Автореферат и диссертация по медицине (14.00.24) на тему:Судебно-медицинское определение давности наступления смерти по иммунным показателям трупной крови

л? о в

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ СССР ОРДЕНА ТРУДОВОГО КРАСНОГО ЗНАМЕНИ у

НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ИНСТИТУТ СУДЕБНОЙ МЕДИЦИНЫ

/V

На правах рукописи

ЧС сС* КОСТЫЛЕВ ВЛАДИМИР ИЛЬИЧ

УДК 616-079.6:340.6*712,78»

СУДЕБНО-МЕДИЦИНСКОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ ДАВНОСТИ НАСТУПЛЕНИЯ СМЕРТИ ПО ИММУННЫМ ПОКАЗАТЕЛЯМ ТРУПНОЙ КРОВИ

14.00.24 — Судебная медицина

Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора медицинских наук

Москва — 1989

Работа выполнена в бюро судебно-медицинской экспертизы Ворошиловградского облздравотдела.

Официальные оппоненты:

ДЬктор медицинских наук, профессор В. И. Кононенко доктор медицинских наук, профессор М. В. Кисин доктор медицинских наук, профессор М. И. Потапов

Ведущее учреждение — 2-й Московский медицинский институт им. Н. И. Пирогова

Защита диссертации состоится «_»_ 198 г.

в_часов на заседании Специализированного совета

(Д.074.03.01) Научно-исследовательского института судебной медицины Минздрава СССР (123242, Москва, Садовая-Кудринская ул., д. 3, корп. 2)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Института

Автореферат разослан «-»

Ученый секретарь специализированного совета старший научный сотрудник кандидат медицинских наук

198 г.

О. А. ПАНФИЛЕНКО

Актуальность проблемы. Достижения научно-технического прогресса и разработка новых методов диагностики в медицине позволяют по-новому подойти к дальнейшему развитию судебно-медицинской проблемы - установлению давности наступления смерти (ДНС). Имеющиеся методы диагностики во многом не отвечают запросам судебно-следственных органов из-за малой эффективности . получаемых данных, и по этой причине не получили широкого распространения (В.Г.Науменко, 1984; В.В.Томилин с соавт., 1984).

Необходимость дальнейшего совершенствования судебно-медицинских методов определения ДНС неоднократно подчеркивалась на Всесоюзных съездах судебных медиков (1976, 1982, 1988) и пленумах проблемных комиссий (1978, 1979, 1980, 1983, 1988). Актуальность проблемы подтверждает её включение в программу Научного совета по судебной медицине АМН СССР, в~ которой четко определены временные периоды, сроки диагностики и предусматривается её разрешение в двух направлениях - инструментальном и лабораторном (В.Г.Науменко с соавт., 1981). Лабораторное направление весьма перспективно, т.к. позволяет не только получать объективную для диагностики информацию, но и иметь её при неоднократном исследовании взятого из трупа материала.

Наибольшее число таких работ выполнено по исследованию различных жидких сред, тканей и органов трупа с использованием биохимических, гистохимических, биофизических методов (Г.А.Ботезату, I961-1987; Г.Н.Назаров, 1976; Ю.Л.Мельников и В.В.Жаров, 1978; Г.А.Ананьев и В.В.Прутовых, 1982; А.С.Жакенов, 1983; К.Н.Алыбае-ва, 1987; Moore, 1985; Morf , 1985 и др.).

Особый интерес представляют методы исследования крови в • зависимости от времени после наступления смерти. Такими исследованиями занимались И.И.Райский, И.Н.Осипова-Райская (1928);

М.М.Эйдлин (19<i8); Е.М.Евгеньев-Тиш (1961); Н.П.Туровец (196^); М. Л.Казарновская (1983); Schleuer (1956); öeneke, Bahn (1961) и другие. Тем не менее трупная кровь осталась недостаточно изу-ченой. Так сложилось неверное представление о малой её пригодности для исследования из-за быстрого развития аутолитических процессов. Вместе с тем в литературе, в пограничных с судебной медициной специальностях имеются сведения, которые опровергают это представление, если соблюдать в процессе анализа определенные условия хранения и консервации образцов крови и использовать новые методы диагностики.

На современном этапе весьма перспективными для получения новой диагностической информации могут быть имцунные показатели трупной крови. Для решения задач судебно-медицинского определения ДНС они не использовались.

Целью настоящего исследования является разработка новых научно обоснованных судебно-медицинских критериев определения ДНС по показателям розеткообразования Т- и B-лимфоцитов, бласто-подобных форм лимфоцитов и иммуноглобулинов трупной крови в первые трое суток после смерти.

В работе были поставлены следующие задачи:

1. Изучить розеткообразование Т- и B-лимфоцитов, появление бластоподобных форм лимфоцитов, а также количественное содержание иммуноглобулинов классов ^ , А и М в динамике раннего посмертного периода.

2. На основе существующих иммунологических методик исследования донорской крови разработать их модификации применительно к исследованию трупной крови с целью определения ДНС.

3. Оценить влияние на иммунные показатели трупной крови времени и участка сосудистого русла для забора крови на анализ,

возраста и пола умершего, наличия этанола, причины смерти, тем-тературы окружающей труп среды, а также сроков начала лабораторного анализа после забора крови и температурных условий её «ранения в лаборатории.

4. Установить сроки пригодности трупной крови для исследования её с целью определения ДНС.

5. Определить иммунные показатели розеткообразующих Т- и 3-лимфоцитов, бластоподобных форм лимфоцитов и количественного содержания иммуноглобулинов классов У , А и М, обладающие наи-5олылей информативностью для установления ДНС в процессе судебно-медицинской экспертизы трупа раннего посмертного периода и разработать научно обоснованные рекомендации по их практическому использованию.

Научная новизна. Впервые на основе установленных закономер--гостей изменений количественных характеристик реакций розетко-эбразования Т- и В-лимфоцитов, бласттрансформации лимфоцитов разработан и научно обоснован новый способ диагностики ДНС.

Доказано, что в первые трое суток после смерти от механической травмы, механической асфиксии и ишемической болезни сердца (ИБС) в трупной крови сохраняется способность лимфоцитов образовывать розетки и бластподобные формы, что указывает на их жизнеспособность.

Установлено, что в лабораторных условиях эта способность у нимфоцитов выражена длительное время (до 8-11 суток) при соблюдении определенного режима сохранения крови и разработанных на-ли модификаций методик. Угасание процессов розеткообразования и 5ласттрансформации лимфоцитов в раннем посмертном периоде носит закономерный характер во времени и математически выражается экс-тонентой, что позволяет использовать количественные показатели

этих тестов для определения ДНС.

