Автореферат и диссертация по медицине (14.00.08) на тему:Особенности патоморфоза глаукоматозного процесса при лечении пептидными биморегуляторами

На правах рукописи

ЧУРИЛИНА Надежда Юрьевна

ОСОБЕННОСТИ ПАТОМОРФОЗА ГЛАУКОМАТОЗНОГО ПРОЦЕССА ПРИ ЛЕЧЕНИИ ПЕПТИДНЫМИ БИОРЕГУЛЯТОРАМИ

14.00.08 - глазные болезни 14.00.15 — патологическая анатомия

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

□0316Э38Э

Санкт-Петербург 2008

003169389

Работа выполнена в Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Санкт-Петербургская государственная медицинская академия им ИИ Мечникова» Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию

Научные руководители:

доктор медицинских наук профессор

АЛЕКСЕЕВ Владимир Николаевич,

член-корреспондент РАМН заслуженный деятель науки РФ доктор медицинских наук профессор АНИЧКОВ Николай Мильевич

Официальные' оппоненты

заслуженный деятель науки РФ, доктор медицинских наук профессор БАЛАШЕВИЧ Леонид Иосифович,

доктор медицинских наук профессор РЫБАКОВА Маргарита Григорьевна

Ведущая организация - Российский Государственный медицинский университет

Защита состоится 16 июня 2008г. в 14 часов на заседании совета по защите докторских и кандидатских диссертаций Д 215 002 09 при Военно-медицинской академии им. С М. Кирова (194044, Санкт-Петербург, ул Академика Лебедева, д 6)

С диссертацией можно ознакомиться в фундаментальной библиотеке Военно-медицинской академии им. С М. Кирова.

Автореферат разослан « » мая 2008г.

УЧЕНЫЙ СЕКРЕТАРЬ СОВЕТА доктор медицинских наук профессор ЧЕРНЫШ Александр Владимирович

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. По данным Всемирной организации здравоохранения около 67 миллионов человек в мире страдают глаукомой, и до 2030 года это количество больных должно удвоится Частота глаукомы в развитых странах мира остается примерно на уровне 14-15% от общего числа всех заболевших Еясегодно в России выявляется глаукома более чем у 50 тысяч человек, общее же число больных по статистике составляет около миллиона больных (Нестеров А П, 2006), при этом еще столько же человек не знают о своей болезни

Распространенность этого опасного заболевания увеличивается с возрастом Так, в 40-45 лет первичной открытоугольной глаукомой (ПОУГ) страдает 1% населения, в 50-60 - 1,5-2,0%, в 75 лет и старше - более 18% (Нестеров АП, 1999, Малеванная О А, 2005), что, несомненно, указывает на ьозрастной характер данной патологии Такое значительное распространение глаукомы, трудности ранней диагностики, сложности лечения дают серьезный прогноз и служат причинами постоянного внимания к этому заболеванию исследователей и практических врачей

Многочисленные исследования, проводимые в области изучения этиологии и патогенеза ПОУГ, в своем большинстве посвящены клинической оценке заболевания, и развивают теории причин возникновения г лаукомы генетическую предрасположенность, эндокринные заболевания, гидро- и гемодинамические нарушения (Нестеров АП, 1995), биомеханический фактор (Нестеров АП, Алексеев ВН, 2000, Нестеров А П , Егоров Е А , Батманов Ю Е , 2000, Quigley Н , Anderson D , 1977), метаболические нарушения (Бунин АЯ, Бабижаев М А, Супрун AB , 1985, Мартынова Е Б, 1995, Курышева Н И и соавт, 1996-1998, Алексеев В Н, Мартынова ЕБ, 1997, Алексеев ВН, Садков В И и соавт, 1999, Корелина ВЕ, 1999, Бунин А.Я, 1999, Самусенко И А, 2003), возрастную дезорганизацию соединительной ткани (Затулина Н И, Панормова Н В , Сеннова Л Г, 2000)

Практически отсутствуют работы по комплексной кпинико-морфологической оценке глаукомного процесса, которая важна для понимания морфогенеза ПОУГ (Корелина В Е , 1999, Мартынова Е Б и соавт , 2000)

Актуальность экспериментального исследования глаукомы связана также с разработкой патогенетически обоснованного лечения Важно конкретизировать направление действия и эффективность влияния препаратов на уровень внутриглазного давления (ВГД) и нейропротекцию

Безусловно, проведение таких исследований возможно на экспериментальной модели глаукомы, в частности, на принятой в нашей стране модели адреналин-индуцируемой глаукомы (АИГ) у кроликов по схеме Е М Липовецкой (1966)

Эта модель является экспериментальным аналогом ПОУГ, характеризуется формированием симптомокомплекса, включающего в себя трабекуло- и нейрооп-тикопатшс в глазу (Липовецкая ЕМ, 1967, 1968, Думброва НЕ и соавт, 1975, Крыжановский Г Н и соавт , 1980,1983, Кашинцева Л Г и соавт, 1983, 1995, Liao ТI et al, 1994)

В настоящее время на новом уровне морфологических технологий экспериментальное исследование на модели АИГ имеет особую значимость, так как может давать новые сведения о пато- и морфогенезе ПОУГ, а так же способствовать поиску новых средств нейропротекторного лечения глаукомы - заболевания лиц пожилого

возраста, имеющего медленно прогрессирующий характер течения Для направленного выбора нейропротекторной терапии используются препараты различных групп, в том числе и пептидные биорегуляторы Поиск указанных путей лечения на сегодняшний день в значительной мере носит экспериментальное направление Такое направление имеет настоящее исследование и этим определяется его актуальность

Цель исследования - дать экспериментальную оценку нейропротекторной эффективности пептидных биоргеуляторов на экспериментальной модели адреналин-индуцируемой глаукомы

Основные задачи исследования:

1 Исследовать показатели ВГД и гидродинамику глаза на этапах развития АИГ и при лечении пептидами

2 Дать морфологическую оценку структурным изменениям радужно-роговичного угла глаза на этапах развития АИГ и при лечении пептидами

3 Исследовать морфогенез патологических изменений в сетчагке и зрительном нерве на этапах развития АИГ и при лечении пептидными биорегуляторами

4 Оценить особенности регуляторного действия пептидов на течение глаукома-тозного процесса при АИГ

5 Провести клинико-морфологическую оценку эффективности применения пептидных биорегуляторов при АИГ

Научная новизна исследования. Впервые на этапах развития АИГ и при лечении пептидными биорегуляторами (ПБ) изучены структуры радужно-роговичного угла (РРУ) глаза, дана комплексная гистологическая и морфофункциональная характеристика Впервые приведена количественная морфометрическая характеристика состояния ганглиозных клеток сетчатки (ГКС) и слоя аксонов на этапах развития АИГ при лечении пептидами

