Автореферат и диссертация по медицине (14.04.02) на тему:Новые подходы к созданию и стандартизации лекарственных средств на основе видов рода Hypericum L.

ДИССЕРТАЦИЯ
Новые подходы к созданию и стандартизации лекарственных средств на основе видов рода Hypericum L. - диссертация, тема по медицине
АВТОРЕФЕРАТ
Новые подходы к созданию и стандартизации лекарственных средств на основе видов рода Hypericum L. - тема автореферата по медицине
Правдивцева, Ольга Евгеньевна Самара 2011 г.
Ученая степень
доктора фармацевтических наук
ВАК РФ
14.04.02
 
 

Автореферат диссертации по медицине на тему Новые подходы к созданию и стандартизации лекарственных средств на основе видов рода Hypericum L.

На правах рукописи

Правдивцева Ольга Евгеньевна

НОВЫЕ ПОДХОДЫ К СОЗДАНИЮ И СТАНДАРТИЗАЦИИ ЛЕКАРСТВЕННЫХ СРЕДСТВ НА ОСНОВЕ ВИДОВ РОДА HYPERICUM L.

14.04.02 - фармацевтическая химия, фармакогнозия

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени доктора фармацевтических наук

oß^

2 1 АПР 2011

Самара - 2011

4844134

Работа выполнена в Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Самарский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации (443099, г. Самара, ул. Чапаевская, 89).

Научный консультант:

доктор фармацевтических наук, профессор

Куркии Владимир Александрович

Официальные оппоненты:

доктор фармацевтических наук, профессор

доктор фармацевтических наук, профессор

доктор химических наук, профессор

Киселева Татьяна Леонидовна

Бубенчикова Валентина Ивановна Буланова Анджела Владимировна

Ведущая организация:

Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Пятигорская государственная фармацевтическая академия» Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации

Защита диссертации состоится » мая 2011 г. в ¿0 часов на заседании диссертационного совета Д 208.085.06 при ГОУ ВПО «Самарский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации по адресу: 443079, г. Самара, проспект Карла Маркса, 165Б.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГОУ ВПО «Самарский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации: г. Самара, ул. Арцыбушевская, 171.

Автореферат разослан «]_» 2011 г.

Ученый секретарь диссертационного совета, кандидат фармацевтических наук, доцент

И.К. Петрухина

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. В настоящее время в медицинской практике наблюдается тенденция все более широкого применения фитопрепаратов для лечения и профилактики различных заболеваний. Это связано с тем обстоятельством, что лекарственные средства (JIC) на растительной основе, как правило, сочетают в себе широту и мягкость терапевтического действия с отсутствием значительного числа побочных эффектов в случае их рационального применения. Именно поэтому целесообразным является применение фитопрепаратов для лечения хронических заболеваний, в том числе патологий центральной нервной системы, главными причинами которых являются стресс, психоэмоциональное напряжение и экологическое неблагополучие окружающей среды. Перспективным источником растительных средств, на основе которого возможно получение отечественных эффективных антвдепрессантных препаратов, являются виды рода Зверобой - Hypericum L.

В настоящее время в медицинской практике Российской Федерации применяется два вида рода Зверобой (Hypericum L.) - зверобой продырявленный {Hypericum perforatum L.) и зверобой пятнистый (четырехгранный) (Hypericum maculatum Crantz., синоним Hypericum quadrangulum L.) семейства Hypericaceae (Guttiferae). Так, трава обоих фармакопейных видов зверобоя в нашей стране служит дня получения антимикробных, противовоспалительных, вяжущих и фотосенсибилизирующих средств, в то время как за рубежом на основе данного сырья производят антидепрессантные препараты, такие как «Деприм», «Негрустин» и «Гелариум Гиперикум», разрешенные к применению на территории РФ. Однако до сих пор нет единого мнения относительно характера нейротропного эффекта препаратов зверобоя: его трактуют седативным, антидепрессивным, а в некоторых случаях -стимулирующим ЦНС. Противоречия касаются и химической природы биологически активных соединений (БАС) видов рода Hypericum L., обладающих нейротропным действием. Все это не способствует созданию на основе травы зверобоя

импортозамещающих отечественных антидепрессантных ЛС. Разработке отечественных антидепрессантных. аналогов мешают и такие факторы, как недостаточная степень изученности химического состава видов рода Зверобой, а также отсутствие унифицированного подхода к анализу сырья и препаратов зверобоя (Самылина И.А., 1994). Кроме того, требуется оптимизация методик анализа как для сырья, так и препаратов, включая средство «Зверобоя настойка». Это обстоятельство связано с тем, что в действующей нормативной документации (НД) допущены существенные неточности. Так, в случае зверобоя травы для определения подлинности сырья не используются современные физико-химические методы анализа.

Исследования по данной проблеме представляются актуальными и важными также ввиду того, что трава зверобоя широко применяется как в Российской Федерации, так и за рубежом, однако до сих пор многие проблемы оставались нерешенными. Так, в нашей стране качество сырья и препарата «Зверобоя настойка» оценивается методом дифференциальной спектрофотометрии по содержанию суммы флавоноидов в пересчете на рутин. В то же время, в препаратах импортного производства методом прямой спектрофотометрии оценивается содержание суммы антраценпроизводных в пересчете на гиперицин. И тот, и другой подход к анализу имеет свои недостатки в силу того, что каждый из них в отдельности не позволяет в полной мере объективно охарактеризовать качество сырья и препаратов видов рода Зверобой.

Создание конкурентоспособных препаратов возможно лишь на основе глубокого изучения химической природы действующих веществ, а также использовании современных методов стандартизации сырья и препаратов (Куркин В.А., 2007). Выделение из сырья индивидуальных биологически активных веществ позволяет изучить их химическое строение, физико-химические свойства и фармакологические эффекты.

Кроме того, следует также отметить, что изучение морфолого-анатомических признаков фармакопейных и примесных видов рода Зверобой ранее в сравнительном аспекте не проводилось, тогда как современный уровень исследований предполагает использование в НД качественных цветных цифровых микрофотографий макро- и микроскопических признаков отдельных частей сырья, представляющего собой траву.

Таким образом, углубленное изучение химического состава, фармакологических свойств индивидуальных веществ и субстанций в сочетании с проведением морфолого-анатомического анализа позволит научно обосновать подходы к созданию и стандартизации сырья и препаратов видов рода Зверобой.

Цель н задачи исследования. Экспериментально-теоретическое обоснование новых подходов к созданию и стандартизации лекарственных средств на основе видов рода Зверобой (Hypericum L.).

Для достижения этой цели решались следующие задачи:

1. Сравнительное исследование химического состава надземной части видов рода Зверобой.

2. Выделение из надземной части зверобоя продырявленного индивидуальных биологически активных соединений, установление структуры выделенных веществ и изучение их физико-химических и фармакологических свойств.

3. Сравнительное морфолого-анатомическое исследование надземных частей видов рода Зверобой с использованием цифровой микроскопии.

4. Разработка и научное обоснование новых подходов к стандартизации сырья и препаратов зверобоя травы, отвечающих параметрам валидации.

5. Разработка методик качественного анализа для сырья и препаратов зверобоя травы с использованием метода тонкослойной хроматографии в сочетании с качественными реакциями и УФ-спектроскопией.

6. Разработка методик количественного анализа для сырья и препаратов зверобоя травы с применением дифференциальной спектрофотометрии (в

случае суммы флавоноидов), а также прямой спектрофотометрии (в случае антраценпроизводных).

7. Научное обоснование подходов к созданию новых антидепрессантных лекарственных препаратов на основе зверобоя травы.

8. Обоснование способов получения лекарственного препарата «Зверобоя настойка», «Зверобоя экстракт жидкий» и «Зверобоя экстракт сухой».

9. Исследование показателей качества сырья и препаратов зверобоя.

10. Разработка проектов ФСП «Зверобоя трава», «Зверобоя настойка», «Зверобоя экстракт жидкий» и «Зверобоя экстракт сухой».

11. Обоснование целесообразности использования в медицинской практике отечественных антидепрессантных препаратов на основе зверобоя травы.

Научная новизна. Исследование химического состава видов рода Hypericum L. позволило получить новые данные о содержании биологически активных соединений. Так, из надземной части зверобоя продырявленного выделено 9 индивидуальных соединений, относящихся к флавоноидам, флороглюцинам, фенилпропаноидам и стеринам. На основе изучения данных ЯМР-спсктроскопии, УФ-спектроскопии, масс-спектрометрии, тонкослойной хроматографии (ТСХ) установлено химическое строение выделенных веществ, среди которых вещества 3,8п-бисапигенин, гиперфорин, ß-ситостерин и эргостерин выделены впервые в РФ, а 6,8и-дикверцетин впервые описан для рода Hypericum L. и является новым природным соединением.

Сравнительное исследование видов рода Hypericum L. позволило выявить разнообразную природу БАС, среди которых наибольшее значение для целей стандартизации имеют флавоноиды (гиперозид, рутин и бисапигенин) и антраценпроизводные (гиперицин). Разработаны новые подходы к стандартизации сырья и препаратов видов рода Hypericum L., которые заключаются в сочетанном определении двух групп действующих веществ - суммы флавоноидов в пересчете на рутин и суммы антраценпроизводных в пересчете на гиперицин.

Сравнительное анатомо-морфологическое исследование сырья видов рода Hypericum L. позволило выявить общие и отличительные признаки для фармакопейных и примесных видов, необходимые для объективной идентификации сырья. На основе цифровых микрофотографий показано, что основные диагностические признаки выявляются при рассмотрении листьев, цветков и чашелистиков сырья.

Обоснованы технологические подходы для создания препаратов «Зверобоя настойка», «Зверобоя экстракт жидкий» и «Зверобоя экстракт сухой», которые позволили повысить выход целевых веществ, обладающих нейротропной активностью. В результате фармакологических исследований обнаружена выраженная антидепрессантная активность для новых лекарственных препаратов «Зверобоя настойка», «Зверобоя экстракт жидкий» и «Зверобоя экстракт сухой». Обоснована целесообразность применения в медицинской практике импортозамещающих препаратов видов рода Hypericum L. в качестве антидепрессантных средств.

Практическая значимость работы. Сравнительное исследование сырья видов рода Hypericum L. свидетельствует о различии в содержании биологически активных соединений фармакопейных и примесных видов сырья, что имеет существенное значение с точки зрения идентификации сырья и препаратов зверобоя. Разработаны унифицированные методики качественного (ТСХ в сочетании с качественными реакциями и УФ-спсктроскопией) и количественного анализа (сочетанное определение содержания суммы флавоноидов в пересчете на рутин и определение содержания суммы антраценпроизводных в пересчете на гиперицин) для зверобоя травы, зверобоя настойки, зверобоя экстракта жидкого и зверобоя экстракта сухого. Исследованы показатели качества сырья «Зверобоя трава», «Зверобоя настойка», «Зверобоя экстракт жидкий» и «Зверобоя экстракт сухой». Проведенные фармакологические исследования нейротропной активности позволили выявить наличие выраженной антидепрессантной активности для новых препаратов на

основе видов рода Hypericum L. Обоснована ресурсосберегающая технология заготовки сырья высокого качества, что нашло отражение в рекомендациях по заготовке сырья. Разработаны проекты ФСП «Зверобоя трава», «Зверобоя настойка», «Зверобоя экстракт жидкий» и «Зверобоя экстракт сухой», которые проходят экспертизу в ФГБУ «Научный центр экспертизы средств медицинского назначения» Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации.

Получен патент РФ на изобретение № 2327481 «Способ получения средства, обладающего антидепрессантной активностью» (2008 г.).

Публикации. Основное содержание диссертации опубликовано в 77 научных работах, в том числе 19 работ в журналах, реферируемых ВАК, 1 патенте РФ на изобретение и монографии «Зверобой: итоги и перспективы создания лекарственных средств» (2008 г.).

Апробация работы. Материалы работы доложены и обсуждены на различных региональных, Всероссийских и Международных конференциях, в том числе на X, XI, XII, XIII, XTV, XV Всероссийском конгрессе «Экология и здоровье человека» (Самара, 2005; 2006; 2007; 2008; 2009; 2010), XIII, XIV, XV, XVI и XVII Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 2006; 2007; 2008; 2009; 2010); Международном медицинском конгрессе (Ганновер, 2006), Международной конференции по полифенольным соединения (Канада, 2006), ХП Съезде русского ботанического общества «Фундаментальные и прикладные проблемы ботаники в начале XXI века» (Петрозаводск, 2008), VII, VIII Международной конференции «Медико-социальная экология личности: состояние и перспективы» (Минск, 2009; 2010), VII Международном конгрессе «Традиционная медицина» (Москва, 2009), Международном симпозиуме по фенольным соединениям (Москва, 2009), II Российском фитотерапевтическом съезде (Москва, 2010) и др.

Связь задач исследования с планами научных работ. Диссертационная работа выполнена в соответствии с тематическим планом

научно-исследовательских работ Государственного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Самарский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации по темам «Комплексные исследования по проблеме создания новых лекарственных препаратов природного и синтетического происхождения» (№ 01200900658) и «Фармакогностическое и химико-фармацевтическое исследование лекарственных растений и фитопрепаратов» (№ 01200405620), а также соответствует тематике Проблемной комиссии по химико-фармацевтическим наукам. Кроме того, работа выполнена при поддержке проекта 02.740.11.0650 ФЦП «Научные и научно-педагогические кадры инновационной России» на 2009-2013 годы.

Основные положения, выдвигаемые на защиту:

1. Результаты химического изучения травы зверобоя продырявленного.

2. Результаты сравнительного морфолого-анатомического анализа сырья различных видов рода Hypericum L.

3. Новые подходы к стандартизации сырья и препаратов на основе зверобоя травы, которые заключаются в сочетанном определении суммы флавоноидов в пересчете на рутин и определении суммы антраценпроизводных в пересчете на гиперицин.

4. Способы получения новых лекарственных средств «Зверобоя настойка», «Зверобоя экстракт жидкий» и «Зверобоя экстракт сухой».

5. Научное обоснование целесообразности применения разработанных препаратов в медицинской практике.

Структура и объем диссертации. Диссертационная работа изложена на 245 страницах машинописного текста, содержит 41 таблицу, 90 рисунков. Диссертация состоит из введения, 7 глав, выводов, списка литературы и приложения. Список литературы включает 355 источников, из которых 50 зарубежных.

Во введении обосновывается актуальность темы, формулируются цель и задачи исследования, отмечены новизна и практическая значимость полученных результатов, а также изложены положения, выносимые на защиту.

Первая глава посвящена обзору современного состояния исследований растений рода Hypericum L., в котором обобщены и систематизированы сведения по изучению химического состава, фармакологических свойств и применению в медицине. Главы 2-7 являются экспериментальными, в них дана характеристика объектов и методов исследования, обсуждаются результаты изучения химического состава сырья видов рода Hypericum L., разработки новых подходов к стандартизации сырья и препаратов, изложены способы получения новых лекарственных препаратов, а также результаты сравнительного анатомо-морфологического исследования сырья видов рода Hypericum L.

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ 1. Материалы и методы исследования

Объектами исследования служили высушенные на воздухе образцы сырья видов Hypericum L. Для сравнительного анализа использовались образцы надземных частей зверобоя продырявленного, заготовленные в течение вегетационного периода 2000-2009 гг. на территории различных регионов РФ. Для анализа содержания основных БАС сырья в зависимости от сроков вегетации и длины стебля, а также для установления оптимального режима сушки сырья были использованы образцы надземных частей зверобоя продырявленного (Hypericum perforatum L.), культивируемого на территории Ботанического сада Самарского государственного университета. В Ботаническом саду были также собраны образцы надземных частей зверобоя большого (Hypericum ascyron L.), зверобоя олимпийского (Hypericum olympicum L.) и зверобоя красивого (Hypericum androsaemum L.). Данное сырье было заготовлено от культивируемых видов. Образцы

надземных частей зверобоя жестковолосистого (волосистого) (Hypericum hirsutum L.) и зверобоя изящного (Hypericum elegans Steph.) были собраны на территории Самарской области от дикорастущих растений. На территории Кировской области, Республики Марий Эл и Чувашской Республики были заготовлены образцы травы зверобоя пятнистого (четырехгранного) (Hypericum maculatum Crantz, (синоним Hypericum quadrangulum L.). Кроме того, были использованы образцы сырья зверобоя продырявленного, культивируемого на территории специализированного хозяйства ЗАО «Самаралектравы» (Самарская область), а также промышленные образцы КФХ «Кентавр» (Самарская область), ООО «Лекрасэт» и «Алтайфарм» (Алтайский край), ОАО «Красногорсклексредства» (Московская область), ООО «Народная медицина» (Ленинградская область).

Объектами исследования являлись водно-спиртовые извлечения (настойки, жидкие экстракты), изготовленные в лабораторных условиях по различным технологическим схемам из травы зверобоя продырявленного. Образцы сухого экстракта зверобоя были получены на основе жидкого экстракта зверобоя продырявленного. Кроме того, были использованы образцы препарата «Зверобоя настойка», выпущенные промышленным способом, а также образцы препаратов «Негрустин», «Деприм» и «Гелариум Гиперикум».

Для приготовления растворов стандартных веществ были использованы образцы ГСО рутина, гиперозида и кверцетина. Кроме того, в исследованиях использовались образцы индивидуальных веществ, выделенных из травы зверобоя продырявленного.

Для исследования морфолого-анатомических признаков сырья готовились образцы надземной части различных видов рода Hypericum L. как по методике в соответствии с требованиями ГФ СССР XI издания, так и с использованием собственных разработок. Все микрофотографии сырья получены с помощью цифрового микроскопа «Motic DM 111».

Для целей детального исследования химического состава надземной части зверобоя продырявленного и выделения биологически активных веществ в индивидуальном виде применен метод колоночной хроматографии в отношении ряда образцов травы зверобоя. Для этих целей извлечения из надземной части зверобоя продырявленного упаривали и наносили на силикагель Ь 40/100. Экстрактивные вещества хроматографировали, используя качестве элюента хлороформ, спирто-хлороформные смеси в различных сочетаниях и спирт этиловый. Элюаты делили на фракции примерно одинакового объема по 150-200 мл, затем упаривали под вакуумом. Индивидуальные вещества получали методом рехроматографии на колонках, где в качестве сорбента использовали полиамид «\Voelm» и сефадекс ЬН-20, а также путем перекристаллизации. Выделенные вещества были исследованы и помощью 'Н-ЯМР-спекгроскопии и 13С-ЯМР-спектроскопии, УФ-спектроспопии, масс-спектрометрии, различных химических превращений, тонкослойной хроматографии (ТСХ) и других методов для установления их структуры.

Методом ТСХ проводили изучение образцов травы зверобоя и препаратов травы зверобоя, а также осуществлялся контроль чистоты выделенных веществ при использовании колоночной хроматографии. При этом были использованы пластинки «БИиМ ЦУ 254», «Сорбфил ПТСХ-П-А-УФ» и «Сорбфил ПТСХ-АФ-А-УФ». Для анализа были использованы следующие системы растворителей: хлороформ - этиловый спирт (2:1, 4:1, 6:1, 9:1), хлороформ - метиловый спирт - вода (26:14:3), а также система хлороформ - этиловый спирт - вода (26:16:3). Прежде чем поместить пластинку, камеру насыщали парами растворителей в течение 1 часа. Анализ проводили при комнатной температуре, фронт прохождения растворителя составлял около 9 см («Сорбфил ПТСХ-П-А-УФ» и «Сорбфил ПТСХ-АФ-А-УФ») или 13 см («ЗОиЛЯ иУ 254»), Для анализа использовали растворы государственных стандартных образцов (ГСО) рутина, кверцетина и гиперозида, а также другие выделенные индивидуальные соединения в

качестве веществ-свидетелей, например рабочий стандартный образец (PCO) бисапигенина.

Спектрофотометрический метод использовали для количественной оценки содержания суммы антраценпроизводных, а также флавоноидов в траве зверобоя и образцах препаратов зверобоя. Для анализа флавоноидов были использованы методы дифференциальной спектрофотометрии в пересчете на рутин с использованием спиртового раствора алюминия хлорида. Метод прямой спектрофотометрии использован для анализа антраценпроизводных. В случае прямой спектрофотометрии раствором сравнения являлся 95 % этиловый спирт. Все исследования проводились на спектрофотометре «Specord 40» (Analytik Jena) в кюветах с толщиной слоя 10 мм. Кроме того, метод УФ-спектроскопии использовался для идентификации веществ, выделенных из травы зверобоя методом колоночной хроматографии.

Образцы настоек были получены в соответствии с имеющимися требованиями в соотношении «сырье:экстрагент» 1:5. Были использованы два классических способа получения настоек: мацерация, перколяция и новый метод модифицированной мацерации. Препарат «Зверобоя экстракт жидкий» получали в лабораторных условиях различными технологическими методами: перколяцией и реперколяцией в соотношении «сырье-экстрагент» 1:1. Препарат «Зверобоя экстракт сухой» получали путем высушивания под вакуумом жидкого экстракта при температуре не выше 50 °С.

Для всех полученных препаратов, а также выделенных индивидуальных веществ проводили исследование биологической активности. Доклинические испытания нейротропной активности осуществляли на белых беспородных крысах обоего пола.

Антидепрессантную активность изучали в тесте открытое «Отчаяние». Антидепрессивную активность препаратов оценивали по уменьшению времени (неподвижности), которая считается проявлением подавленности

или отчаяния. В качестве препарата сравнения был использован препарат «Амитриптилин».

Анксиолитическое действие препаратов оценивали, используя тест «Приподнятый крестообразный лабиринт». Данная методика основана на способности животных под действием препаратов преодолевать естественный страх перед падением с высоты и открытыми площадками. В качестве препарата сравнения был использован препарат «Феназепам».