Установлено, что в процессе розеткообразования в поздние сроки раннего посмертного периода (вторые-третьи сутки) преобладают полярные формы розеток, тогда как в более ранние сроки -формы венчиков и морул.

Доказано тормозящее влияние на процесс розеткообразования больших доз антибиотиков (400 ООО ВД и более).

Научно обоснован характер изменений содержания иммуноглобулинов в" сыворотке трупной крови, отличающейся своеобразной динамикой.

Теоретическое значение выполненной работы состоит в развитии нового прикладного направления иммунологии для использовани] её методик при судебно-медицинском определении ДОС.

Практическая значимость и внедрение. Для судебно-медицинской диагностики ДНС в раннем посмертном периоде (до трех суток включительно) при отсутствии на трупе гнилостных изменений разработаны два способа диагностики, основанные на исследовании им мунных тестов трупной крови. Предложены одно- и двухразовое её исследование с учетом комплекса влияющих факторов. Обоснованы и предлагаются диагностические таблицы и поправочные коэффициенты повышающие достоверность и эффективность диагностики. Доказано, что наибольшей эффективностью обладают показатели Т- и В-розет-кообразующих лимфоцитов, обеспечивающие высокую точность диагно стики (от 2-х до 10 %).

Полученные данные используются в практической работе Воро-шиловградского бюро судебно-медицинской экспертизы, внедрены в практику работы 9-ти областных бюро судебно-медицинской эксперт! эы УССР, демонстрировались на 2-ом семинаре заведующих танатологическими отделами ряда экспертных учреждений РСФСР (Москва,-

.983), используются в учебном процессе на кафедрах судебной ме-(ицины Ворошиловградского мединститута и Киевского института 'совершенствования врачей.

Практические рекомендации по использованию разработанного гами метода диагностики ДНС по количественным характеристикам .ммунных тестов трупной,крови включены в Руководство "Судебно-юдицинская диагностика давности наступления смерти".

Апробация работы. Результаты исследований доложены и обсуж-ены: на заседании проблемной комиссии "Научные основы судебной едицины, токсикологической и судебной химии" (Киев, 1980); заедании Ученого совета Киевского института усовершенствования рачей МЗ СССР (Киев, 1980); У1 республиканской научной конфе-енции судебно-медицинских экспертов УССР (Черновцы, 1981); овместных заседаниях сотрудников кафедры судебной медицины и бластного бюро судебно-медицинской экспертизы Ворошиловградско-о облздравотдела (1981, 1982, 1983, 1984, 1985); научной конфе-енции НИИ судебной медицины МЗ СССР (Москва, 1983); расширенном аседании Украинского научного общества судебных медиков и кри-иналистов (Киев, 1984); конференции по проблеме ДНС на базе павной судебно-медицинской экспертизы МЗ РСФСР и кафедры судеб-эй медицины 2-го Московского мединститута им.Н.И.Пирогова Москва, 1985); совместном заседании кафедр судебной медицины «евского медицинского института и Киевского института усовер-гнствования врачей с участием судебно-медицинских экспертов гепубликанского и Киевского областного бюро судебно-медицинской {спертизы (Киев, 1985, 1986).

Публикации. По теме диссертации опубликовано II работ: Материалах Всесоюзного и республиканского съездов, конференций, фнале "Судебно-медицинская экспертиза'1 и научных трудах инсти-

тутов (Москва, Киев, Черновцы, Кишинев, Иркутск); получено два авторских свидетельства на изобретение, внедрены б рационализаторских предложений, опубликовано два информационных письма (Москва, Киев).

Структура и объем работы. Диссертация состоит из 8 глав, выводов, практических рекомендаций, списка литературы и приложения. Общий объем работы с приложением составляет 198 страниц. Основной материал изложен на 144 страницах, иллюстрирован 32 рисунками и 30 таблицами. Список литературы включает 206 источников. Из них 160 - на русском и 46 - на иностранных языках.

На защиту выносятся следующие положения:

1. Для судебно-медицинского определения ДНС в раннем посмертном периоде могут быть использованы иммунные показатели трупной крови.

2. Популяции Т- и В-лимфоцитов проявляют свою жизнеспособность в реакциях бласттрансформации и розеткообразования при за боре крови из трупа в первые трое суток после смерти и сохранении её при определенных лабораторных условиях до 8-11 суток.

3. При смерти от механической травмы, механической асфикси и ИБС снижение иммунных показателей лимфоцитов в раннем посмерт ном периоде подчиняется экспоненциальной зависимости, что делае возможным диагностику Д1С в часовых интервалах. Содержание имму ноглобулинов не имеет такой зависимости, отличается снижением этого показателя в первые 3 часа после смерти, резким подъемом к 8-10 часам и большой вариабельностью в последующие часы ранне го посмертного периода, во многом зависит от причины смерти.

4. Судебно-медицинское определение ДНС по розеткообразова-нию Т- и В-лимфоцитов возможно с высокой достоверностью (0,99), надежностью и стабильностью показателей,отличается низкой погрс ностью результатов (от 2-х до 105?) от истинной давности смерти.

Материал и методы исследования

В качестве объекта исследования избрали трупную кровь и её сыворотку, а также кровь живых лиц (доноров).

Для исследования посмертного процесса использовали следующие иммунологические тесты: реакцию бласттрансформации лимфоцитов (РБТЛ), реакции розеткообразования Т- и В-лимфоцитов, количественное определение иммуноглобулинов класса ¡У , А и М. Кровь и её сыворотку взяли в морге (температура +15 - +25°С, влажность 40-60%) от 335 трупов мужчин и женщин, умерших в возрасте 17-60 лет от несовместимых с жизнью механических повреждений (141), ишемической болезни сердца (142), механической асфиксии (52), при заведомо известном времени наступления смерти; учитывали наличие и отсутствие этанола в крови. Результаты иммунологических реакций (тестов) интерпретировали как количественные и качественные характеристики посмертного процесса при сроках взятия материала через I, 3, 6, 12, 18, 24, 36, 48, 60 и 72 часа после наступления смерти. Взятые образцы крови исследовали неоднократно в течение до II суток при её хранении в условиях холодильника. Во всех случаях при анализе следственных и анамнестических данных исключали иммунодефицитные заболевания и состояния.

Для сравнения показателей трупной крови исследовали кровь 40 доноров.

Полученные данныз подвергли статистической обработке с помощью ЭВМ ЕС. Решение поставленных задач основывали на комплексном изучении иммунных показателей и установлении статистических инвариантов на разных стадиях посмертного периода с учетом влияния эндо- и экзогенных факторов. Для определения основных зависимостей исследуемых величин применяли методы корреляционного

и регрессионного анализа.

