Окислительный стресс в нейродегенеративных процессах, вызванных нейротоксинами

Моисеева, Юлия Владимировна

Диссертации по медицине → Патологическая физиология

Автореферат и диссертация по медицине (14.00.16) на тему:Окислительный стресс в нейродегенеративных процессах, вызванных нейротоксинами

ДИССЕРТАЦИЯ

АВТОРЕФЕРАТ

Моисеева, Юлия Владимировна Москва 2004 г.

Ученая степень: кандидата биологических наук

ВАК РФ: 14.00.16

Автореферат диссертации по медицине на тему Окислительный стресс в нейродегенеративных процессах, вызванных нейротоксинами

На правах рукописи

МОИСЕЕВА ЮЛИЯ ВЛАДИМИРОВНА

ОКИСЛИТЕЛЬНЫЙ СТРЕСС В НЕЙРОДЕГЕНЕРАТИВНЫХ ПРОЦЕССАХ, ВЫЗВАННЫХ НЕЙРОТОКСИНАМИ

14.00.16 - патологическая физиология 03.00.04 - биохимия

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Москва -

2005

Работа выполнена в лаборатории функциональной биохимии нервной системы Института высшей нервной деятельности и нейрофизиологии Российской АН.

Научные руководители:

доктор биологических наук, профессор Н.В. Гуляева кандидат биологических наук М.Ю. Степаничев

Официальные оппоненты:

доктор биологических наук, профессор Е.Б. Манухина. доктор биологических наук, профессор Ю.В. Архипенко.

Ведущее учреждение: Московская медицинская академия им И.М. Сеченова

Автореферат разослан /7 О'А<- ( 2005 года

Защита диссертации состоится J? •>) A^ fiT^f 2005 года в/^часов

на заседании Диссертационного совета Д 001.003.01 при Научно-исследовательском институте общей патологии и патофизиологии Российской АМН (125315, Москва, Балтийская улица, дом 8).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Института

Ученый секретарь Диссертационного совета, кандидат медицинских наук

Л.Н. Скуратовская

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность исследования. В конце двадцатого века старение населения стало одной из центральных проблем, с которой столкнулось большинство развитых стран мира. Это связано как с общим повышением жизненных стандартов, так и с достижениями современной медицины. Поэтому значительные усилия ученых в различных странах мира направлены в настоящее время на понимание фундаментальных основ и разработку методов коррекции патологий, связанных со старением организма человека. Одним из ведущих научных направлений является исследование нарушений высших функций мозга, лежащих в основе различного рода деменций. Среди причин старческих деменций, по мнению некоторых авторов, центральное место занимает болезнь Альцгеймера (БА). Это заболевание было впервые описано в 1907 г. А. Альцгеймером и в настоящее время большинством авторов признается в качестве самостоятельной нозологической единицы. Принято считать, что БА не встречается среди подростков, отдельные случаи регистрируются среди людей моложе 40 лет, в 510% случаев БА регистрируется у людей старше 65, тогда как в возрастной группе старше 85 лет БА является причиной деменций в 25-35% случаев (Katzman, 1993). На территории бывшего СССР БА регистрировали в 0,3-7,6% случаев (Гаврилова, 1976; Сметанников, 1997).

В последние годы во многих странах наметилась тенденция к увеличению частоты встречаемости БА. По мнению R.Katzman (2000), при отсутствии эффективных методов лечения 22 миллиона человек по всему миру будут страдать от этого заболевания в ближайшие два десятилетия. В связи с этим актуальной проблемой является выявление молекулярных механизмов, лежащих в основе данного заболевания. Эта задача не может быть решена без использования моделей на животных, что позволяет с одной стороны лучше понять природу человеческих заболеваний, оценить их причины и последствия, а с другой стороны является лучшим экспериментальным инструментом для разработки и скрининга патогенетически направленных стратегий лечения патологий.

Наиболее распространенным подходом к моделированию нейродегенеративных патологий является использование специфических нейротоксинов. В качестве средства для моделирования БА наиболее часто используются холинотоксин этилхолин азиридиний (AF64A) и р-амилоидные пептиды (|ЗА). К настоящему времени установлено, что эти вещества вызывают возникновение у животных амнезии, связанной с гипофункцией холинергической системы. В то же время точные механизмы, опосредующие токсические эффекты обоих веществ, остаются малоисследованными.

Одним из возможных механизмов, которые обусловливают токсические эффекты AF64A и рА, может являться окислительный стресс. В пользу этой гипотезы свидетельствуют данные большого числа экспериментов, проведенных на образцах аутопсийного материала, а также в культуре клеток (Greene et al., 1976; Hedley, 1992; Behl et al., 1994; Schubert et al., 1995b; Richardson et al., 1996; Yan et al., 1996; Avdulov et al., 1997; Rinner et al., 1997; Hanin, 1998; Galeazzi et al., 1999). Антиоксиданты в значительной степени позволяют уменьшить повреждающее воздействие этих токсинов (Emeiich et al., 1992; Behl, 1994, 1994a; Thomas et al., 1996; Miranda et al., 2000). Вместе с тем до сих пор не было получено прямого подтверждения участия окислительного стресса в нейротоксичности AF64A или pA in vivo. Указанные факты позволили определить цель и задачи настоящего исследования.

Цель и задачи исследования

Основной целью данной работы явилось исследование изменения свободнорадикальных процессов в отделах мозга крыс при развитии нейродегенерации в «инъекционных» экспериментальных моделях болезни Альцгеймера у грызунов, при использовании двух видов нейротоксинов -холинотоксин этилхолин азиридиний (AF64A) и р-амилоидный пептид (рА), в частности фрагмент РА(25-35). Для достижения этой цели были поставлены следующие задачи:

1. Оценить показатели свободнорадикального окисления в отделах мозга крыс (кора, мозжечок, гиппокамп) при моделировании нейродегенерации, вызванной интрацеребровентрикулярным введением нейротоксинов AF64A или РА(25-35).

2. Измерить активность синтазы оксида азота (NOC) в отделах мозга крыс (кора, мозжечок, гиппокамп) in vivo при моделировании нейродегенерации, вызванной интрацеребровентрикулярным введением нейротоксинов AF64A или рА(25-35).

3. Оценить активность NOC мозга крыс при индукции окислительного стресса in vitro.

4. Провести сопоставление развития окислительного стресса в мозге крыс на двух вышеуказанных моделях нейродегенерации.

Научная новизна работы.

В работе впервые проведено систематическое исследование ряда значимых биохимических показателей, характеризующих процессы свободнорадикального окисления в мозге крыс в условиях экспериментально вызванной нейродегенерации in vivo.

Установлено, что интрацеребровентрикулярное введение рА(25-35) вызывает нейродегенеративные изменения в гиппокампе и коре больших полушарий крыс, сопровождающиеся усилением процессов свободнорадикального окисления в этих отделах мозга. Таким образом получены прямые доказательства, подтверждающие участие окислительного стресса в нейротоксических эффектах рА(25-35) in vivo.

Впервые показано, что холинергическая нейродегенерация, вызванная интрацеребровентрикулярным введением холинотоксина AF64A, сопровождается развитием окислительного стресса в отделах мозга крыс.

Впервые продемонстрирована динамика изменений активности NOC после введения рА(25-35) и AF64A. рА(25-35) вызывает кратковременное снижение активности фермента в гиппокампе и неокортексе, сменяющееся существенным

увеличением активности NOC в неокортексе. Введение AF64A вызывает более длительное снижение активности нейрональной NOC в гиппокампе.

В экспериментах in vitro впервые установлено, что окислители (пероксид водорода и гипохлорит натрия) вызывают дозозовисимое падение активности NOC в гомогенатах коры больших полушарий.

Впервые продемонстрированы особенности развития окислительного стресса после введения рА(25-35) и AF64A. рА(25-35) вызывает медленное и продолжительное (по крайней мере, в течение 30 дней) накопление продуктов свободнорадикального окисления, тогда как введение AF64A приводит к быстрой активации процессов свободнорадикального окисления, достигающей максимального уровня в течение первых 5 дней после введения холинотоксина.

Теоретическое значение работы.

В работе рассмотрены патофизиологические механизмы возможной связи между свободнорадикальными процессами, включая генерацию оксида азота, и холинергической нейродегенерацией, вызванной двумя различными нейротоксинами. Выявлены закономерности развития окислительного стресса в зависимости от использованного нейротоксина (быстро развивающийся окислительный стресс и последующая холинергическая нейродегенерация при центральном введении AF64A и медленное усиление свободнорадикальных процессов в результате введения рА(25-35)). Сделан фундаментальный вывод о том, что окислительный стресс может быть одним из важнейших молекулярных механизмов, опосредующих холинергическую нейродегенерацию.

Практическое значение работы.

альцгеймеровского типа у крыс (Степаничев и соавт., 1997; Stepanichev et al., 2003; 2004). Подтверждение вовлеченности окислительного стресса в механизмы нейродегенерации при центральном введении агрегированного нейротоксичного фрагмента рА принципиально важно для разработки патогенетически направленной коррекции когнитивных расстройств, связанных с холинергической нейродегенерацией. Модель может быть использована как для дальнейшего, более глубокого исследования молекулярных механизмов болезни Альцгеймера, так и для скрининга лекарственных препаратов для лечения этого заболевания.

Положения, выносимые на защиту

1. Моделирование нейродегенерации путем центрального введения холинотоксина AF64A или агрегированного нейротоксичного фрагмента р-амилоидного пептида приводит к развитию окислительного стресса в определенных областях мозга крыс.

2. Динамика окислительного стресса зависит от природы нейротоксина и исследуемого отдела мозга.

3. Окислительный стресс может быть одним из важнейших молекулярных механизмов холинергической нейродегенерации.

Апробация работы.

конференции «Свободнорадикальные процессы: экологические,

фармакологические и клинические аспекты» (Санкт-Петербург, 1999), XXX Всероссийском Совещании по проблемам высшей нервной деятельности (Санкт-Петербург, 2000), конференции Европейского нейрохимического общества «Достижения в изучении молекулярных механизмов неврологических заболеваний» (Перуджа, 2001), 14-м съезде Европейского нейрохимического общества «Достижения в изучении молекулярных механизмов неврологических заболеваний» (Варшава, 2003) и апробированы на межлабораторной конференции ИВНДиНФРАН.

Объем и структура диссертации. Диссертация содержит следующие основные разделы: введение, обзор данных литературы, главы результатов собственных исследований и их обсуждение, заключение, выводы и библиографический указатель, включающий работы на русском (24) и иностранных (388) языках. Диссертация изложена на 146 страницах машинописного текста и содержит 10 таблиц и 17 рисунков.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

В работе использовано 203 крысы-самца линии Wistar, массой 250-350 г. Крыс содержали по пять особей в пластмассовых клетках в условиях вивария при естественном освещении и свободном доступе к воде и пище.

Введение нейротоксинов проводили стереотаксически. Для проведения операций крысы были распределены случайным образом на группы. Подопытным животным билатерально вводили в желудочки мозга АР64А (3 нмоль) (группа AF64A), растворенный в искусственной спинномозговой жидкости (Chrobak et al., 1988), или РА(25-35) (15 нмоль) (группа AM), растворенный в воде (Maurice et al., 1996). В качестве контроля ложнооперированным животным (группа ЛО) вводили эквивалентный объем соответствующего растворителя.

Для проведения биохимических исследований крыс декапитировали в разные сроки после введения веществ. Подготовку ткани мозга к биохимическому анализу проводили, как описано в работе (Gulyaeva et al., 1996). Для морфологических методов мозг фиксировали методом интракардиальной перфузии, используя в качестве фиксатора 4% нейтральный параформальдегид или смесь формалин: уксусная кислота: этанол в соотношении 2:1:7 (Gulyaeva et al., 1996; Stepanichev et al., 2000).

Определение продуктов свободнорадикального окисления, реагирующих с 2-тиобарбитутровой кислотой (ТБКРП) (базальный уровень и накопление в результате индукции Fе2+/аскорбатом) проводили по методам, предложенным Н. Ohkawa et al. (1972) и В. Каганом и соавт. (1979). Величину супероксидперехватывающей активности (СПА) определяли

спектрофотометрическим методом, основанным на генерации супероксидного радикала системой феназинметасульфат/НАДН и восстановлении нитросинего тетразолия с образованием синего формазана (Nishikimi et al., 1972, Gulyaeva et al., 1990).

Для оценки генерации активных форм кислорода (ГАФК) был использован оригинальный метод, основанный на использовании показателей индуцированной перекисью водорода люминол-зависимой хемилюминесценции (Моисеева и соавт., 1995).

Для исследования активности NOC применяли классический метод оценки синтеза [3Н]Ь-цитруллина из [3H]L-аргинина (Bredt, Snyder, 1989) с небольшими модификациями (Онуфриев с соавт., 1999; Iadecola et al., 1995).

Содержание белка в ткани определяли по методу М. Bradford (1976) с использованием красителя Кумасси голубого.

Для оценки холинергической гипофункции использовали гистохимический метод определения холинацетилтрансферазы (ХАТ) по методу, описанному A. Burt и A. Silver (1973). Патоморфологическое исследование проводили, используя парафиновые фронтальные срезы мозга, которые окрашивали классическими гистологическими методами.

Полученные в работе данные обрабатывали, используя методы математической статистики. Различия между группами определяли по t-критерию Стьюдента. Влияние систематически действующих факторов на исследованные биохимические показатели определяли методом дисперсионного анализа (ANOVA). Наряду с указанными, использовались непараметрические методы анализа для оценки достоверности различий между группами (критерий инверсий Вилкоксона - Манна - Уитни). Использованные в работе методы статистики реализованы в пакете программ «Statistica for Windows». Данные в таблицах представлены в виде М ± S.E.M.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

1. Исследование свободно радикальных процессов в мозге крыс после интрацеребровентрикулярного введения холинотоксина AF64A

AF64A - токсический аналог холина, который был исходно предложен в качестве холинергического нейроспецифического токсина. AF64A имеет холиноподобную структуру, которая содержит высокореактивное цитотоксическое азиридиниевое кольцо (Hanin, 1998). Введение AF64A приводит к нарушению поведения, которое проявляется уже через три недели после операции, что, по-видимому, связано с гибелью холинергических нервных клеток в ядрах септума. Для выяснения вопроса о том, участвует ли окислительный стресс в механизме токсического воздействия AF64A на нейроны, было исследовано содержание ТБКРП, СПА и ГАФК в коре больших полушарий и гиппокампе крыс. Для этого животным билатерально интрацеребровентрикулярно вводили AF64A или эквивалентный объем искусственной спинномозговой жидкости. Крыс декапитировали через 1, 3 и 5 дней после операции и проводили изучение названных показателей.

На рис. 1 представлены данные исследования содержания ТБКРП в отделах мозга крыс. В течение первой недели после введения AF64A вызывал накопление ТБКРП. При этом наблюдался рост как базального уровня ТБКРП, так и

кора

оло

гиппокамп

ОЛО

1АВ4А

■АР64А

юнгроль

3 5

■онтроль

3 5

диилослеолерации

диипоаеоперации

Рис. 1. Влияние ЛР64Л на содержание ТБКРП в отделах мозга крыс (батальный уровень). Данные представлены в виде M±S.E.M. По оси ординат - содержание ТБКРП в ед. оптической плотности/мг белка. *- р<0.05; ** р<0.01 - достоверные отличия ЛО от интактного контроля; а - р<0.05 - достоверность различий между группами ЛР64Л и ЛО. Для всех групп п=7.

содержания ТБКРП после индукции. Интересно, что сама по себе операция оказывала сходное влияние на эти параметры, однако эффект ЛР64Л был более выражен. Возрастание уровня ТБКРП в условиях индукции Ре2+/аскорбатом свидетельствует об увеличении потенциальной способности субстратов (прежде всего липидов) к свободнорадикальному окислению. Накопление ТБКРП, вероятно, было обусловлено существенным усилением ГАФК во всех исследованных структурах мозга, начиная с первого дня после операции (рис. 2). Активация процессов свободнорадикального окисления в мозге в первые дни после ведения AF64A сопровождалась постепенным усилением СПА. Так, в гиппокампе (рис. 3) СПА увеличивалась к 5-му дню после операции и сохранялась на более высоком уровне до 4-х месяцев после введения токсина. Увеличение способности ткани мозга к перехвату супероксидного радикала может отражать в данном случае компенсаторные изменения, связанные с развитием окислительного стресса.

Рис. 2. Влияние AF64A на ГАФК в отделах мозга крыс. Данные представлены в виде M±S.E.M. По оси ординат - интенсивность ХЛ в усл. ед. * - р<0.05; ** - р<0.01 -достоверность различий между группами ЛО и интактного контроля; а- р<0.05 -достоверность различий между группами AF64A и ЛО. Для всех групп п=7.

