Особенности ангиогенеза и иммунного статуса плаценты при ее старении

Костылев, Артем Вячеславович

Диссертации по медицине → Геронтология и гериатрия

Автореферат и диссертация по медицине (14.01.30) на тему:Особенности ангиогенеза и иммунного статуса плаценты при ее старении

ДИССЕРТАЦИЯ

АВТОРЕФЕРАТ

Костылев, Артем Вячеславович Санкт-Петербург 2010 г.

Ученая степень: кандидата биологических наук

ВАК РФ: 14.01.30

Автореферат диссертации по медицине на тему Особенности ангиогенеза и иммунного статуса плаценты при ее старении

На правах рукописи

КОСТЫЛЕВ Артем Вячеславович

ОСОБЕННОСТИ АНГИОГЕНЕЗА И ИММУННОГО СТАТУСА ПЛАЦЕНТЫ ПРИ ЕЕ СТАРЕНИИ

14.01.30 — геронтология и гериатрия

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Санкт-Петербург - 2010

003493269

Работа выполнена в лаборатории иммунологии старения Санкт-Петербургского института биорегуляции и геронтологии СЗО РАМН

Научный руководитель:

доктор биологических наук Полякова Виктория Олеговна

Официальные оппоненты:

доктор биологических наук Кветная Татьяна Викторовна

доктор биологических наук Зубжицкая Людмила Борисовна

Ведущая организация:

ГОУ ВПО «Санкт-Петербургская государственная медицинская академия им. И.И. Мечникова» ФАЗСР

Защита диссертации состоится » М^Урпмк^ 2010 г. в часов на заседании диссертационного совета Д 601.001.01 при Санкт-Петербургском институте биорегуляции и геронтологии СЗО РАМН по адресу: 197110, Санкт-Петербург, пр. Динамо, д. 3.

С диссертацией можно ознакомиться в фундаментальной библиотеке Санкт-Петербургского института биорегуляции и геронтологии СЗО РАМН (197110, Санкт-Петербург, пр. Динамо, д. 3).

Автореферат разослан « » срл^рЛЛ/._2010 г.

Ученый секретарь диссертационного совета

доктор биологических наук, доцент Козина Л.С.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы

Рост, развитие и инволюция плаценты во многом контролируются сосудистой системой ворсинчатого хориона, которая, в свою очередь, формируется при участии фактор роста эндотелия сосудов (VEGF).

Плацента является уникальным объектом для геронтологических исследований, поскольку ее онтогенез четко очерчен по времени гестации, а ткань и сосудистая сеть плаценты являются прекрасным материалом для поиска критериев старения на органном, тканевом, клеточном и субклеточном уровнях [Кветной И.М. и др., 2005].

Стремительное развитие новейших методик в биологии и медицине, открытие репликативного старения, а так же концепция гетерохронного развития различных органов и тканей позволяют рассматривать состояние сосудистой сети и иммунного статуса плаценты, как маркеров, которые дают возможность ответить на вопрос «Подвергается ли плацента старению или нет?».

В настоящее время существует две теории, по-разному освещающие проблему старения плаценты. Первая теория утверждает, что существует старение плаценты как органа. Сторонники данной теории полагают, что по мере созревания плода и становления его собственных систем жизнеобеспечения, снижается потребность в трофических, гормональных, иммунных, газообменных и выделительных функциях плаценты. Это приводит к редукции ее структур, которая начинается после 32 недели гестации, и особенно выражена при переношенной беременности, то есть при сроке более 42 недель [Волкова О.В., Тарабрин C.B., 1973; Vorcher H., 1975]. В связи с этой теорией, для нашего исследования были выбраны не только плаценты I, II и III триместра беременности, но и материал, полученный при переношенной беременности.

Вторая теория постулирует, что дегенеративно-дистрофические изменения и циркуляторные нарушения в плаценте связаны не столько с ее собственным старением, сколько являются отражением возрастных изменений в организме женщины [Милованов А.П. 1999; Князькин И.В. и др., 2007; Хавинсон В.Х., Коновалов С.С., 2009]. Другими словами, инволютивные изменения в плаценте тем более выражены, чем старше возраст беременной. Многочисленные подтверждения данной теории [Сухих Г.Т., Ванько Л.В., 2003; Соколов Д.И., 2007; Rosso Р., 1976] свидетельствуют о том, что для нашего исследования целесообразно отобрать женщин старшего репродуктивного возраста, у которых инволютивные изменения в плаценте будут более заметны, по сравнению с молодыми первородящими.

того, было отмечено усиление секреции ангиогенина, который способствует развитию сосудистой сети плаценты и подавляет активность цитотоксических лимфоцитов. Полученные данные косвенно указывают на ведущую роль факторов развития сосудистой сети плаценты в процессе ее формирования, хотя имеющиеся в литературе данные недостаточно освещают связь состояния сосудистой сети плаценты и ее инволюции. Помимо этого, вопрос о связи между ангиогенными факторами и активностью цитотоксических иммунных клеток плаценты недостаточно изучен.

Вышеизложенные обстоятельства свидетельствуют об актуальности и необходимости проведения специального исследования по изучению развития сосудистой системы ворсин хориона и иммунных клеток в плаценте у женщин старшего репродуктивного возраста на различных сроках гестации.

Цель и задачи исследования

Целью диссертационного исследования является сравнительное изучение фактора роста эндотелия сосудов и некоторых субпопуляций иммунных клеток плаценты на различных сроках гестации у женщин старшего репродуктивного возраста.

Для достижения указанной цели были поставлены и последовательно решены следующие задачи:

1. Верифицировать динамику экспрессии фактора роста эндотелия сосудов в плаценте у женщин старшего репродуктивного возраста.

2. Определить некоторые субпопуляции иммунных клеток, принимающих участие в иммунном ответе (лимфоциты, дендритные и тучные клетки) в плаценте у женщин старшего репродуктивного возраста.

3. Изучить особенности ангиогенеза в плаценте на разных сроках ее развития.

4. Выявить корреляции между ангиогенезом, а также некоторыми субпопуляциями иммунных клеток плаценты и сроком гестации.

5. Изучить различные аспекты старения плаценты.

Научная новизна

Впервые проведен сравнительный анализ фактора роста сосудов и некоторых субпопуляций иммунных клеток (Т-киллеры, Т-супрессоры, тучные и дендритные клетки) в ворсинчатом хорионе плаценты на различных сроках гестации у беременных старшего репродуктивного возраста.

Установлено, что наиболее активное развитие сосудистой сети плаценты характерно для I триместра беременности и при переношенной беременности. Впервые построены аппроксимирующие зависимости между сроком гестации и количеством иммунных клеток и УЕвР в плаценте. Выявлено, что в ворсинчатом хорионе присутствуют три из четырех изученных субпопуляций иммунных клеток: Т-киллеры, Т-супрессоры и дендритные клетки. Тучные клетки в плаценте на всех исследуемых сроках гестации были верифицированы в незначительном количестве. Показано влияние срока гестации на состав и соотношение различных субпопуляций иммунных клеток плаценты.

Выявлена нелинейная зависимость между экспрессией фактора роста сосудов и сроком гестации. Установлено, что в I триместре беременности экспрессия VEGF максимальна, снижается к концу III триместра и возрастает при переношенной беременности. Впервые получены данные о ведущей роли цитотоксических иммунных клеток (Т-киллеры, дендритные клетки) в I триместре беременности и снижении их количества в зрелой и переношенной плаценте.

Разработана новая концепция старения плаценты, основанная на имеющихся в литературе данных и результатах собственных исследований, которая учитывает как старение организма женщины в целом, так и возможность инволютивных изменений в плаценте в связи с переношенной беременностью. Показано, что экспрессия фактора роста сосудов при переношенной беременности возрастает по сравнению со сроком гестации 37-40 недель, что является компенсаторным механизмом, направленным на поддержание жизнедеятельности плода в условиях старения плаценты. На модели переношенной беременности получены доказательства иммунологического старения плаценты.

Практическая значимость

Полученные результаты позволяют расширить представления о морфо-функциональных изменениях плаценты на различных сроках гестации у женщин старшего репродуктивного возраста. Результаты исследования позволят оптимизировать эффективность диагностики воспалительных процессов в плаценте и причины преждевременных родов и выкидышей, а также прогнозировать риск повторного развития патологической беременности у женщин старшего репродуктивного возраста.

Положения, выносимые на защиту

1. На всех этапах онтогенеза плаценты происходит ангиогенез, контролируемый фактором роста эндотелия сосудов.

2. Зависимость между экспрессией фактора роста сосудов и сроком гестации носит нелинейный характер. В I триместре беременности экспрессия VEGF максимальна, к концу III триместра она снижается и возрастает при переношенной беременности.

3. В I триместре беременности количество Т-киллеров и дендритных клеток в ворсинах хориона преобладает над содержанием Т-супрессоров.

4. Во II триместре беременности количество Т-киллеров и дендритных клеток сопоставимо с количеством Т-супрессоров, а к концу беременности Т-супрес-соры являются ведущей субпопуляцией иммунных клеток в ворсинах хориона.

5. У женщин старшего репродуктивного возраста при беременности, продолжающейся свыше 42 недель, происходит иммунологическое старение плаценты, выражающееся в отсутствии Т-лимфоцитов и снижении содержания дендритных клеток.

Связь с научна-исследовательской работой Института

Диссертационная работа является научной темой, выполняемой по основному плану НИР Санкт-Петербургского института биорегуляции и геронтологии СЗО РАМН.

Структура и объем диссертации

Диссертация состоит из введения, обзора литературы, 2 глав собственных исследований, обсуждения, выводов, практических рекомендаций и указателя литературы. Глава 1- обзор литературы представляет собой анализ данных литературы об особенностях онтогенеза ворсинчатого хориона на различных сроках гестации плаценты (в том числе и при переношенной беременности), о факторе роста эндотелия сосудов и некоторых субпопуляциях иммунокомпетентных клеток, а так же об имеющихся концепциях старения плаценты. Глава 2 посвящена описанию материалов и методов, используемых в диссертационном исследовании. Глава 3 представляет изложение собственных данных изучения роста сосудистой сети и иммунного статуса плаценты в зависимости от срока гестации, а также обсуждение полученных результатов. Текст диссертации изложен на 108 страницах, содержит 8 таблиц, иллюстрирован 32 рисунками. Список литературы содержит 159 источников, из них отечественных — 52, зарубежных—107.

Публикации

По материалам диссертации опубликовано 14 научных работ, в том числе 1 статья в журнале, рекомендованном ВАК Минобрнауки РФ для публикации материалов диссертационных исследований.