Результаты исследований

С целью определения оптимального места забора трупной крови из сосудистого русла исследовали кровь от 30 трупов людей, умерших от несовместимых с жизнью повреждений (15), ишемической болезни сердца (10) и механической асфиксии (5) при отсутствии и наличии этанола в крови. Кровь брали при вскрытии трупа из правой и левой половины сердца, яремной вены, брюшной аорты и правой бедренной артерии через б, 12, 24, 48 и 72 часа после наступления смерти.

Анализ полученных данных, характеризующих динамику иммунных показателей в раннем посмертном периоде, выявил существенные различия между средними значениями статистических параметров для исследуемых областей забора крови. При смерти от механической травмы, ИБС и механической асфиксии уровень иммунных показателей крови из правой половины сердца выше, чем в других отделах сосудистого русла. Наибольшие показатели характерны для крови правой половины сердца во всех исследуемых интервалах времени.

Сравнительные исследования показателей иммуноглобулинов сыворотки крови из указанных отделов сосудистого русла не позволили выявить наиболее стабильные количественные их показатели.

Способность Т- и В-лимфоцитов к розеткообразованию с учетом вида розеток изучили в зависимости от времени смерти (через 3, б, 12, 18, 24, 30, 36, 48 и 72 часа) и причины смерти (механическая травма - 5, ишемическая болезнь сердца - 5, механическая асфиксия - 5). Исследовали также кровь живых лиц (5).

Установили, что в реакциях Т- и В-розеткообразования лимфоциты образуют с эритроцитами барана различные формы розеток. В

трупной крови преобладают розетки в форме неполных венчиков и различной формы полярные с тремя и более эритроцитов вокруг лимфоцита; а в донорской крови - в виде венчиков, морул и редко полярные.

В более поздние сроки \.48-72 часа) втрупной крови встречаются единичные формы розеток в виде венчиков Т- и В-розеткообра-зующих лимфоцитов и увеличение полярных форм розеток (3-мя эритроцитами вокруг лимфоцита).

Результаты исследований показали, что при установлении времени наступления смерти необходимо учитывать все разновидности форм розеткообразуоцих Т- и В-лимфоцитов трупной крови.

Для изучения влияния различных температурных условий на результаты анализа трупной крови и установление оптимального режима её хранения, исследовали кровь 7 доноров и 16 трупов людей (механическая травма, ИБС, механическая асфиксия), при отсутствии алкоголя в крови.

Кровь хранили в помещении лаборатории при температуре от +18 до +22 °С; в холодильнике при температуре от +4 до +6 °С; в морозильной камере при температуре от -18 до -20 °С.

Установили, что различные условия хранения крови оказывают влияние на активность Т- и В-лимфоцитов к розеткообразованию. Эту способность лимфоциты трупной крови сохраняют на протякении 9-II суток.

Оптимальными условиями хранения трупной крови, пригодной для иммунологических исследований, являются условия холодильника при температуре от +4 до +6 °С. При хранении крови в комнатных условиях 1+18...+22 °С) и в морозильной камере (-18...-20 °С) активность лимфоцитов практически одинакова и в среднем проявляется до 8 суток.

Установленные зависимости дают возможность по динамике показателей розеткообразования трупной крови прогнозировать давность смерти в зависимости от пребывания трупа в различных температурных условиях, а также рекомендовать наиболее оптимальные условия лабораторного хранения трупной крови, при которых она длительное время остается пригодной для исследований.

Влияние этанола на процесс розеткообразования изучили в зависимости от его содержания в трупной крови и температурных условий хранения на 16 трупах людей, умерших от несовместимых с жизнью механических повреждений при наличии в крови алкоголя от I до 2 %о и от 2,1 до 3 а также кровь от 8 трупов при отсутствии этанола. Кровь хранили при комнатной температуре (+18...+22 °С).

Результаты исследований показали, что в трупной крови погибших независимо от содержания или отсутствия этанола в крови в течение 3-х суток посмертного периода определяется постепенное снижение способности Т- и В-лимфоцитов к розеткообразования.

Установлено, что содержание этанола 2 %о и более в трупной крови лвдей, погибших от травм, не ухудшает возможности её использования для диагностики ДНС тестом розеткообразования. Более того, такая кровь сохраняет необходимые для диагностики свойства даже без специальных условий её хранения и может быть пригодна в течение двух суток посмертного периода. Следует полагать, что наличие этанола в 1фови оказывает фиксирующее действие клеток и сохраняет способность лимфоцитов к образованию розеток при хранении крови в обычных условиях при температуре +18-22 °С до двух суток.

Изучение влияния антибиотиков на способность Т- и В-лимфоцитов к розеткообразованию показало, что при хранении крови в

течение 3-х суток при наличии в ней пенициллина и стрептомицина (до 100000 ВД/20 мл) замедляются процессы гниения и они не оказывают влияния на способность Т- и В-лимфоцитов к розеткообразо-ванига. Увеличение дозы антибиотиков до 400000 ВД/30 мл угнетающе действует на процесс розеткообразования.

Влияние возрастных особенностей на иммунные показатели анализировали на материале исследования 56 трупов лиц в возрасте от 17 до 50 лет (первая группа) и 48 трупов - от 50 до 60 лет (вторая группа), умерших от механической травмы и ишеми-ческой болезни сердца. Сопоставляя результаты количественного содержания Т- и В-лимфоцитов в различных возрастных группах, установили, что в первой группе, независимо от причины смерти, нет существенных изменений показателей, в то время как во второй груше отметили снижение показателей Т-розеткообразуицих лимфоцитов в среднем на 7 а В-лимфоцитов - на II %.

Половая принадлежность умерших от травм и шемической болезни сердца не оказывает существенного влияния на изменение способности Т- и В-лимфоцитов к розеткообразованию.

Проанализировали влияние сезонных изменений температуры окружающей труп среды в раннем посмертном периоде (при отсутствии гнилостных изменений). Исследовали кровь и её сыворотку из правой половины сердца, взятую от 65 трупов людей, умерших от механической травмы (48), ишемической болезни сердца (12). Изучали способность Т- и В-лимфоцитов к розеткообразованию и динамику содержания иммуноглобулинов классов У , А и М. Исследованию подвергались трупы, находившиеся в различных температурных условиях морга: в осенне-зимний период при температуре +15...+20 °С и в весенне-летний период при температуре +20...+25 °С. За исходные показатели принимали значения извест-

ного времени наступления смерти.

