Автореферат и диссертация по медицине (14.03.06) на тему:Особенности спектра жирных кислот эритроцитов у больных хронической формой ишемической болезни сердца при лечении симвастатином

На правах рукописи

КИРИЧЕНКО ДАРЬЯ АЛЕКСАНДРОВНА

ОСОБЕННОСТИ СПЕКТРА ЖИРНЫХ КИСЛОТ ЭРИТРОЦИТОВ У БОЛЬНЫХ ХРОНИЧЕСКОЙ ФОРМОЙ ИШЕМИЧЕСКОЙ БОЛЕЗНИ СЕРДЦА ПРИ ЛЕЧЕНИИ СИМВАСТАТИНОМ

14.03.06 - фармакология, клиническая фармакология 03.01.04 - биохимия

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

13 МАЙ 2015

Томск-2015

005568575

Работа выполнена на базе центральной научно-исследовательской лаборатории Государственного бюджетного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Красноярский государственный медицинский университет имени профессора В.Ф. Войно-Ясенецкого» Министерства здравоохранения Российской Федерации и в Федеральном государственном бюджетном научном учреждении «Научно-исследовательский институт фармакологии и регенеративной медицины имени Е.Д. Гольдберга»

Научный руководитель:

доктор медицинских наук, профессор, академик РАН,

заслуженный деятель науки РФ Дыгай Александр Михайлович

Научный руководитель:

кандидат медицинских наук Котловскнй Михаил Юрьевич

Официальные оппоненты:

Суханова Галина Алексеевна, доктор биологических наук, профессор, Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Сибирский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации, кафедра биохимии и молекулярной биологии, профессор кафедры Савченко Андрей Анатольевич, доктор медицинских наук, профессор, Федеральное государственное бюджетное научное учреждение «Научно-исследовательский институт медицинских проблем Севера», лаборатория клеточно-молекулярной физиологии и патологии, руководитель лаборатории

Ведущая организация: Федеральное государственное бюджетное научное учреждение «Научно-исследовательский институт кардиологии»

Защита состоится «_»_2015 г. в _часов на заседании диссертационного

совета Д 001.031.01 при Федеральном государственном бюджетном научном учреждении «Научно-исследовательский институт фармакологии и регенеративной медицины имени Е.Д. Гольдберга» (634028, г. Томск, пр. Ленина, 3; www.pharmso.ru)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Федерального государственного бюджетного научного учреждения «Научно-исследовательский институт фармакологии и регенеративной медицины имени Е.Д. Гольдберга»

Автореферат разослан « ¡и » 2015 г.

Ученый секретарь диссертационного совета, доктор биологических наук

Амосова Евдокия Наумовна

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы исследования. За последнее десятилетие ишемическая болезнь сердца (ИБС) занимает одно из ведущих мест в структуре смертности от болезней системы кровообращения (БСК), поэтому прогнозирование ее течения, эффективность терапии и профилактики является актуальной проблемой современной кардиологии. Наиболее значимыми факторами, влияющими на развитие сердечно-сосудистых заболеваний (ССЗ), являются нарушение липидного обмена, артериальная гипертензия, курение, питание, недостаточная физическая активность, ожирение, а также половая принадлежность [Драпкина О.М. и др., 2010; Бойцов С.А. и др., 2012; Яковлев В.М. и др., 2012].

Морфологической основой ИБС является атеросклеротическое поражение коронарных артерий. Механизм формирования атеросклероза связан с нарушением липидного обмена, в частности, повышенным уровнем триацилглицеролов (ТГЛ), холестерол-липопрогеинов низкой (ХС-ЛПНП), очень низкой плотности (ХС-ЛПОНП) и низким уровнем холестерол-липопротеинов высокой плотности (ХС-ЛПВП) [Буеверова Е.Л. и др., 2008; Косарев В.В. и др., 2010].

Доказательная база по эффективности, безопасности и переносимости статинов была получена благодаря многим контролируемым рандомизированным исследованиям с применением малых (10-20 мг), оптимальных (40 мг), а также максимальных (80-160 мг) доз препарата [Pin В. et al., 1999; Corti R. et al., 2005; Pedersen T.R. et al„ 2005; Miles J.M., 2006; Сусеков A.B., 2007; Сусеков A.B. и др., 2011]. Статины, помимо снижения синтеза холестерола, способны оказывать влияние на метаболизм жирных кислот (ЖК). Механизмы действия препарата связаны с интенсивным поглощением клетками транспортеров ЖК - ХС-ЛПНП, а также со способностью статинов оказывать влияние на экспрессию десатураз и элонгаз -ферментов, активирующих синтез длинноцепочечных ЖК [Rise P. et al., 1997; Zhou G. et al., 2010; Nozue T. et al., 2013]. Необходимо отметить, что ЖК, обеспечивая целостность биомембран, регулируя активность клеточных функций, участвуя в процессах энергообразования и воспаления, играют важную роль в патогенезе сердечно-сосудистых заболеваний [Титов, В.Н., 2002; 2004; Галявич А.С. и др., 2011].

Для больных высокого и очень высокого риска рекомендовано сразу выбирать максимально агрессивную тактику гиполшщцемической терапии [Reiner Z. et al., 2011]. В этом случае, одним из подходов к достижению целевого уровня липидных фракций является использование препаратов в максимально разрешенных дозах с последующим соблюдением контроля безопасности терапии [Марцевич С.Ю. и др., 2008]. Доказан положительный эффект статинов в стабилизации уровня атерогенных липидов в плазме крови, однако полностью отсутствуют данные о влиянии препаратов данной группы в разных дозировках на жирнокислотный состав мембран эритроцитов, который отражает содержание данного компонента в мембранах других клеток

организма. Исследование этого вопроса позволяет выявить роль ЖК в механизме фармакологического эффекта статинов.

Степень разработанности. Существуют экспериментальные данные о воздействии симвастатина на жирные кислоты в составе мембран клеточных линий моноцитов и гепатоцитов [Rise P. et al., 1997; Galli С., 2005]. Отмечено влияние симвастатина в дозе 20 мг/сутки на отдельные показатели эссенциальных ЖК в плазме крови у пациентов мужского пола с диагнозом ИБС [de Lorgeril М. et al., 2005], а также на содержание мононенасыщенпых и насыщенных ЖК у мужчин с гиперхолестеринемией [Jula A. et al., 2005]. Механизм действия симвастатина связывают не только со снижением концентрации ХС-ЛПНП, но и с преимущественным синтезом длинноцепочечных ЖК [Rise P. et al., 1997; Zhou G. et al., 2010; Nozue T. et al., 2013], а также образованием сывороточного альбумина, способствующего оттоку неэстерифицированных жирных кислот и холестерола из периферических тканей организма [Grundy S.M., 1994; На С.Е. et al., 2009]. В то же время, влияние исследуемого препарата в оптимальных и высоких дозах на жирнокислотный состав мембран эритроцитов остается менее изученным. Поскольку мембрана эритроцитов наиболее объективно отражает глубокие и долговременные изменения жирных кислот в составе фосфолипидов [Parks J.S. et al., 1989], а также является универсальной моделью плазматических мембран других клеток организма [Постнов Ю.В. и др., 1987], то является актуальным исследование особенностей спектра жирных кислот эритроцитов у больных ИБС при лечении разными дозами симвастатина.

Цель исследования. Выявить особенности спектра жирных кислот мембран эритроцитов у пациентов с ишемической болезнью сердца до и после лечения симвастатином в разных дозировках.

Задачи исследования:

1. Определить состав отдельных ЖК в мембранах эритроцитов у больных ИБС до и после лечения разными дозами симвастатина.

2. Оценить комплексные параметры ЖК эритроцитов по содержанию сумм насыщенных, мононенасыщенных, ненасыщенных ЖК, ЖК-субстратов мембран, глицерофосфолипидов, сфингофосфолипидов, витамина F, а также коэффициент эффективности метаболизации эссенциальных ЖК у больных ИБС до и после лечения разными дозами симвастатина.

3. Выявить зависимость содержания отдельных ЖК и их комплексов от принадлежности к полу и дозы симвастатина.

Научная новизна. Впервые исследован спектр отдельных ЖК мембран эритроцитов и разработаны комплексные характеристики ЖК у пациентов с ИБС до и после приема симвастатина. Показано влияние препарата на метаболизм ЖК клеточных мембран, которое характеризуется снижением суммы НЖК, индекса ненасыщенности (ИН), ЖК-субстратов мембран и повышением суммы НасЖК, мононенасыщенных ЖК (МНЖК) и ЖК-субстратов сфингофосфолипидов (СФЛ). После двухмесячной терапии симвастатином отмечена нормализация отдельных показателей соб НЖК (дигомо-у-линолевой (С20:2) ЖК у мужчин, арахидоновой (С20:4) ЖК у

женщин), ш9 - гондоиновой (С20:1) ЖК (у всех лиц, за исключением женщин, принимавших препарат в суточной дозе 40 мг), пальмитиновой (С 16:0), маргариновой (С 17:0), арахиновой (С20:0) НасЖК, ЖК-субстратов витамина F и глицерофосфолипидов (ГФЛ).