Апробация и реализация диссертации

Материалы диссертации доложены на XII Всероссийской медико-биологической конференции молодых исследователей «Фундаментальная наука и клиническая медицина» (Санкт-Петербург, 2009); Всероссийской конференции студентов и молодых ученых с международным участием, посвященной 65-летию ЯГМА «Актуальные вопросы медицинской науки» (Ярославль, 2009); Всероссийской научной конференции, посвященной 150-летию кафедры патологической анатомии Военно-медицинской академии им. С.М. Кирова «Современные проблемы общей и частной патологической анатомии» (Санкт-Петербург, 2009); XVII Всероссийской конференции «Нейроиммунология. Рассеянный склероз» (Санкт-Петербург, 2009); Весенней геронтологической конференции (Белгород, 2009); Научно-практической конференции молодых ученых «Актуальные вопросы клинической и экспериментальной медицины» (Санкт-Петербург, 2009); Всероссийской научно-практической конференции «Амбулаторно-клиническая практика - платформа женского здоровья» (Москва, 2009); II международной конференции «Ранние сроки беременности»

(Москва, РУДН, 2009); XIII Пущинской международной школе-конференции молодых ученых «Биология - наука XXI века» (Пущино, 2009); Международной научно-практической конференции с международным участием «Осенняя геронтологическая конференция в Белгороде» (Белгород, 2009).

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Характеристика исследуемого материала

В ходе работы изучен ворсинчатый хорион плацент различного срока гестации. Образцы плацент были получены при выкидышах и родах в НИИ акушерства и гинекологии им. Д.О. Отта РАМН от 62 женщин старшего репродуктивного возраста. Поскольку в настоящее время не проанализированы механизмы, связывающие особенности развития и инволюции сосудистой сети и иммунных клеток плаценты, в нашем исследовании были отобраны плаценты различных сроков гестации, на которых проводилось иммуногистохимическое исследование на экспрессию УЕОБ и некоторых субпопуляций иммунных клеток плаценты.

Анализ морфо-функционального состояния плацент проводили с использованием клинических данных, а также заключений патоморфологических исследований последов, проведенных в лаборатории патоморфологии НИИ акушерства и гинекологии им. Д.О. Отта РАМН.

а 6-10 неделя (прерванная беременность) п=15

□ 37-40 неделя (переношенная беременность) п=15

■ 37-40 неделя (доношенная беременность) п=15

О 23-26 неделя (преждевременные роды) п=17

Рис. 1. Распределение образцов плацент по группам в зависимости от срока гестации

Плаценты, со сроком гестации 6-10 недель, были получены от пациенток с замершей беременностью (нарушение развития плода вследствие инфекции было исключено). При исследовании, весь материал разделили на 4 группы, в зависимости от срока гестации (рис. 1).

Гистологические методы

Образцы плацент объемом 1 см3 обезвоживали в 10% нейтральном забуференном растворе формалина (pH 7.2), проводили при помощи гистологического процессора карусельного типа Leica TP1020, заливали в парафин и готовили микротомные срезы, согласно стандартной схеме изготовления гистологических препаратов. В качестве обзорной окраски использовали гематоксилин и эозин; тучные клетки выявляли при помощи толуидинового синего.

Иммуногистохимические методы

Изготовленные на микротоме парафиновые срезы толщиной 4—6 мкм, помещали на покрытые поли-Ь-лизином предметные стекла (Sigma). Для иммуногистохимического исследования использовали первичные и вторичные антитела. В качестве первичных антител были взяты моноклональные мышиные анти-человеческие антитела к маркерам сосудистого эндотелиального фактора роста VEGF (1:75, Novocastra), Т-лим-фоцитов (киллеров и супрессоров) CD4 и CD8 (готовые к использованию, Novocastra), фолликулярных дендритных клеток CD35 (1:60, Novocastra). В качестве вторых антител использовали универсальный набор, содержащий биотинилированные анти-мышиные и анти-кроличьи иммуноглобулины (Novocastra). Визуализацию иммуногистохимической реакции проводили с применением комплекса авидина с биотинилированной пероксидазой (ABC-kit), с последующим проявлением пероксидазы хрена диаминобензидином (Novocastra). Методика визуализации экспрессии всех антител проводилась по стандартному протоколу.

Морфометрия и статистическая обработка результатов

Микроизображения плаценты архивировались с помощью микроскопа Nikon Eclipse Е400 и цифровой камеры Nikon DXM1200. Морфометрический анализ изображений проводился на персональном компьютере на базе процессора Intel Pentium 4 в программе «Видеотест-Морфология 5.0». На каждом препарате исследовали 5 полей зрения при увеличении х400 [Автандилов Г.Г., 2002; 2006]. Площадь экспрессии (%) рассчитывали как отношение площади, занимаемой иммунопозитивными клетками, к общей площади поля зрения. Оптическую плотность окрашивания выявленных продуктов измеряли в условных единицах.

Статистическая обработка всех экспериментальных данных включала в себя подсчет среднего арифметического, стандартного отклонения и доверительного интервала для каждой выборки и проводилась в программе Microsoft Excel с использованием t-критерия Стьюдента на двустороннем уровне значимости р<0,05. Для выявления корреляции между исследуемыми маркерами и сроками гестации применяли коэффициенты ранговой корреляции Спирмана и Пирсона.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Результаты исследования иммунного статуса и ангиогенсза в плаценте на 6-10 неделе гестации В плацентах здоровых женщин старшего репродуктивного возраста на сроке гестации 6-10 недель площадь экспрессии фактора роста эндотелия сосудов составляет около 6% при оптической плотности 0.33 у.е. (табл. 1,2).

Таблица 1

Площадь экспрессии маркеров фактора роста сосудов н иммунных в

маркер срок гестации

6-10 недель 23-26 недель 37-40 недель

УЕвР 6.12± 1.15 1.65 ±0.41* 1.22 ±0.38*

С035 8.81 ±2.47 1.34 ± 0.32** 0.19 ±0.03**

СБ4 8.20 ± 2.35 4.22 ± 1.13# 0.00 ± 0.00##

С08 3.16 ±0.64 3.21 ±0.47 4.26 ±0.32***

* - р < 0.05 по сравнению с площадью экспрессии УЕвР в I группе (6-10 неделя гестации); **- р < 0.05 по сравнению с площадью экспрессии СБ35 в I группе (6-10 неделя гестации); # - р < 0.05 по сравнению с площадью экспрессии СБ4 в I группе (6-10 неделя гестации); ## - р< 0.05 по сравнению с площадью экспрессии С04 в I и II группе (6-10 и 23-26 недели гестации); *** - р < 0.05 по сравнению с площадью экспрессии СБ4 в I группе (6-10 неделя гестации).

Таблица 2

Оптическая плотность экспрессии маркеров фактора роста сосудов

и иммунных в плаценте на 1-Ш триместре беременности

маркер срок гестации

6-10 недель 23-26 недель 37-40 недель

УЕСБ 0.33 ± 0.05 0.31 ±0.03 0.35 ±0.11

СБ35 0.32 ± 0.06 0.28 ±0.04 0.42 ± 0.06*

ст 0.28 ± 0.05 0.16 ±0.03** 0.00 ±0.00***

СВ8 0.43 ± 0.06 0.38 ±0.05 0.34 ± 0.07

* - р < 0.05 по сравнению с оптической плотностью СБ35 в II группе (23-26 неделя гестации); **- р < 0.05 по сравнению с площадью экспрессии С04 в I группе (6-10 неделя гестации); *** - р < 0.05 по сравнению с площадью экспрессии СЭ4 в I и II группе (6-10 и 23-26 недели гестации).

Площадь экспрессии маркера С035 в ткани плаценты на 6-10 неделе гестации составила около 8% (табл. 1) при оптической плотности 0.32 у.е.,

что свидетельствует о важной роли ДК в формировании иммунного статуса плаценты.

При исследовании плаценты I триместра беременности на наличие лимфоцитов было установлено, что площадь экспрессии маркера CD8 составляет около 3%, что в 2.5 раза ниже по сравнению с площадью экспрессии маркера CD4 составившей 8% (табл. 1). При этом оптическая плотность CD8 была на 65% больше этого показателя для маркера CD4 (табл. 1). Данные литературы свидетельствуют, что незрелые Т-лимфоциты, не контактировавшие с антигеном, имеют фенотип CD4+CD8+, что, применительно к нашим данным, может свидетельствовать о том, что 8% CD4+ включают в себя 3% незрелых CD4+CD8+, а оставшиеся 5% составляют зрелые Т-киллеры - CD4+ клетки. Преобладание цитотоксичных Т-киллеров над малодифференцированными Т-лимфоцитами - предшественниками Т-супрессоров, с одной стороны, обеспечивает защиту плода от чужеродных антигенов, но, с другой стороны, может являться причиной воспалительных реакций и служить причиной гестоза, часто развивающегося у женщин старшего репродуктивного возраста.

Окрашивание препаратов плаценты толуидиновым синим показало, что тучные клетки присутствуют в ворсинах хориона в незначительном количестве — не более чем 1-2 в поле зрения.

Резюмируя полученные данные, следует отметить, что на 6-10 неделе гестации в плаценте на фоне активного ангиогенеза, о чем свидетельствует экспрессия VEGF, происходит формирование ее иммунного статуса, ведущую роль в котором играют предшественники ДК, макрофагов и различных субпопуляций лимфоцитов.

Результаты исследования иммунного статуса и ангиогенеза в плаценте на 23-26 неделе гестации

В конце II триместра беременности в плаценте площадь экспрессии фактора роста сосудов составляет около 1.5%, что достоверно ниже, чем в плаценте I триместра беременности. При этом оптическая плотность экспрессии VEGF в плаценте как в I, так и во II триместре беременности составляет около 0.3 у.е. (табл. 1,2).

Площадь экспрессии CD35+ клеток на 23-26 неделе гестации составила около 1%, что в 8 раз меньше, по сравнению с гестационным сроком 6-10 недель. При этом оптическая плотность маркера CD35 во II триместре беременности не отличалась от значений, характерных для 6-10 недели гестации (табл. 1, 2). Полученные данные позволяют сделать заключение о том, что количество недифференцированных ДК в конце II триместра беременности многократно снижается по сравнением с I триместром.

