Автореферат и диссертация по медицине (14.00.45) на тему:О-метилирование катехоламинов в мозге крыс при экспериментальном алкоголизме

ргб оа

2 2 ЬйГ

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ И ВДИВДНСКОЙ

ПР01ШЛЕНН0СТИ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НАУЧНЫЙ ЦЕНТР НАРКОЛОГИИ

На правах рукописи

УДК 616:89-008.441.13-071 616.031-008.94-074

Кузнецове Марина Николаевна

О-МЕТЯЛИРОВШЕ КДШОЛАМИНОВ В МОЗГЕ КРЫС ПРИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОМ АЛКОГОЛИЗМЕ

специальность и.оо.45-наркология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Москва 1994

Работа выполнена в Иаститута иедико - биологических проблей наркологии (директор член-корр.РАМН,профессор И.П.Анохина) Государственного научного центра наркологии 1£3 России (директор профессор Д.Г.ВруОлввсюй)

Научный руководитель чден-корр.РАШ.профессор,доктор шдацинских наук И.П.Ашхвна

Официальные оцпоненты:

члвн-корр.РАЫН,профессор,доктор медицинских наук Л.Ф.Панченко кандидат медицинских наук Т. Ы. Иванова

Ведущее учреждение - НИИ Фармакологии Рамп

Защита диссертации состоится •_"_1994 г.в_.чао.

на заседании специализированного совета Д 074.50.01 при ГНЦ наркологии ( г.ыосква, 121921* гар.Ы.ШГЕЯьцэвскиа, д.З ).

о диссертацией шкно ознакомиться в бнйзнотекз ПЩ нвркалогш Автореферате разослан "_*_1994 г.

Ученый секретарь СоециалиаиравшЕого совета кавдадат бнодагячэшшх наук

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность исследования.Согласно данным современных нейрохимических и физиологических исследований, существенная роль в патогенезе алкоголизма принадлежит нарушениям обмена и . функций катехолзминовой система мозга (И.П.Анохина 1987,1992,1993).Однако, до настоящего времени остаются не до конца выяснеными конкретные причины этих нарушений и ш роль в генезэ различны! проявлений болезни, что, в своп очередь, ограничивает возможность изыскания и разработки наиболее эффективных и специфичных средств патогенетической терапии алкоголизма и его осложнений. В связи с этим актуальным является дальнейшее, более углубленное исследование механизмов нарушения обмена и функций катехоламиновой система мозге при алкогольной интоксикации и развитии зависимости от алкоголя.

По современным представлениям ферменты катаболизма катехол-аминов,помимо метаболической инактивации,катализируют образование функционально активных продуктов.обладаицих широким спектром действия на различные биохимические,клеточные и физиологические процессы (А.М.Утевский и соавт.1974,1978; А.Е.Медведев 1990;В.З.Горкин И соавт.1971,1992;маоз et al.I988fPickar et al.1990; Halbreih et al.I990¡ Sano et al.I992; Siever et al.1993; üllbertson et al. 1994 И др.).

Установлено также, что для катехоламинов характерна множественность путей юс метаболизма, и к настоящему времени появляется все большее число данных,доказывавдих,что каждый путь превращения функционален и участвует в проявлении различных биохимических и физиологических эффектов катехоламинов.Именно в этом,как полагают (А.М.Утевский и соавт.1975,1978) заключается причина столь много-

образного спектра проявлений функциональной активности и регуля-торного действия катехоламинов.

Возможно .исследование разных путей метаболического превращения катехоламинов и изучение особенностей нарушения функциональных взаимосвязей и соотношений давду ними в условиях алкогольной интоксикации позволит в определенной мере раскрыть причины нару- . шенлй при алкоголизма функциональной активности катехоламшювой системы и понять механизма мждаственных аффектов алкоголя,включая дёйствие последнего на различные функции ЩЮ.

Б настоящее время имеется довольно "много данных,свидетельствующих о существенных количественных и качественных изменениях, при хронической интоксикации алког.олем,каталитической активности и физико-химических характеристик одного из основных ферментов катаболизма катехоламинов - МАО, катамзирувдей окислительное де-заминирование медиаторов ( А.З.Дроздов 1990; Я.Н.Овчинникова, В.З.Горкин 1989,1992,1993;Tabakoff et al.l9e5,l989;sullivan et al. 1990,Knorring et al.l9?i;siierif et al.l992;Devor et &1.1993).МаЛО

изученными при алкоголизма остаится другие пути катаболизма катехоламинов .

В связи с эим представляется вагшш исследование в условиях хронической алкогольной интоксикации,наряду с "шноамиаоксвдазншУ, других путей метаболического превращения катехолашнов. И,в частности, интерес представляет изучение,на разных стадиях развития алкоголизма, особенностей катаболпзыа катехола!линов по пути катализируемого КОНТ 0-метилирования,с которым в литературе связывав! воз-шшость изменений в нейро- и психотропной сшкгра актнвносга катехолашнов (А.И.Утевский 1976,1978: В.Н.АНДврс.Д.Д.ОрлоВская 1932; Wyatt et al, 1980;tlarrullo ana Friedhof i 1981).

Известно,что эффекты алкоголя реализуются через разные структуры мозга, отличные по своей биохимической организации и функциональной специфичности. Однако .принимая во внимание .что гипоталамусу отводится центральная роль в организации мотивационного поведения ( К.В.Судаков 1987 ) и через гипоталамус осуществляется интеграция эмоционального поведения и вегетативных реакций организма (И.Н.Боголепова 1979; Л.Н.Пайкова 1985),эта структура мозга экспериментальных живогных была выбрана в качества объекта для проводимых исследований.

Цель и задачи исследования. В соответствии с вышеизложенным, целью настоящей работы явилось изучение особенностей обмена кате-холаминов по пути катализируемого КОМТ О-мвтилирования в мозге крыс при экспериментальном алкоголизме и определение роли изменений этих процессов в патогенезе алкогольной зависимости.

Для достижения поставленной цели били сформулированы следующие задачи:

¡.исследовать активность растворимой и мембраносвязанной КОМТ,содержание катехоламинов и некоторых продуктов катализируемого КОМТ метаболического превращения катехоламинов в гипоталамусе крыс при алкогольной интоксикации и экспериментальном алкогольном абстинентном синдроме;

2.охарактеризовать активность КОМТ и уровень катехоламинов в гипоталамусе крыс с разным уровнем первичной алкогольной мотивации; 3.исследовать содержание катехоламинов и продуктов их катаболизма в условиях ремиссии экспериментального алкоголизма и при однократном введении раствора алкоголя посла длительного его лишения; 4.оценить возможную роль нарушений обмена катехоламинов по пути 0-ш тонирования в формировании патологического влечения к алкого-

ли и зависимости от алкоголя.

