Автореферат и диссертация по медицине (14.00.36) на тему:Новые подходы в изучении антибактериального гуморального иммунитета при вторичных иммунодефицитных состояниях

На правах рукописи

КУЛАКОВ АЛЕКСАНДР ВЛАДИМИРОВИЧ

НОВЫЕ ПОДХОДЫ В ИЗУЧЕНИИ АНТИБАКТЕРИАЛЬНОГО ГУМОРАЛЬНОГО ИММУНИТЕТА ПРИ ВТОРИЧНЫХ ИММУНОДЕФИЦИТНЫХ СОСТОЯНИЯХ

14.00.36 - Аллергология и иммунология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора медицинских наук

Москва 1997

Работа выполнена в Государственном научном центре -Институте иммунологии Минздрава России

Научный консультант:

академик РАМН, доктор медицинских наук, профессор P.M. Хаитов

Официальные оппоненты:

член-корр. РАМН, доктор медицинских наук, профессор В.И.Литвинов академик РАЕН, доктор медицинских наук, профессор А.А.Ярилин доктор медицинских наук, профессор В.А.Алешкин

Ведущая организация:

. . Научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им.Н.Ф.Гамалеи РАМН

Защита состоится 26 ноября 1997г. в 14 часов на заседании диссертационного совета Д 074.09.01 при Институте иммунологии Минздрава России по адресу: 115478 г.Москва, Каширское шоссе, дом 24, корп. 2.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Института иммунологии Минздрава России.

Автореферат разослан "__"____________ 1997г.

Ученый секретарь диссертационного совета доктор медицинских наук

Л. С. Сеславина

Общая характеристика работы

Актуальность проблемы

В настоящее время наблюдается существенный рост хронических ин-фекционно-вослалительных процессов, характеризующихся вялым, непрерывно-рецидивирующим течением (Р.В.Петров, А.А.Михайленко 1990, Р.В.Петров с соавт. 1992-1995, Р.М.Хаитов с соавт. 1994-1996). Связано это с ухудшением общей экологической ситуации, особенно в промышленно-развитых регионах, и как следствие этого, воздействия на иммунную систему различных иммуно-тропных факторов физической или химической природы (P.M. Хаитов с соавт. 1995).

Действие указанных факторов в большинстве случаев - однотипно и приводит к различным стадиям недостаточности иммунной системы, в основе которых сначала лежит нарушение соотношения популяций Т-лимфоцитов (Th1/Th2), со всеми вытекающими отсюда последствиями (Mosman J.1993; Subash D. Mosman J, 1994), а затем их количественное снижение (Б.В Пинегин с соавт. 1996, В.Д.Прокопенко 1996). При этом на ранних стадиях этого процесса параметры клеточного и гуморального иммунитета жителей экологически неблагоприятных регионов не выходят за пределы нормальных значений (Б.В.Пинегин 1992-1996), а в ряде случаев наблюдается достоверное увеличение основных классов иммуноглобулинов. Тем не менее, у данных лиц наблюдались различные заболевания бронхолегочного аппарата и носоглотки, вызванные внеклеточными бактериальными агентами и характеризуемые как клинические проявления недостаточности иммунной системы. Последнее обстоятельство показывает, что определение содержания основных классов иммуноглобулинов или содержание антител к определенным бактериям, важнейшему фактору резистентности и инфекциям (В.И.Покровский, И.В.Рубцов 1994) не всегда дает положительную информацию о состоянии гуморального антибактериального иммунитета. Это послужило основанием для разработки новых подходов в его изучении

Исходя из этого целью настоящей работы явилось изучение особенностей антителообразования к различным бактериальным антигенам и их компонентам клеточной стенки при вторичных иммунодефицитных состояниях различной этиологии.

Учитывая, что почти при всех проявлениях вторичных иммунодефицитных состояний происходит, в большей или меньшей степени развитие хронических воспалительных процессов бронхолегочного аппарата и носоглотки, этиологическими факторами, которых являются Staphylococcus aureus, Streptococcus pneumoniae и Branhamella catarrhalis, параметры антителообразования определяли к антигенам этих микроорганизмов.

Кроме того, поскольку эффективность связывания антител с антигеном и их способность взаимодействовать с Fc-peijenTopaM(FcR) фагоцитирующих клеток или Clq-компонентом комплемента обусловлена-аффинностью и степенью гликозилирова-ния(. Яри оценке гуморального противобактериального иммунитета были исследованы эти параметры.

В работе были поставлены следующие конкретные задачи:

1. Создать комплекс методов по оценке гуморального антибактериального иммунитета, основанный на определении с помощью им-муноферментного анализа в сыворотке периферической крови людей антител к иммунодоминантному антигену клеточной стенки всех грамположительных бактерий - пептидогликану, и двум его антигенным детерминантам: N-ацетилглюкозаминилмурамил ди-пептиду (ГМДП) и тетрасахариду, детерминанте гликановой цепи, а также к антигенам двух основных возбудителей заболеваний бронхолегочного аппарата Streptococcus pneumoniae и Branhamella catarrhalis.

2.Создать комплекс методов по оценке способности антител выполнять свои эффекторные функции: эффективность взаимодействия с антигеном, аффинность, и уровень их гликози-лирования.

3. С помощью разработанных комплексов оценить состояние гуморального антибактериального иммунитета у людей, проживающих в экологически неблагоприятных регионах, и у людей с клиническими признаками вторичной иммунологической недостаточности.

4. Оценить информативность используемых показателей, пыдепить наиболее информативные из них, и выявить связи используемых показателей с клиническими проявлениями недостаточности иммунной системы с определением их диагностической и прогностической значимости.

Научная новизна работы

В работе впервые показано, что уровень антител к компоненту бактериальной стенки пептидогликана - N-ацетилглюкозаминилму рамил дипептиду ( ГМДП ) и их аффинность отражают параметры антителообразования к антигенам внеклеточных бактерий

Продемонстрировано, что относительная аффинность антител (RHAV) к пептидогликану SI.aureus и его антигенной детерминанте -ГМДП и другим условно-патогенным бактериям, так же как и глико-зилирование IgG являются объективными лабораторными критериями, характеризующими состояние иммунной системы.

Впервые установлена зависимость влияния различных экологически неблагоприятных факторов на процессы антителообразования к антигенам внеклеточных бактерий.

Выявлена зависимость ослабленного иммунитета у лиц с клиническими проявлениями недостаточности иммунной системы(НИС) от нарушения уровня антител к компоненту бактериальной стенки пептидогликана - N-ацетилглюкозаминилмурамил дипептиду (ГМДП) их низкой аффинности и нарушения процессов гликозипирования IgG у таких больных.

Определены уровни антител к некоторым компонентам клеточной стенки бактерий и нарушения процессов аффинности и гли-

коэилирования у больных с эхинококковой инвазией и выявлена связь гнойно-осложненного течения послеоперационного периода с нарушением процессов антителообразования, показана прогностическая значимость для развития гнойно-осложненных форм низкого содержания антител к различным компонентам клеточной стенки бактерий, их низкой аффинности и сниженного уровня процессов гликозилирования у таких больных.

Установлено, что низкая эффективность гуморального иммунного ответа у ВИЧ -инфицированных пациентов с бактериальными осложнениями обусловлена как низкой аффинностью антибактериальных антител так и неполным гликоэилированием 1дС при повышении титра антител к тому инфекционному агенту, который является этиологическим фактором этих осложнений.

Научная значимость работы Научная значимость работы заключается: - в создании и апробации новых подходов к оценке гуморального противобак-териального иммунитета, основанной на определении уровня антител к универсальной антигенной детерминанте бактерий - М-ацетилглкжозаминилмура-мил дипептиду (ГМДП), их аффинности и уровня гликозилирования 1дО;

- в выявлении связи гуморального противобактериального иммунитета с клиническими проявлениями недостаточности иммунной системы при различных заболеваниях и инфекционных осложнениях;

- в выявлении их прогностической значимости для динамики инфекционных проявлений недостаточности иммунной системы.

- в обосновании необходимости их исследования для оценки состояния здоровья населения экологически неблагоприятных регионов.

Практическая значимость работы Выявлена связь гнойно-осложненного течения послеоперационного периода с нарушением процессов антителообразования к антигенам внеклеточных бактерий.

Определены прогностические показатели антибактериального гуморального иммунитета для развития гнойных осложнений в послеоперационном периоде.

Обосновано проведение заместительной терапии препаратами 1дв на всех стадиях ВИЧ-инфекции, сопровождающихся бактериальными осложнениями, и тяжелых форм бактериальной инфекции, развивающейся на фоне недостаточности иммунной системы.

