Автореферат и диссертация по медицине (14.00.16) на тему:Описторхозно-меторхозная инвазия у человека в Западной Сибири (новые аспекты этиологии, патогенеза, клиники и распространения)

На правах рукописи

Ильинских Екатерина Николаевна

ОПИСТОРХОЗНО-МЕТОРХОЗНАЯ ИНВАЗИЯ У ЧЕЛОВЕКА В ЗАПАДНОЙ СИБИРИ (новые аспекты этиологии, патогенеза, клиники и распространения)

14.00.16 - патологическая физиология 14.00.10 - инфекционные болезни

Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора медицинских наук

Томск - 2005 г.

Работа выполнена в ГОУ ВПО Сибирский государственный медицинский университет Минздрава России Научные консультанты:

доктор медицинских наук, профессор, член-корреспондент РАМН,

Заслуженный деятель науки РФ Новицкий Вячеслав Викторович

доктор медицинских наук, профессор

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор доктор медицинских наук, профессор доктор медицинских наук, профессор

Лепехин Алексей Васильевич

Федорова Татьяна Сергеевна Агафонов Владимир Иванович Толоконская Наталья Петровна

Ведущая организация: ГУ НИИ общей патологии и патофизиологии РАМН (г. Москва).

Защита состоится "_"_2005 г. в_часов на заседаниии

диссертационного совета Д 208 096.01 при Сибирском государственном медицинском университете (634050, г. Томск, Московский тракт, 2).

С диссертацией можно ознакомиться в научно-медицинской библиотеке Сибирского государственного медицинского университета (г. Томск, пр. Ленина, 107).

Автореферат разослан

7 7

Ученый секретарь диссертационного совета,

доктор биологических наук, профессор Г.А. Суханова

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы Заболевания человека и животных, вызванные трематодами семейства Opisthorchidae, широко распространены в Российской Федерации (Ясинский А А с соавт, 2000, Сыскова ТГ с соавт, 2001) Способность гельм/нта Opisthorchis Ае!теив паразитировать у человека была впервые доказана в 1891 г профессором Императорского Томского Университета КН Виноградовым Наиболее крупный природный очаг описторхоза связан с Обь-Иртышским речным бассейном в Западной Сибири (Сыскова ТГ с соавт, 2001) Показано, что инвазия О {е1те^ вызывает значительные изменения в гепатобилиарнсй системе, предрасполагает к развитию панкреатита, язвенной болезни желудка и двенадцатиперстной кишки, а также способствует развитию холангиокарциномы и рака поджелудочной железы (Лепехин А В с соавт, 1992, Белобородова Э И с соавт, 1996, Альперович Б И, 1997, Бражникова НА, 2002)

По данным ЭА Кашуба и ТГ Дроздовой (1988), ГА Кальгиной с соавт (2002), ВН Карбышевой с соавт (2002) и ТФ Степановой (2002) при хроническом течении описторхоза отмечается подавление преимущественно клеточного звена иммунореактивности с развитием признаков иммуносупрессии Кроме того, описторхозная инвазия сопровождается значительным увеличением числа Т-лимфоцитов с цитогенетическими нарушениями (Ильинских НН с соавт, 1984, Кудрявцев ДП, 1992, Степанова ТФ, 2002) Поскольку описторхи не могут непосредственно воздействовать на генетический аппарат клеток то возникает обоснованное предположение, что цитогенетические нарушения, наблюдаемые при описторхозной инвазии, обусловлены опосредованными механизмами В литературе к настоящему времени имеются лишь разрозненнье данные, касающиеся механизмов иммуносупрессии и мутагенеза при описторхозной инвазии (Бычков В Г, 1992, Кудрявцев ДП, 1992, Кривцова Л А, 1993 Jenne L et al, 2001, Степанова ТФ, 2002) Известно что в различных регионах Обь-Иртышского речного бассейна у больных людей имеются отличия в иммунном статусе и в клиническом течении заболевания (Кривцова Л А, 1993) Однако гричины этого до сих пор не были определены и освещены в литературе Кроме того, считается, что развитие холангиокарциномы на фоне описторхозной инвазии возможно при условии воздействия дополнительных мутагенных и канцерогенных факторов, в частности - N нитрозосоединений (Бычков В Г, 1992, Зуевский ВП, 1995, Jaiswal M et al. 2001) Показано что у больных описторхозом проживающих в промышленно развить х регионах, регистрируется повышенное накопление в организме ряда тяжелых металлов (Арифуллина К В, 2000) В то же время, известно, что многие реки, входящие в Обь-Иртышский бассейн, кроме нефтепродуктов и органических химических веществ, систематически подвергались загрязнению токсичными металлами (Рихванов ЛП, 1997, Обзор загрязнения , 2000 Гордеев В В с соавт, 2002, Савичев О Г с соавт, 2002, Барановская Н В, 2003) Более того, было доказано присутствие ряда тяжелых металлов в повышенных концентрациях в мышечной ткани рыб отловленных в реках Обского бассейна (Петлина АП, Юракова ТВ, 1998) Поэтому не исключено, что иммуносупрессия, хромосомные нарушения в лимфоцитах периферической крови и своеобразные изменения в клинической картине заболевания у больных описторхозом, проживающих в промышленно развитых регионах, являются следствием комплексного воздействия гельминтной инвазии и ксенобиотиков

Кроме того, имеются данные литературы согласно которым, описторхи могут образовывать ассоциации с некоторыми бактериями и вирусами (сальмонеллы, вирус простого герпеса), способными вызывать мутагенные эффекты (Лепехин А В, 1987, Иванских В И, Близнюк В В, 1996) В связи с этим, большой интерес представляют сероэпидемиологические исследования, свидетельствующие о том, что у населения, проживающего на территории Обь-Иртышского речного бассейна, где распространена описторхозная инвазия, отмечается повышение циркуляции потенциально онкогенного вируса Эпштейна-Барр (Васильев Н В с соавт, 1992) Известно, что реактивация латентной инфекции, вызванной вирусом Эпштейна-Барр, происходит на фоне таких паразитарных заболеваний как малярия и шистосомоз (Burkitt D, 1970, Araujo I et al, 1996, Абегев Г И, Альштайн А Д, 2000)

Р Г Фаттаховым (1996), а также Е Н Сербиной и Н И Юрловой (2002) на основании экологических наблюдений установлено, что у рыб семейства карповых, отловленных в реках Обь-Иртышского речного бассейна нередко встречаются метацеркарии не только О felineus (Rivolta, 1884), но и других представителей семейства Opisthorchidae, в частности - Metorchis bilis (Braun, 1890) По данным JD MacLean et al (1996), В Г Кузнецовой с соавт (2000) и КП Федорова с соавт (2002) показано, что родственные виды М bilis (синоним М albidus) и М conjunctus (синоним М intermedius) способны вызывать заболевание людей - меторхоз Более того В Г Кузнецовой с соавт (2000) и К П Федоровым с соавт (2002) с помощью серологических методов было обнаружено присутствие антител против М bilis у более чем половины людей из числа обследованных больных - жителей Новосибирской области, госпитализированных с диагнозом "описторхоз" Поэтому не исключено, что различия в клинической картине и иммунном статусе у больных людей могут быть обусловлены различными этиологическими вариантами заболевания с инвазией описторхов или/и меторхов

Цель и задачи исследования Установить этиологию, особенности патогенеза, клинической картины и распространения описторхидозов у населения, проживающего в различных регионах Обь-Иртышского речного бассейна

Для реализации этой цели были поставлены следующие задачи

1 Установить закономерности распространения моно- и микст-инвазий, вызываемых у человека трематодами Opisthorchis felmeus (Rivolta, 1884) и Metorchis bilis (Braun,1890), на территории Обь-Иртышского речного бассейна, в населенных пунктах Томской, Челябинской, Курганской Тюменской областей и Алтайского края

2 Определить особенности поражения гепатобилиарной системы у человека при описторхозно-меторхозных микст- и моноинвазиях

3 Установить общие закономерности аккумуляции токсичных микроэлементов в организме больных при описторхозно-меторхозных микст- и моноинвазиях

4 Выявить особенности цитогенетического статуса больных с микст- и моноинвазиями описторхов и меторхов с определением точной локализации аберраций по отдельным хромосомам и их длине

5 Доказать кластогенную роль аккумуляции токсичных микроэлементов (ртути и хрома) и реактивации вируса Эпштейна Барр при описторхозно-меторхозной микст-инвазии и описторхозной моноинвазии

6 Выявить общие закономерности изменений иммунного статуса у больных с описторхозно-меторхозной микст-инвазией и описторхозной моноинвазиеи на фоне повышенной аккумуляции токсичных микроэлементов и персистенции вируса Эпштейна Ьарр

7. Определить основные особенности клинической картины у больных с описторхозно-меторхозной микст-инвазией и описторхозной моноинвазией, имеющих повышенное накопление токсичных микроэлементов в периферической крови

Научная новизна работы. Впервые установлено, что у людей, проживающих в различных регионах Обь-Иртышского речного бассейна, наряду с описторхозной моноинвазией Optsthorchis felmeus (Rivolta, 1884), регистрируются моноинвазия меторхов Metorchis bills (Braun, 1890) и микст-инвазия этих гельминтов Этот вывод был сделан на основании анализа результатов серологического исследования и дополнительно подтвержден обнаружением трематод Metorchis bilis (Braun,1890) при аутопсии Показано, что мариты меторхов, в отличие от описторхов, способны паразитировать в мелких внутрипеченочных желчных протоках, в связи с чем микст-инвазия, по сравнению с моноинвазией, сопровождается более значительным поражением гепатобилиарной системы Кроме того, установлено, что пораженность описторхами и меторхами населения, проживающего вблизи отдельных рек Обь-Иртышского бассейна на территории Томской, Челябинской, Курганской, Тюменской областей и Алтайского края, имеет существенные различия Преобладание пораженности людей описторхозно-меторхозной микст-инвазией или моноинвазией меторхов над моноинвазией описторхов зарегистрировано в населенных пунктах расположенных вблизи р Томь Томской области, на р Теча и Исеть в Челябинской и Курганской областях, и на р Алей в Алтайском крае

Впервые показано, что в патогенезе описторхидозов особую роль играет повышенная аккумуляция некоторых микроэлементов в организме больных людей У больных с описторхозно-меторхозной микст- и моноинвазиями, проживающих в различных регионах Западной Сибири, по сравнению со здоровыми людьми, зарегистрировано повышенное накопление в периферической крови различных токсичных микроэлементов В частности, у больных описторхидозами, проживающих в г Томске, установлена значительная аккумуляция хрома и ртути в периферической крови, ткани печени и маритах гельминтов (описторхов и меторхов), а также повышенная экскреция этих микроэлементов с желчью Высокий уровень содержания хрома и ртути, превышающий региональную норму, регистрируемую у здоровых людей, наиболее часто встречается у больных с описторхозно-меторхозной микст-инвазией

Впервые проведено изучение особенностей клинической картины различных этиологических вариантов описторхидозов в зависимости от содержания ртути и хрома в крови Установлено, что повышенное содержание ртути и хрома в периферической крови больных людей сопровождается увеличением тяжести течения заболевания и частоты встречаемости синдрома холецистогепатита, клинических признаков иммунодефицитного состояния, гастродуоденопатии, аллергического, диспептического синдромов и нарушения функционального состояния щитовидной железы

Повышенная аккумуляция ртути и хрома в крови больных с описторхозно-меторхозной микст-инвазией оказалась ассоциирована с выраженным дисбалансом клеточных субпопуляций лимфоцитов снижением числа Т-клеток (CD3+ зрелых Т-лимфоцитов, CD4+ Т-хелперов и CD8+ цитотоксических Т-лимфоцитов) и увеличением содержания CD19+ В-лимфоцитов Кроме того, у этих больных были зарегистрированы гиперпродукция мононуклеарными лейкоцитами интерлейкина-4 и интерлейкина-10, подавление секреции интерферона-у и монооксида азота этими клетками, а также повышение уровней содержания иммуноглобулина Е, циркулирующих иммунных комплексов и числа эозинофильных гранулоцитов в периферической крови

Повышенное содержание в крови ртути и хрома у больных с описторхозно-меторхозной микст-инвазией сопровождается также чрезмерно напряженным функционированием биоцидной системы нейтрофилов с тенденцией к срыву их резервных возможностей, о чем свидетельствовало подавление НСТ-теста, стимулированного бактериальным аллергеном, снижение резерва реактивности нейтрофилов и индекса завершенности фагоцитоза.

Впервые показано, что одним из факторов, способствующим увеличению уровня цитогенетических нарушений в лимфоцитах периферической крови у больных с описторхозно-меторхозными микст- и моноинвазиями, может быть повышенная аккумуляция в организме хрома и ртути, а также реактивация Эпштейн-Барр вирусной инфекции. Доказано, что при микст-инвазии описторхов и меторхов разрывы хромосом локализуются не случайно, а вблизи известных протоонкогенов и ломких участков хромосом 2,3,6,8 и 12.

По результатам серологического исследования впервые установлено, что описторхозно-меторхозная микст-инвазия, особенно в случае высокого содержания ртути и хрома в крови, сопровождается значительным увеличением титров антител к антигенам вируса Эпштейна-Барр. Более того, показано присутствие антигенов этого вируса в маритах описторхов и меторхов.

Теоретическое и практическое значение. В результате проведенных исследований показано, что у жителей различных регионов Западной Сибири регистрируется инвазия не только трематоды вида Opisthorchis felineus (Rivolta, 1884), но и родственного вида - Metorchis bilis (Braun, 1890), что обусловливает определенные отличия иммунного статуса, уровня цитогенетических нарушений в лимфоцитах периферической крови и особенности клинической картины при различных этиологических вариантах описторхозно-меторхозных инвазий. Поэтому при формулировке диагноза целесообразно выделение трех этиологических вариантов этого заболевания: моноинвазии описторхов, моноинвазии меторхов или микст-инвазии описторхов и меторхов.

Полученные в настоящем исследовании данные о роли аккумуляции некоторых микроэлементов в организме и персистенции вируса Эпштейна-Барр в механизмах биохимических, иммунологических и цитогенетических нарушений у больных с описторхозно-меторхозной инвазией вносят новые сведения в существующие представления о патогенезе описторхидозов человека и могут служить основой для разработки патогенетически обоснованных подходов к терапии данного заболевания. Установлено, что у больных с описторхозно-меторхозными инвазиями следует учитывать ряд показателей, свидетельствующих о тяжести клинической картины заболевания: высокое содержание некоторых токсичных микроэлементов в крови и желчи пациента, повышенные титры антител к антигенам вируса Эпштейна-Барр, высокий уровень структурных нарушений хромосом в Т-лимфоцитах периферической крови, снижение числа Т-клеточных субпопуляций лимфоцитов.

Внедрение результатов работы в практику. Результаты исследования внедрены в учебный процесс и используются в обучении студентов и клинических ординаторов по теме "Гельминтозы" на кафедре инфекционных болезней и эпидемиологии Сибирского государственного медицинского университета, а также используются в обучении студентов в курсе "Медицинская паразитология" на кафедре биологии и генетики Сибирского государственного медицинского университета, на кафедре фармакогнозии с курсом

биологии и экологии Сибирского государственного медицинского университета, на кафедре экологии антропогенных систем международного факультета сельского хозяйства и экологии Томского государственного университета в курсе "Экология человека", на кафедре морфологии медицинского факультета Сургутского государственного университета в разделе "Патоморфология печени", на курсе биологии и экологии биологического факультета Сургутского государственного университета в курсе "Природно-очаговые инфекции", на кафедре биологии Новосибирской государственной медицинской академии в курсе "Паразитология", на кафедре медицинской и биологической физики Тюменской государственной медицинской академии в теме "Компьютерный цитоморфологический анализ", на кафедре экологии и генетики Тюменского государственного университета в разделе "Экология и мутагенез", на кафедре микробиологии, вирусологии и иммунологии Иркутского государственного медицинского университета в теме "Герпетические вирусные инфекции", на кафедре охраны здоровья детей ГорноАлтайского государственного университета в курсе "Инфекционные заболевания у человека". В научно-исследовательской лаборатории Тюменского филиала ГУ НИИ клинической иммунологии внедрен метод диагностики меторхозной инвазии у человека, а в ЦНИЛе Сибирского государственного медицинского университета внедрен метод получения антигенов трематод. Основные положения, выносимые на защиту

1. Наряду с описторхозной инвазией Opisthorchis felineus (Rivolta, 1884) у населения, проживающего на территории Обь-Иртышского речного бассейна, встречается заболевание, вызванное систематически близким видом семейства Opisthorchidae - Metorchis biiis (Braun, 1890), и сочетанная инвазия этих трематод. Наиболее высокие показатели пораженности меторхами установлены у жителей населенных пунктов, расположенных вблизи р. Томь в Томской области, р. Исеть в Курганской области и р. Алей в Алтайском крае.

2. Мариты меторхов (М. bilis), в отличие от описторхов (0. felineus), могут паразитировать в более мелких внутрипеченочных желчных протоках, что способствует более значительному поражению гепатобилиарной системы при микст-инвазии, по сравнению с моноинвазиями этих гельминтов.

3. Микст- и моноинвазии описторхов и меторхов сопровождаются повышенным накоплением в организме больного и в маритах гельминтов токсичных микроэлементов, вносящих существенный вклад в патогенез заболевания.

4. При микст- и моноинвазиях описторхов и меторхов регистрируется возрастание числа клеток с цитогенетическими нарушениями в периферической крови. Наибольший уровень структурных аберраций хромосом отмечается при микст-инвазии, при этом разрывы хромосом локализуются преимущественно вблизи известных протоонкогенов и ломких участков хромосом 2,3,6,8 и 12.

5. Факторами кластогенеза, способными индуцировать цитогенетические нарушения, при описторхозно-меторхозных микст- и моноинвазиях являются повышенная аккумуляция некоторых токсичных микроэлементов в организме (главным образом хрома и ртути), а также реактивация латентной инфекции вируса Эпштейна-Барр.

6. Аккумуляция токсичных микроэлементов (хрома и ртути) в организме и реактивация Эпштейн-Барр вирусной инфекции у больных с описторхозно-меторхозной микст-инвазией ассоциированы с развитием Т-клеточного иммунодефицита и повышением активности Т-хелперов типа 2.

7. Повышенное содержание в периферической крови больных описторхидозами токсичных микроэлементов (ртути и хрома) способствует увеличению тяжести течения заболевания с развитием холецистогепатита, гастродуоденопатии и клинических признаков иммунодефицитного состояния.

Апробация работы Материалы диссертационной работы преставлены на The 2nd International Congress on Lung Cancer (Crete, Greece, 1996), The 4th International workshop "Mutation Detectiom'97" (Brno, Czech Republic, 1997), The 4th Hong Kong International Cancer Congress (Hong Kong, 1997), The Amencan Academy of Allergy, Asthma and Immunology (AAAAI), the Amencan Association of Immunologists (AAI) and the Clinical Immunology Society (CIS) Joint Meeting (San Francisco, CA, 1997), The Society of Environmental Toxicology and Chemistry (SETAC) 18th Annual Meeting (San Francisco, CA, 1997), The International Symposium on Environmental Epidemiology in Central and Eastern Europe "Critical Issues for Improving Health" (Smolemce, Slovak Republic, 1997), на международной научно-прашческой конференции "Радиционная безопасность и социально-экологические проблемы Казахстана" (Алматы-Караганда, Казахстан, 1997), на 2-ой международной научно-практической конференции "Безопасность жизнедеятельности в Сибири и на крайнем Севере" (Тюмень, 1997), на 13-ой Российской научной конференции "Факторы клеточного и гуморального иммунитета при различных физиологических и патологических состояниях" (Челябинск, 1997), на региональной конференции "Медико-биологические аспекты нейро-гуморальной регуляции, посвященной 35-летию ЦНИЛ" (Томск, 1997), Conference on genetic aspects of autoimmune diseases (Noordwijkerhout, The Netherlands, 1998), The 15th Annual Meeting of the European Association for Cancer Research (EACR) (Stockholm, Sweden, 1998), The 10,h NCI-EORTC Symposium on New Drugs in Cancer Therapy, (Amsterdam, 1998), на Всероссийской научно-практической конференции "Экологозависимые заболевания (биохимия, фармакология, клиника)" (Чита, 1998) на 2-ой республиканской научно-практической консреренции, посвященной 75-летию инфекционной службы Удмуртии (Ижевск 1998), на межрегиональной научно-практической конференции "Медицинские и экологические проблемы Северных районов Сибири" (Томск-Стрежевой, 1998), на конференции, посвященной 50-летию кафедры детских инфекций СибГМУ (Томск, 1998), на международном симпозиуме "Медицина и охрана здоровья'99" (Тюмень, 1999), на научной конференции "Актуальные вопросы экспериментальной морсрологии" (Томск, 1999), на 7-й научно-практической консреренции "Актуальные вопросы гастроэнтерологии и особенности заболеваний органов пищеварения в Сибирском регионе" (Томск, 1999), на научной городской конференции молодых ученых и специалистов "Региональные проблемы экологии и природопользования" (Томск, 2000), на научной конференции, посвященной 10-летию независимой Республики Узбекистан и 75-летию со дня образования УЗНИИВ "Мониторинг распространения и предотвращения особо опасных болезней животных" (Самарканд, Узбекистан, 2001), на 1-ой международной конференции, посвященной 110-летию со дня открытия проф КН Виноградовым сибирской двуустки у человека (Томск, 2001), на 2-ой научной конференции с международным участием "Проблемы инфекционной патологии в регионах Сибири, Дальнего Востока и Крайнего Севера" (Новосибирск, 2002), на III международной научно-практической конференции "Эпидемиология, диагностика, лечение и профилактика паразитарных заболеваний человека" (Витебск, Белоруссия, 2002), на 3-ей региональной научно-практической конференции с международным участием, посвященная памяти заслуженного деятеля науки РФ профессора ЛИ Геллера "Третьи Геллеровские чтения" (Хабаровск, 2002), на 1-ой Всероссийской научной конференции с международным участием "Влияние загрязнения окружающей среды на здоровье человека" (Новосибирск, 2002)

Публикации По материалам диссертации опубликовано 92 работы, в том числе 7 статей в центральных реферируемых изданиях, 15 статей в реферируемых зарубежных изданиях на английском языке, 3 монографии и 1 учебник для ВУЗов (рекомендован УМО)

Структура работы Диссертация изложена на 389 страницах, состоит из введения, 4 глав, выводов и списка литературы Работа иллюстрирована 37 таблицами и 34 рисунками Библиографический указатель включает 521 источников, из которых 189 отечественных и 332 зарубежных

Работа частично поддержана грантом РГНФ № 02 06 000 14а

МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Всего с применением различных методов было обследовано 868 человек, проживающих в различных регионах Обь-Иртышского речного бассейна. На северо-востоке Западной Сибири нами было проведено обследование населения Томской области, включая г.Томск, Томский район (пос. Самусь, Моряковский Затон, Наумовка, Черная Речка и Кандинка) и Бакчарский район (пос. Бакчар и Плотникове)); на западе было обследовано население Челябинской (с. Муслюмово и Бродокалмак), Курганской (пос. Юлдус и Канаши) и Тюменской областей (пос. Бачелино, Иевлево и Менделеево), а на юго-востоке - население Алтайского края (населенные пункты: Локоть, Рубцовск, Шипуново и Троицкое).

В г. Томске нами было проведено обследование 139 больных, госпитализированных в инфекционную клинику Сибирского государственного медицинского университета МЗ РФ (СибГМУ), с гельминтоовоскопически подтвержденной инвазией описторхид. Из них 112 человек (возраст 40,6+5,1 лет) имели суперинвазионную стадию описторхидозов (больные СО), а 27 человека (возраст 36,9+6,7 лет) поступили с хронической стадией заболевания в стадии умеренного обострения (больные ХО).

В качестве контроля нами были обследованы студенты СибГМУ, постоянно проживающие в г. Томске, а также условно здоровые жители этого города (32 человека), которые имели отрицательные результаты копроовоскопических и серологических анализов в отношении инвазий гельминтов.

Кроме того, с целью обнаружения экземпляров трематод рода Metorchis было проведено взятие образцов аутопсийного материала (ткани печени и гельминтов) от 32 человек с признаками инвазии описторхид.

Кроме жителей г. Томска, нами было проведено выборочное обследование взрослого населения поселков Томской области, расположенных в Томском районе вблизи р. Томь (164 человек), а также в Бакчарском районе на р. Бакчар и Икса (127 человек). В результате копроовоскопических и серологических исследований хроническое течение описторхозно-меторхозной инвазии было выявлено в Томском районе у 30 человек (возраст 44,6±5,5 лет), а в Бакчарском районе - у 26 человек (возраст 40,6+4,2 лет). Сопоставимые по возрасту и полу группы здоровых людей в этих районах (34 и 24 человек) были отобраны среди людей, не имевших гельминтной инвазии.