Рис. 3. Влияние AF64A на СПА в отделах мозга крыс. Данные представлены в виде m±S.E.M. По оси ординат - доля ингибирования (перехватывающая активность, положительные значения) или генерации (генерирующая активность, отрицательные значения) супероксида в усл.ед. ** - р<0.01, достоверность различий между группами ЛО и интактный контроль; аа - р<0.02, достоверность различий между группами AF64A и ЛО. Для всех групп п=7.

2. Исследование активности синтазы оксида азота в мозге крыс после интрацеребровентрикулярного введения холинотоксина ЛР64Л

Во второй серии экспериментов было исследовано влияние AF64A, введенного в латеральные желудочки мозга на активность NOC. Для этого крыс, инъецированных AF64A или эквивалентным по объему количеством спинномозговой жидкости, декапитировали через 1, 2, 3, 4 и 7 дней после операции и исследовали активность NOC в гиппокампе, фронтальной и париетальной коре.

Было установлено, что в гиппокампе крыс из группы AF64A происходило кратковременное снижение активности NOC, которое было максимальным на 3-ий и 4-ый дни после введения токсина (рис. 4) Этот эффект по времени совпадал с интенсивным окислительным стрессом.

140-, 120 100 -80 -60 -40 -20 -0 -0

Рис. 4. Влияние AF64A на активность NOC в гиппокампе крыс. По оси ординат -активность NOC в % от величины соответствующей группы ЛО. Данные представлены в виде M±S.E.M. Активность NOC в группе ЛО через 7 дней после операции составляла 60.1±2.8 пмоль NO/мин/мг белка. Значения активности NOC в других временных точках в группе ЛО не отличались достоверно от указанной величины. * - р<0.05 -достоверность различий между группами AF64A и ЛО. Для всех групп п=7.

Во фронтальной коре не было обнаружено изменений в активности NOC. В париетальной коре, примыкающей к гиппокампу - зоне наиболее подверженной действию AF64A - наблюдалось увеличение активности NOC, которое было

-»-ЛО —»-АР64А

2 4 6 8

Дни после операции

достоверно выше уровня NOC у крыс ЛО на 4-ый день после введения AF64A (100 ± 9,2 % и 126,7 ± 5,9 % в группах ЛО и AF64A, соответственно; р<0.05).

По данным литературы ингибирование NOC неспецифичным в отношении разных изоформ этого фермента ингибитором L-NAME способствует усилению холинотоксического эффекта AF64A (Lautenshlager et al., 2000). Ингибиторы нейрональной и индуцибельной изоформ NOC не влияют существенно на нейротоксичность AF64A (Lautenshlager et al., 1998). Следует также отметить, что снижение активности NOC, вызванное AF64A, совпадало по времени с усилением окислительного стресса в мозге, который нам удалось зарегистрировать в течение первых дней после интрацеребровентрикулярной инъекции этого нейротоксина. Это свидетельствует о том, что в этой модели БА снижение активности NOC может способствовать развитию септо-гиппокампальной нейродегенерации.

3. Исследование эффектов окислительного стресса на активность NOC в гомогенатах мозга крыс

Для того, чтобы проверить справедливость вывода о возможности ингибирования активности NOC в мозге в условиях окислительного стресса была проведена специальная серия экспериментов, в которой образцы гомогенатов мозга крыс инкубировали в присутствии сильных окислителей in vitro. Данные этой серии экспериментов представлены на рис. 5 и 6. Инкубация образцов мозга с пероксидом водорода или гипохлоритом натрия приводила к дозозависимому снижению активности NOC (рис. 5А, 6А), происходившему параллельно с усилением ГАФК (рис. 5Б, 6Б). Отсутствие достоверной ХЛ при низких концентрациях оксидантов, по-видимому, отражает пределы чувствительности хемилюминометра. Снижение активности NOC до 40-45% от контрольного уровня наблюдалось при концентрации пероксида 20 мМ и гипохлорита 0.38 мМ.

Таким образом, активность NOC в мозге весьма чувствительна к избытку окислителя. Сравнение результатов, полученных in vitro и in vivo, позволяет предполагать, что ингибирование NOC под действием AF64A может быть

Рис. 5. Влияние пероксида водорода на активность NOC (А) и ГАФК (Б) в супернатанте гомогената мозга крыс. А: по оси абсцисс - концентрация Н2О2, мМ; по оси ординат -активность NOC, % от исходного уровня. Б: по оси абсцисс - концентрация H2O2, мМ; по оси ординат - светосумма ХЛ, усл.ед. Данные представлены в виде M±S.E.M. * - р<0.05, достоверность различий между образцами с Н2О2 и образцами без Н2О2.

Рис. 6. Влияние гипохлорита натрия на активность NOC (А) и ГАФК (Б) в супернатанте гомогената мозга крыс. А: по оси абсцисс - концентрация NaCЮ, мМ; по оси ординат -активность NOC, % от исходного уровня. Б: по оси абсцисс - концентрация NaCЮ, мМ; по оси ординат - светосумма люминол-зависимой хемилюминесценции, усл.ед. Данные представлены в виде M±S.E.M. * - р<0.05, достоверность различий между образцами с NaCЮ и образцами без NaCЮ.

следствием вызываемого этим нейротоксином окислительного стресса в ткани мозга.

4. Исследование активности холинацетилтрансферазы (ХАТ) в мозге крыс после интрацеребровентрикулярного введения холинотоксина ЛР64Л

Для верификации степени гибели холинергических нейронов в мозге крыс после введения ЛР64Л было проведено гистохимическое исследование числа ХАТ-содержащих нейронов в четырех группах клеток медиального септума через 28 дней после экспериментального воздействия. Было установлено, что билатеральная интрацеребровентрикулярная инъекция ЛР64Л существенно снижала число холинергических нейронов в медиальном септуме (табл. 1). В частности, число холинергических нейронов было снижено у крыс группы ЛР64Л по сравнению с группой ЛО на 44.2% в дорсальной группе клеток, на 42.8% в средней группе, на 62.6% в интермедиальной группе и на 66.8% в вентральной группе клеток.

Таблица 1.

Влияние ЛР64Л (28°" день после интрацеребровентрикулярного введения 3 нмоль холинотоксина) на число ХАТ-позитивных нейронов в группах клеток медиального септума

группа N Группа клеток

дорсальная средняя интермедиальная вентральная

ЛО 4 58.2±3.3 12.5+1.2 49.7+3.8 29.5+1.9

ЛР64Л 4 32.5±4.4* 7.2±1.4* 18.6+2.5* 10.8+1.8*

интермедиальный септум) или 9х104 цм3 (медиальный и вентральный септум). * - р<0 01, достоверность различий между группами ЛР64Л и ЛО.

Сходные данные были получены при использовании ЛР64Л и другими авторами (СЪгоЪак е! а1., 1988; Ьогеш е! а1., 1991). Известно, что использованная в

настоящем исследовании доза AF64A (3 нмоль) избирательно снижает холинергические показатели в гиппокампе, не оказывая существенного влияния на концентрацию норадреналина, дофамина, серотонина и 5-гидроксииндолуксусной кислоты в гиппокампе, стриатуме, миндалине и фронтальной и париетальной коре (^кМс et я1., 1988). Предварительное введение мощного ингибитора ХАТ -гемихолина-3 - предотвращает возникновение холинергической гипофункции и когнитивного дефицита, которые вызывает инъекция AF64A в дозе 3 нмоль (Chгobak et 1989). Эти данные демонстрируют селективность указанной дозы AF64A в отношении холинергических нейронов.

5. Исследование свободнорадикальных процессов в мозге крыс после интрацеребровентрикулярного введения фрагмента (25-35) р-амилоидного пептида

Одно из центральных мест в патогенезе БА играет р-амилоидный пептид (РА). Согласно амилоидной гипотезе патогенеза БА нейротоксичность этого пептида является одной из основных причин гибели нервных клеток в отделах мозга, которые максимально страдают при этом заболевании (Yankneг, 1996; SeLkoe, 2003). Кроме того рА может быть одним из основных индукторов окислительного стресса при БА (ButteгfieLd et al., 1999). В настоящей работе были исследованы эффекты интрацеребровентрикулярного введения фрагмента рА(25-35) крысам на состояние свободнорадикальных процессов в структурах мозга. Для этого крыс декапитировали через 1,3, 5 и 30 дней после введения рА(25-35) и исследовали содержание ТБКРП, ГАФК и СПА в супернатантах гиппокампа и неокортекса. Введение 15 нмоль агрегированного рА(25-35) в латеральные желудочки мозга крыс вызывало усиление перекисного окисления липидов (ПОЛ), что выражалось в накоплении ТБКРП в церебральных структурах. Наиболее быстрое повышение содержания продуктов ПОЛ было отмечено в гиппокампе крыс группы AM (начиная с 3-го дня после введения); уровни ТБКРП оставались в среднем на 35-37% выше, чем в группе ЛО на всех исследованных сроках (рис. 7).

250 п

□ кора

в 10°-

гР

200 ■

50-

■ гипппокамп

1 3 5 30 дни после операции

Рис 7. Влияние рА(25-35) на содержание ТБКРП в структурах мозга крыс. Данные представлены в виде М±Б.Е.М. По оси ординат - содержание ТБКРП в % от соответствующей группы ЛО. ** - р<0.01; *** - р<0.005, - достоверность различий между группами АМ и ЛО (100%). Для всех групп п=6, кроме группы АМ на 30 день после операции (п=5).

В коре больших полушарий накопление ТБКРП начиналось с 5-го дня после операции и достигало максимального уровня к 30-му дню.

Введение рА(25-35) вызывало увеличение генерации супероксидных радикалов в коре больших полушарий через 30 дней после инъекции (236% по сравнению с группой ЛО; р<0.02). В гиппокампе обнаруживалось временное снижение ГАФК в 1-й день после операции (на 12% по сравнению с группой ЛО; р<0.03). Таким образом было установлено, что в отличие от АБ64А, вызывающего быстро развивающийся окислительный стресс, агрегированный рА(25-35) индуцирует медленно развивающийся окислительный стресс в мозге крыс, максимально выраженный через 1 месяц после операции. В то же время наблюдается определенная регионарная специфика в развитии процесса ПОЛ после введения рА(25-35). Так, интенсификация ПОЛ вначале происходит в гиппокампе и лишь позже в неокортексе. Этот факт представляется весьма важным, поскольку гиппокамп относится к структурам мозга, которые, в первую очередь и в наибольшей степени страдают при БА (БеГкое, 1994). Необходимо

также отметить, что окислительный стресс, вызванный рА, может быть одной из причин апоптоза, который наблюдается при БА или при моделировании БА in vitro и in vivo (Shimohama, 2000).

6. Исследование активности синтазы оксида азота в мозге крыс после интрацеребровентрикулярного введения фрагмента (25-35) р-амилоидного пептида

Для того чтобы оценить вклад N0 в развитие нейродегенеративных процессов, связанных с токсическим эффектом РА(25-35), была исследована активность NOC в гиппокампе и коре больших полушарий крыс. Исследование проводили в мозге тех же животных, которых использовали для изучения показателей окислительного стресса. Было учстановлено, что активность NOC снижалась в гиппокампе крыс группы AM по сравнению с группой ЛО через 1 день после операции и быстро возвращалась к исходному уровню (рис. 8). В неокортексе крыс группы AM временное (на 3-й день после операции) снижение активности NOC сменялось резким увеличением (в 1,5 раза) активности фермента на 5-й день.

Интересно, что как в гиппокампе, так и в неокортексе уменьшение синтеза N0 в течение первых дней после операции предшествовало накоплению ТБКРП в этих отделах. К сожалению, в литературе практически отсутствуют данные об эффектах рА на активность NOC in vivo. В работе O'Mahony et al. (1998) сообщается об увеличении генерации N0 в неокортексе через одну неделю после введения рА(1-42) и РА(25-35) в базальные ядра, но в этой работе отсутствуют данные для других временных точек. Авторы этой работы установили также корреляции между увеличением активности NOC и степенью холинергической денервации в коре мозга.

Ранее было показано, что в различных ситуациях in vivo, в частности при моделировании ишемии мозга, активность NOC отрицательно коррелирует со степенью окислительного стресса в ткани мозга (Онуфриев и соавт., 1999; Gulyaeva et al., 1994,1996; Stepanichev et al., 1997). Более того, обнаруженное

1 3 5 30 дни после операции

Рис 8. Влияние РА(25-35) на активность NOC в отделах мозга крыс. Данные представлены в виде M±S.E.M. По оси ординат - активность NOC в % от величины соответствующей группы ЛО. * - р<0.05, достоверность различий между группами AM и ЛО (100%). Для всех групп n=6, кроме группы AM на 30 день после операции (n=5).

снижение активности NOC в гомогенатах коры больших полушарий крыс в присутствии окислителей, позволяет предположить, что активность нейрональной NOC in vivo чувствительна к окислительному стрессу. Можно предположить, что снижение генерации N0 играет существенную роль в инициации гибели клеток, например в реализации механизма апоптоза. Известно, что N0 может играть двойственную роль, как инициируя, так и блокируя апоптоз, в зависимости от экспериментальных условий (Brune et al., 1998). В частности, NO ингибирует апоптоз, предотвращая активацию каспазы-3 как по цГМФ-зависимому механизму, так и регулируя активность каспаз путем S-нитрозшгарования (Kim et al., 1997; Rossig et al., 1999). NO защищает клетки от апоптоза, вызванного ультрафиолетовым облучением, регулируя экспрессию гена Bcl-2 (Sushek et al., 1999). Несмотря на то, что эти результаты получены главным образом in vitro, есть основания предполагать, что N0 является важнейшим эндогенным ингибитором апоптоза. В свете этого получает возможное объяснение установленный ранее факт ингибирования NOC в мозге при окислительном стрессе in vivo (Онуфриев и

соавт., 1999; Gulyaeva et al., 1994,1996; Stepanichev et al., 1997), главным образом при ишемии мозга, при которой установлено наличие апоптотическй гибели нейронов (Charriaut-Marlangue et al., 1996). В настоящей работе нами показана принципиальная возможность ингибирования NOC при индукции окислительного стресса in vitro. Можно предположить, что именно недостаточная генерация N0 является одной из причин гибели клеток как при ишемии, так и при моделировании БА.

7. Исследование нейродегенеративных изменений в мозге крыс, вызванных интрацеребровентрикулярным введением фрагмента (25-35) р-амилоидного пептида

В морфологических исследованиях было установлено наличие выраженного дегенеративного процесса в мозге животных через 1 месяц после интрацеребровентрикулярного введения РА(25-35). Хроматофильные и ацидофильные нейроны были обнаружены во фронто-париетальной моторной, ретросплениальной (цингулярной), первичной обонятельной коре, гиппокампе, а также в базальных ядрах переднего мозга. В неокортексе некротические нейроны были локализованы большей частью в слоях III и V и вблизи сосудов мозга.

Через 6 месяцев после интрацеребровентрикулярной инъекции рА(25-35) были выявлены следующие изменения. Хроматофильные нейроны в срезах мозга, окрашенных по Нисслю, были обнаружены главным образом в неокортексе и гиппокампе. Единичные хроматофильные нейроны были локализованы в таламусе, гипоталамусе и миндалине, однако острых некротических изменений не было обнаружено ни в одной из исследованных структур мозга. В неокортексе и базальных ганглиях переднего мозга животных опытной группы наблюдалась активация сателлитной микроглии и нейронофагия. Было установлено, что введение РА(25-35) приводило в среднем к 20%-ному снижению числа нейронов в поле СА1 гиппокампа (р< р<0.05) и к 25%-ному снижению числа нервных клеток во фронтальной (р=0.06) и фронто-париетальной коре (р<0.01).

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Моделирование патологий человека на животных необходимо как для исследования механизма патогенеза заболевания, так и для поиска патогенетически направленных путей коррекции. В данной работе использовали «инъекционные» модели БА in vivo, реализуемые за счет интрацеребровентрикулярного введения крысам двух принципиально разных нейротоксинов, алкилирующего аналога ацетилхолина AF64A и ундекапептида рА(25-35), нейротоксического фрагмента рА. Обе модели БА позволяют воспроизводить по крайней мере некоторые важнейшие симптомы этого заболевания, прежде всего когнитивные нарушения у крыс (Walsh et al., 1984; Chrobak et al., 1989; Walsh, Opello, 1994; Maurice et al., 1996; Delobette et al., 1997; Sigurdsson et al., 1997; Stepanichev et al., 2000; Yamaguchi et al., 2001). В основе этих нарушений лежит, по-видимому, процесс холинергической нейродегенерации, развивающийся в мозге после введения нейротоксинов. Развитие нейродегенеративных изменений в определенных отделах головного мозга грызунов определяется спецификой использованного токсина и не сопровождается отложениями рА. Однако в обоих случаях наблюдается развитие окислительного стресса, который, очевидно, является одним из важных звеньев в механизмах гибели нервных клеток. При сравнении двух моделей отмечаются выраженные различия в пространственно-временном паттерне развития окислительного стресса. Регионарная специфика развития окислительного стресса проявляется в различной чувствительности отделов мозга к токсическому действию AF64A и рА(25-35), а динамика развития окислительного стресса принципиально различается (от нескольких дней в случае AF64A до месяцев в случае РА(25-35)).