Дана клинико-морфологическая оценка лечебного воздействия ПБ на структуры переднего и заднего отрезков глаза на этапах развития АИГ Впервые экспериментально установлено нейропротекторное действие ПБ на сетчатку и зрительный нерв

Научно-практическая значимость работы. Изучаемые клинические, морфологические и электронно-микроскопические изменения при АИГ позволят выявить закономерности развития заболевания Выявленные особенности морфогенеза установят механизмы развития и определят степень выраженности патологических процессов в переднем и заднем отделах глазного яблока

Изучение лечебного воздействия ПБ на этапах развития АИГ установит механизмы действия и эффективность препаратов данной группы Выявленные механизмы действия и эффекты ПБ позволят определить возможности их применения в терапии больных ПОУГ

Реализация работы. Материалы и выводы диссертационного исследования внедрены в практическую деятельность учреждений здравоохранения Санкт-Петербурга и Астрахани, будут представлены практическими рекомендациями «Обоснование применения пептидных биорегуляторов в комплексном лечении больных первичной открытоугольной глаукомой» Фрагменты работы используются в учебном процессе со студентами, интернами и клиническими ординаторами кафедры офтальмологии СПбГМА им И И Мечникова

Публикации. Основные положения и выводы опубликованы в 6 научных работах

Апробация работы. Результаты исследовании и основные положения диссертации были представлены и обсуждены на

- Международном конгрессе офтальмологов «Белые ночи» (Санкт-Петербург, 2006),

— Республиканской конференции «V Всероссийская офтальмологическая школа» (Москва, 2006),

-Республиканской конференции «VI Всероссийская офтальмологическая школа» (Москва, 2007)

Положения, выносимые на защиту

1 Экспериментальная адреналин-индуцируемая глаукома сопровождается развитием симптомокомплекса, который характеризуется морфофункциональным поражением структур РРУ глаза, ГКС, их аксонов, зрительного нерва и развитием его экскавации

2 Обнаруженные патоморфологические изменения на этапах развития АИГ формируются одновременно в переднем (структуры РРУ) и заднем (сетчатка, зрительный нерв и его диск) отрезках глазного яблока

3 На этапах развития АИГ пептидные биорегуляторы оказывают нейропротек-торное действие, что отражается на количестве ганглиозных клеток сетчатки, толщине слоя аксонов, степени повреждения волокон зрительного нерва

4 Полученные в ходе исследований комплексные данные о нейропротекторной эффективности ПБ являются основанием к их применению в терапии больных ПОУГ

Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на 130 страницах машинописного текста, включает 7 таблиц и 44 рисунка, состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, главы описания собственных исследований, заключения, выводов, практических рекомендаций и списка литературы Список литературы содержит 214 источников (146 отечественных и 68 зарубежных)

Работа выполнена на кафедре офтальмологии (заведующий кафедрой - доктор медицинских наук, профессор В Н Алексеев) и кафедре патологической анатомии (заведующий кафедрой - член-корреспондент РАМН, заслуженный деятель науки РФ, доктор медицинских наук, профессор Н М Аничков) Санкт-Петербургской государственной медицинской академии им И И Мечникова

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Материалы и методы исследований. С целью изучения морфогенеза и лечебного патоморфоза экспериментальной глаукомы на ранних этапах ее развития было проведено комплексное клинико-морфологическое исследование на 36 кроликах породы «Серая шиншилла», обоего пола, возраста около 2-х лет, массой 2,5-3 кг Адреналин-индуцпрованная глаукома воспроизведена путем внутривенного введе-

ния опытным животным через день 0,1 мл 0,1% раствора адреналина гидрохлорида (Липовецкая Е М, 1966)

Для выполнения поставленных задач были сформированы следующие группы кроликов

группа №1 - интакгаые кролики - 6 животных,

группа №2 - экспериментальная адреналин-индуцированная глаукома - 10 кроликов,

группа №3 - кролики, совместно с адреналином получавшие пептиды ретииаламин 5 мг парабульбарно, кортексин 10 мг внутримышечно, эпигаламин 10 мг внутримышечно - первые 10 дней каждого месяца в течение 3-х месяцев - 10 животных,

группа №4 - кролики, совместно с адреналином получавшие эпиталон 10 мкг парабульбарно первые 10 дней каждого месяца в течение 3-х месяцев - 10 животных

Кроликам всех групп через каждые 10 дней от начала эксперимента в течение 3-х месяцев измеряли уровень внутриглазного давления при помощи тонометра Мак-лакова грузом массой 7,5 гр по принятой методике Параллельно с контролем то-нометрических показателей исследовалась гидродинамика глаза Тонографические показатели измерялись 1 раз в месяц в течение этого же времени тонографом ТНЦ-100 под местной анестезией 0,5% раствором дикаина грузом 5,5 гр Определялись показатели истинного ВГД (Р0), коэффициента легкости оттока водянистой влаги (С), продукции камерной влаги в минуту (F), коэффициента Беккера (Ро/С) Показатели С, F, Ро/С рассчитывали по таблицам Фриденвальда

После окончания клинической фазы через 3 месяца кролики были выведены из эксперимента путем воздушной эмболии (введение в ушную вену 10 мл воздуха) По истечении 15 минут глаза были энуклеированы и фиксировались в 10% растворе нейтрального формалина в течение 24 часов, после чего взятый материал проходил стандартную обработку для изготовления гистологических препаратов с толщиной серийных парафиновых срезов 3-5 мкм

Для микроскопического исследования срезы окрашивались гематоксилином и эозином, пикрофуксином по методу Ван-Гизона (для выявления коллагена), аль-циановым синим при рН 1,0 (дня обнаружения гликозаминогликанов), проводилась реакция ШИК (для выявления гликопротеидов), окрашивание по методу Перлса (для обнаружения железа), обработка серебром по методу Фонтана-Массона (для выявления премеланина и меланина) Было выполнено серебрение по методу Гор-дона-Свита (для выявления аргирофильных (преколлагеновых) волокон), окраска по методу Шпильмейера на осевые цилиндры и миелиновые оболочки нервной ткани с целью исследования состояния аксонов ганглиозных клеток до выхода из глазного яблока и после в составе зрительного нерва

Проведено иммуногистохимическое исследование С целью выявления апоптоза в переднем и заднем отрезках глаза использован набор Apoptosis Detection Kit ТА 200 DAB производства фирмы R&D SYSTEMS Выражаем благодарность за предоставленную возможность его использования Санкт-Петербургскому институту биорегуляции и геронтологии СЗО РАМН Для иммуногистохимического исследования активности и идентификации мюллеровских клеток использовались моно- и поликлоналыше антитела против глутамин синтетазы, глиального фибриллярного кислого белка (GFAP), виментина производства фирмы DAKO, индуцибельной синтазы оксида азота (iNOS) производства Chemicon International Inc