Результаты эксперимента приводятся в виде средней арифметической и ее стандартной ошибки. Статистическую значимость различий параметров определяли с помощью критериев 1 Стьюдента (р < 0,05) и 81аи8Йса 6.0.

2. Исследование химического состава надземной части зверобоя продырявленного

Для исследования химического состава травы зверобоя продырявленного методом препаративной колоночной хроматофафии было использовано извлечение, полученное с помощью 90% этилового спирта из сырья, заготовленного в Самарской области в 2006 и 2008 гг. Полученное извлечение упаривали под вакуумом и наносили на силикагель Ь 40/100. Таким образом, был получен ряд фракций (более 300), которые в дальнейшем использовался для выделения индивидуальных веществ. Индивидуальные вещества получали методом рехроматографии на колонках, где в качестве сорбента использовали полиамид «\Уое1т» и сефадекс ЬН-20. Контроль за разделением веществ осуществляли с помощью метода ТСХ на пластинках «81Мо1 ЦУ 254», «Сорбфил ПТСХ-АФ-А-УФ» и «Сорбфил ПТСХ-АФ-А-УФ» в системах хлороформ-спирт (2:1), а также специально разработанной нами системе хлороформ-этанол-вода (26:16:3). Выделенные вещества были исследованы с помощью УФ-, 'Н-ЯМР-спеьсгроскопии, 13С-ЯМР-спек1роскопии, масс-спектромегрии, различных химических превращений, ТСХ. Затем все описанные выше операции осуществлялись повторно в отношении извлечения из травы зверобоя,

полученного на основе 70% этилового спирта, а также сырья, заготовленного в 2007 г. В результате проведенного исследования были выделены следующие компоненты: 3,8п-бисапигенин, кверцетин, 6,8"-дикверцетин, пшерозид, рутин (флавоноиды), хлорогеновая кислота (фенилпропановд) и гиперфорин (флороглюцин), а также (3-ситотерин и эргостерин (стерины). Физико-химические и спектральные характеристики выделенных веществ, в частности, бисапигенина, представлены на рис. 1 и в таблице 1.

Г.: 'I ч '.и 1.М ■

5

Рис. 1. 'Н-ЯМР- спектр 3,8пбисапигенина

Таблица 1

Физико-химические константы соединений, выделенных из _надземной части зверобоя продырявленного_

№ п/п Название, структура Физико-химические константы

1. 3,8й - Бисапигенин \ /ч^он СзоН,80ю С т.пл. 233-235°С, М+ 302 (100 %), УФ-спектр: Кы 270, 330 нм. 'Н-ЯМР-спектр в дейтероацетоне (6, м.д.): 13,15 (с, 5-ОН), 12,99 (с, 5п-ОН), 7,71 (д, 9 Гц, 2Н, Н-2',61), 7,51 (д, 9 Гц, 2Н, Н-2И1,6П1),), 6,90 (д, 9 Гц, 2Н, Н-З'.б1), 7,79 (д, 9 Гц, 2Н, Н-3Ш,5Ш), 6,61 (с, Н-З11), 6,60 (д, 2,5 Гц, Н-8), 6,35 (д, 2,5 Гц, Н-6), 6,34 (с, Н-б").

2. 6,8 й -Дикверцетин Д^он / А^он Ч^Ч^-ОН СзоН^Ои, УФ-спектр в этаноле: Кы 257, 268 гш, 374 нм. 'Н-ЯМР-спектр в дейтероацетоне (6, м.д.): 7,83 (д, 9 Гц, Н-21), 7,70 (дд, 2 и 9 Гц, Н-61), 7,53 (д, 9 Гц, Н-2111), 7,48 (да, 2 и 9 Гц, Н-6111), 6,98 (д, 9 Гц, Н-51), 6,89 (д, 9 Гц, Н-5111), 6,53 (уш. с, Н-8), 6,27 (уш. с, Н-6).

3. Кверцетин Д.ОН ОН О С15Н10О7 с Т.ПЛ. 312-314 °С, М+ 302 (100 %), УФ-спектр в этаноле: 1,пах 257, 268 пл, 372 нм. 'Н-ЯМР-спектр в дейтероацетоне (6, м.д.): 12,20 (с, 5-ОН), 7,83 (д, 9 Гц, Н-2'), 7,70 (дд, 2 и 9 Гц, Н-6'), 6,99 (д, 9 Гц, Н-5'), 6,53 (д, 2,5 Гц, Н-8), 6,26 (д, 2,5 Гц, Н-6).

4. Гиперозид он А/он ОН О С21Н20О12 с т.пл. 233-235"С (водный ацетон); УФ-спектр в этаноле: 258, 266 пл, 362 нм. 'Н-ЯМР-спектр в смеси дейтероацетона и дейтероводы (6, м.д.): 12,30 (с, 5-ОН), 7,92 (д, 2,5 Гц, Н-21), 7,55 (дд, 2,5 и 9 Гц, Н-61), 6,88 (д, 9 Гц, Н-51), 6,45 (д, 2,5 Гц, Н-8), 6,21 (д, 2,5 Гц, Н-6), 5,20 (д, 7,5 Гц, Н-111 галактозы), 3,5-4,0 (м, 6Н галактозы).

5. Рутин он ДлН он о С27Н30О16; т.пл. 192-194 "С (водный спирт) УФ-спектр: Ядах 258, 266 пл, 362 нм. 1Н-ЯМР-спектр в смеси дейтероацетона и дейтероводы, 2:1 (5, м.д.): 7,74 (д 9 Гц, Н-21), 7,68 (дд, 2,5 и 9 Гц, Н-61), 6,94 (д, 9 Гц, Н-51), 6,50 (д, 2,5 Гц, Н-8), 6,27 (д, 2,5 Гц, Н-6), 5,13 (д, 7 Гц, Н-111 глюкозы), 4,55 (д, 2 Гц, Н-1111 рамнозы), 3,70-3,25 (м, 6Н глюкозы + 4Н рамнозы), 1,08 (д, 6 Гц, ЗН, СНз рамнозы).

6. Хлорогеновая кислота он ОН 1 он Ci6H,809. Т. пл. 203-205° (вода). УФ-спектр в спирте этиловом: 243, 300 пл, 330 нм. 'Н-ЯМР-спектр в ДМСО-с1й (100 МГц, м.д.): 7.45 (д, 16 Гц, Н-7), 7.06 (д, 2 Гц, Н-21), 7.01 (ад, 2 и 8 Гц, Н-6'), 6.80 (д, 8 Гц, Н-51), 6.18 (д, 16 Гц, Н-8), 5.10 (дт, 5 и 9 Гц, Н-5), 4.00 (кв, 3 Гц, Н-3), 3.62 (дд, 3 и 9 Гц, Н-4).

7. Гипе О рфорин 7 X С35Н54О4; УФ-спектр в этаноле: 275 нм. 'Н-ЯМР-спекгр в дейтерохлороформе (5, м.д.): 4,85,3 (м, 4Н, Н-15, Н-22, Н-27, Н-32), 4,2-4,3 (м, 2Н, Н-14), 3,20 (м, 1Н, Н-11), 1,8-2,5 (м, ЮН, Н-6, Н-7, 2Н-19, 2Н-21, 2Н-26, 2Н-31), 1,51,8 (м, 28Н, СНз-17, 18, 24, 25, 29, 30, 34, 35), 1,20 (с, 6Н, СНз-12, СНз-13), 1,00 (с, ЗН, СНз-20).

8. нсгч/ ß-Сит остерин С29Н50О; т.пл. 132-133, 'Н-ЯМР-спектр 200 МГц в дейтерохлороформе (5, м.д.): 5,32 (м, 1Н, Н-6), 3,73 (м, 1Н, Н-3), 0,82,2 (м, 47Н, в том числе 6 СНз). Масс-спектр (70 eV, 200 "С, m/z, %): 414 (М+, 32), 255 (32), 231 (19), 213 (27), 145 (34), 135 (37), 119 (60), 105 (43), 97 (58), 71 (63), 69 (65), 43 (50).

9. НО'Чх Эрго iT стерин С28Н44О, т.пл. 163-165 °С. УФ-спектр (EtOH, Хтк): 271 нм. 'Н-ЯМР-спектр 200 МГц в дейтерохлороформе (8, м.д.): 5,35 (м, 2Н, Н-6, Н-7), 4,37 (д, 2Н, 7,7, Н-22, Н-23), (м, 1Н, Н-3), 3,1-3,4 (м, 2Н, П-9, Н-14), 0,65-2,4 (м, 47Н, в том числе 6 СНз). Масс-спектр (70 eV, 200 "С, m/z, %): 396 (М\ 100), 255 (7), 213 (13), 147 (28), 80 (34), 57 (52), 43 (68).

Следует отметить, что 3,8п-бисапигенин и гиперфорин впервые выделены из травы зверобоя продырявленного, произрастающего в РФ. Вещество 6,8й-дикверцетин впервые описано для рода Hypericum L. и является новым природным соединением. Из надземной части Hypericum perforatum L. впервые выделены ß-ситостерин и эргостерин.

3. Разработка новых подходов к стандартизации сырья и препаратов видов рода Hypericum L.

3.1. Исследования по обоснованию новых подходов к стандартизации сырья и препаратов зверобоя

В настоящее время весьма актуальным является исследование вопросов стандартизации сырья и препаратов видов рода Hypericum L. Несмотря на то, что в нормативной документации на сырье (ГФ СССР XI издания (ст. 52) и препарат «Зверобоя настойка» (ФС 42-814-73 и ФС 42-1889-95) предусмотрены качественный и количественный анализы, и в том, и другом случае имеются существенные неточности. Прежде всего следует отметить, что в методике анализа сырья в качестве экстрагента используется 50% этиловый спирт, однако результаты проведенных нами исследований свидетельствуют о том, что оптимальным экстрагентом для травы зверобоя является 70% этиловый спирт, который, на наш взгляд, следует использовать для целей стандартизации (табл. 2). Это обстоятельство согласуется с данными научной литературы, в которых сообщается, что оптимальным экстрагентом для флавоноидов рутина и гиперозида, содержащихся в траве зверобоя, является этиловый спирт 70%-ной концентрации. Для получения извлечения из травы зверобоя по методике, изложенной в ГФ СССР XI издания, следует провести три последовательные экстракции по 30 мин, объединяя полученные извлечения. Наши исследования не показали значительного повышения содержания флавоноидов в получаемых извлечениях при увеличении количества экстракций до трех. Таким образом, изучение динамики извлечения суммы флавоноидов из травы зверобоя

продырявленного свидетельствуют о том, что оптимальным подходом является однократная экстракция травы зверобоя в течение 90 мин на кипящей водяной бане, где в качестве экстрагента используется 70% этиловый спирт.

Таблица 2

Зависимость выхода флавоноидов травы зверобоя _ от концентрации экстрагента_

№ п/п Экстрагент Время экстракции, мин Содержание суммы флавоноидов в пересчете на рутин,%

1. 40% этиловый спирт 90 5,90 ± 0,09

2. 50% этиловый спирт 90 6,00 ±0,10

3., 70% этиловый спирт 90 6,45 ±0,10

4. 90% этиловый спирт 90 5,76 ± 0,09

Методом качественного анализа в ГФ СССР XI выбрана пробирочная реакция с 2% спиртовым раствором алюминия хлорида, позволяющая обнаружить лишь присутствие флавоноидов. Учитывая многообразие БАС зверобоя в качестве основного метода качественного анализа (рис. 2 и 3), нами предложено использовать метод ТСХ на пластинках «ЗйийЯ 1П/ 254», «Сорбфил-ПТСХ-П-А-УФ» или «Сорбфил-ПТСХ-АФ-А-УФ». Результаты четко оцениваются при просматривании пластинки в УФ-свете при длине волны 254 и 366 нм, а также после проявления раствором диазотированной сульфаниловой кислоты или диазобензолсульфокислоты. Данный метод позволяет оценить не только содержание конкретных флавоноидов в траве зверобоя, но и наличие антраценпроизводных. При этом в качестве веществ-свидетелей предложено использовать растворы ГСО рутина и гиперозида -доминирующих флавоноидов травы зверобоя, которые четко обнаруживаются на ТСХ (рис. 2 и 3). Однако при этом на хроматограмме четко диагностируется и бисапигенин, а не кверцетин (содержащийся в небольших количествах), как сообщается в литературе. Таких результатов разделения веществ можно было добиться, используя систему растворителей

хлороформ: этиловый спирт: вода в соотношении (26:16:3). На хроматограмме также четко фиксируется наличие антраценпроизводных в виде пятна красного цвета с около 0,6 до высыхания хроматограммы и стального цвета после высыхания. Это пятно светится красным светом при просматривании хроматограммы в УФ-свете при длине волны 366 нм.

Кроме того, на наш взгляд, целесообразно использовать две химические реакции на группы веществ, характерные для зверобоя. Реакция на антраценпроизводные: наличие для извлечения из травы зверобоя характерной красной окраски (флуоресцирующей в УФ-свете при длине волны 366 нм), переходящей в зелено-желтый цвет после добавления раствора щелочи и восстановление первоначальной красной окраски после добавления раствора хлористоводородной кислоты. Показательна также реакция на конденсированные дубильные вещества, которая заключается в прибавлении к извлечению нескольких капель раствора железоаммонийных квасцов или раствора хлорида окисного железа, при котором наблюдается черно-зеленое окрашивание. Эффективным методом качественного анализа является УФ-спсктроскопия извлечений из травы зверобоя (рис. 4 и 5). При этом характерными являются максимумы поглощения в области 270 и 360 нм (флавоноиды), а также при 591 нм (антраценпроизводные).

В фармакопейной статье на траву зверобоя определение суммы флавоноидов осуществляется с использованием дифференциальной спектрофотометрии при длине волны 415 нм (в пересчете на рутин). Причем в тексте статьи допущен ряд неточностей, существенно искажающих суть методики. Так, приготовление исследуемого раствора (Б) делается следующим образом: в мерную колбу на 25 мл помещают 1 мл раствора хлорида алюминия и доводят 95% спиртом до метки. При этом раствор сравнения готовится следующим образом: в колбу на 25 мл помещают 1 мл извлечения из травы (раствора А), 1 каплю раствора уксусной кислоты и доводят до метки 95% спиртом. Совершенно очевидно, что для приготовления испытуемого раствора (Б) необходимо добавить 1 мл извлечения (раствора А).

О

о о

О J

о о—е—е—&

о о °

О

о о

О J

-е—е—©—е—е

Рис. 2. ТСХ извлечения из травы зверобоя продырявленного в системе растворителей: хлороформ-этиловый спирт-вода в соотношении (26:16:3)

Рис. 3. ТСХ извлечения из травы зверобоя продырявленного в системе растворителей: этилацетат - муравьиная кислота -2 н хлористоводородная кислота в соотношении (85:6:9)

Обозначения:

1. Излечение из травы зверобоя продырявленного

2. Раствор ГСО рутина

3. Раствор ГСО гиперозида

4. Раствор ГСО кверцетина

5. Раствор PCO бисапигенина

На наш взгляд, определение оптической плотности оптимально проводить при длине волны 412 нм, а не 415 нм, как указано в статье ГФ СССР XI издания. Это обусловлено тем, что максимум кривой поглощения раствора рутина в присутствии алюминия хлорида находится при длине волны 412 нм.

АЬгаЬапсе

Рис. 4. УФ-спектр раствора извлечения травы зверобоя

Рис. 5. УФ-спектры раствора извлечения травы зверобоя в присутствии раствора алюминия хлорида

Обозначения:

1 - извлечение из травы зверобоя 1:2500 на 70% этиловом спирте

2 - извлечение из травы зверобоя 1:2500 на 70% этиловом спирте (+А1С1з).

Подбирая оптимальные условия для излечения антраценпроизводных из сырья, работу проводили аналогично анализу флавоноидов (табл. 3). Оптимальными условиями экстракции оказались те же параметры, что и для флавоноидов. Следовательно, возможно получение извлечения из сырья, часть которого используется для анализа флавоноидов, часть - для анализа антраценпроизводных. В своих исследованиях мы отталкивались от методики

анализа, изложенной в НД на препарат «Деприм», в которой используется определение суммы антраденпроизводных в пересчете на гиперицин с использованием прямой спектрофотометрии при длине волны 590 нм. Однако, как показали проведенные нами исследования, максимум для суммы антраденпроизводных находится при длине волны 591 ни. В действующей методике анализа препарата «Деприм» используется ряд агрессивных реактивов, таких как метиловый спирт, что нежелательно с точки зрения безопасности. Кроме того, в методике предполагается использование дорогостоящих и редких реактивов, оснащения и аппаратов, не используемых широко в методиках фармацевтического анализа нашей страны. Предложенная нами методика анализа антраценпроизводных, где в качестве метода также используется прямая спектрофотометр™ при длине волны 591 нм, выгодно отличается от существующей отсутствием токсичных реактивов, дорогостоящего оснащения и непродолжительным временем, необходимом для анализа.

Таблица 3

Зависимость выхода антраценпроизводных от параметров экстракции

№ Экстр агент Соотношение Время Содержание суммы

п/п «сырье (г) - экстракции, антраценпроизводных

«экстрагент», мл мин в пересчете на гиперицин, %

1. 40% этиловый спирт 1:50 90 0,59 ± 0,02

2. 70% этиловый спирт 1:30 90 0,64 ± 0,03

3. 70% этиловый спирт 1:50 90 0,72 ± 0,03

4. 90% этиловый спирт 1:50 90 0,46 ±0.02

5. 95% этиловый спирт 1:50 90 0,33 ±0,01

На наш взгляд, такой же подход (сочетание определения суммы флавоноидов в пересчете на рутин и содержания суммы антраценпроизводных в пересчете на гиперицин) целесообразно применять и для анализа препаратов зверобоя на основе травы зверобоя.

Качество препарата «Зверобоя настойка» регламентируется ФС 42-1889-95. В качестве метода качественного анализа для препарата выбран метод ТСХ-анализа, в котором используются растворы трех ГСО рутина, гиперозида и кверцетина. По нашему мнению, целесообразно использовать лишь растворы ГСО

рутина и гиперозида. Это связано с тем, что кверцетин, хотя и содержится в траве зверобоя в небольшом количестве, в настойке, приготовленной на 40% этиловом спирте, практически не обнаруживается. Кроме того, в данной статье в качестве системы растворителей используется система, состоящая из этилацетата, муравьиной кислоты и хлористоводородной кислоты в соотношении 85:6:9. На наш взгляд, оптимальной является система хлороформ - этиловый спирт - вода в соотношении 26:16:3. Данная система более проста в приготовлении и не содержит агрессивных реагентов. Следует также отметить, что в фармакопейной статье предлагается проявлять пластинки раствором алюминия хлорида, что позволяет обнаружить только флавоноиды. На наш взгляд, целесообразно использовать просмотр пластинок в УФ-свете при длине волны 254 и 366 нм, а также проявление раствором диазобензолсульфокислоты кислоты, которая проявляет большее количество фенольных соединений, присущих траве зверобоя. Как и в случае сырья зверобоя, в качестве основного метода качественного анализа для препарата «Зверобоя настойка» нами предложено использовать метод тонкослойной хроматографии наряду с пробирочными реакциями (на антраценпроизводные и дубильные вещества).

В методике количественного определения суммы флавоноидов в препарате «Зверобоя настойка» при измерении оптической плотности исследуемого раствора настойки (с добавлением алюминия хлорида) в качестве раствора сравнения используется раствор, состоящий из 1 мл исследуемого раствора (раствора А), 1 капли уксусной кислоты, доведенный спиртом до метки 25 мл, что вполне логично, однако в случае раствора ГСО рутина, оптическая плотность которого измеряется параллельно, предлагается использовать 95% этиловый спирт. Данный подход вряд ли можно считать корректным, ведь максимум кривой поглощения раствора рутина (без добавления алюминия хлорида) составляет 362 нм. На наш взгляд, раствор рутина (раствор Б) следует готовить по схеме, аналогичной испытуемому раствору настойки. В мерную колбу на 25 мл необходимо помещать 1 мл раствора А рутина, 1 мл раствора алюминия

хлорида и доводил, до метки 95% спиртом. В качестве раствора сравнения следует использовать раствор, состоящий из 1 мл исследуемого раствора А рутина, доведенный до метки 25 мл. При этом спектрофотометрию, как и в случае травы зверобоя, следует проводить при длине волны 412 нм (оптимальной для комплекса рутина с алюминием хлоридом). Нерациональным, на наш взгляд, остается и подход, предусматривающий при расчете содержания суммы флавоноидов в настойке использовать показатель плотности (р). На наш взгляд, использование этого показателя нецелесообразно, так как неоправданно усложняет методику анализа.

Для анализа суммы антраценпроизводных препарата «Зверобоя настойка» также нами предложено использовать прямую спектрофотометрию при длине волны 591 нм, а не при 590 нм, как это предусмотрено в методиках анализа зарубежных препаратов.

3.2. Методики качественного анализа сырья «Зверобоя трава»

1. ТСХ-анализ. На линию старта пластинки "Силуфол УФ-254", "Сорбфил-ПТСХ-П-А-УФ" или "Сорбфил-ПТСХ-АФ-А-УФ" микропипеткой наносят 0,03 мл полученного извлечения из травы зверобоя (см. раздел 3.3.), рядом наносят такие же объемы 0,1% раствора ГСО гиперозида и раствора ГСО рутина (раствор А - см. раздел З.З.).