Анализ влияния сезонных изменений температуры от +15 до +25 °С показал, что в осенне-зимний период способность к розет-кообразованию выше, чем в весенне-летний и составляет разницу в среднем для Т-розеток 4 %, для В-розеток - 6 %. Достоверной зависимости между содержанием иммуноглобулинов А и М и температурой воздуха нами не выявлено. Содержание иммуноглобулина 1] в сыворотке крови в осенне-зимний период в среднем на 35 % выше, чем в весенне-летний.

Диагностическое значение содержания иммуноглобулинов имеет меньшее значение.

Результаты исследований показали, что при установлении давности наступления смерти иммунологическим методом необходимо учитывать влияние температуры окружающей труп среды и использовать соответствующие поправочные коэффициенты.

Нами изучены также изменения иммунных показателей в зависимости от локализации травмы (черепно-мозговая, груди, живота, комбинированная). Исследования проведены на 16 трупах. Кровь и её сыворотку брали через 3, 6, 12, 24, 48 и 72 часа после смерти.

Установили, что при черепно-мозговой травме содержание Т-лимфоцитов несколько выше, чем при других травмах (живот, грудь, комбинированная). Самые низкие показатели характерны для комбинированной травмы. Однако существенной разницы в показателях розеткообразования в зависимости от локализации травмы не выявлено. Поэтому в дальнейшем оценивали показатели без учета локализации травмы.

Результаты показали, что лимфоциты трупной крови в посмертном периоде обладают способностью определенное время трансформи-

роваться в бластные формы. В первые часы наблюдается резкое снижение способности лимфоцитов образовывать бласты: показатели РБТЛ в среднем на 42 % ниже контрольных показателей (у доноров -65 %). После 3 часов отмечается постепенное затухание процесса бластТрансформации. Снижение показателей РБТЛ зависит от сроков давности смерти; показатели в среднем снижаются от 38,1+0,65 до 4,1+0,18 % (средняя скорость снижения - 0,5 бласта в час).

Влияние травмы на процесс розеткообразования исследовали в крови 141 трупа, взятой через I, 3, 6, 12, 18, 24, 36, 48, 60 и 72 часа после смерти. Для сравнения показателей трупной крови исследовалась кровь живых лиц (40 доноров). Мы убедились в том, что способность лимфоцитов к розеткообразованию в разное время после смерти изменяется существенно. Так, через I час число розеток Т-лимфоцитов составило 26,6+0,61, т.е. в среднем в 2 раза ниже показателей крови живых лиц (доноров) - 50,5+0,94, В-лимфо-цитов - 23,9+0,80, т.е. на 10 % ниже по сравнению с кровью доноров (26,5+0,83). В последующие интервалы времени скорость снижения показателей в среднем составила 1,1 % в час.

Проведенный анализ позволяет утверждать, что травма как причина смерти не оказывает резкого влияния на динамику показателей розеткообразования трупной крови. Следовательно, количественные характеристики розеткообразования могут служить надежными определителями ДНС.

Влияние травмы на иммуноглобулины изучили исследованием сыворотки трупной крови людей, умерших от несовместимых с жизнью механических повреждений (67 наблюдений), и сыворотки . крови доноров. Произвели 201 исследование через 3, 6, 9, 12, 15, 18, 21, 24, 30, 33, 36, 48 и 72 часа.

В сыворотке крови доноров содержание иммуноглобулинов со-

ставило: У - 680-700 А - 110-450 мг$, М - 80-300 Средние показатели через 3 часа были следующие: У - 1093+ +14,2 мг%, А - 261+20,2 мг$, М - 340+4,6 мг$, через 24 часа -

У - 813+12,2 мг$, А - 464+18,1* мг%, М - 80+2,5 через 48 часов - У - 560+64,6 мг$, А - 300+28,3 мг$, М - 41+5,9 мг#. В целом они были ниже показателей сыворотки донорской крови и в зависимости от ДНС значительно варьировали. Так, пределы колебаний в период от 3 до 60 часов после смерти для иммуноглобулинов У - от 322 до 1093 мг$, для А - от 41 до 400 мг$, для М - от 43 до 318 мг%. В то же время выделяется высокий уровень содержания иммуноглобулинов класса У в интервале времени от 3 до 9 часов после смерти. Содержание иммуноглобулинов У , А и М в сыворотке трупной крови показало, что уровень их имеет тенденцию к снижению в период с 3 до 72 часов после смерти, однако из-за больших колебаний использовать этот тест для диагностики ДОС не представляется возможным.

Реакцию бласттрансформации исследовали в крови 14 трупов людей, умерших скоропостижно от ИБС, в динамике через 3, 6, 12, 18, 24, 36, 48, 60 и 72 часа (126 определений). Содержание властных клеток закономерно снижалось от 37,6+0,39 % (через 3 часа после смерти) до 7,5+0,25 % (через 48 часов). Через 3 часа показатели бластообразования лимфоцитов были на 44 % ниже показателей донорской крови. Скорость падения показателей в среднем составляла 0,5 бласта в час.

Приведенные результаты указывают на достоверную зависимость уменьшения способности лимфоцитов трансформироваться в бластные клетки о ДНС в течение 3-48 часов и доказывают возможность использования показателей РКГЛ для установления ДНС.

При исследовании зависимости розеткообразования при скоро-

постижной смерти (ИБС) использовали кровь 68 трупов лиц обоего пола в возрасте от 17 до 60 лет, в интервалах времени 3, 6, 12, 18, 24, 36, 48, 60 и 72 часа (136 исследований). Способность Т- и В-лимфоцитов к розеткообразованию в различные периоды после смерти не одинакова. Через 3 часа эта способность у Т-лимфо-цитов в среднем составляла 23,8+0,3 %, что ниже показателей донорской крови в среднем на 57 %, у В-лимфоцитов - 23,1+0,71 % (ниже показателей донорской крови на 18 %). В последующий период до 72 часов скорость падения показателей для Т- и В-розеток в среднем -.1,1 % в час.

Таким образом, показатели розеткообразования у Т- и В-лим-фоцитов у умерших от ИБС находятся в прямой зависимости от давности наступления смерти.

Для выявления изменений иммуноглобулинов сыворотки трупной ' крови людей, умерших от ИБС (30 наблюдений), в динамике посмертного периода через 3, 12, 24, 48 й 72 часа произвели 98 исследований. Средние показатели иммуноглобулинов классов У, А и М в течение 3 суток посмертного периода ниже, чем показатели крови доноров.

Значительные колебания показателей иммуноглобулинов в исследуемых интервалах времени не позволяют использовать их для определения ДНС.