Научная новизна. В работе впервые исследована динамика изменения активности растворимой и меыбраносвязанной катехол-О-ывтил-трансферазы в гипоталамусе крыс при экспериментальном алкоголизма,на разных этапах развития патологического процесса.

В результате проведенных исследований показано, что у экспериментальных животных, проявляющих высокое влечение к алкоголю после хронической алкогольной интоксикации,активность растворимой ка-техол-О-ыетширансфзрази достоверно выше по сравнению с крысами с низкой алкогольной мотивацией.

Установлено, что в условиях формирования экспериментального алкоголизма, при "синдроме отмены",в гипоталамусе крыс происходит значимое увеличение активности растворимой и мембраносвязанной ка-техол-0-мзтилтрансферазы.и нарушение баланса нативных катехолами-нов и продуктов их метаболического превращения.

Показано, что выявленные изменения метаболизма катахолашнов имеют связь с развитием зависимости от алкоголя.

Впервые,в условиях экспериментальной ремиссии и при однократной алкогольной нагрузке, которая может провоцировать в ремиссии обострение патологического влечения к алкоголю,в гипоталамусе крыс исследованы содернанге катехоламанов и продуктов их катаболизма. При атом установлено, что даке после длительного лишения животных этанола (2 месяца) не происходит восстановления до норм измененных,при хронической интоксикации алкоголем и коротком его отнятии (24 часа), показателей обмена кагехоламинов. И только однократное внутрибршшюэ введение еевотшм раствора этанола в период экспериментальной ремиссии сопровождается восстановлением баланса меа-ду катехолаышаыи а их метаболитам, что иояат рассматриваться как

один из возможных патохимичзских механизмов рецидива алкольной зависимости.

Апробация работа. Тема диссертации утверждена на заседании Проблемной комиссии ГНЦ наркологии МЗ РФ от I ноября, 1993 г. Основные материалы и положения диссертации доложены и утверждены на научных конференциях лаборатории психофармакологии ГНЦ наркологии МЗ России ( Москва,1992,1993 ), меялабораторной конференции института медико-биологических проблем наркологии ( Москва,1993 ).

Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на 103 страницах машинописного текста и состоит из введения,обзора литературы, экспериментальной части,обсуждения,выводов и списка литературы, включающего 297 наименований,в т.ч. 74 отечественных и 223 зарубежных авторов.Работа проиллюстрирована 7 таблицами и 8 рисунками.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ Для выполнения поставленных задач эксперименты были проведены на 280 белых беспородных лабораторных крысах-сэмцах весом 180-210 г.

I.Модели экспериментального алкоголизма.Методы физиологического тестирования тавотных.

1.В опытах с однократным введением этанола использовали 20 % раствор этилового спирга.в дозе-2.5 г/кг веса крысы. Раствор этанола вводили внутрибршшнно за 30 минут до декапитации животных.

2.Хроническую алкоголизацию крыс,с начальной массой тела 100120 г, проводили путем постепенного (на протяжении 3-х недель) замещения воды в их рационе на 5Х-ти,НМ> и 15?! водный раствор этанола, который использовался до конца эксперимента в качестве единственного источника питья.Общая продолжительность алкоголизации крыс составляла 7 месяцев.Контрольных животных содержали в аналогичных

условиях,но без этанола в диэте.

3.Короткое и длительное отнятие этанола проводили после продолжительной (в течении 7 месяцев) алкоголизации крыс.Короткое отнятие составляло - 24 часа и рассматривалось как экспериментальный "синдром отмены".Длительное отнятие продолжалось 2 месяца и служило моделью экспериментальной "ремиссии".

4.На фоне 2-месячного отнятия алкоголя проводили однократное введение животным 25% раствора этанола (в дозе 2.0 г/кг веса кры-

"сы, внутрибршинно),что служило экспериментальной моделью для изучения механизмов обострения патологического влечения к алкоголю в ремиссии.

5.Отбор животных по уровню первичной алкогольной мотивации проводили с использованием двух-поилочного теста. Животным,находящимся в индивидуальных клетках, предоставляли свободный выбор между двумя поилками, в одной из которых содержался 10% раствор этанола, в другой-вода.

Тестирование проводили в течении 10 дней с ежедневной регистрацией количества выпитой жидкости. К предпочитающим этанол были отнесены крысы,потреблявшие 4.0-7.5 г/кг этанола,к отвергающим алкоголь - 0.05-0.8 г/кг.После последнего дня тестирования животных высаживали в общие клетки,сроком на 7 дней, и в качестве источника питья предоставляли только воду.

6.Отбор животных по уровню алкогольной мотивации,после длительного (в течении 6 месяцев) потребления раствора этанола в качестве единственного источника питья, проводили по ме ходу, о снованному на условнорефлекторной реакции предпочтения места,связанного с доступностью алкоголя (Т.Т.Бондаренко,1991). Тестирование проводили в плексигласовой камере, состоящей из 3-х-сообщающихся отсеков-свет-

лый, темный и средний, из которого животное начинало движение,переходя из отсека в отсек.

Длительность наблюдений составляла 10 минут,после чего вычисляли время в % от общего времени наблюдения,в течении которого животное находилось в предпочитаемом и отвергаемом отсеках.

Через 2 месяца алкоголизации 15^-ым раствором этанола проводили предварительное тестирование. Для каждого животного определяли предпочитаемый отсек и далее кавдое из этих животных высаживали в отвергаемый отсек, где однократно вводили 15 %-ый раствор алкоголя в дозе 2.0 г/кг веса,в/бр., после чего проводили повторное тестирование .Из общей группы зкивотных после тестирования были отобраны крысы, не проявляющие четкого влечения к алкоголю ("середняки", преаываюпзга приблизительно равное количество времени в предпочитаемом и отвергаемом отсеках) и высажены на дальнейшую принудительную алкоголизацию.

Через 6 месяцев алкоголизации (общая продолжительность) тестирование повторяли по той же схеме.Если реакция предпочтения у крыс смещалась в сторону ранее отвергаемого отсека, с которым связана доступность алкоголя, и время пребывания в нем превышало 50%, это считалось признаком высокого влечения, к алкоголю, сформированного в процессе длительной алхогодазацш.

Посла последнего тестирования до момента взятия биологического материала алкоголизацию продолжали еще I месяц.

2.Определенна содержания катехоламююв и их метаболитов в гипоталамуса крас.

Определение содержания свободных катехолвшнов (КА) и их метаболитов в гипоталамуса экспериментальных ¡животных проводили методом высокоэффективной жидкостной хроматограф® с электрохимической дэ-

текцией (ВЭЖХ-ЭД) на хроматографе СС-4, фарш ВАз.США.