В качестве прогностических лабораторных критериев при прогрессии ВИЧ-инфекции использовано опредепение уровня и аффинности антител к ГМДП.

Положения, выносимые на защиту

1. Эффективность гуморального противобактериального иммунитета к внеклеточным бактериальным агентам зависит не только от уровня антител, но и от их аффинности и степени гликозилирова-ния

2. Уровень антител к ГМДП, их аффинность и степень гликозилиро-вания 1дО являются объективными диагностическими и прогностическими критериями развития инфекционных проявлений недостаточности иммунной системы

Публикации

По теме диссертации опубликовано 30 работ, в том числе 20 статей в центральной печати, 4 статьи в международной печати и 6 тезисов в материалах международных конференций и съездов.

Объем и структура диссертации

Диссертация изложена на 217 страницах машинописного текста, иллюстрирована 42 таблицами и 15 рисунками, состоит из введения, обзора литературы, 7 глав собственных исследований, обсуждения результатов, выводов и списка литературы, включающего 484 источника.

Г

Содержание работы

Основные подходы к оценке антибактериального гуморального иммунитета

Прежде всего перед нами стоял вопрос - необходимо ли для оценки антибактериального иммунного ответа исследовать уровень антителообразова-ния к спектру бактериальных антигенов различного происхождения или для этого достаточно исследовать ответ к одной универсальной антигенной детерминанте, антитела к которой наиболее часто встречаются в естественных условиях у здоровых лиц, и которой объективно отвечал бы уровень и динамика иммунного ответа к внеклеточным бактериальным антигенам?

Мы остановили свой выбор на определении антител к антигенным детерминантам пептидогликана, который является иммунодоминантным антигеном всех грамположительных бактерий (Reichert С.M. et al. 1980, Lederer E 1988, Andronova T.M., Ivanov V.T. 1991) St.aureus. При этом мы учитывали два следующих обстоятельства: N-ацетилглюкозаминилмурамил дипептид является составной частью пептидогликана всех бактерий (Б.В. Пинегин с соавт.1995), и он обладает иммуностимулирующей активностью. Мы предположили, что иммунный ответ к данному компоненту пептидогликана носил универсальный характер гуморального ответа к внеклеточным бактериям вообще; с другой стороны мы учитывали тот факт, что при развитии недостаточности иммунной системы, St.aureus уже на ранних стадиях заболевания встречается практически у 100% обследованных (Алексеева О.Г., 1983, Прокопенко В.Д.,1996 ).

Данный подход предполагал доказательство существования ГМДП в составе пептидогликана как антигенной детерминанты, изучение свойств антител и разработку диагностической тест-системы для выявления анти-ГМДП-антител.

В настоящее время решающую роль в естественной резистентности к бактериальным инфекциям отводят опсоно-фагоцитарной системе (С М. Бо-лоцкий с соавт. 1994г.), фагоцитирующие клетки, которой - полиморфноядер-ные лимфоциты и моноциты, являются конечным звеном в элиминации бактерий. Очевидно, что интенсивность этого процесса даже при наличии активированных нейтрофилов или макрофагов существенным образом зависит от инь

тенсивности образования комплексов антитело-антиген, антитело-Рс-рецептор (FcR). Такими критическими свойствами, определяющими функциональные свойства антител, являются их аффинность и уровень гликозилирования от которого в известной степени зависит взаимодействие антитела с FcR фагоцита (Hennessey P.J., 1991). Поэтому в своей работе при оценке способности антител выполнять свои эффекторные функции мы определяли уровень их аффинности и гликозилирования.

При апробации данной методологии были использованы сыворотки здоровых доноров, сыворотки людей, живущих в экологически неблагоприятных регионах, сыворотки больных эхинококкозом, заболеванием с выраженным иммунопатологическим компонентом с неосложненным и гнойноосложненным послеоперационным периодом и сыворотки ВИЧ-инфицированных пациентов, с различными стадиями заболевания.

Материалы и методы исследования

Было выбрано для обследования несколько групп численностью всего 1322 человека: 1-я доноры - в качестве этой группы были взяты 729 донорских сывороток со станции переливания крови при 7-й Городской клинической больнице. Из этой группы доноров были выбраны наиболее стабильные по своим параметрам 73 сыворотки практически здоровых доноров, которые в дальнейшем послужили своеобразным контролем для всех патологических исследуемых групп сывороток; 2-я - жители экологически неблагоприятных регионов страны и ближнего зарубежья (г.Н.Тагил - Средний Урал - 154 рабочих и служащих Нижнетагильского металлургического комбината и 257 жителей г.Нукус -Аральский регион); 3-я группа больных - лица с проявлениями недостаточности иммунной системы(НИС), была отобрана из контингента жителей г.Н.Тагила и составляла 56 человек, из них 21 мужчин и 35 женщин. Контролем для этой группы послужила сыворотка крови, полученная от 98 практически здоровых доноров, из того же региона. Клиническая характеристика остальных групп обследуемых приведена в соответствующих разделах.

Оценку иммунного статуса обследуемых лиц проводили в соответствии с методическими рекомендациями "Оценка иммунного статуса человека при мас-

совых обследованиях (методология и методические рекомендации)" (Р. В Петров. 1991 г).

Число лейкоцитов и лимфоцитов, которое подсчитывали с помощью краски С.И.Задорожного и И.М.Дозморова (1985г).

Определение CD3*-, CD4*- и С08+-лимфоцитов проводили с помощью метода проточной цитометрии. Для определения указанных популяций использовали моноклональные антитела, выявляющие соответствующие субпопуляции, производства ГНЦ - Института иммунологии Минздрава России (А.В.Филатов 1985г).

Для определения фагоцитарной активности нейтрофилов использовали их способность поглощать частицы меламин-формальдегидного латекса размером 1.5-2 мкм, производства ВНИИ биологического приборостроения (г.Москва).

Количественное определение IgM, IgA и IgG проводили методом радиальной иммунодиффузии по Манчини (1970г.) с использованием наборов для их определения (производство НИИЭМ им Н.Ф. Гамалеи)

Для статистической обработки материала использовали пакет программ "Статграф" Для обработки результатов были использованы также методы непараметрической статистики.

В работе использовали препараты: N-ацетилглюкозаминилмурамил ди-пептид (ГМДП); тетрасахарид, состоящий из N-ацетилглюкозамина и N-ацетилмурамовой кислоты (ГМГМ); мурамилдипептид (МДП); пентапептид (ПП) - Ala-D-isoglut.-Lys-D-Ala-D-Ala (Sigma) и их конъюгаты с БСА были предоставлены Е.А.Макаровым (ИБХ им. М.М.Шемякина). Препарат тейхоевые кислоты (TK), полученный из клеточной стенки St..aureus с помощью трихлоруксусной кислоты по методу А.Р.Арчибальд(1975), был любезно предоставлен Н.П.Ванеевой (НИИВС им.И.И.Мечникова). Для определения антител к стафилококку применяли пептидогликан (ПГ) St.arueus штамм Wood, выделенный по методу Peterson et al.(1978). Препарат ПГ, выделенный из M.lysodecticus по оригинальной методике, был нам любезно предоставлен В.Л. Львовым (Институт иммунологии).

Поликлональные антитела кролика к ГМДП были любезно предоставлены С.В.Гурьяновой. Асцитическая жидкость гибридомы, синтезирующей антитела к ГМДП была предоставлена В.А.Несмеяновым (ИБХ им. М.М.Шемякина)

Для определения антител к антигенам стенки бактерий использовали твердофазный иммуноферментный анализ.

Методология и методы исследования параметров антибактериального иммунитета.

Уровень антител к различным антигенным детерминантам бактериальных антигенов определяли в специально разработанных иммуноферментных тест-системах. Специфичность связывания доказывали в ингибиторном анализе. Так уровень антител к ГМДП оценивали в ИФА. Сущность методики вкратце: в планшеты, сенсибилизированные ГМДП, конъюгированным бычим сывороточным альбумином (ГМДП-BSA), затем вносили различные разведения исследуемых сывороток, антитела выявляли с помощью козьих аффинноочищенных антител против IgG человека, конъюгированных с пероксидазой (Sigma), оптическую плотность (OD) регистрировали на мультискане "МСС 340" (Labsystem) при 490 нм. и за титр принимали то разведение сыворотки, где OD в опыте в 2 раза превышало OD в контроле.

Для выделения из сыворотки антибактериальных антител использовали термическую экстракцию по Parker et al. (1994г.).