Впервые установлены изменения ЖК мембран эритроцитов в зависимости от пола и дозы препарата. Если у женщин прием препарата приводил к снижению отношения 20:3 со6+20:5 саЗ/22:6 ®3, то у мужчин - к повышению уровня дигомо-у-линолевой (С20:2) шб ЖК и гексакозановой (С26:0) ЖК. При лечении суточной дозой симвастатина равной 40 мг выявлено увеличение маргариновой (С17:0) ЖК, тогда как при лечении дозой 80 мг/сутки наблюдалось снижение пальмитиновой (С 16:0) ЖК.

В результате приема симвастатина выявлены различия по отдельным показателям и комплексам ЖК. У женщин терапия в суточной дозе 40 мг приводила к увеличению пентадекановой (С15:0) ЖК. Отмечено уменьшение содержания стеариновой (С 18:0) ЖК, соотношения С20:4 (об/С22:6 юЗ, коэффициента эффективности метаболизации (КЭМ) эссенциальньгх ЖК и увеличение соотношения сумм юЗ/юб у женщин после приема препарата в дозе 80 мг/сутки. Снижение суммы юЗ ЖК и увеличение миристиновой (С 14:0) ЖК выявлено у мужчин при лечении симвастатином дозой 40 мг/сутки.

Теоретическая и практическая значимость работы. Результаты исследования могут быть использованы в клинической практике для назначения оптимальных дозировок симвастатина, а также в комбинированной терапии с препаратами полиненасыщенных ЖК (ПНЖК) с целью улучшения терапевтического эффекта. По результатам исследования, в большинстве случаев, установлен равнозначный эффект от используемых дозировок препарата на отдельные показатели ЖК и их комплексные параметры, что указывает на предпочтительность использования симвастатина в меньшей дозе, с точки зрения экономической целесообразности, а также с целью предупреждения побочных эффектов от лечения в максимальных дозах, таких как миопатия, рабдомиолиз. Полученные результаты расширяют имеющиеся представления о спектре фармакологического действия симвастатина.

На основе исследования оформлены патенты (RU) на изобретения № 2503405 и «способ индивидуальной количественной оценки развития ишемической болезни сердца» и №2535025 «способ индивидуальной количественной оценки риска развития гипертонической болезни». Результаты исследования внедрены в научный процесс на кафедрах биологической химии с курсом медицинской, фармацевтической и токсикологической химии и фармакологии с курсами клинической фармакологии, фармацевтической технологии и курсом последипломного образования КрасГМУ.

Методология и методы исследования. Согласно поставленным задачам выбраны современные высокоинформативные методические подходы, имеющиеся в научно-исследовательской лаборатории ГБОУ ВПО КрасГМУ им. проф. В.Ф. Войно-Ясенецкого Минздрава России. В качестве объекта исследования были использованы образцы выделенных эритроцитов у пациентов мужского и женского пола с диагнозом ИБС до начала лечения и

через 2 месяца терапии симвастатииом в разных дозировках. В исследовании приметались лабораторные методы, включающие биохимический и развернутый анализ крови с целью исключения инфаркта миокарда, для оценки функционального состояния печени и почек, а также контроля побочных эффектов симвастатина. Состояние сердечно-сосудистой системы оценивалось с помощью функциональных методов, включающих электрокардиографию, велоэргометрию и эхокардиографию. Жирнокислотный состав мембран эритроцитов определяли методом газожидкостной хроматографии.

Положения, выносимые на защиту:

1. Симвастатии, у пациентов с ишемической болезнью сердца, не влияет на содержание заменимых ю7, незаменимых дигомо-у-линоленовой (С20:3) юб и тимнодовой (С20:5) юЗ жирных кислот. Реализация фармакологического эффекта происходит за счет нормализации производных юб жирных кислот (дигомо-у-линолевой (С20:2) у мужчин, арахидоновой (С20:4) у женщин), со9 гондоиновой (С20:1) (за исключением женщин при лечении дозой 40 мг/сутки), уровня насыщенных жирных кислот (пальмитиновой (С 16:0), маргариновой (С17:0), арахиновой (С20:0)), жирных кислот-субстратов витамина F и субстратов глицерофосфолипидов.

2. Снижение уровня холестерола-липопротеинов низкой плотности, а также взаимные превращения жирных кислот, на фоне лечения, являются причинами уменьшения содержания пальмитиновой (С16:0) и олеиновой (С18:1) ю9 жирных кислот и повышения отдельных длинноцепочечных и суммы насыщенных жирных кислот, мононенасыщенных за счет заменимых а>9 жирных кислот, а также жирных кислот-субстратов сфингофосфолипидов. Дефицит незаменимых юб жирных кислот не компенсируется повышением ю9 жирных кислот и приводит к уменьшению суммы ненасыщенных жирных кислот, индекса ненасыщенности и жирных кислот-субстратов мембран.

3. В большинстве случаев (75%), у пациентов с ишемической болезнью сердца, влияние симвастатина в вышеуказанных дозах вызывало Одинаковые эффекты на исследуемые параметры жирных кислот. Наличие изменений по их отдельным показателям у женщин, связанных с уменьшением коэффициента эффективности метаболизации эссенциальных жирных кислот после лечения дозой 80 мг/сутки, а у мужчин - с повышением уровня гексакозановой (С26:0) жирной кислоты, указывает на предпочтительность использования более низкой дозы препарата.

Степень достоверности и апробация результатов. Высокая степень достоверности полученных результатов подтверждается достаточным объемом экспериментального материала с привлечением современных лабораторных и инструментальных методов, а также использованием адекватных критериев статистического анализа.

Результаты исследования представлены на международных научных конференциях «Современные проблемы экспериментальной и клинической медицины» (Банкок, 2009), «Фундаментальные и прикладные исследования в медицине» (Сочи, 2011), «Фундаментальные и прикладные проблемы медицины и биологии» (Дубай, 2012). Основные положения работы доложены

и обсуждены на заседании проблемной комиссии по «Фундаментальной медицине» на кафедре биологической химии с курсом медицинской, фармацевтической и токсикологической химии ГБОУ ВПО КрасГМУ им. проф. В.Ф. Войно-Ясенецкого Министерства здравоохранения РФ (Красноярск, 2014) и ФГБУ «НИИ фармакологии» СО РАМН (Томск, 2014).

По теме диссертации опубликовано 11 печатных работ, из них 8 - в рецензируемых журналах, рекомендованных ВАК Минобрнауки РФ.

Объем и структура работы. Диссертация написана в традиционном стиле и состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований изложенных в третьей главе, заключения и выводов. Работа изложена на 160 страницах компьютерного текста, содержит 27 таблиц и 15 рисунков. Библиографический список включает 442 источника, из них 167 отечественных и 255 иностранных.

Личное участие автора состояло в сборе, проведении исследования, анализе полученных результатов для диссертационной работы. Автором лично осуществлен анализ литературных данных, получение и интерпретация основных результатов исследования, их статистическая обработка и подготовка к печати статей и тезисов по теме диссертации.

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Во введении обоснована актуальность темы диссертации, сформулированы цель и задачи исследования, научная новизна, теоретическая и практическая значимость работы.

В первой главе проведен анализ отечественной и зарубежной научной литературы по теме диссертации. В первом разделе представлены сведенья об эпидемиологии и этиологии ИБС, изложены основные представления о патогенезе атеросклероза. Представлены основные данные клинических исследований по эффективности лечения статинами пациентов с гиперлипидемией и ИБС, механизмы основного и плейотропных эффектов, а также побочные действия от приема препаратов данной группы. Последние разделы посвящены роли жирных кислот и их метаболитов в развитии и формировании сердечно-сосудистой патологии.