Катехоламины и метаболиты разделяли на оОрадакно-фазной колонке - Nucleoeil-Cjg ИЛИ Adeorbosphere-C18, 5/>, 1?Ох4.6 tus (Alltech, США) С преколонкой - Adeorboephere-Cia, 5/», 10x4.6 mm (Alltech) ,И определяли электрохимически, используя амперометрический детектор lc-4b с рабочим электродом - mfiooo или ипо4б (bas,США).

Животных декапитировали,быстро на холоду выделяли гипоталамус а замораживали его при -?0°С до момента определения КА.Гомогенизацию осуществляли в холодной (0-4°С) o.IH нсхл4 с добавлением внутреннего стандарта-дигидроксибанэиламина (ДГЕА)-ЮО нг/мл. Гомогенизацию проводили в стеклянном гомогенизаторе с тефлоновыы пестиком,помещенном в ледяную баню;при 5000 об/мин,30 сек. Пробы центрифугировали при I0000g*20 минут, (t-o-4°c) .Отбирали али-квоту надосадочной жидкости и фильтровали центрифугированием через капроновые фильтрн-о.з ия.Отбирали 20 шел фильтрата и вво-

дили в хроматогра<|ическую систему.

а ) .Для разделения катехоламинов-норадреналина (НА ), адреналина (А ), дофамина (ДА), в качестве подвижной фазы использовали 70 мМ натрий-фосфатный буфер (nb2hfo4 ), содержащий 33 ыМ лимонной кислоты, i Ш ка^ЭДТА,о.5 мм гептансулъфоната натрия,Ш» метанола (v/v), (рН=5.2)

(Krstulovio,l98l).

Определение КА осуществляли на стеклоуглеродаоы электрода (hfiooo или MF1046) при потенциале +0.6 в относительно хлорсеребряного-Ag/AgCl ЭЛвКТрОДВ СраВНеШЯ (MW2021, BAS). Скорость протока подвижной фазы составляла о.6 мл/ыии.

б).Для разделения метаболитов катохоламинов - 3-штокси,4-охси-фенилгликдяя (ЫОЗЖГ) .ногиетанейшна (НМН ), з, 4-диоксифенилуксусвой кислоты (ДОФУК ), гомованилиновой кислоты (ГВК) использовали подвих-

ную фазу следующего состава:о.i к натрий-фосфатный буфер (рн-з.а), содержащий o.ismM ЭДТА.о.зиМ гептансульфоната натрия и is* метанола (v/v).

Детекцию осуществляли на стеклоуглеродном электроде при потенциале +0.85 в против хлорсеребряного электрода'сравнения. Скорость потока составляла о.8 ил/мин.

Обработку ДаННЫХ проводили на интеграторе CI4100 (LDC/Kilton Roy), или на компьютере нсимго,Hyundai с использованием хрома тографпе-ской програмш-712 (ф.аивоп,Франция).

В качестве сравнения использовали смесь катехоламинов или метаболитов, при концентрации кэвдого компонента в смеси 50нг/мл O.IH нсю4.

Э.Определение активности Катехол-О-метилтрасферазы (КОМТ). а).Выделение растворимой и меибраяосвязанной КОМТ из гипоталамуса

КрЫС (Nissenen,19В5).

Животных декапитировали, из выделенного мозга быстро извлекали на холоду гипоталамус и замораживали при-7о°с до момента выделения фермента.

Гомогенизацию проводили при о-4°с в iov (v/v) охлажденного ю мМ калий-фосфатного буфера,рН=7.4,содержащего о.5мМ дитиотрейтол. Фракции, содержащие растворимую и мембраносвязанную КОМТ, получали методом дифференциального центрифугирования. Для осавдения тяжелых фракций,гомогенат центрифугировали при 7oogxio минут, и полученный супернатант-при юооодхзоыин, (t-o-4°c).

Надосадочную жидкость .полученную на предыдущей стадии, центрифугировали при б7ооодхбомин (t»o-4°c) ,для осаждения мшсросом. Активность растворимой (РС)-КОМТ определяли в полученном .после последнего центрифугирования,супернатанте.Активность мембраносвязанной (MC)-КОМТ регистрировали в отмытой фракции микросом, для этого

осадок ре суспендировали в среде гомогенизации и переосавдали в том та режиме.

Концентрацию бежа определяли по o.H.Lowry et ai (1951), в присутствии DS-Na.

б).Определение активности КОМТ.

Активность КОШ? определяли радиометрическим методом (Jeffery,Roth, 1984,Jonas,1974) в среде следующего состава (указаны конечные концентрации) : 5омМ калий-фосфатный буфер(рН=7.4);г.5мМ Мдс12;1оомкМ ''(14с)-sah (о.бмКи/ммоль); imM датиотрейтол; imM ЭДТА;imM паргилин,-50мкМ ДСФУК-в случае определения активности МС-КОМТ, imM-b случае-РС-К0МТ;и so мкл препарата фермента (-iso мкг).Б контрольную пробу вместо ДОФУК вносили равный объем буфера.

.Пробы инкубировали зо минут,при 37°с. Реакцию останавливали добавлением 25 ЫКЛ HCL ковд.

Экстракцию радиоактивного продукта осуществляли по методу (Jonas, Gershon,1974). В кавдув пробу вносили по о.ов г Naci и добавляли 1.25 ыл этилацетата. Посла is-сек. тщательного перемешивания центрифугировали 5 минут при 2000 об/мин.Из пробы отбирали i мл органической фазы и добавляли равный объем 0.3 H HCl,перемешивали is", повторно центрифугировали.Отбирали i мл органической фазы в сцин-тилляционный флакон,добавляли i мл этанола и заливали м мл сцин-тилляционной смеси (о.з г ПОПОП и 4 г ППО в i л толуола). Радиоактивность просчитывали на жидкостном сщштилляционном счетчике hack - beta 1215/1216(LKB-waiiak,Швеция).Активность фермента выражали в пкмоль радиоактивного продукта/мг белка/мин.

4.Статистическая обработка данных.Приведенные в таблицах и на рисунках данные представлены в виде средних значений 6-12 измерений со стандартной ошибкой М^га.Результаты исследований обрабатывали ста-

тистически с использованием параметрического t-критерия Стьюдента.

РЕЗУЛЬТАТУ И 0БСУ2ДЕНИЕ I.Активность КОМТ,содержание катэхолашпюв и их метаболит .з при острой и хронической алкогольной интоксикации крыс.

Для оценки возможного влияния этанола на метаболизм катехол-аминов по цути катализируемого КОМТ О-метюшрования в работе, в условиях острой и хронической алкогольной интоксикации,исследовалась активность растворимой (РС) в мембраносвязанноЯ (МС) КОМТ, содержание катехоламшов (КА) и продуктов их метаболического превращения в гипоталамусе экспериментальных животных.