Элюированные антитела были высоко специфичны: они практически не взаимодействовали с очень близкой по строению детерминантой - мурамилди-пептидом, пентапептидом, трипептидом и тейхоевыми кислотами, слабо взаимодействовали с пептидогликаном, но имели достаточно высокий уровень связывания с родственной детерминантой - тетрасахаридом, состоящим из N-ацетилглюкозамина и N-ацетилмурамовой кислоты (ГМГМ)

Аффинность антител оценивали с помощью относительной величины RHAV (Relative High Affinity Vallue) no Luxton и Thompson (1990г.). Сыворотку больных брали в разведении, дающем при длине волны 492 нм оптическую плотность 1.000 - 1.500 единиц. После фиксации антител на антигене и последующей отмывки в лунки добавляли тиоционат натрия (Sigma) в различных

концентрациях и инкубировали 10 мин при комнатной температуре. Затем с помощью конъюгата проявляли реакцию и определяли относительную аффинность антител по формуле:

RHAV=A1 х 12 + А2 х 11 + A3 х 10 + А4 х 9 где А1, А2, A3, А4 - процент антител, оставшихся в лунке после их обработки тиоционатом натрия в концентрациях 5, 4.5, 4, 3.5,М соответственно.

Исследования относительной аффинности анти-ГМДП-антител 12-ти сывороток с различным Kd в диапазоне от 1 х 10"6 до 1 х 10 7 М показало полное совпадение обоих показателей (г = 0.86; р < 0.01). И это обстоятельство дало нам основание в дальнейшей работе использовать для определения аффинности антител относительную величину RHAV.

Уровень дегликозилированных lg определяли по разработанной нами методике по связыванию с лектином митогена лаконоса или конканавалином А, меченным пероксидазой в иммунофермент-ном анализе(Пинегин Б.В. 1997)

Степень взаимодействия лектина со специфичным к нему сахаром углеводной цепи IgG определяли с помощью коэффициента гликозилирования

КГ= (ODo - ODk )/[lgG]x 1000 где ODo - оптическая плотность образца, ODk - оптическая плотность контроля, [IgG] - содержание IgG в сыворотке крови, мг%.

Статистическую обработку результатов проводили на персональном компьютере IBM/PC с помощью специальной программы "Statgraphies" (Vers. 2.0, 2.1, 3.0).

Исследование параметров гуморального противоинфекцион-ного иммунитета у ВИЧ-инфицированных пациентов.

Исследование гуморального противоинфекционного иммунитета в рамках предлагаемой методологии было проведено при клиническом и лабораторном обследовании 41 ВИЧ-инфицированного пациента с различными стадиями

ю

заболевания (Классификация ВОЗ, 1993г.) (Табл.1). В качестве группы сравнения были взяты 16 доноров.

Таблица 1.

Характеристика больных по стадиям ВИЧ-инфекции

Число больных с клиническими проявлениями

Распределение по числу CD4*/ мкл А В С Всего

категория

1 ?500 А1 6 (14,6%) В1 3 (7,3%) С1 3 (7,3%) 12

II 200-499 А2 4(9,75%) В2 6(14,6%) С2 5 (12,2%) 15

III i200 A3 1 (2,4%) ВЗ 1 (2,4%) СЗ 12(29,2%) 14

итого 11 10 20 41

У обследованного контингента содержание 1дА и 1дв прогрессивно снижалось при снижении содержания С04+-клеток (Табл.2).

Таблица 2.

Концентрация основных классов иммуноглобулинов в зависимости от содержания С04*клеток у ВИЧ - инфицированных пациентов

Категория Содержа ние CD4+ Число больных А G М

I £500 (584+41) 12 365+ 218 2069 + 256 169,4 + 6,2

II 200-499 (388+87) 15 220 + 12,4 1770,6 + 210 166,1 J: 7,4

III £200 (173+50) 14 135 + 8,6* 905 + 121 138,3 + 5,3

Повышение антител 1дв - класса к ГМДП наблюдалось на всех стадиях - А, В и С ВИЧ - инфекции (Табл.3). Стадия СЗ была выде-

лена в отдельную группу, поскольку уровень антител к ГМДП в сыворотках больных, находящихся на этой стадии заболевания существенно отличается от уровня антител к ГМДП у больных в стадии С1 и С2.

Таблица 3

Уровень 1дв антител к бактериальным антигенам в сыворотке крови больных в различных стадиях ВИЧ-инфекции.

Стадии Число больных Титры антител к

ГМДП St.aur. ПГ St.aur. ГМГМ St.aur. Br.catarr Str. pneumon

А 11 10200+ * 4200 51200 + 14021 1520 + 480 133120 * + 30270 5200 + * 1120

В 10 14200+ * 9200 95360+ * 14920 10280 + 4317 77120 + 36035 38400 + 10140

С1+С2 8 7600 + 5500 27200 + 9191 н/д 58200 + 26216 30400 + 24000

СЗ 12 12400+ * 4200 96000+ * 39624 8050 + 3020 70400 + 19280 78400+ * 29436

Здоровые доноры 16 4700 + 499 45600 + 6500 5500 + 400 73825 + 7764 34400 + 7270

Примечание: * - р <0.05 (по отношению к здоровым донорам); н/д - не делали

Однако динамика содержания антитела к другим бактериальным антителам при развитии ВИЧ-инфекции имела иной характер. Прежде всего при развитии ВИЧ-инфекции наблюдалось повышение антител к пептидогликану St. aureus. Такая же тенденция наблюдалась и в динамике антител к Sir.pneumoniae. Титры антител к Br.catarrhalis на всех стадиях ВИЧ-инфекции статистически значимо не менялись. Можно отметить тенденцию к повышению титра антител к этому антигену в начальных стадиях заболевания.

При анализе уровней иммуноглобулинов при различных стадиях ВИЧ-инфекции наблюдалась отчетливая тенденция к повышению всех классов иммуноглобулинов . Так у больных в стадии А и С1+С2 уровень 1дС составил 1353,5 + 102,2 и 1830,3 + 139,2; уровень 1дА -265,6 + 50,1 и 440,3 + 80,6; уровень 1дМ - 96,6 + 6,4 и 177,5 + 19,4 соответственно.

Закономерен вопрос - чем качественно отличаются параметры антителообразования у больных без клинических проявлений ВИЧ-инфекции стадии А и с клиническими проявлениями В и С, обусловленными или развивающимися на фоне нарушениями гуморального или клеточного иммунитета?

Нами были проанализированы параметры антителообразования к бактериальным антигенам у больных с ВИЧ-инфекцией , осложненной стафилококковым, кандидозным, 1 степенью герпетической инфекции , ХНЗП, саркомой Капоши и диарреей (Табл.4)

Таблица 4

Уровень 1дС-антител к бактериальным антигенам в сыворотке крови ВИЧ-инфицированных больных с различными осложне-

ниями.

Осложнения Число Титры антител к

больных

ПГ ГМГМ ГМДП Br. Str.

St.aure- St.aure- St. aure- catarrha pneum-

us us us lis oniae

Стафилококк.и герпетические 10 н/д н/д 10400 + 64000 + 32100

поражения 1-П 1800 4550 + 5200

степени кожи

ХНЗ/1 и носо- 14 н/д н/д 12800+ 100400* 64000+

глотки 525 +10650 19320*

Саркома Ка- 3 153600+ 6546 + 8533+ 59733 + 19733+

поши 51200 * 1041 2133 * 22577 15794

Диаррея 3 93866+ 12933+ 13866+ 136533* 37333+

55956 7274 * 6488 * + 34133 32546

Здоровые до- 16 45600 + 5500 + 4700 + 73825 + 34400

норы 6502 597 449 7764 + 7270

Примечание: * - р <0.05 (по отношению к здоровым донорам); н/д - не депали

Полученные результаты показали, что у больных с первыми тремя видами поражений не имеют существенных отличий по титрам антител от нормальных доноров , за одним исключением-повышение титров анти-ГМДП-антител. У больных с хроническими неспецифическими заболеваниями бронхолегочного аппарата и носоглотки в стадии В1 В2 и СЗ, у которых количество Сй4*-клеток было на достаточно высоком уровне, наблюдалось повышение уровня антител к двум главным возбудителям заболеваний бронхолегочного аппарата и носоглотки: Str.pneumoniae и Br.catarrhalis.

У больных, относящихся к III- категории, у которых количество С04*-клеток было менее 200/мкл страдающих варкомой Калоши или диадеей и у которых наблюдается чрезвычайно выраженный дисбактериоз слизистых и кишечника с высокой обсемененностью St.aureus наблюдается повышенный уровень антител к лептидогли-кану St.aureus и его детерминантам.