Вторая глава диссертации посвящена описанию материалов и методов исследования. Оценка эффектов симвастатина проведена у 95 пациентов с диагнозом ИБС (37 женщин и 58 мужчин), жителей города Красноярска, в рамках открытого, рандомизироваштого, контролируемого и параллельного исследования продолжительностью 2 месяца на базе ЦНИЛ ГБОУ ВПО КрасГМУ им. проф. В.Ф. Войно-Ясенецкого Минздрава России и КГБУЗ «КМКБ № 20 имени И.С. Берзона» г. Красноярска. Исследование утверждено на заседании локального этического комитета ГБОУ ВПО КрасГМУ им. проф. В.Ф. Войно-Ясенецкого Минздрава России (выписка из протокола №12/2008 от 26 ноября 2008 г.). Средний возраст женщин составлял 56,2±б,3 лет, мужчин -55,2±6,1 лет. Критериями включения в основную группу являлись: возраст - от 40 до 70 лет, пол - мужчины и женщины, верифицированный диагноз ИБС

(стенокардия напряжения 1-2 функционального класса и инфаркт миокарда давностью более 6 месяцев), наличие дислипидемии (Па, Пв, III, IV типов, при ОХ > 5,2 мМ/л, ТГ > 1,7 мМ/л), неэффективность гиполипидемической (гипохолестериновой) диеты, добровольное информированное согласие на участие в исследовании. Критериями исключения пациентов из исследования являлись: инфаркт миокарда, прогрессирующая стенокардия, острое нарушение мозгового кровообращения и транзиторная ишемическая атака, тромбоэмболия легочной артерии менее чем за 6 месяцев до обследования, стенокардия напряжения 3-4 функционального класса, тяжелые нарушения функции печени, почек, острые и хронические заболевания в стадии обострения, ожирение более 1 степени, сахарный диабет 1-го и 2-го типа тяжелой степени, гипотиреоидизм, порфирия, миопатия, повышенная активность ферментов аспартатаминотрансферазы (AJIT) и аланинаминотрансферазы (ACT) более 3 верхних пределов норм и злоупотребление алкоголем.

Критерии преждевременного прекращения исследования включали выраженные побочные эффекты от приема симвастатина и отсутствие дальнейшего желания к сотрудничеству.

Группу контроля составили условно здоровые лица в количестве 51 человека (31 женщина и 20 мужчин), жителей города Красноярска, результаты исследования которых принимались за норму. Средний возраст женщин составлял 49,4±5,6 лет, мужчин — 47,6±7,7 лет. Критериями включения для данной группы являлись: возраст - от 40 до 65 лет, пол - мужчины и женщины. Критериями исключения являлись: наличие ИБС, острые заболевания, хронические заболевания в стадии обострения, наличие сахарного диабета, нарушения липидного обмена, тяжелые нарушения функции печени и почек, артериальная гипертензия.

Все больные получали рекомендации по соблюдению гиполипидемической диеты и базисную терапию антиангинальными и гипотензивными препаратами ф-адреноблокаторы, антагонисты кальция, нитраты, ингибиторы ангиотензин-превращающего фермента), антиагреганты по показаниям (ацетилсалициловую кислоту), диуретики, а также сахароснижающие препараты у пациентов с диагнозом НТУ и сахарный диабет.

Клиническая характеристика обследованных лиц представлена в таблице 1.

Таблица 1

Общая клиническая характеристика исследуемых групп

Показатели Основная группа Контрольная группа

абс.число % абс.число %

1 2 3 4 5

Количество пациентов 95 100 51 100

Пол Женщины 37 39 31 61

Мужчины 58 61 20 39

Продолжение таблицы 1

1 2 3 4 5

Средний возраст (лет) 55,53±6,17 48,53±6,33

Гипертоническая болезнь (III стадия) 36 38 0 0

Достигнутый целевой уровень АД 24 67 0 0

Достигнутая степень АГ 1 12 33 0 0

Стенокардия напряжения: 95 100 0 0

IФК 28 29 0 0

II ФК 67 71 0 0

III ФК 0 0 0 0

IV ФК 0 0 0 0

Постинфарктный кардиосклероз 95 100 0 0

НТУ и сахарный диабет 15 16 0 0

Целевой уровень АД, равный величине менее 140/90 мм.рт.ст., был достигнут у большинства пациентов основной группы.

После месяца отсутствия гиполипидемической терапии первая подгруппа больных ИБС в количестве 48 человек (20 женщин и 28 мужчин) в течение 2-х месяцев получала препарат «СимваГЕКСАЛ®», с действующим веществом симвастатин в дозировке 40 мг/сутки. Средний возраст данной подгруппы составлял 58,3±6,0 лет у женщин и 56,1±6,8 лет у мужчин. Вторую подгруппу больных ИБС составили 47 пациентов (17 женщин и 30 мужчин), которым назначали данный препарат в дозировке 80 мг/сутки. Средний возраст женщин данной подгруппы составил 52,9±5,6 лет, у мужчин 54,4±5,5 лет. Выбор используемого дженерика определялся высокой степенью соответствия по эффективности и безопасности влияния на уровень липидов оригинальному препарату [Аронов Д.М. и др., 2003; Марцевич С.Ю., 2006; 2008]. При назначении симвастатина в дозировке 40 мг/сутки, с целью предупреждения осложнений, после месяца приема осуществляли контроль над соблюдением рекомендаций, проводили развернутый и биохимический анализ крови, тогда как при лечении дозой 80 мг/сутки контроль в первый месяц исследования осуществлялся раз в две недели.

Общеклиническое обследование на ранних этапах работы включало опрос, физикальный осмотр, определение антропометрических параметров тела (рост, масса, индекс массы тела, отношение окружности талии и окружности бедер и др.).

Для оценки функционального состояния печени и почек у пациентов, а также для контроля за побочными эффектами симвастатина, проводили биохимический анализ сыворотки крови на автоматическом анализаторе «Star Fax 1904+» (США), включающий определение уровня глюкозы, альбумина, общего белка, мочевой кислоты, креатинина, мочевины, общего и прямого билирубина, активности АЛТ, ACT, креатинфосфокиназы, а-амилазы, щелочной фосфатазы и лактатдегидрогеназы. Для оценки липидного обмена определяли уровни общего холестерола (ОХ), ТТЛ и ХС-ЛПВП. Содержание ХС-ЛПНП и ХС-ЛПОНП рассчитывали по формуле Фридвальда (1972)

[Friedwald W.T. et al., 1972]. Для расчета коэффициента атерогенности (КА) применяли формулу Климова (1999) [Климов А.Н. и др., 1999]. Развернутый анализ крови проводили на гематологическом анализаторе «Medonic СА 620» (Швеция). Состояние углеводного обмена оценивали с помощью теста толерантности к глюкозе [Дедов И.И. и др., 2003].

Исследование состояние сердечно-сосудистой системы включало электрокардиографию (ЭКГ), велоэргометрию (ВЭМ) на базе диагностической системы «Валента» (Россия) и эхокардиографию (ЭхоКГ) на аппарате УЗ диагностики «Aloka 900» (Япония).

Жирнокислотный состав эритроцитов определяли методом газожидкостной хроматографии с предварительной пробоподготовкой [Ланкин В.З. и др., 1971]. Очистку ЖК проводили методом тонкослойной хроматографии [Ruggieri S., 1962]. Для определения и количественного анализа эфиров ЖК использовали газожидкостный хроматограф «Agilent technologies 6890N» и масс-спектрометр «Agilent technologies 5975С VL MSD» (США). Разделение смеси эфиров ЖК производили на капиллярной колонке «OMEGA WAX ТМ» (США) длинной — 30 м, внешним диаметром — 0,25 мм и толщиной пленки — 0,25 мкм.

Идентификацию ЖК осуществили на основании времен удерживания стандартных образцов ЖК и «библиотек» масс-спектрометрических параметров «NIST MS Search 2.0» и «AMDIS Analysis» с применением компьютерной программы «MSD ChemStation D.02.00.275» (США) по методу нормализации пиков. Единицы измерения ЖК выражались в процентах от общей суммы площадей пиков ЖК.

Проведено исследование содержания отдельных НЖК и НасЖК и их суммарных показателей. В сумму мононенасыщенных ЖК входили заменимые ЖК такие, как С16:1 со7, С18:1 а>9, С18:1 ю7, С20:1 со9, С22:1 со9, С24:1 ю9 ЖК. В качестве интегрального показателя, указывающего на перераспределение ЖК состава, использовался индекс ненасыщенности (ИН), рассчитанный как отношение процентного содержания НЖК к НасЖК умноженное на 100. Содержание в клетках ЖК-субстратов витамина F вычисляли как сумму незаменимых ЖК, включающую С18:2 саб, С18:3 юЗ, С20:4 юб, С20:5 соЗ, С22:6 юЗ ЖК [Ford E.S. et al., 2000; Таганович А.Д., 2008]. Содержание ЖК-субстратов ГФЛ рассчитывали как сумму С14:0, С16:0, С18:0, С20:0, С22:0, со7 ЖК - С16:1, С18:1, са9 ЖК - С18:1, С20:1, габ ЖК - С18:2, С20:2, С20:3, С20:4 и шЗ ЖК - С18:3, С20:5, С22:6 ЖК. Состав ЖК-субстратов СФЛ рассчитывали как сумму С24:0 и С24:1 ЖК. В качестве субстратов мембран эритроцитов использовали процентное содержание НЖК с 2-мя и более двойными связями ЖК [Казимирко В.К., 2004; Титов В.Н. и др., 2006].