Свидетельства об активации свободнорадикальных процессов при БА были получены при исследовании постмортальных образцов мозга человека (Gotz et al., 1994; Lovell et al., 1995, 1999, 2000; Batterfield et al., 1997; Prasad et al., 1998; Koppal et al., 1999), однако по понятным причинам биохимические исследования мозга человека in vivo ограничены имеющимися методическими подходами.

Поскольку использованные нами «инъекционные» модели БА на крысах позволяют воспроизводить не только отдельные симптомы БА, но и такие важные аспекты патогенеза этого заболевания, как гибель нервных клеток, в частности, в результате окислительного стресса, исследования, проводимые на этих моделях, являются ценным инструментом для изучения механизмов патогенеза БА. Эти данные представляют особый интерес в свете обсуждаемой сегодня гипотезы о патогенезе БА, которая связывает дегенерацию нервных клеток в селективно чувствительных отделах мозга с окислительными повреждениями, развивающимися в отсутствие сенильных бляшек или нейрофибриллярных сплетений (Carney, 2000; Yankner, 2000). В пользу этого свидетельствуют и полученные недавно данные о том, что у трансгенных мышей с оверэкспрессией белка предшественника амилоидного протеина содержание продуктов ПОЛ в мозге увеличивается задолго до образования Р-амилоидных бляшек (Pratico et al., 2001). Высказано предположение, что отсутствие протеаз, участвующих в разрушении белков, подвергшихся окислительному повреждению, ведет к ускорению патологических процессов при БА (Carney, 2000). Вместе с тем дополнительные исследования, в том числе и на описанных моделях, позволят расширить имеющиеся представления о роли окислительного стресса в патогенезе БА.

Таким образом, исследования, проведенные на инъекционных моделях с использованием AF64A и рА(25-35), показали ценность этих моделей как инструмента для изучения окислительного стресса при БА, важнейшего механизма патогенеза нейродегенерации, которая, в свою очередь, приводит развитию специфических когнитивных нарушений (деменции Альцгеймеровского типа). Наши исследования представляют прямые подтверждения гипотезы об участии окислительного стресса в специфических областях мозга в патогенезе БА.

ВЫВОДЫ

1. Холинергическая нейродегенерация, вызванная интрацеребро-вентрикулярным введением холинотоксина AF64A, сопровождается

развитием окислительного стресса в отделах мозга (по содержанию продуктов, реагирующих с 2-тиобарбируровой кислотой; генерации активных форм кислорода и супероксид генерирующей/перехватывающей активности).

2. Окислительный стресс в неокортексе и гиппокампе достигает максимума через 3-5 дней после операции.

3. Введение AF64A сопровождается снижением активности нейрональной синтазы оксида азота в гиппокампе.

4. В экспериментах in vitro показано, что окислители (пероксид водорода и гипохлорит натрия) вызывают дозозовисимое падение активности синтазы оксида азота в гомогенатах коры больших полушарий. Ингибирование фермента под действием AF64A может быть следствием вызываемого этим нейротоксином окислительного стресса.

5. AF64A вызывает нейродегенерацию в ядрах перегородки, при этом число клеток снижается в среднем на 54%.

6. Инстрацеребровентрикулярное введение нейротоксического фрагмента бета-амилоидного пептида в дозе 15 нмоль вызывает окислительный стресс в неокортексе и гиппокампе крыс.

7. В отличие от окислительного стресса после введения AF64A, рЛ(25-35) вызывает более медленное и продолжительное (по крайней мере, в течение 30 дней) усиление свободнорадикальных процессов (по содержанию продуктов, реагирующих с 2-тиобарбируровой кислотой; генерации активных форм кислорода и супероксид генерирующей/перехватывающей активности).

8. Активность синтазы оксида азота снижается в гиппокампе и неокортексе через 1 и 3 дня после введения рА(25-35) соответственно, а на 5-й день возрастает в неокортексе.

9. Через 1 и 6 месяцев после введения рА(25-35) обнаружена нейродегенерация в отделах мозга крыс.

10. Предполагается, что окислительный стресс, вызванный введением обоих нейротоксинов, является важным звеном патогенеза вызываемой ими нейродегенерации.

Список опубликованных статей по теме диссертации

1. Моисеева Ю.В.. Онуфриев М.В., Лазарева Н.А., Гуляева Н.В. Применение перекись-индуцированной хемилюминесценции для исследования свободнорадикальных процессов в мозге// Нейрохимия. -1995-. Т. 12. - № 3. - С. 55-60.

2. Степаничев М.Ю., Лазарева НА., Онуфриев М.В., Митрохина О.С., Моисеева Ю.В.. Гуляева Н.В. Влияние введения фрагмента (25-35) бета-амилоидного пептида на поведение крыс. // Журн. высш. нерв. деят. -1997. -Т. 47. - № 3. - С. 597-600 (Effects of doses of fragment (25-35) of p-amyloid peptide on behavior in rats. Neurosci. Behav. Physiol. -1998. - V. 28. - № 5. - P. 564-566.)

3. Gulyaeva N.V., Victorov I.V. Stepanichev M.Yu., Onufriev M.V., Mitrokhina O.S., Moiseeva Yu.V.. Lazareva NA Intracerebroventricular administration of beta-amyloid peptide (25-35) induces oxidative stress and neurodegeneration in rat brain. In: Progress in Alzheimer's and Parkinson's diseases // Fisher A. et al., eds. New York, Plenum Press. -1998. - P. 89-98.

4. Онуфриев МБ., Степаничев М.Ю., Митрохина O.C., Моисеева Ю.В.. Лазарева Н.А., Гуляева Н.В. Влияние окислительного стресса на активность синтазы оксида азота мозга in vivo и in vitro // Российский физиол. журн. -1999. -Т. 85.-№4.-С. 531-538.

5. Митрохина О.С., Степаничев М.Ю., Лазарева НА., Моисеева Ю.В., Онуфриев М.В., Гуляева Н.В. Влияние интрацеребровентрикулярного введения фрагмента (25-35) бета-амилоидного пептида на уровни перекисного окисления липидов в структурах мозга и в крови крыс // Докл. Акад. наук. -1999. - Т. 368. - № 5. - С. 711-713.

6. Stepanichev M.Yu., Onufriev M.V., Mitrokhina O.S., Moiseeva Yu.V.. Lazareva N.A. Victorov I.V., Gulyaeva N.V. Neurochemical, behavioral, and neuromorphological effects of central administration of beta-amyloid peptide (2535) in rat // Нейрохимия. 2000. - Т. 17. - № 4. - С. 291-306.

7. Lautenschlager M., Onufriev M. V., Gulyaeva N. V., Harms С, D. Freyer, Sehmsdorf U.-S., Ruscher K., Moiseeva Y. V., Arnswald A., Victorov I., Dirnagl U., Weber J. R and Hortnagl H. Role of nitric oxide in the ethylcholine aziiidinium model of delayed apoptotic neurodegeneration in vivo and in vitro // Neuroscience. - 2000. - V. 97. - № 2. - P. 383-393.

8. Моисеева Ю.В.. Онуфриев М.В., Лазарева Н.А., Степаничев М.Ю., Гуляева Н.В. Свободнорадикальные механизмы септо-гиппокампальной нейродегенерации, вызванной холинотоксином AF64A у крыс in vivo // Нейрохимия. - 2001. - Т. 18. - № 4. - С. 287-289.

9. Степаничев М.Ю., Моисеева Ю.В., Гуляева Н.В. «Инъекционные» модели болезни Альцгеймера: окислительный стресс в механизме токсичности AF64A и р-амилоидного пептида у грызунов // Нейрохимия. - 2002. - Т. 19. -№3.-С. 165-175.

10.Stepanichev M.Yu., Mitrokhina O.S., Viktorov I.V., Moiseeva Yu.. Onufriev M.V., Lazareva N.A., Gulyaeva N.V. p-Amyloid (25-35) induces impairment of working but nor reference memory accompanied by neurodegeneration in rat brain // In: Memory and Emotions. P. Calabrese, A. Neugebauer, eds. Singapore, New Jersey, London, Hong Kong, World Scientific. - 2002. - P. 445-452.

ll.Stepanichev M.Yu., Moiseeva Yu.V., Lazareva N.V., Onufriev M.V., Gulyaeva N.V. Single intracerebroventricular administration of amyloid-beta (25-35) peptide induces impairment in short-term rather than long-term memory in rats // Brain Res. Bull. - 2003. - V. 61. - P. 197-205.

12. Stepanichev M.Yu., Zdobnova I.M., Zarubenko I.I., Moiseeva Yu.V.. Lazareva N.V., Onufriev M.V., Gulyaeva N.V. Amyloid- P(25-35)-induced memory impairments correlate with cell loss in rat hippocampus// Physiol. Behav. - 2004. -V. 80.-P. 647-655.

Заказ № 135 Подписано в печать 02.02.05 Тираж 100 экз. Уел п.л. 1

000 "Цифровичок", тел. 741-18-71,505-28-72 www.cfr.ru

Оглавление диссертации Моисеева, Юлия Владимировна :: 2004 :: Москва

ВВЕДЕНИЕ.

Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Психопатология, нейропатология и этиология Б А.

1.2. Моделирование нейродегенеративных процессов у животных: современные подходы к моделированию болезни

Альцгеймера на грызунах.

1.3. Нейротоксины как средство моделирования симптоматики и патогенетических механизмов нейродегенеративных патологий.

1.3.1. Моделирование когнитивных нарушений.

1.3.2. Моделирование нейропатологических признаков.

1.3.3. Холинергическая природа когнитивных нарушений при моделировании БА.

1.4. Окислительный стресс в патогенезе болезни Альцгеймера.

1.4.1. Роль окислительного стресса в патогенезе болезни Альцгеймера: центральная роль р-амилоидного пептида.

1.4.2. Окислительный стресс при моделировании БА.

1.5. N0 и >Ю-синтаза в патогенезе болезни Альцгеймера.

1.5.1. Функции N0 и >Ю-синтазы в нервной системе.

1.5.2. Роль N0 и Ж)-синтазы в нейродегенеративных процессах.

Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

2.1. Работа с лабораторными животными.

2.2. Моделирование нейродегенеративных процессов.

2.3. Получение гомогенатов ткани мозга и сыворотки крови.

2.4. Биохимические методы исследования.

2.4.1. Оценка состояния процессов перекисного окисления липидов в мозге и крови.

2.4.1.1. Определение содержания ТБКРП.

2.4.1.2. Определение интенсивности перехвата супероксидных радикалов.

2.4.1.3. Хемилюминесцентный метод определения генерации активных форм кислорода (ГАФК).

2.4.2. Радиометрический метод определения активности N

2.4.3. Определение белка.

2.5. Морфологические методы исследования.

2.6. Статистическая обработка данных.

Глава 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ

ОБСУЖДЕНИЕ.

3.1. Исследование свободнорадикальных процессов и активности синтазы оксида азота в мозге крыс после интрацеребровентрикулярного введения холинотоксина АР64А.

3.1.1. Перекисное окисление липидов в отделах мозга крыс после введения АР64А.

3.1.2. Генерация активных форм кислорода и супероксидперехватывающая активность в отделах мозга крыс после введения АР64А.

3.1.3. Активность синтазы оксида азота в отделах мозга крыс после введения АР64А.

3.1.4. Исследование эффектов окислительного стресса на активность синтазы оксида азота в гомогенатах мозга крыс.

3.1.5. Активность холинацетилтрансферазы в мозге крыс после введения холинотоксина АР64А (гистохимическое исследование).

3.1.6. Обсуждение результатов.

3.2. Исследование свободнорадикальных процессов и активности синтазы оксида азота в мозге крыс после интрацеребровентрикулярного введения фрагмента (25-35) р-амилоидного пептида

3.2.1. Перекисное окисление липидов в отделах мозга крыс после введения рА(25-35).

3.2.2. Генерация активных форм кислорода и супероксидперехватывающая активность в отделах мозга крыс после введения РА(25-35).

3.2.3. Перекисное окисление липидов в сыворотке крыс после введения рА(25-35).

3.2.4. Активность синтазы оксида азота в отделах мозга крыс после введения рА(25-35).

3.2.5. Исследование нейродегенеративных изменений в мозге крыс, вызванных фрагментом (25-35) р-амилоидного пептида.

3.3. Обсуждение результатов.

Введение диссертации по теме "Патологическая физиология", Моисеева, Юлия Владимировна, автореферат

Актуальность исследования

В конце двадцатого века старение населения стало одной из центральных проблем, с которой столкнулось большинство развитых стран мира. Это связано как с общим улучшением жизненных стандартов, так и с достижениями современной медицины. Поэтому значительные усилия ученых в различных станах мира направлены в настоящее время на понимание фундаментальных основ и разработку методов коррекции патологий, связанных со старением организма человека. Одним из ведущих научных направлений является исследование нарушений высших функций мозга, составляющих основу различного рода деменций. Среди причин старческих деменций по мнению некоторых авторов центральное место занимает болезнь Альцгеймера (БА). Это заболевание было впервые описано как самостоятельное заболевание в 1907 г. А. Альцгеймером и в настоящее время большинством авторов признается в качестве самостоятельной нозологической единицы. Данные о распространенности БА среди различных возрастных групп населения существенно расходятся. Принято считать, что БА не встречается среди подростков, отдельные случаи регистрируются среди людей моложе 40 лет, в 510% случаев БА регистрируется у людей старше 65, тогда как в возрастной группе старше 85 - Б А является причиной деменций в 25-35% случаев (Katzman, 1993). На территории бывшего СССР БА регистрировали в 0,3-7,6% случаев от числа всех пациентов психиатрических клиник (Гаврилова, 1977; Сметанников, 1997). В последние годы во многих странах наметилась тенденция к увеличению частоты встречаемости БА. По мнению A. Katzman (2000), при отсутствии эффективных методов лечения 22 миллиона человек по всему миру будут страдать от этого заболевания в ближайшие два десятилетия. В связи с этим актуальной проблемой является выявление молекулярных механизмов, лежащих в основе данного заболевания. Эта задача не может быть решена без использования моделей на животных, что позволяет с одной стороны лучше понять природу человеческих заболеваний, оценить их причины и последствия, а с другой стороны является лучшим экспериментальным инструментом для разработки и скрининга различных стратегий лечения патологий.

Наиболее распространенным подходом к моделированию нейродегенеративных патологий является использование специфических нейротоксинов. В качестве средства для моделирования БА наиболее часто используются этилхолин азиридиний (AF64A) и Р-амилоидные пептиды (РА). К настоящему времени установлено, что эти вещества вызывают возникновение у животных амнезии, связанной с гипофункцией холинергической системы. В то же время точные механизмы, опосредующие токсические эффекты обоих веществ, остаются малоисследованными.

Одним из возможных механизмов, которые обусловливают токсические эффекты AF64A и РА, может являться окислительный стресс. В пользу этой гипотезы свидетельствуют данные большого числа экспериментов, проведенных на образцах аутопсийного материала, а также в культуре клеток (Greene et al., 1976; Hedley, 1992; Behl et al., 1994; Schubert et al., 1995; Richardson et al., 1996; Yan, 1996; Avdulov et al., 1997; Rinner et al., 1997; Hanin, 1998; Galeazzi et al., 1999). Антиоксиданты в значительной степени позволяют уменьшить повреждающее воздействие этих токсинов (Emerich et al., 1992; Behl et al., 1994; Thomas et al., 1996; Miranda et al., 2000). Вместе с тем прямого подтверждения участия окислительного стресса в токсичности AF64A или PA in vivo до сих пор получено не было. Указанные факты позволили определить цель и задачи настоящего исследования.

Цель и задачи исследования

Альцгеймера у грызунов, при использовании двух видов нейротоксинов холинотоксин этилхолин азиридиний (AF64A) и р-амилоидный пептид (РА), в частности фрагмент рА(25-35). Для достижения этой цели были поставлены следующие задачи:

3. Оценить активность NOC мозга крыс при индукции окислительного стресса in vitro.

Научная новизна работы

Впервые продемонстрирована динамика изменений активности NOC после введения рА(25-35) и AF64A. РА(25-35) вызывает кратковременное снижение активности фермента в гиппокампе и неокортексе, сменяющееся существенным увеличением активности NOC в неокортексе. Введение AF64A вызывает более длительное снижение активности нейрональной NOC в гиппокампе.