Í.I.Активность КйД а содержание катехолшгаов в гипоталамусе крыс при однократной алкогольной интоксикации.

Результаты исследования активности ШШ и содеряания катехол-еьеянов в гипоталамусе крыс при острой алкогольной интоксикации пред-ставланы в таблщзх-1,2.Как видно из таблиц, при однократном введении 20» раствора этанола в дозе а.5 г/кг веса, в/бр.,не установлено значимых изменений активности фермента.При этом,через зо минут поело введения раствора едкого ля, в гипоталамусе крыс выявлено достоверное еншанпв уровня НА. Установленное сштазнне уровня норадреналина согласуется с данными литератур!,в которых отмечено усиление скорости высвобождения НА п его катаболизма в мозге животных после однократного ввадошш алкоголя (А.И.Балаклиевскнй и соевт.,1988;капеуик1 et al. 1991), что соцровоадвэтся сеиеэнизм уровня самого медиатора и увеличением продуктов его метаболического превращвния-норметанефри-на (НМН) И 3-«ЭТОКСИ,4-0КСИфениЛГЛПК0ЛЯ (MOSEP) ( Hunt, Hajchrovlca, 1974f Karotta et а1.1976гИ.П.АЕОДШа И С08ВТ. 1975,1988 ).

Учитывая литературные сведения об отсутствии в мозге изменений активности МАО вря острой алкогольной интоксикации (Tabak.ofí,Boggan,

ТАБЛИЦА 1.

активность КОЙ Г В Г II П О Г й л й II и С £ И Н Т й К Г И II « Крис И НА ФОНЕ ОДНОКРАТНОГО ВВЕДЕНИЯ Р - Р А »ТИНОЛЯ <2.3 ГС/ИГ , С н ± К )

грипп« «ИВОТНМК К 0 Н Т <пкнола/«г в/кюО

РАСТВОР НИ. В Е Н В Р.-С В Я 8.

КОНТРОЛЬ 1 паю) 130.40 £ 12.80 8.05 £1.94

ОДНОКРАТНОЕ БВЕДЕННЕ Р-РЙ ЭТАНОЛА (2.5 г/кг;в/6р ) ( П в 9 > 101.5919.87 11.90 ±1.79

Т Й Б (1 И Ц Й 2 .

СОДЕРЖАНИЕ КЙТЕХОААНИНОВ В Г II П О Т й Л й П I) С £ интиктник КРИС И Н Я »ВНЕ ОЦНОКРЛТИОГО ВВЕДЕНИЯ РАСТВОРА ЭТАНОЛА (2.5 г/кг;ь/«р )

ГРИППЫ ВИБОГНиК К А Т Е К 0 Л И И II II (нг/гт»0

И А • А & А

КОНТРОЛЬ С п в 16) 1438.61 96.1 61.7 ±6.47 376.84 32.5

ОДНОКРАТНОЕ ВВЕДЕНИЕ Р-Рй 3 Тй-Н 0 А А С 2.5 г/кг',л/ер ) (П! 7 ) а 934.01142.3 ези ±12.5 327.3473.3

♦ - рг 0.02 - па срйшвзю с шшслгя

1974;А.З.Дроздов,1986),а также результаты настоящей работы, в которой не выявлено значимых изменений активности КОМТ, можно полагать, что снижение уровня НА и при этом повышение содержания продуктов его катаболизма при однократном введении этанола (Barbaccia et ai.,i982; Borg et а1.,19аэ ) связано не с увеличением активности МАО и КОМТ,а „ с большей доступностью норадреналина действию этих ферментов, вследствие усиленного выброса медиатора в синапгическую щель. 1.2.Активность КОМТ при хронической алкогольной интоксикации и на фоне суточного отнятия алкоголя.

При длительном принудительном, потреблении 15^-ого раствора этанола (в течении 7 месяцев) в гипоталамусе крыс установлено статистически значимое увеличение активности растворимой КОМТ (табл.3). Через сутки после последнего контакта с алкоголем, когда нарастает выраженность основных проявлений "синдрома отмены",отмечено еще большее повышение активности этого фермента ( на 68£ по сравнению с контрольными значениями ). Изменение активности мембраносвязэнной КОМТ имело ту же направленность и достигало статистически значимого увеличения на фоне суточного отнятия алкоголя.

Т*ВЛИЦ4Э

лктикностъ к о и т » гилотллдписс ХРОНИЧЕСКИ АЛХОГОЛИЭНРОВ4ННЫХ КРЫС И Н Л »OHE ОТМЕНИ АЛКОГОЛЯ (Itm 1

rtunnu ЯН50ТНЫК К О И Г <пкнвдмч>

РЛСТЬОРНИ. hems р.-с в я а.

КОНТРОЛЬ 1 Г) S 10 } 130.40 ♦ 12.88 е.оз г-«.*«

ХРОНИЧЕСКАЯ ЙЛКОГОЛИЭЛЦИЯ ( 7 n t с ЯЦ CS ) 1 П • <2 1 163. «±14.«'* * 13.40 t г.гз

ОТМЕНА Э. Т й Н 0 Л а (24 Ч Л С Д) « п « * » гог. 1« ♦ «2.31* * 14.08 * 1.77 *

ф- PI о.оз *» - рс o.ooi - по срявнени» с icoktpo<iew

13

Установленное увеличение активности Катехол-О-ыетилтрансфаразы представляет особый интерес в связи с возможностью образования, на пути катализируемого КОМТ О-ыетилирования,продуктов {э,4-диматокси-проЕзводных КА), близких по биологической активности соединениям с психо- И нейротропныи действием (А.М.УтевскИЙ 1976,I978;Kalbhen,Braun i97ï; Marruiio and Friedhoff,1981 ). И.как отмачают в литературе ( В.Н.Аддерс.Д.Д.Орловская 1982 ),вероятность недифференцированного О-метилирования КА,- с образованием и накоплением этих продуктов,возрастает при снижении или блокада катализируемого МАО их метаболического превращения.