В Алтайском крае в населенных пунктах Локоть, Рубцовск и Шипуново, расположенных на р. Алей, а также в с. Троицкое в верховьях р. Оби было выборочно обследовано 83 и 92 жителя соответственно, из которых 36 (возраст 42,7+6,1 лет) и 21 человек (возраст 41,9±4,8 лет) имели хроническую стадию инвазии описторхид. Группы здоровых людей были сформированы из числа обследованных, сопоставимых с основными группами по полу и возрасту и не имевших гельминтной инвазии (19 и 18 человек).

В населенных пунктах Челябинской и Курганской областей, расположенных на р. Теча и Исеть, нами было обследовано 129 жителей, а в поселках Тюменской области, расположеных на р. Тобол, было проведено обследование 134 человек. В результате этих исследований описторхидозные инвазии были установлены соответственно у 24 и 50 человек (возраст 43,6±7,3 лет и 37,1±7,4 лет). Из людей, сопоставимых с основной группой по полу и возрасту и не имевших гельминтной инвазии, были сформированы группы здоровых лиц (13 и 19 человек).

На каждого выявленного при выборочном обследовании больного человека заполнялась подробная анкета. У всех обследованных нами больных и здоровых людей для исследования брали капиллярную кровь из пальца и образцы венозной крови. У 22 больных СО и 8 здоровых человек, проживающих в г. Томске, проводилось дуоденальное зондирование и были взяты образцы желчи (порция С).

Для экспериментов in vitro использовались методы хромосомного и кариопатологического анализа в культурах лимфоцитов, стимулированных к делению фитогемагглютинином (ФГА). В культуры, полученные от 12 здоровых людей, добавляли описторхин, хлорид хрома (III) или оба эти агента. Концентрация хлорида хрома в культурах клеток была равна содержанию этого МЭ в образцах цельной крови больных СО (4 мкмоль/л по хрому). Описторхин для экспериментов получали из гельминтов, выделенных из печени

зараженных золотистых хомяков, в соответствии с методикой AT Котелкина с соавт (1997) В качестве контроля использовали интактные культуры ФГА-стимулированных лимфоцитов, полученные от этих же людей Культуры ФГА-стимулированных лимфоцитов получали также, как это описано для хромосомного анализа (Moorhead PS et al, 1960) Полученные препараты использовались для описания кариопатологии и патологии митоза согласно рекомендациям ВН Блюмкина (1974) Подсчет 500 клеток производили равномерно через всю площадь мазка Для определения уровней лимфоцитов с микроядрами использовали рекомендации W Schmid (1975)

Кроме того, уровень цитогенетических нарушений изучали в культурах лимфоцитов зараженных и не зараженных вирусом Элштейна-Барр Культуры получали от 6 здоровых людей, серонегативных к этому вирусу Половину приготовленных для культивирования образцов предварительно заражали вирусом Эпштейна-Барр путем введения в культуру лимфоцитов суспензионной вируслродуцирующей линии PJ4R-1 в количестве 25 тыс клеток на 1 мл культуры Через 24 ч после начала культивирования в питательную среду половины зараженных и незараженных вирусом культур вводили хлорид хрома (в концентрации 4 мкмоль/л по хрому)

Эксперименты in vivo проводились с целью исследования накопления тяжелых металлов (на примере бихромата калия) в печени золотистых хомяков на фоне повторного заражения животных гельминтами О felineus или М bilis и изучения индуцированных уровней цитогенетических нарушений Животных заражали повторно метацеркариями О felmeus от 1-го до 5-ти раз, а метацеркариями М bilis от 1-го до 3-х раз каждые 1,5 месяца, вводя им с помощью зонда по 10-12 метацеркарий этих трематод на фоне ежедневного перорального (также через зонд) введения бихромата калия (VI) в течение от 1,5 до 7,5 месяцев в дозе 1 мг/кг массы тела Для получения метацеркариев О felineus и М bilis из рыбы была использована методика изложенная в работе Д П Кудрявцева (1989) Всего было использовано 69 животных (от 6 до 8 животных в каждой серии) В качестве контроля использовали 7 здоровых животных, которым вводили бихромат калия в той же дозе, что и подопытным, а также 6 незараженных животных которые служили в качестве интактного контроля У животных определяли интенсивность инвазии, гистологические изменения в печени уровни накопления хрома в ткани печени с помощью метода инструментального нейтронно активационного анализа (ИНАА), а также число эритроцитов периферической крови и гепатоцитов печени с микроядрами Все эксперименты проводились в строгом соответствии с правилами проведения работ с использованием экспериментальных животных

Больные, госпитализированные в стационар, проходили тщательное общеклиническое, лабораторное и инструментальное обследование, которое включало общий и биохимический анализы крови ультразвуковое исследование (УЗИ) органов брюшной полости и фиброгастродуоденоскопию (ФГДС) Активность аланин- и аспартатаминотрансфераз определяли по методу S Reitman и S Frankel (1957) а уровень общего билирубина в сыворотке крови - по методу L Jendrassik (1936) Кроме того, в сыворотке крови изучали показатели перекисного окисления липидоз и состояние антиоксидантной системы Содержание малонового диальдегида (МДА) определяли согласно ЮА Владимирову и А И Арчакову (1972) Определение активности каталазы в сыворотке крови проводилось по методу М А Королюк и Л И Ивановой (1988) Антиокислительную активность липидов (АОАЛ) в сыворотке крови изучали согласно А П Левицкому и Л М Шафран (1983)

Для изучения функциональных изменений щитовидной железы было проведено определение содержания в сыворотке крови тироксина, трийодтиронина и тиреотропного гормона с использованием метода иммуноферментного анализа (ИФА) с использованием диагностических наборов и аппаратуры фирмы "Hoffman-La Roche" (Швейцария) (Wiltons ТА etal, 1985)

Кроме того, у всех обследованных нами больных СО с помощью анамнестически статистического метода и "Карты выявления иммунологической недостаточности при иммуно-эпидемиологических исследованиях", рекомендованной Всесоюзной проблемной комиссией "Эпидемиология иммунодефицитов

и оценка иммунного статуса" (Степанова ТФ, 1998), были проанализированы клинические проявления иммунологической недостаточности

Для выявления инвазии описторхов и меторхов использовался метод эфирно-уксусного осаждения яиц гельминтов (Павлюков И Ас соавт, 1989, Лепехин А В с соавт, 1992) Для серологического подтверждения инвазии описторхов и меторхов использовался метод иммуноферментного анализа Для определения титров антител к антигенам О felineus применялись иммуноферментные тест системы D-3304, D-2904 и D-2906 производства ЗАО "Вектор-Бест" (пос Кольцово Новосибирской области), позволяющие определять титры специфичных иммуноглобулинов класса G и М, а также циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК) Для определения титров антител к антигенам М biiis использовался метод "сэндвичевого" твердофазного иммуноферментного анализа для обнаружения противометорхозных антител (Schuster R et al, 2003) Для проведения этого исследования полученные от больных людей образцы сыворотки крови были отправлены в Федеральный институт защиты здоровья потребителей и ветеринарной медицины (Federal Institute for Health Protection of Consumers and Veterinary Medicine), г Берлин, Германия Кроме того, для подтверждения инвазии М bilis (Braun, 1890) образцы марит гельминтов, выделенных на аутопсии из печени 15 человек, а также образцы яиц гельминтов, полученных при гельминтоовоскопическом исследовании от 81 больных СО (из числа госпитализированных в стационары г Томска), имевших моноинвазию меторхов и микст-инвазию описторхов и меторхов, были исследованы методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) Для ПЦР-анализа использовались видоспецифичные для О felmeus и М bilis праймеры на основе части гена оксидазы I митохондриального цитохрома с этих гельминтов (Pauly A, Schuster R, 2003)

Для получения гистологических препаратов кусочки аутопсийного материала ткани печени фиксировали в жидкости Карнуа и готовили гистологические препараты по стандартной методике (Волкова О В, Елецкий ЮК, 1971}

В ходе предварительного исследования с помощью метода инструментального нейтронно-активационного анализа (ИНАА) в аутопсийном материале ткани печени а также в образцах цельной крови и желчи, полученных от 6-7 больных с каждым из этиологических вариантов описторхидозов, было изучено содержание 34 химических элементов (литий, рубидий, цезий, калий, натрий, медь серебро, золото, бериллий, барий, стронций, цинк, кальций, магний, ртуть, кадмий, алюминий, скандий, лантан, церий, европий, олово, сурьма, свинец, хром, селен, молибден, теллурий, марганец бром, йод, железо, кобальт и никель) Эти химические элементы были также изучены у такого же числа здоровых людей Кроме того, в крови, желчи, ткани печени и в выделенных из желчных протоков маритах гельминтов у всех обследованных нами больных и здоровых людей, проживающих в г Томске, было проведено определение содержания токсичных химических элементов, обладающих высокой токсической, мутагенной и канцерогенной активностью (хром, ртуть, никель, кадмий, свинец, алюминий, барий, сурьма, мышьяк, барий, бериллий, таллий) В дальнейшем у больных описторхидозами проводилось более детальное изучение содержания только тех химических элементов, для которых было обнаружено достоверное повышение, по сравнению с уровнями у здоровых людей в крови, желчи или ткани печени

На основании полученных данных у больных СО с моноинвазией описторхов и микст-инвазией описторхов и меторхов, проживающих в г Томске, нами были выделены подгруппы людей, имевших высокий и относительно низкий уровень хрома или/и ртути в периферической крови Условно за высокий уровень было принято содержание хрома и ртути в крови, превышающее верхнюю границу физиологической нормы, то есть 0,46 мг/кг и 0,10 мг/кг сухой массы цельной крови соответственно (Кист АА, 1987) У больных с относительно низким уровнем концентрация этих токсичных микроэлементов (МЭ) в крови не имела достоверных отличий от здоровых людей Для проведения дальнейших лабораторных исследований (хромосомного анализа и определения показателей лейкоцитарной формулы, биохимического анализа, иммунного статуса, цитокинового профиля, функциональной активности

нейтрофилов) в эти подгруппы, из общего числа обследованных, были отобраны те люди, которые отличались по содержанию в крови хрома и ртути, но ме имели существенных различий по уровню других токсичных МЭ Кроме того, критериями отбора в эти подгруппы являлись продолжительность инвазии до 10 лет и не более одной дегельминтизаций в прошлом по данным анамнеза У больных с микст-инвазией с высоким уровнем токсичных МЭ в крови среднее содержание хрома составляло 1 30±0,15 мг/кг сухой массы, ртути - 0,14+005 мг/кг, брома - 14 3+1,95 мг/кг, цезия - 0 05±0,02 мг/кг, лантана - 0,10+0 05 мг/кг, цинка 36,1 ±1,6 мг/кг, кобальта -0,09+0,06 мг/кг Уровни этих МЭ в крови больных с моноинвазией, имевших высокое содержание токсичных МЭ в крови, не имели достоверных отличий от уровней перечисленных соответствующих показателей у больных с микст-инвазией

Кроме того, содержание вышеперечисленных 34 химических элементов предварительно определялось в цельной крови, полученной от 5-8 больных и здоровых людей, проживающих в различных регионах Западной Сибири В дальнейшем проводилось более детальное изучение содержания только тех химических элементов, уровень которых у больных описторхидозами достоверно повышал таковой у здоровых жителей данного региона Облучение проб осуществлялось на базе исследовательского ядерного реактора НИИ ЯФ при Томском политехническом университете МО РФ, а измерения были выполнены в ядерно-геохимической лаборатории кафедры геоэкологии и геохимии этого вуза

Для изучения показателей иммунного статуса использовали гепаринизированную венозную кровь (20 МЕ/мл) Мононуклеары получали центрифугированием лейковзвеси на градиенте плотности Ficoll-Paque (Pharmacia Fine Chemical, Швеция) по методу М Jondal et al (1972) Экспрессию мембранных маркеров на лимфоцитах определяли иммунофлюоресцентным методом с помощью моноклональных антител к следующим детерминантам CD3+, CD4+ , CD8+, CD16+, CD19+ В работе применялись моноклональные антитела к дифференцировочным антигенам лимфоцитов производства фирмы "ДиагноТех", г Москва Подсчет осуществляли на люминесцентном микроскопе Люмам И-2 Определяли процент и абсолютное число лимфоцитов, несущих определенные детерминанты (Методические рекомендации.,1996)

Для выявления содержания циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК) в сыворотке крови применяли метод, основанный на физико-химическом осаждении белка в 4% растворе полиэтиленгликоля (ПЭГ, мол масса 6000,0) по Д К Новикову (1987) Количественное определение основных классов иммуноглобулинов (IgG, IgM, IgA) производили методом простой радиальной иммунодифузии по G Mancini (1965) Для определения иммуноглобулина класса Е в сыворотке крови больных использовался радиоиммунный метод с применением коммерческих наборов фирмы "Parmacia Diagnostics" (Швеция)

Оценку фагоцитарной активности нейтрофильных лейкоцитов проводили общепринятым способом со штаммом стафилокока 209Р (Кост ЕА, 1975 Новиков ДК, Новикова ВИ, 1979) Определяли фагоцитарный индекс Гамбургера и фагоцитарное число Райта Переваривающую способность нейтрофилов определяли по методу МА Фроловой и соавт (1972), вычисляя индекс завершенности фагоцитоза Осмотическую резистентость лейкоцитов изучали по методу Е Storti et al (1957)

О цитотоксическом потенциале нейтрофилов судили по результатам спонтанного и стимулированного НСТ-теста (Покровский ВИ, Нагоев Б С 1983) Для проведения индуцированного варианта НСТ-теста применялись описторхозный антиген (описторхин) в конечной концентрации по белку 150 мкг/мл (Котелкин AT с соавт, 1997) и стандартный аллерген Escherichia coll (производства Казанского НИИ микробиологии и эпидемиологии МЗ РФ)

Для изучения состояния процессов внутриклеточного метаболизма исследовалась активность миелопероксидазы (по Сато) и кислой фосфотазы нейтрофилов и моноцитов (Barka Т., Anderson P J, 1962, Бутенко ЗА с соавт, 1974) Интенсивность всех цитохимических реакций оценивали полуколичественным методом LS Kaplow(1955)

Для компьютерной цито- и кариометрии нейтрофильных лейкоцитов мазки крови фиксировали в метаноле и окрашивали по Фельгену на хроматин (Хейхоу Ф Г, Кваглино Д, 1983) Изображение нейтрофилов и их

ядер получали с обычного светового микроскопа фирмы Reichert (Авария) при помощи цифровой фотокамеры Casio QV-100, имеющей разрешение 640x480 пикселей Подготовку изображения и собственно анализ изображения проводили с использованием программы ImageJ, разработанной Wayne Rasband, National Institutes of Health (США) В полученных изображениях нейтрофилов изучались следующие показатели (в мкм2) площадь клетки, площадь клеточного ядра, площадь цитоплазмы, площадь диффузного хроматина ядра, площадь зоны компактного хроматина ядра

Для определения продукции иммуноцитокинов и монооксида азота использовали культуры мононуклеарных клеток Мононуклеарные клетки периферической крови выделяли стандартно путем центрифугирования венозной крови в градиенте плотности Ficoll-Paque (Pharmacia Fine Chemical, Швеция) при 1500 оборотов/мин в течение 40 мин Клетки отмывали культуральной средой и культивировали в 24-луночных плоскодонных планшетах при температуре 37°С и при концентрации СО2 5% В каждую лунку добавлялся 1 мл полной культуральной среды RPMM640 (НПО "Вектор", Новосибирская обл, Россия) с добавлением 10% инактивированной эмбриональной телячьей сыворотки, гентамицина 80 мкг/мл, 0,3 мг/мл L-глутамина, 5мМ HEPES-буфера, содержащей около 2хЮ6 клеток/мл Для стимуляции мононуклеарных клеток использовали 10 мкг/мл липополисахарида Eschenchia coll 055 В5 (Sigma Chemical Co, USA), Юмкг/ЮОмкл ФГА ("Difco", США) или по 20 мкг/мл описторхозного антигена (Котелкин AT с соавт, 1997) Спонтанные и стимулированные уровни продукции монооксида азота, интерлейкина-10 (ИЛ-10), интерлейкина-4 (ИЛ-4) и интерферона-у (ИФ-у) мононуклеарными клетками оценивали по накоплению нитритов и этих цитокинов в культуральных супернатантах Уровни продукции ИЛ-10, ИЛ-4 и ИФ-у определяли с помощью твердофазного ИФА в соответствии с инструкциями, предлагаемыми производителем тест-систем ("Immunotech Counter Company", Франция) Концентрацию нитритов определяли спектрофотометрически с использованием реактива Грисса (Green LC et al. 1982.Ogilvie AC et al, 1996)

Для хромосомного анализа получение культур ФГА-стимулированных лимфоцитов и приготовление препаратов проводилось в соответствии с методикой Р S Moorhead et al (1960) У каждого человека анализировали не менее 100 метафаз Изучение хромосом проводили при увеличении 10x90, используя микроскоп МБИ-6 Идентификация хромосом человека проводилась в соответствии с Парижской номенклатурой, принятой в 1971 г (Pans Conference , 1975) Метафазные пластинки с цитогенетическими нарушениями фотографировали при помощи цифровой фотокамеры Casio QV-100, переносили полученные изображения в компьютер и идентифицировали избыточные, недостающие и поврежденные хромосомы Для дифференциального окрашивания хромосом использовали технику G-бэндов (Seabright M, 1971) Микроядерный тест с определением эритроцитов с микроядрами проводился в соответствии с методикой W Schmid (1975)

В качестве тест-системы для выявления титров антител к антигенам вируса Эпштейна-Барр (ЭБ) использовали фиксированные препараты суспензионной клеточной линии, полученной из лимфоцитов больных лимфомой Беркитта вируспродуцирующая линия PJHR-1 Культура получена от ВН Степиной из лаборатории НИИ канцерогенеза онкологического научного центра PAМН, r Москва Уровень G- и А-антител к вирускапсидному антигену (ВКА) вируса ЭБ, а также G-антител к раннему антигену (РА) этого вируса определяли в непрямой реакции иммунофлюоресценции по методу, модифицированному W Henle и G Henle (1979) У людей, имевших высокие титры антител к вирусу ЭБ, определенных с помощью реакции иммунофлюоресценции, дополнительно проводили определение титров антител с помощью иммуноферментных тест-систем "ВектоВЭБ^СА-1дМ-стрип", "ВектоВЭБ-ЕА-^-стрип" и "ВектоВЭБ-NA-lgG-стрип" производства ЗАО "Вектор-БЕСГ (пос Кольцове Новосибирская область)

Для определения содержания капсидного антигена вируса ЭБ в теле марит Opistorchis fekneus использовалась непрямая реакция иммунофлюоресценции Для этого полученный материал тщательно отмывали стерильным раствором Хэнкса, наносили на чистое, обезжиренное предметное стекло и фик-

сировали охлажденным ацетоном В качестве специфической сыворотки использовали несколько высокотитражных сывороток к капсидному антигену ЭБ Дальнейшая методика не отличалась от выше изложенной Кроме того, для дополнительного подтверждения присутствия вируса ЭБ был использован метод полимеразной цепной реакции (ПЦР) с помощью тест-систем "ВектоВЭБ-ДНК-апмли-100" производства ЗАО "Вектор-БЕСГ (пос Кольцове Новосибирская область)

Оценку различий между выборками осуществляли с использованием t-критерия Стъюдента (при нормальном распределении переменных), U-теста Манна-Уитни и критерия Вилкоксона (в случае отсутствия согласия данных с нормальным распределением) и критерия ¿ (Монцевичюте-Эрингене ВЕ, 1964, Гублер ЕВ, Генкин А.А,1973, Лакин ГФ, 1980) Для выявления зависимостей между изучаемыми параметрами проводили ранговую корреляцию Спирмена (Лакин ГФ, 1980) Среднегеометрический титр антител к антигенам вируса Эпштейна-Барр определялся согласно И П Ашмарину и АА Воробьеву (1962) Различия сравниваемых результатов [X ±mj считались достоверными приРО.Ю

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

ОПРЕДЕЛЕНИЕ ИНВАЗИИ ОПИСТОРХОВ И МЕТОРХОВ У ЧЕЛОВЕКА ПО ДАННЫМ АУТОПСИИ И РЕЗУЛЬТАТАМ СЕРОЛОГИЧЕСКИХ ИССЛЕДОВАНИЙ

В целях решения вопроса о возможности инвазирования человека не только О felineus, но и трематодами рода Metorchis нами проводилось тщательное изучение 32 образцов желчи и ткани печени, полученных при аутопсии от людей с диагностированной "описторхозной" инвазией Аутопсийный материал был получен от людей, проживавших в г Томске В 17 образцах (53,1%) были найдены только гельминты Opisthorchis felineus (Rivolla, 1884) В девяти (28,1%) случаях кроме трематод О felmeus были обнаружены от 69 до 193 экземпляров гельминтов, идентифицированных в соответствии с критериями, предложенными К И Скрябиным (1950), как Metorchis bills (Braun, 1890) Кроме того, в шести (18,7%) из 32 изученных нами образцов желчи и печени были найдены только трематоды М bilis Выделенные меторхи имели заметно меньшую длину тел (3,5-5,1 мм), по сравнению с описторхами (7,2-12,5 мм) У 8 из 9 людей (88,9110,5%), имевших микст-инвазию описторхов и меторхов, а также у 4 из 17 человек (23,5±10,2%, при Р<0,01) с моноинвазией описторхов на аутопсии была установлена средняя и высокая интенсивность инвазии с общим числом паразитов от 470 до 3581 экземпляров

При гистологическом исследовании ткани печени у этих людей был обнаружен значительно выраженный пролиферативный холангит с признаками аденоматоза и аденофиброза, при этом преобладал перидуктальный и перипортальный фиброз Среди обследованных людей с моноинвазией меторхов не было найдено случаев с высокой интенсивностью инвазии, а общее число выделенных паразитов не превышало 154 экземпляра В случае низкой интенсивности инвазии у людей, имевших моноинвазию описторхов, микст-инвазию, а также моноинвазию меторхов, микроскопические изменения в основном были ограничены только умеренно выраженным пролиферативным холангитом При гистологическом исследовании печени меторхи, в отличие от описторхов, были обнаружены в более мелких желчевыводящих протоках, поэтому в случае сочетанной инвазии этих гельминтов наблюдалось более выраженное и протяженное поражение билиарного тракта Для дополнительного подтверждения вида выделенных нами гельминтов был использован метод полимеразной цепной реакции (ПЦР) Во всех 15 образцах вид паразита был идентифицирован как Metorchis bilis

Кроме того, с целью подтверждения инвазии меторхов у человека нами проводилось определение специфических противоописторхозных и противометорхозных антител в сыворотках крови 139 больных с копроовоскопически установленной инвазией описторхов, госпитализированных в больницы г. Томска. Поскольку копровоскопическое исследование не позволяет идентифицировать вид описторхид, нами были использованы серологические методы. Из 139 обследованных нами больных людей 78 человек (56,1%) имели микст-инвазию описторхов и меторхов, 58 человек (41,7%) были серопозитивны только в отношении описторхов, а 3 человека (2,1%) оказались серопозитивными только в отношении меторхов. Кроме того, образцы яиц гельминтов, полученных при копроовоскопическом исследовании от 81 больного, серопозитивного в отношении меторхозного антигена, были исследованы методом ПЦР с целью обнаружения присутствия ДНК М. bilis. Во всех случаях метод ПЦР-анализа дал положительный результат.