К 23-26 неделе гестации в плаценте также значительно изменяется соотношение различных субпопуляций лимфоцитов. Площадь экспрессии CD8+ клеток составляет 3,2% при оптической плотности около 0.4 у.е. (табл. 1, 2), что, хотя и достоверно не отличается от показателей

I триместра беременности, но указывает на тенденцию к увеличению числа этой субпопуляции Т-лим-фоцитов. При этом показатели экспрессии CD4+ клеток достоверно уменьшаются по сравнению со сроком гестации 6-10 недель. Экспрессия маркера CD4 была отмечена только в 8 плацентах со сроком гестации 23-26 недель из 15 исследованных, тогда как в I триместре беременности CD4+ клетки выявлены во всех взятых плацентах. В 6 плацентах с положительной реакцией с антителами к CD4 площадь экспрессии составила около 4% при оптической плотности 0.16 у.е. (табл. 2). При этом площадь экспрессии CD4+ и CD8+ клеток достоверно не различалась, а оптическая плотность маркера Т-супрессоров была в 3 раза больше, чем для маркера Т-кил-леров. Так же, как и в I триместре беременности, при сроке гестации 23-26 недель в ворсинах хориона были обнаружены единичные тучные клетки.

Подводя итоги исследованию плаценты со сроком гестации 23-26 недель, можно сделать вывод о том, что по сравнению с I триместром беременности в этот период развития плаценты снижается экспрессия фактора роста сосудов, уменьшается количество агрессивных иммунокомпетентных клеток и возрастает роль Т-супрессоров.

Результаты исследования иммунного статуса и ангиогеиеза в плаценте на 37-40 неделе гестации

Площадь экспрессии фактора роста сосудов при доношенной беременности составила около 1%, что указывает на тенденцию к снижению экспрессии VEGF в плаценте по сравнению с концом II триместра беременности. При этом оптическая плотность составила 0.35 у.е. (табл. 1, 2), что не отличается от данных, полученных для плаценты на сроке гестации 23-26 недель.

Площадь экспрессии CD35+клеток в плаценте на сроке гестации 37-40 недель составила всего около 0,2% при оптической плотности 0.38 у.е., что свидетельствует о наличии лишь единичных незрелых ДК (табл. 1, 2). При этом площадь экспрессии CD8+ клеток в доношенной плаценте составила около 4% при оптической плотности 0.34 у.е. (табл. 1, 2), что свидетельствует об увеличении численности Т-супрессоров к концу беременности.

Маркер CD4 (табл. 1, 2) не был выявлен в доношенной плаценте. Как и на более ранних сроках гестации, тучные клетки в доношенной плаценте присутствовали в незначительном количестве - 0-1 в поле зрения.

Резюмируя полученные данные, можно сделать вывод о том, что к концу беременности в плаценте замедляется рост сосудистой сети, а иммунологические реакции смещаются от цитототоксических в сторону супрессорных.

Результаты исследования иммунного статуса и ангиогеиеза в плаценте на 42-43 неделе гестации

В основу концепции старения плаценты положены исследования переношенной беременности, продолжающейся свыше 42 недель. В связи

с этим, нами было проведено иммуногистохимическое исследование плацент при переношенной беременности.

Площадь экспрессии фактора роста сосудов (VEGF) в плаценте на 42-43 неделе гестации составила около 2.52±0.70%, что достоверно выше, чем при доношенной беременности. Оптическая плотность VEGF при переношенной беременности не отличалась от значения, полученного при сроке гестации 37-40 недель и составила 0.34±0.04 у.е. Увеличение экспрессии VEGF при переношенной беременности, по сравнению с доношенной, свидетельствует об активации роста сосудистого русла на 42-43 неделях гестации, что может являться компенсаторным механизмом, направленным на поддержание жизнеобеспечения развивающегося плода в неблагоприятных условиях. Развитие сосудистого роста при переношенной беременности указывает на то, что плацента является постоянно растущим органом. При исследовании иммунного статуса плаценты на 42-43 неделе гестации было установлено, что маркеры Т-лимфоцитов CD4 и CD8 не экспрессируются.

Площадь экспрессии маркера CD35 при сроке гестации 42-43 недели составила 0.20±0.04% при оптической плотности 0.39±0.05 у.е., что не отличается от значений, полученных при доношенной беременности. Полученные данные согласуются с результатами, представленными Е.А. Лапиной (2004), показавшей, что у здоровых женщин в возрасте от 29 до 35 лет как при доношенной, так и при переношенной беременности, в стволовых и промежуточных ворсинах хориона наблюдаются единичные CD3 5-со-держащие клетки.

Поскольку маркер Т-киллеров, CD4+, не был выявлен ни в доношенной плаценте, ни в переношенной плаценте, экспрессия CD8 при переношенной беременности отсутствовала, а количество CD35+ оставалось стабильно низким, можно предположить, что старение плаценты выражается в снижении ее иммунной активности, начиная с 42 недели гестации.

При этом тучные клетки в переношенной плаценте были единичными в поле зрения. Вероятно, верифицированные нами единичные тучные клетки плаценты не являются резидентными в плаценте, а попадают в нее с током крови, что позволяет объяснить их неизменное присутствие в малых количествах на всех стадиях формирования плаценты.

Морфометрический анализ экспрессии маркеров, характеризующих развитие сосудистой сети и иммунный статус плаценты при переношенной беременности показал, что при сроке гестации 42-43 недели в плаценте продолжается рост сосудистой сети, но, вместе с тем, в ней отсутствуют выявленные ранее субпопуляции иммунных клеток, что является признаком иммунологического старения плаценты.

Результаты исследования экспрессии VEGF при развитии и инволюции плаценты

Проведенные нами исследования позволили установить, что в период с 6 по 10 неделю гестации площадь экспрессии VEGF составила 6.12%, что

в среднем в 3.5 раза больше, чем на более поздних сроках развития плаценты (табл. 1, 2). Так, в конце II и III триместров беременности экспрессия данного маркера составила соответственно 1.65 и 1.25%. Хотя различия площади экспрессии УЕСР между сроками гестации 23-26 недель и 37-40 недель были недостоверны, наблюдалась тенденция к снижению этого показателя к моменту формирования зрелой плаценты (рис. 2А).

При переношенной беременности площадь экспрессии УБОР в плаценте составила 2.52%, что достоверно в 2 раза выше, чем при доношенной беременности (рис. 2А). Оптическая плотность экспрессии УЕОБ на всех изученных сроках гестации достоверно не изменялась и составила около 0.3 у.е. (рис. 2Б).

А Б

Рис.2. Экспрессия VEGFm различных сроках гестации: А- площадь экспрессии, Б - оптическая плотность.

* - р < 0.05 по сравнению с площадью экспрессии в I группе (6-10 неделя гестации); **- р < 0.05 по сравнению с площадью экспрессии в III группе (37-40 неделя гестации).

В I триместре развития плаценты процессы ангиогенеза и формирования сосудистой сети наиболее выражены, тогда как к концу II триместра рост сосудистой сети замедляется и остается на стабильно низком уровне до достижения плацентой физиологической зрелости. Данные по экспрессии VEGF в переношенной плаценте позволяют сделать заключение о предполагаемом старении этого органа. Выявленное увеличение площади экспрессии фактора роста сосудов, вероятно, отражает компенсаторный механизм, направленный на поддержание жизнеобеспечения растущего плода.

Коэффициент Спирмана между выборками из сроков гестации и площади экспрессии VEGF составил - 0.4. Это свидетельствует о наличии нелинейной отрицательной связи умеренной тесноты, аппроксимируемой уравнением y=0.0003x3-0.02x2-0.03x+7. Полученное уравнение показывает, что с начала I триместра беременности и до 32 недели гестации экспрессия

УЕСР монотонно понижается, до 40 недели держится на постоянном уровне, а к 42-43 недели беременности незначительно повышается (рис. ЗА).

Коэффициент Спирмана для оптической плотности УЕвР и срока гестации составил 0.6, что указывает на наличие положительной связи умеренной тесноты, которая описывается параболическим уравнением у=0.000009х2-0.004х+0.352. Полученная зависимость показывает, что до 25 недели беременности оптическая плотность не изменяется, а затем незначительно возрастает (рис. ЗБ).

А Б

16 24 32 40 48 Срок гестации, недель

20 30 40 50 Срок гестации, недель

Рис. 3. Зависимость экспрессии УЕОР в плаценте от срока гестации: А — площадь экспрессии, Б - оптическая плотность. Черная кривая с точками - экспериментальные данные, пунктирная линия - аппроксимирующая кривая.

В свете гипотезы старения плаценты полученные данные свидетельствуют о том, что повышение экспрессии фактора роста сосудов при переношенной беременности может служить компенсаторным механизмом, призванным нивелировать патологические процессы, связанные с инволютивными изменениями в плаценте и обеспечить нормальное развитие плода.

Результаты исследования экспрессии СБ35 при развитии и инволюции плаценты

Площадь экспрессии С035+ ДК в ворсинах хориона в период с 6 по 10 неделю гестации составила 8.81%, что в 6,5 раз больше, чем на 23-26 неделе беременности, где этот показатель был равным 1.34%. При доношенной и переношенной беременности площадь экспрессии СБ35 достоверно не различалась и составила соответственно 0.19 и 0.2%, что в 4 раза меньше, чем в 1 триместре беременности и в 6.7 раз меньше, чем во II триместре (табл. 1,2; рис. 4А).

Рис. 4. Экспрессия С035 на различных сроках гестации: А - площадь экспрессии, Б - оптическая плотность.

* - р < 0.05 по сравнению с площадью экспрессии в I группе (6-10 неделя гестации); **- р < 0.05 по сравнению с площадью экспрессии во II группе (23-26 неделя гестации); #- р < 0.05 по сравнению с оптической плотностью во II группе (23-26 неделя гестации).

Оптическая плотность СБ35 в плаценте при сроках гестации 6-10 и 23-26 недель не изменялась и составила 0.32 и 0.28 у.е. Между группами доношенной и переношенной беременности оптическая плотность также не различалась, но имела тенденцию к повышению, по сравнению с более ранними сроками гестации, и составила соответственно 0.42 и 0.39 у.е., что было достоверно больше, по сравнению со II триместром беременности (рис. 4Б).

Полученные данные показали, что максимальное количество незрелых ДК характерно для I триместра беременности. Снижение количества ДК во II триместре беременности и в зрелой плаценте может быть связано с тем, что на более поздних сроках развития главенствующую роль в поддержании иммунного статуса плаценты играют другие субпопуляции иммунных клеток. Отсутствие различий между количеством ДК при доношенной и переношенной беременности полностью согласуется с концепцией стационарного старения, постулирующей, что одним из критериев инволюции органа является отсутствие прироста его функциональных возможностей и метаболических показателей.

Коэффициент корреляции Спирмана между выборками из площади экспрессии СБ35 и сроком гестации составил -0.8, что свидетельствует о сильной отрицательной нелинейной связи между ними. Зависимость площади экспрессии СБ35 от срока гестации аппроксимируется степенным уравнением у=1322х~2 (рис. 5А). Максимальное количество ДК в плаценте характерно для начала беременности, к 32 неделе их количество снижается

и далее не изменяется. В данном случае фаза «плато», отражающая стационарное старение плаценты, наблюдается с 40 по 43 неделю беременности.