Способность ЖК, в составе липидов, наиболее полно обеспечивать синтез структурных компонентов клеточных мембран характеризовал коэффициент эффективности метаболизации (КЭМ) ПНЖК, рассчитанный как отношение С20:4/ С20-С22 шб и юЗ [Нечаев А.П., 2007].

Статистическую обработку полученных результатов проводили с использованием пакета прикладной программы «SPSS 11.5». Проверку

нормальности распределения показателей осуществляли с помощью теста Колмогорова-Смирнова и Шапиро-Уилкоксона. С учетом значительных отклонений отдельных значений процентного содержания ЖК мембран эритроцитов была сформирована группа из 69 пациентов (26 женщин и 43 мужчины), из которых первая подгруппа в количестве 34 человек (14 женщин и 20 мужчин), принимала симвастатин в дозе 40 мг/сутки, тогда как вторая - в количестве 35 человек (12 женщин и 23 мужчины) принимала препарат в дозе 80 мг/сутки. Для оценки достоверности различий несвязанных выборок использовали ^критерий Стьюдента-Фишера. Для сравнения изменений между группами больных ИБС до и после лечения использовали Т-тест Стьюдента для парных выборок. Различия сравниваемых величин считали достоверными при уровне значимости р<0,05.

Третья глава диссертации посвящена описанию полученных результатов влияния симвастатина на содержание жирных кислот мембран эритроцитов. Числовые данные представлены в виде таблиц и рисунков.

Четвертая глава диссертации посвящена обсуждению полученных результатов исследования с привлечением литературных данных.

Влияние симвастатина на липидный спектр сыворотки крови у исследуемых пациентов

Первый раздел исследований предусматривал изучение исходных показателей липидного профиля сыворотки крови у больных ИБС в сравнении с таковыми в контрольной группе. Результаты показали более высокий уровень ХС-ЛПНП, ХС-ЛПОНП, ТТЛ, ОХ и показателя КА. Только у женщин отмечено снижение уровня ХС-ЛПВП (Таблица 2).

Таблица 2

Показатели липидного спектра сыворотки крови у лиц, условно здоровых и

больных хронической формой ИБС (М±т)

Липидный спектр крови Содержание в мМ/л

женщины мужчины

условно здоровые (п=31) больные ИБС (п=23) условно здоровые (п=20) больные ИБС (п=43)

1 2 3 4 5

ТТЛ 0,96±0,05 1,94±0,10 *** 1,05±0,06 1,47±0,09***

ХС-ЛПВП 1,48±0,06 1,31 ±0,05* 1,21±0,03 1,33±0,05

ХС-ЛПНП 3,27±0,11 3,90±0,26* 2,95±0,11 3,42±0,19*

ХС-ЛПОНП 0,49±0,03 0,93±0,11*** 0,49±0,04 0,67±0,04**

ОХ 5,00±0,11 5,90±0,29* 4,70±0,15 5,22±0,15*

КА 4,18±0,11 4,93±0,30* 3,86±0,16 4,35±0,17*

Примечание: Здесь и далее: М - среднее значение, т - ошибка среднего; п - количество пациентов; звездочками обозначена степень достоверности отличий сравниваемых значений (* ,** и *** соответствуют р<0,05, р<0,01, р<0,001), КА-коэффициент атерогенности в у.е.

Все изменения липидного спектра согласуются с представлениями о наличии гиперлипидемии у исследуемых лиц [De Backer G. et al., 2003; Grundy

S.M., 2004; Нарышкина C.B. и др., 2005; Сусеков A.B., 2007; Буеверова E.JI. и др., 2008; Лиходед В.Г. и др., 2010].

На фоне приема симвастатина в дозировке 40 мг/сутки у женщин выявлено снижение уровня ХС-ЛПНП на 50%, ОХ на 31% и КА на 36,4% по сравнению с исходными данными (Рисунок 1).

мМ/л

8 *** *** х*

тгл хслпвп хслпнп хслпонп ОХ КА

Н женщины с ИБС, исходно □ женщины с ИБС, лечение в дозе 40 мг/сутки

И мужчины с ИБС, исходно □ мужчины с ИБС, лечение в дозе 40 мг/сутки

Рисунок 1 - Изменение липидного спектра сыворотки крови у больных ИБС после приема симвастатина в дозе 40 мг/сутки.

Примечание. Здесь и далее: значимые отличия между исследуемыми группами * -р<0,05; ** -р <0, 01 ***-р<0,001 - по сравнению с больными ИБС, до приема препарата

У мужчин лечение суточной дозой 40 мг приводило к снижению показателей ТГЛ на 16,7%, ХС-ЛПНП на 34%, ОХ на 25% и КА на 25,6% относительно исходных значений (Рисунок 1).

После приема препарата в дозировке 80 мг/сутки у женщин снизился уровень ХС-ЛПНП на 39,1%, ОХ на 29,4% и КА на 36,6% по сравнению с исходными показателями (Рисунок 2).

3 жени^ны с ИБС, исходно ¡ мужчины с ИБС, исходно

Ш женщины с ИБС, лечение в дозе 80 мг/сутки □ мужчины с ИБС, лечение в дозе 80 мг/сутки

Рисунок 2 - Изменение липидного спектра сыворотки крови у больных ИБС после приема симвастатина в дозе 80 мг/сутки.

На фоне проведенной терапии симвастатином в дозе 80 мг/сутки у мужчин уровень ТТЛ снизился на 23,7%, ХС-ЛПНП на 54%, ХС-ЛПОНП на 23,4%, ОХ на 30% и КА на 38,3% по сравнению с исходным.

Анализ литературных данных подтвердил наличие гиполипидемического эффекта симвастатина, который характеризовался снижением уровня атерогенных липидных фракций сыворотки крови [Group SSSS, 1994; Collins R. et al., 2002]. Стоит отметить, что в группе мужчин эффект от лечения характеризовался более выраженным снижением уровня ОХ, ХС-ЛПНП, КА,

ТТЛ и дополнительным уменьшением фракции ХС-ЛПОНП при лечении дозой 80 мг/сутки, чем при меньшей дозе препарата. В то же время в группе женщин не наблюдалось дозозависимого эффекта на показатели липидного спектра.

В результате приема симвастатина в течение 2 месяцев целевой уровень ОХ (<5 мМоль/л) был достигнут у 77% женщин и у 100% мужчин, при лечении дозой 40 мг/сутки, у 50% женщин и у 91% мужчин, после лечения суточной дозой 80 мг. Целевой уровень ХС-ЛПНП (<1,8 мМоль/л) был достигнут у 55% женщин и у 33% мужчин, после приема дозы 40 мг/сутки, у 33% женщин и 55% мужчин, в результате лечения дозой 80 мг/сутки. Целевой уровень ТТЛ (<1,7 мМоль/л) был достигнут у 22% женщин и у 60% мужчин, при лечении дозой 40 мг/сутки, у 80% у женщин и у 67% мужчин, при лечении более высокой дозой препарата.

Влияние симвастатина на содержание соЗ НЖК в мембранах эритроцитов

Второй раздел исследований связан с оценкой влияния симвастатина на содержание ЖК мембран эритроцитов. Как видно из рисунка 3, симвастатин не оказывал влияния на уровень тимнодовой (С20:5) соЗ ЖК у исследуемых лиц. Необходимо отметить, что данный показатель был низким до назначенного лечения (у женщин 0,66±0,05% при норме 0,85±0,06%, р<0,05; у мужчин 0,68±0,05% при норме 0,95±0,11%, р<0,05).

С20:5шЗ

□ женщины с ИБС, исходно

□ женщины с ИБС, исходно 0 мужчины с ИБС, исходно 0 мужчины с ИБС, исходно

С22:6шЗ

сумма u)3

И женщины с ИБС, лечение в дозе 40 мг

□ женщины сИБС.лечениев дозе 80 мг 0 мужчины с ИБС, лечение в дозе 40 мг

□ мужчины с ИБС, лечение в дозе 80 мг

Рисунок 3 - Изменение соЗ НЖК мембран эритроцитов у больных ИБС на фоне терапии симвастатином.

Примечание: Здесь и далее: результаты до и после лечения получены на связанных выборках. Звездочками обозначена степень достоверности отличий сравниваемых значений (* ,** и *** соответствуют р<0,05, р<0,01, р<0,001.

Данные литературы свидетельствуют о том, что дефицит С20:5 ЖК связан с нарушением обмена эссенциальных ЖК и риском развития ИБС [Albert С.М. et al., 2002; Harris W.S. et al„ 2004; Rizzo A.M. et al., 2010; Ohnishi H. et al., 2013], а также со снижением противовоспалительной защиты [Farrow J.W. et al., 1975; Эндакова Э.А., 2002].