Хроматографическую пластинку помещают в камеру, которую предварительно насыщают не менее 1 ч смесью растворителей: хлороформ -этиловый спирт - вода (26:16:3), и хроматографируют восходящим способом. Когда фронт растворителей пройдет около 13 см (силуфол) или 8 см (сорбфил), пластинку вынимают из камеры, сушат на воздухе в течение 5 мин и просматривают в УФ-свете при длине волны 254 нм и 366 нм. Затем хроматограмму опрыскивают из пульверизатора раствором диазобензолсульфокислоты. На хроматограмме извлечения обнаруживаются пятна доминирующих веществ травы зверобоя: рутина около 0,4), гиперозида

(К^ около 0,5), гиперицина около 0,6) и бисалигенина (1^ около 0,8). При этом пятна, соответствующие рутину, гиперозиду и бисапигенину флуоресцируют фиолетовым светом в УФ-свете при длине волны 254 нм на уровне соответствующих стандартов и проявляются раствором диазобензолсульфокислоты в желто-коричневый цвет (рутин и гиперозид) и в коричнево-оранжевый дает (бисапигенин); пятно, соответствующее гиперицину, проявляется в УФ-свете при длине волны 366 нм (розово-красная флуоресценция). Допускается наличие и других пятен.

Примечание: 1. Подготовка пластинок. Пластинки "Силуфол УФ 254" 15 х 15 см, "Сорбфил-ПТСХ-АФ-А-УФ" или "Сорбфил ПТСХ-П-А-УФ" (ТУ 26-11-17-89) перед использованием активируют в сушильном шкафу при 100-105 °С в течение 1 ч. Пятна исследуемых растворов наносят на линию старта, проведенную вдоль линий накатки.

2. Приготовление раствора гиперозида. 0,025 г гиперозида (ВФС 421088-81) помещают в мерную колбу на 25 мл, добавляют 15-20 мл 70% спирта, растворяют на кипящей водяной бане, охлаждают до комнатной температуры и доводят 70% этиловым спиртом до метки. Срок годности 0,1% раствора ГСО гиперозида - 1 месяц.

3. Приготовление раствора ГСО рутина См. раздел 3.3.

4. Приготовление раствора диазобензолсульфокислоты. 0,01 г диазобензолсульфокислоты (ГФ X, стр. 876) растворяют в 10 мл 10 % раствора натрия карбоната. Раствор используют свежеприготовленным.

Целесообразным является проведение и других качественных реакций на сырье «Зверобоя трава». Так, извлечение травы зверобоя (см. раздел 3.3.) имеет ярко-красный цвет и красную флуоресценцию в УФ-свете при длине волны 366 нм (антраценпроизводные). Для этого в пробирку помещают 1-2 мл извлечения и несколько капель раствора гидроксида натрия: наблюдается зелено-желтое окрашивание. Затем прибавляют несколько капель раствора

хлористоводородной кислоты, при этом отмечается восстановление первоначальной красной окраски раствора (антраценпроизводные).

С целью обнаружения дубильных веществ в пробирку помещают 1 мл извлечения и прибавляют несколько капель раствора железоаммонийных квасцов или хлорида окисного железа. Появляется черно-зеленое окрашивание (дубильные вещества).

Кроме того, излечение из травы зверобоя имеет характерный УФ-спектр, обусловленный наличием бисапигенина (270 ± 2 нм) и антраценпроизводных (591 ± 2 нм), а также плечо в области 360 нм, обусловленное флавоноидами, в частности, рутином и гиперозидом (рис. 4).

3.3. Методика количественного определения суммы флавоноидов в траве зверобоя

Аналитическую пробу сырья измельчают до размера 1 мм. Около 1 г сырья (точная навеска) измельченного сырья помещают в колбу со шлифом вместимостью 100 мл, прибавляют 50 мл 70% этилового спирта. Колбу закрывают пробкой и взвешивают на тарирных весах с точностью до + 0,01. Колбу присоединяют к обратному холодильнику и нагревают на кипящей водяной бане (умеренное кипение) в течение 90 мин. Затем колбу закрывают той же пробкой, снова взвешивают и восполняют недостающий экстрагент до первоначальной массы. Извлечение фильтруют через рыхлый комочек ваты или бумажный фильтр («красная полоса») и охлаждают в течение 30 мин (извлечение из травы). Испытуемый раствор для анализа флавоноидов готовят следующим образом: 1 мл полученного извлечения помещают в мерную колбу вместимостью 50 мл, прибавляют 2 мл 3% спиртового раствора алюминия хлорида и доводят объем раствора до метки 95% этиловым спиртом (испытуемый раствор А). Раствор сравнения готовят следующим образом: 1 мл извлечения из травы помещают в мерную колбу на 50 мл, доводят объем раствора до метки 95% этиловым спиртом (раствор сравнения А).

Параллельно готовят раствор ГСО рутина. Около 0,025 г (точная навеска) ругана (ФС 42-2508-87) помещают в мерную колбу на 50 мл, растворяют в 30 мл 70% этилового спирта при нагревании на водяной бане. После растворения содержимое колбы охлаждают до комнатной температуры и доводят объем раствора 70% этиловым спиртом до метки (раствор А рутина). 1 мл раствора А рутина помещают в мерную колбу на 25 мл, прибавляют 1 мл 3% спиртового раствора алюминия хлорида и доводят объем раствора 95% спиртом до метки (испытуемый раствор Б рутина). В качестве раствора сравнения используют раствор, состоящий из 1 мл раствора А рутина, помещенного в мерную колбу на 25 мл, и доведенный 95 % спиртом до метки (раствор Б рутина).

Измерение оптической плотности проводят при длине волны 412 нм через 40 мин после приготовления всех растворов. Содержание суммы флавоноидов в пересчете на рутин и абсолютно сухое сырье в процентах (X) вычисляют по формуле:

Б х т0х 50 х 50 х 1 х 100 х 100

Х= -

Бохщх 1 X 50 х 25 X (100ЛУ)

Б — оптическая плотность испытуемого раствора;

Б0- оптическая плотность раствора ГСО рутина;

ш0- масса ГСО рутина, г;

т -масса сырья, в г;

- потеря в массе при высушивании, %.

Содержание суммы флавоноидов в пересчете на рутин в траве зверобоя варьирует в пределах 3,00-7,50%. Результаты статистической обработки свидетельствуют, что ошибка единичного определения составляет 1,49% (табл. 4). Опыты с добавками ГСО рутина свидетельствуют об отсутствии систематической ошибки.

Следует отметить, что извлечение из травы зверобоя используется для целей качественного и количественного анализа. Для целей качественного анализа также используется раствор А рутина.

Таблица 4

Метрологические характеристики методики количественного

Б X Б Б2 Р (%) Т(Р,1) ДХ Е, %

10 6,03 0,1400 0,0200 95% 2,23 0,09 ± 1,49%

3.4. Методика количественного определения суммы антрацеипроизводиых в сырье «Зверобоя трава»

5 мл полученного извлечения из травы (см. раздел 3.3.) помещают в мерную колбу вместимостью 50 мл и доводят 95% этиловым спиртом до метки.

Измерение оптической плотности проводят при длине волны 591 нм. Раствором сравнения при этом является этиловый спирт. Содержание суммы антраценпроизводных в пересчете на гиперицин и абсолютно сухое сырье в процентах (X) вычисляют по формуле:

0 x50 x 50x100

X = -

718 х т * 5 *(100-\У)

Э - оптическая плотность испытуемого раствора;

718-удельный показатель поглощения 1% раствора гиперицина;

гп - масса сырья, в г;

\У - потеря в массе при высушивании, %.

Содержание суммы антраценпроизводных в пересчете на гиперицин в траве зверобоя, находится в пределах 0,10 - 0,92 %. Результаты статистической обработки свидетельствуют, что ошибка единичного определения составляет 4,11% (табл. 5).

Таблица 5

Метрологические характеристики методики количественного

Р X 52 Р(%) Т(Р,1) ДХ Е, %

10 0,73 0,0470 0,0022 95% 2,23 0,03 ±4,11%

4. ОБОСНОВАНИЕ РЕСУРСОСБЕРЕГАЮЩИХ ТЕХНОЛОГИЙ ПРОИЗВОДСТВА СЫРЬЯ ВИДОВ HYPERICUM L.

4.1. Исследование вопросов получения зверобоя травы высокого качества

Как известно, для получения сырья высокого качества, прежде всего, необходима правильная заготовка лекарственного растения. В соответствии с инструкцией по заготовке, в сырье зверобоя допускается наличие стеблей длиной до 30 см. При этом необходимо учесть, что само растение имеет размеры от 30 до 80 см, следовательно, при заготовке сырья надземные части могут быть срезаны под корень. В инструкциях по заготовке указано, что надземную часть следует срезать без нижних огрубевших стеблей. Однако практика показывает, что они часто не заметны у свежего растения. Поэтому большинство образцов зверобоя травы, заготовленных по всем правилам, имеют одревеснение в нижней части стеблей. При этом важно подчеркнуть, что в сырье других видов лекарственных растений с похожим габитусом регламентируемая длина стеблей гораздо меньше. Так, у душицы травы допускается наличие стеблей только до 20 см, а у тысячелистника травы собирают лишь верхушки стеблей до 15 см. Совершенно естественно, что в нижних одревесневших частях стеблей зверобоя травы можно прогнозировать невысокий уровень действующих веществ, хотя они значительно увеличивают массу сырья. Анализ образцов зверобоя травы, собранных по общим правилам, показал, что грубые одревесневшие части стеблей могут составлять примерно 25% от всей массы сырья.

Было проведено исследование содержания основных действующих веществ в различных видах сырья зверобоя, представляющих собой листья, цветки, плоды, стебли и корневища с корнями. Полученные результаты свидетельствуют о том, что наибольшее содержание действующих веществ обнаружено в случае цветков и листьев зверобоя, причем если содержание флавоноидов в этих частях сырья примерно одинаково (6,93% и 5,90%

соответственно), то содержание анграценпроизводных в цветках (0,810%) отличается от других видов сырья примерно в 3 раза. Следовательно, необходимо добиваться получения сырья с большим процентом листьев и цветков. Это можно достичь, собирая цветущие верхушки растений (табл. 6).

Таблица 6

Содержание суммы флавоноидов и суммы антраценпроизводных в образцах зверобоя травы с различной длиной стеблей_

№ Длина стеблей Содержание Содержание

п/п зверобоя травы, см флавоноидов антраценпроизводных

в пересчете в пересчете

на рутин, % на гиперицин, %

1. 5 5,30 ±0,08 0,719 ±0,028

2. 10 5,16 ±0,08 0,688 ± 0,28

3. 15 4,77 ± 0,07 0,568 ± 0,023

4. 20 4,65 ± 0,07 0,540 ±0,022

5. 30 4,55 ± 0,07 0,489 ± 0,020

Важно также подчеркнуть, что способ заготовки сырья зверобоя путем срезания всей надземной части может вредить и дикорастущим зарослям этого растения. Поэтому нами были проанализированы на содержание суммы флавоноидов и антраценпроизводных образцы сырья зверобоя травы с различной длиной стеблей. Анализ показал, что содержание основных действующих веществ - суммы антраценпроизводных и суммы флавоноидов - снижается при увеличении длины стеблей зверобоя травы. Это связано с тем обстоятельством, что при увеличении длины стебля в сырье существенно снижается доля цветков и листьев, которые содержат основные количества действующих веществ. На наш взгляд, следует заготавливать надземные части зверобоя с длиной стебля не более 20 см.

4.2. Исследование динамики накопления БАС в надземных частях зверобоя продырявленного

С точки зрения получения сырья высокого качества и обоснования ресурсосберегающих технологий важным является исследование динамики

накопления действующих веществ в надземных частях зверобоя продырявленного (табл. 7). Сбор осуществлялся в течение всего вегетационного периода от растений, произрастающих на одной площадке в Ботаническом саду Самарского государственного университета. Наблюдения проводили в течение 2007-2009 гг. Стебли у собираемых надземных частей зверобоя не превышали 20 см. Собранное сырье высушивалось на воздухе и проводилось определение содержания действующих веществ по методикам количественного определения, разработанными нами ранее.

Таблица 7

Содержание суммы флавоноидов и суммы антраценпроизводных в

№ п/п Время сбора Фенофаза растения Содержание флавоноидов в пересчете на рутин (%) Содержание антраценпроизводных в пересчете на гиперицин (%)

1. 22.04.08 Начало вегетации 3,64 ± 0,05 0,099 ± 0,004

2. 21.05.08 Вегетация 4,41 ±0,06 0,147 ±0,006

3. 4.06.08 Начало бутонизации 5,15 ±0,08 0,160 ±0,006

4. 19.06.08 Окончание бутонизации 5,22 ± 0,08 0,461 ±0.018

5. 30.06.08 Начало цветения 5,80 ± 0,09 0,896 ±0,036

6. 9.07.08 Начало плодоношения 4,86 ± 0,07 0,799 ±0,032

7. 22.07.08 Плодоношение 2,49 ± 0,04 0,300 ±0,012

Полученные результаты свидетельствуют о том, что содержание основных БАС увеличивается к моменту цветения растения и снижается на стадии плодоношения. Однако было замечено, что сбор растений с длиной стебля 20 см позволил растениям в тот же вегетационный период быстро развить новые цветущие побеги, что не всегда наблюдается при сборе по общим правилам (30 см). Побеги второй волны цветения имели длину 15-20 см. Они были также собраны на ответствующих фенофазах и проанализированы. Как видно из приведенных результатов исследования,

собранные образцы надземных частей зверобоя продырявленного во вторую фазу цветения ничуть не уступают по содержанию флавоноидов и антраценпроизводных образцам сырья, собранным в первую фазу (табл. 8). Это говорит о возможности проведения двух укосов травы зверобоя в течение одного лета. При этом масса заготовленного сырья в течение года была несколько больше, чем при заготовке по общим правилам годом ранее.

Таблица 8

Содержание суммы флавоноидов и суммы антраценпроизводных в

надземных частях Hypericum perforatum L. (вторая фаза цветения)

№ п/п Время сбора Фенофаза растения Содержание флавоноидов в пересчете на рутин (%) Содержание антраценпроизводных в пересчете на гиперицин(%)

1. 20.07.08 Начало бутонизации 4,01 ± 0,06 0,230 ±0,009

2. 22.07.08 Начало цветения 5,31 ±0,08 0,650 ±0,026

3. 25.08.08 Плодоношение 3,02 ± 0,04 0,478 ±0,019

Немаловажным вопросом является сушка сырья зверобоя. В соответствии с инструкцией сушить зверобоя траву необходимо либо без доступа прямых солнечных лучей при периодическом помешивании, либо в сушилках при температуре нагрева не выше 40 °С. Как показало наше исследование образцов травы зверобоя продырявленного, высушенных при различных температурных режимах, режим сушки существенно не влияет на наличие действующих веществ. Однако установлено, что более высокие значения содержания основных компонентов наблюдаются в случае сушки сырья в сушилках при температуре 6090 °С. Возможно, при данной температуре происходит более быстрая инактивация ферментов, приводящих к деструкции основных фенольных компонентов.

4.3. Сравнительное исследование образцов травы зверобоя продырявленного, произрастающего в РФ

Весьма актуальным является сравнительное исследование химического состава образцов травы зверобоя из различных регионов РФ (табл. 9).

Результаты, приведенные в таблице 9, представляют собой усредненные данные за последние 5 лет, и они наглядно показывают, что химический состав различных образцов сходен по содержанию суммы флавоноидов и суммы антраценпроизодных, при этом соотношение флавоноидов и антраценпроизводных в сырье в среднем составляет 1:10.

Таблица 9

Содержание флавоноидов и антраценпроизводных в надземной части зверобоя продырявленного, произрастающего различных регионах РФ

№ п/п Название региона Среднее содержание флавоноидов в пересчете на рутин (%) Среднее содержание антраценпроизводных в пересчете на гиперицин(%)

1. Республика Башкортостан 6,11 ±0,09 0,602 ± 0,024

2. Республика Мордовия 6,87 ±0,10 0,764 ±0,031

3. Республика Марий Эл 7,17 ± 0,11 0,684 ±0,027

4. Оренбургская область 5,16 ±0,08 0,590 ± 0,024

5. Пензенская область 5,87 ± 0,09 0,484 ±0,019

6. Самарская область 6,31 ±0,09 0,598 ± 0,024

7. Ульяновская область 6,07 ± 0,09 0,653 ± 0,026

8. Республика Татарстан 6,40 ±0,10 0,580 ± 0,023

9. Чувашская Республика 5,41 ±0,08 0,459 ±0,018

4.4. Сравнительное исследование образцов надземных частей видов рода Hypericum L.

При заготовке сырья от дикорастущих растений необходимо учитывать, что на территории РФ в сходных экологических условиях, наряду со зверобоем продырявленным и зверобоем пятнистым, могут произрастать два других вида зверобоя - зверобой жестковолосистый (волосистый) (Hypericum hirsutum L.) и зверобой изящный (Hypericum elegans Steph.). Последние два вида являются примесями и не допускаются для заготовки, однако, как показывает практика, бывают случаи ошибок при сборе.

Особенно недопустимо с точки зрения охраны природных ресурсов уничтожение запасов зверобоя изящного - растения редкого и охраняемого.

Весьма актуальными представляются сравнительные исследования химического состава видов рода Hypericum L., культивируемых в РФ. Для исследования были использованы воздушно-сухие образцы надземной части, зверобоя олимпийского (Hypericum olympicum L.), зверобоя большого (Hypericum ascyron L.), зверобоя красивого (Hypericum androsaemum L.) заготовленные от растений, культивируемых в Ботаническом саду Самарского государственного университета. Так, в сырье Hypericum ascyron L. и Hypericum androsaemum L., наоборот, содержание гиперозида превышает содержание рутина. Следует отметить, что надземные части Hypericum olympicum L. значительно отличаются по химическому составу от других изучаемых видов.

С этой целью нами проводилось исследование образцов сырья, заготовленных от других видов зверобоя (табл. 10). Как показало исследование, все образцы содержат различные количества флавоноидов и антраценпроизводных. Отмечено, что все проанализированные образцы значительно уступают по содержанию основных БАС траве Hypericum perforatum L. Причем содержание флавоноидов в сырье различных видов находится в более узких пределах, чем содержание суммы антраценпроизводных. Анализ извлечений, проведенный методом ТСХ, также позволяет обнаружить отличия в химическом составе надземных частей различных видов рода Hypericum L. Причем, если общее содержание флавоноидов в различных образцах приблизительно одинаковое, то содержание отдельных компонентов может существенно отличаться. Так, в надземной части Hypericum perforatum L. и Hypericum hirsutum L. содержание рутина несколько превалирует над гиперозидом. В то же время в сырье Hypericum maculatum Crantz., наоборот, содержание гиперозида превышает содержание рутина. Следует отметить, что надземные части Hypericum elegans Steph. значительно отличаются по химическому составу от других видов.

Таблица 10

Содержание флавоноидов и антраценпроизводных в надземных частях некоторых видов рода Hypericum_

№ Название вида зверобоя Содержание Содержание

п/п флавоноидов антраценпроизводных

в пересчете в пересчете

на рутин, % на гиперицин, %

1. Hypericum perforatum L. 5,80 ± 0,09 0,896 ±0,036

2. Hypericum maculatum Crantz. 5,09 ±0,08 0,469 ±0,019

(Hypericum quadrangulum L.)

3. Hypericum hirsutum L. 3,09 ± 0,05 0,070 ± 0,003

4. Hypericum elegans Steph. 2,89 ± 0,04 0,262 ± 0,01

5. Hypericum olympicum L. 4,26 ±0,06 0,200 ±0,008

6. Hypericum ascyron L. 4,77 ± 0,07 0,059 ± 0,002

7. Hypericum androsaemum L. 4,27 ± 0,06 0,038 ± 0,002

5. Сравнительное морфолого-анатомическое исследование надземных частей видов рода Hypericum L.

Проведенное сравнительное исследование микроскопических признаков образцов надземной части для зверобоя продырявленного (Hypericum perforatum L.), зверобоя пятнистого (четырехгранного) (Hypericum maculatum Crantz.), зверобоя жестковолосистого (.Hypericum hirsutum L.) и зверобоя изящного (Hypericum elegans Steph.) (рис. 6-8) показало, что основные диагностические признаки сосредоточены на листьях, лепестках и чашелистиках растений. Для листьев зверобоя продырявленного и зверобоя пятнистого характерным микроскопическим признаком является наличие пигментированных вместилищ округлой или овальной формы на листьях и лепестках. Причем вместилища со светлым содержимым на листьях зверобоя пятнистого встречаются гораздо реже, чем на листьях зверобоя продырявленного. На лепестках зверобоев обоих видов находятся вместилища с темным и светлым содержимым вытянутой формы, края чашелистиков ровные.

'■Ш-'Г&Щ

■ ' . зм ямяШ

Кк

Рис. 6. Диагностические признаки в анатомическом строении цельного сырья зверобоя продырявленного:

а - эпидермис верхней стороны листа зверобоя продырявленного (увеличение х 400);

б - эпидермис нижней стороны листа зверобоя продырявленного (увеличение *400);

в - пигментированные вместилища на листе зверобоя продырявленного (увеличение *100);

г - бесцветные вместилища на листе зверобоя продырявленного (увеличение х100);

д - поперечный разрез листа зверобоя продырявленного через пигментированное вместилище (увеличение х 100);

е - поперечный разрез листа зверобоя продырявленного через пигментированное вместилище (увеличение х400);

ж - поперечный разрез стебля зверобоя продырявленного (увеличение х56);

з - поперечный разрез листа зверобоя продырявленного через пигментированное вместилище, содержимое которого окрашено Суданом III (увеличение х400);

и - вместилища вытянутой формы на лепестке зверобоя продырявленного (увеличение х56);

к - вместилища вытянутой формы на чашелистике зверобоя продырявленного (увеличение х5б).

Листовая пластинка зверобоя волосистого густо опушена с обеих сторон, однако вместилища на ней не встречаются. По краям лепестков имеются пигментированные железки округлой формы на коротких ножках. Аналогичные железки имеются и по краям чашелистиков. Листовая пластинка зверобоя изящного имеет редкие округлые вместилища с темным и прозрачным содержимым. По краю чашелистиков расположены пигментированные железки, которые оттянуты на длинных ножках. Пигментированные вместилища расположены преимущественно по краю лепестков.