Морфологическое исследование проведено при помощи светооптического микроскопа Микмед-1 и Axioskop-Zeiss Морфометрическое исследование выполнено с помощью окуляр- и объект-микрометров «Reichert»

Для электронно-микроскопического исследования кусочки сетчатой оболочки и зрительного нерва фиксировались в 2,5% растворе глутаральдегида на 0,1 м фосфатном буфере с последующей обработкой 1% раствором четырекокиси осмия Материал обезвоживали в спиртах нарастающей концентрации и эфире, заливали в эпон-812 Контрастирование кусочков проводили насыщенным спиртовым раствором уранилацетата и на срезах цитратом свинца Ультратонкие срезы изготавливались на ультратоме LKB-3 и изучались в электронном микроскопе JEM-100 S

Математическую обработку полученных клинико-морфологических данных проводили методами вариационной статистики с определением показателей среднего значения (X), стандартного отклонения (а), дисперсии (а2), ошибки среднего (ш), достоверности различий между группами сравнения с вычислением критерия Стъюдента (t) и уровня значимости (а), достоверного интервала (р), различия считали достоверными при р<0,05

Микрофотографирование проводили при помощи цифровых фотокамер Olympus С-3020, Polaroid Digital Camera DMC 1

Результаты исследований и их обсуждение

1. Клиническая часть эксперимента

Период трехмесячного введения адреналина животным сформировал отчетливое, статистически достоверное повышение внутриглазного давления (ВГД), что подтверждалось результатами тонометрических и топографических показателей в группах животных с введением адреналина и при сочетании введения адреналина и лечебных препаратов Различия между показателями на правом и левом глазу были незначительными Данные результатов тонометрии приведены в таблице 1

Таблица 1

Внутриглазное давление при АИГ без лечебного воздействия и при воздействии лекарственными препаратами

(X ± ш, п=б)

Глаз/группа ВГД мм рт ст

Исходный уровень АИГ Пептиды Эпиталон

OD 14,3 ±0,26 24,5±0,17** 20,3±0,42* 21,0±0,36*

OS 13,6 ±0,27 23,5±0,22** 20,8±0,40* 21,3±0,33*

" - Р < 0,001 по сравнению с исходным уровнем - Р < 0,001 по сравнению с экспериментальной глаукомой

Повышение ВГД в группе АИГ составило 72,5%, что отличалось от имевшихся данных литературы (Мартынова Е Б , 1995, Корелина В Е , 1999) В 1рупле кроликов на фоне индукции глаукомы, получавших пептиды, имелось статистически достоверное (р<0,001) повышение ВГД, которое возросло в среднем на обоих глазах на 47,5% В группе кроликов, получавших эпиталон, уровень ВГД вырос на 52% Таким образом, при применении препаратов наблюдалось снижение офталь-могипертензии, и было обнаружено, что самым выраженным гипотензивным эффектом обладали пептиды, менее выраженный гипотензивный эффект оказывал эпиталон

Гипотензивное действие препаратов группы пептидов и эпиталона было выявлено нами впервые

При изучении эффективности циркуляции водянистой влаги в глазу нами были исследованы гидродинамические (тонографические) показатели Полученные результаты в группах кроликов свидетельствовали о воздействии всех препаратов на улучшение показателей циркуляции водянистой влаги в глазу Была установлена тенденция к снижению уровня истинного ВГД (Р0) по сравнению с группой АИГ, наиболее выраженная в группах пептидов - на 22% и эпиталона - на 17,5% Влияние препаратов на остальные показатели гидродинамики глаза также имели тенденцию к нормализации повышался коэффициент легкости оттока (С) На снижение минутного объема продукции камерной влага (Б), который возрастал при глаукоме, влияли и эпиталон и пептиды

Таким образом, в случае применения комплекса пептидных биорегуляторов -ретиналамина, кортексина, эпиталамина (группа пептидов) и эпиталона, глаукома-тозный симптомокомплекс претерпевал заметные изменения Они характеризовались меньшей степенью нарастания офтальмогипертензии, проявлялись менее выраженным нарушением циркуляции водянистой влаги в глазу (ее продукция и отток)

2. Морфологическое исследование переднего отрезка глаза

Нами установлено, что патологические изменения при глаукоме одновременно затрагивали весь глаз, и одной из точек приложения патологического воздействия являлся радужно-роговичный угол глаза В переднем отрезке глаза были изучены морфофункциональные особенности соединительнотканного каркаса трабекуляр-ного аппарата, гребенчатой связки, шлеммова канала, примыкающих отделов цили-арного тела и радужки и проведена их сравнительная оценка при лечении

В нашем исследовании в группе АИГ были обнаружены типичные гистологические проявления глаукоматозной трабекулопатии, сформулированные А П Нестеровым (2000) В стенках артериол этой зоны Наблюдалось плазматическое пропитывание, гиалиноз с сужением просвета к центру, мукоидное и фибри-ноидное набухание Гликозаминогликаны (ГАГ) обнаруживались в трабекулярном остове, увеличение фракции которых влекло повышение проницаемости стенок сосудов, особенно микроциркуляторного русла, стимулировало пролиферацию фиб-робластов и коллагенообразование С изменением коллагеновых волокон сочеталось снижение импрегнации серебром и набухание аргирофильных волокон, их

разрушение и замещение коллагеновыми Выраженный фиброз (3 балла) в этих зонах носил распространенный характер

С целью оценки влияния препаратов на сосуды, трабекулу, гребенчатую связку, шлеммов канал, степень фиброза и выпадения пигмента, нами была впервые предпринята попытка морфометрической оценки этих структур в группах животных

В группе АИГ выявлено развитие склероза и атрофии корнеоувеальной - па 36,5% от исходного уровня (со 147,99±4,03 до 94,04±3,91 мкм) н корнеомышечной - на 64% (с 95,45±2,25 до 34,58±2,74 мкм) частей трабекулы по толщине, заметное укорочение гребенчатой связки - на 76% (со 148,02±4,43 до 35,94±3,69 мкм), которое вызывало сужение радужно-роговичного угла глаза Длина обеих частей трабекулы во всех группах животных была одинаковой Поры в трабекулярном аппарате были резко деформированы и представляли собой щели, в них, а также в их каркасе, по ходу нервных окончаний, в участках фиброза наблюдалось отложение меланина

Результаты наших исследований согласовывались с данными В В Лантух (1970), о том, что адреналин, повышая рецепцию в глазу, вызывал накопление продукта его окисления - аденохрома и последующее образование меланина Отложение гранул пигмента в строме, в первую очередь в трабекуле, вызывало механическое препятствие оттоку водянистой влаги