СОДЕРЖАНИЕ МИКРОЭЛЕМЕНТОВ В ОРГАНИЗМЕ ЧЕЛОВЕКА И МАРИТАХ ГЕЛЬМИНТОВ ПРИ ОПИСТОРХОЗНО-МЕТОРХОЗНЫХ ИНВАЗИЯХ

С помощью метода инструментального нейтронно-активационного анализа (ИНАА) было установлено, что у больных описторхидозами, по сравнению со здоровыми людьми, отмечается достоверное повышение содержания в образцах цельной крови, таких МЭ как хром, ртуть, бром, цезий, лантан, селен, цинк и кобальт (при Р<0,01 или Р<0,05). Показано, что у больных СО с микст- и моноинвазией, по сравнению со здоровыми людьми, регистрируется повышение содержания в крови хрома в 18,6 и 8,9 раза и ртути в 4,1 и 2,2 раза соответственно. Кроме того, содержание ртути и хрома в крови больных людей было значительно выше средней физиологической нормы для цельной крови (0,02-0,09 мг/кг и 0,1-0,46 мг/кг сухой массы соотвественно), приведенной в работах АА Кист (1987). В тоже время, уровни содержания в крови остальных изученных нами МЭ не превышали физиологическую норму для этих МЭ. Для образцов желчи, полученных от больных, по сравнению со здоровыми людьми, оказалось характерным увеличение концентрации хрома, брома, рубидия, лантана, цинка и кобальта, а в ткани печени (аутопсийный материал) повышалось содержание хрома, ртути, рубидия, цезия, лантана и кобальта (при Р<0,01 или Р<0,05). Например, в группе людей с микст-инвазией описторхов и меторхов, по сравнению со здоровыми людьми, содержание хрома в ткани печени повышалось в 24,3 раза, ртути - в 8,3 раза, рубидия - в 2,5 раз, цезия - в 2,3 раза, лантана - в 3,1 раз, а кобальта в 2,1 раз. Из всех изученных нами МЭ у обследованных нами больных наиболее существенное повышение содержания в образцах крови, желчи и печени, по сравнению со здоровыми людьми и физиологической нормой, было обнаружено в отношении хрома и ртути. Кроме того, показано, что в маритах гельминтов, выделенных при аутопсии, также отмечается повышенная, по сравнению с тканью печени, аккумуляция хрома (в 8,4-17,6 раза) и ртути (в 2,8-5,3 раза). У людей с моноинвазией описторхов или меторхов содержание всех изученных МЭ в ткани печени и маритах гельминтов не имело достоверных отличий между этими группами, но оказалось существенно ниже такового у больных с микст-инвазией описторхов и меторхов (при Р<0,05).

Кроме того, нами проводилось изучение содержания некоторых МЭ в образцах цельной крови, полученных от больных СО и больных ХО, которые имели микст- или моноинвазию описторхов и меторхов. Содержание в крови таких условно-эссенциальных и эссенциальных МЭ как цезий, лантан, бром, селен и цинк у больных СО с микст-инвазией оказалось достоверно выше, по сравнению с больными, имевшими моноинвазию описторхов (при Р<0,05 или Р<0,01) В случае микст-инвазии у больных СО содержание в крови брома, селена и цинка оказалось достоверно выше, чем у больных ХО. Уровень

хрома и ртути в крови у больных СО и ХО с микст-инвазией описторхов и меторхов был достоверно выше, чем у соотвествующих групп больных с моноинвазией описторхов (при Р<0,01 или Р<0,05). Эти различия оказались обусловлены прежде всего тем, что среди больных с микст-инвазией число лиц, имевших высокий уровень хрома и ртути, превышающий верхнюю границу физиологической нормы для этих МЭ, оказалось существенно выше, чем среди больных с моноинвазией описторхов (67,1+5,6% против 35,7+7,3% при Р<0,01). Концентрация хрома и ртути в крови больных людей, причисленных к группе с относительно низким содержанием этих МЭ, не имело достоверных отличий от соответствующих показателей у здоровых лиц. У обследованных нами больных СО были установлены достоверные положительные корреляционные связи между содержанием в крови ртути и селена (г=+0,68 при Р<0,01), ртути и цинка (г=+0,74 при Р<0,01), хрома и цинка (г=+0,63 при Р<0,01). Кроме того, нами было показано, что у больных людей в цельной крови с возрастом достоверно возрастает содержание цинка (г=+0,87 при Р<0,01), ртути ^=+0,78 при Р<0,01) и хрома (г=+0,85 при Р<0,01). Наиболее высокая концентрация хрома и ртути в крови и ткани печени больных описторхидозами была обнаружена в случае высокой интенсивности инвазии или продолжительности патологического процесса.

В образцах желчи у больных, имевших микст-инвазию описторхов и меторхов, по сравнению с больными с моноинвазией описторхов, было обнаружено достоверное увеличение содержания хрома, брома, лантана, цинка и кобальта (при Р<0,01). Кроме того, у обследованных нами больных описторхидозами были установлены положительные корреляционные зависимости между содержанием в крови и желчи хрома (г=+0,65 при Р<0,05), брома ^=+0,76 при Р<0,01) и лантана (г=+0,83 при Р<0,01).

Резюмируя сказанное, можно сделать вывод о том, что у больных людей, имеющих микст-инвазию описторхов и меторхов, отмечается повышение содержания в крови, ткани печени и желчи ряда токсичных, условно-эссенциальных и эссенциальных МЭ (ртути, хрома, цезия, лантана, брома селена, цинка), по сравнению с больными с моноинвазией этих гельминтов и здоровыми людьми. При этом из числа изученных нами МЭ, у больных с микст-инвазией наиболее часто регистрируется существенное повышение содержания в организме и маритах гельминтов хрома и ртути. Кроме того, у больных описторхидозами, имевших высокую интенсивность инвазии или значительную продолжительность патологического процесса концентрации этих токсичных МЭ в несколько раз превышает физиологическую норму и аналогичные значения у здоровых людей.

ОСОБЕННОСТИ КЛИНИЧЕСКОЙ КАРТИНЫ И РЕЗУЛЬТАТЫ ИНСТРУМЕНТАЛЬНО-ЛАБОРАТОРНОГО ОБСЛЕДОВАНИЯ БОЛЬНЫХ СОПИСТОРХОЗНО-МЕТОРХОЗНОЙ

ИНВАЗИЕЙ

Поскольку для обследованных нами больных описторхидозами была характерна значительная аккумуляция в крови и ткани печени таких токсичных МЭ как хром и ртуть, то в группах больных СО с моноинвазией описторхов и микст-инвазией описторхов и меторхов нами были выделены подгруппы людей, имевших высокий и относительно низкий уровень хрома или/и ртути в периферической крови. Синдром лихорадки (повышение температуры тела в пределах 37,2-38,5°С) достоверно более часто наблюдался у больных с микст-инвазией, имевших высокий уровень ртути и хрома в крови, по сравнению с аналогичной группой больных, имевших относительно низкий уровень этих МЭ (при Р<0,05). У больных с моноинвазией достоверных отличий частоты встречаемости этого показателя между подгруппами больных, имевших высокий и низкий уровни токсичных МЭ в крови, обнаружено не было. Заболевание сопровождалось признаками интоксикации: слабостью, повышенной утомляемостью и головной болью.

Симптомы интоксикации, а также проявления диспептического синдрома, как у больных с микст-инвазией, так и у больных с моноинвазией описторхов, значительно более часто встречались у обследованных с высоким уровнем токсичных МЭ в крови, по сравнению с людьми с относительно низким содержанием этих МЭ(приР<0,01).

Аллергический синдром, который проявлялся в основном в виде экзантемы, а также диспептический синдром, увеличение размеров печени и болезненность в области правого подреберья или/и эпигастрия среди больных с микст- и моноинвазией достоверно чаще встречались в группах пациентов с высоким уровнем ртути и хрома в крови, по сравнению с обследованными, имевшими низкий уровень этих МЭ (при Р<0,01 или Р<0,05). У больных с микст-инвазией, по сравнению с больными с моноинвазией описторхов, имевших низкое содержание хрома и ртути в крови, существенно более часто наблюдались признаки интоксикации и диспепсии в виде тошноты или/и горечи во рту, а также болевой синдром в области правого подреберья или/и эпигастрия (при Р<0,01 или Р<0,05). При высоком содержании токсичных МЭ в крови у больных с микст-инвазией, по сравнению с обследованными с моноинвазией описторхов, достоверно более часто регистрировались: диспептический синдром, положительный симптом Ортнера, увеличение размеров печени, болевой синдром в области правого подреберья или/и эпигастрия, а также в области левого подреберья (при Р<0,01 или Р<0,05).

Частоту встречаемости нарушений функционального состояния щитовидной железы оценивали по изменениям содержания тироксина, трийодтиронина и тиреотропного гормона в периферической крови выше и ниже нормативных значений. Наиболее часто, по сравнению с другими обследованными группами больных, отклонения от нормативных значений уровней содержания гормонов щитовидной железы регистрировались у больных с микст-инвазией, имевших высокое содержание ртути и хрома в крови (при Р<0,01).. Кроме того, у больных описторхидозами были установлены обратные корреляционные зависимости между уровнем трийодтиронина в сыворотке крови и содержанием в крови таких МЭ как бром, цинк, хром и ртуть (г= -0,65, г= -0,77, г= -0,71, г= -0,52 при Р<0,01 во всех случаях). Таким образом, в период суперинвазии повышенное содержание ртути и хрома в периферической крови у больных с микст- и моноинвазией описторхов и меторхов сопровождается увеличением тяжести течения заболевания, а также повышением частоты встречаемости гепатомегалии, нарушения функционального состояния щитовидной железы и различных клинических проявлений интоксикационного, диспептического, аллергического, абдоминального болевого синдромов. В случае относительно низкого содержания токсичных МЭ в крови у больных с моноинвазией описторхов, по сравнению с микст-инвазией, достоверные отличия были установлены только в отношении проявлений интоксикационного, диспептического синдромов, а также болевого синдрома в области правого подреберья.

У больных с описторхозно-меторхозной микст-инвазией или с моноинвазией описторхов, имевших высокий уровень содержания токсичных МЭ в крови, частота встречаемости синдрома холецистогепатита оказалась достоверно выше, по сравнению с аналогичными группами больных, имевших относительно низкое содержание этих МЭ (при Р<0,05). При относительно низком уровне ртути и хрома в крови у больных с моноинвазией описторхов, по сравнению с больными с микст-инвазией, синдром холецистохолецистита встречался достоверно чаще (при Р<0,05), а синдром холецистогепатита наблюдался существенно реже (при Р<0,05). В случае высокого уровня ртути и хрома в крови у больных с описторхозно-меторхозной микст-инвазией или с описторхозной моноинвазией частота встречаемости клинических вариантов течения заболевания - панкреатопатии или гастродуоденопатии оказалась значительно выше, чем у аналогичных групп больных с относительно низким уровнем этих МЭ (при

Р<0,05). При относительно низком уровне токсичных МЭ в крови панкреатопатия регистрировалась только у больных с микст-инвазией, а гастродуденопатия достоверно более часто наблюдалась у больных с микст-инвазией, по сравнению с группой обследованных, имевших моноинвазию описторхов (при Р<0,01). Таким образом, повышение содержания ртути и хрома в крови больных описторхидозами сопровождается преобладанием в клинической картине синдрома холецистогепатита и увеличением частоты встречаемости панкреатопатии и гастродуоденопатии.

По данным ультразвукового исследования органов брюшной полости и фиброгастродуоденоскопии, у больных СО с описторхозно-меторхозной микст-инвазией и у больных с моноинвазией описторхов диффузные изменения ткани печени и поджелудочной железы, а также атрофический, эрозивно-язвенный и гиперпластический гастрит значительно более часто встречались в группах людей, имевших высокий уровень ртути и хрома в крови, по сравнению с группами, имевших относительно низкий уровень этих МЭ (при Р<0,01 или Р<0,05). Кроме того, у больных с микст-инвазией, по сравнению с больными с моноинвазией, достоверно более часто отмечались случаи диффузных изменений ткани печени и атрофического гастрита. В то же время, поверхностный гастрит или/и дуоденит более часто встречались у больных с моноинвазией описторхов, чем у больных с микст-инвазией описторхов и меторхов (при Р<0,01) Известно, что вирус Эпштейна-Барр (ЭБ) способствует развитию атрофического гастрита и рака желудка (Гурцевич В.Э. с соавт., 2000) Для больных описторхидозами, имевших атрофический, эрозивно-язвенный или гиперпластический гастрит, оказалось характерным значительное повышение титров Э-антител к вирускапсидному антигену этого вируса.

С помощью анамнестически-статистического метода проанализированы некоторые клинические проявления иммунологической недостаточности у больных описторхидозами, имевших высокий и относительно низкий уровни ртути и хрома в крови. Оказалось, что у больных с микст-инвазией описторхов и меторхов хронические бронхиты, бактериальные инфекции кожи, афтозные стоматиты и частые острые респираторные заболевания достоверно более часто регистрировались в группе обследованных людей, имевших высокое содержание ртути и хрома в крови, по сравнению с пациентами, имевшими относительно низкий уровень этих МЭ (при Р<0,01). Кроме того, в случае высокого содержания токсичных МЭ в периферической крови у больных с описторхозно-меторхозной микст-инвазией и с моноинвазией описторхов лимфаденопатия, хронические тонзиллиты или/и фарингиты отмечались значительно более часто, чем у аналогичных групп больных, имевших относительно низкий уровень этих МЭ (при Р<0,05) При относительно низком уровне ртути и хрома в крови лимфаденопатия и хронические тонзиллиты или/и фарингиты у больных с микст-инвазией встречались достоверно более часто, по сравнению с моноинвазией описторхов (при Р<0,05). Таким образом, высокое содержание ртути и хрома в крови больных описторхидозами, особенно у больных с микст-инвазией описторхов и меторхов, сопровождается развитием хронических бронхитов, бактериальных инфекций кожи, афтозных стоматитов, частых острых респираторных заболеваний, лимфаденопатий и хронического тонзиллита или/и фарингита Лимфаденопатия и хронический тонзиллит или/и фарингит более часто регистрируются у больных с микст-инвазией описторхов и меторхов, по сравнению группой обследованных с моноинвазией описторхов

У больных описторхидозами, по сравнению со здоровыми людьми, установлено достоверное повышение в сыворотке периферической крови активности ферментов аланинаминотрансферазы и аспартатаминотрансферазы, а также содержания общего билирубина, В случае высокого уровня ртути и хрома в крови у больных с микст-и моноинвазией описторхов и меторхов было установлено существенное повышение содержания общего билирубина и активности аланинаминотранферазы, по сравнению с

аналогичными группами больных, имевших относительно низкий уровень этих МЭ (при Р<0,01). Кроме того, у больных с микст-инвазией описторхов и меторхов регистрировались значительно более высокие уровни общего билирубина, а также активности аминотрансфераз, по сравнению с больными, серопозитивными только в отношении описторхозного антигена (при Р<0,05). Кроме того, нами были установлены прямые корреляции между активностью аланинаминотрансферазы в сыворотке крови и содержанием хрома или ртути в крови (г=+0,64 и г=+0,91 при Р<0,01).

ЛЕЙКОЦИТАРНАЯ ФОРМУЛА И ФУНКЦИОНАЛЬНОЕ СОСТОЯНИЕ НЕЙТРОФИЛОВ У БОЛЬНЫХ С ОПИСТОРХОЗНО-МЕТОРХОЗНОЙ ИНВАЗИЕЙ

Пейкоцитарная формула

У больных СО с моноинвазией описторхов и с микст-инвазией описторхов и меторхов, имевших высокий или низкий уровни ртути и хрома в крови, были изучены показатели лейкоцитарной формулы. У всех обследованных нами больных олисторхидозами, за исключением пациентов с микст-инвазией описторхов и меторхов с высоким уровнем токсичных МЭ в крови, было установлено достоверное повышение общего числа лейкоцитов в периферической крови, по сравнению с соответствующим показателем у здоровых людей (при Р<0,05). В случае относительно низкого содержания ртути и хрома в крови у больных с микст-инвазией общее число лейкоцитов снижалось, по сравнению с соответствующим показателем в группе обследованных людей с моноинвазией описторхов (при Р<0,01). Абсолютное и относительное число моноцитов, эозинофилов и палочкоядерных нейтрофилов в периферической крови у больных с микст- и моноинвазиями описторхов и меторхов, имевших высокое и низкое содержание токсичных МЭ в крови, было значительно выше, по сравнению с уровнями этих клеток у здоровых людей (при Р<0,01). У больных с микст-инвазией описторхов и меторхов, имевших высокое содержание ртути и хрома в крови, абсолютное и относительное число эозинофильных гранулоцитов оказалось достоверно выше, чем у аналогичной группы больных, имевших относительно низкий уровень этих МЭ (при Р<0,01). Вместе с тем, у больных с микст-инвазией описторхов и меторхов, имевших высокое содержание ртути и хрома в крови, отмечалось существенное снижение абсолютного и относительного числа лимфоцитов и сегментоядерных нейтрофилов, по сравнению с соответствующими показателями у здоровых людей (при Р<0,01). У больных с микст-инвазией как в случае низкого, так и в случае высокого содержания ртути и хрома в крови, абсолютное число сегментоядерных нейтрофилов и лимфоцитов было значительно ниже соответствующих значений у обследованных людей с моноинвазией описторхов (при Р<0,01) Кроме того, абсолютное и относительное число лимфоцитов и сегментоядерных нейтрофилов у больных с описторхозно-меторхозной микст-инвазией и у больных с моноинвазией описторхов, имевших высокое содержание ртути и хрома в крови, было достоверно ниже, чем у аналогичных групп обследованных, имевших низкий уровень этих МЭ (при Р<0,01). У больных описторхидозами были обнаружены обратные корреляционные связи между содержанием хрома и абсолютным числом сегментоядерных нейтрофилов (г=-0,63 при Р<0,01), а также между показателями содержания хрома и числом лимфоцитов в периферической крови (г=-0,67 при Р<0,01). Кроме того, прямые корреляционные связи были установлены между содержанием брома и абсолютным числом эозинофилов (г=+0,51 при Р<0,01).

Функциональное состояниенейтрофилов У обследованных нами больных СО с микст-инвазией описторхов и меторхов или с моноинвазией описторхов, имевших высокий или низкий уровни ртути и хрома в крови, показатели спонтанного НСТ-теста были достоверно выше такового у здоровых людей (при Р<0,01) Вместе с тем, как у больных с микст-инвазией, так и у больных с моноинвазией, имевших высокое содержание ртути и хрома в крови, показатель спонтанного НСТ-теста оказался существенно ниже, соответствующих показателей у больных с низким содержанием этих МЭ (при Р<0,01)

В случае индуцированного НСТ-теста нейтрофилы стимулировали описторхозным антигеном или бактериальным аллергеном £. coli Стимуляция должна приводить к усилению продукции активных форм кислорода и увеличению количества активных нейтрофилов У больных с микст-инвазией описторхов и меторхов, имевших высокое содержание токсичных МЭ в крови, стимуляция нейтрофилов бактериальным аллергеном не приводила к достоверному повышению показателя НСТ-теста, по сравнению со спонтанным уровнем Кроме того, показатель индуцированного НСТ-теста у больных этой группы был достоверно ниже аналогичного показателя у здоровых людей (при Р<0,01) У больных с микст-инвазией, имевших высокий и низкий уровни токсичных МЭ, после воздействия аллергена £ coli резерв реактивности нейтрофилоа оказался равен 4,1 и 4,2 соответственно, то есть был значительно ниже 10 Резерв реактивности нейтрофилов (РРН), который рассчитывается по разнице индуцированного и спонтанного НСТ-тестов, отражает эффекторный потенциал системы фагоцитоза (Маянский АН, Пикуза ОИ, 1993) При ряде бактериальных инфекций (острой пневмонии, ОРВИ у новорожденных детей и других) РРН ниже 10 с высокой вероятностью говорит об осложнениях или о неблагополучном прогнозе (Маянский А Н, Пикуза ОИ.1993)

У больных с моноинвазией описторхов, имевших высокий или низкий уровень токсичных МЭ в крови, уровень стимулированного бактериальным аллергеном НСТ-теста был достоверно выше соответствующего спонтанного уровня (при Р<0,01) Резерв реактивности нейтрофилов у больных с моноинвазией описторхов, имевших высокий или низкий уровни токсичных МЭ в крови, составил соответственно 9,8 и 13,5, что приближалось к норме Для сравнения, у здоровых людей после стимуляции бактериальным аллергеном РРН был равен 16,7

Как у больных с микст-инвазией, так и у больных с моноинвазией, показатели стимулированного бактериальным аллергеном НСТ-теста в группах обследованных людей, имевших высокий уровень ртути и хрома в крови, оказались значительно ниже аналогичных показателей у больных с относительно низким уровень этих МЭ (при Р<0,01) Кроме того, показатели стимулированного бактериальным аллергеном НСТ-теста у больных с микст-инвазией были значительно ниже, чем у больных с моноинвазией (при Р<0,01)

Показатели индуцированного НСТ-теста после стимуляции описторхином как у больных с микст-инвазией, так и у больных с моноинвазией, были достоверно выше соответствующих спонтанных уровней (при Р<0,01) Более того, у больных с микст-инвазией, имевших высокое содержание ртути и хрома в крови, стимуляция нейтрофилов описторхозным антигеном приводила к достоверно более высоким значениям показателя НСТ-теста, по сравнению с таковыми после стимуляции нейтрофилов бактериальным аллергеном (при Р<0,01)

Индуцированный НСТ-тест, характеризующий функциональный резерв нейтрофилов, рассматривают как биохимический критерий готовности нейтрофильных гранулоцитов к завершенному фагоцитозу (Маянский А.Н, Пикуза О И, 1993, Межгихов Т Н, 1998) Поэтому с целью изучения фагоцитарной функции нейтрофилов у больных описторхидозами нами проводилось определение фагоцитарного индекса

Гамбургера, фагоцитарного числа Райта, индекса завершенности фагоцитоза, а также исследование активности миелопероксидазы нейтрофилов.

У всех обследованных нами больных СО показатель фагоцитарного индекса не имел достоверных отличий, а фагоцитарное число оказалось достоверно выше, чем у здоровых людей (при Р<0,05) В то же время, индекс завершенности фагоцитоза во всех группах обследованных людей был значительно ниже аналогичного показателя у людей, не имевших инвазию (при Р<0,01). Кроме того, как у больных с микст-инвазией, так и у больных с моноинвазией описторхов, показатели фагоцитарного индекса и индекса завершенности фагоцитоза в группах обследованных, имевших высокое содержание токсичных МЭ в крови, оказались существенно ниже таковых у больных с низким содержанием этих МЭ (при Р<0,05). Вместе с тем, у всех обследованных нами больных СО, активность миелопероксидазы и кислой фосфатазы нейтрофилов была достоверно выше соответствующих показателей у здоровых людей (при Р<0,01).

Полученные нами данные свидетельствуют, что у больных СО в целом наблюдается повышение функциональной активности нейтрофилов, о чем свидетельствовало увеличение, по сравнению со здоровыми людьми, показателей спонтанного НСТ-теста, фагоцитарного числа Райта, а также активности миелопероксидазы и кислой фосфатазы. Вместе с тем, у больных СО были обнаружены признаки чрезмерно напряженного функционирования бактерицидной системы нейтрофилов с тенденцией к срыву резервных возможностей этих фагоцитов. Так, например, у больных с описторхозно-меторхозной микст-инвазией и моноинвазией описторхов повышенный уровень ртути и хрома в крови сочетался со значительным подавлением НСТ-теста, стимулированного бактериальным аллергеном, а также снижением показателя РРН и индекса завершенности фагоцитоза. Более того, об истощении резервных возможностей нейтрофилов свидетельствовали результаты изучения функциональной активности этих клеток у больных ХО с микст-инвазией описторхов и меторхов. В этой группе обследованных, особенно в случае высокого содержания ртути и хрома в крови, нами было зарегистрировано значительное подавление, по сравнению со здоровыми людьми, как спонтанного, так и стимулированного бактериальным аллергеном НСТ-теста, а также снижение показателя РРН, активности миелопероксидазы и всех трех изученных показателей (фагоцитарного индекса, фагоцитарного числа и индекса завершенности фагоцитоза) фагоцитарной функции нейтрофилов (при Р<0,01). Известно, что при контакте с чужеродной поверхностью нейтрофилы генерируют активные формы кислорода и наиболее активные из них инактивируются. Поэтому такие события как контакт, приводящий к активации, генерация активных форм кислорода и инактивация нейтрофилов тесно взаимосвязаны (Герасимов И.Г., Игнатов Д Ю., 2001).

Показатели осмотической резистентности гранулоцитов у больных с микст- и моноинвазией, имевших высокое содержание токсичных МЭ в крови, оказались существенно ниже соответствующих значений у больных, имевших низкое содержание этих МЭ (при Р<0,01). При этом было установлено достоверное снижение осмотической резистентности не только эозинофилов, но и нейтрофильных гранулоцитов. У больных с микст- и моноинвазией с высоким и низким уровнями ртути и хрома в крови достоверные отличия были установлены в отношении осмотической резистентности агранулоцитов (Р<0,01).

Таким образом, у больных СО, особенно в случае повышенной концентрации ртути и хрома в крови, по сравнению со здоровыми людьми, было установлено значительное снижение осмотической резистентности гранулоцитов и агранулоцитов, что свидетельствовало о увеличении гибели этих клеток.