Коэффициент Спирмана между выборками из оптической плотности экспрессии СБ35 и сроком гестации составил 0.6, что свидетельствует о наличии положительной нелинейной связи умеренной тесноты между указанными величинами, аппроксимируемой уравнением у=0.0001х2-0.008х+0.4. Параболическая зависимость показывает, что до 24 недели беременности оптическая, плотность не изменяется, а затем незначительно возрастает (рис. 5Б).

А Б

Рис. 5. Зависимость экспрессии СБ35 в плаценте от срока гестации: А -площадь экспрессии, Б - оптическая плотность. Черная кривая с точками -экспериментальные данные, пунктирная линия - аппроксимирующая кривая.

ДК в I триместре беременности играют важную роль в поддержании иммунного баланса между тканями матери и плода, тогда как при последующем развитии плаценты их количество уменьшается и к 37-42 неделе выходит на «плато», соответствующее состоянию стационарного старения плаценты.

Результаты исследования экспрессии СБ4 при развитии и инволюции плаценты

Площадь экспрессии и оптическая плотность СБ4+ клеток в I триместре беременности была в 2 раза больше, чем во II триместре, и составила соответственно 8.20% и 0.28 у.е. и 4.22% и 0.16 у.е. (табл. 1,2; рис. 6А, Б). В плаценте с доношенной и переношенной беременностью С04+ клетки не были выявлены. Полученные данные показали, что Т-кил-леры играют важную роль в формировании иммунного статуса плаценты на 6-10 неделе гестации, защищая ткани матери и плода от чужеродных

агентов. Снижение количества Т-киллеров к 23-26 неделе гестации может быть обусловлено высокой цитотоксичностью данной субпопуляции иммунных клеток, которая может быть направлена против быстро развивающегося организма плода. Вероятно, как во II, так и в III триместре беременности, функцию Т-киллеров берут на себя менее агрессивные плацентарные макрофаги. Отсутствие СБ4' клеток в ворсинах хориона при доношенной и переношенной беременности может служить отражением фазы «плато», характерной для стационарного иммунологического старения плаценты.

А Б

Рис. 6. Экспрессия СВ4 на различных сроках гестации: А - площадь экспрессии, Б - оптическая плотность.

* - р < 0.05 по сравнению с показателями экспрессии в I группе (6-10 неделя гестации)

Коэффициент Спирмана для обоих показателей экспрессии СЭ4 в связи со сроком гестации составил -1, что свидетельствует о наличии линейной отрицательной связи сильной тесноты между исследуемыми величинами.

Коэффициент Пирсона при сопоставлении площади экспрессии и оптической плотности СВ4 и срока гестации составил соответственно -0.99 и -0.97. Линейная зависимость между площадью экспрессии и сроком гестации описывается уравнением у=-0.25х+10 (рис. 7А); между оптической плотностью и сроком гестации соответствует уравнению у=-0.01х+0.36 (рис. 7Б).

Полученные линейные зависимости указывают на монотонное снижение количества Т-киллеров с увеличением срока гестации, а пересечения прямых с осью абсцисс в значении «41 неделя» подтверждает предположение о том, что переношенная плацента находится в состоянии не только стационарного старения, но в ней, в данном случае, наблюдается инволютивный процесс.

Рис. 7. Зависимость экспрессии CD4 в плаценте от срока гестации: А -площадь экспрессии, Б - оптическая плотность. Черная кривая с точками -экспериментальные данные, пунктирная линия - аппроксимирующая прямая.

Результаты исследования экспрессии CD8 при развитии и инволюции плаценты

Площадь экспрессии CD8+ клеток в плаценте I триместра беременности достоверно не отличались от указанных показателей во II триместре и составила соответственно 3.16 и 3.21% (табл. 1, 2; рис. 8А). При доношенной беременности площадь экспрессии Т-супрессоров возрастала в 1,3 раза по сравнению со сроком гестации 23-26 недель и составила 4.26% (рис. 8А). Оптическая плотность маркера CD8 во всех триместрах беременности оставалась неизменной (рис. 8Б). При переношенной беременности Т-супрессоры в плаценте выявлены не были.

Увеличение количества Т-супрессоров в III триместре беременности является защитным механизмом, обеспечивающим отсутствие сильных воспалительных и аутоиммунных реакций, которые могут привести к позднему гестозу и преждевременным родам.

Отсутствие Т-супрессоров в плаценте при переношенной беременности указывает на снижение способности плаценты к защите плода от иммунной агрессии матери и подтверждает предположение об иммунологическом старении плаценты.

Данные корреляционного анализа подтвердили приведенные нами предположения. Коэффициент Спирмана для выборок из площади экспрессии маркера CD8 и срока гестации составил -0.2, что указывает на отсутствие значимой корреляции между исследованными величинами.

Коэффициент Спирмана для выборок из оптической плотности маркера CD8 и срока гестации был равен -1, что указывает на наличие отрицательной линейной зависимости сильной тесноты. Коэффициент Пирсона составил -0.74, что позволяет судить о близости полученной зависимости к линейной.

Рис. В. Экспрессия CD8 на различных сроках гестации: А - площадь экспрессии, Б - оптическая плотность.

* - р < 0.05 по сравнению с показателями экспрессии во II группе (23-26 неделя гестации)

cj 0,5

>> —- у = -0,01х + 0,6

1 0,4

в о 0,3

с к я 0,2

я и и 0,1

в г~ 0,0

с [ 1 ■ : ' : 1

0 8 16 24 32 40 4$

Срок гестации, недель

Рис. 9. Зависимость оптической плотности экспрессии CD8 в плаценте от срока гестации. Черная кривая с точками - экспериментальные данные, пунктирная линия - аппроксимирующая прямая.

Оптическая плотность экспрессии CD8 аппроксимируется линейной функцией у= -0.01х+0.6 (рис. 9). Линейная зависимость показывает, что при увеличении срока гестации оптическая плотность, характеризующая концентрацию CD8 клеток, незначительно снижается к моменту достижения плацентой зрелости.

Полученные данные позволяют сказать, что Т-супрессоры участвуют в поддержании иммунной толерантности между тканями матери и плода, что является исключительно важным механизмом в обеспечении нормального вынашивания беременности. Отсутствие Т-супрессоров в плаценте при сроке

42-43 недели является подтверждением ослабления ее иммунной функции, что может быть связано с иммунологическим старением плаценты.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Анализ проведенных исследований по изменению состояния сосудистой сети и иммунного статуса плаценты в процессе ее развития и инволюции у женщин старшего репродуктивного позволяет объединить две существующие в настоящее время концепции старения плаценты.

Первая концепция связывает старение плаценты с состоянием организма беременной, полагая, что старение плаценты, как и любого органа в организме женщины, происходит соответственно ее биологическому возрасту. Известно, что при старении органа обменные процессы в нем замедляются, что может выражаться в прекращении роста и редукции сосудистой сети.

Вторая теория рассматривает реальное старение плаценты, которая, подобно любому другому органу, проходит свой жизненный цикл от развития до инволюции. В связи с этим происходит редукция структур плаценты, которая начинается после 32 недели гестации и особенно выражена при сроке свыше 42 недель, что проявляется развитием морфо-функциональных процессов, напоминающих старение органов.

В соответствии с первой концепцией, признаки старения следует изучать на материале плацент, полученных от женщин старшего репродуктивного возраста, тогда как вторая теория предлагает исследовать плаценты при переношенной беременности. Следовательно, наиболее выраженные признаки старения должны наблюдаться при анализе плацент на 42-43 неделе гестации, полученных от женщин старшего фертильного возраста. Наши исследования стали подтверждением этой гипотезы.

Анализ экспрессии фактора роста эндотелия сосудов VEGF на различных сроках гестации плаценты показал, что в I триместре беременности темпы роста сосудистой сети максимальны, тогда как к концу III триместра они значительно замедляются, что соответствует завершению развития плаценты. К 37-40 неделе гестации возрастающие трофические потребности плода обеспечиваются морфо-функциональной перестройкой ворсин хориона, тогда как при пролонгированной беременности этот резерв уже исчерпан, и для поддержания жизнедеятельности плода включается компенсаторный механизм - увеличение экспрессии VEGF в плаценте.

Исследование иммунного статуса плаценты у женщин старшего репродуктивного возраста показало, что в I триместре беременности ведущую роль в формировании иммунного статуса плаценты играют ДК и Т-киллеры, а к концу III триместра наблюдается преобладание Т-супрессоров. При переношенной беременности проявляются признаки иммунного старения плаценты: исчезают Т-киллеры и Т-супрессоры, а количество ДК выходит на «плато», что согласуется с теорией стационарного старения.

Анализ данных показал, что в плацентах, полученных от женщин старшего репродуктивного возраста при переношенной беременности, наблюдаются

признаки старения, выражающиеся в компенсаторно-приспособительных сосудистых реакциях на фоне снижения иммунной активности плаценты.

ВЫВОДЫ

1. У женщин старшего репродуктивного возраста при переношенной беременности наблюдаются признаки старения плаценты, выраженные в возникновении компенсаторно-приспособительных реакций, реализуемых через фактор роста эндотелия сосудов (VEGF) и снижение количества некоторых субпопуляций иммунных клеток.

2. Экспрессия фактора роста эндотелия сосудов (VEGF) в плаценте максимальна в I триместре беременности, затем она снижается, и до конца III триместра остается на неизменном уровне, что отражает скорость роста плаценты.

3. При переношенной беременности экспрессия фактора роста эндотелия сосудов (VEGF) возрастает, что может быть обусловлено компенсаторно-приспособительными реакциями, направленными на поддержание жизнедеятельности плода.

4. Экспрессия маркеров иммунных клеток CD4, CD8, CD35 и фактора роста эндотелия сосудов VEGF плаценты коррелирует со сроком гестации.

5. В I триместре беременности в формировании иммунного статуса плаценты ведущую роль играют цитотоксические субпопуляции иммунных клеток, такие как Т-киллеры и дендритные клетки, во II триместре соотношение цитотоксических и супрессорных иммунных клеток примерно одинаково, а к концу III триместра беременности Т-супрессоры преобладают над ДК, а

Т-киллеры отсутствуют.

6. У женщин старшего репродуктивного возраста при переношенной беременности отсутствуют Т-супрессоры и Т-киллеры, наблюдаются только единичные ДК, что, в совокупности, свидетельствует об иммунологическом старении плаценты.