В нашем исследовании установлена морфофункциональная сохранность шлем-мова канала у кроликов, что отличалось от сведений об его отсутствии в работах J Н Prince, С D Diesem, Q Eglitis (I960), А М Шапкиной (1971)

При исследовании структур вблизи радужно-роговичного угла глаза обнаруживалось, что снижение количества сосудов на 61,5% при АИГ статистически достоверно по сравнению с исходным уровнем и происходило за счет залустеваняя сосудов в связи с гиалинозом артериол Редукция сосудистого русла глаз кроликов отражалась на степени фиброзных изменений, деструкции коллагена, сочеталась с процессом неоангиогенеза и появлением тонкостенных капилляров в новообразованной соединительной ткани цилиарных отростков Неоангиогенез трактовался нами, как компенсаторно-приспособительный процесс, направленный на осуществление фильтрации водянистой влаги, на уровне необходимом для жизнедеятельности глаза

Нами был проведен сравнительный анализ структурных изменений у живогных, получавших медикаментозное лечение, для оценки направления, количественных и качественных особенностей патологических процессов, определявших фильтрацию и регуляцию оттока водянистой влаги

Так, в группе кроликов, получавших пептиды, общее количество сосудов было снижено на 42%, капилляры располагались в местах деструкции коллагена в цили-арном теле, что отражало стимулирующее влияние этих препаратов на ангиогенез Фиброз носил умеренный и выраженный характер, что имело недостоверные различия с контрольной группой Мукоидное набухание отсутствовало, аргирофиль-ные волокна повсеместно были фрагментированы или замещены коллагеновыми При незначительном очаговом отложении меланина он локализовался в зонах дренажа, деструкции коллагена, ангиогенеза Трабекулярная атрофия корнеоувеальной части составляла 39,5% (147,99±4,03 - 89,92±2,49 мкм), корнеомышечной — 55% (95,45±2,25 - 42,88±3,91 мкм), гребенчатая связка укорочена на 29%

(148,02±4,43 - 105,16±8,50 мкм), что вызывало незначительное сужение радужно-роговичного угла глаза

В опытах с эпиталоном обшее количество сосудов было снижено на 24% за счет редукции сосудов всех калибров Степень фиброза повсеместно выраженная (3 балла), атрофия корнеоувеальиой части по толщине составляла 31% (147,99±4,03 -102,34±9,73 мкм), корнеомышечной ~ 52% (95,45±2,25 — 45,65±2,77 мкм), гребенчатая связка укорачивалась на 42% (148,02±4,43 - 85,74±4,10 мкм), что вызывало заметное сужение радужно-роговичного угла глаза Степень отложения меланина слабая и умеренно выраженная Мукоидный отек стромы был слабо выражен, кол-лагенизация аргирофильного каркаса имелась на всем протяжении Это в комплексе с клиническими данными объясняет не столь выраженное нарушение оттока водянистой влаги в глазу в этой группе животных

Результаты сравнительного морфологического исследования позволили конкретизировать основные положения по направлению воздействия лекарственных препаратов на патологический процесс в радужно-роговичном углу глаза

1 Фиброзно-склеротические процессы, как отражение морфогенеза трабекуло-патии, были связаны со стромально-сосудистыми патологическими процессами развитием в стенках артериол плазматического пропитывания, склероза, гиалиноза, в соединительной ткани - мукоидного и фибриноидного набухания, склероза, уменьшением толщины корнеоувеальиой, затем корнеомышечной частей трабеку-лы, укорочением гребенчатой связки и сужением радужно-роговичного угла глаза

2 Влияние лечебных препаратов на степень выраженности склеротических изменений варьировало более выраженным противофибропластическим эффектом обладали пептиды, менее выраженным - эпиталон

3 При применении препаратов наблюдалась зависимость между морфофунк-циональным и гистохимическим состоянием соединительной ткани (накопление в ней ГАГ с индукцией коллагенообразования и деструкция аргирофильного каркаса) протекторным влиянием отличался эпиталон, а пептиды предотвращали развитие мукоидного отека

4 Компенсаторно-приспособительный процесс при экспериментальной глаукоме в виде новообразования капилляров в местах деструкции соединительной ткани имелся при применении всех препаратов наиболее выраженным ангиогенным влиянием обладали пептиды, менее выраженным - эпиталон, процесс неоангиоге-неза имел существенное значение для улучшения гидродинамики в глакоматозном глазу

5 При морфометрической оценке количества сосудов и степени сужения артериол установлено, что наиболее выраженным ангиолротекторным действием обладал эпиталон, менее эффективны были пептиды

6 Топография, закономерность и степень отложения меланина в цилиарном теле, трабекулярном аппарате, по ходу нервных терминалей и в стенках сосудов позволили считать, что свободный меланин усугублял склероз и нарушал отток водянистой влаги в шлеммов Канал, препараты имели различное влияние на этот процесс наименьшее отложение меланина наблюдалось при применении пептидов и оно нарастало при применении эпиталона

3 Морфологическое исследование заднего отрезка глаза

Патологические процессы, которые развивались при глаукоме в заднем отрезке глаза, характеризовались развитием глаукоматозной оптической нейропатии

В нашем исследовании путем морфометрического анализа предпринята попытка исследования структурных образований, которые поражались при глаукоматозной оптической нейропатии сетчатка, аксоны ганглиозных клеток сетчатки и сформированный ими зрительный нерв

Исследована назальная часть сетчатки кролика от цилиарного тела до решетчатой пластинки, как наиболее информативная В работе установлено, что крупных клеток больше при приближении к цилиарному телу, а мелких - при приближении к диску зрительного нерва Нами подтверждены данные НГ Фельдмана (1951) о наличии в сетчатке кролика в ганглиозном слое трех типов клеток мелкие клетки -диаметр ядра 3 мкм, средние клетки - диаметр ядра 6 мкм, крупные клетки с диаметром ядра более 9 мкм В опытах с ретроградным повреждением ганглиозных клеток (перерезка зрительного нерва) НГ Фельдман (1951) установил различные временные параметры гибели ганглиозных клеток в начале страдали мелкие клет ки, затем средние и только потом крупные Аналогичные закономерности гибели в ганглиозном слое клеток при глаукоме были подтверждены и нами, что противоречило данным HQuigley, G Dunkelberger, W Green (1988), NOsbom, J Wood, G Chidlow et al (1999)