В экспериментах in vitro впервые установлено, что окислители (пероксид водорода и гипохлорит натрия) вызывают дозозовисимое падение активности синтазы оксида азота в гомогенатах коры больших полушарий.

Впервые продемонстрированы особенности развития окислительного стресса после введения рА(25-35) и AF64A. РА(25-35) вызывает медленное и продолжительное (по крайней мере в течение 30 дней) накопление продуктов свободнорадикального окисления, тогда как введение AF64A приводит к быстрой активации процессов свободнорадикального окисления, достигающей максимального уровня в течение первых 5 дней после введения холинотоксина.

Теоретическое значение работы

Практическое значение работы

Практическая ценность работы состоит в развитии моделей холинергической дегенерации и получении практически важных характеристик этих моделей. Из использованных моделей наиболее перспективной представляется модель с использованием агрегированного нейротоксичного фрагмента рА, поскольку именно для этой модели показано развитие амнезии альцгеймеровского типа у крыс (Степаничев и соавт., 1997; Stepanichev et al., 2003; 2004). Подтверждение вовлеченности окислительного стресса в механизмы нейродегенерации при центральном введении агрегированного нейротоксичного фрагмента РА принципиально важно для разработки патогенетически направленной коррекции когнитивных расстройств, связанных с холинергической нейродегенерацией. Модель может быть использована как для дальнейшего, более глубокого исследования молекулярных механизмов болезни Альцгеймера, так и для скрининга лекарственных препаратов для лечения этого заболевания.

Положения, выносимые на защиту

1. Моделирование нейродегенерации путем центрального введения холинотоксина AF64A или агрегированного нейротоксичного фрагмента Р-амилоидного пептида приводит к развитию окислительного стресса в определенных областях мозга крыс.

2. Динамика окислительного стресса зависит от природы нейротоксина и исследуемого отдела мозга.

Апробация диссертации

Основные результаты работы доложены на съезде федерации Европейских физиологических обществ (Маастрихт, 1995), 1-м региональном конгрессе FAONS (Патайя, 1996), 1-м Российском конгрессе по патофизиологии (Москва, 1996), XXXIII Международном конгрессе физиологических обществ (Санкт-Петербург, 1997), конференциях Американского общества по нейронаукам (Вашингтон, 1996, Новый Орлеан, 1997), 12-м съезде Европейского нейрохимического общества (Санкт-Петербург, 1998), Европейском форуме по нейронаукам (Берлин, 1998), Международной конференции, посвященной 150-летию И.П. Павлова: Новое в концепциях о механизмах ассоциативного обучения и памяти (Москва, 1999), Международной школе по биокибернетике «Память и эмоции» (Неаполь, 1999), конференции «Свободнорадикальные процессы: экологические, фармакологические и клинические аспекты» (Санкт-Петербург, 1999), XXX Всероссийском Совещании по проблемам высшей нервной деятельности (Санкт-Петербург, 2000), конференции Европейского нейрохимического общества «Достижения в изучении молекулярных механизмов неврологических заболеваний» (Перуджа, 2001), 14-м съезде Европейского нейрохимического общества «Достижения в изучении молекулярных механизмов неврологических заболеваний» (Варшава, 2003) и апробированы на межлабораторной конференции ИВНДиНФ РАН.

Заключение диссертационного исследования на тему "Окислительный стресс в нейродегенеративных процессах, вызванных нейротоксинами"

выводы

1. Холинергическая нейродегенерация, вызванная интрацеребро-вентрнкулярным введением холинотоксина AF64A, сопровождается развитием окислительного стресса в отделах мозга (по содержанию продуктов, реагирующих с 2-тиобарбируровой кислотой; генерации активных форм кислорода и супероксид генерирующей/перехватывающей активности).

2. Окислительный стресс в неокортексе и гиппокампе достигает максимума через 3-5 дней после операции.

3. Введение AF64A сопровождается снижением активности нейрональной синтазы оксида азота в гиппокампе.

5. AF64A вызывает нейродегенерацию в ядрах перегородки, при этом число клеток снижается в среднем на 54%.

7. В отличие от окислительного стресса после введения AF64A, РА(25-35) вызывает более медленное и продолжительное (по крайней мере, в течение 30 дней) усиление свободнорадикальных процессов (по содержанию продуктов, реагирующих с 2-тиобарбируровой кислотой; генерации активных форм кислорода и супероксид генерирующей/перехватывающей активности).

9. Через 1 и 6 месяцев после введения РА(25-35) обнаружена нейродегенерация в отделах мозга крыс.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Моделирование патологий человека на животных необходимо как для исследования механизма патогенеза заболевания, так и для поиска патогенетически направленных путей коррекции. В данной работе использовали «инъекционные» модели БА in vivo, реализуемые за счет интрацеребровентрикулярного введения крысам двух принципиально разных нейротоксинов, алкилирующего аналога ацетилхолина AF64A и ундекапептида ßA(25-35), нейротоксического фрагмента ßA. Обе модели БА позволяют воспроизводить по крайней мере некоторые важнейшие симптомы этого заболевания, прежде всего когнитивные нарушения у крыс (Walsh et al., 1984; Chrobak et al., 1989; Walsh, Opello, 1994; Maurice et al., 1996; Delobette et al., 1997; Sigurdsson et al., 1997; Stepanichev et al., 2000; Yamaguchi et al., 2001). В основе этих нарушений лежит, по-видимому, процесс холинергической нейродегенерации, развивающейся в мозге после введения нейротоксинов. Развитие нейродегенеративных изменений в определенных отделах головного мозга грызунов определяется спецификой использованного токсина и не сопровождается отложениями ßA. Однако в обоих случаях наблюдается развитие окислительного стресса, который, очевидно, является одним из важных звеньев в механизмах гибели нервных клеток. При сравнении двух моделей отмечаются выраженные различия в пространственно-временном паттерне развития окислительного стресса. Регионарная специфика развития окислительного стресса проявляется в различной чувствительности отделов мозга к токсическому действию AF64A и ßA(25-35), а динамика развития окислительного стресса принципиально различается (от нескольких дней в случае AF64A до месяцев в случае ßA(25-35)).

Свидетельства об активации свободнорадикальных процессов были получены при исследовании постмортальных образцов мозга человека (Götz et al., 1994; Lovell et al., 1995, 1999, 2000; Batterfield et al., 1997; Prasad et al., 1998; Koppal et al., 1999), однако по понятным причинам биохимические исследования мозга человека in vivo ограничены имеющимися методическими подходами. Поскольку использованные нами «инъекционные» модели БА на крысах позволяют воспроизводить не только отдельные симптомы БА, но и такие важные аспекты патогенеза этого заболевания, как гибель нервных клеток, в частности, в результате окислительного стресса, исследования, проводимые на этих моделях, являются ценным инструментом для изучения механизмов патогенеза БА. Эти данные представляют особый интерес в свете обсуждаемой сегодня гипотезы о патогенезе БА, которая связывает дегенерацию нервных клеток в селективно чувствительных отделах мозга с окислительными повреждениями, развивающимися в отсутствие сенильных бляшек или НФС (Carney, 2000; Yankner, 2000). В пользу этого свидетельствуют и полученные недавно данные о том, что у трансгенных мышей с оверэкспрессией БПА содержание продуктов ПОЛ в мозге увеличивается задолго до образования (3-амилоидных бляшек (Pratico et al., 2001). Высказано предположение, что окислительное повреждение протеаз, участвующих в репарации белков, ведет к ускорению патологических процессов при БА (Carney, 2000). Вместе с тем дополнительные исследования, в том числе и на описанных моделях, позволят расширить имеющиеся представления о роли окислительного стресса в патогенезе БА.

Таким образом, исследования, проведенные на инъекционных моделях с использованием AF64A и рА(25-35), показали ценность этих моделей как инструмента для изучения окислительного стресса при БА, важнейшего механизма патогенеза нейродегенерации, которая, в свою очередь, приводит развитию специфических когнитивных нарушений (амнезии альцгеймеровского типа). Наши исследования представляют прямые подтверждения гипотезы об участии окислительного стресса в специфических областях мозга в патогенезе БА.

Список использованной литературы по медицине, диссертация 2004 года, Моисеева, Юлия Владимировна

1. Владимиров Ю.А., Азизова O.A., Деев А.И. Свободные радикалы в живых системах. // Биофизика (Итоги науки и техники ВИНИТИ АН СССР) М. -1991.-Т. 29.-С. 250.

2. Владимиров Ю.А., Арчаков А.И. Перекисное окисление липидов в биологических мембранах. -М.: Наука, 1972. 352 с.

3. Владимирский Б.М. Математические методы в биологии. Ростов-на-Дону: Издательство Ростовского университета, 1983. - 304 с.

4. Гаврилова С.И., Жариков Г.А. Современные стратегии патогенетической терапии болезни Альцгеймера. // Вестн. РАМН. 2001. - №7. - С. 13-18.

5. Гаврилова С. Клинико-эпидемиологические исследования психического состояния группы лиц позднего возраста из общего населения. // Журн. невропатол. психиатрии. 1977. - № 9. - С. 1382-1389.

6. Гублер Е.В., Генкин A.A. Применение непараметрических критериев статистики в медико-биологических исследованиях. JL: Медицина, 1973. -141 с.

7. Гуляева Н.В., Бикбулатова JI.C., Обидин А.Б., Айрапетянц М.Г., Кругликов Р.И. Длительное снижение перекисного окисления липидов в мозгу крыс при введении нейропептидов. // Нейрохимия. -1989. Т. 8. - С. 95-1000.

8. Гуляева Н.В., Ерин А.Н. Роль свободнорадикальных процессов в развитии нейродегенеративных заболеваний. // Нейрохимия. — 1995. Т. 12. - № 2. -С. 3-15.

9. Ермакова И.В., Лосева Е.В., Гуляева Н.В. Поведенческие, морфологические и биохимические корреляты раннего влияния нейротрансплантанта на поврежденный мозг взрослых крыс. // Журнал высшей нервной деятельности. 1988. - Т. 38. - С. 922-930.

10. Зенков Н.К., Меньшикова Е.Б., Шергин С.М. Окислительный стресс. Диагностика, терапия, профилактика. Новосибирск РАМН, Сибирскоеотделение, 1993. 181 с.

11. Каган В.Е., Орлов О.Н., Прилипко JI.JI. Проблема анализа эндогенных продуктов перекисного окисления липидов. // Итоги науки и техники. Сер. Биофизика. 1986. - Т. 18. М.: ВИНИТИ, 1986. - С. 136.

12. Каган В.Е., Прилипко JI.A., Савов В.М. Об участии свободных активных форм кислорода в ферментативном перекисном окислении липидов в биологических мембранах. // Биохимия. 1979. - Т. 44. - С. 482-485.

13. Лакин Г.Ф. Биометрия. М.: Высшая школа, 1980. - 293 с.

14. Малета Ю.С., Тарасов В.В. Математические методы статистического анализа в биологии и медицине. -М.: Издательство МГУ, 1982 а. 179 с.

15. Малета Ю.С., Тарасов В.В. Непараметрические методы статистического анализа в биологии и медицине. М.: Издательство МГУ, 1982 6.- 178 с.

16. Моисеева Ю.В., Онуфриев М.В., Лазарева H.A., Степаничев М.Ю., Гуляева Н.В. Свободнорадикальные механизмы септо-гиппокампальной нейродегенерации, вызванной холинотоксином AF64A у крыс in vivo // Нейрохимия. 2001. - Т. 18. - № 4. - С. 287-289.

17. Онуфриев М.В., Степаничев М.Ю., Лазарева H.A., Григорян Г.Л., Гуляева Н.В. Активность NO-синтазы и генерация активных форм кислорода в мозге старых крыс: связь с индивидуальным поведением. // Бюл. эксперим. биол. и мед. 1995. - Т. 120. - С. 145-147.

18. Рогаев Е. Пресенилины: обнаружение и характеристика генов болезни Альцгеймера//Мол. Биология. 1998. - Т. 32. -№ 1. - С. 71-83.

19. Сметанников П. Психиатрия. С-Пб: СПбМАПО, 1997. - 632 с.

20. Степаничев М.Ю., Лазарева H.A., Онуфриев М.В., Митрохина О.С., Моисеева Ю.В., Гуляева Н.В. Влияние введения фрагмента (25-35) ß-амилоидного пептида на поведение крыс. // Журн. высш. нерв. деят. 1997а. -Т.47.-№3.-С. 597-600.

21. Abe Е., Casamenti F., Giovannelli L., Scali С., Pepeu G. Administration of amyloid beta-peptides into the medial septum of rats decreases acetylcholine release from hippocampus in vivo. // Brain Res.- 1994,- V. 636.- P. 162-164.

22. Abe E., Murai S., Masuda Y., Saito H., Itoh T. Alpha-sialyl cholesterol reverses AF64A-induced deficit in passive avoidance response and depletion of hippocampal acetylcoline in mice. // British Journal of Pharmacology.- 1993.-V.108.- P. 387-392.

23. Adams J.D., Klaidman L.K., Odunze I.N., Shen H.C., Miller C.A. Alzheimer's and Parkinson's disease. Brain levels of glutathione, glutathione disulfide, and vitamin E. // Mol. Chem. Neuropathol.- 1991.- V. 14.- P. 213-226.

24. Akama K.T., Albanese C., Pestell R.G., Van Eldik L.J. Amyloid beta-peptide stimulates nitric oxide production in astrocytes through an NFkappaB-dependent mechanism. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA.- 1998.- V. 95.- P. 5795-5800.

25. Aksenov M.Y., Aksenova M.V., Harris M.E., Hensley K., Butterfield D.A., Carney J.M. Enhancement of b-amyloid peptide AP(l-40)-mediated neurotoxicity by glutamine synthetase. // J. Neurochem.- 1995.- V. 65.- P. 1899— 1902.

26. Anderson A.J., Cummings B.J., Cotman C.W. Increased immuno-reactivity for Jun- and Fos-related proteins in Alzheimer's disease: association with pathology. // Exp. Neurol.- 1994.- V. 125.- P. 286-295.

27. Applegate L.A., Luscher P., Tyrrell R.M. Induction of heme oxygenase: a general response to oxidant stress in cultured mammalian cells. // Cancer Res.-1991.-V. 51.- P. 974-978.

28. Armstrong R.A. A comparison of p-amyloid deposition in the medial temporal lobe in late-onset sporadic Alzheimer's disease and Down's syndrome. // Amyloid.- 1995.- V. 2.- P. 107-113.

29. Bailey E.L., Overstreet D.H., Crocker A.D. Effects of intrahippocampal injections of the cholinergic neurotoxin AF64A on open-field activity and avoidance learning in the rat. // Behavioral and Neural Biology. 1986.- V. 45.-P. 263-274.

30. Banati R., Beyreuter K. Alzheimer's disease/ Neuroglia / Eds. Kettenmann H., Ransom B. N.Y., Oxford: Oxford University Press, 1995.- P. 1027-1043.

31. Bauer M.K., Lieb K., Schulze-Osthoff K., Berger M., Gebicke Haerter P.J., Bauer J., Fiebich B.L. Expression and regulation of cyclooxygenase-2 in rat microglia. // Eur. J. Biochem. 1997. - V. 243. - P. 726-731.

32. Begley J.G., Duan W., Chan S., Duff K., Mattson M.P. Altered calcium homeostasis and mitochondrial dysfunction in cortical synaptic compartments of presenilin-1 mutant mice. // J. Neurochem. 1999.- V. 72.- P. 1030-1039.

33. Behl C., Davis I., Cole G.M., Schubert D. Vitamin E protects nerve cells from amyloid p protein toxicity. // Biochem. Biophys. Res. Commun. 1992. V.-186.- P. 944-950.

34. Behl C., Davis J.B., Lesley R., Schubert D. Hydrogen peroxide mediates amyloid beta protein toxicity. // Cell. 1994.- V. 77.- P. 817-827.

35. Benzi G., Moretti A. Are reactive oxygen species involved in Alzheimer's disease? // Neurobiol. Aging. 1995.- V. 16.- P. 661-674.

36. Benzing W.C., Mufson E.J., Increased number of NADPH-d-positive neurons within the substantia innominata in Alzheimer's disease. // Brain Res.- 1995. V. 670.-P. 351-355.

37. Bitting L., Naidu A., Cordell B., Murphy G.M. Beta-amyloid peptide secretion by a microglial cell line is induced by beta-amyloid(25-35) and lipopolysaccharide. // J. Bioi. Chem.- 1996. V. 271.- P. 16084-16089.

38. Blanc E.M., Toborek M., Mark R.J., Hennig B., Mattson M.P. Amyloid beta-peptide induces cell monolayer albumin permeability, impairs glucose transport, and induces apoptosis in vascular endothelial cells. // J. Neurochem.- 1997.- V. 68.-P. 1870-1881.