Таким образом, при некоторых видах бактериальных осложнений в сыворотке больных наблюдается повышение титра антител к тому этиологическому агенту, которым вызвано осложнение и во всех случаях наблюдается увеличение титра антител к ГМДП. В то же время, как свидетельствует клинический материал, данные антитела не обеспечивают эффективной защиты, что может быть обусловлено низкой аффинностью антител(Табл.5).

Таблица 5

Аффинность IgG- антител к бактериальным антигенам в сыворотке крови ВИЧ- инфицированных и больных в различные стадии ВИЧ-инфекции.

Стадии Число больных ПГ ГМДП

А 11 470 + 30 2660 + 270 *

В 10 520 + 40 1540+150 *

С 20 300 + 28 * 1240 + 155 *

Здор. доноры 2'2 710 + 20 1950 + 1 10

При изучении аффинности антител было установлено, что аффинность антител к пептидогликану St.aureus на всех стадиях ВИЧ-инфекции имеет отчетливую тенденцию к понижению, особенно выраженную у больных в стадии С. Тенденция к понижению этого свойства наблюдается и у антител к Str.pneumoniae однако это различие не носит достоверный характер. Аффинность антител к ГМДП на стадии А достоверно была повышена и затем прогрессивно снизилась, достигая максимума в стадии С.

Таким образом, представленные данные свидетельствуют о том, что в процессе ВИЧ-инфекции на всех, стадиях и при всех видах осложнений наблюдается повышение титра антител к детерминанте пептидогликана - N-ацетилглюкозоминилмурамил дипептиду, характеризующей уровень гуморального иммунного ответа к бактериальным антигенам.

При конкретных осложнениях сопровождающимися или обусловленными конкретными инфекционными агентами St.aureus, Str.pneumoniae и Br.catarrhalis у больных с ВИЧ-инфекцией наблюдается повышение антител к этим инфекционным агентам.

В частности у ВИЧ-инфицированных больных, страдающих хроническими неспецифическими заболеваниями легких, помимо по вышения уровня антител к белковому соматическому антигену Str. pneumoniae наблюдается повышение уровня антител к комплексному ультразвуковому антигену Br.catarrhalis , то есть к антигенам, полученным из инфекционных агентов, являющихся главными этиологическими факторами неспецифических заболеваний бронхоле-гочного аппарата и носоглотки.

А у больных с резко выраженным дефицитом CD+4 - клеток у которых осложнения саркомой Капоши или диарреей развивались на фоне обсеменения стафилококком, происходило повышение уровня антител к пептидогликану и его компонентам.

При этом низкая эффективность гуморального иммунного ответа к бактериальным антигенам связана с низкой аффинностью антибактериальных антител.

Кроме того данные, представленные в этой главе, свидетельствуют о том, что у больных с различным содержанием CD*4- клеток (категории 11-200-499 и 111-<200/мкл ) при прогрессировании ВИЧ инфекции наблюдается прогрессивное снижение основных классов lg. Иными словами, снижение аффинности антител IgG класса и прогрессивное снижение содержания lg в ходе ВИЧ инфекции у II - ой и III- ей категории больных, по-видимому , обусловливают малую эффективность гуморального противоинфекционного иммунитета и развитие инфекционных осложнений, обусловленных внеклеточными инфекционными агентами.

Однако в дальнейших исследованиях были получены данные, показывающие, что неэффективность гуморального противоинфекционного иммунитета у ВИЧ-инфицированных пациентов может быть обусловлена высоким содержанием дегликозилированных lg, обуславливающих низкую эффективность антибактериальной защиты оп-соно-фагоцитарной системы.

Исследования уровня дегликозилированных иммуноглобулинов в данных группах больных и группе здоровых доноров дало возможность получить следующие результаты (Табл.6)

Таблица 6

Коэффициенты гликозилирования 1дв, содержащегося в сыворотках здоровых доноров и ВИЧ-инфицированных пациентов

ГРУППЫ КОНТИН- Число обсле- КГ (М + т)

ГЕНТ дованных МЛ Кон А

1 Здоровые 35 4.83 + 0.08 2.91 + 0.08

II ВИЧ Ст. А 11 2.58 + 0.04 * 1.25 + 0.1 *

III ВИЧ Ст. В 10 2.27 + 0.07 * 1.1 + 0.19*

IV ВИЧ Ст. С 20 2.36 + 0.06 * 1.45 + 0.09*

Примечание: * - р < 0.05

Как видно из таблицы коэффициенты гликозилирования, выявляемые в сыворотках 35 здоровых доноров с помощью МЛ были выше, чем с помощью

КонА. Эти данные соответствуют ранее полученным и свидетельствуют о том, что остатки Gal с которыми связывается МЛ присутствуют в большем количестве в молекуле IgG, чем а-Man, с остатком, который связывается Кон А.

Определение КГ у ВИЧ-инфицированных пациентов с помощью МЛ и Кон А показало снижение уровня дегликозилированных IgG во всех стадиях заболевания, при определении обоими пектинами. Однако если при использовании МЛ эта разница практически не менялась от стадии А к С и составляла КГ1/КГИ - 1.87; КГ1/КГШ - 2.12; КП/KHV - 2.0, то при использовании Кон А, коэффициенты гликозилирования сывороточного IgG, вырьировали в большей степени и достоверно увеличивались от стадии В к стадии С. При этом соотношения КП/КГИ; КП/КПН и КП/КПУ составляли 2.38; 2.64; и 2.0 соответственно.

Эти данные свидетельствовали о том, что использование для определения уровня дегликозилирования иммуноглобулинов Кон А более предпочтительно и информативно.

Действительно при оценке уровня дегликозилированных IgG у ВИЧ-инфицированных пациентов в различных стадиях заболевания и с осложненным течением нами были получены достоверно отличающиеся КГ.

В этих исследованиях нами были выделены 3 группы больных, относящихся по числу С04*-клеток к трем различным категориями находящимся в различных стадиях заболевания. Первая группа, относилась к первой категории ВИЧ-инфицированных, число С04*-клеток в этой группе превышало 500клеток/мкл, а клинически ВИЧ-инфекция проявлялась только лимфадено-патией. У больных второй группы число Сй4+-клеток колебалось от 200 до 499/мкл, все они находились в стадии В ВИЧ-инфекции и у всех у них были обнаружены хронические неспецифические заболевания легких. В третью группу были выделены больные Ш-ей категории с содержанием CD4'-клеток, на превышающим 200/мкл и страдающими Саркомой Капоши и рецидивирующей герпетической инфекцией (стадия С). Результаты исследования представлены в Табл.7

Таблица 7

Коэффициенты гликозилирования, выявляемые по связыванию с Кон А у больных, находящихся на различных стадиях ВИЧ-инфекции

Группы Категории больных: Коэффициенты гликозилирования, выявляемые Кон А у больных с различными стадиями

число СБ^-клеток А П = 5 В п = 6 С п = 12 Зд.доно-ры п=35

I I CD4* * 500 Лимфадено патия * 1.31 + 0.1 - - -

II II CD4* 200-499 хнзл * 0.97 + 0.08

III III CD4*,< 200 - - Герпес, * Саркома Капоши 1.58+0.06 -

IV Здор.доноры > 700 - - - 2.91+0.08

Примечание: * - р <0.05 (по отношению к практически здоровым);

Как видно из таблицы при ВИЧ-инфекции, имеющее ограниченные клинические проявления дегликозилированных 1дС выявляемых Кон А хотя и соответствовала их содержанию у больных с различными стадиями заболевания все же отличалась от средних величин. В частности средние значения, полученные у больных стадии А где аденопатия сочеталась с выраженным дисбактериозом средние значения КГ~кона составило 1.20 + 0.06 (п=6); у больных на стадии В, имеющих другие бактериальные осложнения КГКОна - 1.2 ± 0.1 (п=4), а у больных со стадией С, то есть с преимущественным поражением клеточного звена иммунитета, сочетающегося с высокой бактериальной обсе-мененностью КГКона составил -1.255.

Из этой же таблицы следует, что уровень дегликозиирования 1дС не зависел от содержания С04+-клеток, и по-видимому определялся другими осо-

бенностями иммунной системы на фоне которых развивались те или иные клеточные проявления различных стадий ВИЧ-инфекции.

Так же уровень дегликозилирования IgG не зависел от содержания основных классов иммуноглобулинов в сыворотке ВИЧ-инфицированных пациентов. Действительно, индивидуальный корреляционный анализ не выявил никакой корреляционной зависимости между уровнем дегликозилированных иммуноглобулинов и содержанием основных классов иммуноглобулинов.