При подсчете клеток ганглиозного слоя в группе АИГ их слой был разрежен, количество достоверно было снижено на 45,5% (с 509,67±12,35 до 279,00±5,18), в большей мере за счет мелких - на 49%, количество средних снижалось на 46%, крупных - на 36% Выявлялось нарушение соотношения клеток (мелкие-средние-крупные) их процент в норме составил 36-45-19%, а при глаукоме 33-44-22% Снижалась толщина слоя аксонов ганглиозных клеток на 39%, что формировало довольно выраженную экскавацию диска зрительного нерва В преламинарной части зрительного нерва наблюдалась неравномерная толщина осевых цилиндров с очагами вакуолизации Позади решетчатой пластинки миелиновые оболочки характеризовались набуханием и очаговой деструкцией, местами подвергались растворению с образованием ситообразных пространств Такая морфологическая картина являлась проявлением так называемой кавернозной дистрофии зрительного нерва, описанной некоторыми авторами (Elschmg А., 1928, Пригожина А Л, 1966) Был характерен перикапиллярный склероз и исчезновение ГАГ, что отмечал при глаукоме М R Hernandez (1997) Типовые для глаукомы изменения в зрительном нерве подтверждались электронно-микроскопическим исследованием

При изучении сетчатки глаз животных, подвергшихся лечению различными препаратами, установлено, что в группе животных с использованием пептидов общее количество клеток было снижено на 22% (с 509,67±12,35 до 399,33±4,10), из них мелких - на 19%, средних - на 18%, крупных - на 35,5% Соотношение мелкие-средние-крупные составило 37-47-16% Толщина слоя аксонов уменьшалась на 17%, что влекло слабо выраженную экскавацию диска

В группе лечения эпиталоном общее количество клеток было снижено на 25% (с 509,67±12,35 до 380,33±4,80), из них мелких - на 29%, средних - на 21%, крупных -на 30% Соотношение мелкие-средние-крупные - 35-48-17% Толщина слоя аксо-

нов уменьшилась на 18%, что вызывало слабо выраженную экскавацию диска зрительного нерва

Полученные нами данные не подтверждали положение литературы о первоочередной гибели крупных клеток (Weber A J , 1988, Osborn N , 1999) Возможно, это определялось изучением в нашем исследовании ранней стадии экспериментальной глаукомы

Морфометрическим исследованием установлено, что все использованные лечебные препараты оказывали нейропротекторный эффект на сетчатку глаза, известный только у бетоптика С (Dao Y Y, 1998, Turacli M E , Ozden R G, Gurses V A, 1998) Нами было обнаружено, что выраженный нейропротекторный эффект присутствовал у пептидов и эпиталона

Комплексное гистологическое, гистохимическое, морфометрическое и электронно-микроскопическое исследование позволило получить объективные данные о развитии оптической нейропатии уже на ранних этапах экспериментальной глаукомы параллельно с трабекулопатией Это позволяло разделить точку зрения А Я Бунина (1999) о метаболической теории возникновения первичной открыто-угольной глаукомы

4. Иммуногистохимическое исследование

Иммуногистохимическое исследование было предпринято нами с целью выявление апоптоза и оценки состояния активности мюллеровских клеток

При гистологическом, гистохимическом и электронно-микроскопическом исследованиях обнаружить апоптоз нам не удалось Иммуногистохимическое исследование, как самый чувствительный метод детекции, показало, что в переднем отрезке глаза апоптоз отсутствовал

Известное положение о том, что ганглиозные клетки сетчатки при глаукоме гибнут путем индукции апоптоза в 2 раза быстрее, чем в обычных условиях жизни (Jay J, 1997), нами подтверждено иммуногистохимическим исследованием в группе АЙГ, где были обнаружены 2 ганглиозные клетки в состоянии апоптоза у разных кроликов Исходя из данных литературы о темпах апоптоза в сетчатке, учитывая диаметр глазного яблока и толщину гистологического среза, нами установлено, что вероятность его определения при глаукоме в микроскопическом препарате равна 0,0012% На основании данных исследования, мы думаем, что темпы апоптоза в глазу в несколько раз выше принятых в литературе, а вероятность его выявления чувствительным иммуногистохимическим методом - наиболее высокая

Как известно, глутамат - один из индукторов апоптоза, высокая концентрация которого является решающей для нарушения равновесия между антиапоптотиче-скими и проапоптотическими генами и белками Непосредственными участниками в метаболизме глутамата являются мюллеровские клетки, так как ими осуществляется захваг и обезвреживание этого нейротрансмитгера, как в обычных, так и в высоких концентрациях (Izumi Y, Kirby С О, Benz AM et al, 1999, Winkler В S, Matthew J А, Brasse! M A. et al, 2000) Это происходит при помощи специфического для мюллеровских клеток фермента глутамин синтетазы, которая переводит глутамат в нетоксичный глутамин (Березов Т Т , Коровкин Б Ф , 1990) Еще одним токсическим агентом для ганглиозных клеток является оксид азота (N0), образую-

щийся под влиянием фермента синтазы оксида азота (NOS), который имеется в шоллеровских клетках сетчатки всех позвоночных (Izumi Y , Kirby С О , Benz A M et al, 1999) и представлен фракцией iNOS (индуцибельной NO-синтазои)

Нами была изучена популяция мюллеровских клеток в группах экспериментальной глаукомы и пептидов Для идентификации мюллеровских клеток в сетчатке, мы исследовали экспрессию маркерных белков - виментина и глиального фибриллярного кислого белка (GFAP) Это, по нашему мнению, позволяло конкретизировать топографическое расположение мюллеровских клеток в сетчатке в разных областях глаза Так, например, виментин и глиальный фибриллярный кислый белок имели более высокий уровень экспрессии на экваторе глаза

При иммуногистохимическом исследовании было обнаружено увеличение экспрессии глутамин синтетазы на экваторе глаза при глаукоме В группе кроликов, получавших пептиды, она повышалась, что отражало стимулирующее влияние препаратов на синтез этого фермента в области решетчатой пластинки Учитывая, что при морфометрическом исследовании в группе пептидов обнаружено снижение количества ганглиозных клеток сетчатки на 22% от исходного уровня (при АИГ -на 45%), становилось очевидным, что неиропротекция в глазу связана с активацией мюллеровских клеток

При исследовании iNOS обнаружено, что ее экспрессия невысока в группе АИГ В группе пептидов она слабо увеличивалась во всех отделах сетчатки Усиление экспрессии iNOS, которая катализировала выработку оксида азота, следовало, очевидно, трактовать двояко Отрицательным воздействием оксида азота являлась повреждающая роль на нейроны сетчатки, их аксоны и зрительный нерв Положительным — влияние на вазодилятацию и нормализацию тонуса сосудов микроцнр-куляторного русла, что проявлялось менее выраженным уровнем гипертензии в глазу повышение ВГД - на 47,5% от исходного уровня (при АИГ - на 72,5%) Эго подтверждало данные литературы (Курышева НИ , 2001), в которых отмечалось положительное влияние оксида азота на микроциркуляцию и гидродинамику в глазу