У больных СО с микст-инвазией описторхов и меторхов, а также с моноинвазией описторхов была проведена компьютерная цито- и кариометрия нейтрофилов периферической крови с определением

площади всей клетки, площади цитоплазмы и ядра клетки, а также площади компактного и диффузного хроматина ядра. У больных СО с описторхозно-меторхозной микст-инвазией и с моноинвазией описторхов, по сравнению со здоровыми людьми, было установлено достоверное снижение площади клеточного ядра, диффузного хроматина и площади клетки в целом, а также существенное увеличение площади компактного хроматина ядра (при Р<0,01). Как у больных с микст-инвазией, так и у больных с моноинвазией описторхов, имевших высокое содержание токсичных МЭ в крови, показатели площади цитоплазмы, площади ядра и диффузного хроматина ядра, а также площади клетки нейтрофилов в целом, оказались существенно ниже соответствующих показателей у больных с низким содержанием этих МЭ (при Р<0,05). Более того, как в случае высокого, так и в случае низкого содержания ртути и хрома в крови, показатели площади клеточного ядра нейтрофилов и диффузного хроматина ядра у больных с микст-инвазией описторхов и меторхов были значительно ниже таковых у больных с моноинвазией описторхов (при Р<0,05). Вместе с тем, наиболее высокие значения показателя площади компактного хроматина ядра нейтрофилов были установлены у больных СО с микст-инвазией описторхов и меторхов, имевших высокий уровень ртути и хрома в крови. Уровни хрома и ртути в крови прямо коррелировали с площадью компактного хроматина (r=+0,77 и r=+0,64 при Р<0,01). Кроме того, у больных СО нами были установлены обратные корреляционные зависимости между площадью компактного хроматина и показателями осмотической резистентности этих клеток (r= -0,51 при Р<0,01). Площадь ядра нейтрофилов прямо коррелировала с показателями осмотической резистентности этих клеток и спонтанного НСТ-теста (r= +0,67 и r= +0,58 при Р<0,01).

Повышение площади компактного хроматина ядер нейтрофильных гранулоцитов может соответствовать процессам, связаным с ростом содержания функционально малоактивного гетерохроматина, по сравнению с уровнем эухроматина, что может свидетельствовать о подавлении, прежде всего, белковосинтетической функции клетки и её гибели (Hughes V. et al., 1987; Маянский А.Н. с соавт., 1999).

ХАРАКТЕРИСТИКА ПРОЦЕССОВ СВОБОДНОРАДИКАЛЬНОГО ОКИСЛЕНИЯ У БОЛЬНЫХ С ОПИСТОРХОЗНО-МЕТОРХОЗНОЙ ИНВАЗИЕЙ

У больных СО с описторхозно-меторхозной микст-инвазией, а также с моноинвазией описторхов, имевших высокий или относительно низкий уровни содержания ртути и хрома в крови, была изучена интенсивность свободнорадикального окисления с помощью определения содержания его маркеров -монооксида азота и малонового диальдегида (МДА) в сыворотке крови, а также дана характеристика состояния антиоксидантной системы с использованием показателей активности фермента каталазы и антиокислительной активности липидов (АОАЛ) в сыворотке крови. Во всех обследованных нами группах больных СО было установлено достоверное повышение содержания нитритов (продукта монооксида азота) и МДА в сыворотке крови, по сравнению с соответствующими показателями у здоровых людей (при Р<0,01). У больных с микст- и моноинвазией, имевших высокое содержание токсичных МЭ в крови, уровни нитритов и МДА оказались значительно выше, чем у больных с относительно низким содержанием этих МЭ (при Р<0,01). Активность каталазы и АОАЛ в сыворотке крови у всех обследованных нами больных СО была достоверно ниже соответствующих показателей у здоровых людей (при Р<0,05). У больных с микст- и моноинвазией с высоким содержанием токсичных МЭ в крови показатель АОАЛ и активность каталазы оказались снижены, по сравнению с соответствующими показателями у больных с низким содержанием этих МЭ (при Р<0,05).

Таким образом, у больных с микст- или/и моноинвазией повышенный уровень ртути и хрома в крови сопровождался значительным увеличением содержания в сыворотке крови нитритов (монооксида азота) и

МДА при одновременном подавлении активности каталазы и АО АЛ. Известно, что ионы хрома и ртути способны приводить к повышению образования супероксид аниона кислорода и монооксида азота (Иазвоип ЕА, БШ 5 и., 1995; Атаа М Е. е1 а1., 1998). Кроме того, ртуть может подавлять антиоксидантные механизмы, включая активность каталазы (Калиман П.А. Баранник Т.В., 1999).

ХАРАКТЕРИСТИКА ИММУННОГО СТАТУСА У БОЛЬНЫХ С ОПИСТОРХОЗНО-МЕТОРХОЗНОЙ ИНВАЗИЕЙ

Характеристика сеубпопуляцй лимфоцитов и различных классов иммуноглобулинов

У больных СО с моноинвазией описторхов и с описторхозно-меторхозной микст-инвазией, имевших высокий или низкий уровни ртути и хрома в периферической крови, были изучены показатели иммунного статуса. При исследовании фенотипических характеристик лимфоцитов периферической крови у всех обследованных нами больных с моноинвазией описторхов или с микст-инвазией описторхов и меторхов было установлено достоверное снижение абсолютного и относительного числа 003+ зрелых Т-лимфоцитов и повышение числа 0019+ В-лимфоцитов в периферической крови, по сравнению со здоровыми людьми (при Р<0.01). Среди больных СО с микст- и моноинвазией абсолютное или/и относительное число 003+ зрелых Т-лимфоцитов, 004+ Т-хелперов, 008+ цитотоксических Т-лимфоцитов и 0016+ клеток нормальных киллеров в периферической крови в у обследованных, имевших высокое содержание токсичных МЭ в крови, оказалось существенно ниже, чем в группах больных с низким содержанием этих МЭ (при Р<0,01 или Р<0,05). У всех обследованных нами больных СО, за исключением обследованных с моноинвазией описторхов, имевших относительно низкий уровень ртути и хрома в крови, было установлено достоверное снижение абсолютного и относительного числа 004+ Т-хелперов в периферической крови, по сравнению с соответствующими показателями у здоровых людей (при Р<0,01). У больных СО с микст-инвазией описторхов и меторхов, имевших высокий уровень ртути и хрома в крови, абсолютное и относительное содержание 008+ цитотоксических Т-лимфоцитов и 0016+ клеток нормальных киллеров в периферической крови оказалось существенно ниже, чем у здоровых людей (при Р<0,05). В то же время, у остальных групп больных СО эти показатели не имели достоверных отличий от таковых у здоровых людей. Кроме того, в случае как высокого, так и низкого уровней содержания токсичных МЭ в крови, у больных с микст-инвазией абсолютное число 003+, 004+ и 008+ субпопуляций Т-лимфоцитов оказалось значительно ниже, чем у соответствующих групп больных с моноинвазией (при Р<0,01). Соотношение 004+/008+ Т-лимфоцитов у всех обследованных нами больных СО было значительно ниже, чем у здоровых людей (при Р<0,01). Следует также отметить, что у больных описторхидозами суммарный процент клеток 004+ и 008+ субпопуляций как правило превышал средний уровень 003+ лимфоцитов. Это могло быть связано с наличием в периферической крови незрелых форм Т-клеток (Зарядьева ГА, 1993). Появление таких клеток в периферической крови было описано при иммуносупрессивных состояниях различного генеза (Чумак АА с соавт., 1992), В хронический период инвазии у больных с микст-инвазией, имевших высокое содержание ртути и хрома в крови, по сравнению с обследованными с микст-инвазией, имевших относительно низкий уровень этих МЭ и здоровыми людьми, было установлено существенное снижение абсолютного числа 003+, 004+ и 008+ субпопуляций Т-лимфоцитов (при Р<0,01).

У больных описторхидозами были обнаружены обратные корреляционные зависимости между содержанием хрома в крови и абсолютным числом 008+ цитотоксических Т-лимфоцитов (И= -0,67 при Р<0,01), а также между концентрациями хрома и абсолютным числом 0016+ клеток нормальных киллеров

в периферической крови (r= -0,81 при Р<0,01). Кроме того, у больных СО были зарегистрированы отрицательные корреляционные связи между абсолютным числом CD3+ зрелых Т-лимфоцитов или CD4+ Т-хелперов и показателями содержания хрома в крови (r= -0,53 и r= -0,64 при Р<0,01). Содержание ртути в периферической крови обратно коррелировало с абсолютным числом CD8+ цитотоксических Т-лимфоцитов и прямо коррелировало с числом CD19+ В-лимфоцитов (r= -0,47 и r= +0,68 при Р<0,01).

Таким образом, у больных описторхидозами, по сравнению со здоровыми людьми, отмечалась тенденция к снижению содержания в периферической крови CD3+ и CD4+ субпопуляций Т-лимфоцитов при одновременном повышении уровня CD19+ В-лимфоцитов. Кроме того, у больных описторхидозами, особенно у больных с микст-инвазией описторхов и меторхов, повышенный уровень ртути и хрома в крови сопровождался значительным снижением содержания в периферической крови CD3+ зрелых Т-лимфоцитов, CD4+ Т-хелперов, CD8+ цитотоксических Т-клеток и CD16+ клеток нормальных киллеров.

Показано, что повышенная аккумуляция в организме человека хрома и некоторых других тяжелых металлов может приводить к резкому снижению абсолютного числа лимфоцитов и их некоторых субпопуляций (Хаитов P.M. с соавт., 1995; Tanigawa Т. et al., 1995; Kuo H.W., Wu M L, 2002). Известно, что наиболее чувствительной к любым воздействиям является субпопуляция CD8+ Т-супрессоров и CD4+ Т-хелперов типа 1. В результате подавления функциональной активности этих клеток происходит стимуляция Т-хелперов типа 2 и В-лимфоцитов (Хаитов P.M. с соавт., 1995).

Содержание иммуноглобулинов классов класса Е, а также содержание циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК), в крови у всех обследованных нами больных СО оказалось значительно выше, чем у здоровых людей (при Р<0,01). У больных с описторхозно-меторхозной микст-инвазией и с описторхозной моноинвазией, имевших низкое содержание ртути и хрома в крови, концентрации иммуноглобулинов классов G, М и А были достоверно выше, чем у здоровых лиц (при Р<0,01). У больных с описторхозно-меторхозной микст-инвазией и моноинвазией описторхов уровни иммуноглобулинов классов G и М в группах обследованных, имевших высокое содержание токсичных МЭ в крови, были достоверно ниже таковых у больных с относительно низким содержанием этих МЭ (при Р<0,01). У больных с микст- и моноинвазией, имевших высокое содержание токсичных МЭ в крови, уровни иммуноглобулинов класса Е и ЦИК оказались значительно выше таковых у больных с низким содержанием этих МЭ (при Р<0,01). У больных с микст-инвазией содержание иммуноглобулинов класса Е и ЦИК в периферической крови было достоверно выше, чем у обследованных с моноинвазией описторхов (при Р<0,01).

Кроме того, у больных описторхидозами нами были установлены положительные корреляционные связи между содержанием хрома в крови и концентрацией иммуноглобулинов класса Е или уровнем ЦИК (R=+0,71 при Р<0,01 и r=+0,59 при Р<0,01 соответственно). С другой стороны, нами были установлены обратные корреляции между содержанием хрома в крови и уровнями иммуноглобулинов классов G и М (R= -0,62 при Р<0,01 и r= -0,75 при Р<0,01 соответственно).

Таким образом, у больных с описторхозно-меторхозной микст-инвазией и с моноинвазией описторхов повышенный уровень ртути и хрома в крови сопровождался снижением содержания в периферической крови иммуноглобулинов классов G и М при одновременном значительном повышении содержания иммуноглобулинов класса Е и ЦИК.

Характеристика продукции иммуноиитокинов и монооксида азота

В настоящее время хорошо известно, что тип реагирования иммунной системы по клеточному или гуморальному типу зависит от преобладающей активности одной из двух субпопуляций регуляторных Т-клеток - хелперов типа 1 или 2 и от баланса продуцируемых ими цитокинов (Roger G., Andus Т., 1998;

Хаитов P.M. с соавт., 2000). У больных СО с моноинвазией описторхов и с микст-инвазией описторхов и меторхов, имевших высокий и низкий уровни ртути и хрома в крови, было проведено изучение продукции мононуклеарными клетками периферической крови противовоспалительных цитокинов - интерлейкина-4 и интерлейкина-10, а также провоспалительного цитокина -интерферона^.

Интерлейкин-10 (ИЛ-10) продуцируется Т-хелперами, В-лимфоцитами, а также клетками, инфицированными вирусом Эпштейна-Барр. Он способен ингибировать продукцию цитокинов активированными Т-хелперами типа 1 и макрофагами, подавлять пролиферацию Т-клеток. Интерлейкин-4 (ИЛ-4) вызывает иммунное отклонение дифференцировки CD4+ Т-лимфоцитов в сторону Т-хелперов типа 2, активацию В-лимфоцитов, переключение синтеза класса иммуноглобулинов с повышением образования иммуноглобулинов класса Е (Roger G., Andus Т., 1998; Хаитов P.M. с соавт., 2000).

Во всех группах больных СО спонтанная и стимулированная ЛПС Е. coli или описторхином продукция мононуклеарными клетками ИЛ-10 и ИЛ-4 оказалась значительно выше, чем у здоровых лиц (Р<0,01). Стимуляция мононуклеарных лейкоцитов или описторхином у больных с микст- и

моноинвазией, имевших высокий уровень токсичных МЭ в крови, приводила к существенному повышению продукции этих интерлейкинов, по сравнению со спонтанным уровнем (при Р<0,01). Кроме того, у больных с описторхозно-меторхозной микст-инвазией и моноинвазией описторхов, имевших высокий уровень ртути и хрома в крови, спонтанная и стимулированная или описторхином продукция

мононуклеарными клетками этих интерлейкинов была существенно выше таковых у обследованных людей с относительно низким уровнем этих МЭ (при Р<0,01). Показано, что как при высоком, так и при низком содержании ртути и хрома в крови, спонтанная и стимулированная ЛПС Е. coli или описторхином секреция мононуклеарными клетками интерлейкинов-10 и -4 у больных с микст-инвазией была значительно выше, чем у обследованных людей с моноинвазией описторхов (при Р<0,05). Стимуляция описторхозным антигеном мононуклеарных клеток, полученных от больных СО с микст- или с моноинвазией, имевших высокий уровень токсичных МЭ в крови, вызвала увеличение продукции ИЛ-10, по сравнению со спонтанным уровнем, соответственно в 19,0 и 5,8 раз (при Р<0,01). Воздействие описторхозного антигена на эти клетки у больных с микст- и моноинвазией, имевших относительно низкий уровень ртути и хрома в крови, приводила к стимуляции продукции этого интерлейкина по сравнению со спонтанным уровнем, соответственно в 13,3 и 3,9 раза (при Р<0,01 в обоих случаях). Кроме того, стимуляция описторхозным антигеном мононуклеарных клеток, полученных от больных СО с микст-инвазией описторхов и меторхов, имевших высокий или низкий уровни токсичных МЭ в крови, вызвала увеличение продукции ИЛ-4, по сравнению со спонтанным уровнем соответственно в 2,0 и 2,4 раза (при Р<0,01 в обоих случаях). Помимо этого, стимуляция мононуклеарных клеток описторхозным антигеном у больных с микст- и моноинвазией, имевших высокий или низкий уровни ртути и хрома в крови, приводила к более значительному повышению продукции ИЛ-10, по сравнению с соответствующими уровнями секреции этого интерлейкина после стимуляции клеток ЛПС £ coli (при Р<0,05 или Р<0,01).

Интерферон-у являющийся одним из основных цитокинов Т-хелперов типа 1 и CD8+

цитотоксических Т-лимфоцитов, участвует в противовирусном и антибактериальном, антигельминтном и противопухолевом иммунном ответе (Roger G., Andus Т., 1998; Хаитов P.M. с соавт., 2000).

Показано, что у больных СО с микст-инвазией, имевших высокое и низкое содержание ртути и хрома в крови, спонтанная продукция мононуклеарными клетками оказалась достоверно ниже, по сравнению с таковой у здоровых людей (при Р<0,01). В то же время, у больных с моноинвазией описторхов, имевших высокое содержание токсичных МЭ в крови, спонтанная продукция мононуклеарными клетками не

имела достоверных отличий от соответствующего уровня у здоровых людей. У больных с моноинвазией описторхов, имевших относительно низкое содержание токсичных МЭ в крови, спонтанная продукция мононуклеарными клетками этого иммуноцитокина оказалась существенно выше, по сравнению с таковой у людей, не имевших инвазии (при Р<0,05). После стимуляции мононуклеарных лейкоцитов фитогемагглютинином (ФГА) продукция ИФ^у во всех группах обследованных нами больных СО была значительно ниже, чем у здоровых лиц (Р<0,01 во всех случаях). Кроме того, как в случае микст-инвазии описторхов и меторхов, так и в случае моноинвазии описторхов, спонтанная и стимулированная ФГА продукция мононуклеарными клетками ИФ-у в группах больных, имевших высокий уровень ртути и хрома в крови, была существенно ниже таковой в группах обследованных людей, имевших относительно низкий уровень токсичных МЭ (при Р<0,05). Как при высоком, так и при низком содержании ртути и хрома в крови, спонтанная и стимулированная ФГА продукция мононуклеарными клетками у больных с микст-инвазией была значительно ниже, чем в соответствующих группах обследованных людей с моноинвазией описторхов (при Р<0,05). Стимуляция мононуклеарных лейкоцитов ФГА или описторхином у больных с микст-инвазией, имевших высокий и низкий уровни токсичных МЭ в крови, не приводила к повышению продукции по сравнению со спонтанным уровнем. У больных с моноинвазией, имевших высокое и низкое содержание токсичных МЭ в крови, стимуляция мононуклеарных ФГА вызывала увеличение продукции этого иммуноцитокина в 2,4 и 4,0 раза, по сравнению со спонтанным уровнем (при Р<0,01 в обоих случаях). Воздействие олисторхозного антигена на эти клетки у больных с моноинвазией, имевших высокий и низкий уровни ртути и хрома в крови, также приводила к достоверному повышению продукции этого иммуноцитокина, по сравнению со спонтанными уровнями (при Р<0,01). После добавления описторхина к культуре мононуклеарных лейкоцитов, полученных от больных СО, имевших высокий или низкий уровни ртути и хрома в крови, стимулированная продукция у больных с микст-инвазией была достоверно ниже, чем у больных с моноинвазией описторхов (при Р<0,01).

Провоспалительные иммуноцитокины, например ИФ^, ИЛ-Iß, а также бактериальный ЛПС, облегчают экспрессию индуцибельной изоформы синтазы оксида азота (iNOS) (Маеда X, Акаике Т., 1998; Elliott S.N., Wallace J.L., 1998). Известно, что период полужизни молекулы монооксида азота измеряется несколькими секундами, после чего образуются нитриты. У больных СО с описторхозно-меторхозной микст-инвазией и моноинвазией описторхов, имевших высокое и низкое содержание ртути и хрома в крови, спонтанная продукция мононуклеарными клетками нитритов во всех случаях оказалась достоверно выше, чем у здоровых людей (при Р<0,01). Показано, что как при высоком, так и при низком содержании ртути и хрома в крови, достоверных отличий спонтанной продукции мононуклеарными лейкоцитами нитритов в культурах, полученных от больных с микст- и моноинвазией, установлено не было. Стимуляция мононуклеарных лейкоцитов ЛПС £. сой у больных с микст-инвазией, имевших высокий и низкий уровни токсичных МЭ в крови, не приводила к повышению продукции нитритов, по сравнению со спонтанными уровнями. Кроме того, уровни стимулированной продукции нитритов в этих группах оказались достоверно ниже, чем у здоровых людей (при Р<0,01). С другой стороны, у больных с моноинвазией описторхов, имевших высокое и низкое содержание токсичных МЭ в крови, стимуляция мононуклеарных лейкоцитов , приводила к существенному увеличению продукции нитритов, по сравнению со спонтанным уровнем (при Р<0,01). После стимуляции ЛПС Е. cofi мононуклеарных клеток, полученных от больных, имевших высокий или низкий уровни токсичных МЭ в крови, продукция нитритов у больных с микст-инвазией была значительно ниже, чем в соответствующей группе обследованных людей с моноинвазией описторхов (при Р<0,01). Таким образом, у больных с микст- и моноинвазией, по сравнению со здоровыми людьми,

отмечалось повышение спонтанной секреции нитритов мононуклерными клетками периферической крови. Вместе с тем, у больных с микст-инвазией описторхов и меторхов, по сравнению с больными с моноинвазией описторхов, продукция нитритов этими клетками после стимуляции бактериальным ЛПС оказалась подавленной.

У обследованных нами больных описторхидозами были установлены прямые корреляции между спонтанной продукцией ИЛИ0 и уровнями ЦИК или содержанием хрома в крови (р+0,73 и Р+0,89 при Р<0,01). В то же время, стимулированная секреция мононуклеарными клетками ИЛ-10 отрицательно коррелировала с продукцией ИФ^ (г= -0,87 при Р<0,01). Спонтанная секреция ИФ-? обратно коррелировала с содержанием хрома в крови (r=- 0,73 при Р<0,01). Кроме того, положительные корреляционные связи отмечались между спонтанной продукцией ИЛ-4 и концентрацией иммуноглобулина Е или содержанием хрома в крови (г=+0,Э1 иг=+0,65при Р<0,01 в обоих случаях).

Известно, что хроническая инвазия гельминтов сопровождается преобладанием гуморального иммунного ответа, опосредованного Т-хелперами типа 2, что может приводить к подавлению цитотоксической активности макрофагов и CD8+ Т-лимфоцитов (MacDonald A.S. et al. ,1998). Более того, установлено, что выделенный из яиц шистозом олигосахарид индуцировал продукцию ИЛ-10 В-клетками (Velupillai P., Ham DA, 1994).. 2000). Кроме того, известно, что хром даже в низкой концентрации вызывает подавление продукции ИФ^у (Christensen MM. et al., 1992; Boscolo P. et al., 1999). Таким образом, все эти изменения могли свидетельствовать об отклонении дифференцировки CD4+ Т-лимфоцитов у больных описторхидозами, особенно в случае микст-инвазии с высоким содержанием ртути и хрома в крови, преимущественно в сторону Т-хелперов типа 2.