Очевидно одно, что КГ, определяемый с помощью Кон А дает представление об изменении соотношения IgG с различной структурой углеводов при различной патологии, однако механизм этого явления требует уточнения. Тем не менее исследование этого показателя при оценке состояния противобакте-риального иммунитета, в частности, и иммунной системы вообще на наш взгляд представляется целесообразным, поскольку остатки а-маннозы играют ключевую роль в связывании IgG с FcR-фагоцитирующих клеток (Смирнов С.Г. ссоавт., 1988г.)

Параметры гуморального антибактериального иммунитета у хирургических больных при нормальном и гнойноосложненном течении послеоперационного периода.

Исследования последних лет показывают, что развитие гнойных хирургических инфекции часто определяется различными нарушениями функции иммунной системы. Клинический опыт доказывает, что при адекватном состоянии естественных факторов антибактериальной защиты, своевременно выполненная операция приводит к выздоровлению. Однако, при сниженной реактивности или извращении иммунного ответа значительно возрастает вероятность возникновения послеоперационных инфекционных осложнений, имеющих тенденцию к генерализации процесса. Частота их возникновения по данным разных авторов составляет 23,5-71,2% (Buter J., 1995г.) В последнее время рост осложнений, не имеет тенденции к снижению и является основной причиной смертности до 42,5%, а у лиц пожилого возраста эта цифра достигает 70% (Adarzua Р., 1995). В последнее время высокая частота развития

гнойно-септических осложнений у хирургических больных связана с увеличением объема оперативных вмешательств, вызывающих стрессовую им-мунодепрессию (Б.Б.Першин, 1993г.) и, с отмечающимся в последнее время увеличением частоты дисфункции иммунной системы. Последнее объясняется прежде всего отрицательным влиянием различных иммунотропных факторов.

У хирургических больных нарушение резистентности к бактериальным антигенам и развитие гнойно-септических осложнений развивается на фоне самых разнообразных изменений иммунной системы.

В частности, при местных формах гнойной инфекции абсолютное и относительное содержание Т-лимфоцитов в периферической крови может быть или сниженным или нормальным, а содержание В-лимфоцитов нормальным или даже повышенным (Альперович Б.П. с соавт.1987). В тоже время при генерализованных формах - сепсисе, перитоните, обширных флегмонах - абсолютное и относительное количество Т и В-лимфоцитов обычно значительно снижено (Нишанов Х.Т., 1992).

При гнойных инфекциях нередко находят разнообразные изменения функций фагоцитирующих клеток, выражающиеся в повышении спонтанной миграционной активности лейкоцитов, угнетении хемотаксиса и хемилюминес-ценции, изменении бактерицидное™, повышении экспрессии Рс и СЗЬ-рецепторов (Бутаков А.А.,1992).

Течение гнойной инфекции часто сопровождается повышением содержания в сыворотке 1дА, степень увеличения которого, по клиническим наблюдениям коррелирует с затяжным течением воспалительного процесса(Ройт А., 1991г.).

При генерализации процесса, как правило, наблюдается снижение содержания в сыворотке 1дС, сочетающееся со снижением концентрации 1дА и 1дМ дасэоп Р.А, 1995).

Однако, как показали наши данные, количественные изменения показателей клеточного иммунитета и уровни иммуноглобулинов в сыворотке больных с гнойными осложнениями сопровождаются и количественными отличиями в аффинности антител и уровнях их гликозилирования.

В частности нами было проанализировано течение послеоперационного периода у пятидесяти больных эхинококкозом в зависимости от исходного состояния иммунной системы. При этом эхинококкоз был нами взят как модель иммунопатологического процесса, который на ранних стадиях заболевания сопровождается выраженной поликлональной активацией В-клеток иммунитета и гиперпродукцией антител, а на поздних - супрессией всех функций иммунной системы (Ещанов А.Т., 1995г). Из этих 50-ти больных у 16-ти в послеоперационном периоде развились гнойные осложнения (Табл.8)

Таблица 8

Характеристика послеоперационных осложнений у больных с эхинококкозом

Формы послеоперационных осложнений Кол-во больных % осложнений

1. Гнойные свищи 4 8

2. Нагноение операционной раны 6 12

3. Нагноение остаточной полости 5 9

4. Перитонит 1 3

Итого: 16 32

Данные осложнения связаны, на наш взгляд, не только с изменением основных показателей иммунного статуса, но и с характеристикой уровней антител к бактериальным антигенам.

Таблица 9

Характеристики иммунного статуса больных с осложненным и неослож-ненным послеоперационным периодом эхинококкоза

Показатели Практически Эхинококкоз Эхинококкоз

здоровые неосложнен. осложненный

п=25 п=34 п=16

Лейкоциты (абс) 5932 + 142 6348 + 110 5018 + 96

Лимфоциты (абс) 2050 + 70 1209 + 62 ** 868 + 115 ***

CD3* (абс) 1281 + 79 648 + 18.4** 563 + 12.6***

CD4* (абс) 627 + 64,2 326 + 10,2** 325 + 19.8**'

CD8* (абс) 555 + 92,4 326 + 11.8** 284 + 9.2 ***

CD4/CD8 1,55 1,30 1.12

igG мг% 1283 + 46 1410 + 96.4* 812 + 16.3*

|дА мг% 189 + 16 310 + 18.6* 163 +11.0

igM мг% 140 + 8.5 208 + 12.1 103 + 9.4

ФАГ % 64 + 2.1 66 + 1,6 54 + 0.9

аТ к ГМДП OD 1.468 + 0.04 1.815 + 0.34* 0.806 + 0.06 *

аТ к ПГ OD 1.768 + 0.1 1.820 + 0.19 1.343 + 0.05 *

ГМДП RHAV 2126 + 84 1508 + 42 * 1486 + 32

П Г RHAV 1076 + 27 562+12 * 503 + 8.6 *

Str.pneum. RHAV 1976 + 18 1332+13 * 1276 + 98 *

КГконА 1.896 + 0.5 1.256 + 0.08 0.806 + 0.05 *

Примечание: * - р <0.05; ** - р <0.01; *** - р <0.001 (по отношению к контролю)

Как видно из таблицы для больных с осложненным послеоперационным течением заболевания глубокий дефицит общей популяции Т-клеток и С04*-популяции сопровождался достоверным снижением 1дв и гипоглобулинемией А и М. Достоверное снижение С04+ популяции у этих больных приводило и к снижению регуляторного индекса - С04+/С08* до 1,12. Кроме того у этой формы заболевания наблюдалось угнетение фагоцитарной активности. При этом наиболее значимыми прогностическими показателями у этих больных были абсолютное число С04+-клеток и концентрация 1дО. В частности, снижение

числа СР<Г -клеток менее 400/мкл наблюдалось у 15-ти больных, то есть 94%, а концентрация - менее 600 мг% - у 14 больных (85%).

Помимо этих, прогностически значимых показателей иммунного статуса несомненное прогностическое значение имели уровень антибактериальных антител к ПГ и его антигенной детерминанте - ГМДП и содержание дегликозили-рованных 1дв определяемых с помощью Кон А. Об этом свидетельствуют не только данные представленные в Табл.9, показывающие достоверность различий этих показателей, но и распределение их значений у больных с нео-сложненным и осложненным течением послеоперационного периода (Табл.10)

Таблица 10

Распределение показателей, характеризующих антибактериальный иммунитет (АТ к ГМДП и содержание дегликозилированных 1д6) у больных с неосложненным и осложненным течением заболевания

Значение

показателей Число больных

с осложнениями без осложнений

(п = 16) Р (п = 34 )

AT ГМДП (OD)

>1.500 0 (0%) <0.05 32( 94.1%)

< 1.500 16 (100%) <0.05 2 ( 5.9 %)

КГ

»1.0 2 (12.5%) <0.05 31(91.2%)

< 1.0 14 (87.5%) <0.05 3( 8.8%)

Как видно из таблицы, распределение этих показателей у больных с осложненным и неосложненным течением послеоперационного периода достоверно отличаются

Отсутствие различий в показателях аффинности антител к ГМДП, ПГ и Sir.pneumoniae, по-видимому, связано с их существенным снижением по отношению к группе сравнения - практически здоровым лицам, проживающим в Приаралье

Уровень антител к основной антигенной детерминанте пептидогликана -ГМДП может служить прогностическим критерием в развитии послеоперационных бактериальных осложнений.