В настоящее время, рядом исследователей показано,что при хронической алкогольной интоксикации (Gottfries et al.l975;Oreland et al. 1983,-Giiier «t ai. 1934) и абстинентном синдрома (А.К.Батурин,Л.В.Саввина 1979; Л.Н.Овчинникова и соавт.1989) в мозге происходит снижение скорости катализируемого МАО окислительного дезаминирования биогенных аминов. Установлено таксе шразкенное снижение у Сольных алкоголизмом ( Faraj et al.1987; Tabakoff et al.1988,1990; Sullivan et.al. 1990,-Knorrlng et al.l991;Sherif et aX.l992;pevor et al. 1993) .особенно при развитии алкогольного абстинентного синдрома (ААС ) и алкогольного делирия (АД) (Major et ai.'i98i; А.3.Дроздов,И.П.Анохина 1986, 1990), активности тромбоцитарной МАО,которая,как считается,в определенной мере отражает активность МАО ЦНС.Учитывая эти данные о снижении активности МАО и обнаруженное нами увеличение активности КСМГ, можно предполагать,что при хроническом алкоголизме .особенно в состоянии абстиненции и при развитии алкогольного делирия, возможно образование даметоксипроизводных КА, которые,как свидетельствуют данные литературе,обладают свойствами психотомиметиков, могут вызывать различные двигательные расстройства и нарушения поведения ( friedhoff,

Winkle 1967;Kalbhen 1973;Guldberg and Marsden 1975 И др).

1.3.Активность КОМГ и содержание КА в гипоталамусе крыс с разным уровнен влечения к алкоголр после хронической алкогольной нагсксжсации.

Клиническая практика свидетельствует,что центральное место в структуре синдрома зависимости занимает патологическое влечение к алкоголя ( Н.Н.Иванец а соавт. ,1993 ),и степень выраженности патологической потребности в алкоголе определяет тяжесть алкогольной абстиненции (Н.Н.Иванец.А.Л.Игонин 1983;Д.ФЛриишин,1989).

Учитывая полученные вами результаты по увеличению активности КШЕ в гипоталамусе хронически алкоголизированных крыс, цела сообразным представлялось определить-является ля такое изменение активности фермента общим отвзтоы на длительное воздействие алкоголя илп.возмонно,связано с формированием, в процессе хронической интоксикации этанолом .патологической алкогольной мотивации.

С этой целью работа была продолжена не крысах,отобранных после хронической алкогольной интоксикации по уровню влечения к алкоголя, который оценивался методом, основанным на условнорефлекторной реакция предпочтения места,связанного с доступностью алкоголя (см. "Материалы а метода">.Учитывая,что высокое влечение к алкоголю появлялось у животных, которые в предварительном тестировании не обнаруживали выраЕэнной алкогольной мотивации,признавалось,что влечение к этанолу у этих животных было сформировано в процессе длительной алкогольной интоксикации. Наличие высокого уровня алкогольной мотивации,можно полагай», указывает на то, что у этой группы животных развился синдром алкогольной зависимости.

Результаты исследования активности КОМТ в гипоталамусе крыс с разным уровнем влечения к алкоголю представлены в табл.4.

ТАБЛИЦА 4.

АКТИВНОСТЬ КОНТ В ГИПОТАЛАПУСЕ ХРОНИЧЕСКИ АЛКОГОЛИЗИРОВАННЫХ КРЫС,ОТОБРАННЫХ ПО У Р 0-BIID АЛКОГОЛЬНОЙ ПОТИВАЦНН ( Н t а )

Г Р 1» n n U ИИВ0ТН11Х КОНТ (лкполь/мг в/пин 5

РАСТВОРИ П. И Е Н Б Р.-С в я а.

С НИЗКИМ УРОВНЕН длкого.ль- лНОЙ МОТИВАЦИИ 111=91 08. Ов i 27. SO 0.65+ 1.2&

СВЫСОКИИ УРОВНЕН АЛКОГОЛЬ -НОН МОТИВАЦИИ t п = 10 > 184.50 + 34.15 * 12.13 t 2.46

, • - PZ0.02

ТАБЛИЦА 3.

СОД ЕР1АНИЕ К А Т СX О Л А И ИНОВ В ГИПОТАЛАПИСЕ ИРОНИЧЕСКИ ААКОГОЛИЭНРОВАННиХ К Р и С , ОТО-БРАННиХ ПО УРОВНИ АЛКОГОЛЬНОЙ МОТИВАЦИИ.

гриппы N И В 0 Г Н II X КДГСХОААНИНЬМ нг/V-rv)

м А ДА

С НН9КИН УРОВНЕН АЛКОГОЛЬ -НОЯ МОТИВАЦИИ С п г 9 1 1304.0 t «5.2 43.7 + 3.9 493.0*53.0

С В U С 0 К ИИ УРОВНЕЙ АЛКОГОЛЬ -НОЙ МОТИВАЦИИ t л = 10 ) . 1100.0 ♦ 192.0 ** 113.7111.1 460.0+42.2

* * - PL О. О 01

Как видно из таблицы, у животных .проявляющих высокое влечение к этанолу посла хронической алкогольной интоксикации, по сравнению с крысами с низким уровнем влечения, активность растворимой КОМТ выше в 2.1 раза (р<0.02).Направленность изменения активности мембрано-связэнной КОМ в этих группах крыс имеет подобный характер, но менее выражено.

Таким образом, в гипоталамусе животных, обнаруживших высокое влечение к этанолу после длительной алкогольной интоксикации,отмечено значительное увеличение активности КОМТ.Принимая во внимание, что у животных с разным уровнем первичной алкогольной мотивации,который определялся методом количественной оценки потребления жидкости в течении м дней при предоставлении животным свободного выбора между ю$ раствором этанола и водой, по активно с га фермента не выявлено значимых отлагай,можно полагать,что увеличение активности КОМТ, особенно растворимой формы, происходят при длительном действии этанола и имеет связь с формированием синдрома алкогольной зависимости с патологическим влечением к алкоголю.

Результаты определения содержания кагехоламинов (КА) в этом же эксперименте представлены в таблице 5.Проведенное исследование позволило установить достоверное увеличение (в 2.6 раза,р<0.001) уровня адреналина в гжгагаламусе крыс с высоким влечением к алкоголю.

Известно,что феркеня синтеза адроналкна -фенилэтаноламин-н-ме-жгараисфэраза ( ФЗА-w-® ) имеет экегранейрональнув локализацию (ЫмюПа et ai 1937),Kai« И раСТБОрШЗЯГ КОМТ (Hanson and SeUestrom iSB3g nivstt et ai.,1983; Jefffary and Roth 1984,1985),и образование 8лрэн£Я£?!а происходи? в гяиальшЕ клэгках гипоталамуса после зк-страшЕронельного гоглодэшя норадрен&шнэ из сшаятаческой щадя (tinnoila et al. ,190?). Возионно, что у крас с шсокш влечением в

алкоголю при длительной потреблении этанола усиливается экстраней-рональный метаболизм,о чем свидетельствует и высокая активность растворимой КОМТ.и высокий уровень образования адреналина из норадрв-налина (г—о.в).

1.4.Содержание КА и та метаболитов при хронической алкогольной интоксикации и на фона суточного отнятия алкоголя.