39. Bland M. An Introduction to Medical Statistics. / Oxford etc.: Oxford University Press, 1995.-P. 396.

40. Blasco I, Schmitt T.L., Steiner E., Trieb K., Grubeck-Loebenstein B. Tumor necrosis factor a augments amyloid 5 protein (25-35) induced apoptosis in human cells. //Neurosci Lett. 1997. - V. 238. - P. 17-20.

41. Blass J.P., Gibson G.E. The role of oxidative abnormalities in the pathophysiology of Alzheimer's disease. // Neurologique.- 1991.- V. 147.- P. 513-525.

42. Bobrysheva I.V., Chernyavskaya L.I., Onufriev M.V., Grivennikov I.A., Gulyaeva N.V. Hydrogen peroxide dose-dependently inhibits caspase-3 in PC 12 cells. // HeiipoxHMHfl.- 2000. -T. 17.- №2.- C. 93-98.

43. Boje K.M., Arora P.K. Microglial-produced nitric oxide tive nitrogen oxidesmediate neuronal cell death. // Brain Res.- 1992.- Y. 587.- P. 250-256.

44. Bonaiuto C., McDonald P.P., Rossi F., Cassatella M.A. Activation of nuclear factor-kappa B by beta-amyloid peptides and interferon-gamma in murine microglia. // J Neuroimmunol.- 1997.- V. 77.- P. 51-56.

45. Bondy S.C., Guo-Ross S.X., Truong A.T. Promotion of transition metal-induced reactive oxygen species formation by P-amyloid. // Brain Res.- 1998.- V.799.-P.91-96.

46. Bondy S.C., Truong A. Potentiation of beta-folding of beta-amyloid peptide 2535 by aluminum salts. //Neurosci Lett. 1999.- V. 267.- P. 25-28.

47. Bondy, S.C. Reactive oxygen species: relation to aging and neurotoxic damage. // Neurotoxicology.- 1992.- V. 13.- P. 87-100.

48. Bonnefont A.B., Muiioz F.I., Inestrosa N.C., Estrogen protects neuronal cells from the cytotoxicity induced by acetylcholinesterase-amyloid complexes. // FEBS Lett.- 1998.- V.441.- P.220-224.

49. Bozner P., Grishko V., LeDoux S.P., Wilson G.L., Chyan Y.C., Pappolla M.A. The amyloid beta protein induces oxidative damage of mitochondrial DNA. // J. Neuropathol. Exp. Neurol.- 1997. Y. 56. P. 1356-1362.

50. Braak H., Braak E. Neuropathological staging of Alzheimer-related changes. // Acta Neuropathologica.- 1991.- V. 82.- P. 239-259.

51. Bradford M.M. A rapid and sensitive method for the quantitation of microgram quantities of protein using the principle of protein binding. // Analyt Biochem. -1976.-V. 72.-P. 248-254.

52. Bredt D.S., Hwang P.M., Snyder S.H. Localization of nitric oxide synthase indicating a neural role for nitric oxide. // Nature.- 1990.- Y. 347.- P. 768-770.

53. Bredt D.S., Snyder S.H. Nitric oxide mediates glutamate-linked enhancement of cGMP levels in the cerebellum. // Proc Natl Acad Sci USA.- 1989. V. 86.1. P. 9030-9033.

54. Bredt D.S., Snyder S.H. Transient nitric oxide synthase neurons in embryonic cerebral cortical plate, sensory ganglia, and olfactory epithelium. // Neuron. -1994.-V. 13.-№2.-P. 301-313.

55. Brera B., Serrano A., de Ceballos M.L. Beta-amyloid peptides are cytotoxic to astrocytes in culture: a role for oxidative stress. // Neurobiol.- 2000.- V. 7.- P. 395-405.

56. Brown G.C. Nitric oxide and mitochondrial respiration. // Biochim. Biophys. Acta.- 1999.-V. 1411.- P. 351-369.

57. Brune B., von Knethen A., Sandau K.B. Nitric oxide and its role in apoptosis. // Eur J Pharmacol.- 1998.- V. 351.- P. 261-272.

58. Burt A.M., Silver A. Histochemistry of choline acetyltransferase: a critical analysis. // Brain Res.- 1973.- V. 62.- P. 509-516.

59. Busciglio I., Yankner B.A. Apoptosis and increased generation of reactive oxygen species in Down's syndrome neurons in vitro. // Nature.- 1995.- V. 378.-P. 776-779.

60. Butterfield D.A. Amyloid beta-peptide l-42.-associated free radical-induced oxidative stress and neurodegeneration in Alzheimer's disease brain: mechanisms and consequences. // Curr Med Chem. 2003. - V. 10. - P. 2651-2659.

61. Butterfield D.A., Drake J., Pocernich C., Castegna A. Evidence of oxidative damage in Alzheimer's disease brain: central role for amyloid P-peptide. // Trends in Molecular Medicine.- 2001.- V. 7.- P. 548-554.

62. Butterfield D.A., Howard B.J., Yatin S., Allen K.L., Carney J.M. Free radical oxidation of brain proteins in accelerated senescence and its modulation by N-tert-butyl-alpha-phenylnitrone. // Proc Natl Acad Sci U S A.- 1997.- V. 94.- P. 674-678.

63. Butterfield D.A., Martin L., Carney J.M., Hensley K. A beta (25-35) peptide displays H202-like reactivity towards aqueous Fe2+, nitroxide spin probes, and synaptosomal membrane proteins. //Life Sci.- 1996.- V. 58.- P. 217-228.

64. Cafe C., Torn C., Bertorelli L., Angeretti N., Lucca E., Forloni G., Marzatico F. Oxidative stress after acute and chronic application of beta-amyloid fragment 2535 in cortical cultures. // Neurosci. Lett.- 1996. V. 203. P. 61-65.

65. Capsoni S., Ugolini G., Comparini Al., Ruberti F., Berardi N. Alzheimer-like neurodegeneration in aged antinerve growth factor transgenic mice. // Proc.Natl.Acad.Sci.USA.- 2000.- V. 97.- P. 6826-6831.

66. Chabrier P.E., Demerle-Pallardy C., Auguet M. Nitric oxide synthases: targets for therapeutic strategies in neurological diseases. // Cell Mol. Life Sci.- 1999.- V. 55.-P. 1029-1035.

67. Chalimoniuk M., StrosznajderJ.B. Aging modulates nitric oxide synthesis and cGMP levels in hippocampus and cerebellum. Effects of amyloid beta peptide. //Mol Chem Neuropathol.- 1998.- V. 35.- P. 77-95.

68. Chan S.L., Mayne M., Holden C.P., Geiger J.D., Mattson M.P. Presenilin-1 mutations increase levels of ryanodine receptors and calcium release in PC 12 cells and cortical neurons. // J. Biol. Chem.- 2000.- V. 275.- P. 18195-18200.

69. Chandrasekaran K., Giordano T., Brady D.R., Stol J., Martin L.J., Rapoport S.II. Impairment in mitochondrial cytochrome oxidase gene expression in Alzheimer disease. // Brain Res Mol Brain Res.- 1994.- V. 24.- P. 336-340.

70. Charriaut-Marlangue C., Margaill I., Borrega F., Plotkine M., Ben-Ari Y. NG-nitro-L-arginine methyl ester reduces necrotic but not apoptotic cell deathinduced by reversible focal ischemia in rat. // Eur J Pharmacol. 1996 Aug 29;310(2-3): 137-40.

71. Chen S.Y., Harding J. W., Barnes C.D. Neuropathology of synthetic beta-amyloid peptide analogs in vivo. // Brain. Res.- 1996a.- V.715.- P.44-50.

72. Chen S.Y., Wright J. W., Barnes C.D. The neurochemical and behavioral effects of beta-amyloid peptide(25-35). // Brain. Res.- 1996b.- V.720.- P. 54-60.

73. Choi D.W. Nitric oxide: foe or friend to the injured brain? // Proc. Natl. Acad. Sci. USA.- 1993.- V. 90.- P. 9741-9743.

74. Chrobak J.J., Spates M.J., Stackman R.W. and Walsh, T.J. Hemicholinium-3 prevents the working memory impairments and the cholinergic hypofunction induced by ethylcholine aziridinium ion (AF64A). // Brain Res.- 1989.- V. 504.-P. 269-275.

75. Chrobak, J.J., Hanin, I., Schmechel, D.E. and Walsh, T.J. AF64A-induced working memory impairment: behavioral, neurochemical and histological correlates. // Brain Research.- 1988,- V. 463.- P. 107-117.

76. Colton C.A., Snell J., Chernyshev O., Gilbert D.L. Induction of superoxide anion and nitric oxide production in cultured microglia. // Ann. N.Y. Acad. Sci.- 1994.-V. 738.-P. 54-63.

77. Colton, C.A., Gilbert, D.L. Production of superoxide anions by CNS macrophage, the microglia. // FEBS Lett.- 1987.- V. 223.- P. 284-288.

78. Connor I.R., Snyder B.S., Beard I.L., Fine R.E. Mufson E.I. Regional distribution of iron and iron regulatory proteins in the brain in aging and Alzheimer's disease. // J. Neurosci. Res.- 1992.- V. 31.- P. 327-335.

79. Connor J.R., Tucker P., Johnson M., Snyder B. Ceruloplasmin levels in thehuman superior temporal gyrus in aging and Alzheimer's disease. // Neurosci Lett.- 1993.- V. 159.-P. 88-90.

80. Cotman C.W., Anderson A.J. A potential role for apoptosis in neurodegeneration and Alzheimer's disease. // Mol. Neurobiol.- 1995.- V. 10.- P. 19-45.

81. D'Hooge R., Nagels G., Westland C.E., Mucke L., De Deyn P.P. Spatial learning deficit in mice expressing human 751-amino acid P-amyloid precursor protein. // NeuroReport.- 1996.- V. 7.- P. 2807-2811.

82. Davis D.R., Anderton B.H., Brion I.P., Reynolds C.H., Hanger D.P. Oxidative stress induces dephosphorylation of tau in rat brain primary neuronal cultures. // J. Neurochem.- 1997.- V. 68.- P. 1590- 1597.

83. Dawson T.M., Sasaki M., Gonzalez-Zulueta M., Dawson V.L. Regulation of neuronal nitric oxide synthase and identification of novel nitric oxide signaling pathways. // Prog. Brain Res.- 1998.- V. 118,- P. 3-11.

84. Delobette S., Privat A., Maurice T. In vitro aggregation facilities beta-amyloid peptide-(25-35)-induced amnesia in the rat. // Eur. J. Pharmacol.- 1997.- V. 319.-P. 1-4.

85. Dickson D.W., Farlo I.F., Davies P., Crystal H., Fuld. P., Yen S.H. Alzheimer's disease. A double-labeling immunohisto- chemical study of senile plaques. //

86. Am. J. Pathol.- 1988.- V. 132.- P. 86-101.

87. Dickson D.W., Lee S.C., Mattiace L.A., Yen S.H., Brosnan C. Microglia and cytokines in neurological disease, with special reference to AIDS and Alzheimer's disease. // Glia.- 1993.- V. 7.- P. 75-83.

88. Dikalov S.I., Vitek M.P., Maples K.R., Mason R.P. Amyloid peptides do not form peptide-derived free radicals spon- taneously, but can enhance metal-catalyzed oxidation of hydroxy- lamines to nitroxides. // J. Biol. Chem.- 1999.-V. 274.- P. 9392-9399.

89. Dimmeler S., Zeiher A.M. Nitric oxide and apoptosis: another paradigm for the doubleedged role of nitric oxide. // Nitric Oxide.- 1997.- V. 1.- P. 275-281.

90. DiPatre P.L., Gelman B.B. Microglial cell activation in aging and Alzheimer disease: partial linkage with neurofibrillary tangle burden in the hippocampus. // J. Neuropathol. Exp. Neurol.- 1997.- V. 56.- P. 143-149.

91. Dorheim M.A., Tracey W.R., Pollock J.S., Grammas P., Nitric oxide synthase activity is elevated in brain microvessels in Alzheimer's disease. // Biochem. Biophys. Res. Commun.- 1994.- V. 205.- P. 659-665.

92. Dragunow M., Faull R.L., Lawlor P., Beilharz E.J., Singleton K., Walker E.B. Mee E., In situ evidence for DNA fragmentation in Huntington's disease striatum and Alzheimer's disease temporal lobes. // NeuroReport.- 1995.- V. 6.- P. 1053— 1057.

93. Dudas B, Hanin I, Rose M, Wulfert E. Protection against inflammatory neurodegeneration and glial cell death by 7beta-hydroxy epiandrosterone, a novel neurosteroid. // Neurobiol Dis. -2004. -V. 15. P. 262-268.

94. Dyrks T., Dyrks E., Hartmann T., Masters C., Beyreuter K. Amyloidogenicity of PA4 and pA4-bearing amyloid protein precursor fragments by metal-catalyzed oxidation.//J. Bioi. Chem.- 1992.-V. 267.-P. 18210-18217.

95. Emerich D.F., Black B.A., Kesslak J.P., Cotman C.W., Walsh T.J. Transplantation of fetal cholinergic neurons into the hippocampus attenuates the cognitive and neurochemical deficits induced by AF64A. // Brain Res. Bull.-1992.- V. 28.- P. 219-226.

96. Emerich D.F., Walsh T.J. Ganglioside AGF2 promotes task- specific recoveryand attenuates the cholinergic hypofunction induced by AF64A. // Brain Res.-1990.- V. 572.-P. 299-307.

97. Esterbauer H., Schaur R.J., Zollner H. Chemistry and biochemistry of 4-hydroxynonenal, malonaldehyde and related aide- hydes. // Free Radic. Bioi. Med.- 1991.- V.ll.- P. 81-128.

98. Eva C., Fabrazzo M., Costa E. Changes of cholinergic, noradrenergic and serotonergic synaptic transmission indices by ethylcholine aziridinium ion (AF64A) infused intraventricular!y. // J. Pharmacol. Exp. Ther.- 1987. V. 222. P. 181-186.

99. Fariello R.G., Ghilardi 0., Peschechera A., Amacci M.T., Angelucci L. Regional distribution of ubiquinones and tocopherols in the mouse brain. // Neuropharmacology.- 1988.-V. 27.- P. 1077-1080.

100. Farooqui A.A., Horrocks L.A. Involvement of glutamate receptors, lipases, and phospholipases in long-term potentiation and neurodegeneration. // J. Neurosci. Res.- 1994.-V. 38.-P. 6-11.

101. Fedele E., Raiteri M. In vivo studies of the cerebral glutamate receptor/NO/cGMP pathway. // Prog. Neurobiol.- 1999. V. 58. №1. P.89-120.

102. Fisher A., Hanin I. Potential animal models for senile dementia of Alzheimer's type, with emphasis on AF64A-induced cholinotoxicity. // Annual Review of Pharmacology and Toxicology.- 1986.- V. 26.- P. 161-181.

103. Flood J.F., Morley, J.E., Roberts E. An amyloid p protein fragment, Ap12-28., equipotently impairs post-training memory processing when injected into different limbic system structures. // Brain Research.- 1994.- V. 663.- P. 271-276.

104. Forloni G., Mangiarotti F., Angeretti N., Lucca E., De Simoni M.G. Beta-amyloid fragment potentiates IL-6 and TNF-alpha secretion by LPS in astrocytes but not in microglia. // Cytokine. 1997.- V. 10.- P. 759-762.

105. Forstermann U., Kleinert H. Nitric oxide synthase: expression and expressional control of the three isoforms. // Naunyn Schmiedebergs Arch Pharmacol. 1995. -V. 352.-P. 351-364.

106. Friedlich A.L., Butcher L.L. Involvement of free oxygen radicals in beta-amyloidosis: an hypothesis. //Neurobiol Aging.- 1994.- V. 15.- P. 443-455.

107. Furukawa K., Oyama Y., Chikahisa L., Hatakeyama Y, Akaike N. Flow cytometric analysis on cytotoxic action of amyloid beta protein fragment 25-35 on brain neurons dissociated from the rats.// Brain Res.- 1994.- V. 662.- P. 259262.

108. Gabbita S.P., Lovell M.A., Markesbery W.R. Increased nuclear DNA oxidation in the brain in Alzheimer's disease. // J. Neurochem.- 1998.- V. 71.- P. 20342040.

109. Galeazzi L., Ronchi P., Franceschi C., Giunta S. In vitro peroxidase oxidation induces stable dimers of P-amyloid (1-42) through dityrosine bridge formation. // Amyloid.- 1999, V 6.- P. 7-13.

110. Games D., Khan K.M., Soriano F.G., Keim P.S., Davis D.L., Bryant K.,1.berburg I. Lack of Alzheimer pathology after beta-amyloid protein injections in rat brain. // Neurobiol. Aging.- 1992.- V. 13.- P. 569-576.