После проведенного лечения суммарный уровень соЗ ЖК не изменялся и соответствовал исходному показателю у всех лиц за исключением мужчин, у которых прием препарата в суточной дозе 40 мг приводил к снижению суммы за счет цервоновой (С22:6) соЗ ЖК (Рисунок 3). Дефицит соЗ ЖК может

указывать на слабое проявление защитного, антиатероматозного действия ПНЖК в специализированных клетках организма [Barben M.L. et al., 1997].

Влияние симвастатина на содержание юб НЖК в мембранах эритроцитов

Независимо от пола пациента и дозы препарата выявлено снижение процентного содержания линолевой (С18:2) соб ЖК, арахидоновой ЖК (С20:4) шб ЖК и суммарного уровня соб ЖК (Рисунок 4). При этом до начала лечения показатель последнего был выше такового в группе контроля за счет повышенного уровня линолевой (С 18:2) соб ЖК у мужчин (10,24±0,22% при норме 8,98±0,32%, р<0,01) и арахидоновой ЖК (С20:4) соб ЖК у женщин (15,77±0,30% при норме 13,94±0,25%, р<0,01). В результате терапии полученные изменения приводили к нормализации исследуемых показателей.

С18:2ш6 С20:4ш6

□ женщины с ИБС, исходно

□ женщины с ИБС, исходно 0 мужчины с ИБС, исходно

□ мужчины с ИБС, исходно

сумма шб

О женщины с ИБС, лечение в дозе 40 мг

□ женщины с ИБС, лечение в дозе 80 мг ш мужчины с ИБС, лечение в дозе 40 мг

□ мужчины с ИБС, лечение в дозе 80 мг

С20:2ь>6

С20:3ш6

Рисунок 4 - Изменение соб НЖК мембран эритроцитов у больных ИБС на фоне терапии симвастатином.

Кроме этого, после лечения мужчин, независимо от дозы препарата, выявлен рост показателя дигомо-у-линолевой (С20:2) соб ЖК (Рисунок 4), уровень которого был ниже до назначенного приема симвастатина у всех пациентов основной группы (у женщин 0,29±0,02% при норме 0,38±0,02%, р<0,01; у мужчин 0,33±0,01% при норме 0,38±0,02 %, р<0,05).

Дефицит С 18:2 ЖК после приема статинов подтвержден ранними исследованиями [Jula A. et al., 2005; Rise P. et al., 2005; Галявич A.C. и др., 2011; de Lorgeril M. et al., 2013] и, вероятно, связан с уменьшением в кровотоке основного транспортера - ХС-ЛПНП. Возможен механизм влияния симвастатина на активность Аб-десатуразы в клетках печени [Notarbartolo A. et al., 1995; Rise P. et al., 1997; Ferretti A., et al. 1997; Zhou G., et al., 2010; Nozue T. et al., 2013] и синтез в избыточном количестве дигомо-у-линолевой (С20:2) соб из предшественника [Huang Y. et al., 2011], отмеченный в группе мужчин (Рисунок 4). По литературным данным, С20:2 является ингибитором фермента циклооксигеназы 2 [Huang Y., 2011], участвующего в продукции простаноидов с сосудосуживающими и агрегационными эффектами из арахидоновой (С20:4) соб ЖК [Эндакова, Э. А.,2002; Novgorodtseva Т.Р. et al., 2010], что, вероятно, является механизмом антивоспалительного эффекта симвастатина.

У всех исследуемых пациентов, после проведенной терапии симвастатином, не выявлено достоверных изменений по содержанию дигомо-у-линоленовой (С20:3) соб ЖК (Рисунок 4), как и до назначенной терапии.

Влияние симвастатина на соотношения НЖК в мембранах эритроцитов

Показатели соотношений 20:4 со6/22:6 соЗ, С20:3 со6+С20:5 ооЗ/С22:6 соЗ, 20:4 со6/20:5 соЗ и сумм соЗ/соб у мужчин после терапии симвастатином не имели достоверных отличий относительно исходных значений (Рисунок 5).

До начала приема симвастатина у женщин показатель соотношения 20:3 со6+20:5 соЗ/22:6 соЗ соответствовал таковому в группе контроля, однако, наблюдалось его снижение после лечения в исследуемых дозах препарата (Рисунок 5). Данные изменения указывают на преобладающее содержание в клетках организма ингибитора синтеза простаноидов 1 серии с антивоспалительными и тромболитическими свойствами [Farrow J.W. et al., 1975].

С20:4 ш6/С22:6 шЗ С20:Зш6+С20:5шЗ/С22:6шЗ С20Л ш6/С20:5 шЗ сумма шз/сумма шб

□ женщины с ИБС, исходно □ женщины с ИБС, лечение в дозе 40 мг

0 женщины с ИБС, исходно □ женщины с ИБС, лечение в дозе 80 мг

0 мужчины с ИБС, исходно ЕЭ мужчины с ИБС, лечение в дозе 40 мг

О мужчины с ИБС, исходно □ мужчины с ИБС, лечение в дозе 80 мг

Рисунок 5 - Изменение соотношений НЖК мембран эритроцитов у больных ИБС на фоне терапии симвастатином.

В тоже время, в рассматриваемой группе до назначения терапии были отмечены более высокие показатели соотношений 20:4 со6/22:6 юЗ (2,59±0,11% при норме 2,31 ±0,09%, р<0,05) и 20:4 ш6/20:5 соЗ (23,17±2,12% при норме 17,44±1,60, р<0,05), что может указывать на сдвиги в системе синтеза эйкозаноидов в сторону избыточного образования простаноидов 2-й серии и лейкотриенов 4-й серии, проявляющих вазоконстрикторные и агрегационные свойства [Мевх Т.А. и др., 1990; Holler С. et al., 1996; Новгородцева Т.П. и др., 2001; Конь И.Я. и др., 2006; Ohnishi Н. et al., 2013], тем самым обусловливая негативную роль в развитии патологии. Кроме того, отмечалось пониженное соотношение сумм соЗ/соб ЖК (24,61±1,02% при норме 28,42±1,42%, р<0,05), а значит нарушение метаболизма ЖК а>3 ряда за счет роста уровня его ингибитора - соб ЖК [Новгородцева Т.П. и др., 1993].

Вероятно, проявление антивоспалительного эффекта симвастатина отражено в снижении соотношения С20:4 со6/С22:6 соЗ, которое прослеживалось у женщин после лечения симвастатином в дозе 80 мг/сутки.

Увеличение соотношения сумм соЗ/соб ЖК в данной группе является признаком относительного преобладания в мембранных фосфолипидах соЗ НЖК (Рисунок 7).

Влияние симвастатина на содержание а>7 НЖК в мембранах эритроцитов

Не наблюдалось достоверных отличий по содержанию пальмитолеиновой (С 16:1) со7 ЖК, вакценовой (С 18:1) оо7 ЖК и сумме со7 ЖК у пациентов после приема симвастатина по сравнению с исходным уровнем (Рисунок 6), также как между контрольной и основной группой до начала лечения.

1,4

1,2

0,6 0,4

О Пч-ХТХУ

С16:1ш7 а женщины с ИБС, исходно и женщины с ИБС, исходно "1 мужчины с ИБС, исходно Ш мужчины с ИБС, исходно

С18:1ы7

□ женщины с ИБС, лечение в дозе 40 мг 0 женщины с ИБС, лечение в дозе 80 мг Е мужчины с ИБС, лечение в дозе 40 мг И мужчины с ИБС, лечение в дозе 80 мг

сумма ю7

Рисунок 6 - Содержание со 7 НЖК мембраны эритроцитов у больных ИБС на фоне терапии симвастатином.

Влияние симвастатина на содержание ю9 НЖК в мембранах эритроцитов

Во всех группах после назначенной терапии выявлено снижение процентного содержания олеиновой (С 18:1) со9 ЖК (Рисунок 7) и рост уровня гондоиновой (С20:1) со9 ЖК, нервоновой (С24:1) оо9 ЖК и показателя суммы со9 ЖК относительно исходных значений (Рисунок 7). При этом, до начала лечения, уровень двух последних соответствовал контролю, в то время, как содержание гондоиновой (С20:1) со9 ЖК было ниже такового (у женщин 0,18±0,01% при норме 0,33±0,02%, р<0,001; у мужчин 0,21±0,01% при норме 0,28±0,01%, р<0,01). Необходимо отметить, что полученные изменения приводили к нормализации гондоиновой ЖК у всех исследуемых лиц, за исключением женщин, у которых, после приема препарата в суточной дозе 40 мг, содержание ЖК оставалось ниже нормы (0,18±0,01% при норме 0,33±0,02%, р<0,001).