Проведенные морфолого-анатомические исследования легли в основу проекта ФСП «Зверобоя трава».

Рис. 7. Диагностические признаки в анатомическом строении сырья зверобоя волосистого:

а - пигментированные железки по краю лепестка зверобоя волосистого (увеличение хЮО);

б - пигментированные железки по краю чашелистика зверобоя волосистого (увеличение хЮО);

в - волосок на листе зверобоя волосистого (увеличение х400); г - волоски на стебле зверобоя волосистого (увеличение хЮО); д - нижний эпидермис листа зверобоя волосистого (увеличение х400); е - поперечный срез стебля зверобоя волосистого (увеличение хЮО).

Рис. 8. Диагностические признаки в анатомическом строении сырья зверобоя изящного:

а - пигментированные вместилища по краю лепестка зверобоя изящного (увеличение хЮО);

б - пигментированные железки по краю чашелистика зверобоя изящного (увеличение х40);

в - округлые вместилища по краю листа зверобоя изящного (увеличение х100); г- пигментированная железка по краю чашелистика зверобоя изящного (увеличение *400).

6. Обоснование целесообразности создания и использования в медицинской практике импортозамещающих антидепрессантных лекарственных средств

Следует отметить, что в настоящее время уже существует лекарственный препарат «Зверобоя настойка», однако данный препарат получают из травы зверобоя на основе 40% этилового спирта, и он предназначен для наружного использования в качестве антимикробного, противовоспалительного и ранозаживляющего средства. С целью создания импортозамещающего антидепрессантного препарата была поставлена задача оптимизировать методику получения препарата «Зверобоя настойка».

Как видно из приведенной таблицы И, наибольшее содержание основных БАС отмечается в образцах препаратов, экстрагентом для которых служил 70% этиловый спирт. Как показали доклинические исследования фармакологических

свойств на белых беспородных крысах, препарат «Зверобоя настойка» обладает антидепрессантной активностью, в отличие от промышленного образца препарата. Кроме того, следует отметить, что разработанный препарат приближается по составу к импортным антвдепрессантным средствам. Данные результаты отражены в патенте РФ на изобретение № 2327481 «Способ получения средства, обладающего антидепрессантной активностью» (2008 г.).

Таблица 11

Содержание флавонокдов и антраценпроизводных _в водно-спиртовых препаратах зверобоя _

№ п/п Экстрагент Содержание суммы флавоиомдов в пересчете на рутин, % Содержание суммы антраценпроизводных, в пересчете на гиперицин, %

1. 40 % этиловый спирт * 0,28 ±0,01 0,002 ±0,0001

2. 40 % этиловый спирт 0,30 ±0,01 0,008 ± 0,0003

3. 70 % этиловый спирт 0,55 ± 0,02 0,018 ±0,0007

4. 90 % этиловый спирт 0,43 ± 0,02 0,012± 0,0004

"Примечание: промышленный образец препарата

Проведенные исследования свидетельствуют о возможности создания конкурентоспособных отечественных антидепрессантных ЛС на основе травы зверобоя, близких по химическому составу с зарубежными препаратами.

С целью разработки технологии получения жидкого экстракта травы зверобоя, в лабораторных условиях был получен различными способами ряд извлечений на 70% этиловом спирте. Образцы жидких экстрактов травы зверобоя также отличаются по содержанию действующих веществ, но наибольшее содержание действующих веществ в препарате можно достичь, получая жидкий экстракт методом реперколяции и модифицированной мацерации. Жидкий экстракт может служить основой для получения сухого экстракта травы зверобоя, а тот в свою очередь может входить в состав таблетированных лекарственных препаратов.

Исследовались также вопросы получения сухого экстракта травы зверобоя. Для этого высушивали жидкий экстракт травы зверобоя до получения сухого

порошка, влажность которого не превышала 5%. Полученные экстракты исследовали на содержание действующих веществ, результаты которых приведены в таблице 12. Полученный сухой экстракт использовали для получения в лабораторных условиях таблетированных лекарственных препаратов. Таблеточную массу получали смешиванием сухого экстракта травы зверобоя и различными вспомогательными веществами в соотношении 1:1. В качестве вспомогательных веществ были использованы лактоза, сорбит и микрокристаллическая целлюлоза (МКЦ). Во всех полученных таблеточных массах определяли содержание основных БАС - флавоноидов и антраценпроизводных. Повторный анализ данных субстанций через год не выявил никаких изменений состава, что говорит о стабильности компонентов.

Таблица 12

Сравнительная характеристика исследования препаратов по содержанию основных БАС в исследуемых препаратах

№ Содержание Содержание

п/п флавоноидов антраценпроизводных

Препарат в пересчете в пересчете

на рутин, % на гиперицин, %

1. Зверобоя настойка 0,61 ±0,03 0,011 ± 0,0004

2. Зверобоя экстракт сухой 17,50 ±0,31 0,515 ±0,0070

3. Деприм 3,20 ±0,06 0,137 ±0,0020

Полученные нами зверобоя сухой экстракт, зверобоя настойка и индивидуальные БАС, выделенные из травы зверобоя продырявленного, прошли доклинические испытания (табл. 13 и 14). Препараты были исследованы на белых беспородных крысах на предмет выявления антидепрессантной и анксиолитической активности. Полученные результаты (табл. 13 и 14) наглядно свидетельствуют о выраженном антидепрессантном действии фитопрепаратов на основе зверобоя травы, сравнимом с эффектом амитриптилина. У исследуемых фитопрепаратов обнаружена также некоторая анксиолитическая активность. В случае сухого экстракта зверобоя и препарата «Деприм» в два раза возрастает время пребывания животных в открытых рукавах. Следует отметить, что разработанный нами препарат «Зверобоя экстракт сухой» обладает более

выраженной нейротропной активностью по сравнению с зарубежным лекарственным средством «Деприм», причем последний, с учетом содержания основных БАС в анализируемых ЛС, животным вводили в большей дозировке. Обнаруженная нами антидепресантная активность флавоноидного вещества бисапигенина показывает, что этот компонент также влияет на развитие фармакотерапевтического эффекта препаратов зверобоя. Следовательно, необходимым условием является обнаружение этого компонента при фотохимическом исследовании сырья и препаратов зверобоя травы. Кроме того, нами было доказано выраженное антидепрессантное действие для флавоноида пшерозида, однако не подтверждены данные зарубежных ученых относительно антидепрессантной активности для рутина.

Таблица 13

Результаты исследования поведения животных в методике теста _«Отчаяние» для препаратов_

№ Название препарата Время активного движения

п/п

1. Контроль 78,3 ± 13,8

Зверобоя настойка 97,9 ± 15,2

2. Контроль 63,6 ±8,6

Зверобоя экстракт сухой 121,3 ± 10,0**

3. Контроль 63,6 ± 8,6

Деприм 119,3 ±14,8**

4. Контроль 64,2 ± 7,4

Амитриптилин 138,3 ± 11,9**

Примечание к табл. 1-5. * - различия достоверны по отношению опыта и контроля при Р <0,05;** при Р<0,01.

Таблица 14

Результаты исследования поведения животных в методике теста «Отчаяние» для индивидуальных соединений_

№ Название препарата Время активного движения

п/п

I. Контроль 64,2 ± 7,4

2. Бисапигенин 145,0 ± 10,6*

3. Амитриптилин 103,0 ±8,3

Таким образом, проведенные комплексные исследования

свидетельствуют о возможности создания конкурентоспособных отечественных антидепрессантных ЛС на основе сырья «Зверобоя трава».

ВЫВОДЫ

1. Сравнительное морфолого-анатомичеекое исследование сырья видов рода Hypericum L. позволило выявить общие и отличительные признаки для фармакопейных и примесных видов, необходимых для объективной идентификации сырья. На основе результатов, полученных с использованием цифровой микроскопии, показано, что основные диагностические признаки расположены на листьях, цветках и чашелистиках сырья.

2. Сравнительное исследование видов рода Hypericum L. свидетельствует о разнообразной природе биологически активных соединений, среди которых наибольшее значение для целей стандартизации имеют флавоноиды и антраценпроизводные.

3. Углубленное исследование химического состава травы зверобоя позволило выделить 9 индивидуальных соединений, относящихся к флавоноидам, флороглюцинам, фенилпропаноидам и стеринам.

4. На основе изучения данных ЯМР-спектроскопии, УФ-спектроскопии, масс-спектрометрии, ТСХ-анализа установлено химическое строение всех выделенных веществ, среди которых бисапигенин, ß-ситостерин и эргостерин и гиперфорин выделены впервые в РФ, а дикверцетин является новым природным соединением.

5. Разработаны новые подходы к стандартизации сырья и препаратов видов рода Hypericum L., которые заключаются в определении двух групп действующих веществ - суммы флавоноидов в пересчете на рутин и суммы антраценпроизводных в пересчете на гиперицин.

6. Разработаны методики качественного и количественного анализа для зверобоя травы, зверобоя настойки, зверобоя экстракта жидкого и зверобоя экстракта сухого.

7. Показатели качества сырья и препаратов включены в проекты ФСП «Зверобоя трава», «Зверобоя настойка», «Зверобоя экстракт жидкий» и «Зверобоя экстракт сухой».

8. На основе фармакогностического изучения видов рода Hypericum L. обоснована ресурсосберегающая технология заготовки сырья высокого качества, что нашло свое отражение в рекомендациях по заготовке сырья.

9. Обоснованы технологические подходы к созданию препаратов «Зверобоя настойка», «Зверобоя экстракт жидкий» и «Зверобоя экстракт сухой», заключающиеся в использовании оптимального экстрагента (70% этилового спирта), позволяющего исчерпывающе извлекать весь комплекс БАС, обусловливающих нейротропный эффект (антидепрессантную и анксиолитическую активность).

10. Фармакологические исследования показали наличие более выраженной антидепрессантной и анксиолитической активности для новых препаратов «Зверобоя настойка», «Зверобоя экстракт жидкий» и «Зверобоя экстракт сухой» по сравнению с зарубежными аналогами.

11. Обоснована целесообразность применения в медицинской практике разработанных импортозамещающих препаратов «Зверобоя настойка», «Зверобоя экстракт жидкий» и «Зверобоя экстракт сухой» на основе видов рода Hypericum L. в качестве антидепрессантных средств.

Список основных работ, опубликованных по теме диссертации:

1. Куркин, В.А. Исследование сырья и препаратов зверобоя / В.А. Куркин, О.Е. Правдивцева, А.В. Дубищев, Д.В. Кадацкая, Г.Г. Запесочная, И.П. Жданов // Фармация. - 2005. - Т. 53, № 3. - С. 23-25.

2. Куркин, В.А. Вопросы стандартизации сырья и препаратов зверобоя / В.А. Куркин, О.Е. Правдивцева, JI.H. Зимина // Фармация. - 2007. - Т. 55, №4.-С. 12-14.

3. Куркин, В.А. Флавоноиды надземной части Hypericum perforatum / В.А. Куркин, О.Е. Правдивцева // Химия природных соединений. - 2007. -№ 5. - С. 512-513 (Узбекистан). Chemistry of Natural Compounds. -2007. - Vol. 43, No. 5. - P. 620-621.

4. Правдивцева, О. E. Изучение вопросов оптимизации методик получения и анализа препарата «Зверобоя настойка» / О. Е. Правдивцева // Известия Самарского научного центра Российской академии наук. - 2007. - Т. 2. - С. 191-194.

5. Правдивцева, O.E. Исследования по обоснованию новых подходов к стандартизации сырья и препаратов зверобоя продырявленного / O.E. Правдивцева, В.А. Куркин // Химия растительного сырья. - 2008. -№ 1.-С. 81-86.

6. Куркин, В.А. Сравнительное исследование содержания суммы флавоноидов и антраценпроизводных в препаратах травы зверобоя /

B.А. Куркин, O.E. Правдивцева // Химико-фармацевтический журнал. - 2008. - Т. 42, № 10. - С. 39-42.

7. Правдивцева, O.E. Обоснование ресурсосберегающих технологий производства и переработки сырья зверобоя / O.E. Правдивцева, В.А. Куркин // Известия Самарского научного центра Российской академии наук. - 2008. - С. 156-158.

8. Правдивцева, O.E. Ресурсосберегающие аспекты заготовки высококачественного сырья зверобоя. / O.E. Правдивцева, В.А. Куркин, JI.H. Зимина // Известия Самарского научного центра Российской академии наук. - 2008. - Т. 2. - С. 258-260.

9. Куркин, В.А. Актуальные аспекты создания нейротропных фитопрепаратов / В.А. Куркин, O.E. Правдивцева, Л.Н. Зимина, A.B. Дубищев, Д.Г. Буланкин, Д.В. Корчагина // Медицинский альманах. -2009. -№ 1.-С. 46-49.

10. Куркин, В.А. Сравнительное микроскопическое исследование некоторых видов зверобоя / В.А. Куркин, O.E. Правдивцева, Л.Н. Зимина // Фармация. - 2009. - Т. 57, № 3. - С. 11-12.

11. Куркин, В.А. Изучение нейротропной активности новых лекарственных препаратов зверобоя травы / В.А. Куркин, A.B. Дубищев, O.E. Правдивцева, Л.Н. Зимина, A.A. Аюпова, Е.А. Боткин // Известия Самарского научного центра Российской академии наук. -2009.-Т. 11, № 1 (6).-С. 1300-1303.

12. Куркин, В.А. Изучение нейротропной активности новых лекарственных препаратов из травы зверобоя / В.А. Куркин, A.B. Дубищев, O.E. Правдивцева, Л.Н. Зимина // Медицинский альманах. - 2009. - № 4. - С. 33-36.

13. Правдивцева, O.E. Вопросы рациональной заготовки и переработки сырья зверобоя / O.E. Правдивцева, В.А. Куркин // Известия Самарского научного центра Российской академии наук. - 2009. -Т. 11, № 1 (2).-С. 135-137.

14. Правдивцева, O.E. Сравнительное исследование химического состава надземной части некоторых видов рода Hypericum L. / O.E. Правдивцева, В.А. Куркин // Химия растительного сырья. - 2009. -№ 1.-С. 79-82.

15. Правдивцева, O.E. Рациональная заготовка травы зверобоя / O.E. Правдивцева, В.А. Куркин // Фармация. - 2009. - Т. 57, № 5. - С. 10-12.

16. Куркин, В.А. Сравнительное морфолого-анатомическое исследование сырья некоторых видов рода Hypericum L. / В.А. Куркин, O.E. Правдивцева, Л.Н. Зимина // Медицинский альманах. - 2010. - № 1. -

C. 207-209.

17. Куркин, В.А. Создание ресурсосберегающих технологий переработки лекарственного растительного сырья / В.А. Куркин, Г.Г. Запесочная, Е.В. Авдеева, O.E. Правдивцева, В.Б. Браславский, A.B. Куркина, М.В. Егоров, JI.B. Тарасенко, В.В. Стеняева, В.М. Рыжов, Н.Р. Шагалиева, Л.Н. Зимина, М.М. Анисимова, A.B. Егорова // Известия Самарского научного центра Российской академии наук. -2010. - Т. 12, № 1 (3). -С. 737-739.

18. Правдивцева, O.E. Вопросы создания лекарственных препаратов на основе сырья зверобоя // Известия Самарского научного центра Российской академии наук. - 2010.- Т. 12, № 1 (8). - С. 2094-2096.

19. Куркин, В.А. Антидепрессантная активность препаратов травы зверобоя / В.А. Куркин, O.E. Правдивцева, Л.Н. Зимина // Фармация. -2010.-Т. 58,№5.-С. 40-41.

20. Кадацкая, Д.В. Экспериментальная оценка влияния фитопрепаратов, содержащих флавоноиды, на центральную нервную систему / Д.В. Кадацкая, A.B. Дубищев, В.А. Куркин, O.E. Правдивцева, A.B. Супильникова, М.В. Егоров, В.В. Купцова // Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции: Труды 59-той региональной конференции по фармации и фармакологии. - Пятигорск, 2004. - С. 277-278.

21. Куркин, В.А. Поиск действующих веществ травы зверобоя продырявленного, обладающих нейротропным действием / В.А. Куркин, O.E. Правдивцева, A.B. Дубищев, Д.В. Кадацкая // Тезисы Международного съезда Фитофарм. - Микелли, Финляндия, 2004. - С. 278-280.

22. Правдивцева, O.E. Исследование химического состава травы зверобоя продырявленного / O.E. Правдивцева, В.А. Куркин // Науки о человеке (Сборник статей). - Томск, 2004. - С. 179.

23. Правдивцева, O.E. Сравнительное фотохимическое исследование сырья и препаратов травы зверобоя продырявленного / O.E. Правдивцева, В.А. Куркин // Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции: Труды 59-ой региональной конференции по фармации и фармакологии. - Пятигорск, 2004. - С. 48-49.

24. Зимина, Л.Н. Исследование химического состава травы зверобоя продырявленного методом колоночной хроматографии / Л.Н. Зимина, В.А. Куркин, O.E. Правдивцева // Труды 1-го Международного форума (6-й Международной конференции). - Самара, 2005. - С. 17-19.

25. Зимина, Л.Н. Новые подходы к стандартизации сырья зверобоя / Л.Н. Зимина, O.E. Правдивцева, В.А. Куркин // Материалы 74-й итоговой научной конференции «Молодежная наука и современность». - Курск, 2009.-С. 176-177.

26. Куркин, В.А. Исследование ненротропной активности препаратов и веществ травы зверобоя продырявленного. / В.А. Куркин, O.E. Правдивцева, A.B. Дубищев, Д.В. Кадацкая // Бюллетень сибирской медицины. - 2005. - Т. 4. Приложение 1. - С. 28.

27. Правдивцева, O.E. Фитохимическое исследование сырья зверобоя продырявленного с целью создания новых лекарственных препаратов /

О. Е. Правдивцева // Труды X Всероссийского конгресса «Экология и здоровье человека». - Самара, 2005. - С. 227-228.

28. Куркин, В.А. Исследование активности препаратов и индивидуальных веществ травы зверобоя продырявленного / В.А. Куркин, O.E. Правдивцева, A.B. Дубищев, Д.В. Кадацкая // Медицинский вестник Башкортостана. - 2006. - Вып. 1. - С. 114-115.

29. Правдивцева, O.E. Перспективы создания антидепрессантных лекарственных средств на основе сырья зверобоя продырявленного / O.E. Правдивцева, JI.H. Зимина // Труды XI Всероссийского конгресса «Экология и здоровье человека. - Самара, 2006. - С. 210-211.

30. Правдивцева, O.E. Фитохимическое исследование травы Hypericum perforatum L. / O.E. Правдивцева, В.А. Куркин // Материалы Всероссийской научно-практической конференции. - Томск, 2006. - С. 282-285.

31. Правдивцева, O.E. Проблемы стандартизации препаратов зверобоя продырявленного {Hypericum perforatum L.) / O.E. Правдивцева, В.А. Куркин // Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции: Труды 62-ой региональной конференции по фармации и фармакологии. - Пятигорск, 2007. - С. 348-350.

32. Куркин, В.А. Изучение подходов к оптимизации методик анализа травы зверобоя / В.А. Куркин, O.E. Правдивцева, JI.H. Зимина // Материалы III Всероссийской конференции «Новые достижения в химии и химической технологии растительного сырья». - Барнаул, 2007. - Кн. 2. - С. 287-291.

33. Правдивцева, O.E. Исследования травы зверобоя продырявленного методом колоночной хроматографии / O.E. Правдивцева, JI.H. Зимина // Тезисы докладов XII всероссийской научно-практической конференции «Молодые ученые в медицине». - Казань: Отечество, 2007. - С. 263-264.

34. Правдивцева, O.E. Исследование химического состава травы зверобоя / О. Е. Правдивцева // Химия и медицина: Тезисы докладов VI Всероссийского научного семинара с молодежной научной школой. -Уфа, 2007. - С. 206.

35. Куркин, В.А. Анализ номенклатуры антидепрессантных лекарственных средств, представленных на фармацевтическом рынке Российской Федерации / В.А. Куркин, Е.П. Гладунова, O.E. Правдивцева, JI.H. Зимина // Фармацевтический менеджмент. - 2008. - № 3. - С. 3-5.

36. Куркин, В.А. Сравнительное исследование образцов травы зверобоя продырявленного / В.А. Куркин, O.E. Правдивцева // Материалы V Всероссийской научной конференции «Химия и технология растительных веществ». - Уфа, 2008. - С. 182.

37. Куркин, В.А. Сравнительное фитохимическое исследование сырья различных видов Hypericum L. / В.А. Куркин, O.E. Правдивцева // Труды XII Съезда русского ботанического общества «Фундаментальные и прикладные проблемы ботаники в начале XXI века». - Петрозаводск, 2008. - С. 292-294.

38. Куркин, В.А. Зверобой: итоги и перспективы создания лекарственных средств / В.А. Куркин, O.E. Правдивцева. - Самара: ГОУ ВПО «СамГМУ»; ООО «Офорт», 2008. - 127 с.

39. Правдивцева, О.Е. Исследование зверобоя травы на содержание суммы флавоноидов и антраценпроизводных / О.Е. Правдивцева, В.А. Куркин, Л.Н. Зимина // Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции: Труды 63-ей региональной конференции по фармации и фармакологии. - Пятигорск, 2008. - С. 85-86.

40. Правдивцева, О.Е. Исследование динамики накопления флавоноидов и антраценпроизводных в зверобоя траве / О.Е. Правдивцева, В.А. Куркин, JI.H. Зимина // Материалы конференции «Фармация и общественное здоровье». - Екатеринбург, 2008. - С. 262-264.