7. Количество ДК в I триместре беременности максимально, ко II триместру оно резко снижается, а при доношенной и переношенной беременности выявлены только единичные ДК, что соответствует фазе «плато» и подтверждает теорию стационарного старения.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. У женщин старшего репродуктивного возраста при прерывании беременности рекомендуется проведение иммуногистохимического исследования соотношения CD4+/CD8+ клеток в плаценте с целью выявления причины невынашивания беременности и назначения адекватной терапии.

2. Для исключения иммунологической патологии беременности и ее последствий для ребенка женщинам старшего репродуктивного возраста рекомендуется проводить иммунологическое исследование крови на наличие цитотоксических популяций лимфоцитов.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

Статьи в журналах по перечню ВАК Минобрнауки РФ

1. Экспрессия CD8 как маркера риска невынашивания беременности у женщин с гестозом/ Линькова Н.С., Костылев A.B., Костючек И.Н., Полякова В.О.// Вестник Российского университета дружбы народов. Серия Медицина. Акушерство и гинекология. -№6. - 2009. - С. 326-331.

Тезисы докладов

2. Взаимодействие некоторых субпопуляций иммунокомпетентных клеток плаценты у женщин различного возраста на фоне гестоза/Н.С. Линькова, А.В.Костылев, H.A. Пальченко, В.О. Полякова, И.Н.Костючек//Матер. Международной научно-практической конференции с международным участием «Весенняя геронтологическая конференция в Белгороде», Белгородский государственный университет. - Белгород, 2009. - С. 29-30.

3. Зависимость количества Т-супрессоров в плаценте от возраста женщин в норме и при гестозе/ Н.С. Линькова, A.B. Костылев, И.Н. Костючек, В.О. Полякова, И.М. Кветной//Сб. научных работ студентов и молодых ученых Всероссийской конференции с международным участием, посвященной

65-летию ЯГМА «Актуальные вопросы медицинской науки». - Ярославль, 2009.-С. 90-91.

4. Изменение иммунного статуса плаценты у женщин разного возраста/ Н.С. Линькова, A.B. Костылев, И.Н. Костючек, В.О. Полякова, И.М. Кветной//Сб. научных работ студентов и молодых ученых Всероссийской конференции с международным участием, посвященной 65-летию ЯГМА «Актуальные вопросы медицинской науки». - Ярославль, 2009. - С. 90.

5. Корреляция возраста женщин и иммунного статуса плаценты при гестозе / Н.С. Линькова, A.B. Костылев, И.Н. Костючек, И.М. Кветной//Сб. тез. Всероссийской научно-практической конференции «Амбулаторно-клиническая практика - платформа женского здоровья». -Москва, 2009. - С. 155-156.

6. Костылев A.B. Роль Т-лимфоцитов плаценты в развитии угрозы невынашивания беременности на фоне гестоза./А.В. Костылев, Н.С. Линькова, И.Н. Костючек//Матер. Всероссийской научной конференции, посвященной 150-летию кафедры патологической анатомии Военно-медицинской академии им. С.М. Кирова. - Санкт-Петербург, 2009. -С. 66-67.

7. Костылев A.B. Т-лимфоциты и НК-клетки как антагонисты в иммунном ответе доношенной плаценты/ХП Всероссийская медико-

биологическая конференция молодых исследователей «Фундаментальная наука и клиническая медицина» Санкт-Петербург, 2009. - С. 186-187.

8. Линькова Н.С. Корреляция экспрессии макрофагов плаценты у женщин различного возраста в норме и при гестозе/ Н.С. Линькова, A.B. Костылев, И.Н. Костючек//ХИ Всероссийская медико-биологическая конференция молодых исследователей «Фундаментальная наука и клиническая медицина». - Санкт-Петербург, 2009. - С. 185-186.

9. Натуральные киллеры в плаценте у женщин различного фертильного возраста в норме и при патологии/ Н.С. Линькова,

A.B. Костылев, И.Н. Костючек, И.М. Кветной//Сб. тез. Всероссийской научно-практической конференции «Амбулаторно-клиническая практика -платформа женского здоровья». - Москва, 2009. - С. 156-158.

10. Причины невынашивания беременности у женщин старшего фертильного возраста/Н.С. Линькова, A.B. Костылев, И.Н. Костючек, H.A. Пальченко, В.О. Полякова//Матер. Международной научно-практической конференции с международным участием «Осенняя геронтологическая конференция в Белгороде», Белгородский государственный университет. - Белгород, 2009. - С. 19-20.

11. Роль макрофагов и дендритных клеток в иммунном ответе плаценты при гестозе/Линькова Н.С., Костылев A.B., И.Н. Костючек,

B.О. Полякова, И.М. Кветной //Тез. В матер. конференции «Нейроиммунология» в журнале «Нейроиммунология». - Санкт-Петербург, 2009. - т.VII. - №1. - С. 61.

12. Роль тучных клеток в иммунной функции последа при переношенной беременности/ Н.С. Линькова, A.B. Костылев, В.О. Полякова, И.М. Кветной //Сб. тез. ХШ Пущинской международной школы-конференции молодых ученых «Биология - наука XXI века», Пущино, 2009. -С. 106-107.

13. Роль CD4+ лимфоцитов в иммунологическом «старении» плаценты / Н.С. Линькова, A.B. Костылев, В.О. Полякова, H.A. Пальченко, И.М. Кветной//Матер. международной научно-практической конференции с международным участием «Осенняя геронтологическая конференция в Белгороде», Белгородский государственный университет. - Белгород, 2009. -С. 20-21.

14. CD8 как маркер угрозы выкидыша у женщин различных возрастных групп на фоне гестоза/Н.С. Линькова, A.B. Костылев, И.Н. Костючек, А.О. Дурнова, H.A. Пальченко, В.О. Полякова//Сб. тез. к научно-практической конференции молодых ученых «Актуальные вопросы клинической и экспериментальной медицины», СПбМАПО. - Санкт-Петербург, 2009. - С. 191-192.

Костылев Артем Вячеславович ОСОБЕННОСТИ АНГИОГЕНЕЗА И ИММУННОГО СТАТУСА ПЛАЦЕНТЫ ПРИ ЕЕ СТАРЕНИИ // Автореф. дис. канд. биол. наук: 14.01.30 - СПб., 2010. - 23 с.

Подписано в печать 12.02.2010. Формат 60*84 1/16. Бумага офсетная. Печать офсетная. Печ. л. 1,0. Тираж 100 экз. Заказ 53. Отпечатано с готового оригинал-макета. ЗАО "Принт - Экспресс" 197376, С.-Петербург, ул. Большая Монетная, 5 лит. А

Оглавление диссертации Костылев, Артем Вячеславович :: 2010 :: Санкт-Петербург

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.

ВВЕДЕНИЕ.

Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

ФАКТОР РОСТА СОСУДОВ И ИММУННЫЕ КЛЕТКИ ПЛАЦЕНТЫ ПРИ ЕЕ СТАРЕНИИ.

1.1. Некоторые особенности эмбриогенеза ворсинчатого хориона.

1.1.1. Образование и развитие ворсинчатого хориона в

I половине беременности.

1.1.2. Строение ворсинчатого хориона во II половине беременности.

1.1.3. Плацентарный рост и функциональная активность плаценты в конце беременности.

1.1.4. Морфологические предпосылки к старению плаценты.

1.1.5. Переношенная беременность как модель старения плаценты.

1.2. Фактор роста сосудов и иммунные клетки плаценты.

1.2.1. Фактор роста эндотелия сосудов VEGF.

1.2.2. Дендритные клетки.

1.2.3. Т-лимфоциты.

1.2.4. Тучные клетки.;.

Глава 2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

2.1. Материал для исследования.

2.2. Гистологические методы.

2.2.1. Выявление тучных клеток толуидиновым синим.

2.2.2. Иммуногистохимические методы.

2.3. Морфометрия и анализ микрофотографий.

2.4. Статистическая обработка результатов.

2.4.1. Коэффициент ранговой корреляции Спирмана.

2.4.2. Коэффициент ранговой корреляции Пирсона.

РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ

ОБСУЖДЕНИЕ.

Глава 3. ИММУННЫЙ СТАТУС И АНГИОГЕНЕЗ ПЛАЦЕНТЫ ПРИ ЕЕ СТАРЕНИИ.

3.1. Иммунный статус и ангиогенез плаценты на 6-10 неделе гестации.

3.2. Иммунный статус и ангиогенез плаценты на 23—26 неделе гестации.

3.3. Иммунный статус и ангиогенез плаценты на 37-40 неделе гестации.

3.4. Иммунный статус и ангиогенез плаценты на 42-43 неделе гестации.

3.5. Экспрессия VEGF при развитии и инволюции плаценты.

3.6. Экспрессия CD35 при развитии и инволюции плаценты.

3.7. Экспрессия CD4 при развитии и инволюции плаценты.

3.8. Экспрессия CD8 при развитии и инволюции плаценты.

Введение диссертации по теме "Геронтология и гериатрия", Костылев, Артем Вячеславович, автореферат

Актуальность темы

Плацента является уникальным объектом для геронтологических исследований, поскольку ее онтогенез четко очерчен по времени гестации, ткань и сосудистая сеть плаценты являются прекрасным материалом для поиска критериев старения на органном, тканевом, клеточном и субклеточном уровнях [Кветной И.М. и др., 2005].

В настоящее время существует две теории, по-разному освещающие проблему старения плаценты.

Первая теория утверждает, что существует старение плаценты как органа. Сторонники данной теории полагают, что по мере созревания плода и становления его собственных систем жизнеобеспечения, снижается потребность в трофических, гормональных, иммунных, газообменных и выделительных функциях плаценты. Это приводит к редукции ее структур, которая начинается после 32 недели гестации, и особенно выражена при переношенной беременности, то есть при сроке более 42 недель [Волкова О.В. и др., 1975]. В связи с этой теорией, для нашего исследования были выбраны не только плаценты I, II и III триместра беременности, но и материал, полученный при переношенной беременности.

Вторая теория постулирует, что дегенеративно-дистрофические изменения и циркуляторные нарушения в плаценте связаны не столько с ее собственным старением, сколько являются отражением возрастных изменений в организме женщины [Милованов А.П. 1999; Князькин И.В. и др., 2007; Хавинсон В.Х. и др., 2009]. Другими словами, инволютивные изменения в плаценте тем более выражены, чем старше возраст беременной. Многочисленные подтверждения данной теории [Сухих Г.Т., Ванько J1.B., 2003; Соколов Д.И., 2007; Rosso Р., 1976] свидетельствуют о том, что для нашего исследования целесообразно отобрать женщин старшего репродуктивного возраста, у которых инволютивные изменения в плаценте будут более заметны, по сравнению с молодыми первородящими.

