но основным направлением работы явилась исследование и разработка методических рекомендаций по экспертной оценке результатов химического анализа при исследовании жидкостей и объектов (головной мозг, мышечная ткань) от гнилостно измененных трупов.
Исследователя