Реакцию бласттрансформации лимфоцитов изучили в крови 9 трупов лиц, умерших от механической асфиксии через 6, 12, 18, 24, 36, 48 часов. Результаты 81 теста показывают, что в течение б часов средний показатель составляет 16,6+0,30 %, что на 75 % ниже среднего показателя донорской крови. В последующие интервалы времени показатели РБГЛ трупной крови постепенно снижались. Скорость падения их в интервале от 6 до 72 часов в среднем -

0,23 бласта в час.

Розеткообразование Т- и В-лимфоцитов изучали в крови 57 трупов людей, также погибших от механической асфиксии. Тесты определяли через б, 12, 18, 36, 48, 60 и 72 часа (114 исследований) . В первые б часов розеткообразование этих лимфоцитов резко падает по сравнению с донорской кровью. Количество Т-розеток составило 22,0+0,71 %, В-розеток - 20,0+0,71 %, что на 59 % и 21 % ниже показателей донорской крови. Средняя скорость падения числа розеток 0,7 % час.

"Для установления влияния ДНС на иммуноглобулины нами исследовалась сыворотка крови людей, погибших от механической асфиксии (10). Иммуноглобулины определяли в сыворотке, взятой через б, 12, 18, 24, 48 и 72 часа после смерти. Всего произвели 60 исследований. Установили, что средние показатели иммуноглобулинов крови лиц, умерших от механической асфиксии, ниже, чем средние показатели донорской крови.

В течение 3 суток посмертного периода отмечается значительная вариабельность показателей иммуноглобулинов. Поэтому использовать их для установления ДНС не представляется возможным.

С целью выявления изменений иммунных показателей в зависимости от причины и давности смерти провели сравнительное их изучение.

Показатели РБГЛ в крови умерших от механической травмы, ИБС и механической асфиксии в раннем посмертном периоде не одинаковы. Между этими причинами смерти имеется статистически значимое различие по показателям бласттрансформации лимфоцитов. При травме оно составляет от 38,0+0,65 до 7,7+0,27, при ИБС -от 37,6+0,39 до 7,5+0,20; при механической асфиксии - от 16,6+0,30 (6 часов) до 4,6+0,37. Средняя скорость падения пока-

зателей РБГЛ составила при механической травме и ИБС 0,5 бласта в час, при механической асфиксии 0,23 бласта в час.

Динамика показателей РБГЛ при механической травме хорошо описывается степенной зависимостью Ф = 71,65 £ "°»59 (остаточная дисперсия & ^ = 5,377) и гиперболической у. = 6,2 + 55^66

У 2

(остаточная дисперсия 6 = 5,9), что на гФрядок по дисперсии лучше остальных зависимостей (линейной, параболической, экспоненциальной). Стартовое значение показателя через 3 часа после смерти составляет около 60 ^ по сравнению с контролем и далее падает со скоростью у! = 47,48 • Ь т>е> через б часов он

составляет уже 30 % от контроля или 53 % от трехчасового значения; через 12 часов соответственно - 24 % и 42 %, через 25 часов - 20 % и 34 %, через 36 часов - 15 % и 26 % и т.д.

При скоропостижной смерти прослеживается практически такая же динамика процесса: у = 5,78 + 95'89 и у = 83,26 • £~°>&7 (по гиперболической и степенной функциям соответственно).

При механической асфиксии также сохраняется общая закономерность с разницей по всем отсчетам времени около 3 ед. по сравнению с механической травмой и ишемической болезнью сердца. Как и в предыдущих случаях, наиболее предпочтительно использо-

рр т

вать гиперболическую зависимость вида: у = 3,246 + 22»± . Стартовое значение составляет 50 % от донорского показателя.

Таким образом, динамика показателей РБГЛ при всех причинах смерти имеет одну и ту же закономерность и лучше всего описывается в гиперболической зависимости: ^ = а0 + , где значения коэффициентов находятся: ао€[б±0,75] а, 6 [95.5 * 0.5]

Показатели РБГЛ в случае механической асфиксии в среднем на 10 % ниже показателей при смерти от травмы и ИБС.

Таким образом, ДНС можно определять по РБТЛ по следующей

методике. При исследовании трупной крови получают показатели РБТЛ и вводят их в формулу ( ^ )

95.5

¡-I "6

Динамика угасания жизнеспособности лимфоцитов в раннем посмертном периоде по показателям РБТЛ достоверна и устойчива с точки зрения влияния эндо- и экзогенных факторов и описывается гиперболической зависимостью вида + , причем ско-

рость угасания также удовлетворительно описывается кривой

= -а,/^ . Это позволяет предложить методику определения ДНС по обратной зависимости, что практически решает проблему интерполяции в периоде до 3 суток после смерти.

Точность диагностики составляет до 2 часов - 80 %, до 3 часов -93%. • .

Проведенные исследования выявили различную способность лимфоцитов трупной крови к бласттрансформации при различных причинах смерти. Установлена динамика показателей РБГЛ в зависимости от причины и давности наступления смерти.

При механической асфиксии показатели РБГЛ в течение 3-48 часов после смерти ниже соответствующих показателей при травме и ИБС. Следовательно, по полученным показателям возможно ориентировочное установление причины смерти.

Как показал статистический анализ количественных показателей РБГЛ в различные интервалы посмертного периода и динамика их подчиняется гиперболической закономерности в период от 3 до 48 часов, что позволяет использовать эти количественные показатели для установления ДНС в этом периоде. В более поздние сроки с момента смерти (до 72 часов) процесс бласттрансформации лимфоцитов не может быть положен в основу метода установления ДНС вследствие быстрого падения функциональной активности лимфоци-

тов за счет аутолиза, вредного влияния посторонней флоры и др.

Показатели розеткообразования Т- и В-лимф°Цитов в первые часы после наступления смерти в результате механической асфиксии (6 часов), при травме и ИБС (от I до 3 часов) резко падают и в среднем составляют 40-60 % от донорской крови (контроль). Исследованием крови правой половины сердца лиц, умерших от механической травмы установлено, что в первые 3 часа после наступления смерти показатели способности Т- и В-лимфсцитов и розеткообразованию составляют соответственно 24,2 и 22,7%, т.е. несколько выше, чем при таких же интервалах времени в случае наступления смерти от ИБС (23,8 и 23,1 %). В последующие интервалы времени от 3 до 72 часов средние показатели Т- и В-розеток по всем исследовавшимся причинам смерти примерно одинаковы и существенных различий в этих показателях не выявлено. При механической травме и ИБС скорость образования Т- и B-розеток по интервалам времени в среднем падает на 1,1 % в час. При смерти от механической асфиксии скорость падения в интервале от 6 до 72 часов в среднем составляет 0,7 % в час.