По данным Д.И. Соколова с соавторами (2008) при физиологически протекающей беременности при увеличении срока гестации секреция антиангиогенных факторов и экспрессия их рецепторов снижается. Кроме того, было отмечено усиление секреции ангиогенина, который способствует развитию сосудистой сети плаценты и подавляет активность цитотоксических лимфоцитов. Полученные данные косвенно указывают на ведущую роль факторов развития сосудистой сети плаценты в процессе ее формирования, хотя имеющиеся в литературе данные недостаточно освещают связь состояния сосудистой сети плаценты и ее инволюции. Помимо этого, вопрос о связи между ангиогенными факторами и активностью цитотоксических иммунных клеток плаценты недостаточно изучен.

Цель и задачи исследования

Для достижения указанной цели были поставлены и последовательно решены следующие задачи:

3. Изучить особенности ангиогенеза в плаценте на разных сроках ее развития.

5. Изучить различные аспекты старения плаценты.

Научная новизна

Установлено, что наиболее активное развитие сосудистой сети плаценты характерно для I триместра беременности и при переношенной беременности. Впервые построены аппроксимирующие зависимости между сроком гестации и количеством иммунных клеток и VEGF в плаценте. Выявлено, что в ворсинчатом хорионе присутствуют три из четырех изученных субпоплуляций иммунных клеток: Т-киллеры, Т8 супрессоры и дендритные клетки. Тучные клетки в плаценте на всех исследуемых сроках гестации были верифицированы в незначительном количестве. Показано влияние срока гестации на состав и соотношение различных субпопуляций иммунных клеток плаценты.

Практическая значимость

Полученные результаты позволяют расширить представления о морфо-функциональных изменениях плаценты на различных сроках гестации у женщин старшего репродуктивного возраста. Результаты исследования позволят оптимизировать эффективность диагностики воспалительных процессов в плаценте и причины преждевременных родов и выкидышей, а так же прогнозировать риск повторного развития патологической беременности у женщин старшего репродуктивного возраста.

Положения, выносимые на защиту

4. Во II триместре беременности количество Т-киллеров и дендритных клеток сопоставимо с количеством Т-супрессоров, а к концу беременности Т-супрессоры являются ведущей субпопуляцией иммунных клеток в ворсинах хориона.

Связь с научно-исследовательской работой Института

Структура и объем диссертации

Заключение диссертационного исследования на тему "Особенности ангиогенеза и иммунного статуса плаценты при ее старении"

выводы

1. У женщин старшего репродуктивного возраста при переношенной беременности наблюдаются признаки старения плаценты, выраженные в возникновении . компенсаторно-приспособительных реакций, реализуемых через фактора роста эндотелия сосудов (VEGF) и снижение количества некоторых субпопуляций иммунных клеток.

3. При переношенной беременности экспрессия фактора роста эндотелия сосудов (VEGF) возрастает, что может быть обусловлено компенсаторно-приспособительными реакциями, направленными па поддержание жизнедеятельности плода.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

Список использованной литературы по медицине, диссертация 2010 года, Костылев, Артем Вячеславович

1. Автандилов Г.Г. Диагностическая медицинская плоидометрия. М.: Медицина, 2006. - 192 с.

2. Автандилов Г.Г. Основы клинической паталогической анатомии. Учебное пособие для студентов и аспирантов. М.: Медицина, 2002. - 240 с.

3. Айламазян Э.К. Акушерство. Учебник для студентов медицинских вузов. СПб.: Специальная литература, 1997. - 496с.

4. Айламазян Э.К, Соколов Д.И, Сельков С.А. Гестоз и атеросклероз: общность патогенетических механизмов. // Журнал акушерства и женских болезней. 2009. - Т. LVIII. - №1. - С. 4-6.

5. Афифи А, Эйзен С. Статистический анализ: Подход с использованием ЭВМ. М.: Мир, 1982. - 488 с.

6. Брусиловский А.И. Функциональная морфология плацентарного барьера человека. Киев, Здоровье, 1976. - 129 с.

7. Волкова О.Б, Тарабрин С.Б. Эмбриогенез человека и его регуляция. -М, 1973. 143с.

8. Глуховец Б.И, Глуховец Н.Г. Патология последа. СПб.: Грааль, 2002. - 448 с.

9. Говорка Э. Плацента человека. М.:, 1970. - 421 с.

10. Зубжицкая Л.Б, Кошелева Н.Г, Семенов В.В. Иммуноморфологическое состояние плаценты при акушерской патологии.- СПб.: Нордмедиздат, 2005. 304 с.

11. Зыбина Е.В. Цитология трофобласта. Л.: Наука, 1986. - 192 с.

12. Кащенко Н. Эпителий человеческого хориона и его роль в гистогенезе последа. Харьков, 1884. - 33с.

13. Кветной И.М, Айламазян Э.К, Лапина Е.А. и др. Сигнальные молекулы- маркеры зрелости плаценты. М.: МЕД пресс-информ, 2005. - 78с.

14. Кнорре А.Г. Краткий очерк эмбриологии человека. Л.: Медгиз, 1959.- 223с.

15. Князькин И.В., Кветной И.М., Зезюлин П.Н. и др. Нейроиммуноэндокринология мужской половой системы, плаценты и эндометрия. СПб.: Знание, 2007. - 192с.

16. Козлов В.И., Мельман Е.П., Нейко Е.М., и др. Гистофизиология капилляров. СПб.: Наука, 1994. - 234 с.

17. Колесников С.И. Периферический цитотрофобласт плаценты человека // Автрореф. Дис, канд. мед. наук. Симферополь, 1973. - 22 с.

18. Коржевский Д.Э., Оттелин В.А., Неокессарийский А.А. и др. Структурная организация макрофагов формирующейся плаценты человека. // Морфология. 2005. - Т. 128. - №6. - С. 60-62.

19. Леонов В.П. Обработка экспериментальных данных на программируемых микрокалькуляторах. Томск, Изд-во Томского университета, 1990. - 376 с.

20. Лукьянова Н.Ю., Кулик Г.И., Чехун В.Ф. Роль генов р53 и bcl-2 в апоптозе и лекарственной резистентности опухолей // Вопр. онкол. 2000. -Т. 46.-№2.-С. 121-126.

21. Милованов А.П. Патология системы мать-плацента-плод. Руководство для врачей. М.: Медицина, 1999. - 448 с.

22. Милованов А.П., Курик Е.Г. Функциональная морфология вневорсинчатого (периферического) трофобласта плаценты человека // Архив анатомии, гистологии и эмбриологии. 1990. - № 10. - С. 77-82.

23. Михайлова Н.П. Гистоэнзиматические особенности плаценты в норме и при некоторой акушерской патологии. Горький, Горьковский медицинский институт, 1977. - 73 с.

24. Павлов О.В., Сельков С.А., Лалаян Д.В. и др. Особенности секреции провоспалительных цитокинов тканью ворсинчатого хориона при невынашивании беременности // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. 2008. Т. 135. - №4. - С. 441-444.

25. Пальцев М.А., Кветной И.М. Руководство по нейроиммуноэндокринологии. М.: Медицина, 2008. - 512с.

26. Савельева Г.М., Федорова М.В., Клименко П.А., и др. Плацентарная недостаточность. М.: Медицина, 1991. - 276 с.

27. Савельева Г.М., Федорова Т.В. Профилактика и лечение плацентарной недостаточности // Акушерство и гинекология, 1985. Т. 12. - С. 66-69.

28. Сельков С.А., Павлов О.В. Плацентарные макрофаги. М.: Товарищество научных изданий КНК, - 2007. - 185 с.

29. Соколов Д.И. // Автореф. дис. д. биол. наук. СПб., 2009. - 39 с.

30. Соколов Д.И. Васкулогенез и ангиогенез в развитии плаценты. // Журнал акушерства и женских болезней. 2007. - T.LVI. - №3. - С. 129-133.

31. Соколов Д.И., Колобов А.В., Лесничия М.В., и др. Роль проангиогенных и антиангиогенных факторов в развитии плаценты. // Медицинская иммунология. 2008. - Т. 10. - №4-5. - С. 347-352.

32. Соколов Д.И., Колобов А.В., Лесничия М.В., и др. Продукция тканью плаценты проангиогенных и антиангиогенных факторов. // Молекулярная медицина. 2009. - №2. - С. 49-50.

33. Соколов Д.И., Колобов А.В., Печерина Л.В., и др. Экспрессия VEGF и рецептора VEGF-R3 эндотелиальными клетками плаценты в норме и при гестозе. // Бюллетень эксириментальной биологии и медицины. 2008. - Т. 145. -№3. - С. 321-325.

34. Субботин М.Я., Донских Н.В., Брусиловский А.И., и др. Плацента человека // Сб. научных статей. Гистофизиология и гистопатологиявнезародышевых органов человека и млекопитающих. Новосибирск, 1971.-С. 67-71.

35. Сухих Г.Т., Ванько JI.B. Иммунология беременности. М.: Издательство РАМН, 2003. - 400 с.

36. Тетруашвилли Н.К., Сидельникова В.М., Верясов В.Н. и др. Роль системы цитокинов в патогенезе привычного выкидыша и преждевременных родов // Вестник Российской ассоциации акушеров-гинекологов. 1999. - №3. - С.37-45.

37. Тотолян А.А., Фрейдлин И.С. Клетки иммунной системы. Учебное пособие. СПб.: Наука, 2000. - 231с.

38. Федорова М.В., Калашникова Е.П. Плацента и ее роль при беременности. М.: Медицина, 1986. - 256 с.

39. Фрейдлин И.С., Соколов Д.И. Кооперативные эффекты цитокинов. // Современные проблемы аллергологии, иммунологии и иммунофармакологии. Сб. трудов., М.: ВИНИТИ РАН Т. 1. - 2001. - С. 311-324.

40. Цинзерлинг А.В. Современные инфекции. Патологическая анатомия и вопросы патогенеза. СПб.: Сотис, 1993. - 363 с.

41. Цинзерлинг А.В., Мельникова В.Ф. Перинатальные инфекции. Вопросы патогенеза, морфологической диагностики и клинико-морфологических сопоставлений. Практическое руководство. СПб.: Элби СПб, 2002. - 352 с.

42. Цирельников Н.И. Гистофизиология плаценты человека. Новосибирск: Наука, 1980. 184 с.

43. Чернуха Е.А., Орлова В.Г., Афонина Л.И. Соотношение эстрогенов и прогестерона в плазме крови при перенашивании беременности // Акушерство и гинекология. 1986. - №1. - С. 31-36.

44. Хавинсон В.Х., Коновалов С.С. Избранные лекции по геронтологии. -СПб.: Прайм, 2009. 896с.