111. Gargiulo L., Bermejo M., Liras A. Reduced neuronal nitric oxide synthetase and c-protein kinase levels in Alzheimer's disease. // Rev. Neurol.- 2000.- V. 30.- P. 301-303.

112. George-Hyslop P. Recent advances in the molecular genetics of Alzheimer's disease. // Clinical Neurosci.- 1993.- V. 1.- P. 171-175.

113. George-Hyslop P.H., Tanzi R.E., Polinsky R.J., Haines J.L., Nee L., Watkins P.C., Myers R.H., Feldman R.G., Pollen D., Drachman D. The genetic defect causing familial Alzheimer's disease maps on chromosome 21. // Science.-1987.- V. 235.- P. 885-890.

114. Gerlach, M., Ben-Shachar, D., Riederer.- P., Youdim, M.B., Altered brain metabolism of iron as a cause of neurodegenerative disease? // J. Neurochem.-1994.- V. 63.- P. 793-807.

115. Gillardon F., Skutella T., Uhlmann E., Holsboer F., Zimmermann M., Behl C. Activation of c-Fos contributes to amyloid beta-peptide-induced neurotoxicity. // Brain Res.- 1996.- V. 706.- P. 169-172.

116. Glenner G. G. Alzheimer's disease: its proteins and genes. // Cell.- 1988.- V. 52,-P. 307-308.

117. Good P.F., Perl D.P., Bierer L.M., Schmeidler J. Selective accumulation of aluminium and iron in the neurofibrilary tangles of Alzheimer's disease: a laser microprobe (LAMMA) study. //Ann. Neurol.- 1992.- V. 31.- P. 286-292.

118. Good P.F., Werner P., Hsu A., Olanow C.W., Perl D.P. Evidence of neuronal oxidative damage in Alzheimer's disease. // Am. J. Pathol.- 1996.- V. 149.- P. 21-28.

119. Goodman Y., Steiner M.R., Steiner S.M., Mattson M.P. Nordihydroguaiaretic acid protects hippocampal neurons against amyloid p-peptide toxicity, and attenuates free radical and calcium accumulation. // Brain Res.- 1994.- V. 654.-P. 171-176.

120. Goodwin J.L., Kehrli M.E., Uemura Jr. E. Integrin Mac-1 and beta-amyloid in microglial release of nitric oxide. // Brain Res.- 1997.- V. 768.- P. 279-286.

121. Gotz M.E., Kunig G., Riederer P. and Youdim, M.H., Oxidative stress: free radical production in neural degeneration. // Pharmacolo Thero.- 1994.- V. 63.-P. 37-122.

122. Gow A.J., Stamler J.S. Reactions between nitric oxide and haemoglobin under physiological conditions. //Nature.- 1998.- V. 391.- P. 169-173.

123. Greene L.A., Tischler A.S. Establishment of a noradrenergic clonal line of rat adrenal pheochromocytoma cells which respond to nerve growth factor. // Proc Natl Acad Sci U S A.- 1976.- V. 73.- P. 2424-2428.

124. Greenwald R.A. (ed.) CRG Handbook of Methods for Oxygen Radical Research. Boca Raton: CRG Press, 1987. P. 364.

125. Griffiths P.D., Crossman A.R. Distribution of iron in the basal ganglia and neocortex in postmortem tissue in Parkinson's disease and Alzheimer's disease. // Dementia.- 1993.- V. 4,- P. 61-65

126. Gulyaeva N. V., Onufriev M. V., Stepanichev M. Yu. NO synthase and free radical generation in brain regions of old rats: correlations with individual behaviour. // Neuroreport.- 1994.- V. 6.- P. 94-96.

127. Guntern R., Bouras C., Hof P.R., Vallet P.G. An improved thioflavine S method for staining neurofibrillary tangles and senile plaques in Alzheimer's disease. // Experientia. 1992. - V. 48. - P. 8-10.

128. Guo Q., Christakos S., Robinson N., Mattson M.P. Calbindin D28k blocks the proapoptotic actions of mutant presenilin 1: reduced oxidative stress and preserved mitochondrial function. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA.- 1998.- V. 95.-P. 3227-3232.

129. Guo Q., Fu W., Sopher B.L., Miller M.W., Ware C.B., Martin G.M., Mattson M.P., Increased vulnerability of hippocampal neurons to excitotoxic necrosis in presenilin-1 mutant knock-in mice. // Nat. Med.- 1999.- V. 5.- P. 101-106.

130. Gureviciene I, Ikonen S, Gurevicius K, Sarkaki A, Van Groen T, Pussinen R, Ylinen A, Tanila H. Normal induction but accelerated decay of LTP in APP + PS1 transgenic mice. // Neurobiol Dis. 2004. - V. 15.- P. 188-195.

131. Gwebu E.T., Williams J., Mathis D. Warden J.A., Selassie M., Richardson S., Gwebu N.T. Cytotoxicity of beta-amyloid peptide 25-35 on vascular smooth muscle cells and attenuation by vitamin E. // In Vitro Cell Dev Biol Anim.1997.- V. 33.-P. 672-673.

132. Haass C. Presenilins: genes for life and death. // Neuron.- 1997.- V. 18.- P. 687690.

133. Hajimohamedreza I., Brammer M. Brain membrane fluidity and lipid peroxidation in Alzheimer's disease. // Neuroscii. Lett.- 1990.- V. 112.- P. 333337.

134. Hall M.E., Stewart J.M. Theamnesic effects of p-amyloid fragments on passive avoidance responding in mice are blocked by substance P. // Abstracts of the Society for Neuroscience.- 1992.- V. 18.- P. 164.

135. Halliwell B., Gutteridge I.M. Lipid peroxidation, oxygen radicals, cell damage, and antioxidant therapy. // Lancet.- 1984.- V. 1.- P. 1396-1397.

136. Halliwell B., Gutteridge J.M. The importance of free radicals and catalytic metal ions in human diseases. // Mol Aspects Med. -1985. V. 8. -P. 89-193.

137. Halliwell B., Gutterige J.M.C. // Free Radicals in Biology and Medicine. Oxford University Press., 1989.- P. 188-256.

138. Hanin I. Molecular mechanisms of AF64A toxicity in the cholinergic neuron. / Progress in Alzheimer's and Parkinson's diseases. Eds. Fisher A. et al. N.Y.: Plenum press. New York and London, 1997. - P.675-680.

139. Hanin I. The AF64A model of cholinergic hypofunction: an update. // Life Sci.-1996.-V. 58.-P. 1955-1964.

140. Harkany T, Lengyel Z, Soos K, Penke B, Luiten PG, Gulya K. Cholinotoxic effects of beta-amyloid (1-42) peptide on cortical projections of the rat nucleus basalis magnocellularis. // Brain Res. 1995. V. 695. P. 71-75.

141. Harrington C.R., Colaco C.A. Alzheimer's disease. A glycation connection. //

142. Nature.- 1994.- V. 370.- P. 47-48.

143. Hartmann H., Eckert A., Muller W.E. Beta-Amyloid protein amplifies calcium signalling in central neurons from the adult mouse. // Biochem. Biophys. Res. Commun. 1993.- V.194.-P. 1216-1220.

144. Hawkins R.D., Son H., Arancio 0. Nitric oxide as a retrograde messenger during long-term potentiation in hippocampus. // Prog. Brain Res.- 1998.- V. 118.- P. 155-172.

145. Hedley D., Chow S. Flow cytometric measurement of lipid peroxidation in vital cells using parinaric acid. // Cytometry.- 1992.- V. 13.- P. 686-692.

146. Hensley K., Maidt M.L., Yu Z., Sang H., Markesbery W.R., Floyd R.A. Electrochemical analysis of protein nitrotyrosine and dityrosine in the Alzheimer brain indicates region-specific accumulation. // J Neurosci.- 1998.- V.18.- P. 8126-8132.

147. Ho L., Pieroni C., Winger D., Purohit D.P., Aisen P.S., Pasinetti G.M. Regional distribution of cyclooxygenase-2 in the hippocampal formation in Alzheimer's disease. // J. Neurosci. Res.- 1999.- V.57.- P. 295-303.

148. Hockenbery D.M., Olvai Z.N., Yin X.M., Miliman C.L., Korsmeyer S.J. Bcl-2 functions in an antioxidant pathway to prevent apoptosis. // Cell.- 1993.- V. 75.-P. 241-251.

149. Holscher C. Beta-amyloid induced reduction in synaptic transmission is reversed by inhibitors of nitric oxide synthase. // Neuroreport.- 1998.- V. 9.- P. 1245-1248.

150. Hsiao K., Chapman P., Nilsen S., Eckman C., Harigaya Y., Younkin S., Yang F.,

151. Cole G. Correlative memory deficits, AP elevation, and amyloid plaques in transgenic mice. // Science.- 1996.- V.274.- P. 99-102.

152. Huang Z., Huang P.L., Ma J., Meng W., Ayata C., Fishman M.C., Moskowitz M.A. Enlarged infarcts in endothelial nitric oxide synthase knockout mice are attenuated by nitro-L-arginine. // J. Cereb. Blood Flow Metab.- 1996.- V. 16.- P. 981-987.

153. Hyman B.T., Marzloff K., Wenniger J.J., Dawson T.M., Bredt D.S. Neurons in the hippocampal formation in Alzheimer's disease. // Ann. Neurol.- 1992.- V. 32.- P. 818-820.

154. Iadecola C., Xu X., Zhang F., El-Fakahany E.E., Ross M.E. Marked induction of calcium-independent nitric oxide synthase activity after focal cerebral ischemia. //J Cerebr Blood Flow Metab. 1995. - V. 15. - P. 52-59.

155. Ikarashi Y., Takahashi A., Ishimaru H., Shiobara T., Maruyama Y. The role of nitric oxide in striatal acetylcholine release induced by N-methyl-D-aspartate. // Neurochem. Int.- 1998.- V. 33.- P. 255-261.

156. Ivins K.J, Ivins J.K, Sharp J.P, Cotman C.W. Multiple pathways of apoptosis in PC12 cells. CrmA inhibits apoptosis induced by beta-amyloid. // J Biol Chem.1999. V. 274. - P. 2107-2112.

157. Ivins K.J., Thornton P.L., Rohn T.T., Cotman C.W. Neuronal apoptosis induced by beta-amyloid is mediated by caspase-8. // Neurobiol. Dis.- 1999.- V. 6.- P. 440-449.

158. Janus C., Westaway D. Transgenic mouse models of Alzheimer's disease. // Physiol Behav. 2001. - V. 73. - № 5. - P. 873-886.

159. Jarrard L.E., Levy A., Meyerhoff J.L., Kant G.J. Intracerebral injections of AF64A: an animal model of Alzheimer's disease? // Ann N Y Acad Sci. 1985. -V. 444. - P. 520-522.

160. Jeandel C., Nicolas M.H., Dubois F., Nabet-Helleville F., Penin F., Cuny G. Lipid peroxidation and free radical scavengers in Alzheimer's disease, // Gerontology.- 1989.- V. 35.- P. 275-2820.

161. Kaneko I., Morimoto K., Kubo T. Drastic neuronal loss in vivo by P-amyloid racemized at Ser26 residue: conversion of non-toxic D-Ser26.f}-amyloid 1-40 to toxic and proteinase-resistant fragments. // Neuroscience. 2001. - V. 104. — P. 1003-1011.

162. Kanfer J.N., Sorrentino G., Sitar D.S. Phospholipases as mediators of amyloid beta peptide neurotoxicity: an early event contributing to neurodegeneration characteristic of Alzheimer's disease. // Neurosci. Lett.- 1998.- V. 257.- P. 93-96.

163. Katzman R. Clinical and epidemiological aspects of Alzheimer's disease. // Clinical Neurosci.- 1993. V. 1. P. 165-170.

164. Katzman R. Epidemiology of Alzheimer's disease. // Neurobiol. Aging.- 2000. V. 21.- P. 51.

165. Kelley A.E. Locomotor activity and exploration. / in: Sahgal A. (Ed.)./ Behavioral Neuroscience. A Practical Approach, 1993.- V. 2, IRL Press, Oxford.- P. 1-21.

166. Kim Y.M., Talanian R.V., Billiar T.R. Nitric oxide inhibits apoptosis by preventing increases in caspase-3-like activity via two distinct mechanisms. // J. Biol. Chem.- 1997.- V. 272.- P. 31138-31148.

167. Knauer M.F., Orlando R.A., Glabe C.G. Cell surface APP751 forms complexes with protease nexin 2 ligands and is internalized via the low density lipoprotein receptor-related pro- tein (LRP). // Brain Res.- 1996.- V. 740.- P. 6-14.

168. Knowles R.G, Moncada S. Nitric oxide synthases in mammals. // Biochem J. -1994.-V. 298.-P. 249-258.

169. Kowall N., McKee A., Yankner B., Beal M.F. In vivo neurotoxicity of beta-amyloid beta(l-40). and the beta(25-35) fragment. // Neurobiol. Aging.- 1992.-V. 13.- P. 537-542.

170. Kroncke K.D., Fehsel K., Kolb-Bachofen V. Inducible nitric oxide synthase and its product nitric oxide, a small molecule with complex biological activities. // Biol. Chem. Hoppe-Seyler.- 1995.- V. 376.- P. 327-343.

171. Kuiper M.A., Mulder C, van Kamp G.J., Scheltens P., Wolters E.C., Cerebrospinal fluid ferritin levels of patients with Parkinson's disease, Alzheimer's disease, and multiple system atrophy. // J. Neural Transm.- 1994.-V.7.- P. 109-114.

172. Lander H.M., Ogiste J.S., Teng K.K., Novogrodsky A., p21ras as a common signaling target of reactive free radicals and cellular redox stress. // J. Biol. Chem.- 1995.- V. 270.- P. 21195-21198.

173. Larson J., Lynch G., Games D., Seubert P. Alterations in synaptic transmission and long-term potentiation in hippocampal slices from young and aged PDAPP mice. // Brain Res.- 1999.- V. 840 P. 23-35.

174. Laskowitz D.T., Matthew W.D., Bennett E.R., Schmechel D., Herbstreith M.H., Goel S., McMillian M.K. Endogenous apolipoprotein E suppresses LPS-stimulated microglial nitric oxide production. // NeuroReport.- 1998.- V. 9 P.615.618.

175. Law A., Gauthier S., Quirion R. Say NO to Alzheimer's disease: the putative links between nitric oxide and dementia of the Alzheimer's type. // Brain Research Reviews.- 2001.- V. 35.- P. 73-96.

176. LeBlanc A., Liu H., Goodyer C., Bergeron C., Hammond J. Caspase-6 role in apoptosis of human neurons, amyloidogenesis, and Alzheimer's disease. // J. Biol. Chem.- 1999.- V. 274.- P. 23426-23436.

177. Lehtonen J.Y., Holopainen J.M., Kinnunen P.K. Activation of phospholipase A2 by amyloid beta-peptides in vitro. // Biochemistry.- 1996. V. 35.- P. 9407-9414.

178. Leonard T.O., Lydic R. Nitric oxide synthase inhibition decreases pontine acetylcholine release. //NeuroReport.- 1995.- V. 6.- P. 1525-1529.

179. Loo D.T., Copani A., Pike C.J., Whittemore E.R., Walencewicz A.J., Cotman C.W. Apoptosis is induced by beta-amyloid in cultured central nervous system neurons. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA.- 1993.- V. 90.- P. 7951-7955.

180. Lorens S.K., Kindel G, Dong X.W., Lee J.M., Hanin I. Septal choline acetyltransferase immunoreactive neurons: dose-de- pendent effects of AF64A, //Brain Res. Bull.- 1991.- V.26.- P. 965-971.

181. Lorens S.K., Kindel G., Dong X.W., Lee J.M., Hanin I. Septal choline acetyltransferase immunoreactive neurons: dose-dependent effects of AF64A H Brain Res. Bull.- 1991.- V. 26.- P. 965-971.

182. Lovell M.A., Ehmann W.D., Butler S.M., Markesbery W.R. Elevated thiobarbituric acid-reactive substances and antiox- idant enzyme activity in the brain in Alzheimer's disease. //Neurology.- 1995.- V. 45.- P. 1594-1601.

183. Lovell M.A., Gabbita S.P., Markesbery W.R. Increased DNA oxidation and decreased levels of repair products in Alzheimer's disease ventricular CSF. // J. Neurochem.- 1999.- V. 72.- P. 771-776.

184. Lovell M.A., Robertson I.D., Teesdale W.I., Campbell I.L., Markesbery W.R. Copper, iron and zinc in Alzheimer's disease senile plaques. // J. Neurol. Sci.-1998.- V. 158.- P. 47-52.