СОСТОЯНИЕ ЦИТОГЕНЕТИЧЕСКОГО АППАРАТА У БОЛЬНЫХ С ОПИСТОРХОЗНО-МЕТОРХОЗНОЙ ИНВАЗИЕЙ

У больных СО с микст-инвазией описторхов и меторхов, а также с моноинвазией описторхов была изучена частота цитогенетических нарушений в культурах ФГА-стимулированных лимфоцитов периферической крови. У всех обследованных нами больных СО было установлено достоверное повышение числа хромосом с аберрациями хроматидного типа в лимфоцитах периферической крови, по сравнению с соответствующим показателем у здоровых людей (при Р<0,01). Кроме того, во всех группах больных, за исключением пациентов с моноинвазией описторхов, имевших низкий уровень ртути и хрома в крови, отмечалось значительное повышение числа хромосом с аберрациями хромосомного типа в лимфоцитах, по сравнению с соответствующим показателем у здоровых людей (при Р<0,01). Как у больных с микст-инвазией, так и у больных с моноинвазией, число хромосом с хроматидными и хромосомными нарушениями в лимфоцитах периферической крови в группе обследованных, имевших высокое содержание токсичных МЭ в крови, оказалось существенно выше соответствующих показателей в группах больных, имевших низкое содержание этих МЭ (при Р<0,05). Кроме того, как в случае высокого, так и в случае низкого содержания ртути и хрома в крови, у больных с микст-инвазией описторхов и меторхов число хромосом с аберрациями хромосомного типа в лимфоцитах периферической крови было существенно выше соответствующих значений в группе обследованных с моноинвазией описторхов (при Р<0,01). Частота лимфоцитов с гипо-, гиперплоидией и полиплоидией в периферической крови у всех обследованных нами больных СО была достоверно выше соответствующих показателей у здоровых лиц (при Р<0,05 или Р<0,01). Число гиперплоидных и полиплоидных лимфоцитов в периферической крови у больных с микст- и моноинвазией в группах, имевших высокое содержание ртути и хрома в крови, было достоверно выше, чем в группах больных, имевших низкий уровень этих МЭ (при Р<0,05). В случае

высокого уровня ртути и хрома в крови у больных с микст-инвазией описторхов и меторхов частота гиперплоидных и полиплоидных лимфоцитов оказалась существенно выше аналогичных показателей у обследованных людей с моноинвазией описторхов (при Р<0,01) Наиболее высокий уровень лимфоцитов с цитогенетическими нарушениями, который включал в себя показатели частоты этих клеток со структурными нарушениями и с измененным числом хромосом в наборе был установлен у больных с микст- нвазией, имевших высокое содержание ртути и хрома в крови (при Р<0,01) Таким образом, наибольшее число структурных аберраций хромосом хромосомного и хроматидного типов, а также клеток с гиперплоидией и полиплоидией было зарегистрировано у больных с микст-инвазией описторхов и меторхов, имевших высокое содержание ртути и хрома в крови

У больных описторхидозами нами были установлены прямые корреляционные зависимости между содержанием хрома или ртути в крови и частотой хромосом с аберрациями хроматидного (R=+0,78 при Р<0,01 и r=+0,91 при Р<0,01) или хромосомного (r=+0,89 при Р<0,01 и r=+0,83 при Р<0,01) типов Уровни клеток с полиплоидным или гиперплоидным наборами хромосом положительно коррелировали с содержанием хрома в крови (r=+0,77 при Р<0,01 и r=+0,81 при Р<0 01) Содержание нитритов и МДА в сыворотке крови прямо коррелировало с уровнями структурных аберраций хромосом (R=+0,61 И R=+0,72 при Р<0,01 в обоих случаях) Прямые корреляционные связи были обнаружены также между уровнями спонтанной и стимулированной продукции мононуклеарными клетками периферической крови интерлейкина-10 и частотой структурных аберраций хромосом (R=+0,79 при Р<0,01 и r=+0,75 при Р<0,05) В то же время, между частотой лимфоцитов со структурными аберрациями и абсолютным числом CD8+ цитотоксических Т-лимфоцитов или числом CD16+ клеток нормальных киллеров были установлены обратные корреляционные связи (R=-0,86 и r=-0,75 при Р<0,01 в обоих случаях) По данным литературы, у людей, имевших повышенную аккумуляцию в организме хрома и ртути, было установлено наличие прямой корреляционной связи между частотой лимфоцитов с хромосомными аберрациями или с микроядрами и содержанием этих тяжелых металлов в крови (Franchi E et al, 1994) У обследованных нами больных СО отмечалось существенное накопление нитритов и продуктов перекисного окисления липидов (ПОЛ) в сыворотке крови Показано, что повышенное образование нитритов и продуктов ПОЛ в сыворотке крови в острый период гельминтной инвазии, вызванной трихинеллами, эхинококком, шистосомами и Opisthorchis vivernni может быть фактором, способствующим увеличению уровня цитогенетических нарушений (Haswell-Elkins M R et al, 1994, Ohshima H et al, 1994, Hogaboam С M et al, 1996, Touil-Boukoffa С et al, 1998)

Следующий раздел настоящего исследования касается анализа дифференциально окрашенных препаратов хромосом ФГА-стимулированных лимфоцитов периферической крови больных СО с микст-инвазией описторхов и меторхов и с моноинвазией описторхов Абсолютные значения фактически наблюдаемых уровней структурных нарушений хромосом сравнивали с ожидаемыми уровнями, которые вычисляли, исходя из относительных длин хромосом кариотипа человека и равной вероятности возникновения структурных аберраций в любом участке хромосомы (Фогель Ф, Мотульски А, 1989) Установлено, что распределение структурных нарушений хромосом у обследованных нами людей не всегда соответствовало ожидаемому уровню Наиболее близкие величины относительно ожидаемого уровня были зарегистрированы у здоровых доноров При сопоставлении эмпирических значений, полученных у больных СО с моноинвазией описторхов, с ожидаемыми уровнями также не было выявлено достоверных отличий при использовании критерия х2 К Пирсона В то же время, у больных СО с микст-инвазией описторхов и меторхов между эмпирическими и ожидаемыми уровнями структурных нарушений хромосом были обнаружены существенные отличия (Р<0,01) При обследовании этой группы больных

описторхидозами было установлено, что из 96 обнаруженных нарушений хромосом 16 разрывов хромосом приходилось на хромосому 2 (наблюдалось -16,7%; ожидалось - 7,7%), 14 разрывов - на хромосому 3 (наблюдалось -14,6%; ожидалось - 6,6%), 13 разрывов - на хромосому 6 (наблюдалось -13,5%; ожидалось - 5,7%), 12 аберраций - на хромосому 8 (наблюдалось - 12,5%; ожидалось - 4,7%), 11 разрывов - на хромосому 12 (наблюдалось - 11,4%; ожидалось - 4,5%), 9 аберраций на хромосому 14 (наблюдалось -9,4%; ожидалось - 3,4%) и 6 нарушений на хромосому 22 (наблюдалось - 6,2%; ожидалось - 1,96%). При этом 10,8% структурных нарушений реализовались в виде транслокаций с 8 хромосомы на хромосомы 2 и 14. Практически во всех случаях был отмечен недостаток разрывов в мелких хромосомах генома, за исключением хромосомы 22. Установлено, что разрывы локализовались не случайно, а, главным образом, вблизи известных ломких участков и протоонкогенов хромосом 2,3,6,8 и 12. У больных часто нарушалась структура хромосомы 3 в области протоонкогена raf-1, хромосомы 6 в области протоонкогена ф, хромосомы 2 и 8 вблизи локусов генов N-myc и с-тус , хромосомы 12 вблизи гена ras-Ki-2. Структурные аберрации вблизи этих генов ассоциированы с различными злокачественными новообразованиями (Yunis J.J., 1983; Sandberg AA, 1984; Сьяксте Т.Г., Эренпрейс Я.Г., 1987). Кроме того, известно, что для онкогенной трансформации клеток, вызванных вирусом ЭБ, характерны перестройки хромосом 2, 3, 6 и 8 (Kumari P.etal.,1995).

ПЕРСИСТЕНЦИЯ ВИРУСА ЭПШТЕЙНА-БАРР У БОЛЬНЫХ С ОПИСТОРХОЗНО-МЕТОРХОЗНОЙ ИНВАЗИИ Определение титров антител к антигенам вируса Этитейна-Барр в сыворотке крови

У больных СО с микст-инвазией описторхов и меторхов, а также с моноинвазией описторхов было проведено определение в сыворотке крови титров антител класса G и А к вирускапсидному антигену (ВКА) вируса Эпштейна-Барр (ЭБ), а также антител класса G к комплексу ранних антигенов (РА) этого вируса с помощью реакции непрямой иммунофлюоресценции. У всех обследованных нами больных СО с микст- и моноинвазией было установлено достоверное повышение среднегеометрических титров (СГТ) G- и А-антител к ВКА и G-антител к РА вируса ЭБ в сыворотке крови, по сравнению с соответствующими показателями у здоровых людей (при Р<0,05 или Р<0,01). Кроме того, как в случае высокого, так и в случае низкого содержания ртути и хрома в крови, у больных с микст-инвазией описторхов и меторхов СГТ G- и А-антител к ВКА и G-антител к РА вируса ЭБ оказались существенно выше таковых у больных с моноинвазией описторхов (при Р<0,05). Для подтверждения результатов, полученных нами с помощью непрямой реакции иммунофлюореценции, все больные, имевшие высокие титры антител классов G и А к ВКА и комплексу РА, были дополнительно обследованы иммуноферментным методом. У обследованных нами больных СО М-антитела к ВКА, а также антитела класса G к комплексу РА и к ядерному антигену вируса ЭБ были обнаружены соответственно у 100%, 91% и 100% обследованных больных, что свидетельствовало о реактивации Эпштейн-Барр инфекции.

У больных СО нами были установлены прямые корреляционные связи между содержанием хрома или ртути в крови и титрами антител класса G к ВКА (R=+0,72 И R=+0,84 при Р<0,01 в обоих случаях). Более того, титры G-антител к ВКА вируса ЭБ отрицательно коррелировали с абсолютным числом лимфоцитов (r=-0,79 при Р<0,01), нейтрофилов (r=-0,68 при Р<0,01), уровнями CD3+ зрелых Т-лимфоцитов (r=-0,82 при Р<0,01), CD4+ Т-хелперов (r=-0,70 при Р<0,01), CD8+ Т-лимфоцитов (r=-0,87 при Р<0,01) и CD16+ нормальных киллеров (r=-0,66 при Р<0,01) в периферической крови. Положительная корреляционная связь была выявлена между уровнями титров этих антител и спонтанной продукцией мононуклеарными клетками

периферической крови интерлейкина-10 (R=+0,79 при Р<0,01). Титры G-антител к ВКА вируса ЭБ также положительно коррелировали с абсолютным числом эозинофилов, площадью компактного хроматина в ядрах нейтрофилоэ, уровнями эритроцитов с микроядрами и частотой структурных аберраций хромосом в лимфоцитах периферической крови (r=+0,73, r=+0,82, r=+0,96 И R=+0,88при Р<0,01 во всех случаях). Аналогичные корреляции были установлены между этими цитогенетическими показателями и титрами G-антител к комплексу РА вируса ЭБ (r=+0,83 и r=+0,80 при Р<0,01 в обоих случаях).

Таким образом, описторхидозная инвазия сопровождается повышением титров антител к антигенам вируса ЭБ. Особенно высокие СП G-антител к ВКА и РА этого вируса были установлены у больных с микст-инвазией описторхов и меторхов. Как известно, появление высоких титров антител класса G к ВКА и комплексу РА, а также А-антител к ВКА вируса ЭБ у взрослых людей может свидетельствовать о реактивации латентной инфекции. Известно, что реактивация латентной инфекции, вызванной вирусом ЭБ, происходит на фоне таких паразитарных заболеваний как малярия и шистосомоз (Burkitt D., 1970; Araujo I., 1996). Кроме того, реактивацию вируса ЭБ могут вызывать некоторые тяжелые металлы и другие ксенобиотики (Rotnman N. et al., 1997; Худолей ВВ., 1999). Показано, что в основе реактивации латентной ЭБ вирусной инфекции лежит иммуносупрессия и нарушение контроля CD8+ цитотоксических Т-лимфоцитов и CD16+ нормальных киллеров за этим вирусом (Khanna R. et al., 1997). Кроме того, установлено, что вирус ЭБ может проникать в ядро нейтрофила, что сопровождается усилением гибели этих клеток (Larochelle В. et al., 1998).

Определение антигенов вируса Эпштейна-Баор в гельминтах Гомогенаты тел марит описторхов 0. felineus и меторхов М. bilis были изучены на предмет содержания в них капсидного антигена вируса ЭБ с использованием непрямой реакции иммунофлюоресценции. Гельминты были получены из внутрипеченочных желчных протоков 18 людей, у которых на аутопсии была обнаружена моноинвазия описторхов (11 человек) или микст-инвазия описторхов и меторхов (7 человек). В 12 случаях (66,6%) методом люминесцентной микроскопии было выявлено свечение яиц гельминтов. Реакция оказалась положительной у 7 больных с микст-инвазией (в 100%) и у 5 человек с моноинвазией (з 45%). В гомогенатах тел гельминтов, полученных от 7 человек, которые имели микст-инвазию описторхов и меторхов, и одного человека с моноинвазией описторхов нами было обнаружено яркое свечение (на три-четыре креста) яиц, что могло свидетельствовать о присутствии ВКА вируса ЭБ. В остальных 4 образцах гомогенатов тел гельминтов, полученных от больных с моноинвазией описторхов, свечение оказалось менее интенсивным (на два креста). Кроме того, присутствие ДНК вируса ЭБ в гельминтах было дополнительно подтверждено методом ПЦР-анализа.

Согласно данным J.K. Actor et al. (1993), которые заражали мышей S. mansoni, а затем рекомбинантным вакцинным вирусом vPE16, вирус длительно сохранялся в печени внутри паразитарных гранулем, образованных вокруг яиц гельминта (Actor J.K. et al., 1993). По мнению этих исследователей гранулемы вокруг яиц гельминта обеспечивают благоприятное микроокружение для экспрессии вируса (Actor J.K. et al., 1994).

ЭКСПЕРИМЕНТЫ IN VIVO И В УСЛОВИЯХ КУЛЬТУРЫ Т-ЛИМФОЦИТОВ ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИ Для изучения индуцированных кариопатологических изменений в культуры ФГА-стимулированных лимфоцитов, полученных от 12 здоровых людей, добавляли описторхин, хлорид хрома (III) или оба эти агента. Воздействие олисторхина, хлорида хрома или сочетанное действие этих агентов на культуру лимфоцитов приводило к достоверному изменению уровней почти всех изученных нами показателей, по

сравнению с интактным контролем (при Р<0,01 или Р<0,05) Во всех трех опытах в культурах отмечалось достоверное снижение, по сравнению с интактным контролем, частоты встречаемости клеток с округлой, продолговатой и бобовидной формой ядер (при Р<0,05). Сочетанное ведение в культуры хлорида хрома и описторхина приводило к наиболее выраженному снижению частоты встречаемости этого типа формы ядра как по сравнению с контролем, так и по сравнению с культурами, в которые вносили описторхин (при Р<0,01). В то же время, в культурах лимфоцитов во всех трех опытах было зарегистрировано достоверное повышение, по сравнению с интактным контролем, числа клеток с однолопастным или многолопастным ядром, уровня лимфоцитов с одним или несколькими микроядрами, частоты многоядерных клеток, а также числа клеток с кариорексисом, кариопикнозом и кариолизисом В культуре лимфоцитов хлорид хрома индуцировал достоверно более высокий уровень многоядерных клеток и клеток с кариолизисом, чем описторхин (при Р<0,01). За исключением вышеназванных показателей, достоверных различий между опытами, когда в культуру изолировано вносился только описторхин или хлорид хрома, установлено не было.

Наиболее высокие уровни многоядерных клеток, лимфоцитов с однолопастным ядром, лимфоцитов с одним или несколькими микроядрами, а также числа клеток с кариопикнозом, кариолизисом в культурах лимфоцитов было зарегистрировано после сочетанного воздействия хлорида хрома и описторхина Частота встречаемости клеток с перечисленными типами кариопатологических изменений в культурах, подвергнутых сочетанному воздействию описторхина и хлорида хрома, оказалась существенно выше, чем в культурах, в которые вносился лишь один из этих агентов, что могло свидетельствовать об аддитивном эффекте.

Частота патологических митозов изучалась в культурах ФГА-стимулированных лимфоцитов здоровых доноров после введения в них хлорида хрома, описторхина или сочетанного воздействия этих двух агентов Добавление в культуры лимфоцитов хлорида хрома или описторхина приводило к значительному повышению, по сравнению с интактным контролем, частоты встречаемости клеток с отставанием хромосом в метафазе или с преждевременным отхождением хромосом к полюсам, а также лимфоцитов с трехполюсной или многогрупповой метафазами, клеток с К-митозом или с отставанием хромосом и их фрагментов в ана- или телофазе. Из перечисленных типов патологии митоза между опытами с добавлением изолированного описторхина или хлорида хрома было установлено различие только по трем ниженазванным показателям.

Число клеток с трехполюсной, многополюсной метафазами и с отставанием хромосом в метафазе в культуре клеток после добавления хлорида хрома оказалось достоверно выше, чем после внесения в культуру описторхина (при Р<0,05). В культурах лимфоцитов крови после сочетанного воздействия хлорида хрома и описторхина было установлено достоверное повышение, по сравнению с интактным контролем, всех изученных нами типов патологии митоза, за исключением преждевременного расхождения хроматид в профазе и неравнополюсной ана-телофазы (при Р<0,01). В этом опыте была зарегистрирована наиболее высокая, достоверно отличающаяся от соответствующих уровней после воздействия только описторхина или только хлорида хрома, частота клеток с отставанием хромосом в метафазе, лимфоцитов с трех- и многополюсной или многогрупповой метафазой, К-митозом (при Р<0,01).

Установлено, что в опытных культурах после сочетанного воздействия хлорида хрома и описторхина или изолированного введения хлорида хрома число лимфоцитов со структурными аберрациями хромосом и количество клеток с измененным числом хромосом было значительно повышено, по сравнению с таковым в интактном контроле (при Р<0,01). Кроме того, оба эти показателя оказались достоверно выше в

опытных культурах лимфоцитов после совместного добавления хлорида хрома и описторхина, по сравнению с культурами здоровых людей после воздействия только соли хрома (при Р<0,01).

Кроме того, нами были проведены эксперименты с культурами лимфоцитов, зараженных и не зараженных вирусом ЭБ, в которые добавляли хлорид хрома (III). Установлено, что заражение вирусом ЭБ культуры лимфоцитов индуцировало достоверное повышение уровня цитогенетически измененных клеток, по сравнению с интактым контролем (при Р<0,01). Добавление хлорида хрома в культуру лимфоцитов, зараженную вирусом ЭБ, индуцировало наиболее высокий уровень лимфоцитов с цитогенетическими нарушениями, который оказался достоверно выше соответствующих уровней в культурах лимфоцитов после воздействия только одного из этих двух факторов (при Р<0,01).

Кроме экспериментов с использованием культуры клеток нами были проведены опыты in vivo с целью исследования накопления тяжелых металлов (на примере бихромата калия) в организме золотистых хомяков на фоне повторного заражения животных гельминтами 0. felineus или М. bilis и изучения индуцированных уровней цитогенетических нарушений. Установлено, что многократная инвазия гельминтов приводила к значительному накоплению хрома в ткани печени, по сравнению с аналогичной группой здоровых животных, получавших бихромат калия, что прямо коррелировало с интенсивностью инвазии, тяжестью поражения печени по данным гистологического исследования и числом эритроцитов и гепатоцитов с микроядрами (r=+0,82 и r=+0,83 при Р<0,01). Сходные результаты были получены как для животных, зараженных 0. felineus, так и для животных, зараженных М. bilis.

Известно, что добавление хроматов в культуру лимфоцитов периферической крови человека приводит к увеличению частоты встречаемости одиночных и парных фрагментов хромосом, а также аберраций обменного типа (Бигалиев А.Б., 1986; Gao M. et al., 1992; Надеенко В.Г. с соавт., 1997). Кроме структурных аберраций, хром индуцирует образование анеуплоидных и полиплоидных лимфоцитов (Бигалиев А.Б., 1986).

РАСПРОСТРАНЕНИЕ И ОСОБЕННОСТИ ПАТОГЕНЕЗА ОПИСТОРХОЗНО-МЕТОРХОЗНОЙ ИНВАЗИИ У ЧЕЛОВЕКА В РАЗЛИЧНЫХ РЕГИОНАХ ЗАПАДНОЙ СИБИРИ

Томская область

Распространение. Для оценки уровня пораженности описторхидами нами было проведено выборочное обследование с использованием копроовоскопических и серологических методов людей, которые проживали в поселках Томского района, расположенных вблизи р. Томь, а также в населенных пунктах Бакчарского района, расположенных на р. Бакчар и Икса. При копроовоскопическом обследовании жителей населенных пунктов Томского и Бакчарского районов нами было выявлено 30 (18,2913,0%) и 26 (20,5+3,5%) человек соответственно, которые имели инвазию описторхид. По данным серологического обследования на наличие противометорхозных антител, наиболее высокий показатель пораженности был зарегистрирован среди жителей поселков Томского района, расположенных вблизи р, Томь (12,8+2,6%), что оказалось достоверно выше, чем аналогичный показатель у жителей Бакчарского района (5,51+2,0% при Р<0,05). Более того, у населения поселков Томского района показатели пораженности описторхами и меторхами были приблизительно одинаковы (13,4+2,6% и 12,8+2,6%). В то же время, у жителей Бакчарского района уровни пораженности описторхами оказались достоверно выше показателей пораженное™ меторхами (20,5+3,5% против 5,5±2,0% при Р<0,01). Среди населения Томского района число лиц, имевших моноинвазию описторхов, моноинвазию меторхов и микст-инвазию описторхов и меторхов, было приблизительно одинаково. В то же время, среди жителей Бакчарского района не было

32

найдено лиц, серопозитивных в отношении только меторхознозного антигена, а число людей, имевших микст-инвазию оказалось существенно ниже, по сравнению с числом жителей, имевших моноинвазию описторхов (5,5±2,0% против 14,9+3,1% при Р<0,05). Более того, число серопозитивных лиц по отношению только к описторхозному антигену среди жителей пос. Бакчар и Плотниково (14,9+3,1%) было достоверно выше, чем в населенных пунктах Томского района (5,5+3,1% при Р<0,05).

Полученные данные могут свидетельствовать, на наш взгляд, об увеличении среди обследованных нами жителей Томского района числа людей, имевших микст-инвазию описторхов и меторхов или моноинвазию меторхов, по сравнению с аналогичными показателями у жителей пос. Бакчар и Плотниково Бакчарского района.

Биоаккумуляция химических элементов. У обследованных нами больных описторхидозами из Томского и Бакчарского районов Томской области наиболее часто встречалось повышение содержания в цельной крови, по сравнению с людьми, не имевшими инвазии описторхид, таких МЭ как хром, ртуть, бром, рубидий, цезий, лантан, селен, цинк и кобальт. В периферической крови у больных с микст-инвазией описторхов и меторхов, по сравнению с больными с моноинвазией описторхов, проживающих в Томском районе, отмечалось существенное увеличение содержания хрома, ртути, рубидия, лантана и кобальта (при Р<0,01 или Р<0,05).

Вместе с тем, у обследованных нами больных с микст-инвазией описторхов и меторхов, проживающих в населенных пунктах Бакчарского района было обнаружено повышение содержания в крови, по сравнению со здоровыми людьми и больными с моноинвазией, только таких МЭ как хром, бром и кобальт (при Р<0,01 или Р<0,05). Кроме того, в крови больных с микст-инвазией описторхов и меторхов и с моноинвазией описторхов, проживающих в Томском районе, по сравнению с аналогичными группами больных из Бакчарского района, было установлено значительное повышение содержания хрома, брома, ртути, рубидия, цезия, лантана, селена и кобальта (при Р<0,01 или Р<0,05). Интересно также отметить, что достоверные отличия содержания в крови хрома, ртути и брома были обнаружены в группах здоровых людей, проживающих в Томском и Бакчарском районах (Р<0,05).

Таким образом, у больных описторхидозами и здоровых людей, проживающих в населенных пунктах Томского района, расположенных в среднем течении р. Томь, и в поселках Бакчарского района, расположенных вблизи р. Бакчар и Икса, были установлены существенные различия содержания в крови ряда токсичных, условно-эссенциальных и эссенциальных МЭ.

Цитогенетическая патология. У больных с микст-инвазией описторхов и меторхов и с моноинвазией описторхов, проживающих в Томском и Бакчарском районах, по сравнению со здоровыми людьми, было установлено значительное повышение частоты лимфоцитов со структурными аберрациями хромосом и с измененным числом хромосом, а также уровня эритроцитов с микроядрами (при Р<0,01 во всех случаях). Кроме того, в Томском и Бакчарском районах у больных с микст-инвазией описторхов и меторхов, по сравнению с больными с моноинвазией описторхов, отмечалось достоверное увеличение числа клеток со структурными нарушениями хромосом, а также уровней эритроцитов с микроядрами (при Р<0,01). Более того, у больных с микст- и моноинвазией, проживавших в Томском районе, было установлено существенное увеличение общей частоты лимфоцитов с цитогенетическими нарушениями, числа лимфоцитов со структурными аберрациями хромосом и уровня эритроцитов с микроядрами, по сравнению с аналогичными группами больных из Бакчарского района (при Р<0,01 или Р<0,05). Среди структурных аберраций хромосом у больных с микст- и моноинвазией, проживающих в Томском районе, было обнаружено значительное увеличение числа хромосом с аберрациями хромосомного типа, по сравнению с аналогичными группами больных из Бакчарского района (при Р<0,01). Вместе с тем, достоверных отличий

числа хромосом с хроматидными аберрациями между этими же группами больных из Томского и Бакчарского районов установлено не было.

Таким образом, у больных описторхидозами, проживающих в Томском и Бакчарском районах, нами были установлены существенные отличия частоты клеток с цитогенетическими нарушениями. В наибольшей степени эти отличия касались структурных нарушений хромосом.

Персистенция вируса Эпштейна-Барр. Установлено, что в Томском и Бакчарском районах уровни СГТ антител класса Э и А к ВКА, а также Э-антител к РА вируса ЭБ в сыворотке крови у больных с микст-инвазией описторхов и меторхов были достоверно выше, чем у здоровых людей (при Р<0,01 или Р<0,05). У больных с моноинвазией описторхов из Томского района, по сравнению со здоровыми людьми, также отмечалось существенное повышение СГТ антител класса Э к ВКА, а также Э-антител к РА вируса ЭБ (при Р<0,05 или Р<0,01). Вместе с тем, в Бакчарском районе достоверных отличий этих показателей между группами больных с моноинвазией описторхов и здоровыми людьми обнаружено не было. Кроме того, у больных с микст-инвазией описторхов и меторхов, проживавших в Томском районе, уровни СГТ А-антител к ВКА вируса ЭБ в сыворотке крови оказались существенно выше, по сравнению с соответствующим показателем у больных с моноинвазией описторхов из этого же района (при Р<0,05). В Бакчарском районе у больных с микст-инвазией описторхов и меторхов, по сравнению с группой обследованных людей с моноинвазией описторхов, было установлено достоверное повышение уровней'СГТ антител класса Э и А к ВКА, а также Э-антител к РА вируса ЭБ (при Р<0,05 или Р<0,01). Более того, у больных с моноинвазией описторхов, проживавших в Томском районе, уровни СГТ антител класса Э к ВКА, а также Э-антител к РА вируса ЭБ оказались существенно выше, по сравнению с соответствующими показателями у больных с моноинвазией из Бакчарского района (при Р<0,05).