Также прогностически значимым был и уровень антител к самому пепти-догликану. Однако уровень антител к другим антигенным детерминантам -МДП, ГМГМ, ТРИП и ТК достоверно не отличался в группах больных с осложненным и неосложненным послеоперационным периодом (Табл.11)

Таблица 11

Уровень естественных антител (00) к компонентам клеточной стенки бактерий в различных группах больных и группе сравнения

Группы п АНТИТЕЛА (ОЭ) к

МДП ГМГМ ТРИП ПГ ТК

Осложнен- 16 ++ *

ный эхиноко- 0.711 + 1.832 + 0.816 + 1.343 + 3.345 ±

ккоз 0.15 0.29 0.18 0.05 0.18

Неосложнен- 34 *

ный эхиноко- 0.905 + 2.012 ± 0.797 + 1.820 + 3.287 +

ккоз 0.29 0.10 0.17 0.19 0.25

Здоровые 257 0.525 + 1.625 + 0.734 + 1.768 + 3.511 ±

доноры 0.04 0.11 0.04 0.10 0.18

Примечание: * - р < 0.05 (по отношению к здоровым донорам)

++ - р < 0.01 (между группами больных) Увеличение уровня естественных антител к бактериальным антигенам у больных эхинококкозом по отношению к группе сравнения, , _.. на наш взгляд, связано с тем, что эхиникоккоз является заболеванием, развивающимся на фоне поликлональной активации В-клеток (Збарский А.И., Тумольская Н.И.,1983, 1988), а в неосложненных случаях сопровождается достаточным повышением 1д различных классов, Такую же зависимость мы обнаружили и при определении конечных титров антител как к антигенам стафилококка так и другим бактериальным антигенам Рис.1

с

О) t-s t-X

re

3 о. f-5

12000

10000

8000

6000

4000

2000

□ ГМДП

□гмгм

90000 80000 70000

I 60000

500001

s

ь

X re

2 40000 а

s 30000 20000 10000

0

ЕПГ

□ Вг.с atarr halis

□ Str.p neu moni ae

Рис. 1 Конечные титры 1дС-антител к пептидогликану ЗЬаигеиэ, его антигенным детерминантам и другим условно-патогенным микробам.

Подводя итоги этой части работы необходимо отметить следующее: Прежде всего исследование новых покаjdгелей состояния гуморального иммунитета таких как аффинность антител и определение доли дегликозилирован-ных IgG позволили вскрыть различные нарушения в резистентности организма к инфекционным осложнениям, и объяснить неэффективность гуморального звена антибактериального иммунитета даже при повышенных содержаниях иммуноглобулинов различных классов.

С другой стороны нами были созданы новые подходы для оценки гуморального иммунитета к внеклеточным бактериальным агентам, основаннй^з^на определении антител к основному компоненту клеточной стенки бактерий - N-ацетилглюкозаминилмурамил дипептиду, их аффинности и учета содержания дегликозилированных иммуноглобулинов.

Кроме того, данная методология открывает новые подходы в изучении состояния здоровья населения, и использовании данных показателей как прогностических критериев для развития различных инфекционных процессов, осложнений и заболеваний, вызванных внеклеточными бактериальными агентами, и других инфекционных проявлений недостаточности иммунной системы.

Естественные антитела к различным бактериальным антигенам и их свойства у лиц, проживающих в экологически неблагоприятных регионах.

В настоящее время имеются данные, что пептидогликан является главным компонентом клеточной стенки грам-попожительных бактерий, ответственным за развитие естественного иммунитета против бактерий (Wergeland H.I. et al. 1984). Именно пептидогликан, но не тейхоевые кислоты или белок А, участвуют в процессах опсонизации и активации комплемента (Peterson R.K. et al., 1978; Seidl P.H., 1983; Verbrugh Н А., 1979)

Учитывая, что в организме человека и млекопитающих имеются естественные антитела практически против всех антигенов микробов (Boyden, 1966), является логичным предположение о наличии в сыворотке здоровых людей и антител против антигенных детерминант пептидогпикана. Согласно данным ряда авторов Karakawa et al (1966, 1968), Heymer et al (1976). Seidi et al

(1984, 1985), Franken et al. (1984, 1985) в составе пептидогликана находятся по крайней мере 5 антигенных детерминант:

1 Щетерминанты гликановой цепи (Г\1-ацетилглюкозамин-1Ч-ацетилмура-мовая кислота (ГМГМ).

2)1\1-концевая часть не связанного перекрестно межпептидного мостика, например пентапептид стафилококка(ПП).

3)С-концевая последовательность межпептидного мостика, возникающего при расщеплении глицил-глициновых мостиков.

4)Не связанный перекрестно тетрапептид (L-ana-D-rny-L-nn3-D-ana), с С-концевыми L-лиз-О-ала как иммунодоминантной группой.

5)Не связанный перекрестно пентапептид (L-ana-D-my-L-nn3-D-ana-D-ала) с С-концевым D-ana-D-ana как иммунодоминантной группой.

Если пептидогпикан играет исключительно важную роль в защите организма от инфекции, то в его составе должны быть детерминанты, в большей степени, чем другие,ответственные за противоинфекционный иммунитет, т.е. являются протективными антигенными детерминантами.

Действительно исследование сывороток 30 здоровых доноров показало, что в них находятся естественные антитела к различным детерминантам пептидогликана

Таблица 12

Спектр естественных антител к различным антигенам бактериального происхождения в сыворотках здоровых доноров*

Процент сыворотки с тиром антител

Антиген 1 : 10 100% 1 : 30 1 : 100 1 : 300 1 :1000 1 : 3000 1:10000

Е. Coli 30/30 28/30 2/30 — — — —

m. Bovis BCG 30/30 30/30 5/30

ГМДП 30/30 30/30 30/30 18/30 6/30 2/30 —

МДП 30/30 30 / 30 29/30 15/30 1 /30 — —

ПП 16/30 2/30 — — — — —

ПГ 30/30 30 i 30 30/30 14/30 1 /30 — —

ГМГМ 30/30 30 / 30 16/30 11 /30 1 /30 — —

* - За положительную реакцию принимали реакцию с OD = 0,6

Однако детальное исследование сывороток 73 жителей г.Москвы и двух экологически неблагоприятных региона г.Н.Тагил (154 человека) и г.Нукус Республика Каракалпакстан (257 человек) показало, что во-первых антитепа к некоторым антигенным детерминантам пептидогликана синтезируются не во всех случаях.

Таблица 13

Процент сывороток с положительным уровнем антител к различным компонентам клеточной стенки бактерий

Жители п Процент положительных сывороток

ГМДП МДП ГМГМ ТРИП ПП

г.Москва 73 92 85 96 95 97

г.Нукус 257 90 94 100 97 94

г. Н.Тагил 154 92 95 100 96 93

При этом если процент положительных сывороток был одного порядка, то уровень содержания в них антител к одной из детерминант пептидогликана -ГМДП отличался существенным образом (Табл. 14). Как следует из этой таблицы у жителей экологически неблагоприятных регионах наблюдается высокая инфекционная заболеваемость, что является следствием недостаточности иммунной системы (45% в г.Нукус и 34% в г.Н.Тагил). Уровень антител к ГМДП достоверно отличается от уровня антител к ГМДП жителей Москвы

В тоже время уровень антител к другим антигенным детерминантам пептидогликана - МДП, трипептид, тейхоевым кислотам был одинаковым, а уровень антител к самому ПГ или ГМГМ даже увеличен.

Это дало основание предположить, что уровень естественных антител к ГМДП отражает воздействие неблагоприятных иммунотропных экологических факторов, приводящим к смене специфичности рецептора антител к бактериальным антигенам и, как следствие, развитию инфекционных проявлений недостаточности иммунной системы.

Таблица 14

Уровни антител к компонентам клеточной стенки бактерий в сыворотках людей

Жители п АНТИТЕЛА (СЮ) к

ГМДП МДП ГМГМ ТРИП ПГ ТК

г.Москва 73 2.065 + 0.17 0.571 + 0.03 1.893 + 0.14 0.675 + 0.04 2.010 + 0.09 3.185 + 0.09

г.Нукус 257 1.458 + * 0.05 0.578 + 0.02 1.653 + * 0.02 0.727 + 0.01 1.832+ * 0.04 3.407+ 0.07

г. Н.Тагил 154 ** * 1.691 + 0.10 0.635 + 0.03 ** 1.955 + 0.10 0.744 + 0.03 ** » 2.677 + 0.09 3.952 + 0.11

Примечание: * - р < 0.05 (по отношению к контролю)

** - р < 0.05 (между группами г.Нукус и г.Н.Тагил)

С другой стороны, характерной особенностью параметров антибактериальных антител в экологически неблагоприятных регионах оказалось повышение частоты отклонений от среднего значения уровня антителообразования. В частности, если у здоровых лиц, проживающих в г.Москве отклонение от средней величины уровня анти-ГМДП-антител более чем на 1,5 а встречалось лишь у 7%, то в г.Н.Тагил и г.Нукус этот показатель у здоровых лиц составлял 22% и 24% соответственно.