Дефицит олеиновой (С18:1) со9 ЖК в мембранах клеток в результате лечения симвастатином подтвержден ранними исследованиями [Reaven P.D. et al., 1994] и, возможно, является следствием не только снижения уровня ХС-ЛПНП, но и недостатком первичного субстрата эндогенных предшественников - пальмитиновой ЖК [Rise Р., 1997; Jula A. et al., 2005]. Способностью симвастатина активировать экспрессию ферментов Д5 и Дб-десатураз с образованием длинноцепочечных со9 ЖК также объясняется недостаток олеиновой ЖК. Необходимо отметить, что в составе ХС-ЛПНП

рассматриваемый метаболит, благодаря наличию единственной двойной связи, понижает восприимчивость к окислению, а в составе ХС-ЛПВП повышает текучесть, стимулируя отток холестерина из клеток [Ginsberg H.N. et al., 1994; Nydahl, M.C. et al., 1994; Kris-Etherton P.M. et. al., 1997], а также является одним из основных субстратов получения энергии в митохондриях тех клеток организма, где реализован процесс окисления ЖК [Титов В.Н., 2013].

В научной литературе отсутствуют сведения об изменении нервоновой ЖК под влиянием статинов, однако доказано ранее, что метаболит обратно коррелирует с потреблением НасЖК [Takkunen М. et al., 2013] и оказывает положительное профилактическое воздействие на ССЗ [Deutschman D.H. et al., 2003; Oda E. et al., 2005]. Очевидно, нервоновая ЖК влияет на повышение функциональной активности сфинголипидов, которые, в составе молекул антигенов и рецепторов, участвуют в регуляции адгезии, роста клеток и иммунологических процессах [Jin F.Y. et al., 1998; Li Z. et al., 2005; Комов В.П. и др., 2008].

C18:1 ш9

сумма w9

3 женщины с ИБС, исходно

2 женщины с ИБС, исходно

3 мужчины с ИБС, исходно з мужчины с ИБС, исходно

□ женщины с ИБС, лечение в дозе 40 мг

□ женщины с ИБС, лечение в дозе 80 мг а мужчины с ИБС, лечение в дозе 40 мг [3 мужчины с ИБС, лечение в дозе 80 мг

Рисунок 7 - Изменение со9 НЖК в мембране эритроцитов больных ИБС на фоне терапии симвастатином.

В результате лечения наблюдался рост суммарного содержания со9 ЖК (Рисунок 7), направленный на компенсацию снижения уровня соб НЖК путем «замены» экзогенных НЖК на эндогенные длинноцепочечные МНЖК. Увеличение же афизиологичных со9-эйкозаноидов с выраженными провоспалительными, агрегационными и вазоконстрикторными свойствами [Титов В.Н., 2002] может являться «платой» за эту компенсацию.

Влияние симвастатина на содержание НасЖК в мембранах эритроцитов

У мужчин лечение симвастатином в дозе 40 мг/сутки не сказывалось на изменении пальмитиновой (С 16:0) ЖК, тогда как в остальных группах выявлено снижение данного показателя относительно исходного уровня (Рисунок 8). Необходимо уточнить, что уровень данного показателя у пациентов до приема симвастатина был выше относительно полученного в контрольной группе (у женщин 15,27±0,30% при норме 11,43±0,64%, р<0,001; у мужчин 14,50±0,29% при норме 11,13±0,50%, р<0,001), что согласуется с литературными данными [АИтап-РаппеШ М.А. й. а1., 2005; Осипенко А.Н.,

2012]. В результате проведенной терапии выявлена нормализация по содержанию С 16:0 ЖК во всех исследуемых группах.

У женщин, после проведенной терапии дозой препарата 80 мг/сутки, отмечалось снижение стеариновой (С 18:0) ЖК относительно исходного уровня (Рисунок 8).

С16.0

С18.0

□ женщины с ИБС, исходно 0 женщины с ИБС, исходно В мужчины с ИБС, исходно & мужчины с ИБС, исходно

П женщины с ИБС, лечение в дозе 40 мг □ женщины с ИБС, лечение в дозе 80 мг @ мужчины с ИБС, лечение в дозе 40 мг ш мужчины с ИБС, лечение в дозе 80 мг

Рисунок 8 - Изменение пальмитиновой (С16:0) и стеариновой (С18:0) НасЖК в мембране эритроцитов больных ИБС на фоне терапии симвастатином.

Поскольку избыток пальмитиновой ЖК способен вызывать провоспалительные реакции и инициировать начало апоптоза эндотелиальных клеток аорты человека [Harvey К.А. et al., 2010], способствуя прогрессированию атеросклероза [Shimokawa Н., 1999; Davignon J. et. al., 2004; Hansson G.K., 2005], очевидно, что снижение уровня данного метаболита, равно как и стеариновой ЖК, является положительным эффектом лечения, направленным на регрессию атеросклеротических бляшек [Jula A. et al., 2005].

После проведенного лечения у женщин уровень миристиновой (С14:0) ЖК не изменялся и достоверно не отличался от исходного показателя, тогда как у мужчин, прием симвастатина в суточной дозе 40 мг приводил к повышению содержания метаболита (Рисунок 9).

0,1 %

г женщины с ИБС, исходно □ женщины с ИБС, исходно 0 мужчины с ИБС, исходно а мужчины с ИБС, исходно

С14:0

И женщины с ИБС, лечение в дозе 40 мг И женщины с ИБС, лечение в дозе 80 мг ш мужчины с ИБС, лечение в дозе 40 мг □ мужчины с ИБС, лечение в дозе 80 мг

Рисунок 9 - Изменение миристиновой (С14:0) и пентадекановой (С15:0) НасЖК в мембране эритроцитов больных ИБС на фоне терапии симвастатином.

Необходимо отметить, что у женщин до назначенного лечения процентное содержание миристиновой ЖК (С 14:0) было ниже, чем у здоровых лиц (0,05±0,004% при норме 0,07±0,01%, р<0,05), тогда как у мужчин не

отличалось от контроля. Подобные изменения подтверждены у пациентов с признаками АГ и дислипидемией [Novgorodtseva Т.Р. et al., 2011]. Содержание С14:0 НасЖК связано с активностью клеточных функций и белковых взаимодействий в мембранах и может влиять на регуляцию сигнальных молекул, трансдукцию и др. [Thalia A. et al., 2001], поэтому уменьшение этой ЖК может играть негативную роль в развитии патологии.

Выявлено повышение процентного содержания пентадекановой (С15:0) ЖК у женщин после терапии симвастатином в дозе 40 мг/сутки (Рисунок 9), уровень которой до начала приема препарата соответствовал контролю.

Только у мужчин терапия симвастатином в дозе 40 мг/сутки приводила к незначительному повышению уровня миристиновой ЖК (Рисунок 9), однако в пределах контроля.

Согласно литературным данным, Cl5:0 положительно коррелирует с ХС-ЛПВП [Smedman A. et al., 1999] и отрицательно с соотношением ЛПНП/ЛПВП, ТТЛ и риском ССЗ [Warensjö Е. et al., 2010; Wang H. et al., 2011].

На фоне лечения симвастатином наблюдалось повышение содержания маргариновой (С 17:0) ЖК у всех исследуемых пациентов, за исключением мужчин, у которых терапия дозой препарата 80 мг/сутки не влияла на изменение данного показателя относительно исходного (Рисунок 10). Стоит отметить, что уровень маргариновой (С 17:0) ЖК до назначенного лечения был ниже такового относительно группы условно здоровых лиц (у женщин 0,19±0,02% при норме 0,26±0,01%, р<0,001; у мужчин 0,21±0,01% при норме 0,25±0,01%, р<0,05). Подобные изменения были показаны в эритроцитах у пациентов с ИБС в раннем исследовании [Эндакова Э.А., 2002]. Известно, что маргариновая ЖК является полезным маркером молочного жира, показатель которой отрицательно коррелирует с развитием ИБС [Khaw К.Т. et al., 2012].

0 женщины с ИБС, исходно 0 женщины с ИБС, исходно

□ мужчины с ИБС, исходно

□ мужчины с ИБС, исходно

С22:0 С23:0

г женщины с ИБС, лечение в дозе 40 мг

□ женщины с ИБС, лечение в дозе 80 мг

□ мужчины с ИБС, лечение в дозе 40 мг

□ мужчины с ИБС, лечение в дозе 80 мг

Рисунок 10 - Изменение маргариновой (С17:0), арахиновой (С20:0), бегеновой (С22:0), трикозановой (С23:0), лигноцериновой (С24:0) и гексакозановой (С26:0) НасЖК в мембране эритроцитов больных ИБС на фоне терапии симвастатином.