Таким образом, процесс розеткообразования Т- и B-лимфоцитов и закономерное изменение его количественных показателей по интервалам посмертного периода до 72 часов, а в ряде случаев даже до II суток, позволяет использовать в качестве основы иммунологического метода определения ДНС выявленную экспоненциальную зависимость показателей розеткообразования от времени с момента смерти.

Изучение содержания иммуноглобулинов ?У, А и М в сыворотке крови трупов лиц, погибших от механической травмы, умерших скоропостижно от сердечно-сосудистых заболеваний (ИБС) и механической асфиксии позволило выявить определенную закономерность их

динамики в посмертном периоде: содержание их в сыворотке трупной крови ниже по сравнению с показателями донорской крови. В первые 3-6 часов после смерти показатели всех трех иммуноглобулинов увеличиваются независимо от причины смерти. В последующее время они имеют вид ломаной линии, пики которой имеют тенденцию к уменьшению и сглаживанию по мере увеличения давности наступления смерти. Однако, вследствие большого разброса данных, их затруднительно использовать для диагностики ДНС.

Поскольку процесс затухания жизнеспособности лимфоцитов наиболее устойчив и характеризуется экспоненциальной зависимостью, его и положили в основу метода установления ДНС.

Вместе с тем этот процесс хотя в целом и подчиняется экспоненциальной зависимости, однако не имеет строго функционального характера. Связано это с тем, что в различные интервалы времени посмертного периода комплекс экзо-эндогенных и индивидуальных факторов вызывает определенные изменения темпов процесса затухания жизнеспособности лимфоцитов. Эти изменения носят случайный, вероятностный характер, вследствие чего и динамика параметров иммунной системы во времени также имеет статистический характер. Отклонения параметров процесса затухания жизнеспособности лимфоцитов, вызываемые действием комплекса факторов, в значительной степени опосредованы, т.е. они являются интегральным результатом реакции иммунных показателей, что дает основание рассматривать их как случайные (статистические) отклонения от какой-то определенной величины (средней генеральной совокупности). Определение этой средней величины и является целью мате-матико-статистического анализа материала, полученного нами в результате выполненных исследований.

Задача математико-статистического анализа состояла в опре-

делении основных характеристик иммунологических тестов установления Д1С, их универсальности, точности и достоверности результатов. Как показал математико-статистический анализ динамики различных процессов, характеризующих затухание жизнеспособности лимфоцитов, наиболее стабильными (близкими к функциональной зависимости) и наиболее строго дифференцированными по интервалам посмертного периода (до 72 часов) являются количественные характеристики процесса розеткообразования Т- и В-лимфоцитов. Поэтому за основу метода установления ДНС нами взята экспоненциальная зависимость количества розеткообразующих Т- и В-лимфоцитов от времени с момента наступления смерти и проведена математико-ста-тистическая оценка надежности (достоверности) и точности результатов определения ДОС, разработанными на основе указанной зависимости способами.

Описание динамики посмертного процесса и статистические - выводы базируются на результатах наблюдений и общеизвестных теоретических предпосылках. Процесс розеткообразования Т- и В-лим-фоцитов является процессом без случайных выбросов, что следует из самой его природы. Динамика Т- и В-розеткообразования лимфоцитов в течение 3 суток посмертного периода отражена на графике (рис.1).

Наиболее приемлемой моделью этого процесса с математической точки зрения является экспоненциальная зависимость вида ^ = ехр(а0 +аЛ) , где а„ к а, _ числовые коэффициенты, I - время, ^ - число розеткообразований.

Использование экспоненциальной зависимости в качестве гипотез при описании динамики посмертного процесса хорошо согласуется с традиционно принятым использованием её для описания процессов "угасания жизнеспособности" или "умирания".

РисЛ. Динамика Т- и В-розеткообразующих лимфоцитов трупной крови в зависимости от ДНС (I - Т-лимфоциты, 2 - В-лимфоциты).

В интервалах б час * t ^72 часа и -0,03 < ö, < -0,007, в которых практически всегда находятся значения t и о., , экспоненциальная зависимость может быть достаточно хорошо аппроксимирована линейной, степенной, а также гиперболической зависимостями.

Нами разработаны два способа определения ДНС по количественным характеристикам затухания жизнеспособности, материальной основой которой являются популяции Т- и В-лтфоцитов трупной крови. Количественные характеристики затухания жизненного процесса популяции Т- и В-лим£оцитов закономерно изменяются в течение определенного срока посмертного периода, начиная с момента наступления смерти. Поэтому установление ДНС основывается на определении соотношения указанных количественных характеристик по интервалам времени с момента наступления смерти.

Установление ДНС по динамике затухания жизнеспособности лимфоцитов в посмертном периоде состоит в выборе наиболее законо-

мерно изменяющихся во времени и наименее варьирующих показателей. Этим требованиям удовлетворяют процессы бласттрансформации и особенно розеткообразования Т- и В-лимфоцитов трупной крови, количественные характеристики которых определяются по интервалам времени иммунологическими реакциями.

На основе количественных изменений хода реакций розеткообразования во времени ДНС устанавливается двумя способами. Сущность первого способа заключается в выявлении розеткообразующих Т- и В-лимфоцитов в трупной крови, взятой дважды с интервалами времени не менее 6 часов, и определении по полученным данным коэффициента К по приведенной ниже формуле, который учитывает влияние эндо- и экзогенных факторов на скорость затухания процесса розеткообразования

ш-т ш-м

где /V, - число розеток при первом и втором исследованиях крови;

- интервал времени между исследованиями, час.

По комплексу известных ихкзо- и эндогенных факторов по специальной таблице поправок корректируется полученное при этом число ( N2. ) розеток Т- и В-лимфоцитов. По рассчитанному коэффициенту ( К ) и скорректированным количествам Т- и В-розеткообра-зугощих лимфоцитов из диагностической таблицы для первого способа берется время отдельно для Т- и В-лимФоцитов ( ¿У и 4 ) и вычисляется среднее время ДНС: I = ■ — .

Таблицей поправок рекомендуется пользоваться в случаях, отличающихся от базового варианта, для которого построена диагностическая таблица (смерть от механической травмы; отсутствие в крови алкоголя; заболеваний; возраст умерших не старше 50 лет;

температурные условия от +15,..+20 °С).

Сказанное поясним на примере. Объект наблюдения - труп мужчины 46 лет, причина смерти - ИБС (Акт № 574 от 8.08.84, наблюдение № 325). Показатели первого исследования крови: 25 % Т-розеткообразующих лимфоцитов и 23 % В-розеткообразующих лимфоцитов. Показатели второго исследования крови: 19 % Т-розеткообразующих лимфоцитов и 17 % В-розеткообразующих лимфоцитов { йЬ =15 часов).