41. Куркин, В.А. Актуальные аспекты стандартизации лекарственного растительного сырья, содержащего фенольные соединения / В.А. Куркин, Е.В. Авдеева, В.Б. Браславский, О.Е. Правдивцева, А.В. Куркина, В.В. Стеняева, В.М. Рыжов, Ф.Ш. Сатдарова, Л.Н. Зимина, Ламрини М.Х., Д.Г. Буланкин, М.М. Анисимова, Л.Р. Сулейманова // Тезисы докладов XVI Российского национального конгресса «Человек и лекарство». - Москва, 2009. - С. 690.

42. Куркин, В.А. Актуальные вопросы создания нейротропных фитопрепаратов / В.А. Куркин, О.Е. Правдивцева, Л.Н. Зимина, Д.Г. Буланкин И Материалы VII Международной конференции «Медико-социальная экология личности состояние и перспективы». - Минск, 2009. - С. 268-270.

43. Куркин, В.А. Актуальные проблемы рациональной заготовки и оценки качества травы зверобоя / В.А. Куркин, О.Е. Правдивцева, Л.Н. Зимина // Материалы IV Всероссийской конференции «Новые достижения в химии и химической технологии растительного сырья». - Барнаул, 2009. - С. 224-225.

44. Куркин, В.А. Исследования по созданию новых нейротропных лекарственных фитопрепаратов / В.А. Куркин, О.Е. Правдивцева, Л.Н. Зимина, Д.Г. Буланкин // Научные труды VII Международного конгресса «Традиционная медицина». - Москва, 2009. - С. 330-331.

45. Правдивцева, О.Е. Актуальные аспекты оценки качества зверобоя травы / О.Е. Правдивцева, В.А. Куркин // Материалы 74-й итоговой научной конференции «Молодежная наука и современность». - Курск, 2009. - С. 206.

46. Правдивцева, О.Е. Вопросы стандартизации препаратов зверобоя травы / О.Е. Правдивцева // Научные труды VII Международного конгресса «Традиционная медицина». - Москва, 2009. - С. 331-333.

47. Правдивцева, О.Е. Методические и методологические подходы к созданию препаратов на основе сырья видов рода Hypericum L. / О.Е. Правдивцева, В.А. Куркин // Материалы VII Международного симпозиума по фенольным соединениям: фундаментальные и прикладные аспекты. - Москва, - 2009. - С. 225-226.

48. Правдивцева, О.Е. Создание отечественных антидепрессантов на основе сырья зверобоя / О.Е. Правдивцева, В.А. Куркин // Материалы VIII Международного симпозиума «Новые и нетрадиционные растения и перспективы их использования». - Москва, 2009. - С. 408-410.

49. Правдивцева, O.E. Сравнительное исследование надземных, частей некоторых видов рода Hypericum L. / O.E. Правдивцева, В.А. Куркин // Материалы конференции «Фармация и общественное здоровье». -Екатеринбург, 2009. - С. 111-113.

50. Правдивцева, O.E. Сравнительное исследование сырья и препаратов Hypericum perforatum L. и Hypericum maculatum Crantz. / O.E. Правдивцева, Л.Н. Зимина, В.А. Куркин // Научные труды I съезда натуротерапевтов России. - Москва, 2009. - С. 139-140.

51. Правдивцева, O.E. Сравнительный анализ химического состава надземных частей некоторых видов рода Hypericum L. / O.E. Правдивцева, Л.Н. Зимина, В.А. Куркин // Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции: Труды 64-ой региональной конференции по фармации и фармакологии. - Пятигорск, 2009. - С. 96-98.

52. Kurkin, V.A. The new possibilities in the standardization of the some medicinal plants containing the flavonoids / V.A. Kurkin, G.G. Zapesochnaya, E.V. Avdeeva, V.B. Braslavsky, O.E. Pravdivseva, A.V. Supilnicova, M.V. Egorov, V.V. Stenyaeva, A.I. Bontsevich // XXII International Conference on Polyphenols. Helsinki, Finland. - 2004. P. 621622.

53. Kurkina, A.V. Pharmacological activity of flavonoid-containing plants / A.V. Kurkina, O.E. Pravdivtseva, V.A. Kurkin, A.V. Dubishchev // Internationaler medizinischer Kongress. - Hannover, 2006. - P. 37-38.

54. Kurkin,V.A. Phytochemical and pharmacological investigation of some medicinal plants containing flavonoids / V.A. Kurkin, A.V. Dubishchev, O.L. Kulagin, E.V. Avdeeva, V.B. Braslavsky, O.E. Pravdivtseva, A.V. Kurkina, D.V. Kadatskaya, N. S. Dodonov, A.A. Tsareva, E.A. Dremova, A.I. Bontsevich // Polyphenols communications. - Winnipeg, Manitoba, Canada, 2006. - P. 513-514.

55. Kurkin, V.A. The new methodological approaches to the standardization of the some medicinal plants containing the flavonoids and phenylpropanoids / V.A. Kurkin, E.V. Avdeeva, V.B. Braslavsky, O.E. Pravdivtseva, A.V. Kurkina, M.V. Egorov, V.M. Ryzhov, O.V. Sharova, E.S. Artamonova, F. Sh. Satdarova, A.V. Egorova, Mohammed Lamrini, L.N. Zimina, M.M. Anisimova, D.G. Bulankin, A.V. Smirnov // XXIV International Cohfere on Polyphenols communications. Salamanca, 2008. - P. 185-186.

56. Патент РФ № 2327481 на изобретение «Способ получения средства, обладающего антидепрессантной активностью» А 61 К 36/38 Бюл. № 18 от 27.06.2008 (Авторы: Куркин В.А., Правдивцева O.E., Дубищев A.B., Кадацкая Д.В.)

Подписано к печати 21.03.2011 г. Формат 60x84/16. Бумага офсетная. Печать оперативная. Усл. печ. л. 2,79. Тираж 100 экз. Заказ № 372.

Отпечатано в типографии ООО «Офорт». 443080, г. Самара, ул. Революционная, 70, литера П. Тел.: 372-00-56,372-00-57.

 
 

Оглавление диссертации Правдивцева, Ольга Евгеньевна :: 2011 :: Самара

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1. СОВРЕМЕННОЕ СОСТОЯНИЕ ИССЛЕДОВАНИЙ ВИДОВ РОДА HYPERICUM L. (ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ).

1.1. Морфолого-анатомические и экологоценотические признаки видов рода Hypericum L.

1.1.1. Ботаническое описание некоторых видов рода Hypericum L.

1.1.2. Анатомо-морфологическая характеристика сырья «Зверобоя трава».

1.1.3. Ареал обитания.

1.1.4. Заготовка сырья «Зверобоя трава» и его природные запасы.

1.1.5. Культивирование зверобоя продырявленного.

1.2. Химический состав травы зверобоя.

1.2.1. Характеристика важнейших групп биологически активных соединений из травы зверобоя.

1.2.2. Динамика накопления биологически активных соединений в траве зверобоя.

1.2.3. Исследование химического состава и проблемы стандартизации травы зверобоя.

1.3. Фармакологические свойства препаратов зверобоя.

1.3.1. Обзор номенклатуры препаратов на основе зверобоя травы.

1.3.2. Характеристика основных лекарственных средств зверобоя травы.

1.3.3. Возможные побочные действия и противопоказания к применению препаратов зверобоя травы.

1.3.4. Анализ номенклатуры антидепрессантных лекарственных средств на фармацевтическом рынке РФ.

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ

ГЛАВА 2. ОБЪЕКТЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

2.1. Объекты исследования.

2.2. Методы исследования.

2.2.1. Морфолого-анатомический и товароведческий анализ сырья видов Hypericum L.

2.2.2. Колоночная хроматография.

2.2.3. Методики проведения качественных реакций.

2.2.4. Метод тонкослойной хроматографии.

2.2.5. Метод УФ-спектроскопии

2.2.6. Технологические методы получения спиртовых препаратов зверобоя.

2.2.7. Методики фармакологических исследований.

ГЛАВА 3. МОРФОЛОГО-АНАТОМИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ СЫРЬЯ

ВИДОВ РОДА HYPERICUM L.

3.1. Морфологические признаки сырья видов рода Hypericum L.

3.2. Микроскопические признаки сырья видов рода Hypericum L.

ГЛАВА 4. ВЫДЕЛЕНИЕ БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ СОЕДИНЕНИЙ ИЗ ТРАВЫ ЗВЕРОБОЯ ПРОДЫРЯВЛЕННОГО МЕТОДОМ КОЛОНОЧНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ.

4.1. Исследования по выделению биологически активных соединений.

4.2. Описание выделенных биологически активных соединений.

Глава 5. РАЗРАБОТКА НОВЫХ ПОДХОДОВ К СТАНДАРТИЗАЦИИ СЫРЬЯ И ПРЕПАРАТОВ ВИДОВ РОДА НУРЕШСиМЬ.

5.1. Исследования по разработке методик качественного анализа для сырья и препаратов зверобоя

5.1.1. Разработка методики качественного анализа сырья и препаратов зверобоя травы.

5.1.2. Методика качественного анализа сырья «Зверобоя трава».

5.1.3. Методика качественного анализа препарата

Зверобоя настойка».

5.1.4. Методика качественного анализа препарата

Зверобоя экстракт жидкий».

5.1.5. Методика качественного анализа препарата

Зверобоя экстракт сухой».

5.2. Исследования по разработке методики количественного анализа суммы флавоноидов в сырье и препаратах зверобоя.

5.2.1. Исследования по разработке методики количественного анализа суммы флавоноидов в сырье зверобоя.

5.2.2. Методика количественного определения суммы флавоноидов в траве зверобоя.

5.2.3. Исследования по разработке методики количественного анализа суммы флавоноидов препарата «Зверобоя настойка».

5.2.4. Методика количественного определения суммы флавоноидов в препарате «Зверобоя настойка».

5.2.5. Методика количественного определения суммы флавоноидов в препарате «Зверобоя экстракт жидкий».

5.2.6. Методика количественного определения суммы флавоноидов в препарате «Зверобоя экстракт сухой».

5.3. Исследования по разработке методики количественного анализа суммы антраценпроизводных в сырье и препаратах зверобоя.

5.3.1. Исследования по разработке методики количественного анализа суммы антраценпроизводных в сырье зверобоя.

5.3.2. Методика количественного определения суммы антраценпроизводных в сырье «Зверобоя трава».

5.3.3. Методика количественного определения суммы антраценпроизводных в препарате «Зверобоя настойка».

5.3.4. Методика количественного определения суммы антраценпроизводных в препарате «Зверобоя экстракт жидкий».

5.3.5. Методика количественного определения суммы антраценпроизводных в препарате «Зверобоя экстракт сухой».

ГЛАВА 6. СРАВНИТЕЛЬНОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ НАДЗЕМНЫХ ЧАСТЕЙ РАЗЛИЧНЫХ ВИДОВ РОДА НУРЕШСиМЪ.

6.1. Исследование качественного состава извлечений из надземных частей различных видов рода Hypericum L.

6.2. Количественный анализ извлечений из надземных частей различных видов рода Hypericum L.

ГЛАВА 7. ОБОСНОВАНИЕ ЦЕЛЕСООБРАЗНОСТИ СОЗДАНИЯ НОВЫХ ЛЕКАРСТВЕННЫХ СРЕДСТВ НА ОСНОВЕ СЫРЬЯ И ПРЕПАРАТОВ ВИДОВ РОДА HYPERICUM L.

7.1. Оптимизация способа получения сырья зверобоя продырявленного высокого качества.

7.1.1. Исследование различных видов сырья зверобоя продырявленного.

7.1.2. Исследование показателей травы зверобоя в зависимости от длины стебля.

7.1.3. Исследование динамики накопления биологически активных соединений в траве зверобоя продырявленного.

7.1.4. Исследование степени измельченности сырья, используемого для анализа.

7.1.5. Исследование травы зверобоя продырявленного, заготовленного в различных регионах РФ.

7.1.6. Исследование суммы дубильных веществ в траве и препаратах зверобоя.

7.1.7. Исследование режимов сушки сырья зверобоя.

7.2. Разработка способов получения лекарственных средств на основе травы зверобоя.

7.2.1. Оптимизация способа получения препарата

Зверобоя настойка».

7.2.2. Исследования по разработке препарата

Зверобоя экстракт жидкий».

7.2.3. Исследования по разработке препарата «Зверобоя экстракт сухой».

7.3. Изучение фармакологической активности новых препаратов на основе сырья видов рода Зверобой.

 
 

Введение диссертации по теме "Фармацевтическая химия, фармакогнозия", Правдивцева, Ольга Евгеньевна, автореферат

Актуальность темы. В настоящее время в медицинской практике наблюдается тенденция все более широкого применения фитопрепаратов для лечения и профилактики различных заболеваний. Это связано с тем обстоятельством, что лекарственные средства (ЛС) на растительной основе, как правило, сочетают в себе широту и мягкость терапевтического действия с отсутствием значительного числа побочных эффектов в случае их рационального применения. Именно поэтому целесообразным является применение фитопрепаратов для лечения хронических заболеваний, в том числе патологий центральной нервной системы, главными причинами которых являются стресс, психоэмоциональное напряжение и экологическое неблагополучие окружающей среды. Перспективным источником растительных средств, на основе которого возможно получение отечественных эффективных антидепрессантных препаратов, являются виды рода Зверобой - Hypericum L.

В настоящее время в медицинской практике Российской Федерации применяется два вида рода Зверобой {Hypericum L.) - зверобой продырявленный {Hypericum perforatum L.) и зверобой пятнистый (четырехгранный) {Hypericum maculatum Crantz., синоним Hypericum quadrangulum L.) семейства Hypericaceae {Guttiferae). Так, трава обоих фармакопейных видов зверобоя в нашей стране служит для получения антимикробных, противовоспалительных, вяжущих и фотосенсибилизирующих средств, в то время как за рубежом на основе данного сырья производят антидепрессантные препараты, такие как «Деприм», «Негрустин» и «Гелариум Гиперикум», разрешенные к применению на территории РФ. Однако до сих пор нет единого мнения относительно характера нейротропного эффекта препаратов зверобоя: его трактуют седативным, антидепрессивным, а в некоторых случаях стимулирующим ЦНС. Противоречия касаются и химической природы биологически активных соединений (БАС) видов рода Hypericum L., обладающих нейротропным действием. Все это не способствует созданию на основе травы зверобоя импортозамещающих отечественных антидепрессантных ЛС. Разработке отечественных антидепрессантных аналогов мешают и такие факторы, как недостаточная степень изученности химического состава видов рода Зверобой, а также отсутствие унифицированного подхода к анализу сырья и препаратов зверобоя (Самылина И.А., 1994). Кроме того, требуется оптимизация методик анализа как для сырья, так и препаратов, включая средство «Зверобоя настойка». Это обстоятельство связано с тем, что в действующей нормативной документации (НД) допущены существенные неточности. Так, в случае зверобоя травы для определения подлинности сырья не используются современные физико-химические методы анализа.

Исследования по данной проблеме представляются актуальными и важными также ввиду того, что трава зверобоя широко применяется как в Российской Федерации, так и за рубежом, однако до сих пор многие проблемы оставались нерешенными. Так, в нашей стране качество сырья и препарата «Зверобоя настойка» оценивается методом дифференциальной спектрофотометрии по содержанию суммы флавоноидов в пересчете на рутин. В то же время, в препаратах импортного производства методом прямой спектрофотометрии оценивается содержание суммы антраценпроизводных в пересчете на гиперицин. И тот, и другой подход к анализу имеет свои недостатки в силу того, что каждый из них в отдельности не позволяет в полной мере объективно охарактеризовать качество сырья и препаратов видов рода Зверобой.

Создание конкурентоспособных препаратов возможно лишь на основе глубокого изучения химической природы действующих веществ, а также использовании современных методов стандартизации сырья и препаратов (Куркин В.А., 2007). Выделение из сырья индивидуальных биологически активных веществ позволяет изучить их химическое строение, физико-химические свойства и фармакологические эффекты.

Кроме того, следует также отметить, что изучение морфолого-анатомических признаков фармакопейных и примесных видов рода Зверобой ранее в сравнительном аспекте не проводилось, тогда как современный уровень исследований предполагает использование в НД качественных цветных цифровых микрофотографий макро- и микроскопических признаков отдельных частей сырья, представляющего собой траву.

Таким образом, углубленное изучение химического состава, фармакологических свойств индивидуальных веществ и субстанций в сочетании с проведением морфолого-анатомического анализа позволит научно обосновать подходы к созданию и стандартизации сырья и препаратов видов рода Зверобой.

Цель и задачи исследования. Экспериментально-теоретическое обоснование новых подходов к созданию и стандартизации лекарственных средств на основе видов рода Зверобой (Hypericum L.).

Для достижения этой цели решались следующие задачи:

1. Сравнительное исследование химического состава надземной части видов рода Зверобой.

2. Выделение из надземной части зверобоя продырявленного индивидуальных биологически активных соединений, установление структуры выделенных веществ и изучение их физико-химических и фармакологических свойств.

3. Сравнительное морфолого-анатомическое исследование надземных частей видов рода Зверобой с использованием цифровой микроскопии.

4. Разработка и научное обоснование новых подходов к стандартизации сырья и препаратов зверобоя травы, отвечающих параметрам валидации.

5. Разработка методик качественного анализа для сырья и препаратов зверобоя травы с использованием метода тонкослойной хроматографии в сочетании с качественными реакциями и УФ-спектроскопией.

6. Разработка методик количественного анализа для сырья и препаратов зверобоя травы-с применением дифференциальной спектрофотометрии (в случае суммы флавоноидов), а также прямой спектрофотометрии (в случае антраценпроизводных).

7. Научное обоснование подходов к созданию новых антидепрессантных лекарственных препаратов на основе зверобоя травы.

8. Обоснование способов получения лекарственных препаратов «Зверобоя настойка», «Зверобоя экстракт жидкий» и «Зверобоя экстракт сухой».

9. Исследование показателей качества сырья и.препаратов зверобоя.

10. Разработка проектов ФСП «Зверобоя трава», «Зверобоя настойка», «Зверобоя экстракт жидкий» и «Зверобоя экстракт сухой».

11. Обоснование целесообразности использования в,медицинской практике отечественных антидепрессантных препаратов на основе зверобоя травы.

Научная новизна. Исследование химического состава видов рода Hypericum L. позволило получить новые данные о содержании биологически активных соединений. Так, из надземной части зверобоя продырявленного выделено 9 индивидуальных соединений, относящихся к флавоноидам, флороглюцинам, фенилпропаноидам и стеринам. На основе изучения данных ЯМР-спектроскопии, УФ-спектроскопии, масс-спектрометрии, тонкослойной хроматографии (ТСХ) установлено химическое строение выделенных веществ, среди которых вещества 3,8п-бисапигенин, гиперфорин, ß-ситостерин и эргостерин выделены впервые в РФ, а 6,8п-дикверцетин впервые описан для рода Hypericum L. и является новым природным соединением.

Сравнительное исследование видов рода Hypericum L. позволило выявить разнообразную природу БАС, среди которых наибольшее значение для целей стандартизации имеют флавоноиды (гиперозид, рутин и бисапигенин) и антраценпроизводные (гиперицин). Разработаны новые подходы к стандартизации сырья и препаратов видов рода Hypericum L., которые заключаются в сочетанном определении двух групп действующих веществ - суммы флавоноидов в пересчете , на рутин и суммы антраценпроизводных в пересчете на гиперицин.

Сравнительное анатомо-морфологическое исследование сырья видов? рода Hypericum L. позволило выявить общие и отличительные признаки для фармакопейных и примесных видов, необходимые для объективной идентификации сырья. На основе цифровых микрофотографий показано; что основные диагностические признаки выявляются при рассмотрении листьев, цветков и чашелистиков сырья.

Обоснованы технологические подходы для создания препаратов «Зверобоя настойка»^ «Зверобоя экстракт жидкий» и «Зверобоя экстракт сухой», которые позволили повысить выход целевых веществ, обладающих нейротропной активностью. В результате фармакологических исследований обнаружена выраженная антидепрессантная активность, для новых лекарственных препаратов «Зверобоя настойка», «Зверобоя; экстракт жидкий» и «Зверобоя экстракт сухой». Обоснована целесообразность применения в; медицинской практике импортозамещающих препаратов видов рода Hypericum L. в качестве антидепрессантных средств.

Практическая значимость работы. Сравнительное исследование сырья видов трод^.Hypericum L. свидетельствует о различии, в содержании биологически активных соединений фармакопейных и примесных видов,, сырья, что имеет существенное значение с точки зрения идентификации: сырья и препаратов зверобоя. Разработаны унифицированные методики качественного (ТСХ в сочетании с качественными реакциями и УФ-спектроскопией) и количественного анализа (сочетанное определение содержания суммы флавоноидов в пересчете на рутин и определение содержания суммы антраценпроизводных в пересчете на гиперицин) для зверобоя травы, зверобоя настойки, зверобоя экстракта жидкого и зверобоя экстракта сухого. Исследованы показатели качества сырья «Зверобоя трава», «Зверобоя настойка», «Зверобоя экстракт жидкий» и «Зверобоя; экстракт сухой». Проведенные фармакологические исследования нейротропной активности позволили выявить наличие выраженной антидепрессантной активности для новых препаратов на основе видов рода Hypericum L. Обоснована ресурсосберегающая технология заготовки сырья высокого качества, что нашло отражение в рекомендациях по заготовке сырья. Разработаны проекты ФСП «Зверобоя трава», «Зверобоя настойка», «Зверобоя экстракт жидкий» и «Зверобоя экстракт сухой», которые проходят экспертизу в ФГБУ «Научный центр экспертизы средств медицинского назначения» Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации.

Получен патент РФ на изобретение № 2327481 «Способ получения средства, обладающего антидепрессантной активностью» (2008 г.).

Публикации. Основное содержание диссертации опубликовано в 77 научных работах, в том числе 19 работ в журналах, реферируемых ВАК, 1 патенте РФ на изобретение и монографии «Зверобой: итоги и перспективы создания лекарственных средств» (2008 г.).