45. Шатилова И.Г. Роль плацентарных макрофагов (клетки Кащенко-Гофбауэра) в развитии ворсин и патогенезе неразвивающейся беременности. // Автореф. дис. канд. мед. наук. М., 1999. - 27с.

46. Шехтер А.Б., Серов В.В. Воспаление и регенерация // Воспаление. Руководство для врачей // Ред.: Серов В.В. М.: Медицина, 1995. С. 152-173.

47. Шмидт Р., Тевс Г. Физиология человека. // М.: Мир, 1996. 843 с.

48. Ширшев С.В. Иммунобиологические особенности антигенов плаценты

49. Успехи современной биологии. 2000. - Т. 120. - № 3. - С. 279-290.

50. Ширшев С.В. Механизмы иммунного контроля процессов репродукции. Екатеринбург: УрО РАН, 1999. - 381 с.

51. Ярилин А.А. Основы иммунологии. М.: Медицина, 1999. - 608с.

52. Abraham S., Indrasingh I., Vettivel S. Gross morphology and ultrastructure of dendritic cells in the normal human decidua // Clin. Anat. 2000. - V. 13. -№3. - P. 177-180.

53. Agarwal R., Loganath A., Roy A.C. et al. Increased expression of interleukin-6 in term compared to the first trimester human placental villi // Horm. Metab. Res. 2000. - V. 32. - №5. - P. 164-168.

54. Ahmed A., Li X.F., Dunk C. et al. Colocalisation of vascular endothelial growth factor (VEGF) and placenta growth factor (PIGF) and solubleFlt-1 by oxygen-a review // Placenta. 1995. - V. 21. - Suppl. A. - P. S16-S24.

55. Albrecht E.D., Pepe G.J. Estrogen regulation of placental angiogenesis and fetal ovarian development during primate pregnancy // Int. J. Dev. Biol. 2009. -V.5.-P. 145-151.

56. Aplin J.D. Developmental cell biology of human villous trophoblast: current research problems // Int. J. Dev. Biol. 2009. - V. 2. - P. 112-116.

57. Arck P.C., FerricK D.A, Steele-Norwood D. et al. Murine t-cell determination of pregnancy outcome: I. Effects of strain, сф T cell receptor, yP T cell receptor, and yP T cell subsets // Am. J. Reprod. Immunol. 1997. - V. 37. - №6. - P. 492-502.

58. Arck P.C, Hertwig K, Hagen E. et al. Pregnancy as a model of controlled invasion might be attributed to the ratio of CD3/CD8 to CD56 // Am. J. Reprod. Immunol. 2000. - V. 44. - №1. - P. 1-8.

59. Athanassakis I, Vassiliadis S. Interplay between T helper type 1 and type 2 cytokines and soluble major histocompatibility complex molecules: a paradigm in pregnancy // Immunology. 2002. - V. 107. - №3. - P. 281-287.

60. Bailey D.P, Kashyap M, Bouton L.A., et al. Interleukin-10 induces apoptosis in developing mast cells and macrophages // J. Leukoc. Biol. 2006. -Vol. 80. -№3. - P. 581-589.

61. Balasuriya H, Bell P, Waugh R. et al. Primate maternal placental angiography // J. Placenta. 2009. - V.l. - P. 56-61.

62. Benirschke K, Kaufmann P. Patology of the Human Placenta. 3rd ed. -New York, Springer Verlag, 1990. - 720 p.

63. Bischof P, Meisser A, Campana A. Mechanisms of endothelial control of trophoblast invasion // J. Reprod. Fertil. 2000. - V. 55. - P.65-71.

64. Bukovsky A, Cekanova M, Caudle MR et al. Variability of placental expression of cyclin E low molecular weight variants // Biol Reprod. 2002. -Vol. 67. - № 2. - P. 568-574.

65. Burton G.J, Jauniaux E, Charnock-Jones D.S. The influence of the intrauterine environment on human placental development // Int. J. Dev. Biol. -2009. V.2. - P. 237-242.

66. Boyd P. A. Quantitative studies of the normal human placenta from 10 weeks of gestation to term. // Early Hum. Devel. 1984. - Vol. 9. - P. 297-307.

67. Castellucci M, Kaufmann P. A three-dimencional study of the normal human placental villious core: II. Stromal architecture. // Placenta. 1982a. -V.3. -№3. -P.269-285.

68. Castellucci M., Kaufmann M. Basic structure of the villious trees // Pathology of the human placenta. 2000. - Eds. K. Benirshke, M. Kaufmann, New York: Springer Verlag. - P. 82-88.

69. Castellucci M., Kaufmann P. Evolution of the stroma in human chorionic villi throught pregnancy. // Bibl. Anat. 1982b. - V.22. - P. 40-45.

70. Castellucci M., Kozanke G., Verdenelli F. et al. Villious sprouting: fundamental mechanisms of human placental development // Hum. Reprod. Update. 2000. - Vol. 6. - №5. - P. 485-494.

71. Chaouat G., Zourbas S., Ostojic S. et al. A brief review of recent data on some cytokine expressions at the materno-fetal interface which might challenge the classical Thl/Th2 disharmony. // J. Reprod. Immunnol. 2002. - V.53. - №1-2.-P. 241-256.

72. Chaouat G., Ledee-Bataille N., Zourbas S. et al. Cytocines, implantation and early abortion: re-examining the Thl/Th2 paradigm leads to guestion the single pathway, single therapy concept. // Am. J. Reprod. Immunnol. 2003. -V.50. - №3. - P. 177-186.

73. Clark D.A. Controversies in reproductive immunology // Crit. Rev. Immunol. 1991.-V. 11.-№ 3-4. - P. 215-247.

74. Clark D.E., Smith S.K., Sharkey A.M. et al. Localization of VEGF and expression of its receptors fit and KDR in human placenta through pregnancy // Hum. Reprod. 1996. - V. 11. - №5. - P. 1090-1098.

75. Croy B.A., Wessels J.M., Linton N.F. et al. Cellular and molecular events in early and mid gestation porcine implantation sites: a review // Soc. Reprod. Fertil. 2009. - V. 66. - Suppl. 1. - P. 233-244.

76. D'Andrea M.R. et al. Differential expression of protease-activated receptors-1 and -2 in stromal fibroblasts of normal, benign and malignant human tissues. //Am. J. Pathol. 2001. - V. 158. - P. 2031-2041.

77. Dabiri S., Huntsman D., Makretsov N. et al. The presence of stromal mast cells identifies a subset of invasive breast cancers with a favorable prognosis // Mod. Pathol. 2004. - V. 17. - № 6. - P. 690-695.

78. Dilioglou S., Cruse J.M., Lewis R.E. Costimulatory function of umbilical cord blood CD14(+) and CD34(+) derived dendritic cells // Exp. Mol. Pathol. -2003.-V. 75.-№ l.-P. 18-33.

79. El-Hashash A.H., Warburton D., Kimber S.J. Genes and signals regulating murine trophoblast cell development // Mech. Dev. 2009. - V.45. - №3. - P. 243-248.

80. Goldstein J., Braverman M., Salafia C. et al. The phenotype of human placental macrophages and its variation with gestational age. // Am. J. Pathol. -1988. V.133. - №3. - P. 648-659.

81. Gudmundsson S., Dubiel M., Sladkevicius P. Placental morphologic and functional imaging in high-risk pregnancies // Semin. Perinatol. 2009. - V. 33. - №4. - P. 270-280.

82. Fox H. The incidence and significance of Hofbauer cells in the mature human placenta. // J. Pathol. Bacteriol. V.93. - 1970. - №2. - P. 710-717.

83. Fox H., Page Fack W. The human placenta as an experimental model. // Clin Endocrin. Metaboll. 1981. - V. 10. - № 1. - P. 57-72.

84. Fox H. Aging of the placenta. // Arch Dis Child Fetal Neanatal Ed. 1997. -V. 77.-P. 171-175.

85. Fowden A.L., Forhead A. Endocrine regulation of feto-placental growth // J. Horm. Res. 2009. - V. 72. - №5. - P. 257-265.

86. Fraccaroli L., Alfieri J., et al. A potential tolerogenic immune mechanism in a trophoblast cell line through the activation of chemokine-induced T cell death and regulatory T cell modulation. // Hum. Reprod. 2009. - V. 24(1). - P. 166-175.

87. Frank H-G., Malekzadeh F., Kertschanska S. Immunohistochemistry of two different types of placental fibrinoid // Acta Anat. 1994. - V. 150 - P. 55-68.

88. Fukuda M, Okuyama T, Furuya H. Growth and function of the placenta -with special reference to various enzymes involved in the biosynthesis of steroids in the human placenta. // Nippon Sanka Fujinka Gakkai Zasshi. 1986. -V. 38.-№3.-P. 411-416.

89. Geier G., Schuhman R., Kraus H. Regional unterschliedliche Zell proliferation innerhalb der Placentome reifer menschlicher Placenten: autoradiographische Untersuchungen. //Arch Gynecol. 1975. - V. 218. - P. 31-37.

90. Godfrey W.A. Characterization of the choroidal mast cell. // Trans. Am. Ophthalmol. Soc. 1987. - V. 85. - P. 557-599.

91. Handschuh K., Guibourdenche J., Cocquebert M. et al. Expression and regulation by PPARgamma of hCG alpha- and beta-subunits: Comparison between villous and invasive extravillous trophoblastic cells // J. Placenta. -2009. V. 3. - P. 132-136.

92. Hart D.N.G. Dendritic cells: unique leukocyte populations which control the primary immune response. // Blood. 1997. - V.90. - №9. - P. 3245-3287.

93. Hatta К., van den Heuvel M.J., Croy B.A. NK cells detect changes in adaptive immunity within mouse decidua from gestation day eight. // Placenta. -2009. V. 30. - №6. - P. 501-506.

94. Heath D., Lowe P., Smith P. Mast cells in the human carotid body. // J. Clin. Pathol. 1987. - V. 40. - № 1. - P. 9-12.

95. Hoffmann P., Saoudi Y., Benharouga M. et al. Role of EG-VEGF in human placentation: physiological and pathological implications // J. Cell. Mol. Med.2008.-V. 22.-P. 138-142.

96. Huisman M.A., Timmer В., Stegehuis J. et al. Vascularization in first-trimester chorionic villi in complicated and uncomplicated pregnancies // Am. J. Obstet. Gynecol. 2009. - V. 7. - P. 221-226.

97. Iverson I.E., Farsund T. Flow cytometry in the assessment of human placental growth. // Acta Obstet Scand. 1985. - V. 64. - P. 605-607.