Нейротоксический эффект оксида азота в сетчатке, очевидно, не имел столь тяжелых последствий при лечении, по сравнению с группой глаукомы а нейроггро-текторное действие препаратов, связанное с активацией синтеза мюллеровскими клетками глутамин синтетазы, являлось преобладающим

Мы считаем, что повышение активности мюллеровских клеток в большей мере при лечении являлось компенсаторно-приспособительным процессом и свидетельствовало о положительном лечебном патоморфозе

Таким образом, известные механизмы повреждения заднего отрезка глаза при глаукоме открывают возможность нейропротекторного лечения, которое может быть как опосредованным (снижение офтальмотонуса, нормализация микроциркуляции), так и непосредственным (блокада глутаматных рецепторов, нейтрализация свободных радикалов, модуляция синтеза оксида азота) при помощи изученных лечебных препаратов на ранних стадиях формирования данного заболевания

Комплексным гистологическим, морфометрическим, гистохимическим, идшуно-гистохимическим, электронно-микроскопическим исследованием нами были установлены основные особенности морфогенеза ранней стадии экспериментальной глаукомы, конкретизированы ее проявления во всех структурах переднего и задне-

го отрезков глаза Сравнительный анализ материала по полученным данным в группах экспериментальной глаукомы без лечения и при лечении лекарственными препаратами позволил конкретизировать общее для всех препаратов направление течения патологических процессов и их особенности при применении различных лекарственных форм Лекарственный патоморфоз, представленный количественными и качественными морфофункциональными изменениями патологического и компенсаторно-приспособительного процесса в направлении противофибропласти-ческого, ангиопротекторного, ангиогенного и нейропротекторного действия отражал особенности патоморфоза Это создает возможности направленной коррекции течения ранних этапов глаукомы с учетом фармакодинамики препаратов и индивидуальных особенностей течения заболевания

ВЫВОДЫ

1 При экспериментальном воспроизведении глаукомы внутривенное введение 0,1% раствора адреналина гидрохлорида способствует развитию глаукоматозного симптомокомплекса, характеризующегося повышением уровня внутриглазного давления (ВГД) на 72,5%, ухудшением гидродинамических показателей, морфологическими изменениями радужно-роговичного угла глаза, сетчатой оболочки и зрительного нерва

2 На модели адреяалин-индуцированной глаукомы установлена взаимосвязь клинической симптоматики и морфологических проявлений глаукоматозной трабе-кулопатии Наблюдается выраженная редукция сосудов микроциркуляторного русла зоны радужно-роговичного угла глаза преимущественно за счет артериол, пре-капилляров и венул (в 2,5 раза), выраженный фиброз и атрофия корнеоувеальной и корнеомышечной частей трабекул, укорочение гребенчатой связки и отложение большого количества меланина в этих структурах

3 Применение лекарственных препаратов в группах экспериментальных животных приводит к замедлению формирования патоморфологических изменений и, тем самым, способствует снижению ВГД в группах животных, которым вводили пептиды - на 14,3%, эпиталон - на 11,9% При топографическом исследовании установлено, что использование указанных препаратов приводит к повышению коэффициента легкости оттока и уменьшению продукции камерной влаги

4 Хронологически при экспериментальной глаукоме трабекулопатия и глауко-матозная оптическая нейропатия развиваются одновременно и имеют характерные для данной патологии изменения морфофункциональных структур В 100% наблюдении отмечается эффективность применявшихся препаратов и развитие лечебного патоморфоза, который выражался в противофибропластическом, ангиопротектор-ном, ангиогенном и нейропротекторном воздействии на структуры глазного яблока

5 Противофибропластическое воздействие характеризуется снижением накопления гликозаминогликанов, уменьшением степени выраженности и распространенности дезорганизации зрелой соединительной ткани, снижением интенсивности коллагенизации аргирофильного каркаса и накопления меланина Наибольшим противофибропластическим эффектом обладают пептиды, менее выраженным -эпиталон

6 Ангиопротекторное и ангиогеяное воздействие заключается в снижении редукции сосудов, склеротических и деформирующих процессов В этом отношении наиболее выраженным эффектом обладает эпиталон, при применении которого отмечается уменьшение количества сосудов от исходного уровня на 24% и при применении пептидов - на 42% При адреналин-индуцированной глаукоме без применения лекарственных препаратов отмечается уменьшение количества сосудов на 61,5%

7 Нейропротекторное воздействие выражается в понижении степени повреждения зрительного нерва и количества гибнущих ганглиозных клеток сетчатки, снижении атрофических процессов в слое их аксонов, повышении активности мюлле-ровских клеток Нейропротекторный эффект прежде всего отражался на мелких и средних ганглиозных клетках Сохранность общего количества клеток по сравнению с группой АИГ повышается при действии пептидами - на 43%, эпиталоном -на 36% Использование препаратов приводит к большему сохранению толщины слоя аксонов (на 36-43%) и незначительным структурным изменениям зрительного нерва Доказано увеличение активности мюллеровских клеток за счет увеличения экспрессии глутамин синтетазы и индуцибельной синтазы оксида азота при применении пептидов, что отражает влияние глии на коррекцию метаболизма и, как следствие, ее положительную роль в отношении нейропрогекции в глазу

8 Полученные комплексные сравнительные данные о морфогенезе изменений при ранней стадии экспериментальной глаукомы являются основой для направленного выбора нейропротекторной терапии при дальнейших клинических исследованиях

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1 Результаты экспериментального комплексного клинического и морфологического исследования показали, что на ранних этапах глаукомы ее патогенетическое лечение должно быть комбинированным и одновременно направлено на предотвращение воздействия патологических факторов на структуры переднею и заднего отрезка глаза

2 С целью нормализации гидродинамики, достижения нейропротекции и коррекции структурных изменений в глазу при лечении экспериментальной глаукомы на ранних этапах рекомендован рациональный способ введения препаратов при курсе терапии 10 дней ретиналамин 5 мг и эпиталон 10 мкг парабульбарно, котек-син 10 мг и эпиталамин 10 мг внутримышечно 1 раз в день, эффективность действия препаратов при данном способе введения подтверждается морфологическим исследованием

3 Указанный курс терапии глаукомы препаратами ретиналамин, кортексин, эпиталамин, эпиталон предложен в эксперименте и требует проведения клинических испытаний

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1 Алексеев ВН Клинико-морфологические изменения при экспериментальной адреналин-индуцируемой глаукоме / В Н Алексеев, Е Б Мартынова, Л В Чекурова, Н Ю Чурилина // Роль и место фармакотерапии в современной офтальмологической практике Материалы Всерос науч -практ конф - СПб, 2006 - С 11-12