Кроме того, у обследованных нами больных с микст-инвазией описторхов и меторхов и с моноинвазией описторхов из Томского и Бакчарского районов были проанализированы данные о частоте встречаемости высоких уровней антител к антигенам вируса ЭБ. Высокими титрами антител считали: для иммуноглобулинов класса Э к ВКА 1/640 и выше; для иммуноглобулинов класса А к ВКА 1/20 и выше; для антител класса Э к РА 1/20 и выше. В Томском районе у больных с микст-инвазией выявляемость высоких титров Э-антител к ВКА вируса ЭБ была достоверно выше, по сравнению с больными с моноинвазией описторхов (при Р<0,05). Кроме того, частота встречаемости высоких титров Э-антител к ВКА среди больных СО с микст-инвазией из Томского района, была значительно выше, чем в аналогичной группе больных из Бакчарского района (при Р<0,05). Вместе с тем, у больных с моноинвазией описторхов, проживающих в Бакчарском районе, высокие титры антител обнаружены не были. Кроме того, у больных из Томского района нами были установлены прямые корреляционные зависимости между содержанием хрома или ртути в крови и титрами антител класса Э к ВКА (Я=+0,61 И Я=+0,75 при Р<0,01 в обоих случаях) Таким образом, у больных, проживавших в Томском и Бакчарском районах, было установлено повышение СГТ антител к антигенам вируса ЭБ, по сравнению со здоровыми людьми. Особенно высокие титры антител к антигенам этого вируса регистрировались у больных с микст-инвазией. Более того, у больных из Томского района СГТ антител класса Э к ВКА, а также Э-антител к комплексу РА вируса ЭБ оказались достоверно выше, чем у больных, проживавших вблизи р. Бакчар и Икса.

Алтайский край

Распространение. В целях решения вопроса о возможности инвазирования населения Алтайского края не только 0. felineus, но и трематодами рода Metorchis, нами было проведено выборочное обследование с использованием копроовоскопических и серологических методов жителей населенных пунктов Локтевского, Рубцовского и Шипуновского районов, расположенных вблизи р. Алей, а также населения с. Троицкое

Троицкого района, расположенного на р. Большая Речка, одного из правых притоков в верховьях р Обь. По данным выборочного копровоскопического обследования, показатели пораженности описторхидами у жителей населенных пунктов, расположенных на р. Алей, оказались достоверно выше, чем у жителей с. Троицкое (43,4+5,4% против 22,8+4,3% при Р<0,01). По данным серологического обследования на наличие противоописторхозных антител, число серопозитивных лиц в населенных пунктах, расположенных на р. Алей, и в с. Троицкое (34,9+5,2% и 22,8+4,3%) было приблизительно одинаково. В то время как показатель пораженности меторхами у людей, проживающих в населенных пунктах Локтевского, Рубцовского и Шипуновского районов, был достоверно выше, по сравнению с таковым у жителей с. Троицкое (26,5+4,8% против 6,5+2,5% при Р<0,01). Кроме того, в отличие от жителей населенных пунктов, расположенных на р. Алей, среди обследованного населения с. Троицкое показатель пораженности описторхами (22,8+4,3%) был значительно выше, чем уровень пораженности меторхами (6,5+2,5% при Р<0,01)

В населенных пунктах, расположенных на р. Алей, число серопозитивных лиц с моноинвазией описторхов, моноинвазией меторхов или лиц с микст-инвазией описторхов и меторхов не имели достоверных отличий (16,8+4,0%, 8,4+3,0% и 18,0+4,2%). В то же время, у жителей с. Троицкое случаев моноинвазии меторхов обнаружено не было, а показатель пораженности описторхами (16,3+3,8%) был существенно выше, чем число лиц с микст-инвазией описторхов и меторхов (6,5+2,5% при Р<0,05). Более того, у жителей населенных пунктов, расположенных на р. Алей, число лиц серопозитивных с микст-инвазией описторхов и меторхов было достоверно выше, по сравнению с аналогичным показателем у жителей с. Троицкое (18,0+4,2% против 6,5+2,5% при Р<0,05).

Полученные данные могут свидетельствовать, на наш взгляд, об увеличении среди обследованных нами жителей населенных пунктов, расположенных на р. Алей, числа лиц, имевших микст-инвазию описторхов и меторхов или моноинвазию меторхов, по сравнению с аналогичными показателями у жителей с. Троицкое Троицкого района.

Биоаккумуляиия химических элементов С помощью метода ИНАА было установлено, что у больных описторхидозами из обследованных нами населенных пунктов наиболее часто регистрировалось существенное повышение содержания в цельной крови, по сравнению со здоровыми людьми, таких МЭ как цезий и стронций. Повышение содержания в периферической крови этих двух МЭ, по сравнению со здоровыми людьми, было установлено у больных с микст-инвазией описторхов и меторхов или с моноинвазией описторхов, проживавших в населенных пунктах Локтевского, Рубцовского и Шипуновского районов (при Р<0,01 или Р<0,05). Более того, в крови больных с микст-инвазией описторхов и меторхов содержание этих МЭ оказалось достоверно выше, чем у больных с моноинвазией описторхов (при Р<0,01 или Р<0,05).

У больных с микст- и моноинвазией из Троицкого района, проживающих на р. Большая Речка в верховьях р. Оби, также было обнаружено увеличение содержания в крови стронция, по сравнению со здоровыми людьми (при Р<0,01 или Р<0,05). Однако, у обследованных нами больных с микст-инвазией описторхов и меторхов и с моноинвазией описторхов, проживающих вблизи р. Алей, содержание в крови цезия и стронция было значительно выше, чем в аналогичных группах больных из Троицкого района (при Р<0,01 или Р<0,05).

Таким образом, у больных описторхидозами, проживающих в населенных пунктах Алтайского края, расположенных на р. Алей и в верховьях р. Обь, были установлены существенные различия содержания в крови таких МЭ как стронций и цезий.

Цитогенетическая патология У больных с микст-инвазией описторхов и меторхов и с моноинвазией описторхов, проживающих вблизи р. Алей и в верховьях р. Обь, по сравнению со здоровыми людьми, было установлено значительное повышение частоты лимфоцитов со структурными аберрациями хромосом и с

измененным числом хромосом, а также уровней эритроцитов с микроядрами (при Р<0,01 или Р<0,05). Кроме того, у больных, проживающих вблизи р. Алей, в группе с микст-инвазией описторхов и меторхов, по сравнению с больными с моноинвазией описторхов, отмечалось достоверное увеличение числа клеток со структурными нарушениями хромосом, а также уровней эритроцитов с микроядрами (при Р<0,01). Более того, у больных с моноинвазией описторхов, проживавших вблизи р. Алей, было установлено существенное повышение числа лимфоцитов со структурными аберрациями хромосом и с измененным числом хромосом, а также уровня эритроцитов с микроядрами, по сравнению с аналогичной группой больных из Троицкого района (при Р<0,05).

Среди структурных аберраций хромосом у больных с моноинвазией описторхов, проживавших вблизи р. Алей, было обнаружено значительное увеличение числа хромосом с аберрациями хромосомного и хроматидного типов, по сравнению с аналогичной группой больных из Троицкого района (при Р<0,01). Более того, у больных из населенных пунктов, расположенных вблизи р. Алей, нами были установлены прямые корреляционные связи между содержанием цезия или стронция в крови и уровнями хромосомных аберраций хромосом (г=+0,91 при Р<0,01 и г=+0,86 при Р<0,01). Таким образом, у больных описторхидозами, проживающих вблизи р. Алей и в верховьях р. Обь, нами были установлены существенные отличия частоты клеток с цитогенетическими нарушениями.

Персистенция вируса Эпштейна-Барр. У больных с микст-инвазией описторхов и меторхов, проживающих в вблизи р. Алей, отмечалось достоверное повышение уровней СГТ антител класса G и А к ВКА, а также G-антител к РА вируса ЭБ в сыворотке крови, по сравнению с соответствующими показателями у здоровых людей (при Р<0,01 или Р<0,05). Вместе с тем, у больных с моноинвазией описторхов, проживающих вблизи р. Алей и в верховьях р. Обь, по сравнению со здоровыми людьми, было обнаружено достоверное повышение только уровня СГТ G-антител к ВКА в сыворотке крови (при Р<0,01).

Кроме того, у больных с микст-инвазией описторхов и меторхов, проживавших вблизи р. Алей, уровни СГТ антител класса А к ВКА, а также G-антител к РА вируса ЭБ, оказались существенно выше, по сравнению с соответствующими показателями у больных с моноинвазией описторхов (при Р<0,01 в обоих случаях). Более того, у больных с моноинвазией описторхов, проживавших вблизи р. Алей, уровни СГТ антител класса G и А к ВКА вируса ЭБ оказались существенно выше, по сравнению с соответствующими показателями у больных с моноинвазией из Троицкого района (при Р<0,05), Важно также отметить, что у больных с моноинвазией описторхов из Троицкого района, в отличие от больных с микст- и моноинвазией, проживавших вблизи р. Алей, не было обнаружено высоких титров антител.

Кроме того, нами были установлены прямые корреляционные зависимости между титрами G-антител к ВКА вируса ЭБ и содержанием стронция в крови у больных, проживающих в населенных пунктах, расположенных в верховьях р. Алей (г=+0,87 при Р<0,01). Прямые корреляционные связи были обнаружены также между титрами G-антител к ВКА вируса ЭБ и частотой структурных аберраций хромосом у больных, проживающих в населенных пунктах, расположенных вдоль р. Алей (г=+0,84 при Р<0,01). Таким образом, у больных с микст-инвазией описторхов и меторхов, проживавших вблизи р. Алей, было установлено значительное повышение СГТ антител к антигенам вируса ЭБ, по сравнению с больными с моноинвазией описторхов и здоровыми людьми. Более того, у больных, проживавших вблизи р. Алей, СГТ антител класса G и А к ВКА вируса ЭБ оказались достоверно выше, чем у больных из Троицкого района.

Челябинская, Курганская и Тюменская области

Распространение. В целях решения вопроса о возможности инвазирования жителей населенных пунктов Уральского региона не только 0. felineus, но и трематодами рода Metorchis, нами было проведено выборочное обследование с использованием копроовоскопических и серологических методов жителей

населенных пунктов Челябинской и Курганской областей, расположенных на р. Теча и Исеть, а также жителей поселков Тюменской области, расположенных на р. Тобол. Показатель пораженности описторхидами, по данным выборочного копроовоскопического обследования, у жителей поселков Тюменской области оказался достоверно выше, по сравнению с аналогичным показателем у жителей населенных пунктов Челябинской и Курганской областей (37,3±4,2% против 18,6±3,4% при Р<0,01)

Показатель пораженности описторхами, по результатам иммуноферментного анализа у жителей обследованных нами поселков Тюменской области также был существенно выше такового у жителей населенных пунктов, расположенных на р. Теча и Исеть (36,6±4,1 % против 14,7±3,1% при Р<0,01). Более того, число лиц, серопозитивных в отношении меторхозного антигена, у жителей поселков, расположенных на р. Тобол, было достоверно меньше такового среди жителей населенных пунктов Челябинской и Курганской областей (8,9±2,4% против 12,412,9% при Р<0,01). Среди жителей обследованных нами населенных пунктов Челябинской и Курганской областей число лиц, имевших моноинвазию описторхов, моноинвазию меторхов и микст-инвазию этих гельминтов, было приблизительно одинаково. В то же время, среди жителей поселков Тюменской области число людей, имевших моноинвазию описторхов, оказалось значительно выше, по сравнению с числом жителей, имевших микст-инвазию описторхов и меторхов или моноинвазию меторхов (28,4±3,9% против 8,2±2,3% или 0,74±0,74% при Р<0,01 в обоих случаях).

Таким образом, полученные данные могут свидетельствовать об увеличении среди обследованных нами жителей населенных пунктов, расположенных на р. Теча и Исеть, числа лиц, имевших микст-инвазию описторхов и меторхов или моноинвазию меторхов, по сравнению с аналогичными показателями у жителей поселков, расположенных на р, Тобол.

Биоаккумуляция химических элементов С помощью метода ИНАА было установлено, что у больных описторхидозами, по сравнению со здоровыми людьми, из обследованных нами населенных пунктов Челябинской, Курганской и Тюменской областей наиболее часто встречается существенное повышение содержания в цельной крови таких МЭ как хром, бром, рубидий, церий, цинк и стронций

У больных с микст-инвазией описторхов и меторхов или с моноинвазией описторхов, по сравнению со здоровыми людьми, из населенных пунктов Челябинской и Курганской областей, расположенных вблизи р. Исеть, было установлено достоверное повышение содержания хрома, брома, рубидия, церия, цинка и стронция в цельной крови (при Р<0,01 или Р<0,05). У больных с микст-инвазией описторхов и меторхов, проживающих вблизи р. Исеть, содержание в крови вышеперечисленных МЭ оказалось существенно выше, чем у больных с моноинвазией описторхов (при Р<0,01 или Р<0,05). Вместе с тем, у обследованных нами больных с микст-инвазией описторхов и меторхов или с моноинвазией описторхов, проживающих в населенных пунктах Тюменской области, которые расположены вблизи р. Тобол, также было обнаружено повышение содержания в крови, по сравнению со здоровыми людьми, таких МЭ как хром, бром, рубидий и цинк (при Р<0,01 или Р<0,05). Более того, в крови у этих больных с микст-инвазией описторхов и меторхов, по сравнению с больными с моноинвазией описторхов, отмечалось существенное увеличение содержания хрома, брома, рубидия и цинка (при Р<0,01 или Р<0,05). Вместе с тем, в крови больных с микст-инвазией описторхов и меторхов или/и моноинвазией описторхов, проживающих в Челябинской и Курганской областях, по сравнению с аналогичными группами больных из Тюменской области, было установлено значительное повышение содержания таких МЭ как хром, бром, церий, цинк и стронций.

Таким образом, у больных описторхидозами, проживающих в населенных пунктах Челябинской и Курганской областей, расположенных вблизи р. Исеть, и в поселках Тюменской области, расположенных на р. Тобол, были установлены существенные различия содержания в крови ряда токсичных, условно-эссенциальных и эссенциальных МЭ.

Цитогенетическая патология У больных с микст-инвазией описторхов и меторхов и с моноинвазией описторхов, проживающих в населенных пунктах Челябинской и Курганской областей вблизи р. Исеть и Тобол, по сравнению со здоровыми людьми, было установлено значительное повышение частоты лимфоцитов со структурными аберрациями хромосом и с измененным числом хромосом, а также уровня эритроцитов с микроядрами (при Р<0,01). Кроме того, у больных, проживающих в вблизи р Исеть и Тобол, в группах с микст-инвазией описторхов и меторхов, отмечалось достоверное увеличение этих показателей, по сравнению с группами, имевшими моноинвазию описторхов (при Р<0,01 или Р<0,05).

Более того, у больных с микст-инвазией описторхов и меторхов или/и с моноинвазией описторхов, проживавших вблизи р. Исеть, было установлено существенное увеличение частоты лимфоцитов со структурными аберрациями хромосом и с измененным числом хромосом, а также уровня эритроцитов с микроядрами, по сравнению с аналогичными группами больных из Тюменской области (при Р<0,01 или Р<0,05). Среди аберраций с измененным числом хромосом у больных с микст- и моноинвазией, проживавших вблизи р. Исеть, по сравнению с аналогичными группами больных из Тюменской области, отмечалось достоверное повышение числа полиплоидных клеток (при Р<0,01), а также количества гиперплоидных лимфоцитов (при Р<0,01). Среди структурных аберраций хромосом у больных с микст- и моноинвазией, проживавших вблизи р. Исеть, было обнаружено значительное увеличение числа хромосом с нарушениями хромосомного типа, по сравнению с аналогичными группами больных, проживавших вблизи р. Тобол (при Р<0,05). Кроме того, у больных с микст-инвазией описторхов и меторхов отмечались аналогичные достоверные отличия числа хромосом с хроматидными аберрациями между этими же группами больных, проживавших вблизи р. Исеть и Тобол (при Р<0,05). Более того, у больных из населенных пунктов, расположенных вблизи р. Исеть, нами были установлены прямые корреляционные зависимости между содержанием хрома в крови и числом хромосом с хроматидными нарушениями (Я=+0,95при Р<0,01), а также между содержанием стронция и числом хромосом с аберрациями хромосомного типа (г=+0,80 при Р<0,01).

Таким образом, наиболее высокие показатели пораженности меторхами, включая моноинвазию этих гельминтов, были зарегистрированы у обследованных нами людей, проживающих вблизи р. Томь в Томской области, на р Алей в Алтайском крае, а также вблизи р. Теча и Исеть в Уральском регионе. По данным Р.Г. Фаттахова (1996), в Обь-Иртышском речном бассейне наблюдается увеличение численности О. felineus в паразитофауне рыб в направлении с юга на север, а представителей рода Metorchis, наоборот, - с севера на юг. Преобладание инвазии 0. felineus в северных районах у людей, в частности в обследованных нами населенных пунктах Тюменской области, нашло свое подтверждение и в наших данных Известно, что на заражение тем или иным видом описторхид человека и других окончательных хозяев влияет большое число факторов В частности, это может быть обусловлено различной экстенсивностью и интенсивностью инвазии описторхами и меторхами первых и вторых промежуточных хозяев в местных водоемах, что, в свою очередь, зависит от устойчивости самих личинок паразитов, а также моллюсков и рыбы к загрязнению окружающей среды, изменению температурных условий и гидрологического режима рек (Фаттахов Р.Г., 1996) Все эти факторы обусловливают конкуренцию между видами гельминтов на уровне промежуточных и дополнительных хозяев Кроме того, на уровне окончательного хозяина в природном очаге между меторхами и описторхами существуют хотя и слабые, но антагонистические отношения (Фаттахов Р.Г., 1996). Поэтому различия в показателях пораженности описторхами и меторхами населения различных регионов могут быть обусловлены различной восприимчивостью людей к этим гельминтам.

выводы

1. У населения, проживающего на территории Обь-Иртышского речного бассейна, наряду с описторхозной инвазией Opisthorchis felineus (Rivolta, 1884) регистрируется заболевание, вызванное систематически близким видом семейства Opisthorchidae - Metorchis bilis (Braun, 1890), и микст-инвазия этих трематод. Наиболее высокие показатели пораженности меторхами, по данным серологического исследования, установлены у жителей населенных пунктов, расположенных вблизи р. Томь в Томской области, р. Исеть в Курганской области и р. Алей в Алтайском крае.

2. Мариты меторхов (М. bills), в отличие от описторхов (0. felineus), способны паразитировать в мелких внутрипеченочных желчных протоках, в связи с чем микст-инвазия, по сравнению с моноинвазиями этих гельминтов, вызывает наиболее значительное поражение гепатобилиарной системы

3. При описторхозно-меторхозных микст- и моноинвазиях регистрируется повышенное накопление организме больного и в маритах гельминтов токсичных микроэлементов, вносящих существенный вклад в патогенез заболевания.

4. Особо высокий, значительно превышающий региональную норму, регистрируемую у здоровых людей, уровень аккумуляции токсичных микроэлементов в организме отмечается при микст-инвазии описторхов и меторхов.

5. Микст- и моноинвазии описторхов и меторхов сопровождаются возрастанием числа клеток со структурными аберрациями хромосом, гипер- и полиплоидией в периферической крови. Наиболее высокий уровень цитогенетических нарушений отмечается в случае микст-инвазии, при этом разрывы хромосом локализуются преимущественно вблизи известных протоонкогенов и ломких участков хромосом 2,3,6,8 и 12.

6. Факторами кластогенеза, способными вызвать цитогенетические нарушения при описторхозно-меторхозной инвазии, являются повышенное накопление некоторых токсичных микроэлементов в организме (ртути и хрома), а также регистрируемая при этом заболевании реактивация латентной инфекции вируса Эпштейна-Барр.

7. Аккумуляция токсичных микроэлементов в организме больных с описторхозно-меторхозной микст-инвазией сопровождается развитием Т-клеточного иммунодефицита, повышением активности Т-хелперов типа 2, а также дисфункцией механизмов биоцидности нейтрофилов периферической крови.

8. Описторхозно-меторхозная микст-инвазия характеризуется высоким титром специфических антител к антигенам вируса Эпштейна-Барр в сыворотке периферической крови, что коррелирует со снижением числа нейтрофилов, Т-клеточных субпопуляций лимфоцитов и активацией продукции интерлейкина-10 мононуклеарными клетками периферической крови.

9. Повышенное содержание в периферической крови больных описторхидозами токсичных микроэлементов (ртути и хрома) способствует увеличению тяжести течения заболевания с развитием холецистогепатита, клинических признаков иммунодефицитного состояния, гастродуоденопатии, аллергического, астено-вегетативного, диспептического синдромов и нарушению функционального состояния щитовидной железы.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ МОНОГРАФИИиКНИГИ

1 Экогенетика описторхоза и персистенция вируса Эпштейна-Барр - Новосибирск Крокус, 2000 -268 с (Соавт В В Новицкий, А В Лепехин, Н Н Ильинских, С В Логвинов, И Н Ильинских)

2 Медицинская паразитология - Томск Печатная мануфактура, 2001 - 336с (Соавт Н Н Ильинских, А И Венгеровский, А.В Лепехин, В П Зуевский)

3 Эпидемиологическая генотоксикология тяжелых металлов и здоровье человека -Томск Издание СибГМУ, 2003-301 с (Соавт ЛМ Огородоаа, ПА Безруких, НН Шакиров, ИН Ильинских Н Н Ильинских)

4 Описторхозно-меторхозные инвазии в Сибири - Томск Издание СибГМУ 2004 - 308 с (Соавт

В В Новицкий, И Н Ильинских Н Н Ильинских)

СТАТЬИ

5 Micronucleus test of erythrocytes and lymphocytes in blood of the people living in the radiation pollution zone as a result of the accident at the Sibenan Chemical Plant on April 6, 1993 // Mutation Research -1996 -Vo! 361 -P 173-178 (Соавт AV Eremich, 11 Ivanchuk.NN llyinskikh)

6 Breakes of chromosomes in the region of oncogenes and circulation of Epstein-Barr virus among the local population that had been subjected to the effects of radiating deposits // Journal of the Balkan Union of Oncology-1996 -№1 -P 101-104 (Соавт NN llyinskikh, T M Isaeva, 11 Ivanchuk)

7 Chromosome fragility in the site of oncogenes in the population of the area polluted with radionuchdes due to the radiation accident at the Sibenan chemical plant // Journal of the Balkan Union of Oncology -1997 -Vol 2 №1 -P 47-51 (Соавт NN llymskikh, 11 Ivanchuk, LA Kolomiyets)

8 Mutagenic and carcinogenic properties of one of the trematodes Opistorchis felineus II Journal of the Balkan Union of Oncology -1997 -Vol 2, №4-P 367-372 (Соавт SV Logvinov NS Rodicheva A VLepekhin,NN llyinskikh)

9 Micronucleus test of erythrocytes and lymphocytes in blood of the Altai region residents living near the SemipalatinskAtomic Proving Ground //Mutation Research -1997 -Vol 392 -P 223-228 (Соавт AV Eremich, 11 Ivanchuk, N N llyinskikh)

10 Estimation of the mutagenic potential of the trematode Opistorchis felmeus in experimentally infected guinea pigs//Parasitology Research -1998 -Vol 84 №7 -P 570-572 (Соавт AV Lepyekhin SV Logvinov, N N llymskikh)

11 Frequencies of Micronucleated Lymphocytes and Epstein-Barr Virus Contamination in Altai Region Residents Living Near the Semipalatinsk Atomic Testing Ground // Environmental and Molecular Mutagenesis -1998 -Vol 31, №1 -P 11-17 (Соавт NN llyinskikh, T M Isaeva II Ivanchuk, E A Rogozin)

12 Использование микроядерного теста для оценки состояния цитогенетического аппарата у людей, проживающих в зоне влияния Сибирского химического комбината // Радиационная биология и радиоэкология - 1998 -Т 38, №2 -С 164-170 (Соавт ИИ Иванчук НН Ильинских ЕА Рогозин)

13 Micronucleated erythrocytes frequency and radioces um bioconcentration in pikes (Esox lucius) caught in the Tom River near the nuclear facilities of the Sibenan Chemical Complex (Tomsk-7) // Mutation Research -1998 -Vol 421 - P 197-203 (Соавт NN llymskikh, IN llymskikh)

14 Роль курения в цитогенетических последствиях дегельминтизации билтрицидом у больных хроническим описторхозом //Депонировано ВИНИТИ -1999 - №13829

15 Biodosimetry results obtained by various cytogenetic methods electron spin resonance spectrometry among inhabitants of a radionuclide contaminated area around the Sibenan Chemical Plant (Tomsk-7) //Mutagenesis -1999 - Vol 14, №5 - P473-478 (Соавт NN llyinskikh, IN llyinskikh, VA Porovskiy.AT Natarajan, II Suskov.LN Smirenniy)