Апробация работы. Материалы работы доложены и обсуждены на различных региональных, Всероссийских и Международных конференциях, в том числе на X, XI, XII, XIII, XIV, XV Всероссийском конгрессе «Экология и здоровье человека» (Самара, 2005; 2006; 2007; 2008; 2009; 2010), XIII, XIV, XV, XVI и XVII Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 2006; 2007; 2008; 2009; 2010); Международном медицинском конгрессе (Ганновер, 2006), Международной конференции по полифенольным соединения (Канада, 2006), XII Съезде русского ботанического общества «Фундаментальные и прикладные проблемы ботаники в начале XXI века» (Петрозаводск, 2008), VII, VIII Международной конференции «Медико-социальная экология личности: состояние и перспективы» (Минск, 2009; 2010), VII Международном конгрессе «Традиционная медицина» (Москва, 2009),

Международном симпозиуме по фенольным соединениям (Москва, 2009), II Российском фитотерапевтическом съезде (Москва, 2010) и др.

Связь задач исследования с планами научных работ. Диссертационная работа выполнена в соответствии с тематическим планом научно-исследовательских работ Государственного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Самарский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации по темам «Комплексные исследования по проблеме создания новых лекарственных препаратов природного и синтетического происхождения» (№ 01200900658) и «Фармакогностическое и химико-фармацевтическое исследование лекарственных растений и фитопрепаратов» (№ 01200405620), а также соответствует тематике Проблемной комиссии по химико-фармацевтическим наукам. Кроме того, работа выполнена при поддержке проекта 02.740.11.0650 ФЦП «Научные и научно-педагогические кадры инновационной России» на 2009-2013 годы.

Основные положения, выдвигаемые на защиту:

1. Результаты химического изучения травы зверобоя продырявленного.

2. Результаты сравнительного морфолого-анатомического анализа сырья различных видов рода Hypericum L.

3. Новые подходы к стандартизации сырья и препаратов на основе зверобоя травы, которые заключаются в сочетанном определении суммы флавоноидов в пересчете на рутин и определении суммы антраценпроизводных в пересчете на гиперицин.

4. Способы получения новых лекарственных средств «Зверобоя настойка», «Зверобоя экстракт жидкий» и «Зверобоя экстракт сухой».

5. Научное обоснование целесообразности применения разработанных препаратов в медицинской практике.

Структура и объем диссертации. Диссертационная работа изложена на 245 страницах машинописного текста, содержит 41 таблицу, 90 рисунков. Диссертация состоит из введения, 7 глав, выводов, списка литературы и приложения. Список литературы включает 355 источников, из которых 50 зарубежных.

 
 

Заключение диссертационного исследования на тему "Новые подходы к созданию и стандартизации лекарственных средств на основе видов рода Hypericum L."

ОБЩИЕ ВЫВОДЫ:

1. Сравнительное морфолого-анатомичеекое исследование сырья видов рода Hypericum L. позволило выявить общие и отличительные признаки для фармакопейных и примесных видов, необходимых для объективной идентификации сырья. На основе результатов, полученных с использованием цифровой микроскопии, показано, что основные диагностические признаки расположены на листьях, цветках и чашелистиках сырья.

2. Сравнительное исследование видов рода Hypericum L. свидетельствует о разнообразной природе биологически активных соединений, среди которых наибольшее значение для целей стандартизации имеют флавоноиды и антраценпроизводные.

3. Углубленное исследование химического состава травы зверобоя позволило выделить 9 индивидуальных соединений, относящихся к флавоноидам, флороглюцинам, фенилпропаноидам и стеринам.

4. На основе изучения данных ЯМР-спектроскопии, УФ-спектроскопии, масс-спектрометрии, ТСХ-анализа установлено химическое строение всех выделенных веществ, среди которых бисапигенин, ß-ситостерин и эргостерин и гиперфорин выделены впервые в РФ, а дикверцетин является новым природным соединением.

5. Разработаны новые подходы к стандартизации сырья и препаратов видов рода Hypericum L., которые заключаются в определении двух групп действующих веществ — суммы флавоноидов в пересчете на рутин и суммы антраценпроизводных в пересчете на гиперицин.

6. Разработаны методики качественного и количественного анализа для зверобоя травы, зверобоя настойки, зверобоя экстракта жидкого и зверобоя экстракта сухого.

7. Показатели качества сырья и препаратов включены в проекты ФСП «Зверобоя трава», «Зверобоя настойка», «Зверобоя экстракт жидкий» и «Зверобоя экстракт сухой».

8. На основе фармакогностического изучения видов рода Hypericum< L. обоснована ресурсосберегающая технология заготовки сырья высокого качества, что нашло свое отражение в рекомендациях по заготовке сырья.

9. Обоснованы технологические подходы к созданию препаратов «Зверобоя настойка», «Зверобоя экстракт жидкий»* и «Зверобоя экстракт сухой», заключающиеся в использовании оптимального экстрагента (70% этилового спирта), позволяющего исчерпывающе извлекать весь комплекс БАС, обусловливающих нейротропный эффект (антидепрессантную и анксиолитическую активность).

10. Фармакологические исследования показали наличие более выраженной антидепрессантной и анксиолитической активности для новых препаратов «Зверобоя настойка», «Зверобоя экстракт жидкий» и «Зверобоя экстракт сухой» по сравнению с зарубежными аналогами.

11. Обоснована целесообразность применения в медицинской практике разработанных импортозамещающих препаратов «Зверобоя настойка», «Зверобоя экстракт жидкий» и «Зверобоя экстракт сухой» на основе видов рода Hypericum L. в качестве антидепрессантных средств.

 
 

Список использованной литературы по медицине, диссертация 2011 года, Правдивцева, Ольга Евгеньевна

1. Абубакиров, Н.К. Роль фенольных соединений в химической экологии / Н.К. Абубакиров // Тезисы Четвертого Всесоюзного симпозиума по фенольным соединениям. Ташкент, 1982. - С. 4-5.

2. Акопов, И.Э. Важнейшие отечественные лекарственные растения и их применение / И.Э. Акопов. М.: Медицина, 1986. - С. 172-174.

3. Алюкина, Л.Ю. Содержание флавоноидов у некоторых видов зверобоя / Л.Ю. Алюкина // Биохимия, обмен веществ и продуктивность растений. Алма-Ата, 1970. - С. 161-167.

4. Айзенман, Б.Е. Перспективы и задачи исследования антибиотиков из высших растений / Б.Е. Айзенман // Фитонциды. Киев, 1972.

5. Айзенман, Б.Е. Антимикробные препараты из зверобоя / Б.Е. Айзенман, Н.А. Дербенцева. Киев: Наукова думка, 1976. - С. 6-87.

6. Айзенман, Б.Е. Фитонциды и антибиотики высших растений / Б.Е. Айзенман, В.В. Смирнов, А.С. Бондаренко. Киев, 1984. С. 97-105.

7. Архипова, М.Н. Анатомическое изучение надземных вегетативных органов Hypericum xylosteifolium Spach. / М.Н. Архипова, И.В. Жемчугова // Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции. Пятигорск, 2004. - С. 5-6.

8. Арушанян, Э.Б. Значение иммунологического фактора для фармакологии анксиолитических и антидепрессивных средств / Э.Б. Арушанян, Э.В. Байер // Экспериментальная и клиническая фармакология. 2004. - Т. 67, № 5. - С. 71-77.

9. Атлас ареалов и ресурсов лекарственных растений СССР. М.: ГУГК, 1980.-С. 242-243.

10. Афанасьева, Ю.Г. Влияние извлечений из ряда лекарственных растений на иммунный ответ в эксперименте / Ю.Г. Афанасьева, Т.В. Пахомова, Н.Ж. Басченко, В.В. Сперанский // Растительные ресурсы. -2008. Т. 44, вып. 3. - С. 118-122.

11. БАДы. Полный справочник / Под ред. Ю.Ю. Елисеева. М.: Эксмо, 2007. - 768 с.

12. Бандюкова, В.А. О полифенольных соединениях некоторых видов Hypericum L. / В.А. Бандюкова, Х.Х. Хаматов // Растительные ресурсы. 1972. - Т. 8, вып. 4. - С. 541-547.

13. Барабой, В.А. Противолучевое действие фенольных соединений / В.А. Барабой // Тезисы докладов Четвертого Всесоюзного симпозиума по фенольным соединениям. Ташкент, 1982. - С. 8-9.

14. Беленовская, Л.М. Продукты вторичного метаболизма Hypericum perforatum L. й их биологическая активность / Л.М. Беленовская, А.Л. Буданцев // Растительные ресурсы. 2004. - Т. 40, вып. 3. - С. 131-153.

15. Беликов, В.В. Методы анализа флавоноидных соединений // В.В. Беликов, М.С. Шрайбер // Фармация. 1970. - Т. 19, № 1. - С. 66-72.

16. Беликов, В.В. Реакции комплексообразования в анализе флавоноидов / В.В. Беликов, Т.В. Точкова // Фенольные соединения и их физиологические свойства. Алма-Ата, 1973. - С. 168-172.

17. Беликов, В.В. Химизм комплексообразования флавоноидов с хлоридом алюминия // Тезисы Четвертого Всесоюзного симпозиума по фенольным соединениям. Ташкент, 1982. - С. 11-34.

18. Беликов, В.В. Количественное определение основных действующих веществ у видов Hypericum L. / В.В. Беликов, Т.В. Точкова, JI.B. Шатунова, Н.Т. Колесник, И.И. Баяндина // Растительные ресурсы. -1990. Т. 26, вып. 4. - С. 571-578.

19. Брезгин, Н.Н. Лекарственные растения центральной части России / Н.Н. Брезгин. Москва: Слог, 1993. - С. 99-101.

20. Бочарова, О.А. Фитоадаптогены в онкологии и геронтологии (на примере изучения Фитомикса-40) / О.А. Бочарова, А.Ю. Барышников, М.И. Давыдов. М.: ООО «Медицинское информационное агентство», 2008. - 224 с.

21. Быстров, Н.С. Химия гиперфорина. VI. Общая химическая характеристика / Н.С. Быстров, В.Н. Добрынин, М.Н. Колосов, Б.К. Чернов // Биоорганическая химия. 1978. - Т. 4, № 6. - С. 791-797.

22. Быстров, Н.С. Химия гиперфорина. VII. Строение тетракарбонильной системы / Н.С. Быстров, В.Н. Добрынин, М.Н. Колосов, С.А. Поправко, Б.К. Чернов // Биоорганическая химия. -1978. Т. 4, № 6. - С. 798-804.

23. Быстров, Н.С. Химия гиперфорина. VIII. Дифференцировка боковых цепей / Н.С. Быстров, В.Н. Добрынин, М.Н. Колосов, Б.К. Чернов // Биоорганическая химия. 1978. - Т. 4, № 7. - с. 943-946.

24. Быстров, Н.С. Химия гиперфорина. IX. Структура гиперфорина /Н.С. Быстров, Ш.Р. Групта, В.Н. Добрынин, М.Н. Колосов, Б.К. Чернов // Биоорганическая химия. 1978. - Т. 4, № 7. - С. 948-955.

25. Вайс, Р.Ф. Фитотерапия. // Р.Ф. Вайс, Ф. Фйнтельманн / Руководство: Пер. с нем. М.: Медицина, 2004. - С. 325-354.

26. Вайнштейн, В. А. Экстрагирование полярных Б AB из травы зверобоя двухфазной системой экстрагентов в присутствии ПАВ / В.А. Вайнштейн, И.Х. Хаззаа, Т.Х. Чибиляев, И.Е. Каухова // Химико-фармацевтический журнал. 2004. - Т. 38, № 5. - С. 25-27.

27. Василенко, Ю.К. Изучение метаболической активности кверцетина и его производных / Ю.К. Василенко, Е.В. Утяганова // Тезисы докладов XV Российского национального конгресса «Человек и лекарство». -Москва, 2008. С. 598- 599.

28. Власова, A.M. Индикаторные компоненты водных извлечений травы зверобоя / A.M. Власова, К.И. Элл ер, Е.В. Чукарина, H.A. Беседина // Фармация. 2006. - Т. 54, № 4. - С. 15-18.

29. Вовин, Р.Я. Применение гелариума в лечении депрессивных расстройств / Р.Я. Вовин, М.Г. Янушко, М.Ю. Шипилин // Психиатрия и психофармакотепапия. 2002. - Т. 4, № 1. - С. 22-24.

30. Волосовец, П.С. Новоиманин стимулятор иммуногенеза // П.С. Волосовец, С.Р. Резник / Фитонциды. - Киев, 1972. - С. 203-205.

31. ВФС 42-275-73. Брикет травы зверобоя.

32. ВФС 42-1775-87. Трава зверобоя пятнистого.

33. ВФС 42-2733-96. Экстракт зверобоя сухой.

34. Гаммерман, А.Ф. Лекарственные растения: справочное пособие / А.Ф. Гаммерман, Т.Н. Кадаев, A.A. Яценко-Хмелевский. М.: Высшая школа, 1990.-С. 131-133.

35. Ганиев, A.K. Изучение числовых показателей и биоактивных веществ растительного сбора Рано / А.К. Ганиев // Тезисы докладов XV Российского национального конгресса «Человек и лекарство». -Москва, 2008. С. 607- 608.

36. Геогриевский, В.П. Биологически активные вещества лекарственных растений / В.П. Геогриевский, Н.Ф. Комисаренко, С.Е. Дмитрук. М.: Наука, 1990.-С. 101-109.

37. Георгиевский, В.П. Физико-химические и аналитические характеристики флавоноидных соединений / В.П. Геогриевский, А.И. Рыбаченко, А.Л. Казаков. Ростов на Дону: Издательство Ростовского университета, 1998. - С. 142.

38. Герасимов, А.И. Об эффективности применения новоиманина при ингаляции в комплексном лечении туберкулеза легких и туберкулезного ларингита / А.И. Герасимов. В кн.: Фитонциды. -Киев, 1972 - С. 225-226.

39. Гордеев, М.В. Лечение остеопороза травами / М.В. Гордеев // Медицинский вестник Башкортостана. 2006. - Вып. 1. - С. 85-89.

40. Государственный реестр лекарственных средств. — М., 2004. 1404 с.

41. Государственный реестр лекарственных средств. М., 2008. - Т. 1. -1398 с.

42. Государственная Фармакопея СССР X издания. М.: Медицина, 1968.- 1080 с.

43. Государственная фармакопея СССР. Одиннадцатое издание / МЗ СССР. Вып. 2.-М.: Медицина, 1990. - 400 с.

44. Гозин, A.A. Динамика накопления биологически активных веществ в зверобое, произрастающем в Смоленской области / A.A. Гозин, B.C. Яснецов // Тезисы докладов 3-его Всероссийского съезда фармацевтов.- Свердловск, 1975. С. 385-386.

45. Горяев, М.Н. Эфирные масла флоры СССР / М.Н. Горяев. Алма-Ата, 1952.-379 с.

46. ГОСТ 15161-64. Трава зверобоя // Лекарственное растительное сырье. -М., 1980.-С. 95-99.

47. Гриненко, Н.А. Состав флавоноидов и производных антрахинона в Hypericum perforatum L. и Hypericum maculatum Crantz. / Н.А. Гриненко //Растительные ресурсы. 1989. - Т. 25, вып. 3. - С. 387-392.

48. Гриненко, Н.А. Флавоноиды и антраценпроизводные настойки зверобоя / Н.А. Гриненко, Н.А. Шишкин, Н.С. Фурса // Фармация. -1989. Т. 38, №3.-С. 13-17.

49. Громова, Н.М. Фармакогностическое изучение европейских видов зверобоя: Hypericum perforatum L. и Н. quadrangulum L.: Автореферат дис. канд. фармац. наук. М., 1952. 14 с.

50. Дмитриев, С.В. Запасы дикорастущих лекарственных растений в северных районах Куйбышевской области / С.В. Дмитриев, И.Н. Сокольский, А.А. Фетисов // Растительные ресурсы. 1991. - Т. 27, вып. 1. - С. 58-63.

51. Дробижев, М.Ю. Гелариум Гиперикум при лечении депрессий в общесоматической сети / М.Ю. Дробижев, А.Л. Сыркин, М.Г. Полтавская, М.Б. Печерская // Психиатрия и психофармакотерапия. -2002. Т. 4, № 5. - С. 198-199.

52. Дрозд, Г.А. Ограничения и противопоказания для лекарственного растительного сырья: Информационно-аналитическое пособие по побочным эффектам лекарственных растений / Г.А. Дрозд. Курск: КГМУ, 2006. - С. 58-59.

53. Дрозд, Г.А. Безопасность использования лекарственного растительного сырья / Г.А. Дрозд, Н.Г. Лищук // Разработка,исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции. -Пятигорск, 2007. С. 467-468.

54. Дубищев, A.B. Нейротропная активность растительных препаратов, содержащих флавоноиды / A.B. Дубищев, Д.В. Кадацкая // Тезисы докладов X Российского национального конгресса «Человек и лекарство». Москва, 2003. - С. 713.

55. Дударь, А.К. Ядовитые растения лугов и пастбищ / А.К. Дударь. -Москва, 1980. С. 55-57.

56. Ежков, В.Н. Фармакогностическое и фармакоэкономическое исследование по обоснованию рационального применения фитопрепаратов, содержащих фенилпропаноиды: автореферат дис. докт. фармац. наук: 15.00.02 / Ежков Владимир Николаевич. Москва, 2006. - 45 с.

57. Ефремов, А.П. Поиск растений, перспективных для лечения болезней предстательной железы / А.П. Ефремов, А.П. Шретер // Труды Первой Всероссийской конференции по ботаническому ресурсоведению. -Санкт-Петербург, 1996. С. 218.

58. Жариков, М.Н. Основы психиатрии для врачей общего профиля: Библиотека практикующего врача / М.Н. Жариков. М.: Медицина, 2001.-С. 37-42.

59. Жебелева, Т.Н. Сравнительный люминесцентно-хроматографический анализ некоторых видов зверобоя южного Предуралья / Т.И. Жебелева, C.B. Теслов, Г.А. Глумов // Научн. тр. Перм. мед. ин-та. 1975, вып. 8. -С. 89-94.

60. Жебелева, Т.И. Некоторые данные биохимического анализа зверобоев Предуралья / Т.И. Жебелева. Учен. Зап. Пер. ун-та, 1976, вып. 6, № 336.-С. 114-115.

61. Жизнь растений. Т. 5 (1) / Под ред. Проф. Федорова A.A. Москва «Просвещение», 1980. - С. 62-63.

62. Завражнов, В.Н. Лекарственные растения: Лечебное и профилактическое использование / В.Н. Завражнов, Р.И. Китаева, К.Ф. Хмелев. Воронеж, 1993. - С. 227-229.

63. Запесочная, Г.Г. Структурные исследования флавоноидов / Г.Г. Запесочная // Тезисы докладов Пятого Всесоюзного симпозиума по фенольным соединениям. Таллин, 1987. - С. 32-33.

64. Пименов // Тезисы докладов IX Российского национального конгресса «Человек и лекарство». — Москва. 2002. С. 164.

65. Зимина, JI.H. Исследование химического состава травы зверобоя продырявленного методом колоночной хроматографии / J1.H. Зимина, В.А. Куркин, O.E. Правдивцева // Труды 1-го Международного форума (6-й Международной конференции). Самара, 2005. - С. 17-19.

66. Ивенский, Я.Г. Заготовка и использование лекарственных растений в РСФСР в годы Великой Отечественной войны 1941-1945 гг. Вологда.- 1948. С. 85-86.

67. Йорданов, Д. Фитотерапия / Д. Йорданов, П. Николов, Асп. Бойчинов.- София: Медицина и физкультура, 1970. С. 135-137.

68. Каррер, П. Курс органической химии / П. Каррер / Пер. с немецкого Государственное научно-техническое издательство химической литературы, Ленинград, 1962. С. 717-729.

69. Кадацкая, Д.В. Изучение психотропного эффекта препаратов зверобоя продырявленного и пиона уклоняющегося / Д.В. Кадацкая // Тезисы докладов XI Российского национального конгресса «Человек и лекарство». Москва, 2004. - С. 790.

70. Кадацкая, Д.В. Сравнительная оценка препаратов зверобоя продырявленного, пиона уклоняющегося и пустырника пятилопастного в тесте «открытое поле» / Д.В. Кадацкая // Науки о человеке (Сборник статей). Томск, 2004. - С. 171-172.

71. Кадацкая, Д.В. Определение фармакологической активностьи фитопрепаратов, содержащих флавоноиды / Д.В. Кадацкая // Аспирантский вестник Поволжья. 2004. - № 1. — С. 38-39.

72. Кадацкая, Д.В. Растительные препараты как средства защиты организма от стрессов / Д.В. Кадацкая, A.B. Дубищев, В.А. Куркин // Экология и здоровье человека: Труды IX Всероссийского конгр. -Самара. 2004. - С. 121-123.

73. Кадацкая, Д.В. Нейротропная активность флавоноидсодержащих фитопрепаратов / Д.В. Кадацкая, A.B. Дубищев, В.А. Куркин // Тезисы 2-ого Всероссийского съезда фармацевтических работников. -Дагомыс, 2005. С. 76-78.

74. Кадацкая, Д.В. Перспективные антидепрессанты растительного происхождения / Д.В. Кадацкая // Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции. Пятигорск. - Вып. 60, 2005. - С. 348-350.

75. Кадацкая, Д.В. Нейротропная активность фитопрепаратов, содержащих флавоноиды: автореферат дисс. канд. мед. наук: 14.00.25 / Кадацкая Дина Викторовна. Уфа. 2005.

76. Карпенко, В.А. Изучение химического состава зверобоя козлиного травы / В.А. Карпенко, А.С. Саушкина, JI.B. Лигай, А.А. Акопов // Труды научно-практической конференции «Фармация из века в век». — Санкт-Петербург, 2008. Часть 3. - С. 47-50.