2 Алексеев В Н Клинико-морфологические особенности формирования экспериментальной адреналин-индуцируемой глаукомы / В Н Алексеев, Н Ю Чурилина // VI Всероссийская школа офтальмолога Сб науч трудов - М. 2007 - С 24-27

3 Алексеев В Н Особенности лекарственного патоморфоза при экспериментальной глаукоме / В Н Алексеев, Е Б Мартынова, Н ГО Чурилина, Чжан Шаша // Состояние здоровья населения и факторы риска Материалы науч -практ конф, посвященной 100-летию СПбГМА им И И Мечникова - СПб, 2007 -С 118-119

4 Алексеев ВН Нейропротегаия при первичной открытоугольной глаукоме Морфология и клиника / В Н Алексеев, Е Б Мартынова, А Л Аксенова, Н Ю Чурилина// Ретинапамин Нейропротекция в офтальмологшг Сб науч трудов -СПб, 2007 ~С 47-62

5 Алексеев В Н Клинико-морфологические изменения переднего отрезка глаза при экспериментальной адреналин-индуцируемой глаукоме / В Н Алексеев, Н Ю Чурилина//Клин офталъмол , 2007 -№3 -Т 8 -С 112-114

6 Алексеев В Н Морфометрическое обоснование нейропротекторного действия пептидов при экспериментальной глаукоме / В Н Алексеев, Н Ю Чурилина // Успехи современного естествознания, 2008 - № 2 - С 89-91

Формат 60x84'/, Заказ № 359

Подписано в печать 30,04 08

Объем I пл_Тираж 100 экз

Типография ВМедА, 194044, СПб , ул Академика Лебедева, 6

Актуальность проблемы. По данным Всемирной организации здравоохранения около 67 миллионов человек в мире страдают глаукомой, и до 2030 года это количество больных должно удвоиться. Частота глаукомы в развитых странах мира остается примерно на уровне 14 — 15% от общего числа всех заболевших. Ежегодно в России выявляется глаукома более чем у 50 тысяч человек, общее же число больных по статистике составляет около миллиона больных (Нестеров А.П., 2006), при этом еще столько же человек не знают о своей болезни.

Распространенность этого опасного заболевания увеличивается с возрастом. Так, в 40 — 45 лет первичной огкрытоугольной глаукомой (ПОУГ) страдает 1% населения, в 50 - 60 — 1,5 - 2,0%, в 75 лет и старше — более 18% (Нестеров А.П., 1999; Малеванная О.А., 2005), что, несомненно, указывает на геронтоло-гический характер данной патологии.

Такое значительное распространение глаукомы, трудности ранней'диагностики, сложности лечения дают серьезный прогноз и служат причинами постоянного внимания к этому заболеванию исследователей и практических врачей.

Многочисленные исследования, проводимые в области изучения этиологии и патогенеза ПОУГ, в своем большинстве посвящены клинической оценке заболевания и развивают теории причин возникновения глаукомы: генетическую предрасположенность, эндокринные заболевания, гидро- и гемодинами-ческие нарушения (Нестеров А.П., 1995), биомеханический фактор (Quigley Н., Anderson D., 1977; Нестеров А.П., Алексеев В.Н., 2000; Нестеров А.П., Егоров Е.А., Батманов Ю.Е. 2000); метаболические нарушения (Бунин А .Я., Бабижаев

-М.А.,.Супрун А.В., 1985; Мартынова Е.Б., ,1995; Курышева Н.И. и соавт., 1996

1998; Алексеев В.Н., Мартынова Е.Б.,1997; Алексеев В.Н., Садков В.И. и соавт., 1999; Корелина В.Е.,1999; Бунин А.Я., 1999; Самусенко И.А., 2003); возрастную дезорганизацию соединительной ткани (Затулина Н.И., Панормова Н.В., Сеннова Л.Г., 2000).

Практически отсутствуют работы по комплексной клинико-морфологической оценке глаукомного процесса, которая важна для понимания морфогенеза ПОУГ (Корелина В.Е., 1999; Мартынова Е.Б. и соавт., 2000).

Актуальность экспериментального исследования глаукомы связана также с разработкой патогенетически обоснованного лечения. Важно конкретизировать направление действия и эффективность влияния препаратов на уровень внутриглазного давления (ВГД) и нейропротекцию.

Безусловно, проведение таких исследований возможно на экспериментальной модели глаукомы, в частности, на принятой в нашей стране модели адрена-лин-индуцируемой глаукомы (АИГ) у кроликов по схеме Е.М. Липовецкой (1966).

Эта модель является экспериментальным аналогом ПОУГ и характеризуется формированием симптомокомплекса, включающего в себя трабекуло- и нейрооптикопатию в глазу (Липовецкая Е.М., 1967, 1968; Думброва Н.Е. и соавт., 1975; Крыжановский Г.Н. и соавт., 1980, 1983; Кашинцева Л.Г. и соавт., 1983, 1995; Liao Т. I. et al, 1994).

В настоящее время па новом уровне морфологических технологий экспериментальное исследование на модели АИГ имеет особую значимость, так как может дать новые сведения о пато- и морфогенезе ПОУГ, а так же способствовать поиску новых средств для нейропротекторного лечения глаукомы — заболевания лиц пожилого возраста, имеющего медленно прогрессирующий характер течения. Для направленного выбора нейропротекторной терапии используются препараты различных групп, в том числе и пептидные биорегуляторы. Поиск указанных путей лечения на сегодняшний день в значительной мере носит экспериментальные направление. Такое направление имеет настоящее исследование и "этим определяется его актуальность".'

Цель исследования - дать экспериментальную оценку нейропротекторной эффективности пептидных биорегуляторов на модели адреналин-индуцируемой глаукомы.

Основные задачи исследования

1. Исследовать показатели ВГД и гидродинамику глаза на этапах развития АИГ и при лечении пептидными биорегуляторами.

2. Дать морфологическую оценку структурным изменениям радужно-роговичного угла глаза на этапах развития АИГ и при лечении пептидами.

3. Исследовать морфогенез патологических изменений в сетчатке и зрительном нерве на этапах развития АИГ и при лечении пептидпыми биорегуляторами.

4. Оценить особенности регуляторного действия пептидов на течение глаукоматозного процесса при АИГ.

5. Провести клинико-морфологическую оценку эффективности применения пептидных биорегуляторов при АИГ.

Научная новизна исследования. Впервые на этапах развития АИГ и при лечении пептидными биорегуляторами (ПБ) изучены структуры радужно-роговичного угла (РРУ) глаза, дана комплексная гистологическая и морфофунк-циональная характеристика. Впервые проведена количественная морфометриче-ская характеристика состояния ганглиозных клеток сетчатки (ГКС) и слоя аксонов на этапах развития АИГ, при лечении пептидными биорегуляторами.