16 Chromosome breakage at sites of oncogenes in a population accidentally exposed to radioactive chemical pollution//Mutagenesis -1999 - Vol 14, №1 - P 83-86 (Соавт NN llyinskikh IN llyinskikh)

17 Micronucleated erythrocytes and radionuclide activity in persons living in a radiation contaminated area near the Mayak nuclear facility //Journal of Human Ecology - 1999 -Vol 10, № 4- P 237-244 (Соавт NN llyinskikh, IN llyinskikh, В V Smimov)

18 Using vanous biomarkers for the estimation of the situation after an accident at Sibenan Chemical Plant //In book Biomarkers A pragmatic basis for remediation of severe pollution in Eastern Europe/Ed D В Peakall -Amsterdam Kluwer Academic Publishers, 1999 -P 101-110 (Соавт AT Natarajan, II Suskov, S N Kolyubaeva, 11 Danilenko, L N Smirenniy, A Yu Yurkin)

19 Genetic and oncogenic consequences of chemical and radiation pollution of the Kuzbass and Altai regions // In book Biomarkers A pragmatic basis for remediation of severe pollution in Eastern Europe /DB Peakall - Amsterdam Kluwer Academic Publishers, 1999 - P 91-99 (Соавт IN llyinskikh)

20 Assessment of the relationship of chronic opisthorchiasis to Epstein-Barr virus infection as well as some cytogenetical and immunological parameters in two comparable Siberian regions // European Journal of Epidemiology -2000 -Vol 16 -P 993-1002 (Соавт VV Novitskiy, LN Urazova, TM Isayeva, N N llyinskikh, IN llyinskikh)

21 Monitoring of radiation-exposed people close to Mayak nuclear facility in the Chelyabinsk region using different biodosmetnc methods //Environmental Monitoring and Assessment - 2000 - Vol 61 - P 345349 (Соавт N N llyinskikh, IN llymsk'kh, N N Shakirov, В V Smimov)

22 Роль ассоциации марит Opisthorchis felineus с вирусом Эпштейна-Барр в цитогенетических последствиях описторхозной инвазии//Паразитология - 2000 - Т34, №5 - С 396-401 (Соавт НН Ильинских)

23 Биологические факторы мутагенеза //Вестник СГМУ - 2000 - №1 -С 19-27 (Соавт ЕА Рогозин Б В Шилов, Н Н Ильинских)

24 Цитогенетические нарушения в лимфоцитах крови больных хроническим описторхозом, сопровождающимся персистенцией вируса Эпштейна-Барр// Медицинская паразитология и паразитарные болезни - 2001 - №2 - С 3-7 (Соавт А В Лепехин, С В Рыжов, И Н Ильинских, НН Ильинских)

25 Цитогенетические изменения у людей, инвазированных Opisthorchis felmeus, проживающих в зоне влияния Сибирского химического комбината // Бюллетень ВСНЦ СО РАМН- 2001 - №4 -С 29-31 (Соавт И Н Ильинских, Н Н Ильинских)

26 Роль некоторых тяжелых металлов в цитогенетических последствиях хронического описторхоза //Бюллетень ВСНЦ СО РАМН- 2002- Т2, №4-С 63-65 (Соавт В В Новицкий, НС Родичева, А Г Боков, С Р Будков, Ю В Киселева, Л Э Ерендеева)

27 Цитогенетический мониторинг жителей различных регионов Сибири в связи с описторхозной инвазией и персистенцией вируса Эпштейна-Барр // Бюллетень ВСНЦ СО РАМН- 2002 - Т 2, №4 - С 65-67 (Соавт Н Н Ильинских)

28 Актуальные вопросы изучения описторхоза в Сибири // Бюллетень сибирской медицины - 2002 -

Т1, №1 -С 63-69

29 Патологоанатомические изменения печени при описторхидозных инвазиях// Актуальные проблемы медицинской биологии Сб научных трудов - Томск Издание СибГМУ, 2002 -С 135137

30 Содержание химических элементов в крови человека как индикатор состояния окружающей среды и их влияние на здоровье //Актуальные проблемы медицины и биологии Сб научных трудов -Томск Издание СибГМУ, 2003-Вып 2 -С 142-145 (Соавт НВ Барановская НН Ильинских, Е В Трущенко)

31 31 Влияние геохимических особенностей региона на иммунный и гормональный статус больных описторхозом //Актуальные проблемы медицины и биологии Сб научных трудов - Томск Издание СибГМУ, 2003 -Вып 2-С 230-240

32 Особенности клинической картины и результаты инструментально-лабораторного обследования больных с описторхозно-меторхозной инвазией // Естествознание и гуманизм Сб научных трудов -Томск Издание СибГМУ, 2004 -Т1 , №3 - С 88-91

ТЕЗИСЫ

33 Fragile sites of chromosomes In the field of oncogenes and circulation of a virus of Epstein-Barr among the local population subjected to effect of radiating deposits // The 2nd International Congress on Lung Cancer, 9-13 November 1996 - Crete, Greece, 1996 -P 59 (Соавт NN llyinskikh, AVEremich К Chizmalidi, 11 Ivanchuk)

34 Mechanisms of genome instability in infection with Opistorchis felineus II Mutation Detectioin 97 4th International workshop, 29 May - 2 June 1997 - Brno Czech Republic, 1997 - P 22 (Соавт AV Lepyekhin)

35 Breaks of chromosome in the field of oncogenes and circulation of a virus of Epstem-Barr among the local population subjected to effect of radiating deposits //The 14th Asia Pacific Cancer Conference The 4th Hong Kong International Cancer Congress, 16-19 November 1997 - Hong Kong, 1997 - P 34 (Соавт ТМ Isaeva, A V Lepyekhm)

36 Specific Chromosome aberrations among opisthorchiasis patients living within a radiation contaminated area around the Sibenan Chemical Complex (Tomsk-7)// The American Academy of Allergy, Asthma and Immunology the American Association of Immunologists and the Clinical Immunology Society (CIS) Joint Meeting, 21-26 February 1997 - San Francisco, CA, 1997 - P 57

37 Biotransformation of Mutagensin Liver Affected by Helminth, Opistorchis felmeus and Oncogenesis in Residents of Siberia The Society of Environmental Toxicology and Chemistry (SETAC)// 18th Annual Meeting 16-20 November 1997- San Francisco, CA -1997 -P 68

38 Mutagenic and oncogenic potency of helminth of Opistorchis felineusll The International Symposium on Environmental Epidemiology in Central and Eastern Europe Critical Issues for Improving Health September 24- 271997 - Smolenice, Slovak Republic, 1997 - P 132

39 Mutagenic potential of glandular tissue denvatives of Opistorchis felmeus tested in experimentally treated guinea pigs // The International Symposium on Environmental Epidemiology in Central and Eastern Europe Cntical Issues for Improving Health, September 24-27 1997 - Smolemce, Slovak Republic, 1997 -P 131 (Соавт A V Lepekhin)

40 Цитогенетическая нестабильность у людей с высоким уровнем опухолевых маркеров проживающих в районах Сибири с повышенной пораженностью населения гельминтами Opistorchis felmeus II 2-ая Международная научно-практическая конференция "Безопасность жизнедеятельности в Сибири и на крайнем Севере" - Тюмень 1997 - С 58 (Соавт А В Лепехин, Т Н Васильева)

41 Генетические последсвия описторхозной инвазии на организм человека и экспериментальных животных // 2-ая Международная научно-практическая конференция 'Безопасность

жизнедеятельности в Сибири и на крайнем Севере" - Тюмень, 1997 - С 59 (Соавт А В Лепехин)

42 Анализ иммунологических и цитогенетических изменений и проблема циркуляции вируса Эпштейн-Барр у жителей населенных пунктов подвергшихся радиационному загрязнению после аварии на Сибирском химическом комбинате в апреле 1993 года //13-я Российская научная конференция "Факторы клеточного и гуморального иммунитета при различных физиологических и патологических состояниях" -Челябинск, 1997 -С 59 (Соавт ТМ Исаева)

43 Механизмы цитогенетической нестабильности при инвазии гельминтами Opistorchis felineus 13-

я Российская научная конференция // 13-я Российская научная конференция "Факторы клеточного и гуморального иммунитета при различных физиологических и патологических состояниях" -Челябинск, 1997-С 60 (Соавт А В Лепехин)

44 Патоморфологические изменения ткани печени и внутрипеченочных протоков при описторхозной инвазии у человека //Материалы юбилейной конференции "Медико-биологические аспекты нейро гуморальной регуляции", посвященной 35-летию ЦНИЛ - Томск, 1997- С 54-55 (Соавт С В Логвинов, Н С Родичева, С Р Будков)

45 Анализ мутагенной активности эндотоксинов, выделенных из марит описторхов //Материалы

юбилейной конференции 'Медико-биологические аспекты нейро-гуморальной регуляции", посвященной 35-летию ЦНИЛ -Томск, 1997-С 285-286 (Соавт С В Логвинов, НС Родичева, А В Лепехин)

46 Изменения в микросомах печени и цитогенетическая нестабильность при описторхозной инвазии // Материалы юбилейной конференции "Медико-биологические аспекты нейро-гуморальной регуляции", посвященной 35-летию ЦНИЛ -Томск, 1997-С 287-288 (Соавт ДП Кудрявцев)

47 Цитогенетические последствия лечения больных описторхозом антигельминтным препаратом -празиквантелем (бильтрицидом) // Материалы юбилейной конференции "Медико-биологические аспекты нейро-гуморальной регуляции", посвященной 35-летию ЦНИЛ - Томск, 1997 - С 288289 (Соавт Н В Севостьянова, И А. Цветкова)

48 Anti-DNA antibodies and chromosome aberrations in patients with Opistorchis felineus infection// Conference on Genetic aspects of autoimmune diseases, 7-10 May 1998 - Noordwijkerhout The Netherlands, 1998 -P 56

49 Biotransformation of mutagens in liver affected by helminth, Opistorchis felineus and oncogenesis in . residents of Siberia//The 15th Annual Meeting of the European Association for Cancer Research

(EACR), 15-19 August, 1998 - Stockholm, Sweden 1998 -P 58

50 Opistorchis felineus as a promoter of oncogenesis and a proof of the role of Praziquntel in decreasing the risk of cancer development // The 10th NCI EORTC Symposium on New Drugs in Cancer Therapy, 16-19June 1898 -Amsterdam, 1998 -P 108 (Соавт NN llyinskikh)

51 Цитогенетическая нестабильность в области онкогенов и циркуляция вируса Эпштейна-Барр у больных описторхидозами проживающих вблизи от Семипалатинского полигона и атомных заводов Сибирского химического комбината //Материалы международной научно практической конференции 'Радиционная безопасность и социально экологические проблемы Казахстана" 10-14 ноября 1997г - Казахстан, Караганда, Алматы-Караганда 1998 - С 176-179 (Соавт ТМ Исаева, Н Н Ильинских, Е А Рогозин, А Ю Юркин)

52 Влияние инвазии Opisthorchis felineus на генетический аппарат и цитотоксическую активность лимфоидных клеток периферической крови человека (Соавт А В Лепехин) // Тезисы докладов Всероссийской научно-практической конференции "Экологозависимые состояния (биохимия фармакология, клиника)" -Чита, 1998 -С 10

53. Состояние систем, ответственных за генетический гомеостаз организма, у больных острым описторхозом// Материалы межрегиональной научно-практической конференции "Медицинские и экологические и проблемы Северных районов Сибири", 28-29 мая 1998 г. - Томск - Стрежевой, 1998.-С. 43.

54. Генетические изменения Т-лимфоцитов при сочетанном течении клещевого энцефалита и описторхозной инвазии у человека // Актуальные проблемы природноочаговых инфекций. Сборник материалов 2-ой республиканской научно-практической конференции, посвященной 75-летию инфекционной службы Удмуртии, 8-9 апреля 1998. - Ижевск, 1998. - С. 223. (Соавт. Н.Н. Ильинских, А.В. Лепехин)

55. Ломкость хромосом в области онкогенов при описторхозе и раке желудка. Сибирский журнал гастроэнтерологии и гепатологии // Материалы 6-й региональной научно-практической конференции "Актуальные вопросы гастроэнтерологии и особенности заболеваний органов пищеварения в Сибирском регионе", сентябрь 1998 г. • Томск, 1998. - Т. 1, №6-7. - С. 343. (Соавт. А.В. Лепехин)

56. Нестабильность генома в области онкогенов при описторхозе и раке желудка // Конференция (вузовская), посвященная 50-летию кафедры детских инфекций СибГМУ. - Томск, 1998. - С.49. (Соавт. А.В. Лепехин)

57. Роль курения в мутагенных последствиях лечения празиквантелем больных описторхозом // Научный Вестник Тюменской медицинской академии. Материалы международного симпозиума "Медицина и охрана здоровья'99". -1999. - №3-4.- С.37. (Соавт. Л.Э. Ерендеева, А Г. Боков)

58. Роль вируса Эпштейна-Барр в цитогенетических изменениях, наблюдаемых при описторхозе // Научный Вестник Тюменской медицинской академии. Материалы международного симпозиума "Медицина и охрана здоровья'99". -1999. - №3-4. - С.38.

59. Роль микросомальных ферментов печени в генетических нарушениях при описторхозной инвазии. // Научный Вестник Тюменской медицинской академии Материалы международного симпозиума "Медицина и охрана здоровья'99". -1999. - №3-4. - С.42. (Соавт. А.В. Лепехин, Д П. Кудрявцев, Н.Н. Ильинских, Н.С. Родичева, СР. Будков)

60. Цитогенетические последствия описторхозной инвазии в связи с персистенцией и реактивацией Эпштейн-Барр инфекции// Сибирский журнал гастроэнтерологии и гепатологии. Материалы 7-й региональной научно-практической конференции "Актуальные вопросы гастроэнтерологии и особенности заболеваний органов пищеварения в Сибирском регионе". -1999 - №8-9. - С. 111112.

61. Оценка уровня лимфоцитов с микроядрами и инфицированности вирусом Эпштейна-Барр у жителей Томской области, проживающих на радиоактивно загрязненной территории // Сибирский журнал гастроэнтерологии и гепатологии. Материалы 7-й региональной научно-практической конференции "Актуальные вопросы гастроэнтерологии и особенности заболеваний органов пищеварения в Сибирском регионе. -1999 - С.281. (Соавт. В.В. Новицкий, А.Ю. Юркин, И.Н. Ильинских, Н.Н. Ильинских)

62. Гистологические изменения в печени морских свинок при экспериментальном заражении ОряШсШэ ^е/1пеиз//Актуальные вопросы экспериментальной морфологии. Сб. научных трудов. - Томск, 1999. - С.106. (Соавт. С.В.Логвинов, НН. Ильинских, Н.С Родичева, Е.С Евдокимова, Б.В. Шилов)

63. Ультраструктурный анализ изменений гепатоцитов морских свинок, экспериментально зараженных метацеркариями ОряШсШэ 1вИпвиз II Актуальные вопросы экспериментальной морфологии. Сб. научных трудов. - Томск, 1999. - С.107. (Соавт. С.В. Логвинов, Н.Н. Ильинских, Н.С. Родичева, Е.С. Евдокимова, Б.В. Шилов)

64 Электронномикроскопический и гистологический анализ печени человека и морских свинок, пораженных описторхами //Научный Вестник Тюменской медицинской академии Материалы международного симпозиума "Медицина и охрана здоровья - 2000" - №4 - 2000 - С105 (Соавт С В Логвинов, Д П Кудрявцев, Н С Родичева, С Р Будков, Л Э Ерендеева)

65 Цитогенетические последствия описторхозной инвазии при ассоциации марит Opistorchis felineus с вирусом Эпштейна-Барр // Первая межрегиональная научно-практическая конференция, 22-25 мая, Томск Сб материалов - Томск Графика, 2000 - С 44-45 (Соавт Н В Севостьянова, А Ю Юркин, А В Лепехин, Н Н Ильинских)

66 Загрязнение реки Томь тяжелыми металлами и изменение численности и инвазированности описторхами моллюсков Bithynia inflate II Региональные проблемы экологии и природопользования "Материалы городской конференции молодых ученых и специалистов" -Томск,2000 -С 101-102 (Соавт ИН Ильинских,АЮ Юркин,НН Ильинских)

67 Содержание тяжелых металлов и уровень цитогенетически измененных клеток в организме у людей, проживающих в бассейне рек Теча-Исеть-Пышма-Тобол // Региональные проблемы экологии и природопользования "Материалы городской конференции молодых ученых и специалистов" - Томск, 2000 -С 102-103 (Соавт В Бурхарт, НН Шакиров, ЕН Ильинских, И Н Ильинских)

68 Гетероморфизм ядер и цитогенетические нарушения в бинуклеарных Т-лимфоцитах человека под воздействием ксенобиотиков //Региональные проблемы экологии и природопользования 'Материалы городской конференции молодых ученых и специалистов"- Томск, 2000 - С103-105 (Соавт НН Ильинских, Б В Шилов, В В Казанский, В А Иванов)

69 Особенности клинического течения инфекционных заболеваний на фоне хронического описторхоза // Материалы 1-ой Международной юбилейной конференции, посвященной 110-летию со дня открытия проф К Н Виноградовым сибирской двуустки у человека, 2-5 апреля, 2001, г Томск-Томск Издание СибГМУ, 2001 -С 48-49 (Соавт А В Лепехин, НС Бужак, Л Н Одинцова, Л В Лукашова, Н В Жарова, Е В Портнягина, Г Ф Рогозенко, В П Киселев, О Н Бужак)

70 Корреляционный анализ результатов морфометрии сегментоядерных нейтрофилов крови и показателей лабораторно-клинического анализа у больных хроническим описторхозом // Материалы 1-ой Международной юбилейной конференции, посвященной 110-летию со дня открытия проф КН Виноградовым сибирской двуустки у человека, 2-5 апреля, 2001, г Томск-Томск Издание СибГМУ - 2001 - С 75 (Соавт И А Сальникова, С В Сальников, Б В Шилов)

71 Использование компьютерной топографии для оценки реакции ППН у больных хроническим описторхозом // Материалы 1-ой Международной юбилейной конференции, посвященной 110-летию со дня открытия проф К Н Виноградовым сибирской двуустки у человека, 2-5 апреля, 2001, г Томск-Томск Издание СибГМУ - 2001 -С 87 (Соавт И А Сальникова, С В Сальников)

72 Изучение макрофагальной активности у золотистых хомяков на фоне описторхозной инвазии // Материалы 1-ой Международной юбилейной конференции, посвященной 100 летию со дня открытия проф КН Виноградовым сибирской двуустки у человека, 2-5 апреля, 2001, г Томск -Томск Издание СибГМУ-2001 -С 89 (Соавт ДП Кудрявцев Б В Шилов, А Ю Юркин)

73 Цитогенетические и иммунологические показатели у людей и экспериментальных животных, инвазированных описторхидами // Мониторинг распространения и предотвращения особо опасных болезней животных Материалы докладов научной конференции, посвященной 10-летию Независимой Республики Узбекистан и 75-летию со дня образования УЗНИИВ /М К Бутаев - Республика Узбекистан, Самарканд 2001 - С 68 (Соавт И Н Ильинских, Н Н Ильинских)

74 Зависимость между цитогенетическими нарушениями и реактивацией хронической Эпштейна-Барр инфекции при описторхознои инвазии //Тезисы докладов 2-ой научной конференции с международным участием "Проблемы инфекционной патологии в регионах Сибири, Дальнего Востока и Крайнего Севера", 29-31 мая, 2002, г Новосибирск- Новосибирск ЦЭРИС, 2002-С121

75 Возможная роль оксида азота в мутагенезе и канцерогенезе у животных, зараженных трематодой Optsthorchis felineus II Труды III Международной научно практической конференции "Эпидемиология, диагностика, лечение и профилактика паразитарных заболеваний человека" /ОЯ Бекеш- Витебск, Белоруссия Изд-воВГМУ,2002-С 75

76 Relationship between mutagenic and carcinogenic effects of a trematode Optsthorchis felmeus and heavy metal pollution of the environment // Труды III Международной научно-практической конференции "Эпидемиология, диагностика, лечение и профилактика паразитарных заболеваний человека"/ О Я Бекеш - Витебск, Белоруссия Изд-во ВГМУ, 2002 - С 76 (Соавт VV Novttsky, N N llyinskikh. AV Lepyekhm)

77. Связь между хроническим описторхозом и Эпштейна-Барр вирусной инфекцией в экологически неблагополучных регионах Сибири // Материалы 1-ой Всероссийской научной конференции с международным участием "Влияние загрязнения окружающей среды на здоровье человека", 911 декабря, 2002, г Новосибирск / Ю П Гичев - Новосибирск, 2002 - С 82 (Соавт ВВ Новицкий)

78 Связь между мутагенными эффектами трематоды Opisthorchts fetmeus и загрязнением окружающей среды некоторыми тяжелыми металлами // Сибирский журнал гасгроэгерологии и гематологии Материалы 10-ой региональной научна практической конференции- 2002- №14 15-С 168 (Соавт НС Родичева.АГ Боков,СР Будков,ЮВ Киселева,ЛЭ Ерендеева)

79 Мутагенные эффекты оксида азота у экспериментальных животных, зараженных трематодой Opisthorchis felneus //Сибирский журнал гастроэтерологии и тератологии Материалы 10-ой региональной научно-практической конференции-2002-№14-15 -С 169 (Соавт МС Юсубов Ю Ю Кулманакова)

80. Зависимость между цитогенетическими нарушениями и реаюивацией хронической Эпштейн-Барр вирусной инфекции при описторхознои инвазии // Актуальные проблемы медицинской биологии Сб научных трудов-Томск Издание СибГМУ, 2002 - С 76

81 Цитоморфологические изменения в печени при инвазии гельминтами Opisthorchis felmeus и Metorchis bilis и персистенция вируса Эпштейна-Барр // Приложение к научно-практическому журналу "Здравоохранение Дальнего Востока" Материалы 3-ей региональной научно-практической конференции с международным участием, посвященной памяти заслуженного деятеля науки РФ профессора Л И Геллера "Третьи Геллеровские чтения", 30-31 октября 2002, г Хабаровск - 2002-№1 -С 115-113

82. Частота цитогенетически измененных Т-лимфоцитов в периферической крови коренных и пришлых жителей Тюменской области в связи с хронической инфекцией Opisthoichis felineas //Актуальные проблемы медицины и биологии Сб научных трудов-Томск Издание СибГМУ, ?003 - Вып 2 - С 54 (Соавт И Н Ильинских В Е Казанский)

83 Персистенция вируса Эпитейна-Барр и апоптоз лимфоцитов крови человека //Актуальные проблемы медицины и биологии Сб научных трудов -Томск Издание СибГМУ, 2003 - Вып 2 - С 58 (Соавт И И Иванчук, Н Н Ильинских, В Е Казанский)

84 Цитогенетическая нестабильность и онкочаркеры у жителей населенных пунктов расположенных вблизи от Сибирского Химического Комбината//Актуальные проблемы медицины и биологии Сб научных трудов-Томск Издание СибГМУ, 2003 - Вып 2- С 64 (Соавт ИН Ильинских, МС Романова, О Н Олонцова, В Е Казанский)

85. Загрязнение реки Томь некоторыми тяжелыми металлами и радионуклидами и мутагенные эффекты трематоды Opisthorchis felineus //Актуальные проблемы медицины и биологии. Сб. научных трудов.-Томск:Издание СибГМУ, 2003. - Вып.2. - С. 216. (Соавт. Н.С. Родичева, А.Г. Боков, СР. Будков, Ю.В. Киселева, Л.Э. Ерендеева)

86. Аномалии митоза и числа хромосом при воздействии инфекционных агентов //Актуальные проблемы биологии, медицины и экологии. Сб. научных трудов.- Томск: Издание СибГМУ, 2004.

- Вып. 3, №1-3.- С. 6-7. (Соавт. И.Н. Ильинских, В.В. Новицкий, Н.Н. Ильинских)

87. Загрязнение окружающей среды и проблема описторхоза в Западной Сибири //Актуальные проблемы биологии, медицины и экологии. Сб. научных трудов,- Томск: Издание СибГМУ, 2004.