77. Китанов, Г.М. Фитохимическое изучение и анализ видов Hypericum L., произрастающих в Болгарии / Г.М. Китанов // Растительные ресурсы. -1988.-Т. 24, вып. 1.-С. 114-121.

78. Китанов, Г.М. Современное состояние химического изучения видов рода Hypericum / Г.М. Китанов, К.Ф. Блинова // Химия природных соединений. 1987. - № 2. - С. 185-203.

79. Китанов, Г.М. Фитохимическое исследование и анализ видов рода Hypericum L., распространенных в Болгарии / Г.М. Китанов // Фармация (София). 1987. - Т. 37, № 3. - С. 24-29.

80. Климова, Л.Д. Технологическое исследование спирто-водных извлечений зверобоя продырявленного // Л.Д. Климова, О.В. Бер / Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции: Сб. науч. тр. Пятигорск, 2005. - С. 116-117.

81. Комиссаренко, Н.Ф. Флавоноиды Hypericum ascyron / Н.Ф. Комисаренко, И.Г. Левашова, В.П. Жданова // Химия природных соединений. 1992. - № 5. - С. 580-581.

82. Королюк, Е.А. Красильные растения Алтая и сопредельных территорий / Е.А. Королюк // Химия растительного сырья. 2003. - №1.-С. 101-135.1.

83. Корсун, В.Ф. Энциклопедия фитотерапии. Травы жизни профессора Корсуна / В.Ф. Корсун, Е.В. Корсун. М.: ЗАО Центролиграф, 2007. - С. 305-308.

84. Корсун, В.Ф. Фитолектины / В.Ф. Корсун, В.М. Лахтин, Е.В. Корсун, А. Мицконас. М.: Практическая медицина, 2007. - 288 с.

85. Котуков, Г.Н. Культивируемые и дикорастущие лекарственные растения (Справочник) / Г.Н. Котуков. Киев: Наукова думка, 1974. -С. 34-37.

86. Котельников, Г.П. Доказательная медицина. Научно обоснованная медицинская практика: Монография / Г.П. Котельников, А.С. Шпигель. Самара; СамГМУ, 2000. - 116 с.

87. Кукина, Т.П. Неполярные компоненты экстракта зверобоя продырявленного / Т.П. Кукина, И.И. Баяндина, Л.М. Покровский // Химия растительного сырья. 2007. - № 3. - С. 39-41.

88. Кузнецова, Г.А. Природные кумарины и фурокумармны / Г.А. Кузнецова. Л., 1967.

89. Кузнецова, М.А. Растительные дубители Татарии / М.А. Кузнецова, С.Я. Трубицкая // Тезисы докладов II съезда фармацевтов Украинской ССР. Киев, 1972. - С. 832-834.

90. Кудашкина, Н.В. Лекарственная форма из травы зверобоя для применения в гинекологии / Н.В. Кудашкина // Фармация. 2004. - Т. 52, № 3. - С. 36-37.

91. Куркин, В.А. Фенилпропаноиды перспективные природные биологически активные соединения / В.А. Куркин. - Самара: СамГМУ, 1996. - 80 с.

92. Куркин, В.А. Флаволигнаны и другие природные лигноиды. Проблемы структурного анализа / В.А. Куркин, Г.Г. Запесочная // Химия природных соединений. 1987. - № 1. - С. 11-34.

93. Куркин, В.А. Проблемы рационального использования лекарственных и пищевых растений в научной и народной медицине / В.А. Куркин // Материалы международной научно-практической конференции «Самара в контексте мировой культуры». Самара, 2001. -С. 15-25.

94. Куркин, В.А. Современные аспекты химической классификации биологически активных соединений лекарственных растений / В.А. Куркин // Фармация. 2002. - Т. 50, № 2. - С. 8-16.

95. Тезисы докладов X Российского национального конгресса «Человек и лекарство». Москва, 2003. - С. 728.

96. Куркин, В.А. Поиск действующих веществ травы зверобоя продырявленного, обладающих нейротропным действием / В.А. Куркин, O.E. Правдивцева, A.B. Дубищев, Д.В. Кадацкая // Тезисы Международного съезда Фитофарм. Микелли, Финляндия, 2004. - С. 278-280.

97. Куркин, В.А. Стандартизация листьев березы / Куркин В.А., Стеняева В.В. // Фармация. 2004. - Т 52, № 6. - С. 10-12.

98. Куркин, В.А. Исследование нейротропной активности препаратов и веществ травы зверобоя продырявленного. / В.А. Куркин, O.E. Правдивцева, A.B. Дубищев, Д.В. Кадацкая // Бюллетень сибирской медицины. 2005. - Т. 4. Приложение 1. - С. 28.

99. Куркин, В.А. Исследование сырья и препаратов зверобоя / В.А. Куркин, O.E. Правдивцева, A.B. Дубищев, Д.В. Кадацкая, Г.Г. Запесочная, И.П. Жданов // Фармация. 2005. - Т. 53, № 3. - С. 23-25.

100. Куркин, В.А. Современная фармакогнозия: приоритеты и новые возможности / В.А. Куркин // Материалы II Всероссийского съезда фармацевтических работников. Сочи, 2005. - С. 96-98.

101. Куркин, В.А. Фенилпропаноиды лекарственных растений: Монография / В.А. Куркин, Г.Г. Запесочная, Е.В. Авдеева, В.Н. Ежков // Самара: ООО «Офорт»; ГОУВПО «СамГМУ», 2005. С. 7-9, 60.

102. Куркин, В.А. Антидепресантная активность некоторых фитопрепаратов и фенилпропаноидов / В.А. Куркин, A.B. Дубищев,

103. В.Н. Ежков, И.Н. Титова, Е.В. Авдеева // Химико-фармацевтический журнал. 2006. - Т. 40, № 11. - С. 33-38.

104. Куркин, В. А. Исследование активности препаратов и индивидуальных веществ травы зверобоя продырявленного / В.А. Куркин, O.E. Правдивцева, A.B. Дубищев, Д.В. Кадацкая // Медицинский вестник Башкортостана. 2006. - Вып.1. - С. 114-115.

105. Куркин, В.А. Место и роль фармакогнозии современной медицине / В.А. Куркин // Материалы конференции «Фармация и общественное здоровье». Екатеринбург, 2008. С. 195-198.

106. Куркин, В.А. Вопросы стандартизации сырья и препаратов зверобоя / В.А. Куркин, О.Е. Правдивцева, JI.H. Зимина // Фармация. -2007.-Т. 55, №4.-С. 12-14.

107. Куркин, В.А. Фармакогнозия: Учебник. 2-е изд., перераб. и доп. / В.А. Куркин. - Самара: ООО «Офорт», ГОУ ВПО «СамГМУ», 2007. -С. 794-799.

108. Куркин, В.А. Флавоноиды надземной части Hypericum perforatum / В.А. Куркин, О.Е. Правдивцева // Химия природных соединений. -2007.-№5.-С. 512-513.

109. Куркин, В.А. Анализ номенклатуры антидепрессантных лекарственных средств, представленных на фармацевтическом рынке Российской Федерации / В.А. Куркин, Е.П. Гладунова, О.Е.

110. Правдивцева, JI.H. Зимина // Фармацевтический менеджмент. 2008. -№ 3.- С. 3-5.

111. Куркин, В.А. Сравнительное исследование образцов травы зверобоя продырявленного / В.А. Куркин, O.E. Правдивцева // V Всероссийская научная конференция «Химия и технология растительных веществ». — Уфа, 2008. С. 182.

112. Куркин, В.А. Фенилпропаноиды и флавоноиды как источник импортозамещающих лекарственных растительных средств / В.А. Куркин // Тезисы докладов XVI Российского национального конгресса «Человек и лекарство». Москва, 2009. - С. 689.

113. Куркин, В.А. Фенольные соединения как источник лекарственных растительных средств / Тезисы докладов XV Российского национального конгресса «Человек и лекарство». -Москва,2008.-С. 653.

114. Куркин, В.А. Зверобой: итоги и перспективы создания лекарственных средств / В.А. Куркин, O.E. Правдивцева. Самара: ГОУ ВПО «СамГМУ»; ООО «Офорт», 2008. - 127 с.

115. Куркин, В.А. Сравнительное исследование содержания суммы флавоноидов и антраценпроизводных в препаратах травы зверобоя /

116. В.А. Куркин, O.E. Правдивцева // Химико-фармацевтический журнал. —2008. Т. 42, № Ю. - С. 39-42.

117. Куркин, В.А. Актуальные аспекты создания нейротропных фитопрепаратов / В.А. Куркин, O.E. Правдивцева, Л.Н. Зимина, A.B. Дубищев, Д.Г. Буланкин, Д.В. Корчагина // Медицинский альманах. — 2009. -№ 1.-С. 46-49.

118. Куркин, В.А. Сравнительное микроскопическое исследование некоторых видов зверобоя / В.А. Куркин, O.E. Правдивцева, Л.Н. Зимина // Фармация. 2009. - Т. 57, № 3. - С. 11-12.

119. Лавренов, В.К. Полная энциклопедия лекарственных растений. Том I. / В.К. Лавренов, Г.Н. Лавренова // СПб.: «Издательский Дом «Нева»; М.: «Олма-Пресс», 1999. С. 450-456.

120. Ладынина, Е.А. Фитотерапия / Е.А. Ладынина, P.C. Морозова. -Л.: Медицина, 1987.

121. Лебедев, A.B. Возможность применения зверобоя для лечения заболеваний нервной системы / A.B. Лебедев, H.A. Извопова, Н.С. Фурса // Сборник научных трудов «Человек и его здоровье». Курск, 1998.-Вып. 1.-С. 264-266.

122. Лекарственные растения в гепатологии / Под. Редакцией В.Ф. Корсуна. М.: Издательский дом «Русский врач», 2005. - С. 77-79.

123. Лекарственные растения Государственной Фармакопеи / Под ред. И.А. Самылиной, В.А. Северцева. М.: «АНМИ», 2001. - 488 с.

124. Лекарственные растения. Справочник. М.: Юнвес. - 2002. - С. 91-94.

125. Лекарственные средства: 5000 наименований лекарственных препаратов и их форм: Справочник / Под редакцией М.А. Клюева. -М.: Книжный дом локус, рипол классик, 2004. С. 221-222.

126. Литвиненко, В.И. Получение полиамидного сорбента / Литвиненко В.И., Максютина Н.П., Колесников Д.Г. // Медицинская промышленность. — 1962. № 3. - С. 40-43.

127. Литвиненко, В.И. Оптимизация количественного определения кверцетина в лекарственном растительном сырье / В.И. Литвиненко, М.И. Борисов // Тезисы докладов II съезда фармацевтов Украинской ССР, Киев, 1972. С. 798-799.

128. Литвиненко, В.И. Изомеризация гликофлавоноидов / В.И. Литвиненко, Т.П. Попова, A.C. Амосов // Тезисы Четвертого Всесоюзного симпозиума по фенольным соединениям. Ташкент, 1982. - С. 48-49.

129. Литвиненко, В.И. Биогенез и классификация флавоноидов / В.И. Литвиненко // Тезисы докладов Пятого Всесоюзного симпозиума по фенольным соединениям. Таллин, 1987. — С. 53-55.

130. Лозовская, Е. Фотосенсибилизаторы в природе и медицине / Е. Лозовская // Наука и жизнь. 2002. - № 2 - С. 18-19.

131. Ломаченко, Н.В. Фармакологические свойства гиперицина / Н.В., Ломаченко, P.M. Баширова // Итоги биологических исследований Башкирского университета за 1998 год. Уфа, 1998. - С. 105-108.

132. Лякина, М.Н. Определение содержания флавоноидов с сборе «Гепафит» / М.Н. Лякина, Г.И. Миназова // Научные труды «Современные проблемы фармацевтической науки». Т. XXXVIII. -Москва, 1999.-С. 69-71.

133. Макина, Д.М. Влияние экстракта зверобоя на активность гипоталамо-гипофизарно-адреналовой системы у крыс / Д.М. Макина,

134. А.Г. Таранухин, Е.В. Черниговская, В.В. Кузик // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. 2001. - Т. 132, № 12. - С. 661-663.

135. Маковецкая, Е.Ю. Содержание дубильных веществ в надземной части культивитуемого на Украине Hypericum perforatum L. в зависимости от условий выращивания / Е.Ю. Маковецкая // Растительные ресурсы. 1992. - Т. 28, вып. 3. - С. 67-71.

136. Маковецкая, Е.Ю. Антивирусная активность гиперицина / Е.Ю. Маковецкая, И.И. Бойко, Н.М. Усачева, Т.В. Ковалева, Е.И. Капинус, А.Ф., А.Ф. Лебеда // Фармацевтический журнал. 1997. - № 2. - С. 9397.

137. Маковецкая, Е.Ю. Особенности онтогенеза некоторых видов зверобоя Hypericum L. при интродукции в Киеве / Е.Ю. Маковецкая // Материалы Второй международной научной конференции «Биологическое разнообразие. Интродукция растений». СПб, 1999. С. 216-217.

138. Максютина, Н.П. Полифенолы травы Hypericum perforatum и препарата новоиманина / Н.П. Максютина, Т.А. Когет // Химия природных соединений. 1971. - № 3. - С. 363-367.

139. Малиновская, Е.И. Редкие и исчезающие виды растений национального парка «Самарская Лука» / Е.И. Малиновская. Самара, 1999.-С. 46-47.

140. Маргна, У. Взаимосвязь биосинтеза флавоноидов с первичным метаболизмом растений / У. Маргна // Итоги науки и техники. Сер. Биол. Химия. Т. 33. - М., 1990. - С. 27-29.

141. Машковский, М.Д. Лекарственные средства. В 2 т. / М.Д. Машковский. Изд. 14-е, перераб., испр. и доп. - М.: Новая Волна, 2002.-Т.1 -540 с.

142. Махлаюк, В.П. Лекарственные растения в народной медицине / В .П. Махлаюк. М.: Нива России, 1992. - С. 132-134.

143. Медведев, С.JI. К изучению природных ресурсов лекарственных растений Куйбышевской области // С.Л. Медведев, Т.И. Плаксина / В сб. «Сезонная ритмика и продуктивность дикорастущих лекарственных растений», Москва, 1988. С. 41-42.

144. Мельникова, В.А. Новые подходы к комплексной переработке сухой травы зверобоя / В.А. Мельникова, В.А. Вайнштейн, А.Н. Шиков, И.Б. Каухова // Химико-фармацевтический журнал. 1999. — Т. 33, № 12. - С. 27-30.

145. Мельникова, В.А. Экстракция травы и цветков зверобоя растворителями различной полярности / В.А. Мельникова, В.А. Вайнштейн // Тезисы докладов Международной конференции «Фармация в XXI веке: инновации и традиции». — Санкт-Перербург, 1999.-С. 61.

146. Мельникова, В.А. Получение сухих и масляных экстрактов из травы зверобоя продырявленного / В.А. Мельникова, И.Е. Каухова,

147. B.А. Вайнштейн II Тезисы докладов Международной конференции «Фармация в XXI веке: инновации и традиции». Санкт-Перербург, 1999.-С. 61-62.

148. Михайлов, И. Современные препараты из лекарственных растений / И. Михайлов, А. Шретер // М.: Издательский Дом МСП, 1999.

149. Михайлович, Г. Трава зверобоя {Hypericum herba) — осторожно при использовании / Г. Михайлович, Д. Джурович, Д. Урошев // Тезисы VII Международного съезда «Фитофарм». - Санкт-Петербург-Пушкин, 2003. - С. 644-647.

150. Минчик, О.Ю. Методы получения сухих экстрактов из лекарственного растительного сырья / О.Ю. Минчик // Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции. -Пятигорск, 2004. вып. 59. - С. 101-102.

151. Можаев, М.В. Депрессивные расстройства у пациентов соматического стационара / М.В. Можаев // Материалы IV межрегиональной конференции «Актуальные вопросы биологии и медицины». Ижевск, 2007. - часть II. - С. 267-270.

152. Муравьева, Д.А. Фармакогнозия: учебник / Д.А. Муравьева, И.А. Самылина, Г.П. Яковлев. М.: Медицина, 2002. - 656 с.

153. Технология лекарств: учебник для студентов Изд. 3-е, перераб. и доп. / И.А. Муравьев. - Том I. - М.: Медицина, 1980. - С. 180-183.

154. Настойки, экстракты, эликсиры и их стандартизация / Под ред. проф. В.Л. Багировой, проф. В.А. Северцева. Санкт-Петербург: Спецлит. - 2001. - 223 с.

155. НД 42-7136-97. Деприм таблетки, покрытые оболочкой. 8 с.

156. НД 42-12050-01. Негрустин. 6 с.

157. Носаль, М.А. Лекарственные растения и способы их применения в народе / М.А. Носаль, И.М. Носаль. Мн.: Полымя, 1997. - С. 77-82.

158. Носенко, М.А. Подбор лекарственных трав для конструирования косметического противовоспалительного средства / М.А. Носенко // Материалы 58-й межрегиональной конференции по фармации и фармакологии. Пятигорск, 2003. - С. 343-346.

159. Омельчук-Мякушко, Т.Я. Динамика накопления антимикробных веществ у зверобоя продырявленного / Т.Я. Омельчук-Мякушко, А.Я. Фастовская // Растительные ресурсы. 1968. - Т. 4, вып. 3. - С. 346-349.

160. Палов, М. Энциклопедия лекарственных растений. Пер. с немецкого / М. Палов. М.: Мир, 1998. - С. 133-135.

161. Пастушенков, JI.B. Лекарственные растения: Использование в народной медицине и быту / Л.В. Пастушенков, А.Л. Пастушенков, В.Л. Пастушенков. Л.: Лениздат, 1990. - С. 92-94.

162. Пастушенков, Л.В. Фармакотерапия с основами фитотерапии: учебник / Л.В. Пастушенков, Е.Е. Лесиовская. СПб.: СПХФИ, 1995.

163. Пашинский, В.Г. Растения в терапии и профилактике болезней / В.Г. Пашинский. Томск: Издательство Томского университета, 1989.

164. Перельсон, М.Е. Количественный анализ флавоноидов / М.Е Перельсон, A.A. Кирьянов, Л.Т. Бондаренко // Тезисы Четвертого Всесоюзного симпозиума по фенольным соединениям. Ташкент, 1982. - С. 59.

165. Печерская, Л.Г. Обнаружение примесей в лекарственном растительном сырье / Л.Г. Печерская, М.Д. Решетникова // Тезисы докладов XV Российского национального конгресса «Человек и лекарство». Москва, 2008. - С. 557- 558.

166. Пихлик, У. Фенология и динамика содержания полифенолов у Hypericum perforatum L. и H. maculatum Crantz. В Эстонии / У. Пихлик // Растительные ресурсы. 1993. - Т. 29, вып. 1. - С. 77-82.

167. Плаксина, Т.И. Редкие, исчезающие растения Самарской области / Т.И. Плаксина. Самара: Издательство «Самарский университет», 1998.-С. 41.

168. Попов, И.В. Проблемы использования русурсов дикорастущих лекарственных растений / И.В. Попов // Труды научно-практической конференции «Фармация из века в век». Санкт-Петербург, 2008. -Часть 3.-С. 124-128

169. Портнягина, Н.В. Ресурсная характеристика Hypericum perforatum (.Hypericaceae) в условиях интродукции (Республика Коми) / Н.В. Портнягина, Э.Э. Эчишвили, В.В. Пунегов, В.П. Мишуров // Растительные ресурсы. 2009. - Т. 45, вып. 2. - С. 48-56.

170. Потанина, В.В. Изменения некоторых показателей перекисного окисления липидов при депрессии в процессе терапии / В.В. Потанина, С.С. Теровский, Г.Г. Симуткин // Тезисы докладов V Сибирского физиологического съезда. Томск: СибГМУ, 2005. - С. 141-142.

171. Полуденный, JI.B. Эфирно-масличные и лекарственные растения / JI.B. Полуденный, В.Ф. Сотник, Е.Е. Хлапцев. Москва: Колос, 1979. - С. 224-225.

172. Правила сбора и сушки лекарственных растений (сборник инструкций). М.: Медицина, 1985. С. 104-106.

173. Полежаева, Н.С. Содержание флавоноидов, дубильных веществ и каротинов в Hypericum maculatum Crantz. / Н.С. Полежаева, Г.К. Канючкова // Растительные ресурсы. 1985. - Т. 21, вып. 3. - С. 340-343.

174. Правдивцева, О.Е. Исследование химического состава травы зверобоя продырявленного / О.Е. Правдивцева, В.А. Куркин // Науки о человеке (Сборник статей). Томск, 2004. - С. 179.

175. Правдивцева, О.Е. Фитохимическое исследование сырья зверобоя продырявленного с целью создания новых лекарственных препаратов / О. Е. Правдивцева // Труды X Всероссийского конгресса «Экология и здоровье человека». — Самара, 2005. — С. 227-228.

176. Правдивцева, О.Е. Перспективы создания антидепрессантных лекарственных средств на основе сырья зверобоя продырявленного / О.Е. Правдивцева, JI.H. Зимина // Труды XI Всероссийского конгресса «Экология и здоровье человека. Самара, 2006. - С. 210-211.

177. Правдивцева, О.Е. Фитохимическое исследование травы Hypericum perforatum L. / О.Е. Правдивцева, В.А. Куркин // Материалы Всероссийской научно-практической конференции. Томск, 2006. - С. 282-285.

178. Правдивцева, О.Е. Исследование химического состава травы зверобоя / О. Е. Правдивцева // Химия и медицина тезисы докладов VI Всероссийского научного семинара с молодежной научной школой. -Уфа, 2007. С. 206.