Результаты данного фрагмента рабою представлены в таблицах 6,7. Определение О-метаяированных и дазаминированных метаболитов ката-холаминов в гипоталамусе хронически алкоголизированных крыс показало выраженное увеличение содержания НМН.ва 74* ш сравнению с контролем (Р<0.05),и тенденции к увеличению уровня ШФЕГ (табл.6). При атом исследование натавных катехолаиинов {свободная форма) на фона длительной алкогольной интоксикации не выявило значимых изменений в их содержании,что, вероятно связано с компенсаторным усилением процессов синтеза КА. Полученные данные подтверждаю литературные сведения, в которых на основании целого ряда вкспериментальшх нэблвдэ-ний,делается заключение о том, что усиленный расход катехолаыикщ под влиянием длительного потребления алкоголя по механизмам обратной связи активирует их синтез, и,таким образои.кошенсаторпое усиление синтеза катехолашшов уравновешивает их 'концентрацию^!.П.Анохина И С08ВТ.1983).

Через сутки посла последнего приема алкоголя ("синдром отмены") в гипоталамусе экспериментальных крыс выявлено повышение уровня ГЕК на 82.5% ( р<0.01 ) и уровня НМН на.79.4Я ( р<0.05 ),по сравнению с контролем.Уровни Ы05ЕГ и ДОФУК при лавешш животных этанола ва сутки не отличались от контрольных значений (табл.7).

Определение содержания натившх КА на фоне суточного отнятия алкоголя позволило установить снижение уровня НА ва 30.4*, (р<0.05)

Т А Б (1 И Ц А 6.

КАТСХОЛАПИНЫ В ГНПОТЛЛЛПиСЕ ХРОНИЧЕСКИ ЙЛ-коголширомнних К Р и С НА 10Н( КОРОТКОЙ И ДЛИТЕЛЬНОЙ ОТМЕНЫ ЭТАНО Л Л

Г Р V П П U ВИ&ОТНМН КАТЕХОЛАНИНИ <кг/г тк)

Н А а * А

КОНТРОЛЬ 1438.61 96.1 61.716.5 376.0 1 32.3

4 а к ö I^Ö А и1 а А и и я ( 7 И E С Я Ц ЕВ) <п ■ в ) 1453.51 гз?.о 74.615.1 397.2196.6

о г н е н й этанола (24 Ч Л С А) ( г» а 91 1002.1 ± 106.1* 110.0 115.7** 433.а 190.2

отмена этлнолл (2 И I С Я U ) 1 П а 9 ) 1174.0*79.5 О 75.714.7 • 276.1127.7

<У Т Н ГН И ' з т ¡4 н о л А с г иес) + острий Э Т Л Н 0 Л (2.0 г/кrjbfip) ..... \ П г 7 1....... , .Г , ЕЗ 1410.9137.? СЕВ 71.313.8 348.7 1 36,3

л - р£ 0,05 ~ Р£ 0.04 - ПО СРАВНЕНИИ С КОНТРОЛЕМ © - Р/ 0.0 3 - ДЛИТЕЛЬНОЕ ОТНЯТИЕ ПО СРйВНЕЖЗ С КОРОТКИМ В- PL 0.03- ГО СРЙ8НП1ИЗ с ИДЕНТИЧНАЯ ГРУППОК БЕЗ ОСТРОГО ВЕЕЯОИЯ ЭТДНОЛА Г**Т- PI 0.01 - ПО СРАВНЕНИИ С КОРОТКИМ ОТНЯТИЕМ

Т й Б Л Н и А 7.

ПЕТАбОИКТН КАГЕХОДАПИНОВ В ГИПОТАПАПУСЕ ХРОНИЧЕСКИ АЛКОГОДИ8ИРОВАННИХ КРИС НА »OH t КОРОТКОЛ И ДЛИТЕЛЬНОЙ ОТМЕНЫ 3 Т Л Н 0 <1 л

ГРУППЫ RH80THUX МЕТАБОЛИТЫ КАТЕХОЛАНИНОа (нгД-тк)

* 0 » V К Г 6 К Н N Н Н 0 » Е Г

. КОНТРОЛЬ 152.61 49.0 62.5 17.9 £04.0142.2 77.719.2

А |Н Ö7 а Л йS X Ц н Я (7НЕСЯИЕ В } <п - в ) 133.0123.1 62.613.8 • 355.0150.4 109.3113.4

0 Т Ii Е Н й 3 Т А Н 0 <1 А czt м а с л) 1»; 91 гуя «1.0126.0 114.9 119.9^ 3S5.5HJ.Jjf «7.019.9

ОТМЕНА ЭТАНОЛА (2 МЕСЯЦА ) 1 п = 9) ш 161.7136.2 78.8112.1 234,2146.2 97.6115.7

ОТМЕНА ЭТАНОЛА (2 Н Е С >♦ 0 С TP Ы й ä т а н о л (2.о rM',»/sp) t П = 7 1 • 3J3.7157.2_ 70.0113.0 193. 1 69.3 72.1113.8

• — PÜ 0.05 •* - РL 0.01 - ГО СРДаНЕНЮ С КОНТРОЛЕМ

©- PI о.о5 - по сравнения с я>он1чесжоя Агсоголизтиш И- PI о. оз GEB- р/ 0.01 - га срйвнен® с остр in ввцениеи этйюл)

и увеличение уровня А на 79.(р<0.01), (табл.6).

Установленное увеличение содержания адреналина в гипоталамусе хронически алкоголизированных крыс при отмене этанола,сроком на одни сутки,когда основные проявления абстиненции нарастают и достигают значительной выраженности, имеет особое значение в связи с тем, что с к-метшшрованием норадреналина и образованием оря атом адреналина снижается вероятность "ыоноаминоксидазного"превращения и возрастает возможность окисления А по хиноидному пути,в результате которого образуются продукты с высокой биологической активностью,такие как ортохивоны,которые могут влиять на клеточный метаболизм,выступая активными биорегуляторами и катализаторами различных процессов ( С,М.Рукавишникова,В.М.Денисов 197 и А.М.Утевский.В.О.Осинская

1974,1975,1978 ).

В литературе также отмечается,что с действием адреналина и продуктов его хиноидного окисления-адренохроиом (АДХ) и адренолютином (АЛЛ) связаны такие проявления, как негативизм, ступор, кататония, чувство страха (В.О.Осинская 1964,1969).

Возможно,образование и действие этих продуктов в ЦНС может являться одной из причин возникновения подобных нарушений при развитии абстинентных состояний.

Известно, что КОМТ катализирует О-метилирование не только на-тивных катахоламянов,но и продуктов их превращения,образующихся на других путях метаболизма КА,и,по-видимому,in vivo растворимая КОМТ с высокой Км для КА наиболее эффективно взаимодействует с продуктами их метаболического превращения. Эффективными субстратами фермента, в том числе-,могут становиться продукты хиноидного окисления ка-техоламинов-ортохиноны.