Вычисляем коэффициенты для Т- и В-розеток:

Кт=Ы5_М=аШ; Кв а

В диагностической таблице определения ДНС находим наиболее близкие к вычисленным значения К , если они не совпадают с табличными.

В приведенном примере для Т-розеток И = 0,018, для В-розе-ток Ч = 0,020. По числу розеток ( N 19) для Т-лимфоцитов время ДНС ( ¿г ) составляет 18,9+2,2 часа.

Для определения время ДНС по В-розеткам предварительно необходимо число В-розеток, полученных по исследованию, увеличить на 2 единицы (17+2) и только после этого пользоваться диагностической таблицей. Из таблицы время ДНС ( ) получается равным 18+1,7 часа. Следовательно, среднее время ДНС составляет:

(18,9+2,2) + (18,0+1,7)

-—-=- = 18,45+2,39

2

По материалам дела давность наступления смерти составляет 17 часов, а по данным экспертизы - 18,45+1,39 часа.

Вторым способом время ДНС также определяется из специальной диагностической таблицы (2) по количествам розеток Т- и В-лимфоци-тов,получаемым только при одноразовом исследовании трупной крови.

Таблица I

Зависимость числа розеток Т- и В-лимфоцитов от давности наступления смерти

Давность наступления смерти в часах с погрешностью ! ¡Т-лимфоциты, 1 ¡Давность наступления смерти в ;часах с погрешностью ! .............. 1 (В-ЛИЬ^ОЦИТЫ, i

3+0,23 25,5 3+0,26 22,9

6+0,35 23,9 6+0,41 20,9

9+0-, 46 22,2 9+0,29 19,2

12+0,60 20,6 12+0,43 17,6

18+0,82 17,2 18+0,92 14,8

24+1,1 14,4 24+1,22 12,3

36+1,7 11,2 36+1,9 9,3

48+1,8 8,5 48+2,1 6,9

60+2,6 6,6 60+2,5 5,4

72+3,1 5,0' 72+3,7 4,3

Как и в первом способе, время ДОС определяется как среднее из суммы ( ¿г ) и ( ¿в ).

Если наблюдаемое количество розеткообразующих Т- и В-лимфо-цитов не значится в диагностической таблице (I), а попадает между ближайшими значениями Л( и Л( , соответствующих моментам времени tl и , тогда искомое значение давности смерти определяют по формуле линейного интерполирования (И.С.Березин, Н.П.Жидков, 1963):

А/-М

где

Л4-Л/,

N - количество розеток, определенное измерениями; /V/ - ближайшее табличное значение розеток больше N ; А/г - ближайшее табличное значение розеток меньше N :

I - табличное время, соответствующее количеству розеток /V, ; - табличное время, соответствующее количеству розеток N1 .

Пример. Объект наблюдения - труп женщины 42 лет, причина смерти - механическая травма (Акт № 703 от 24.09.84, наблюдение № 337). Через 18 часов после смерти относительное количество Т- и В-розеткообразующих лимфоцитов составило 17 % и 15 %. По данным таблицы (2) найдены следующие значения времени, прошедшего с момента наступления смерти:

/- = 18 + 17 ~ 17»2 .(24-18) = 18 + • 6 ~ 18,4 часа т 14,4-17,2 -2,8

tй = 12 + 15 ~ 17'6 .(18-12) = 12 + ■ 6 ~ 17,5 часа * 14,8-17,6 -2,8

Затем по двум критериям получаем средний показатель времени наступления смерти:

^ = 18,4 + 17,5 = 1?>9 часа

С учетом таблицы (2) вычисляем среднюю погрешность по формуле:

Мя?г + т\ Л

+ =0,61 часа

2 2 По материалам дела давность наступления смерти составляет 18 часов, а по полученным данным - 17,9+0,61 часа.

Принципиальное отличие второго способа установления ДНС от первого (когда время определяется по числу Т- и В-розеток после предварительного вычисления коэффициента К ) заключается в следующем. Если при первом способе необходимо подсчитывать розетки

минимум два раза, то при втором надобность повторных подсчетов (с интервалом в б часов) отпадает. Кроме того, значительно упрощается диагностическая таблица. Именно эти отличия и составляют преимущества второго способа.

Анализ точности установления ДНС приведенными способами показывает, что оба они дают по своим величинам как в целом за весь ранний посмертный период (3-72 часа), так и по интервалам времени, высокую точность. Но, как уже отмечалось, второй способ отличается большей простотой. Однако второй способ не исключает первый. Они взаимно дополняют друг друга и каждый из них отличается своими преимуществами. Так, когда эксперт имеет достоверные сведения о конкретных экзо-эндогенных и индивидуальных факторах, то для более точного установления ДНС целесообразно использовать именно первый способ. В этом случае при установлении ДНС одновременно эксперт может аналитическим путем получить дополнительные сведения о вероятной причине, или хотя бы о группе равновероятных причин смерти, что существенно может облегчить расследование.

В целом полученные нами результаты исследования трупной крови людей после наступления смерти, дают возможность значительно повысить точность установления ДНС в период до 3 суток после смерти, а разработанные на основе полученных результатов способы определения ДНС отличаются более высокой стабильностью по сравнению с другими.

Таким образом, разработанные нами способы установления момента наступления смерти по комплексу показателей Т- и В-розет-кообразования лимфоцитов трупной крови составляют сущность метода диагностики ДНС.

Выводы

1. В качестве объекта исследования для определения давности смерти в раннем посмертном периоде (до трех суток включительно) используются лимфоциты трупной крови, сохраняющие способность участвовать в реакциях бласттрансформации и розеткообразо-вания. При смерти от механической травмы, механической асфиксии

и ИБС закономерное снижение этих показателей имеет экспоненциальную зависимость и позволяет использовать их для определения сроков давности наступления смерти (ДНС) в часовых интервалах.

2. Наибольшее судебно-медицинское значение для определения ДНС имеют показатели розеткообразования Т- и В-лимфоцитов. Давность смерти по этим показателям в течение трехсуточного посмертного периода определяется с точностью от 2 до 10 % от истинных сроков смерти.

2.1. Для практических целей разработаны два способа математической оценки иммунных показателей с раздельным и общим учетом комплекса влияющих факторов (см. п.2.2), а также диагностические таблицы для определения ДНС при одно- и двухразовом исследовании трупной крови.

2.2. С целью повышения эффективности диагностики предложены поправочные коэффициенты, учитывающие причину смерти, пол и возраст умершего, наличие этанола, температуру окружающей труп среды и температуру сохранения крови в лабораторных условиях.