Во всех исследуемых группах процентное содержание арахиновой (С20:0) ЖК было сниженным до назначения терапии (у женщин 0,26±0,02% при норме 0,50±0,03%, р<0,001; у мужчин 0,27±0,01% при норме 0,40±0,02%, р<0,001), однако после лечения наблюдался рост данного показателя (Рисунок 10).

Согласно литературным данным, арахиновая ЖК в мембранах клеток является модулятором активности Аб-десатуразы, направленной на синтез длинноцепочечных соЗ и соб ЖК [Erasmus U., 1993], уменьшение которой, может затруднять регуляцию и усиливать развитие воспалительного процесса.

В результате приема препарата отмечалась нормализация по содержанию маргариновой и арахиновой ЖК.

Независимо от пола пациента и дозы препарата отмечено увеличение бегеновой (С22:0) ЖК, трикозановой (С23:0) ЖК и лигноцериновой (С24:0) ЖК по сравнению с исходными данными (Рисунок 10). Только у мужчин лечение приводило к росту гексакозановой (С26:0) ЖК (Рисунок 10).

Согласно литературным данным, повышение уровня НасЖК длинноцепочечного ряда делает более жесткой структуру клеточных мембран [de VriesJ.E. et al., 1997].

Влияние симвастатина на комплексы ЖК

У исследуемых пациентов после лечения выявлено снижение суммарного значения НЖК, ИН, ЖК-субстратов мембран и увеличение содержания ЖК-субстратов СФЛ (Рисунок 11).

150 100 50 0

сумма НЖК

□ женщины с ИБС, исходно ЕЗ женщины с ИБС, исходно 0 мужчины с ИБС, исходно а мужчины с ИБС, исходно

ЕЙ 2Й ^ ЙЗ

ЖК-субстрат ЖК-субстрат вит. Р ЖК- субстрат ГФП ЖК-субстрат СФЛ мембран

В женщины с ИБС, лечение в дозе 40 мг

□ женщины с ИБС, лечение в дозе 80 мг В мужчины с ИБС, лечение в дозе 40 мг

□ мужчины с ИБС, лечение в дозе 80 мг

Рисунок 11 - Изменение комплексных параметров ЖК в мембране эритроцитов больных ЖС на фоне терапии симвастатином.

В то же время, наблюдалось снижение и, в соответствии с этим, нормализация процентного содержания ЖК-субстратов ГФЛ и ЖК-субстратов витамина Р (Рисунок 11), уровень которых до начала лечения был выше показателей контроля (соответственно у женщин 86,51 ±0,61% при норме 83,26±0,76, р<0,01; у мужчин 86,50±0,40% при норме 83,05±0,53%, р<0,001; у женщин 33,11±0,41% при норме 30,99±0,39%, р<0,001, у мужчин 33,83±0,40% при норме 31,89±0,81%, р<0,01).

Во всех исследуемых группах терапия симвастатином приводила к росту суммарного показателя НасЖК и МНЖК (Рисунок 12), уровень которого до приема препарата сравним с таковым в группах условно здоровых лиц.

сумма НасЖК

14 женщины с ИБС, исходно □ женщины с ИБС, исходно мужчины с ИБС, исходно Е мужчины с ИБС, исходно

[3 женщины с ИБС, лечение в дозе 40 мг

□ женщины с ИБС, лечение в дозе 80 мг 0 мужчины с ИБС, лечение в дозе 40 мг

□ мужчины с ИБС, лечение в дозе 80 мг

Рисунок 12 - Изменение комплексных параметров ЖК в мембране эритроцитов больных ИБС на фоне терапии симвастатином.

В связи с вышесказанным необходимо отметить, что у пациентов после лечения мембранная компонента эритроцитов характеризовалась модификацией ЖК состава, что отразилось на изменении ИН. Его снижение подтверждает дефицит содержания НЖК в составе фосфолипидов клеточных мембран за счет избыточного содержания НасЖК длинноцепочечного ряда. Необходимо отметить, что данные изменения влияют на физико-химические свойства мембраны эритроцита, нарушают упорядоченность липидного бислоя, липид-липидные и белок-липидные взаимодействия [Титов В.Н., 1998; Эндакова Э.А., 2002; Титов В.Н., 2004]. С другой стороны НасЖК длинноцепочечного ряда и МНЖК являются субстратами получения энергии в митохондриях тех клеток, где данный процесс реализован. Возможно, увеличение НасЖК в мембранах эритроцитов происходит за счет накопления метаболитов в плазме крови, что было показано в раннем исследовании [Котловский М.Ю., 2009] и таким образом, косвенно позволяет судить о скорости окисления НасЖК в кардиомиоцитах, клетках скелетной мускулатуры, печени и почек.

Известно, что статины уменьшают фракцию холестерола в составе мембран эритроцитов [Liang К., 2005; Adekunle A.S. et al., 2013], выполняющую роль каркаса и обуславливающего жесткость их мембран. В связи с этим можно предположить, что увеличение НасЖК является своеобразной «платой» по улучшению пластичности эритроцитов. Кроме этого, доказано влияние статинов на фосфолипидный обмен в мембранах, в первую очередь на ограничение активности холинфосфатцитидилтрансферазы, в результате чего может возникнуть уменьшение фракции фосфотидилхолина во внешнем слое эритроцитарных мембран [Verd J.С. et al., 1999], отраженное в снижении содержания отдельных показателей ЖК в составе ГФЛ [Marai L. et al., 1969] и, в соответствии с этим, ростом уровня ЖК-субстратов СФЛ (Рисунок 11). Хотя относительные пропорции СФЛ в количественном составе по отношению к

ГФЛ имеют меньший удельный вес, тем не менее, они играют важную роль в клеточной адгезии, распознавании и регулировании клеточного окружения, способствуя защите клетки [van Meer G. et al., 2005].

Повышение процентного содержания арахидоновой (С20:4) юб ЖК у женщин до приема симвастатина приводило к увеличению КЭМ эссенциальных ЖК (1,47±0,06% против нормы 1,30±0,06%, р<0,05) по сравнению с контролем, однако, после лечения дозой 80 мг/сутки отмечено снижение коэффициента по сравнению с его исходным уровнем (1,05±0,03 против исходного 1,33±0,06, р<0,05), что свидетельствовало о низком уровне метаболизации алиментарных предшественников в полиеновые ЖК.

Лечение суточной дозой 40 мг симвастатина у женщин приводило к нормализации КЭМ. В тоже время у мужчин изменений КЭМ не отмечалось, что указывало на нормальную функциональную активность метаболических процессов в отношении эссенциальных ЖК, несмотря на уменьшение уровня ЖК-субстратов мембран.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Терапия симвастатином в дозах 40 и 80 мг/сутки влияла на метаболизм ЖК мембран эритроцитов, что подтверждается снижением суммы ненасыщенных жирных кислот, индекса ненасыщенности, ЖК-субстратов мембран одновременно с повышением уровня ЖК-субстратов сфингофосфолипидов, длинноцепочечных насыщенных, а также мононенасыщенных жирных кислот за счет роста суммарного показателя со9 ЖК. Положительный эффект препарата проявился в нормализации уровня пальмитиновой, маргариновой, арахиновой насыщенных жирных кислот, ЖК-субстратов витамина F и глицерофосфолипидов, а также показателя дигомо-у-линолевой (С20:2) соб ЖК у мужчин, арахидоновой (С20:4) габ ЖК у женщин, гондоиновой (С20:1) со9 ЖК у всех пациентов, за исключением женщин, после приема симвастатина в суточной дозе 40 мг. Наличие половых и дозозависимых эффектов симвастатина на содержание ЖК мембран эритроцитов, у женщин, связанных с уменьшением коэффициента эффективности метаболизации эссенциальных жирных кислот при терапии дозой 80 мг/сутки и у мужчин с повышением уровня гексакозановой (С26:0) ЖК, указывают на предпочтительность использования симвастатина в меньшей дозе. Полученные результаты могут быть использованы в клинической практике для назначения оптимальных дозировок симвастатина.

ВЫВОДЫ

1. На фоне высокого содержания шб ЖК за счет линолевой (С 18:2) (у мужчин) и арахидоновой (С20:4) ЖК (у женщин) выявлен низкий уровень дигомо-у-линолевой (С20:2) юб ЖК, тимнодовой (С20:5) шЗ и гондоиновой (С20:1) <о9 ЖК в составе фосфолипидов мембран эритроцитов у больных ИБС. Изменения содержания НасЖК характеризуются высоким уровнем пальмитиновой (С1б:0) ЖК и одновременно низким - маргариновой (С17:0) ЖК и арахиновой (С20:0) ЖК у всех пациентов, а также миристиновой (СИЮ) ЖК у женщин.

2. У больных ИБС симвастатин не оказывал влияния на содержание о7-производных ЖК, дигомо-у-линоленовой (С20:3) соб ЖК, а также соЗ-производных ЖК мембран эритроцитов, за исключением мужчин, принимавших симвастатин в дозе 40 мг/сутки.