179. Правдивцева, О.Е. Исследование динамики накопления флавоноидов и антраценпроизводных в зверобоя траве / О.Е. Правдивцева, В.А. Куркин, JI.H. Зимина // Материалы конференции «Фармация и общественное здоровье». Екатеринбург, 2008. - С. 262264.

180. Правдивцева, О.Е. Сравнительное исследование надземных частей некоторых видов рода Hypericum L. / О.Е. Правдивцева, В.А. Куркин // Материалы конференции «Фармация и общественное здоровье». Екатеринбург, 2009. - С. 111-113.

181. Правдивцева, О.Е. Сравнительное исследование химического состава надземной части некоторых видов рода Hypericum L. / О.Е. Правдивцева, В.А. Куркин // Химия растительного сырья. 2009. - № 1.-С. 79-82.

182. Правдивцева, О.Е. Рациональная заготовка травы зверобоя / О.Е. Правдивцева, В.А. Куркин // Фармация. 2009. - Т. 57, № 5. - С. 1012.

183. Прокошева Л.И., Шатунова Л.В. Содержание действующих веществ в надземной части Hypericum perforatum L. / Л.И. Прокошева, Л.В. Шатунова // Растительные ресурсы. 1985. - Т. 21, вып. 4. - С. 461463.

184. Пронченко, Г.Е. Лекарственные растительные средства / Г.Е. Пронченко. М.: «Гэотар-мед», 2002. — 288 с.

185. Пупыкина, К.А. Разработка стоматологических карандашей с растительным масляным экстрактом / К.А. Пупыкина, В.А. Лиходед,

186. А.Н. Мингазова, P.P. Кутушева // Фармация. 2008. - Т. 56, № 1. - С. 28-30.

187. Раал, А. Влияние густоты посадки Hypericum perforatum L. на развитие и содержание действующих веществ / А. Раал, У. Пихлик, У. Паавер, Д. Волмер, А. Меос // Растительные ресурсы. 2004. - Т. 40, вып. 3. - С. 36-42.

188. Раевский К.С. Антидепрессанты: нейрохимические аспекты механизма действия / К.С. Раевский // Психиатрия и психофармакотерапия. 2001. - Т. 3, № 5. - С. 162-166.

189. Ражинскайте Д.К. Действующие вещества зверобоя обыкновенного / Д.К. Ражинскайте // Тр. АН Лит ССР. Сер. В. -Вильнюс, 1971, Т.1 (54). С. 89-98.

190. Растения для нас: Справочное издание / Под. Ред. Г.П. Яковлева и К.Ф. Блиновой. С.-Пб.: Учебная книга, 1996. - С. 465-468.

191. Растительные лекарственные средства / Н.П. Максютина и др.. -К.: Здоровье, 1985. С. 176-177.

192. Растительные ресурсы СССР: Цветковые растения, их химический состав, использование; Семейства Paeoniaceae — Thymaeleaceae. Л.: Наука, 1985. - С. 11-19.

193. Регистр лекарственных средств России. Энциклопедия лекарств: Справ. / Под ред. Г. Л. Вышковского. М.: РЛС - 2002, 2002. - 1504 с.

194. Редько, И.Г. Соки свежей травы зверобоя и грыжника / И.Г. Редько, Т.В. Ефимова, Х.Х. Хаматов // В. кн.: Матер, юбил. респ.научн. конф. фармацевтов, посвящ. 50-летию образования СССР. -Ташкент, 1972. С. 86-87.

195. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ / Под ред. Р.У. Хабриева. 2-е изд., перераб. и доп. - М.: ОАО Издательство «Медицина», 2005. -832 с.

196. Сабоиев, С.С. Запасы сырья двух видов Р. Hypericum L. и Origanum tyttanthum Gontsch. в западных районах Горно-бадахшанской АО Таджикистана / С.С. Сабоиев, Х.С. Мастоншоева // Растительные ресурсы. 1992. - Т. 28, вып. 2. - С. 36-46.

197. Самылина, И.А. Фармакогнозия. Атлас: учебное пособие: в 2-х томах / И.А. Самылина, О.Г. Аносова // М.: Гэотар-медиа, 2007. Т. 2. -384 с.

198. Самылина, И.А. Фармакогнозия. Атлас: учебное пособие: в 3-х томах / И.А. Самылина, В.А. Ермакова, И.В. Бобкова, О.Г. Аносова // М.: Гэотар-медиа, 2009. Т. 3. - 488 с.

199. Сафиуллин, P.C. Особенности рынка антидепрессантов, применяемых для лечения пограничных психических расстройств в

200. Республике Татарстан / P.C. Сафиуллин, О.Г. Шигабутдинова, Д.Х.Шакирова // Материалы медико-фармацевтического конгресса «Аптека 2007». Москва, 2007. - С. 72-73.

201. Ситдыкова, М.Э. Опыт применения препарата простанорма в лечении больных хроническим простатитом / М.Э. Ситдыкова, В.А. Перчаткин // Казанский медицинский журнал. 2002. - Т. 83. - С. 305306.

202. Смирнова, Е.А. Фитотерапия как метод лечения соматического и гормонального бесплодия / Е.А. Смирнова // Медицинский вестник Башкортостана. 2006. - Вып.1. - С. 90-91.

203. Современная фитотерапия / Под ред. В. Петкова. — София: Медицина и физкультура, 1988.

204. Соколов, С .Я. Справочник по лекарственным растениям (Фитотерапия) /С.Я. Соколов, И.П. Замотаев // 3-е изд. Челябинск, Металлургия, Челябинское отделение, 1990. - С. 161-165.

205. Соколов, С.Я. Фитотерапия и фитофармакология: Руководство для врачей / С.Я. Соколов. М.: Медицинское информационное агентство, 2000. - С. 214-216.

206. Сорокин, В.В. Применение направленной экстракции при получении препаратов травы зверобоя / В.В. Сорокин, И.Е. Каухова, В.А. Вайнштейн // Фармация. 2007. - Т. 55, № 4. - С. 34-35.

207. Сорокин, В.В. Модификация физико-химических и технологических свойств экстракта зверобоя путем введения кристаллического наполнителя / В.В. Сорокин, И.Е. Каухова, В.А.

208. Вайнштейн // Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции. Пятигорск, 2009. - Вып. 64. - С. 212213.

209. Справочник Видаль. Лекарственные препараты в России: Справочник. -М.: АстраФармСервис, 2005. 1536 с.

210. Справочник по лекарственным растениям / A.M. Задорожный,

211. A.Г. Кошкин, С.Я. Соколов, А.И. Шретер. М.: Экология, 1992. - С. 139-142.

212. Суслов, Н.И. Некоторые аспекты механизма действия адаптогенных препаратов / Н.И. Суслов, Н.В. Провалова, Е.Г. Скурихин, О.В. Першина, И.В. Шилова // В сб: Материалы конференции, посвященной 15-летию НИИ фармакологии. Томск, 1999.-Т. 10.-С. 94-103.

213. Сычов, Р.Л. Интенсификация экстракции псевдогиперицина и гиперицина из травы Hypericum perforatum L. в СВЧ поле. / Р.Л. Сычов,

214. B.В. Пунегов // Материалы III Всероссийской конференции «Новые достижения в химии и химической технологии растительного сырья». -Барнаул, 2007. Кн. 2. - С. 92-96.

215. Товчига, О.В. Влияние лекарственных растений на выделительную функцию почек / О.В. Товчига, С.Ю. Штрыголь // Экспериментальная и клиническая фармаколгия. — 2009. Т. 72, № 3. — С. 50-59.

216. Турова, А.Д. Лекарственные растения СССР и их применение / А.Д. Турова. М.: Медицина, 1982. - С. 282.

217. Турищев, С.П. Рациональная фитотерапия / С. П. Турищев. М.: Информпечать. - 2000. - 240 с.

218. Турищев, С. П. Фитотерапия: Учебное пособие для студентов высших медицинских учебных заведений / С. П. Турищев. М.: Издательский дом «Академия», 2003. - С. 137-143.

219. Тюкавкина, Н.А. Использование ВЭЖХ в области фенольных соединений / Н.А. Тюкавкина // Тезисы докладов Пятого Всесоюзного симпозиума по фенольным соединениям. Таллин, 1987. - С. 112-113.

220. Тюрина, Е.В. Опыт возделывания Hypericum perforatum L. в Новосибирской области / Е.В. Тюрина, Н.К. Шохина, И.Н. Гуськова // Растительные ресурсы. -1983. Т. 19, Вып. 4. - С. 507-509.

221. Тюрина, Е.В. Интродукция перспективных лекарственных растений с целью создания промышленных плантаций / Тезисы

222. Всесоюзной конференции «Новые лекарственные препараты из растений Сибири и Дальнего Востока». Томск, 1989. - С. 101.

223. Федеральный реестр биологических добавок к пище. Изд. второе, переработанное и дополненное / под ред. T.JI. Пилат. М.: Когелет, 2001.-432 с.

224. Фетисов, A.A. Запасы сырья дикорастущих лекарственных растений в западных районах Куйбышевской области / A.A. Фетисов, C.B. Дмитриев, И.Н. Сокольский // Растительные ресурсы. 1991. - Т. 27, вып. 1. - С. 64-69.

225. Фетхуллина, Г.А. Количественное определение флавоноидов в жидком экстракте водяного перца и настойке зверобоя / Г.А. Фетхуллина, Т.И. Буленков // Фармация. 1985. - Т. 33, № 5. - С. 38-40.

226. Фитотерапия с основами клинической фармакологии / Под ред. В.Г. Кукеса. М.: Медицина, 1999. - 192 с.

227. Флора СССР. Москва, Ленинград: Издательство академии наук СССР, 1949. С. 201-254.

228. Фогт, В.П. Использование методов ВЭТСХ и ВЭЖХ в разработке экстракта противодиабетического / В.П. Фогт, С.С. Степанов, Т.А. Степанова // Химия растительного сырья. 2008. - № 4. - С. 75-77.

229. ФС 42-814-73. Настойка зверобоя.

230. ФС 42-1889-95. Настойка зверобоя.

231. Хаззаа, И.Х. Экстрагирование липофильных БАБ из травы зверобоя водно-масляными эмульсиями / И.Х. Хаззаа, В.А. Вайнштейн, Т.Х. Чибиляев // Химико-фармацевтический журнал. 2003. - Т. 38, № 7. - С. 20-23.

232. Хаззаа, И.Х. Некоторые особенности двухфазной экстракции надземной части Hypericum perforatum L. в присутствии поверхностно-активных веществ / И.Х. Хаззаа, В.А. Вайнштейн, И.Е. Каухова // Растительные ресурсы. 2004. - Т. 40, вып. 3. - С.117-121.

233. Хазиев, Р.Ш. Экстрагируемость флавоноидов травы зверобоя в настои / Р.Ш. Хазиев, А.А. Тынчерова // Фармация. 2006. - Т. 54, № 6. - С. 32-34.

234. Халматов, Х.Х. Фитохимическое изучение некоторых среднеазиатских видов зверобоя: Автор. Дис. . канд. фармац. наук / Халматов Х.Х. Ташкент, 1948. - 6 с.

235. Хмелев К.Ф., Сидень Г.И. Ресурсы дикорастущих растений среднего Дона // Растительные ресурсы. 1991. - Т. 27, вып. 1. - С. 6975.

236. Ходжиматов М. Дикорастущие лекарственные растения Таджикистана / М. Ходжиматов. Душанбе, 1989. - С. 137-144.

237. Шакирова, К.К. Исследование флавоноидов некоторых видов зверобоя / К.К. Шакирова, В.А. Бандюкова, Х.Х. Хаматов, Р.Л. Хазанович // В кн.: Матер, юбил. респ. научн. конф. фармацевтов, посвящ. 50-летию образования СССР. Ташкент, 1972. - С. 40-41.

238. Шатунова, Л.В. Изучение полифенольных соединений растений рода зверобой / Л.В. Шатунова // Тезисы 3-его Всесоюзного съезда фармацевтов, Кишинев, 1980. С. 191-192.

239. Шатунова, Л.В. Флавоноиды Hypericum hirsutum / Л.В. Шатунова // Химия природных соединений. -1978. № 4. - С. 520.

240. Шатунова, Л.В. Кверцетин из растений рода Hypericum / Л.В. Шатунова // Химия природ, соедин. 1979. - № 5. - С. 724.

241. Шасс, Е. Ю. Фитотерапия / Е. Ю. Шасс. М.: Изд-во АМН СССР, 1952.

242. Шемякина, Г.П. Фармакогностическое изучение зверобоев Дальнего востока / Г.П. Шемякина, И.Н. Рябова, З.В. Скорзова // Научные труды ВНИИФ, том XXV: Ресурсоведческое и фармакогностическое изучение лекарственной флоры СССР. -Москва, 1987. С.90-93.

243. Шиков, А.Н. Растительные масла и масляные экстракты: технология, стандартизация, свойства/ А.Н. Шиков, В.Г. Макаров, В.Е. Рыженков. М.: Издательский дом «Русский врач», 2004. - С. 128-129.

244. Шретер, А.И. Лекарственная флора советского Дальнего востока / А.И. Шретер. Москва: Медицина, 1975. - С. 185.

245. Чаплинская, М.Г. Фитохимическое исследование травы зверобоя и изготовление из нее фармакологических препаратов: автореф. дис. . канд. фарм. наук / Чаплинская М.Г. Львов, 1959. - 13 с.

246. Чаплинская, М.Г. Исследования фотодинамического действия зверобоя при наружном его применении / М.Г. Чаплинская, М.А. Штейнберг, З.Ф. Трибульска // Фармацевтический журнал. 1965. - Т. 20, вып. 2. - С. 47-53.

247. Энциклопедический словарь лекарственных растений и продуктов животного происхождения: Учебное пособие / Под ред. Г.П. Яковлева и К.Ф. Блиновой. СПб.: Специальная литература, 1999. -407 с.

248. Afanas'ev, I.B. Different antioxidant activities of bioflavonoids rutin in normal and ironi Yoverloading rats. / I.B. Afanas'ev, E.A. Natalia, G.K. Ludmila // Biochem. Pharmacol. - 1995. - Vol. 50. - P. 627-735.

249. Berghoefer, R. Biflavonoids in Hypericum perforatum. Part 1. Isolation of 3n,8-biapigenin / R. Berghoefer, J. Hoelz // Planta Medica -1987. Vol. 53, No. 2. -P. 216-217.

250. Bhattacharya, S.K., Satyan K.S. Experimental metods for evalution of agents in rodents I. Anti-anxiety agents / S.K. Bhattacharya, K.S. Satyan // Indian J. Exp. Biol. 1997. - Vol. 35, No. 6. - P. 565-575.

251. Brocmann, H. Die Isolierung des Pseudohypericins / H. Brocmann, G. Pampus //. Naturwissenschaften. - 1954. - Bd. 41, H. 4. - S. 86-87.

252. Buttenwerck, V. Flavonoids from Hypericum perforatum show antidepressant activity in the forced swimming test / V. Buttenwerck, G. Jurgenliemk, A. Nahrstedt, H. Winterhoff// Planta Medica 2000. - Vol. 66. - P. 3-6.

253. European Pharmacopoeia 4. P. 1353-1354.

254. Georghiu, A.Contributii la studiul uleirilor esentiale isolate din Hypericum perforatum L. si Hypericum acutum L. / A. Georghiu, E .Jonescu-Matiu, S. Boteanu // Comun. Bot. (RSR). 1969. - Vol. 8. - P. 119-124.

255. Gray, D.E. Effect of acute drought Stress and time of harvest on phytochemistry and dry weight of St. John's Wort leaves and flowers / D.E. Gray, S.G. Pallardy, H.E. Garrett // Planta Medica. 2003. - Vol. 69. - P. 1024-1030.

256. Harborne, J.B. Comparative Biochemistry of the Flavonoids / J.B. Harborne // London: Academic Press inc., 1967. P. 80-89.

257. Hostettmann, K. Ginkgo biloba / К. Hostettmann // Switzerland. Lausanne-Dorigny, 2001. - 376 p.

258. Jovanotic, S.V. Flavonoids as antioxidants / S.V. Jovanotic, S. Steenken, M.B. Tosic, B. Marjanovic, M.G. Simic // J. Am. Chem. Sos. -1994.-Vol. 116.-P. 4846-4851.

259. Jurgenliemk, G. Phenolic compounds from Hypericum perforatum / G. Jurgenliemk, A. Nahrstedt // Planta Medica. 2002. - Vol. 68, No. 1. - P. 88-91.

260. Karting, Т. Effect of visible and ultraviolet light on the production of hypericin and flavonoids in cell cultures of Hypericum perforatum / T. Karting, В. Heydel //Planta Medica. 1993. - Vol. 59. - P. 654.

261. Koch-Heitzmann, I., Schultze W. Eine alte Arzneipflanze mit neuen therapeutischen Wirkungen / I. Koch-Heitzmann, W. Schultze // Deutsche Apotheker Zeitung. 1984. - Vol. 124 (11). - P. 2137-2145.

262. Kudger Beerhyes. Molecules of Interest Hyperforin // Pharmacopsychiatry. 2006.- London, New York. Vol. 67, No. 20. - P. 2201-2207.

263. Kurkin, V.A. Phenylpropanoids from medicinal plants: distribution, classification, structural analysis and biological activity / V.A. Kurkin // Chemistry of Natural Compounds. -2003. Vol. 39, No. 2. - P. 123-153.

264. Kurkina, A.V. Pharmacological activity of flavonoid-containing plants / A.V. Kurkina, O.E. Pravdivtseva, V.A. Kurkin, A.V. Dubishchev // Internationaler medizinischer Kongress. Hannover, 2006. - P. 37-38.

265. Kyoko Ishiguro, A Prenylated Xanthone from cell suspension cultures of Hypericum patulum / Kyoko Ishiguro, Noriko Nagareya, Akiko Suitani, Hisae Fukumoto //Phytochemistry. 1997. - Vol. 44, No. 6. - P. 10651066.

266. Leifertova I. Studium flavonoidu v ceskoslovenskych druzich rodu Hypericum /1. Leifertova / Preslia, 1966. Vol. 38, № 4. - P. 386-390.

267. Ludger Beerhues. Hyperforin / Ludger Beerhues // Phytochemistry. -2006. Vol. 67. - P. 2201-2207.

268. Mathis, C. Etude chimio-taxonomique du genre Hypericum / C. Mathis, G. Ourisson // Phytochemistry, 1964. Vol. 3, No. 1. - P. 115-131, 133-141, 377-378.

269. Mei-Ing Chung, Phenolicsf From Hypericum geminiflorum / Mei-Ing Chung, Mei-Hsun Lai, Ming-Hong Yen, Ru-Rong Wu, Chun-Nan Lin // Phytochemistry. 1997. - Vol. 44, No. 5. - P. 943-947.

270. Muruganandam, A.V. Antidepressant activity of the St. John's wort, Hepericumperforatum Linn.: An experimental study / A.V. Muruganandam, S.K. Bhattacharya, S. Chosal // Indian J. Exp. Biol. 2001. - Vol. 39, No. 12.-P. 1302-1304.

271. Manach, C. Bioavailability of isoflavones in rat tissues / C. Manach, N. Vedrine, C. Morand, A. Gil-Izquierdo, L. Guy, C. Remesy // XXII International Conference on Polyphenols. Helsinki, Finland. 2004. P. 351352.

272. Muzychkina, R. A. Natural anthraquinones biological properties and physicochemical characteristics / R. A. Muzychkina. Moscow: Phasis, 1998.-P. 668.

273. Naonobu Tanaka, Xanthones from Stems of Hypericum chínense / Naonobu Tanaka, Yoshihisa Takaishi // Chem. Pharm. Bull. 2007. - Vol. 55,No. l.-P. 19-21.

274. Nóldner, M. Rutin is essential for antidepressant activity of Hypericum perforatum extracts in the forces swimming test / M. Nolder, K. Schotz 11 Planta Medica. 2002. - Vol. 68, No. 7. - P. 577-580

275. Sasakia, K. Chemistry and biological activities of Ginkgo biloba / K. Sasakia // Hokkaido. 2007. - 177 p.

276. Schilcher, H. Die Bedeutung der Phytoterapie in der Schulmedizin Europas / H. Schilcher // Zeitschrift fur Phytotherapie. 1991. - Vol. 12, No.3.-P. 71-76.

277. United States Pharmacopeia. — 31-th Ed. — Rockville: United States Pharmacopeial Convention, Inc., 2008. - 2105 p.

278. Vickery, A.R. Traditional uses and folklore of Hypericum in the Britisch isles / A.R. Vickery // Ecol. Bot., 1981. Vol. 35, No. 3. - P. 289293.

279. Vogel G. Natural substances with effects on the liver // New Natural Products and Plant Drugs with Parmacological. Biological or Therapeutical activity / G. Vogel // Berlin-Heidelberg-New York: Springer Verlang, -1977.-P. 249-265.

280. Wagner, H. Pharmazeutische Biologie. Drogen und ihre Inhaltsstoffe / H. Wagner // Stuttgart-New York: Gustav Fischer Verlag, 1993. 522 s.

281. Wagner, H. Plant Drug Analysis / H. Wagner, S. Blads // A Thin Layer Chromatography Atlas. Berlin-Heidelberg-New York: Springer Verlang, 1996. - P. 348.

282. Waka Hashida, Tomoenes A-H, cytotoxic phloroglucinol derivates from Hypericum ascyron / Waka Hashida, Naonobu Tanaka, Yoshiki Kashiwada, Michiko Sekiya, Yasumasa Ikeshiro, Yoshihisa Takaishi // Phytochemistry. 2008. - Vol 69, No. 11. - P. 2225-2230.

283. Whiting, D.A. Lignans, neolignans and related componoids / D.A. Whiting // J. Prod. Reports. 1987. - Vol. 4. - P. 499-525.

284. Yi-Zeng, Lianga Quality control of herbal medicines / Lianga Yi-Zeng //Journal of Chromatography B. № 812. 2004. - P. 53-70.