3. Содержание иммуноглобулинов , А и. М в сыворотке трупной крови не имеет экспоненциальной зависимости, отличается снижением этого показателя в первые 3 часа после смерти, резким

его подъемом к 8-10 часам и большой вариабельностью в последующие часы раннего посмертного периода, во многом зависит от причины

смерти.

4. Для исследования иммунных показателей трупной крови наиболее рационально брать её из правой половины сердца, так как в этом участке сосудистого русла они выше, чем в левой его половине, аорте, яремной вене и бедренной артерии в течение 3-х суток посмертного периода.

5. На вторые - третьи сутки раннего посмертного периода в трупной крови преобладают полярные розетки с 3-4 эритроцитами, тогда как в первые сутки - формы морул и венчиков.

6. Независимо от наличия или отсутствия этанола в крови, взятой из трупа в первые двое суток после смерти, и хранившейся в лабораторных условиях при температуре + 18- 21°С у лимфоцитов способность к розеткообразованию сохраняется до 3 суток, а при температуре + 4 - 6°С - до Псуток.

7. С целью повышения эффективности диагностики для сохранения образцов трупной крови в лабораторных условиях целесообразно вводить в неё антибиотики в дозах, не превышающих 100000 ВД на 20 мл крови; введение в трупную кровь больших доз антибиотиков приводит к резкому угнетению или полному прекращению розеткообразованию у Т - и В-лимфоцитов.

Практические рекомендации

Анализ и оценка полученных результатов позволили обосновать применимость иммунных тестов трупной крови для судебно-медицинского определения давности наступления смерти.

В качестве иммунных жестов целесообразно использовать показатели розеткообразования Т- и В-лимфоцитов, в которых учитывается влияние на них причины смерти, возраста, наличие этанола и ряд других факторов и условий.

Определение сроков наступления смерти в раннем посмертном периоде возможно при заборе крови из трупа в течение 3 суток при отсутствии гнилостных явлений.

В качестве объекта исследования используется трупная кровь правой половины сердца, где показатели этих иммунных тестов выше, чем в крови из левой половины сердца, яремной вены, брюшного отдела аорты, бедренной артерии.

Оптимальными условиями хранения трупной крови являются условия холодильника при температуре + 4 - 6°С.

Для определения ДНС из отобранных образцов крови центрифугированием .выделяют лимфоциты и анализируют на способность к розеткообразованию по интервалам времени.

. Время наступления смерти определяется по данным двух измерений числа розеток лимфоцитов, при этом интервал времени между первым и вторым исследованием розеткообразования устанавливается не менее 6 часов.

Предлагаемымми способами время наступления смерти определяется в течение 3 суток посмертного периода с погрешностью + (2-10 %)_

Применение указанных способов не влечет за собой значительных материальных затрат.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1, Иммунологические методы исследования в решении вопроса прижизненности и давности повреждений. - Тезисы докладов У1 республиканской научной конференции судебно-медицинских экспертов УССР, Черновцы, 1981. с.52-53.

2. Состояние иммунной системы при черепно-мозговой травме в зависимости от сроков наступления смерти. - Тезисы докладов П Всесоюзного съезда судебных медиков, Минск, 1982,с.200-201.

3. О возможности определения прижизненное™ и давности механической травмы по состоянию иммунной системы. -В сб.: Судебно-медицинское установление механизма, прижизненности, последовательности и давности механических повреждений, М., 1983, с.43-45.

4. Применение иммунологических методов исследования для определения4 давности наступления смерти. - Судебно-медицинская экспертиза, М., 1984, № I, с.13-16.

5. Влияние температуры на устойчивость иммунных показателей Т- и В-лимфоцитов крови человека. - В сб.: Экспертные критерии механизма повреждений и диагностика давности их причинения, М., 1984, с.135-137.

6. Динамика некоторых иммунных показателей в зависимости от места взятия крови и давности смерти. - Судебно-медицинская экспертиза, М., № 4, с.8-9. ,.

7. Влияние температуры окружающей среды на динамику некоторых иммунных показателей крови в посмертном периоде. - Судебно-медицинская экспертиза, М., 1986, № I, с.15-16.

8. Иммунологический метод и давность наступления смерти. -Диагностика давности процессов в объектах судебно-медицинской экспертизы, Кишинев, 1986, с.20-21.

9. Реакция лимфоцитов к бласттрансформадии в ранние сроки после смерти. - Материалы П Всероссийского съезда судебных медиков (Тезисы докладов), Иркутск-Москва', 1987, с.236-237.

10. Значение содержания иммуноглобулинов сыворотки крови для дифференциальной диагностики причины смерти. - I съезд судебных медиков Украины (Тезисы докладов), Киев, 1987, с.49-50.

11. Иммунологический метод определения давности наступления смерти. - Ш Всесоюзный съезд судебных медиков (Тезисы докладов), Москва -Одесса, 1988, с.174-175.

Изобретения и рационализаторские предложения

I. Способ определения давности смерти. - Государственный ' комитет СССР по делам изобретений и открытий. Авторское свидетельство № 1202554 от 8.09.1985г.

, 2. Способ определения давности наступления смерти. - Госу дарственный комитет СССР по делам изобретений и открытий.Авторское свидетельство № 1332234 от 22.04.1987г.

3. Использование трупной крови и её сыворотки для решения вопроса о давности наступления смерти иммунологическим методом.-Отдел здравоохранения Ворошиловградского облисполкома. Удостов. № 195 от 22.11.1983г.

4. Модификация и использование способа выделения лимфоцитов из трупной крови для иммунологических исследований в целях установления давности наступления смерти. - Отдел здравоохранения Ворошиловградского облисполкома. Удостов. № 196 от 22Л1.1983г.

5. Усовершенствование и использование иммунологической реакции розеткообразования Т- и В-лимфоцитов трупной крови для установления давности наступления смерти. - Отдел здравоохранения Ворошиловградского облисполкома. Удостов. № 197 от 22.II.83г.

6. Модификация и использование реакции бласттрансформации лимфоцитов для установления ранних сроков наступления смерти.-Отдел здравоохранения Ворошиловградского облисполкома. Удостов. № 198 от 22.11.1983г.

7. Способ установления ДНС по иммунологическим показателям двухкратного исследования крови. - Отдел здравоохранения Ворошиловградского облисполкома. Удостов. № С2 от 24.02. 1986г.

8. Метод определения давности наступления смерти по иммунологическим показателям одноразового исследования крови.' Отдел здравоохранения Ворошиловградского облисполкома. Удостов. № 63 от 24.02.1986г.