Дана клинико-морфологическая оценка лечебного воздействия ПБ на структуры переднего и заднего отрезков глаза на этапах развития АИГ и при лечении пептидами. Впервые экспериментально установлено нейропротектор-ное действие ПБ на сетчатку и зрительный нерв.

Научно-практическая значимость. Изучаемые клинические, морфологические и электронно-микроскопические изменения при АИГ позволят выявить закономерности развития заболевания.

Выявленные особенности морфогенеза установят закономерности развития и определят степень выраженности патологических процессов в переднем и заднем отделах глазного яблока.

Изучение лечебного воздействия ПБ на этапах развития АИГ установит механизмы действия и эффективность препаратов данной группы.

Выявленные механизмы действия и эффекты пептидных биорегуляторов позволят определить возможности их применения в терапии больных ПОУГ.

Реализация работы. Материалы и выводы диссертационного исследования внедрены в практическую деятельность учреждений здравоохранения г.Санкт-Петербурга и г.Астрахани, будут представлены практическими рекомендациями «Обоснование применения пептидных биорегуляторов в комплексном лечении больных первичной открытоугольной глаукомой». Фрагменты работы используются в учебном процессе со студентами, интернами и клиническими ординаторами кафедры офтальмологии СПбГМА им. И.И. Мечникова. Основные положения и выводы опубликованы в 6 печатных работах.

Апробация материалов исследований. Результаты исследований и основные положения диссертации были представлены и обсуждены на:

- Международном конгрессе офтальмологов «Белые ночи» (Санкт-Петербург, 2006);

- Республиканской конференции « V Всероссийская школа офтальмолога» (Москва, 2006);

- Республиканской конференции « VI Всероссийская школа офтальмолога» (Москва, 2007).

Основные положения, выносимые на защиту

1. Экспериментальная адреналип-индуцируемая глаукома сопровождается развитием симптомокомплекса, который характеризуется морфофункциональ-ным поражением структур РРУ глаза, ГКС, их аксонов, зрительного нерва и развитием его экскавации.

2. Обнаруженные патоморфологические изменения на этапах развития АИГ формируются одновременно в переднем (структуры РРУ) и заднем (сетчатка, зрительный нерв) отрезках глазного яблока.

3. На этапах развития АИГ пептидные биорегуляторы оказывают нейро-протекторное действие, что отражается на количестве ганглиозных клеток сетчатки, толщине слоя аксонов, степени повреждения волокон зрительного нерва.

4. Полученные в ходе исследований комплексные данные о нейропротек-торной эффективности ПБ являются основанием к их применению в терапии больных ПОУГ.

Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на 130 машинописных страницах, состоит из введения, обзора литературы, описания материала и методов исследования, анализа и обсуждения собственных результатов исследования, заключения, выводов, практических рекомендаций. В работе использовано 146 отечественных и 68 иностранных источников литературы. Диссертация содержит 7 таблиц и 44 рисунка.

106 выводы

1. При экспериментальном воспроизведении глаукомы внутривенное введение 0,1% раствора адреналина гидрохлорида способствует развитию глауко-магозного симптомокомплекса, характеризующегося повышением уровня внутриглазного давления (ВГД) на 12,5%, ухудшением гидродинамических показателей, морфологическими изменениями радужно-роговичного угла глаза, сетчатой оболочки и зрительного нерва.

2. На модели адреналин-индуцироваиной глаукомы установлена выраженные редукция сосудов микроциркуляторного русла зоны радужно-роговичного угла глаза преимущественно за счет артериол, прекапилляров и венул (в 2,5 раза), фиброз и атрофия корнеоувеальной и корнеомышечной частей трабекул, укорочение гребенчатой связки и отложение большого количества меланина в этих структурах.

3. Применение лекарственных препаратов в группах экспериментальных животных приводит к замедлению формирования патоморфологических изменений и, тем самым, способствует снижению ВГД. В группах животных, которым вводили пептиды - на 14,3%, эпиталон - на 11,9%, что говорит о нейро-протекторном и умеренном гипотензивном действиях указанных препаратов.

4. При экспериментальной глаукоме трабекулопатия и глаукоматозная оптическая нейропатия развиваются одновременно. В 100% случаев наблюдений отмечается эффективность применявшихся препаратов и развитие лечебного патоморфоза, который выражается в противофибропластическом, ангиопротек-торном, ангиогенном и нейропротекторном воздействии на структуры глазного

- яблока.- -—., . . „„ .

5. Противофибропластическое воздействие характеризуется снижением накопления гликозаминогликанов, уменьшением степени выраженности и распространенности дезорганизации зрелой соединительной ткани, снижением интенсивности коллагенизации аргирофильного каркаса и накоплением меланина.

Наибольшим противофибропластическим эффектом обладают пептиды, менее выраженным — эпиталон.

6. Ангиопротекторпое и ангиогенное воздействие заключается в снижении редукции сосудов, склеротических и деформирующих процессов. В этом отношении наиболее выраженным эффектом обладает эпиталон, при применении которого отмечается уменьшение количества сосудов от исходного уровня на 24%, а при применении пептидов - на 42%. При адреналин-индуцированной глаукоме без применения лекарственных препаратов отмечается уменьшение количества сосудов на 61,5%.

7. Нейропротекторное воздействие выражается в понижении степени повреждения зрительного нерва и количества гибнущих ганглиозных клеток сетчатки, снижении атрофических процессов в слое их аксонов, повышении активности мюллеровских клеток. Сохранность общего количества клеток по сравнению с группой АИГ повышается при действии: пептидами — на 43%, эпиталоном — на 36%, Использование препаратов приводит к большему сохранению толщины слоя аксонов (на 36 — 43%) и незначительным структурным изменениям зрительного нерва.

8. Полученные комплексные сравнительные данные о морфогенезе изменений при ранней стадии экспериментальной глаукомы являются основой для направленного выбора нейропротекторной терапии при дальнейших клинических исследованиях.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Результаты экспериментального комплексного клинического и морфологического исследования показали, что на ранних этапах глаукомы ее патогенетическое лечение должно быть комбинированным и одновременно направлено на предотвращение воздействия патологических факторов на структуры переднего и заднего отрезка глаза.

2. С целью нормализации гидродинамики, достижения нейропротекции и коррекции структурных изменений в глазу при лечении экспериментальной глаукомы на ранних этапах рекомендован рациональный способ введения препаратов при курсе терапии 10 дней: ретиналамин 5 мг и эпиталон 10 мкг пара-бульбарно, кортексин 10 мг и эпиталамин 10 мг внутримышечно 1 раз в день, эффективность действия препаратов при данном способе введения подтверждается морфологическим исследованием.

3. Указанный курс терапии глаукомы препаратами ретиналамин, кортексин, эпиталамин и эпиталон предложен в эксперименте и требует проведения клинических испытаний.