Как уже отмечалось,нами установлено выраженное снижение уровня

НА в гипоталамусе хронически влкоголизированных крыс на фоне суточного отнятия алкоголя (табл.6).Можно предположить,что одной из причин отмеченного падения уровня этого медиатора в период короткого отнятия алкоголя является усиление его превращения в адреналин,уровень которого резко повышается на этой стадии экспериментального алкоголизма.

Наряду с этим известно,что адренергический синапс использует свой медиатор очень экономно, и после нейронального обратного захвате б<5льшая часть найротрансмиттера снова включается в КА-запаса-гоие везикулы (Ф.Хухо 1Э9о).Одаако,при отмене алкоголя увеличивается активность МС-КОЫТ и атому соответствует накопление О-маполированного нора дрена лша-исрмз г анзфрина(НШ) .который,как отмечается в литературе,могэт действовать на аксональные мембраны и блокировать Обратный нейрональный захват ( Guldberg and Marsden 1975; А.М.Утев-скпй.В.О.Осинская 1978). Возможно .другой причиной низкого уровня НА является нарушение обратного его поглощения в пресинапо,вследствие чего медиатор идет не на восстановление "запасного" пула норадрена-лина, а в основном метаболизируегся после выброса в синаптичаскую щель МС-КОМТ.

Данные литературы свидетельствуют о снижении активности МАО при хронической интоксикации этанолом и развитии алкогольного абстинентного синдрома. Учитывая эти сведения, можно предполагать,что одним из механизмов удержания высокой концентрации 0-метшшрозаншх метаболитов катехоламинов может быть усиление катализируемого КОМТ ме-токсилирования КА при снижении опосредованного МАО пути их превращения. И, вероятно, высокий уровень НМН может поддерживаться не только за счет увеличения скорости его образования,катализируеьюго КОМТ,но и за счет снижения скорости поеледуадаго окислительного дезаминиро-

вания,катализируемого МАО.

Наш отмечено,что на фоне резкого прекращения приема алкоголя, наряду с НМН, в гипоталамусе крыс происходит также увеличение уровня гомованилиновой кислоты (ГВК)-продукта метаболического превращения дофамина,при его последовательном окислительном дезамишровании и О-метилировании.При этом уровень самого ДА не снижался,что .по-видимому .связано с усиленным синтезом медиатора на фоне отнятия алкоголя, о чем свидетельствуют работы, представленные в литературе (И.П.АНОХИНа,Б.М.КОГаН 1982,1987).

Согласно современным представлениям,нарушение обмена ДА в мозге является причиной возникновения вегетативных и двигательных расстройств .характерных для состояния абстиненции.Предполагается также, что и развитие психотических состояний может быть связано с нарушением метаболизма дофамина в ВДС (И.П.Анохина i987;sano et ai.,1992).

Одной из точек зрения, признанных в настоящее время, является представление о том, что действие нативных катехоламилов может продолжаться в действии продуктов их метаболического превращения.Показано, что многие эффекты катехоламанов связаны с действием продуктов юс катаболизма.Возможно,что и некоторые проявления абстинентного синдрома обусловлены накоплением,в результате нарушений обмена ДА.продукта его катаболизма-гомовашшшовой кислоты (ГВК) .уровень которой, как установлено (Pickar et al. 1986,1990; perry 1990,• Ribeyre ©t al., 1991; Sano et al.,1992; Siever et al.,1991,1993),коррелирует С раэ-

шгием некоторых ссшопатологкческих состояний.

Таким образом, на фона резкого лишения животных этанола посла длительного его потребления, отмечено увеличение содержания некоторых продуктов метаболического превращения катехоламинов.с дейстшем которых в ЦНС мошт Сыть связано, развитие ряда симптомов,характерных

для состояния абстиненции.

2.Содержание катехоламинов и их метаболитов в гипоталамуса крыс при длительном отнятии алкоголя после хронической алкогольной интоксикации и при однократном введении раствора этанола на этом фоне.

Как известно,актуализация патологического влечения к алкоголю в. ремиссии ткет приводить к возобновлению злоупотребления спиртными напитками и развитию рецвдива болезни ( Н.Н.Иванец.А.И.Игонин, 1983).В связи с этим представляется важным изучение патохимических механизмов актуализации в ремиссии влечения к алкоголю.

Учитывая полученные результаты по изменению содержания катехоламинов и некоторых их метаболитов при хронической алкогольной интоксикации и нз фоне короткого отнятия этанола, работа была продолжена на модели экспериментальной ремиссии,которая создавалась путем лишения крыс (после 7 месяцев полупринудительной алкоголизации) этанола сроком на 2 месяца.Учитывая,что одним из факторов,провоцирующих патологическое влечение к алкоголю в ремисии,является однократный прием спиртных напитков,на фоне 2-х месячного отнятия этанола изучалось такяе действие однократного введения алкоголя на уровень катехоламинов - НА,А,ДА и некоторых продуктов их превращения - ДОФУК,ГВК,НМН, МОФЕГ в гипоталамусе экспериментальных крыс.

Результаты проведенного исследования позволили установить (таб.6, 7),что через 2 месяца лишения крыс этанола после хронической алкогольной- интоксикации на происходит восстановления до норш значений норадреналина и его О-метилированного метаболита-норметанефрина.При этом уровень адреналина,резко повыпенный на фоне суточной отмены алкоголя, снижался до контрольных значений.

Также отмечено,что при полном восстановлении содержания ГВК-продукта катаболизма ДА, до значений в контрольной группе, уровень

самого дофамина на фоне длительного отнятия алкоголя снижался,на 27Я,(р<0.05).

Однократное введение раствора этанола в дозе 2.о г/кг на фоне длительного прекращения приема алкоголя сопровождалось снижением до контрольных значений уровней НМН, МОФЕГ и восстановлением до нормы низких показателей ДА и НА.При этом уровень ДОФУК-продукт окислительного дезамишрования ДА, который на изменялся на предыдущих стадиях эксперимента, значимо увеличивался.

" По результатам исследования содержания КА и их метаболитов в' период экспериментальной "ремисси", можно сказать,что даже при длительном лишении этанола после хрощческого его потребления обмен КА остается измененным,что выражается в значимом снижении уровня ДА и в отсутствии восстановления до контрольных значений уровней НА и НМН,измененных на предыдущих стадиях экспериментального алкоголизма. И только однократное введение на этом фоне раствора этанола сопровождается восстановлением до контроля уровней ДА.НА и НМН.Как известно, однократный прием алкоголя в период ремиссии может провоцировать обострение патологического влечения, результатом которого нередко является возобновление зааоя.И,возможно,установленное в работе .восстанавливающее действие однократной дозы этанола на измененные в ремиссии показатели обмена КА является одним из механизмов,приводящих к обострению влечения к алкоголю при однократном его приеме в период ремиссии и развитию рецидива болезни.