185. Lovell M.A., Xie C., Gabbita S.P., Markesbery W.R. Decreased thioredoxin and increased thioredoxin reductase levels in Alzheimer's disease brain. // Free Radic Biol Med.- 2000.- V. 28.- P. 418-427.

186. Luth H.J., Holzer M., Gertz H.J., Arendt T. Aberrant expression of nNOS in pyramidal neurons in Alzheimer's disease is highly co-localized with p21ras and pl6INK4a. //Brain Res.- 2000.- V. 852.- P. 45-55.

187. Lynch M.A. Age-related impairment in long-term potentiation in hippocampus: a role for the cytokine, interleukin-1 beta? // Prog. Neurobiol.- 1998.- V. 56.- P. 571-589.

188. Lyras L., Cairns N.J., Jenner A., Jenner P., Halliwell B. An assessment of oxidative damage to proteins, lipids, and DNA in brain from patients with Alzheimer's disease. // J. Neurochem.- 1997.- V. 68.- P. 2061-2069.

189. Manilow R., Schulman R., Tsien R.W. Inhibition of postsynaptic PKC or CAMK1. blocks induction but not expression of LTP. // Science.- 1989.- V. 245.- P. 862866.

190. Mannisto P.T., Tuomainen P., Kutepova O., Borisenko S.A., Zolotov N., Voronina T. Effects of bilateral cholinotoxin infusions on the behavior and brain biochemistry oh the rats. // Farmacology, Biochemistry and Behavior.- 1994.- V. 49,- P. 33-40.

191. Mantyh P.W., Ghilardi I.R., Rogers S., DeMaster E., Allen C.I., Stimson E.R., Maggio I.E. Aluminum, iron and zinc ions promote aggregation of physiological concentrations of p-amyloid peptide. // J. Neurochem.- 1993.- V. 61.- P.l 171-1174.

192. Mark R.I., Fuson K.S., May P.C. Characterization of 8-epi- prostaglandin F2rx as a marker of amyloid 13-peptide-induced oxidative damage. // J. Neurochem.-1999.-V. 72.-P. 1146-1153.

193. Markesbery W.R., Lovell M.A. Four-hydroxynonenal, a product of lipid peroxidation, is increased in the brain in Alzheimer's disease. // Neurobiol Aging.- 1998.-V. 19.-P. 33-36.

194. Martin P., Bateson P. Measuring Behaviour: An Introductory Guide. / Cambridge: Cambridge University Press, 1994. 222 p.

195. Mattson M.P. Cellular actions of p-amyloid precursor protein and its soluble and fibrillogenic derivatives. // Physiol. Rev.- 1997.- V.77.- P.1081-1132.

196. Mattson M.P. Impairment of membrane transport and signal transduction systems by amyloidogenic proteins. // Methods Enzymol.- 1999.- V.309.- P. 733-46.

197. Mattson M.P., Cheng B., Davis D., Bryant K., Lieberburg I., Rydel R.E. Beta-Amyloid peptides destabilize calcium homeostasis and render human cortical neurons vulnerable to excitotoxicity. // J. Neurosci.- 1992.- V. 12.- P. 376-389.

198. Mattson M.P., Guo Q., Furukawa K., Pedersen W.A. Presenilins, the endoplasmic reticulum, and neuronal apoptosis in Alzheimer's disease. // J. Neurochem.- 1998.- V. 70,- P. 1-14.

199. Mattson M.P., Rychlik B., Chu C., Christakos S. Evidence for calcium- reducing and excito-protective roles for the calcium-binding protein calbindin-D28k in cultured hippocampal neurons. //Neuron.- 1991.- V. 6,- P. 41-51.

200. Mattson M.P., Sherman M. Perturbed signal transduction in neurodegenerative disorders involving aberrant protein aggregation. // Neuromolecular Med. 2003. -V. 4.-P. 109-132.

201. Mattson M.P.,' Tomaselli K.J., Rydel R.E. Calcium-destabilizing and neurodegenerative effects of aggregated beta-amyloid peptide are attenuated by basic FGF. // Brain Res.- 1993.- V. 621.- P. 35^19.

202. Maurice T., Lockhart B., Privat A. Amnesia induced in mice by centrally administered P-amyloid peptides involves cholinergiic dysfunction. // Brain Res.-1996.-V. 706.-P. 181-189.

203. Maurice T., Su T.P., Privat A. Sigmal (sigma 1) receptor agonists and neurosteroids attenuate B25-35-amyloid peptide-induced amnesia in mice through a common mechanism. // Neuroscience.- 1998.- V.83.- P. 413-428.

204. McDonald M.P., Dahl E.E., Overmier Y.B., Bandyopadhyay S., Babcock D., Cleary J. Reversal of p-amiloid-induced retention deficit after exposure totraining and state cues. // Neurobiology of Learning and Memory.- 1996.- V. 65.-P. 35-47.

205. McDonald M.P., Dahl E.E., Overmier Y.B., Mantyh P., Cleary J. Effects of an exogenous P-amiloid peptide on retention for apatial learning. // Behavioral and Neural Biology.- 1994.- V. 62.- P. 60-67.

206. McDonald M.P., Overmier J.B. Present Imperfect: A Critical Review of Animal Models of the Mnemonic Impairments in Alzheimer's Disease. // Neuroscience and Biobehavioral Reviews.- 1998.- V. 22.- P.99-120.

207. McGeer P.L., McGeer E.G. The inflammatory response system of brain: implications for therapy of Alzheimer and other neurodegenerative diseases. // Brain Res. Rev.- 1995.- V. 21.- P. 195-218.

208. Mcintosh L.J., Trush M.A., Troncoso J.C. Increased susceptibility of Alzheimer's disease temporal cortex to oxygen free radical mediated processes. // Free Radic. Biol. Med.- 1997.- V. 23.- P. 183-190.

209. McKee A., Kosik K., Kowall N. Neuritic pathology and dementia in Alzheimer's disease. // Ann. Neurol.- 1991. V. 30. P. 156-165.

210. McKee A.C., Yankner B.A., Beal M.F. In vivo neurotoxicity of beta-amyloid beta(l-40). and the beta(25-35) fragment. // Neurobiol. Aging.- 1992.- V. 13.- P. 537-542.

211. Mecocci P., MacGarvey U., Beal M.F. Oxidative damage to mitochondrial DNA is increased in Alzheimer's disease. // Ann Neurol.- 1994.- V. 36.- P. 747-751.

212. Miranda S., Opazo C., Larrondo L.F., Munoz F.J., Ruiz F., Leighton F., Inestrosa N.C. The role of oxidative stress in the toxicity induced by amyloid P-peptide in Alzheimer's disease. // Progress in Neurobiology.- 2000.- V. 62.- P. 633-648.

213. Miyamoto M., Kato J., Narumi S., Nagaoka A. Characteristic of memory impairment following lesioning of the basal forebrain and medial septal nucleus in rats. // Brain Research.- 1987.- V. 419.- P. 19-31.

214. Mollace V., Rodino P., Massoud R., Rotiroti D., Nistico G. Age-dependentchanges of NO synthase activity in the rat brain. // Biochem Biophys Res Commun. 1995. -V. 215. № 3. - P. 822-827.

215. Montine T.J., Amarnath V., Martin M.E., Strittmatter W.J., Graham D.G. E-4-hydroxy-2-nonenal is cytotoxic and cross-links cytoskeletal proteins in PI9 neuroglial cultures. // Am. J. Pathol.- 1996.- V. 148.- P. 89-93.

216. Moran P.M., Higgins L.S., Cordell B., Moser P.C. Age-related learning deficits in transgenic mice expressing the 751-amino acid isoform of human P-amyloid precursor protein. // Prot. Natl. Acad. Sci. USA.- 1995.- V. 92.- P.5341-5345. Medical Sciences.

217. Mori H., lhara Y. Neurofibrillary tangles, dystrophic neurites (curly fibres) and abnormal phosphorylation of tau // Brain Pathol.- 1991. V. 1. P. 273-277.

218. Mufson E.J., Braandabur M.M. Sparing of NADPH-diaphorase striatal neurons in Parkinson's and Alzheimer's diseases. // Neuroreport.- 1994.- V. 5.- P. 705708.

219. Mullaart E., Boerrigter M.E., Ravid R., Swaab D.F., Vijg J. Increased levels of DNA breaks in cerebral cortex of Alzheimer's disease patients. // Neurobiol. Aging.- 1990.-V. 11.-P. 169-173.

220. Multhaup G., Ruppert T., Schlicksupp A., Hesse L., Beher D., Masters C.L., Beyreuther K. Reactive oxygen species and Alzheimer's disease. // Biochem. Pharmacol.- 1997.- V. 54.- P. 533-539.

221. Multhaup G., Schlicksupp A., Hess L., Beher D., Ruppert T., Masters C.L., Beyreuther K. The amyloid precursor protein of Alzheimer's disease in the reduction of copper (II) to copper (I). // Science.- 1996.- V. 271.- P. 1406-1409.

222. Munch G., Thome J., Foley P., Schinzel R., Riederer P. Advanced glycation end products in ageing and Alzheimer's disease. // Brain. Res. Rev.- 1997a.- V. 23.-P. 134-143.

223. Mutisya E.M., Bowling A.C., Beal M.F. Cortical cytochrome oxidase activity is reduced in Alzheimer's disease. // J Neurochem.- 1994.- V. 63.- P. 2179-2184.

224. Nabeshima T., Nitta A. Memory impairment and neuronal dysfunction induced by P-amyloid protein in rats. // Tohoku Journal of Experimental Medicine.-1994.-V. 174.-P. 241-249.

225. Nakagawa T., Zhu H., Morishima N., Li E., Xu J., Yankner B.A., Yuan J. Caspase-12 mediates endoplasmic-reticulum-specific apoptosis and cytotoxicity by amyloid-beta. // Nature.- 2000.- V. 403.- P. 98-103.

226. Nishikimi M., Appaji N., Yagi K. The occurrence of superoxide anion in the reaction of reduced phenazine methosulfate and molecular oxygen. // Biochem Biophys Res Commun. 1972. - V. 31. - P. 849-854.

227. Nishikimi M., Appaji N., Yagi K. The occurrence of superoxide anion in the reaction of reduced phenazine methosulfate and molecular oxygen. // Biochem Biophys Res Commun. 1972. - V. 46. -P. 849-854.

228. Nitta A., Iton A., Hasegawa T., Nabeshima T. P-amyloid-protein-induced Alzheimer"s disease animal model. //Neuroscience Letters.- 1994.- V. 28.- P. 6366.

229. Noda M., Nakanishi H., Akaike N. Glutamate release from microglia via glutamate transporter is enhanced by amyloid-beta peptide. // Neuroscience.-1999.-V. 92.- P. 1465-1474.

230. Nunomura A., Perry G., Pappolla M.A., Wade R., Hirai K., Chiba S., Smith M.A. RNA oxidation is a prominent fea- ture of vulnerable neurons in Alzheimer's disease. // J. Neurosci.- 1999.- V. 19.- P. 1959-1964.

231. Ohkawa H., Ohishi N., Yagi K. Assay for lipid peroxides in animal tissues by thiobarbituric acid reaction. // Anal Biochem. 1979. - V. 95. -P. 351-358.

232. Oka M., Itoh S., Takashima. The early induction of cyclooxygenase 2 associated with neurofibrillary degeneration in brains of patients with Fukuyama-type congenital muscular dystrophy. // Neuropediatrics.- 1999.- V. 30.- P. 34-37.

233. Opello K. D., Stackman R.W., Ackerman S., Walsh T.J. AF64A (ethylcholine mustard aziridinium) impairs acquisition and performance of a spatial, but not a cued water maze task. // Physiology and Behavior.- 1993.- V. 54.- P. 1227-1233.

234. Oster-Granite M.L., McPhie D.L., Greenan J., Neve R.L. Age-dependent neuronal and Synaptic Degeneration in mice transgenic for the c terminus of the amyloid precursor protein. // The Journal of Neuroscience.- 1996.- V.16.- P. 6732-6741.

235. Palmer A. M., Burns M. A. Selective increase in lipid peroxidation in the inferior temporal cortex in Alzheimer's disease. // Brain Res.- 1994.- V. 645.- P. 338-342.

236. Pappolla M.A., Omar R.A., Kim K.S., Robakis N.K. Immunohistochemical evidence of oxidative (corrected) stress in Alzheimer's disease. // Am. J. Pathol.-1992.- V.140.- P.621-628.

237. Pappolla M.A., Sos M., Omar R.A., Bick R.I., Hickson-Bick D.L., Reiter R.I., Efthimiopoulos S., Robakis N.K. Melatonin prevents death of neuroblastoma cells exposed to the Alzheimer amyloid peptide. // J. Neurosci.- 1997. V. 17.- P. 1683-1690.

238. Paresce D.M., Ghosh R.N., Maxfield F.R. Microglial cell internalize aggregates of Alzheimer's disease amyloid P-protein via a scavenger receptor. // Neuron 1996.-V. 17.-P. 553-565.

239. Passer B.J., Pellegrini L., Vito P., Ganjei J.K., D'Adamio L. Interaction of Alzheimer's presenilin-1 and presenilin-2 with Bel- X(L). A potential role in modulating the threshold of cell death. // J. Biol. Chem.- 1999 V. 274.- P. 2400724013.

240. Paxinos G., Watson C. The rat brain in stereotaxic coordinates. // New York, London: Acad. Press.- 1986.- P.324.

241. Pereira C., Santos M.S., Oliveira C. Involvement of oxidative stress on the impairment of energy metabolism induced by A beta peptides on PC 12 cells: protection by antioxidants. // Neurobiol. Dis.- 1999.- V. 6.- P. 209-219.

242. Pike C., Burdick D., Walencewicz A., Glabe C., Cotman C.W. Neurodegeneration induced by p-amyloid peptides in vitro: the role of peptide assembly state//J. Neurosci.- 1993.-V. 13.-P. 1676-1686.

243. Pokorny J. Major factors affecting the autooxidation of lipids. / Autooxidation of Unsaturated Lipids. London etc.: Academ. Press. 1987. - P. 141-206.

244. Prasad M.R., Lovell M.A., Yatin M., Dhillon H., Markesbery W.R. Regional membrane phospholipid alterations in Alzheimer's disease. // Neurochem Res.-1998.- V. 23.- P. 81-88.

245. Putchler H., Sweat F., Levine M. On the binding of Congo Red by amyloid. // J. Histochem. Cytochem. 1962. - V. 10. - P. 355-359.

246. Quon D., Wang Y., Catalano R., Scardina J.M., Murakami K., Cordell B., Formation of p-amyloid protein deposits in brains of transgenic mice. // Nature. -1991.- V. 325.- P. 239-241.

247. Ravindranath V., Shivakumar B.R., Anandatheerthavarada H.K. Low glutathione levels in brain regions of aged rats. // Neurosci. Lett. 1989.- V. 101.-P. 187-190.

248. Regidor J., Montesdeoca J., Ramirez-Gonzalez J.A., Hernandez-Urquia C.M.,

249. Divac I. Bilateral induction of NADPH-diaphorase activity in neocortical and hippocampal neurons by unilateral injury. // Brain Res. -1993. V. 631. P. 171174.

250. Rice-Evans C.A., Diplock A.T., Symons M.C.R. Techniques in Free Radical Research. / Amsterdam ets.: Elsevier. 1991.-291 p.

251. Richardson J.S., Zhou Y., Kumar U. Free radicals in the neurotoxic actions of beta-amyloid. //Ann. N. Y. Acad. Sci. 1996.- V. 777.- P. 362-365.

252. Richardson, J.S. Free radicals in the genesis of Alzheimer's disease. // Ann. NY Acad. Sci. 1993.- V.695.- P.73-76.

253. Rinner W.A., Pifl C., Lassmann H., Hortnagl H. Induction of apoptosis in vitro and in vivo by the cholinergic neurotoxin ethylcholine aziridinium. // Neuroscience. 1997.- V. 79.- P. 535-542.

254. Roses A. Apolipoprotein E affects the rate of Alzheimer disease expression: P-amyloid burden is secondary consequence dependent on APOE genotype and duration of disease// J. Neuropathol. // Exp. Neurol. 1994.- V. 53.- P. 429-437.

255. Rossi F., Bianchini E., Synergistic induction of nitric oxide by P-amyloid and cytokines in astrocytes. // Biochem. Biophys. Res. Commun. 1996.- V. 225.- P. 474-478.

256. Rossig L., Fichtlscherer B., Breitschopf K., Haendeler J., Zeiher A.M., Mulsch A., Dimmeler S. Nitric oxide inhibits caspase-3 by S-nitrosation in vivo. // J Biol Chem. 1999. - V. 274. - P. 6823-6826.