3. Независимо от пола и дозы прием препарата способствовал снижению уровня олеиновой (С 18:1) ®9 ЖК, увеличению показателя нервоновой (С24:1) и9 ЖК, бегеновой (С22:0) ЖК, трикозановой (С23:0) ЖК, лигноцериновой (С24:0) ЖК и нормализации содержания пальмитиновой (С 16:0) ЖК, маргариновой (С17:0) ЖК, арахиновой (С20.0) ЖК. После проведенной терапии нормализован показатель дигомо-у-линолевой (С20:2) соб у мужчин и арахидоновой (С20:4) соб ЖК у женщин, а также гондоиновой (С20:1) со9 ЖК у всех пациентов, за исключением женщин, принимавших симвастатин в суточной дозе 40 мг.

4. Характерным для больных ИБС является высокий уровень ЖК-субстратов витамина F и глицерофосфолипидов в мембранах эритроцитов, а также повышенный КЭМ эссенциальных ЖК у женщин.

5. Независимо от пола и дозы прием препарата способствовал снижению суммарного уровня НЖК, ИН и ЖК-субстратов мембран, увеличению ЖК-субстратов СФЛ, НасЖК и МНЖК, а также нормализации содержания ЖК-субстратов витамина F и ЖК-субстратов глицерофосфолипидов в составе мембран эритроцитов.

6. Курсовая терапия симвастатином в дозе 40 мг/сутки у женщин приводила к росту уровня пентадекановой (С15:0) ЖК, тогда как прием более высокой дозы - к уменьшению содержания стеариновой (С 18:0) ЖК, соотношения сумм шЗ/соб ЖК, 20:4 ю6/22:6 соЗ к КЭМ эссенциальных ЖК в мембранах эритроцитов. После проведенной терапии суточной дозой препарата 40 мг у мужчин наблюдалось снижение суммы соЗ ЖК за счет цервоновой (С22:6) шЗ ЖК и увеличение миристиновой (¿14:0) ЖК.

7. Половые особенности жирнокислотного состава мембран характеризовались снижением соотношения 20:3 со6+20:5 соЗ/22:6 соЗ у женщин и повышением уровня дигомо-у-линолевой (С20:2) соб ЖК и гексакозановой (С26:0) ЖК у мужчин. Прием симвастатина в дозе 40 мг/сутки приводил к повышению уровня маргариновой (С 17:0) ЖК, тогда как после применения более высокой дозы препарата наблюдалось снижение показателя пальмитиновой (С 16:0) ЖК.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Новицкий, В.В. Роль жирных кислот плазмы крови в патогенезе стабильной стенокардии/ В.В. Новицкий, P.C. Карпов, C.B. Клименков, А.Б. Салмина, М.Ю. Котловский, C.B. Машковская, Д.А. Кириченко и др. // Бюллетень сибирской медицины. - Т. 6, № 4. - 2007. - С.41-45.

2. Новицкий, В.В. Изменение жирных кислот плазмы крови у больных ИБС принимающих симвастатин/ В.В. Новицкий, P.C. Карпов, М.Ю. Котловский,

C.B. Клеменков, B.A. Шульман, С.Ю. Никулина, C.B. Машковская, Д.А. Кириченко и др. // Сибирское медицинское обозрение. - №3. - 2008. - С.15-18.

3. Новицкий, В.В. Изменение спектра жирных кислот плазмы крови больных ИБС при приеме симвастатина/ В.В. Новицкий, P.C. Карпов, М.Ю. Котловский, C.B. Машковская, Д.А. Кириченко и др. // Современные наукоемкие технологии,- №12. - 2009. - С.60-61.

4. Новицкий, В.В. Содержание ненасыщенных жирных кислот в плазме и эритроцитах крови у больных с хронической формой ишемической болезни сердца / В.В. Новицкий, P.C. Карпов, М.Ю. Котловский, Д.А. Кириченко, Ю.В. Котловский // Сибирское медицинское обозрение.- №6. - 2010. - С.18-21.

5. Котловский, М.Ю. Влияние симвастатина на спектр жирных кислот эритроцитов у пациентов с хронической формой ишемической болезни сердца/ М.Ю. Котловский, Д.А. Кириченко, О.С. Усольцева, О .Я. Оседко, A.A. Покровский, A.B. Оседко, Ю.В. Котловский, И.Ю. Якимович// Фундаментальные исследования. - №10, (часть 3). - 2011.- С.513-516.

6. Котловский, М.Ю. Спектр жирных кислот эритроцитов у больных с ИБС при лечении симвастатином/ М.Ю. Котловский, Д.А. Кириченко, О.С. Усольцева, О .Я. Оседко, A.A. Покровский, A.B. Оседко, Ю.В. Котловский, И.Ю. Якимович // Успехи современного естествознания. - №10. - 2011. - С.39-40.

7. Новицкий, В.В. Изменение спектра жирных кислот эритроцитов у больных хронической формой ишемической болезни сердца при лечении симвастатином/ В.В. Новицкий, М.Ю. Котловский, Д.А. Кириченко, P.C. Карпов, Ю.В. Котловский, И.Ю. Якимович// Бюллетень сибирской медицины. -Т.11, № 1.- 2012. - С.46-51.

8. Дыгай, A.M. Эффективность лечения больных ИБС с гипертонической болезнью/ A.M. Дыгай, М.Ю. Котловский, О.С. Котловская, Д.А. Кириченко, Ю.В. Котловский // Успехи современного естествознания.- №10.- 2012. - С. 9596.

9. Котловский, М.Ю. Дозозависимое влияние симвастатина на содержание жирных кислот мембран эритроцитов у мужчин, больных хронической формой ишемической болезни сердца/ М.Ю. Котловский, Д.А. Кириченко, Ю.В. Котловский, И.Ю. Якимович, Д.С. Терешина, A.M. Дыгай// Фундаментальные исследования. - №7, (часть 1), 2013. - С.72-76.

10. Дыгай, A.M. Влияние симвастатина на состав жирных кислот мембран эритроцитов у женщин с хронической формой ишемической болезни сердца / A.M. Дыгай, М.Ю. Котловский, Д.А. Кириченко, И.Ю. Якимович, Д.С. Терешина, Ю.В. Котловский, В.Н. Титов // Бюллетень ВСНЦ СО РАМН. - № 5, (93). - 2013. - С. 22-28.

11. Дыгай, A.M. Жирные кислоты мембран эритроцитов у женщин с ишемической болезнью сердца при действии статинов / А.М. Дыгай, М.Ю. Котловский, Д.А. Кириченко, И.Ю. Якимович, Д.С. Терешина, Ю.В. Котловский, В.Н. Титов // Клиническая лабораторная диагностика. - №3. - 2014. - С.42-47.

Патент на изобретение

Пат. № 2503405 Российская федерация. Способ индивидуальной количественной оценки развития шпемической болезни сердца / A.M. Дыгай, М.Ю. Котловский, О.С. Котловская, Д.А. Кириченко и др.; заявители и патентообладатели ФГБУ "НИИ фармакологии" СО РАМН. - опубл. 10.01.2014.

Пат. №2535025 Российская федерация. Способ индивидуальной количественной оценки риска развития гипертонической болезни / A.M. Дыгай, М.Ю. Котловский, О.С. Котловская, Д.А. Кириченко и др.; заявители и патентообладатели ФГБУ "НИИ фармакологии" СО РАМН. - опубл. 10.12.2014

Список сокращений, встречающихся в диссертации

БСК - болезни системы кровообращения

ССЗ - сердечно-сосудистые заболевания

ИБС - ишемическая болезнь сердца

ХС-ЛПНП - холестерол-липопротеины низкой плотности

ХС-ЛПВП - холестерол-липопротеины высокой плотности

ХС-ЛППП - холестерол-липопротеины промежуточной плотности

ХС-ЛПОНП - холестерол-липопротеины очень низкой плотности

ТГЛ - триацилглицерол

ЖК - жирные кислоты

ПНЖК - полиненасыщенные жирные кислоты

МНЖК - мононенасыщенные жирные кислоты

НЖК - ненасыщенные жирные кислоты

НасЖК - насыщенные жирные кислоты

ИН - индекс ненасыщенности

ФЛ - фосфолппиды

ГФЛ - глицерофосфолипиды

СФЛ - сфингофосфолипиды

КЭМ - коэффициент эффективности метаболизацин

Подписано в печать 22.04.2015 г. Бумага офсетная. Печать ризограф. Тираж 100 экз. Заказ № 774.

Отпечатано в ООО «Версона». 660079, Красноярск, ул. А. Матросова, ЗОк. Тел. 235-04-89, e-mail: versona24@yandex.m.