В группе длительно и часто болеющих, а так же у больных хроническими неспецифическими заболеваниями бронхолегочного аппарата и носоглотки, то есть с клиническими проявлениями недостаточности иммунной системы частота отклонений от средних значений более чем на 1,5а составила в г.Н.Тагил 35%, а в г.Нукусе 50%.

Рис.2 Уровни иммуноглобулинов у лиц с проявлениями НИС в экологически неблагоприятных регионах и здоровых по регионам

Таблица 15

Частота отклонений от среднего уровня антибактериальных антител у лиц, проживающих в экологически неблагоприятных регионах

Население городов Контингент Кол-во обследуемых % сыворотки с уровнем антител, превышающих + 1,5 а к антигенам

ГМДП МДП ГМГМ ПГ ТК

Н.Тагил Здоровые 108 22 24 31 28 55

Н Тагил С клиническими проявлениями НИС 36 35 45 25 25 36

г.Нукус Здоровые 140 24 10 46 46 44

г.Нукус С клиническими проявлениями НИС 117 50 16 30 73 38

Для экологически неблагоприятных регионов характерно не только снижение уровня анти-ГМДП-антител, но и высокая частота отклонений от средних показателей (более чем на 1,5 о ) у лиц с клиническими признаками недостаточности иммунной системы (Табл.15).

При этом параллельно с нарастанием уровня 1дС, то есть гиперглобули-немий (Рис.2) у лиц с клиническими проявлениями недостаточности иммунной системы происходило и нарастание титров антибактериальных антител, (РисЗ) по сравнению со здоровыми лицами, проживающими в г.Москве (Группа сравнения)

120000

РисЗ.Сравнительная характеристика титров 1дС-антител у лиц с клиническими проявлениями НИС и здоровых доноров

Однако как и у ВИЧ-инфицированных у хирургических больных с гнойно-осложненным течением послеоперационного периода в группах больных с клиническими проявлениями недостаточности иммунной системы (НИС) повышенное содержание антибактериальных антител не обеспечивало достаточного уровня резистентности к бактериальным инфекциям. В частности при обследовании 154 человек, проживающих в г.Н.Тагил и 257 жителей г.Нукус, в группе с клиническими проявлениями НИС, выражающейся в развитии различных клинических инфекционных процессов было обнаружено достоверное увеличение антибактериальных антител (Рис.3) по сравнению с практически здоровыми лицами.

Как следует из предыдущего раздела, исследование параметров антибактериального иммунитета у ВИЧ-инфицированных пациентов и хирургических больных с гнойно-осложненным течением послеоперационного периода наблюдается повышение титров анти-ГМДП-антител. При этом наблюдается прогрессивное снижение относительной аффинности (RHAV) и уровня деглико-зилированных IgG.

Исследование этих параметров антибактериального иммунитета у практически здоровых лиц, проживающих в экологически неблагоприятных регионах дало следующие результаты если уровень относительной аффинности анти-ГМДП-антител у здоровых лиц практически не менялся и составил в группе сравнения (г.Москва): 1980 + 95, а у жителей н.Тагила и г.Нукуса 1934 + 156 и 2020 + 95, то определение уровня дегликозилированных IgG, определяемых по коэффициенту гликозилирования достоверно был снижен. При использовании Кон А в группе сравнения КГ составил - 2,85 + 0,09; у жителей Н.Тагил - 2,37 + 0,07*, а у жителей г.Нукуса - 1,89 + 0.05* (* - р < 0.05).

На этом фоне в группе больных с клиническими проявлениями НИС, проживающих в г.Н.Тагил наблюдалось достоверное снижение уровня относительной аффинности антител к ГМДП и Str.pneumoniae и снижение КГ, определяемых как с помощью МЛ, так и Кон А (Табл.16).

Таблица 16

Показатели параметров гуморального противобактериального иммунитета в группах с клиническим проявлением НИС (жителей экологически неблагоприятного региона г.Н.Тагил)

Группы п Относительная аффинность аТ К Г с

ГМД П п Г Б^.рпеит. МЛ Кон А

Г руппа сравнения 73 1980 + 95 н/д н/д н/д 2.85 + 0.09

г.Н.Тагил практ. здоровые 98 1934 + 156 680 + 76 1706 + 154 0.63 +* 0.06 2.37+ * 0.07

г.Н.Тагил с клин.прояв.НИС 56 1432+ * 104 563 + 158 1345+ * 226 0.485+ 0.03 1.132+ 0.08

Примечание: * - р < 0.05 (между пр.здоровыми и лицами с клин.проявл.НИС по регионам); н/д - не делали. Для подтверждения связи параметров гуморального иммунитета с заболеваниями, характеризуемые как проявления недостаточности иммунной системы было исследовано их распределение в 2-х группах лиц: с клиническими проявлениями НИС и без, проживающих в экологически неблагоприятных ре-гионах(Табл.17)

Таблица 17

Распределение лиц с хроническими инфекционными заболеваниями бронхолегочного аппарата и носоглотки в зависимости от показателей

Показатель Значение показателя Число обследованных, из них

Группа сравнения (г.Москва) (п = 73) Р С клиническими призна ками НИС (п = 173) Р Без клинических признаков НИС (п = 238)

Антитела к ГМДП > 1,5 о ^ 1,5 а отсутствие аТ 3 (4,1%) 64(97,7%) 6(8,2%) <0.05 <0.05 >0.05 130 (75,1%) 6 (4,5%) 37 (21,4%) <0.05 <0.05 <0.05 29(12,2%) 209(87,2%) 0

(п = 73) (п = 56) (п = 98)

А \71 анти-ГМДП-аТ > 1,7 £ 1,7 73(100%) 0 (0%) <0.05 <0.05 10 (18%) 46 (82%) <0.05 <0.05 80(81,6%) 18(18,4%)

КГ(КонА) > 1,8 « 1,8 73(100%) 0(0%) <0.05 <0.05 0 (0%) 56(100%) <0.05 <0.05 97(99%) -1(1%)

Данные, представленные в этой таблице наглядно демонстрируют, что приведенные в ней параметры гуморального антибактериального иммунитета достоверно чаще встречаются в группе больных с клиническими проявлениями НИС, и следовательно данные показатели можно расценивать, как диагностические и прогностические критерии недостаточности иммунной системы.

ВЫВОДЫ.

1. Предложены новые подходы к оценке антибактериального гуморального иммунитета, включающие оценку уровня антител к детерминанте пептидогли-кана клеточной стенки бактерий - ГМДП, их аффинность и степень гликози-лирования. Данные параметры целесообразно использовать для оценки гуморального иммунитета т.к. они являются объективными диагностическими и прогностическими критериями развития недостаточности иммунной системы.

2. У здоровых лиц, проживающих в экологически неблагоприятных регионах, уровень антител к антигенной детерминанте пептидогликана St.aureus -ГМДП и степень гликозилирования IgG соответствуют воздействию иммуно-тропных факторов и уровню заболеваемости, характеризуемой как проявление иммунологической недостаточности

3. Развитие бактериальных проявлений недостаточности иммунной системы сопровождается увеличением содержания антител к ГМДП и антител к инфекционному агенту, являющемуся этиологическим фактором развития этих проявлений. При этом малая эффективность гуморального иммунного ответа к бактериальным антигенам связана, в том числе и, со снижением их аффинности и степени гликозилирования IgG.

4. При оценке показателей гуморального иммунного ответа определение уровня антител к ГМДП , а не к другим детерминантам и определение коэффициента гликозилирования с помощью Кон А является наиболее информативным.

5. При ВИЧ-инфекции у всех категорий больных и на всех стадиях заболевания наблюдается повышение титров антител к ГМДП. Снижение уровня антител к

ГМДП их аффинности и уровня гликозилирования являются прогностически значимыми лабораторными критериям.. прогрессии заболевания

6. Антибактериальный гуморальный иммунитет у больных с гнойно-септическими послеоперационными осложнениями характеризуется глубокой депрессией уровня антител ко всему спектру определяемых бактериальных антигенов и их низкой аффинностью и степенью гликозилирования IgG , что может быть показателем для назначения иммунокоррегирующей предоперационной терапии.

7. У хирургических больных сниженный уровень анти-ГМДП-антител и степень их гликозилирования являются прогностически значимыми критериями развития послеоперационных инфекционных осложнений.

8. Эффективность гуморального противобактериального иммунитета зависит не только от уровня антибактериальных антител, но и от их аффинности и степени гликозилирования.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Изучение местного иммунитета у больных хроническими неспецифическими заболеваниями легких. II Иммунология-1991-№6-с.60-63 (Соавт.Шульженко

A.Е., Борисова A.M., Еремина О.Ф., Бутаков А.А., Пинегин Б.В., Коршунов

B.М., Боссарт В.)