- Вып. 3, №1-3. - С. 495-496. (Соавт. О.А Поддубная, Г.П. Островерхова, Э.И. Белобородова, Е.Г. Язиков, Н.Н. Ильинских)

88. Перспективы изучения зависимости абиотических факторов внешней среды при хроническом описторхозе //Актуальные проблемы биологии, медицины и экологии. Сб. научных трудов,-Томск: Издание СибГМУ, 2004. - Вып. 3, №1-3. - С. 496-498. (Соавт. О.А. Поддубная, Е.Г. Язиков, Г.П. Островерхова, Н.Н. Ильинских, Э.И. Белобородова)

89. Состояние иммунной системы при описторхидозных инвазиях //Естествознание и гуманизм. Сб. научных трудов - Томск: Издание СибГМУ, 2004. - Т. 1., №1. - С. 63-65. (Соавт. Н.Н. Ильинских, Н.Н. Плотникова, И.Н. Ильинских)

90. Лейкоцитарная формула и функциональное состояние нейтрофилов у больных с описторхозно-меторхозной инвазией // Естествознание и гуманизм. Сб. научных трудов - Томск: Издание СибГМУ, 2004. - Т. 1., №1. - С. 65-67.

91. Особенности распространения описторхозно-меторхозной инвазии в Сибири//Естествознание и гуманизм. Сб. научных трудов - Томск: Издание СибГМУ, 2004. - Т. 1., №1, - С. 74-75.

92. Содержание микроэлементов в организме человека и маритах гельминтов при описторхозно-меторхозных инвазиях //Естествознание и гуманизм. Сб. научных трудов - Томск: Издание СибГМУ, 2004.-Т. 1., N81.-0. 83.

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ антиоксидантная активность липидов вирускапсидный антиген интерлейкин

инструментальный нейтронно-активационный анализ интерферон-у липополисахарид малоновый диальдегид микроэлементы нитросиний тетразолий полимеразная цепная реакция ранний антиген

резерв реактивности нейтрофилов среднегеометрический титр антител суперинвазионная стадия описторхидозов фитогемагглютинин хроническая стадия описторхидозов циркулирующие иммунные комплексы (вирус) Эпштейна-Барр

АОАЛ ВКА ИЛ ИНАА ИФ-у ЛПС МДА МЭ НСТ ПЦР РА РРН СГТ СО ФГА ХО ЦИК ЭБ

Отпечатано в лаборатории оперативной полиграфии СГМУ Заказ № # Ти раж 100 экз

Актуальность проблемы. Заболевания человека и животных, вызванные трематодами семейства 0р1зЬ1югс111с1ае, имеют широкое распространение [153, 189]. Способность гельминта С^э^огсМэ £еИпеиз паразитировать у человека была впервые доказана в 1891 г. профессором Императорского Томского Университета К.Н. Виноградовым. Наиболее крупный природный очаг описторхоза связан с Обь-Иртышским речным бассейном в Западной Сибири [153]. Показано, что инвазия О. £еИпеиз вызывает значительные изменения в гепатобилиарной системе, предрасполагает к развитию панкреатита, язвенной болезни желудка и двенадцатиперстной кишки, а также способствует развитию холангиокарциномы, рака поджелудочной железы и желудка [5,15,25,171].

По данным многих авторов, при описторхозе отмечается подавление преимущественно клеточного звена иммунореактивности с развитием признаков иммуносупрессии [78, 79, 80, 156] . Кроме того, описторхозная инвазия сопровождается значительным увеличением числа Т-лимфоцитов с цитогенетическими нарушениями [71, 92, 156]. Поскольку описторхи не могут непосредственно воздействовать на генетический аппарат клеток, то возникает обоснованное предположение, что цитогенетические нарушения, наблюдаемые при описторхозной инвазии, обусловлены опосредованными механизмами. В литературе к настоящему времени имеются лишь разрозненные данные, касающиеся механизмов иммуносупрессии и мутагенеза при описторхозной инвазии [31, 90, 92, 156]. Известно, что в различных регионах Обь-Иртышского речного бассейна у больных людей имеются отличия в иммунном статусе и в клиническом течении заболевания [90] . Однако .причины этого до сих пор не были определены и освещены в литературе. Кроме того, считается, что развитие холангиокарциномы на фоне описторхозной инвазии возможно при условии воздействия дополнительных мутагенных и канцерогенных факторов, в частности - Ы-нитрозосоединений [31, 60, 357] . Показано, что у больных описторхозом, проживающих в промышленно развитых регионах, регистрируется повышенное накопление в организме ряда тяжелых металлов [7] . В то же время, известно, что многие реки, входящие в Обь-Иртышский бассейн, кроме нефтепродуктов и органических химических веществ, систематически подвергались загрязнению токсичными металлами [12, 50, 119, 139, 141]. Более того, было доказано присутствие ряда тяжелых металлов в повышенных концентрациях в мышечной ткани рыб, отловленных в реках Обского бассейна [132] . Поэтому не исключено, что иммуносупрессия, хромосомные нарушения в лимфоцитах периферической крови и своеобразные изменения в клинической картине заболевания у больных описторхозом, проживающих в промышленно развитых регионах, являются следствием комплексного воздействия гельминтной инвазии и ксенобиотиков.

Кроме того, имеются данные литературы согласно которым, описторхи могут образовывать ассоциации с некоторыми бактериями и вирусами (сальмонеллы, вирус простого герпеса), способными вызывать мутагенные эффекты [68, 97]. В связи с этим, большой интерес представляют сероэпидемиологические исследования, свидетельствующие о том, что у населения, проживающего на территории Обь-Иртышского речного бассейна, где распространена описторхозная инвазия, отмечается повышение циркуляции потенциально онкогенного вируса Эпштейна-Барр [33] . Известно, что реактивация латентной инфекции, вызванной вирусом Эпштейна-Барр, происходит на фоне таких паразитарных заболеваний как малярия и шистосомоз [1, 229] .

Р. Г. Фаттаховым [163], а также E.H. Сербиной и Н.И. Юрловой [14 7] на основании экологических наблюдений установлено, что у рыб семейства карповых, отловленных в реках Обь-Иртышского речного бассейна, нередко встречаются метацеркарии не только О. felineus (Rivolta, 1884), но и других представителей семейства Opisthorchidae, в частности - Metorchis bilis (Braun, 1890). По данным V.G. Kuznetsova et al. [387], К.П. Федорова с соавт. [118] и J.D. MacLean et al. [251] показано, что родственные виды М. bilis (синоним М. albidus) и М. conjunctus (синоним М. intermedius) способны вызывать заболевание людей -меторхоз. Более того, V.G. Kuznetsova et al. [387] и К.П. Федоровым с соавт. [118] с помощью серологических методов было обнаружено присутствие антител против М. bilis у более чем половины людей из числа обследованных больных -жителей Новосибирской области, госпитализированных с диагнозом "описторхоз". Поэтому не исключено, что различия в клинической картине и иммунном статусе у больных людей могут быть обусловлены различными этиологическими вариантами заболевания с инвазией описторхов или/и меторхов.

Цель и задачи исследования. Установить этиологию, особенности патогенеза, клинической картины и распространения описторхидозов у населения, проживающего в различных регионах Обь-Иртышского речного бассейна.

Для реализации этой цели были поставлены следующие задачи:

1. Установить закономерности распространения моно- и микст-инвазий, вызываемых у человека трематодами Opisthorchis felineus (Rivolta, 1884) и Metorchis bilis

Braun, 1890) , на территории Обь-Иртышского речного бассейна, в населенных пунктах Томской, Челябинской, Курганской, Тюменской областей и Алтайского края. 2.Определить особенности поражения гепатобилиарной системы у человека при описторхозно-меторхозных микст- и моноинвазиях.

3. Установить общие закономерности аккумуляции токсичных микроэлементов в организме больных при описторхозно-меторхозных микст- и моноинвазиях.

4. Выявить особенности цитогенетического статуса больных с микст- и моноинвазиями описторхов и меторхов с определением точной локализации аберраций по отдельным хромосомам и их длине.

5. Доказать кластогенную роль аккумуляции токсичных микроэлементов (ртути и хрома) и реактивации вируса Эпштейна-Барр при описторхозно-меторхозной микст-инвазии и описторхозной моноинвазии.

6. Выявить общие закономерности изменений иммунного статуса у больных с описторхозно-меторхозной микст-инвазией и описторхозной моноинвазией на фоне повышенной аккумуляции токсичных микроэлементов и персистенции вируса Эпштейна-Барр.

7. Определить основные особенности клинической картины у больных с описторхозно-меторхозной микст-инвазией и описторхозной моноинвазией, имеющих повышенное накопление токсичных микроэлементов в периферической крови.

Научная новизна работы. Впервые установлено, что у людей, проживающих в различных регионах Обь-Иртышского речного бассейна, наряду с описторхозной моноинвазией Opisthorchis felineus (Rivolta, 1884), регистрируются моноинвазия меторхов Metorchis bilis (Braun, 1890) и микст-инвазия этих гельминтов. Этот вывод был сделан на основании анализа результатов серологического исследования и дополнительно подтвержден обнаружением трематод Metorchis bilis (Braun,1890) при аутопсии. Вид гельминтов, выделенных из желчных протоков печени человека, был идентифицирован с использованием метода полимеразной цепной реакции. Показано, что мариты меторхов, в отличие от описторхов, способны паразитировать в мелких внутрипеченочных желчных протоках, в связи с чем микст-инвазия, по сравнению с моноинвазией, сопровождается более значительным поражением гепатобилиарной системы. Кроме того, по данным иммуноферментного анализа установлено, что пораженность описторхами и меторхами населения, проживающего вблизи отдельных рек Обь-Иртышского бассейна на территории Томской, Челябинской, Курганской, Тюменской областей и Алтайского края, имеет существенные различия. Преобладание пораженности людей описторхозно-меторхозной микст-инвазией или моноинвазией меторхов над моноинвазией описторхов зарегистрировано в населенных пунктах, расположенных вблизи р. Томь Томской области, на р. Теча и Исеть в Челябинской и Курганской областях, и на р. Алей в Алтайском крае.

Впервые с помощью метода инструментального нейтронно-активационного анализа показано, что в патогенезе описторхидозов особую роль играет повышенная аккумуляция некоторых микроэлементов в организме больных людей. У больных с описторхозно-меторхозной микст- и моноинвазиями, проживающих в различных регионах Западной Сибири, по сравнению со здоровыми людьми, зарегистрировано повышенное накопление в периферической крови различных токсичных микроэлементов. В частности, у больных описторхидозами, проживающих в г. Томске, установлена значительная аккумуляция хрома и ртути в периферической крови, ткани печени и маритах гельминтов (описторхов и меторхов), а также повышенная их экскреция с желчью. Особо высокие уровни содержания этих микроэлементов, превышающие региональную норму, регистрируемую у здоровых людей, наиболее часто встречаются у больных с описторхозно-меторхозной микст-инвазией.

Впервые проведено изучение особенностей клинической картины различных этиологических вариантов описторхидозов в зависимости от содержания ртути и хрома в крови. Установлено, что повышенное содержание ртути и хрома в периферической крови больных людей сопровождается увеличением тяжести течения заболевания и частоты встречаемости синдрома холецистогепатита, клинических признаков иммунодефицитного состояния, гастродуоденопатии, аллергического, диспептического синдромов и нарушения функционального состояния щитовидной железы.

Повышенная аккумуляция ртути и хрома в крови больных с описторхозно-меторхозной микст-инвазией оказалась ассоциирована с выраженным дисбалансом клеточных субпопуляций лимфоцитов: снижением числа Т-клеток (СБЗ+ зрелых Т-лимфоцитов, СБ4+ Т-хелперов и СБ8+ цитотоксических Т-лимфоцитов) и увеличением содержания В-лимфоцитов. Кроме того, у этих больных были зарегистрированы: гиперпродукция мононуклеарными лейкоцитами интерлейкина-4 и интерлейкина-10, подавление секреции интерферона-у и монооксида азота этими клетками, а также повышение уровней содержания иммуноглобулина Е, циркулирующих иммунных комплексов и числа эозинофильных гранулоцитов в периферической крови.

Повышенное содержание в крови ртути и хрома у больных с описторхозно-меторхозной микст-инвазией сопровождается также чрезмерно напряженным функционированием биоцидной системы нейтрофилов с тенденцией к срыву их резервных возможностей, о чем свидетельствовало подавление НСТ-теста, стимулированного бактериальным аллергеном, снижение резерва реактивности нейтрофилов и индекса завершенности фагоцитоза.

Впервые показано, что одним из факторов, способствующим увеличению уровня цитогенетических нарушений в лимфоцитах периферической крови у больных с описторхозно-меторхозными микст- и моноинвазиями, может быть повышенная аккумуляция в организме хрома и ртути, а также реактивация Эпштейн-Барр вирусной инфекции. Доказано, что при микст-инвазии описторхов и меторхов разрывы хромосом локализуются не случайно, а вблизи известных протоонкогенов и ломких участков хромосом 2,3,6,8 и 12.

По результатам серологического исследования впервые установлено, что описторхозно-меторхозная микст-инвазия, особенно в случае высокого содержания ртути и хрома в крови, сопровождается значительным увеличением титров антител к антигенам вируса Эпштейна-Барр. Более того, показано присутствие антигенов этого вируса в маритах описторхов и меторхов.

Теоретическое и практическое значение. В результате проведенных исследований показано, что у жителей различных регионов Западной Сибири регистрируется инвазия не только трематоды вида Opisthorchis felineus (Rivolta, 1884), но и родственного вида - Metorchis bilis (Braun, 1890), что обусловливает определенные отличия иммунного статуса, уровня цитогенетических нарушений в лимфоцитах периферической крови и особенности клинической картины при различных этиологических вариантах описторхозно-меторхозных инвазий. Поэтому при формулировке диагноза целесообразно выделение трех этиологических вариантов этого заболевания: моноинвазии описторхов, моноинвазии меторхов или микст-инвазии описторхов и меторхов.

Полученные в настоящем исследовании данные о роли аккумуляции некоторых микроэлементов в организме и персистенции вируса Эпштейна-Барр в механизмах биохимических, иммунологических и цитогенетических нарушений у больных с описторхозно-меторхозной инвазией вносят новые сведения в существующие представления о патогенезе описторхидозов человека и могут служить основой для разработки новых, патогенетически обоснованных подходов к терапии данного заболевания. Установлено, что у больных с описторхозно-меторхозными инвазиями следует учитывать ряд показателей, свидетельствующих о тяжести клинической картины заболевания: высокое содержание некоторых токсичных микроэлементов в крови и желчи пациента, повышенные титры антител к антигенам вируса Эпштейна-Барр, высокий уровень структурных нарушений хромосом в Т-лимфоцитах периферической крови, снижение числа Т-клеточных субпопуляций лимфоцитов.

Внедрение результатов работы в практику. Результаты исследования внедрены в учебный процесс и используются в обучении студентов и клинических ординаторов по теме "Гельминтозы" на кафедре инфекционных болезней и эпидемиологии Сибирского государственного медицинского университета, а также используются в обучении студентов в курсе "Медицинская паразитология" на кафедре биологии и генетики Сибирского государственного медицинского университета, на кафедре экологии антропогенных систем международного факультета сельского хозяйства и экологии Томского государственного университета в курсе "Экология человека", на кафедре морфологии медицинского факультета

Сургутского государственного университета в разделе "Патоморфология печени", на курсе биологии и экологии биологического факультета Сургутского государственного университета в курсе "Природно-очаговые инфекции", на кафедре биологии Новосибирской государственной медицинской академии в курсе "Паразитология", на кафедре медицинской и биологической физики Тюменской государственной медицинской академии в теме "Компьютерный цитоморфологический анализ", на кафедре экологии и генетики Тюменского государственного университета в разделе "Экология и мутагенез", на кафедре микробиологии, вирусологии и иммунологии Иркутского государственного медицинского университета в теме "Герпетические вирусные инфекции", на кафедре медицины Горно-Алтайского государственного университета в курсе "Инфекционные заболевания у человека". В ЦНИЛе Тюменской государственной медицинской академии внедрен метод диагностики меторхозной инвазии у человека, а в ЦНИЛе Сибирского государственного медицинского университета внедрен метод получения антигенов трематод.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Наряду с описторхозной инвазией Opisthorchis felineus (Rivolta, 1884) у населения, проживающего на территории Обь-Иртышского речного бассейна, встречается заболевание, вызванное систематически близким видом семейства Opisthorchidae - Metorchís bilis (Braun, 1890), и сочетанная инвазия этих трематод. Наиболее высокие показатели пораженности меторхами установлены у жителей населенных пунктов, расположенных вблизи р. Томь в Томской области, р. Исеть в Курганской области и р. Алей в Алтайском крае.

2. Мариты меторхов (М. bilis), в отличие от описторхов (О. felineus) , могут паразитировать в более мелких внутрипеченочных желчных протоках, что способствует более значительному поражению гепатобилиарной системы при микст-инвазии, по сравнению с моноинвазиями этих гельминтов.

3. Микст- и моноинвазии описторхов и меторхов сопровождаются повышенным накоплением в организме больного и в маритах гельминтов токсичных микроэлементов, вносящих существенный вклад в патогенез заболевания.

4 . При микст- и моноинвазиях описторхов и меторхов регистрируется возрастание числа клеток с цитогенетическими нарушениями в периферической крови. Наибольший уровень структурных аберраций хромосом отмечается при микст-инвазии, при этом разрывы хромосом локализуются преимущественно вблизи известных протоонкогенов и ломких участков хромосом 2,3,6,8 и 12.

5. Факторами кластогенеза при описторхозно-меторхозных микст- и моноинвазиях являются повышенная аккумуляция некоторых токсичных микроэлементов в организме (главным образом хрома и ртути), а также реактивация латентной инфекции вируса Эпштейна-Барр.

6. Аккумуляция токсичных микроэлементов (хрома и ртути) в организме и реактивация Эпштейн-Барр вирусной инфекции у больных с описторхозно-меторхозной микст-инвазией ассоциированы с развитием Т-клеточного иммунодефицита и повышением активности Т-хелперов типа 2.

7. Повышенное содержание в периферической крови больных описторхидозами токсичных микроэлементов (ртути и хрома) способствует увеличению тяжести течения заболевания с развитием холецистогепатита, гастродуоденопатии и клинических признаков иммунодефицитного состояния.

Апробация работы. Материалы диссертационной работы представлены на The 2nd International Congress on Lung Cancer (Crete, Greece, 1996) ; The 4th International workshop "Mutation Detectioin'97" (Brno, Czech Republic, 1997); The 4th Hong Kong International Cancer Congress (Hong Kong, 1997); The American Academy of Allergy, Asthma and Immunology (AAAAI), the American Association of Immunologists (AAI) and the Clinical Immunology Society (CIS) Joint Meeting (San Francisco, CA, 1997); The Society of Environmental Toxicology and Chemistry (SETAC) 18th Annual Meeting (San Francisco, CA, 1997); The International Symposium on Environmental Epidemiology in Central and Eastern Europe "Critical Issues for Improving Health" (Smolenice, Slovak Republic, 1997); на международной научно-практической конференции "Радиционная безопасность и социально-экологические проблемы Казахстана" (Алматы-Караганда, Казахстан, 1997); на 2-ой международной научно-практической конференции

Безопасность жизнедеятельности в Сибири и на .крайнем Севере" (Тюмень, 1997); на 13-ой Российской научной конференции "Факторы клеточного и гуморального иммунитета при различных физиологических и патологических состояниях" (Челябинск, 1997); на региональной конференции "Медико-биологические аспекты нейро-гуморальной регуляции, посвященной 35-летию ЦНИЛ" (Томск, 1997); Conference on genetic aspects of autoimmune diseases (Noordwijkerhout, The Netherlands, 1998); The 15th Annual Meeting of the European Association' for Cancer Research (EACR) (Stockholm, Sweden, 1998); The 10th NCI-EORTC Symposium on New Drugs in Cancer Therapy, (Amsterdam, 1998); на Всероссийской научно-практической конференции

Экологозависимые заболевания (биохимия, фармакология, клиника)" (Чита, 1998); на 2-ой республиканской научно-практической конференции, посвященной 75-летию инфекционной службы Удмуртии (Ижевск, 1998); на межрегиональной научно-практической конференции

Медицинские и экологические проблемы Северных районов Сибири" (Томск-Стрежевой, 1998); на конференции, посвященной 50-летию кафедры детских инфекций СибГМУ (Томск, 1998); на международном симпозиуме "Медицина и охрана здоровья'99" (Тюмень, 1999); на научной конференции "Актуальные вопросы экспериментальной морфологии" (Томск, 1999); на 7-й научно-практической конференции "Актуальные вопросы гастроэнтерологии и особенности заболеваний органов пищеварения в Сибирском регионе" (Томск, 1999); на научной городской конференции молодых ученых и специалистов "Региональные проблемы экологии и природопользования" (Томск, 2000); на научной конференции, посвященной 10-летию независимой Республики Узбекистан и 75-летию со дня образования УЗНИИВ "Мониторинг распространения и предотвращения особо опасных болезней животных" (Самарканд, Узбекистан, 2001); на 1-ой международной конференции, посвященной 110-летию со дня открытия проф. К.Н. Виноградовым сибирской двуустки у человека (Томск, 2001); на 2-ой научной конференции с международным участием "Проблемы инфекционной патологии в регионах Сибири, Дальнего Востока и Крайнего Севера" (Новосибирск, 2002); на III международной научно-практической конференции "Эпидемиология, диагностика, лечение и профилактика паразитарных заболеваний человека" (Витебск, Белоруссия, 2002); на 3-ей региональной научно-практической конференции с международным участием, посвященной памяти заслуженного деятеля науки РФ профессора Л.И. Геллера "Третьи Геллеровские чтения"

Хабаровск, 2002); на 1-ой Всероссийской научной конференции с международным участием "Влияние загрязнения окружающей среды на здоровье человека" (Новосибирск, 2002).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 92 работы, в том числе 7 статей в центральных реферируемых изданиях, 15 статей в реферируемых зарубежных изданиях на английском языке, 3 монографии и 1 учебник для вузов (рекомендован УМ0).

Структура работы. Диссертация изложена на 38 9 страницах, состоит из введения, 4 глав, выводов и списка литературы. Работа иллюстрирована 37 таблицами и 34 рисунками. Библиографический указатель включает 521 источник, из которых 18 9 отечественных и 332 зарубежных.

ВЫВОДЫ

1. У населения, проживающего на территории Обь-Иртышского речного бассейна, наряду с описторхозной инвазией Opisthorchis felineus (Rivolta, 1884) регистрируется заболевание, вызванное систематически близким видом семейства Opisthorchidae - Metorchis bilis (Braun, 18 90) , и микст-инвазия этих трематод. Наиболее высокие показатели пора-женности меторхами, по данным серологического исследования, установлены у жителей населенных пунктов, расположенных вблизи р. Томь в Томской области, р. Исеть в Курганской области и р. Алей в Алтайском крае.

2. Мариты меторхов (М. bilis), в отличие от описторхов (О. felineus), способны паразитировать в мелких внутрипеченоч-ных желчных протоках, в связи с чем микст-инвазия, по сравнению с моноинвазиями этих гельминтов, вызывает наиболее значительное поражение гепатобилиарной системы.

3. При описторхозно-меторхозных микст- и моноинвазиях регистрируется повышенное накопление в организме больного и в маритах гельминтов токсичных микроэлементов, вносящих существенный вклад в патогенез заболевания.

4. Особо высокий, существенно превышающий региональную норму, регистрируемую у здоровых людей, уровень аккумуляции токсичных микроэлементов в организме отмечается при микст-инвазии описторхов и меторхов.

5. Микст- и моноинвазии описторхов и меторхов сопровождаются возрастанием числа клеток со структурными аберрациями хромосом, гипер- и полиплоидией в периферической крови. Наиболее высокий уровень цитогенетических нарушений отмечается при микст-инвазии, при этом разрывы хромосом локализуются преимущественно вблизи известных протоонкогенов и ломких участков хромосом 2,3,6,8 и 12.

6. Факторами кластогенеза, способными вызвать цитогенети-ческие нарушения при описторхозно-меторхозной инвазии, являются повышенное накопление некоторых токсичных микроэлементов в организме (ртути и хрома), а также регистрируемая при этом заболевании реактивация латентной инфекции вируса Эпштейна-Барр.

7. Аккумуляция токсичных микроэлементов в организме больных с описторхозно-меторхозной микст-инвазией сопровождается развитием Т-клеточного иммунодефицита, повышением активности Т-хелперов типа 2, а также дисфункцией механизмов биоцидности нейтрофилов периферической крови.

8. Описторхозно-меторхозная микст-инвазия характеризуется высоким титром специфических антител к антигенам вируса Эпштейна-Барр в сыворотке периферической крови, что коррелирует со снижением числа нейтрофилов, Т-клеточных субпопуляций лимфоцитов и активацией продукции интерлейкина-10 мононуклеарными клетками периферической крови.

9. Повышенное содержание в периферической крови больных описторхидозами токсичных микроэлементов (ртути и хрома) способствует увеличению тяжести течения заболевания с развитием холецистогепатита, клинических признаков иммуноде-фицитного состояния, гастродуоденопатии, аллергического, астено-вегетативного, диспептического синдромов и нарушению функционального состояния щитовидной железы.