Таким образом, результаты проведенных исследований показывают, что при развитии экспериментального алкоголизма в гипоталамусе крыс происходит увеличение. активности КОМТ.Принимая во внимание, что наряду с катализируемым КОМТ О-метилированием, метаболическое превращение катехоламинов осуществляется по пути катализируемого МАО окис-

лительного дезаминирования, и от согласованности в действ™ МАО и КОМТ в значительной мере зависят,с одной стороны, эффективность инактивации медиаторов ,и, с другой-спектр образующихся продуктов .представлялось важяш-параллельно с собственными результатами исследования активности КОМТ на разных этапах формирования экспериментального алкоголизма проанализировать по литературным данным динамику изменения активности МАО.

Проведенный нами анализ позволяет предположить, что при развитии алкоголизма происходит нарушение соотношения опосредованных МАО и КОМТ путей катаболизма катехоламинов,которое выражается в преимущественной мобилизации катализируемого КОМТ О-метитрования,при снижении скорости превращения КА по пути катализируемого МАО окислительного дезаминирования.

Результатом такого изменения катаболизма КА в условиях хронической интоксикации алкоголем является нарушение баланса мевду нати-вными катехоламинами и продуктам! их дезаминирования и метоксилиро-вания.Учитывая,что продукты метаболического превращения КА,являются не только показателем их обмена и эффективности инактивации,но и обладают, или собственным спектром биологической активности, или .конкурируя с нативныма катехоламинами за ¡рецепторы .ферменты и системы их транспорта, могут влиять на механизм действия и проявление зф£йктов. последних,установленное в работе увеличение в мозге содеркания ряда продуктов катаболизма катехоламинов ноют существенно сказываться на функциях ЦНС и являться причиной развития некоторых неврологических и психопатологических нарушений,характерных для алкоголизма.

В целом, результаты проводенных исследований свидетельствуют,что при хронической интоксикации алкоголем в гипоталамусе экспериментальных гшвотных происходят существенные изменения катаболизма каге-

холаминов по пути катализируемого КОМТ О-метилирования, которые играют определенную роль в механизмах развития алкоголизма.

ВЫВОДЫ

1.В условиях хронической интоксикации алкоголем в гипоталамусе экспериментальных животных выявлено увеличение активности растворимой катехол-0-метилтрансферазы и накопление продукта О-метилирования норадреналина-норметанефрина.

2.На фоне отмены алкоголя после длительной алкогольной интоксикации в гипоталамусе крыс отмечено значительное увеличение активности мембраносвязанной и растворимой КОМТ.Показано достоверное снижение уровня норадреналина, увеличение содержания адреналина и продуктов метаболического превращения норадреналина и дофамина-норме-танефрина и гомованилиновой кислоты,соответственно.

3.В гипоталамусе хронически алкоголизированных крыс с высоким уровнем влечения к алкоголю, по сравнению с крысами с низкой алкогольной мотивацией, установлено статистически значимое увеличение активности растворимой КОМТ и выраженная тенденция к повышению активности мембраносвязанного фермента.

4.Обнаружено,что нарушенный при хронической алкогольной интоксикации баланс катехолаыинов и их метаболитов в гипоталамусе крыс не восстанавливается до нормы после 2-х месячной отмены этанола.Однократное введение раствора этанола на фоне длительного лишения животных алкоголя после хронической алкоголизации нормализует измененные уровни дофамина .норадреналина и норме танефрина.

5.Результаты исследований свидетельствуют, что выявленные при хронической алкогольной интоксикации изменения катаболизма катехол-аминов по пути катализируемого КОМТ О-метилирования принимают непосредственное участие в механизмах развития алкогольной зависимости и влечения к алкоголю.

6.Анализ собственных результатов исследования в сопоставлении с литературными данными о динамике изменений активности МАО на разных этапах развития алкоголизма позволяет придти к заключению, что при хронической алкогольной интоксикации происходит нарушение соотношения опосредованных МАО и КОМТ путей катаболизма катехоламинов. Преимущественная мобилизация катализируемого КОМТ О-метилирования при снижении скорости катализируемого МАО окислительного деэамини-рованил моноаминов приводит к нарушению функционально-метаболичес-

кого баланса, что мошт являться одной из причин изменения психотропного спектра активности катехолашшов и служить основанием для развития ряда мотивационннх, эмоциональных и психопатологических расстройств,характерных для алкоголизма.

Список работ,опубликованных по теме диссертации

1.Влияние длительной алкоголизации на опиатную активность мозга и содержание катехоламкнов в крови крыс с различным отношением к алкоголю //"Медиаторы и поведение".Тезисы докладов Всас.рабочего совещания-!938-с. 52-53 (соавторы-А.Г.Верегинекея,А,З.Дроздов),

2.Комплексный подход к изучению -возможных механизмов генетически детерминированной предрасположенности к алкоголизму //Вопросы наркологии - 1992 -и 2-е.29-37 ( соавюры-И.П.Анохина, Н.Л.Векшша, А.З.Дроздов,Н.С.Камышанская, А.В. Кирке ль,И. А.Ковалева,Л.И.Овчинникова,А.В.С танишавская,Н.А.Христолюбова,И.D.Шаыакина).

3.Некоторые биологические механизмы врозденной предрасполокеп-пости к алкоголизму //Физиологический зурнал ЕМ.И.Н.Сеченова-1992-T.78-H 12-е.30-38 (соавторц-И.П.Анохина, И. Л. Еамогла,Л.И.Овчинникова ,Л.В.Станишевская,И.А.Христолюбова,И.D.Иаиакена).

4.Изменения в системе кагахолашпов у крыс при кратковременном и длительном лишепше этанола //Материалы на аду народной конференции Гродао-1993-ч.2-е.305-306 ( соввгора-Н.Л.Векшияа, А.Г.Еэретшская, И.П.Анохина).

5.Активность КОИ п гипоталамуса крыс с разнил уровнем алкогольного влачешш посла длительной алкоголкзпцш //Материалы мэзду-народаой конференции, Гродпо-1993-ч.2-е.333-334 (соавторз-Т.Т.Бон-дара нко , И. П. Анохина). ' ■

6.Катехолашшы и некоторые' продукты их метаболического превращения в гипоталамусе крас при скспер^знтальнси алкоголизма //Вопросы наркологип-1994-ru-c.63-65 (соавторы-А.Г.Верзтинская.И.II.Анохина ).

Подписано а пэчата Г2.УП»94 г»

Огпацатапо s ГОС

Зад. 254. Гир.-. ПО авз.