2. Применение рибосомального препарата рибомунила для коррекции иммунной системы у больных хроническим бронхитом. // Иммунология-1994-№1-с.36-43. (Соавт. Хаитов P.M., Борисова A.M., Хорошилова Н.В., Еремина О.Ф., Голубева Н.М., Пинегин Б.В.)

3. Клинико-иммунологическая оценка лечения рибомунилом больных хроническим бронхитом. // Терапевтический архив- 1994-т.66-№3-с.46-50 (Соавт. Борисова A.M., Хорошилова Н.В., Еремина О.Ф., Голубева Н.М., Пинегин Б.В., Дыханов И.И.)

4. Влияние рибомунила на гуморальный иммунитет слизистых оболочек респираторного тракта у больных с различным эффектом лечения. II Иммуноло-

гия-1994-№5-с.27-30. (Соавт. Пинегин Б.В., Хорошилова Н.В., Борисова А.М , Хаитов P.M.)

5. Применение рибосомального препарата рибомунила для коррекции иммунной системы у больных хроническим бронхитом. // Пульмонология-1995-№1-с.84-91. (Соавт. Хаитов P.M., Борисова A.M., Хорошилова Н.В., Еремина О.Ф., Голубева Н.М., Пинегин Б.В.)

6. Антитела к различным компонентам клеточной стенки бактерий в сыворотке крови людей. // Иммунология-1995-№5-с.26-29. (Соавт. Черноусое А.Д., Еща-нов О.Т., Карсонова М.И., Пинегин Б.В.)

7. Определение естественных антител к 1\1-ацетилглюкозаминил-1\1-ацетилмурамил дипептиду в сыворотке крови здоровых людей. // Иммуноло-гия-1995-№1-с.42-45.(Соавт. Пинегин Б.В., Макаров Е.А.)

8. Рибомунил: коррекция иммунной системы у больных хроническим бронхитом. // Практикующий врач: приложение к журналу "Медикал маркет"-1995-5-с.29-30 (Соавт. Хаитов P.M., Борисова A.M., Хорошилова Н.В., Еремина О Ф., Голубева Н.М., Пинегин Б.В.)

9. Определение естественных антител к N-ацетилглюкозаминил-М-ацетилмурамил дипептиду в сыворотке крови здоровых людей. // Russian Journal of lmmunology-1996-№1(1)-c.5-9 (Соавт. Хаитов P.M., Пинегин Б.В., Макаров Е.А., Леджер Ф.)

10 Гуморальные факторы местного иммунитета у больных хроническими неспецифическими заболеваниями легких. II Иммунология-1996-№6-с.59-62. (Соавт. Артемова О.П., Борисова A.M., Сергеев В.А, Пинегин Б.В.)

11. Влияние гликопина на состояние гуморального местного иммунитета у больных хроническим бронхитом. II Иммунология-1996-№6-с.62-65. (Соавт. Арте-мова О.П., Борисова A.M., Пинегин Б.В.)

12.Некоторые новые подходы к оценке гуморального иммунитета. II Intern.J. on immunorehabilitation-1996-№2-c.92(CoaBT. Пинегин Б.В., Ярилин Д.А.)

13.Определение антител к некоторым антигенам условно-патогенных микробов у больных ревматоидным артритом. II Intern.J. on immunorehabilitation-1996-№2-с. 149. (Соавт.Чоладзе Н.В.)

14.Изучение аффинности естественных антител сыворотки крови человека к компоненту клеточной стенки бактерий - глкжозэминилмурамилдипептиду,

обладающему адъювантной активностью // Иммунология-1997-№1-с.21-25. (Соавт. Климова C.B., Ярилин Д А., Р>,оцова M B., Пинегин Б.В.)

15.Иммунный статус и антитела к некоторым условно-патогенным бактериям у ВИЧ-инфицированных и больных СПИДом. /У Иммунология-1997-№4-с. 15-19. (Соавт. Пинегин Б.В., Симонова А.В., Чоладзе Н.В., Папуашвили М.Н., Прокопенко В.Д., Хаитов P.M.)

16.Особенности местного иммунитета больных ХНЗЛ при лечении новым иммуностимулятором - рибомунилом. II Тезисы докладов 1-ой Национальной конференции РААКИ - 1997 - с.280. (Соавт. Хорошилова Н.В., Борисова A.M., Пинегин Б.В.)

17.Иммунный статус и антитела к некоторым условно-патогенным бактериям у больных СПИДом и ВИЧ-инфицированных. II Intern.J. on immunorehabilitation-1997-№4-с.141(Соавт. Чоладзе H.В., Папуашвили М.Н., Прокопенко В.Д.)

18,Гуморальный антибактериальный иммунитет у часто и длительно болеющих людей. // Intern.J. on ¡mmunorehabilitation-1997-№4-c.28 (Соавт. Климова C.B., Пинегин Б.В., Комарова И.А.)

19.Особенности гуморального антибактериального иммунитета у часто и длительно болеющих людей. II Иммунология-1997-№3-с.50-52 (Соавт. Климова C.B., Пинегин Б.В., Комарова И.А.)

20.Конкурентный анализ специфичности естественных антител к эпитопу пеп-тидогликна клеточной стенки бактерий - глюкозаминилмурамил дипептиду, обладающего адъювантной активностью. // Иммунология-1997-№4-с.46-49. (Соавт. Пинегин Б.В., Ярилин Д А., Климова C.B., Хаитов P.M.)

21.Состояние местного и системного иммунитета у больных папилломавирус-ной инфекцией шейки матки и влияние на него иммуномодулятора солкотри-ховака. // Иммунология-1997-№4-с.45-49. (Соавт. Пинегин Б.В., Минкина Г.Н., Коршунова О.В., Сапрыкин В.Б..Сапрыкина О.А., Боссарт В., Карсонова М.И.)

22.Изучение местного иммунитета у больных хроническими неспецифическими заболеваниями легких и влияние на него некоторых иммуномодуляторов. II Тезисы докладов 1-ой Национальной конференции РААКИ - 1997 - с.525 (Соавг. Шупьженко А.Е., Борисова A.M., Пинегин Б.В.)

23.Определение антител к некоторым условно-патогенным бактериям для прогнозирования развития гнойно-септических осложнений после хирургических

операций. // Иммуноло- гия-1997-№4-с.39-42 (Соавт. Ярилин Д.А., Конович Е.А., Пинегин Б.В.)

24.Исследование специфичности естественных антител методом конкурентного анализа к эпитопу пептидогликна клеточной стенки бактерий - N-ацетилглюкозаминилмурамил дипептиду. // ЖМЭИ-1997 (Соавт.Пинегин Б В., Ярилин Д А., Климова С.В., Хаитов Р.М.)(принята к печати)

25.Особенности гуморального антибактериального иммунитета у больных СПИДом и ВИЧ-инфицированных. //ЖМЭИ-1997, (Соавт. Пинегин Б.В , Кар-сонова М.И., Папуашвили М.Н , Прокопенко В.Д., Симонова А.В., Хаитов P.M. (принята к печати)

26.The occurence of natural antibodies to minimal component of bacterial cell wall (N-acetylglucosaminyl-N-acetylmuramyl dipeptide) in sera from healthy humans. //Immunol. Lett., 1995, 47, p.33-37 (CoaBT.Pinegin B.V., Makarov E.A.)

27.Competitive analysis of specificity of natural antibodies against the epitope of bacterial cell wall peptidoglican: glucosaminylmuramyl dipeptide carrying adjuvant activity. II Immun & Inf.Dis. - 1996,- 6,- p.1-5 (Соавт. Pinegin B.V , Yarilin D A., Klimova S.V., Khaitov R.M.)

28.Some new approaches to the evaluation of humoral immunity. II Intern. J Immunorehabil., 1995, 1, p.157 (Соавт. Pinegin B.V., Konovich E.A.)

29.Some peculiarities of the humoral antibacterial immunity in HIV-infected and AIDS patients. // AIDS.- 1997 (Соавт. Pinegin B.V., Karsonova M.I., Papuashvili M N.. Prokopenko V.D , Simonova A.V., Khaitov Я.М.)(Принята к печати)

30.The study of affinity of natural antibodies of human serum towards glucosaminylmuramyl dipeptide, epitope peptidoglycan bacterial cell wall component with adjuvant activity. II Centr.Europ J. of Immun. - 1997 (Соавт. Klimova S.V., Yarilin D.A, Rubtsova M.V., Pinegin B.V., Khaitov Я.М)(Принята к печати)