257. Ruiz F.H., Gonzalez M., Bodini M., Opazo C., Inestrosa N.C. Cysteine 144 is a key residue in the copper reduction by the p-amyloid precursor protein. // J. Neurochem. 1999.- V. 73.- P. 1288-1292.

258. Rush D.K., Aschmies S., Merriman M.C. Intracerebral beta-amyloid(25-35) produces tissue damage: is it neurotoxic? // Neurobiol. Aging. 1992.- V. 13.- P. 591-594.

259. Salinero 0., Moreno-Flores M.T., Ceballos M.L., Wandosell F. beta-Amyloid peptide induced cytoskeletal reorganization in cultured astrocytes. // J. Neurosci. Res. 1997.- V. 47.- P. 216-223.

260. Santiard-Baron D., Gosset P., Nicole A., Sinet P.M., Christen Y., Ceballos Picot

261. Identification of beta-amyloid-responsive genes by RNA differential display: early induction of a DNA damage-inducible gene, gadd45. // Exp. Neurol. -1999.-V. 158.-P. 206-213.

262. Sayre L.M., Perry G., Smith M.A. Redox metals and neuro- degenerative disease. // Curr. Opin. Chem. Bioi. 1999.- V. 3.- P. 220-225.

263. Sayre L.M., Zelasko D.A., Harris P.L., Perry G., Salomon R.G., Smith M.A. 4-Hydroxynonenal-derived advanced lipid peroxidation end products are increased in Alzheimer's disease. // J Neurochem. 1997.- V. 68.- P. 2092-2097.

264. Schubert D., Behl C., Lesley R., Brack A., Dargusch R., Sagara Y., Kimura H. Amyloid peptides are toxic via a common oxidative mechanism. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1995.- V. 92.- P. 1989-1993.

265. Schubert D., Chevion M. The role of iron in beta amyloid toxicity. // Biochem. Biophys. Res. Commun. 1995.- V. 216.- P. 702-708.

266. Seabrook G.R., Rosahl T.W. Transgenic animals relevant to Alzheimer's disease. // Neuropharmacology. 1999.- V. 38.- P. 1-17.

267. Selkoe D.J. Alzheimer's disease: a central role for amyloid // J. Neuropathol. Exp. Neurol. 1994. - V. 53. - P. 438-448.

268. Selkoe D.J. Alzheimer's disease: genes, Proteins, and therapy. // Physiological Reviews. 2001.- V. 81.- P. 741-766.

269. Sessa W.C. The nitric oxide synthase family of proteins. // J Vase Res. 1994. -V. 31. - № 3. - P. 131-143.

270. Shen Y.X., Xu S.Y., Wei W., Sun X.X., Liu L.H., Yang J., Dong C. The protective effects of melatonin from oxidative damage induced by amyloid beta-peptide 25-35 in middle-aged rats. // J. PINEAL RES. 2002. - V. 32. - P. 85-89.

271. Shimohama S. Apoptosis in Alzheimer's disease—an update. // Apoptosis. 2000. -V. 5.-P. 9-16.

272. Shimohama S., Tanino H., Fujimoto S. Changes in caspase expression in Alzheimer's disease: comparison with development and aging. // Biochem. Biophys. Res. Commun. 1999.- V. 256.- P. 381-384.

273. Sigurdsson E.M., Lee J.M., Dong X.W., Hejna M.J., Lorens S.A. Laterality in the histological effects of injections of amyloid-beta 25-35 into the amygdala of young Fischer rats. // J. Neuropathol. Exp. Neurol. 1997a. V. 56.- P. 714-725.

274. Sigurdsson E.M., Lorens S.A., Hejna M.J., Dong X.W., Lee J.M. Local and distant histopathological effects of unilateral amyloid-beta 25-35 injections into the amygdala of young F344 rats. // Neurobiol. Aging. -1996.- V. 17.- P. 893-901.

275. Simon H.U., Haj-Yehia A., Levi-Schaffer F. Role of reactive oxygen species (ROS) in apoptosis induction. // Apoptosis. 2000. - V. 5. - P. 415-418.

276. Singh I. N., McCartney D. G., Kanfer J.N. Amyloid beta protein (25-35) stimulation of phospholipases A, C and D activities of LA-N-2 cells. // FEBS Lett. 1995. - V. 365.- P. 125-129.

277. Slater T.F. Overview of methods for detecting lipid peroxidation. // Methods in Enzymology. V. 105. - New-York etc.: Academ Press. - 1984. - P. 283-293.

278. Smith C.V., Anderson R.E. Methods for determination of lipid peroxidation in biological samples. // Free Radic Biol Med. 1987. - V. 3. - P. 341-344.

279. Smith C.V., Anderson R.E. Methods for determination of lipid peroxidation in biological samples. // Free Radic Biol Med. 1987. - P. 3. - P. 341-344.

280. Smith M.A., Casadesus G., Joseph J.A., Perry G. Amyloid-beta and tau serve antioxidant functions in the aging and Alzheimer brain. // Free Radic Biol Med. -2002.-V. 33.-P. 1194-1199.

281. Smith M.A., Hirai K., Hsiao K., Pappolla M.A., Harris P.L., Siedlak S.L., Tabaton M., Perry G. Amyloid-P deposition in Alzheimer transgenic mice is associated with oxidative stress. // J. Neurochem. 1998.- V. 70.- P. 2212-2215.

282. Smith M.A., Perry G., Richey P.L., Sayre L.M., Anderson V.E., Beal M.F., Kowall N. Oxidative damage in Alzheimer's disease. // Nature. 1996.- V. 382.-P. 120-121.

283. Smith M.A., Richey Harris P.L., Sayre L.M., Beckman I.S., Perry G. Widespread peroxynitrite-mediated damage in Alzheimer's disease. // J. Neurosci. 1997.- V. 17.- P. 2653-2657.

284. Stadtman E.R. Metal ion-catalyzed oxidation of proteins: biochemical mechanism and biological consequences. // Free Radic. Bioi. Med. 1990.- V. 9.-P. 315-325.

285. Stadtman E.R. Protein oxidation and aging. // Science. 1992.- V. 257.- P. 12201224.

286. Stein-Behrens B., Adams K., Yeh M., Sapolsky R. Failure of beta-amyloid protein fragment 25-35 to cause hippocampal damage in the rat. // Neurobiol. Aging. 1992.- V. 13.- P. 577-579.

287. Su J.H., Anderson A.J., Cummings B.J., Cotman C.W. Immunohistochemical evidence for apoptosis in Alzheimer's disease. // NeuroReport. 1994.- V. 5.- P. 2529-2533.

288. Subbarao K.V., Richardson J.S., Ang L.C. Autopsy samples of Alzheimer's cortex show increased peroxidation in vitro. // J Neurochem. 1990. - V. 55. -P. 342-345.

289. Subbarao K.V., Richardson, J.S. and Ang, L.C. Autopsy samples of Alzheimer's cortex show increased peroxidation in vitro. // J. Neurochem. 1990.- V. 55.- P. 342-345.

290. Sunderman F.W. Metals and lipid peroxidation. // Acta Pharmacol Toxicol (Copenh). 1986. - V. 59 (Suppl 7). - P. 248-255.

291. Suo Z., Fang C., CrawfordF., Mullan M. Superoxide free radical and intracellular calcium mediate A beta(l-42) induced endothelial toxicity. //Brain Res. 1997.-V. 762.- P. 144-152.

292. Sushek C.V., Krischel V., Bruch-Gerharz D., Krutmann J., Kroncke K.D., Kolb-Bachofen V. Nitric oxide fully protects against UVA-induced apoptosis in tight correlation with Bcl-2 up-regulation. // J.Biol.Chem. 1999.- V. 274. - P. 61306137.

293. Sweeney W., Luedtke J., McDonald M. P., Overmier J.B. Intrahippocampal p-amyloid impairs win-shift radial mase performance in rats. // Neurobiology of Learning and Memory. 1977.- V. 68.- P. 97-101.

294. Szabo C. Physiological and pathophysiological roles of nitric oxide in the central nervous system. // Brain Res Bull. 1996. - V. 41. - № 3. - P. 131-141.

295. Tamatani M., Ogawa S., Niitsu Y., Tohyama M. Involvement of Bcl-2 family and caspase-3-like protease in NO-mediated neuronal apoptosis. // J. Neurochem. -1998.-V. 71.-P. 1588-1596.

296. Tao Z., Van Gool D., Lammens M., Dom R. NADPH-diaphorase-containing neurons in cortex, subcortical white matter and neostriatum are selectively spared in Alzheimer's disease. // Dement. Geriatr. Cogn. Disord. 1999.- V. 10.- P. 460468.

297. Thomas L.B., Gates D.J., Richfield E.K., O'Brien T.F., Schweitzer J.B., Steindler

298. D.A. DNA end labeling (TUNEL) in Huntington's disease and other neuropathological conditions. // Exp. Neurol. 1995.- V. 133.- P. 265-272.

299. Thomas Т., Thomas G., McLendon C., Sutton Т., Mullan M. p-amyloid-mediated vasoactivity and vascular endothelial damage. // Nature. 1996.- V. 380.-P. 168-171.

300. Thorns V., Hansen L., Masliah E. nNOS expressing neurons in the entorhinal cortex and hippocampus are affected in patients with Alzheimer's disease. // Exp. Neurol. 1998.- V. 150.- P. 14-20.

301. Tjurin V.A., Bagrov A.L., Fedorova O.V., Zhabko E.P., Tiurina Iu.Iu., Avrova N.F., Das D.K., Kagan V.E. Ganglioside protection of the erythrocyte membranes in myocardial ischemia. // BiuII. Eksp. Bioi. Med. 1992.- V. 114.-P. 366-368.

302. Tocco G., Freire-Moar J., Schreiber S.S., Sakhi S.H., Aisen P.S., Pasinetti G.M. Maturational regulation and regional induction of cyclooxygenase-2 in rat brain: implications for Alzheimer's disease. //Exp. Neurol. -1997.- V. 144.- P. 339-349.

303. Tringali G., Dello R.C., Vairano M., Preziosi P., Navarra P. Depolarization and a NO-donor stimulate interleukin-lbeta release from the rat hypothalamus via a mechanism involving caspase 1. // Neurosci. Lett. 1999.- V. 276.- P. 119-122.

304. Tyurin V.A., Tyurina Y.Yu., Avrova N.F. Ganglioside dependent factor, inhibiting lipid peroxidation in rat brain synaptosomes. // Neurochem. Int. -1992.- V. 20.- P. 401-407.

305. Ueda K., Fukui Y., Kageyama H. Amyloid p protein-induced neuronal cell death neurotoxic properties of aggregated amyloid p protein. // Brain Research. -1994.- V. 639.- P. 240-244.

306. Varadarajan S., Yatin S., Aksenova M., Butterfield D.A. Review: Alzheimer's amyloid beta-peptide- associated free radical oxidative stress and neurotoxicity. // J. Struct. Biol. 2000.- V. 130.- P. 184-208.

307. Vaucher E., Linville D., Hamel E. Cholinergic basal forebrain projections to nitric oxide synthase-containing neurons in the rat cerebral cortex. // Neuroscience. 1997.- V. 79.- P. 827-836.

308. Victorov I.V., Prass K., Dirnagl U. Improved, selective, simple and contrast staining of acidophilic neurons with vanadium acid fuchsin. // Brain Res. Protocols. 2000.- V.5.- P. 135-139.

309. Vitek M.P., Bhattacharya K., Glendening J.M., Stopa E., Vlassara H., Bucala R., Manogue K., Cerami A. Advanced glycation end products contribute to amyloidosis in Alzheimer's disease. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1994.- V. 91.-P. 4766-4770.

310. Vitek M.P., Snell J., Dawson H., Colton C.A. Modulation of nitric oxide production in human macrophages by apolipoprotein-E and amyloid-beta peptide. // Biochem. Biophys. Res. Commun. 1997.- V. 240.- P. 391-394.

311. Wallace M.N., Geddes J.G., Farquhar D.A., Masson M.R. Nitric oxide synthase in reactive astrocytes adjacent to beta-amyloid plaques. // Exp. Neurol. 1997.-V. 144.- P. 266-272.

312. Walsh T.J. Models of cholinergic degeneration: AF64A and 192-IgG-saporin. / Progress in Alzheimer's and Parkinson's diseases. Eds. Fisher A. et al. N.Y.: Plenum press. New York and London, 1997. - P. 667-674.

313. Walsh T.J., Opello K.D. The use of AF64A to model Alzheimer's disease. /In M. Woodruff and A. Nonneman (Eds.), Animal Models of Toxin-Induced Neurological Disorders. Plenum Press, New York. 1994.- P. 259-279.

314. Wendel A. Measurement of in vivo lipid peroxidation and toxicological significance. // Free Radical Biol. Med. 1987. - V. 3. - P. 355-358.

315. Wortwein G., Stackman R.W., Walsh T.J. Vitamin E prevents the place learning deficit and the cholinergic hypofunction induced by AF64A. // Experimental Neurology.- 1994.-V. 125.-P. 15-21.

316. Xiao X.Q., Zhang H.Y., Tang X.C. Huperzine A attenuates amyloid beta-peptide fragment 25-35-induced apoptosis in rat cortical neurons via inhibiting reactive oxygen species formation and caspase-3 activation. // J Neurosci Res. 2002. -V. 67.-P. 30-36.

317. Yagi K. (ed). Lipid Peroxides in Biology and Medicine. /New-York ets.: Academ. Press, 1982. P. 321 p.

318. Yamada K. Role of nitric oxide in learning and memory processes. // Nippon Yakurigaku Zasshi. 1998.- V. 111.- P.87-96.

319. Yamaguchi F., Richards, S., Beyreuther, K., Salbaum, M., Carlson, G., Dunnett S.B. Transgenic mice for the amyloid precursor protein 695 isoform have impaired spatial memory. // Neuroreport. 1991.- V. 2.- P. 781-784.

320. Yamaguchi Y., Kawashima S. Effects of (J-amyloid-(25-35) on passive avoidance, radial-arm maze learning and choline acetyltransferase activity in the rat. // Eur. J. Pharmacol. 2001.- V. 412.- P. 265-272.

321. Yan S.D., Chen X., Fu J., Chen M., Zhu H., Roher A., Slattery T., Zhao L., Nagashima M., Morser J., Migheli A., Nawroth P., Stern D., Schmidt A.M. RAGE and amyloid-P peptide neurotoxicity in Alzheimer's disease. // Nature. -1996.- V.382.- P.685-691.

322. Yang S.N., Hsieh W.Y., Liu D.D., Tsai L.M., Tung C.S., Wu J.N. The involvement of nitric oxide in synergistic neuronal damage induced by beta-amyloid peptide and glutamate in primary rat cortical neurons. // Chin. J. Physiol. 1998.-V. 41.-P. 175-179.

323. Yankner B.A., Duffy L.K., Kirschner D.A. Neurotrophic and neurotoxic effects of amyloid beta protein: reversal by tachykinin neuropeptides. // Science. -1990.- V. 25.- P. 279-282.

324. Yankner, B.A. Mechanisms of neuronal degeneration in Alzheimer's disease. // Neuron. 1996.- V. 16.- P. 921-932.

325. Yatin S.M., Yatin M., Varadarajan S., Ain K.B., Butterfield D.A. Role of spermine in amyloid beta-peptide-associated free radical-induced neurotoxicity. // J Neurosci Res. 2001.- V. 63.- P. 395-401.

326. Yehuda S., Carraso R.L., Mostofsky D.I. Essential fatty acid preparation (SR-3) rehabilitates learning deficits induced by AF64A and 5:7-DHT. // Neuroreport. -1995.- V. 6.- P. 511-515.

327. Yew D.T., Wong H.W., Li W.P., Lai H.W., Yu W.H. Nitric oxide synthase neurons in different areas of normal aged and Alzheimer's brains. // Neuroscience. -1999.- V. 89.- P. 675-686.

328. Yun H.Y., Gonzalez-Zulueta M., Dawson V.L., Dawson T.M. Nitric oxide mediates N-methyl-D-aspartate receptor-induced activation of p21ras. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1998.- V. 95.- P. 5773-5778.

329. Zhang J., Snyder S.H. Nitric oxide in the nervous system. // Annu. Rev. Pharmacol. Toxicol. 1995.-V. 35.- P.213-233.

330. Zhou Y., Gopalakrishnan V., RichardsonJ. S. Actions of neurotoxic beta-amyloid on calcium homeostasis and viability of PC12 cells are blocked by antioxidants but not by calcium channel antagonists. // J. Neurochem. 1996 - V. 67.- P. 14191426.

331. Zweig R.M., Ross C.A., Hedreen J.C., Steele C., Cardillo J.E., Whitehouse P.J., Folstein M.F., Price D.L. Neuropathology of aminergic nuclei in Alzheimer's disease. // Prog. Clin. Biol. Res. 1989.- V. 317.- P. 353-365.