98. Jackson M.R., Mayhew T.M., Boyd P.A. A quantitative description of the elaboration and maturation of villy from 10 weeks of gestation to term. // Placenta. 1992. - V. 13. - P. 357-370.

99. Kara S.A., Toppare M.F., Avsar F. et al. Placental aging, fetal prognosis and fetomaternal Doppler indices. // Eur. J. Obstet Gynecol. Reprod. Biol. -1999.-V. 82.-№1.-P. 47-52.

100. Kamishikiryo J., Maenaka K. HLA-G molecule // Curr. Pharm. Des.2009. V. 15. - №28. - P. 3318-3324.

101. Kammerer U., Eggert A.O., Kapp o. et. al. Unique appearance of proliferating antigen-presenting cells expressing DC-SIGN (CD209) in the deciduas of early pregnancy. // Am. J. Pathol. 2003. - V.162. - №3. - P. 887896.

102. Kammerer U., Schoppet M., McLellan A.D. et al. Human decidua contains potent immunostimulatory CD83- dendritic cells. // Am. J. Pathol. 2000. - V. 157.- №1.-P. 159-169.

103. Kastschenko N. Das menschliche Chorionepitel und dessen Rolle bei der Histogenese der Placenta. // Arch. Anat. Physiol. Anat. Abt. 1885. - №1-2. - P. 451-480.

104. Kayem G., Batteux F. Immunology of pregnancy. // Presse Med. 2008. -V. 37(11).-P. 1612-1619.

105. Kelso A. Thl and Th2 subsets: paradigms lost? // Immunol. Today. 1995. -V. 16. - №8. -P. 374-379.

106. Kim J.S., Romero R., Cushenberry E. et al. Distribution of CD14+ and CD68+ macrophages in the placental bed and basal plate of women with preeclampsia and preterm labor. // Placenta. 2007. - V. 28. - P. 571-576.

107. Kim J.S., Romero R., Kim M.R. et al. Involvement of Hofbauer cells and maternal T cells in villitis of unknown aetiology. // Histopathology. - 2008. - V. 52. - №4. - P. 457-464.

108. Kippler M., Hoque A.M., Raqib R. et al. Accumulation of cadmium in human placenta interacts with the transport of micronutrients to the fetus // Toxicol. Lett. 2009. - V.56. - №3. - P. 453-457.

109. Knofler M. Critical growth factors and signalling pathways controlling human trophoblast invasion // Int. J. Dev. Biol. 2009. - V. 27. -№4. - P. 332-338.

110. Kudo Т., Izutsu Т., Sato T. Telomerase activity and apoptosis as indicators of ageing in placenta with and without intrauterine growth retardation. // Placenta. 2000. - V. 21. - № 5-6. - P. 493-500.

111. Longo L.D., Reynolds L.P. Some historical aspects of understanding placental development, structure and function // Int. J Dev. Biol. 2009. - V. 3. -P. 331-337.

112. Malassine A., Cronier L. Hormones and human trophoblast differentiation: a review. // Endocrine. 2002. - V. 19. - № 1. - P. 3-11.

113. Martinoli C., Castellucci M., Zaccheo D. et al. Scanning electron microscopy of stromal cells of numan placental villi throughout pregnancy. // 1984. V. 235. - №3. - P. 647-655.

114. Metcalfe D.D., Baram D., Mekori Y.A. Mast cells. // Physiol. Rev. 1997. - V. 77. - P. 1033-1079.

115. Moffett A., Loke Y.W. The immunological paradox of pregnancy: a reappraisal. // Placenta. 2004. - V. 25. - №1. - P. 1-8.

116. Mues В., Langer D., Zwadlo G. et al. Phenotypic characterization of macrophages in human term placenta. // Immunology. 1989. - V. 67. - №3. - P. 303-307.

117. Nakamura O. Children's immunology, what can we learn from animal studies (1): Decidual cells induce specific immune system of feto-maternal interface // J. Toxicol. Sci. 2009. - V. 34. - Suppl. 2. - P. 331-339.

118. Nakamura Y., Ohta Y. Immunogistochemical study of human placental stromal cells. // Hum. Pathol. 1990. - V. 21. - №9. - P.936-940.

119. Nardozza L.M., Nowak P.M., Araujo Junior E. et al. Evaluation of placental volume at 7-10+6 weeks of pregnancy by 3D-sonography // Placenta. -2009. V. 30. - №7. - P. 585-589.

120. Nelson D.M. Apoptotic changes occur in cyncytiotrophoblast of human placental villi where fibrin type fibrinoid is deposited at discontinuties in the villous trophoblast. // Placenta. 1996. - V. 17. - №7. - P. 387-391.

121. Olkowski Z.L. Cytochemistry of ovarian hormone binding sites in human breast cancer // Eur. Microsc. Anal. 2002. - V. 79. - P. 27-28.

122. Pap E., Pallinger E., Falus A. et al. T lymphocytes are targets for platelet-and trophoblast-derived microvesicles during pregnancy. // Placenta. 2008. - V. 29. - P. 826-832.

123. Parmley T. Placental senescence. // Adv. Exp. Med. Biol. 1984. - V. 176. -P. 127-132.

124. Proctor L.K., Toal M., Keating S. et al. Placental size and the prediction of severe early-onset intrauterine growth restriction in women with low pregnancy-associated plasma protein-A. // Obstet .Gynecol. 2009. - V. 34. - №3. - P. 274282.

125. Rosso P. Placenta as an ageing organ. // Curr. Concept. Nutr. 1976. - V. 4 -P. 23-41.

126. Saito S., Nakashima A., Myojo-Higuma S. et al. The balance between cytotoxic NK cells and regulatory NK cells in human pregnancy. // J. Reprod. Immunol. 2008. - V. 77. - № 1. - P. 14-22.

127. Saito S., Shiozaki A., Sasaki Y. et al. Regulatory T cells and regulatory natural killer (NK) cells play important roles in feto-maternal tolerance. // Semin. Immunopathol. 2007. - V. 29. - № 2. - P. 115-122.

128. Salafia C.M., Zhang J., Charles A.K., Bresnahan M. et al. Placental characteristics and birthweight // Paediatr. Perinat. Epidemiol. 2008. - V. 22. -№3. - P. 229-239.

129. Sands J., Dobbing J. Continuing growth and development of third trimester human placenta. // Placenta 1985. - V. 6. - P. 13-22.

130. Schumacher A., Brachwitz N. et al. Human chorionic gonadotropin attracts regulatory T cells into the fetal-maternal interface during early human pregnancy. // J. Immunol. 2009. - V. 182(9) - P. 5488-5497.

131. Smith S.C, Baker P.N, Symonds E.M. Placental apoptosis in normal human pregnancy // Am. J. Obstet Gynecol. 1997. - V. 177. - № 1. - P. 57-65.

132. Staun-Ram E, Goldman S, Shalev E. p53 mediates epidermal growth factor (EGF) induction of MMP-2 transcription and trophoblast invasion // Placenta. 2009. - V. 22. - №4. - P. 24-29.

133. Sutton L, Mason D.Y, Redman C.W. HLA-DR positive cells in the human placenta. // Immunology. 1983. - V. 49. - №1. - P. 103-112.

134. Swanson L.D, Bewtra C. Increase in normal placental weights related to increase in maternal body mass index // J. Matern. Fetal. Neonatal. Med. 2008. - V. 21. - №2. - P. 111-113.

135. Szekeres-Bartho J. Regulation of NK cell cytotoxicity during pregnancy. // Reprod. Biomed Online.-2008. -V. 16(2). P. 211-217.

136. Theoharides T.C, Conti P. Mast cell: the Jekyll and Hyde of tumor growth. // Trends in Immunol. 2004. - V. 25. - P. 235-241.

137. Tilburgs T, Scherjon S.A, Roelen D.L. et al. Decidual CD8+CD28- T cells express CD 103 but not perforin. // Hum. Immunol. 2009. - V. 70. - №2. -P. 96-100.

138. Tilburgs T, Roelen D.L, van der Mast В,J. et al. Differential distribution of CD4(+)CD25(bright) and CD8(+)CD28(-) T-cells in decidua and maternal blood during human pregnancy.//- Placenta. 2006. - Suppl. A. - P. 47-53.

139. Vacek Z. Derivation and ultrastrucure of the stroma cells of the human chorionic villus. Praha, Folia Morphol. - 1970. - V. 18. - №1. - P. 1-13.

140. Vinnars M.T, Rindsjo E, Ghazi S. et al. The Number of CD68+ (Hofbauer) Cells is Decreased in Placentas with Chorioamnionitis and with Advancing Gestational Age. // Pediatr Dev. Pathol. 2009. - №1. - P. 38-43.

141. Vince G.S, Jonson P.M. Immunobiology of human uteroplacental macrophages friend and foe? // Placenta. - 1996. - V. 17. - №4. - P. 191-199.

142. Vincient R.A, Huang P.C, Parmley Т.Н. Proliferative capacity of cell cultures derived from the human placenta. // In vitro. 1976. - V. 32. - P. 649-653.

143. Vorherr H. Placental insufficiency in relation to posterm pregnancy and fetal postmaturity: evaluation of fetoplacental function: management of the postterm gravida // Am. J. Obstet Gynecol. 1975. - V. 123. - P. 67-103.

144. Wang K., Jiang Y.Z., Chen D.B. et al. Hypoxia enhances FGF2- and YEGF-stimulated human placental artery endothelial cell proliferation: roles of MEK1/2/ERK1/2 and PI3K/AKT1 pathways. // J. Placenta. 2009. - V.l. - P. 34-38.

145. Wasiela M., Brzezinska-Blaszczyk E. The influence of genital mycoplasmas on human placental mast cells. // Central European Journal of Immunology. 2002. - V. 3. - P. 27-32.

146. Wilhelm M., King В., Silverman A.J., Silver R. Gonadal steroids regulate the number and activational state of mast cells in medial habenula. // Endocrinol. -2000. -V. 141. -№3. P. 1178-1186.

147. Wilson C.B., Haas J.E., Weaver W.M. Isolation, purification and characteristics of mononuclear phagocytes from human placentas. // J. Immunol. Methods. 1983. - V. 56. - №3. - P. 305-317.

148. Winick M, Coscia A., Noble A. Cellular growth in human placenta. 1. Normal cellular growth. //Pediatrics. 1967. - V. 39. - P. 248-251.

149. Wynn R.M. Derivation and ultrastructure of the so-called Hofbauer cell. // Am. J. Obstet. Gynicol. 1967. - V. 97. - №2. - P. 235-248.

150. Yagel S. The developmental role of natural killer cells at the fetal-maternal interface. Review // Am. J. Obstet. Gynecol. 2009. - V. 201. - №4. - P. 344350.