Автореферат и диссертация по медицине (14.00.25) на тему:Новое рентгеноконтрастное средство - ортотанталат лантана и возможности его применения в абдоминальной хирургии

На правах рукописи

СТРЕКАЛОВ Илья Михайлович

□030581ЭВ

НОВОЕ РЕНТГЕНОКОПТРАСТНОЕ СРЕДСТВО -OPTO ГАНТАЛАТ ЛАНТАНА И ВОЗМОЖНОСТИ ЕГО ПРИМЕНЕНИЯ В АБДОМИНАЛЬНОЙ

ХИРУРГИИ

(ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ)

14 00 25 - фармакология, клиническая фармакология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Челябинск

-2007

Работа выполнена на кафедре фармакологии Государственного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Уральская государственная медицинская академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию»

Научный руководитель

доктор медицинских наук, профессор Ларионов Леонид Петрович

Официальные оппоненты: доктор медицинских наук, заслуженный деятель науки РФ, профессор

доктор медицинских наук, профессор

Алехин Евгений Константинович

Владимир Викторович Юшков

Ведущая организация Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Российский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию»

Зашита диссертации состоится « » мая 2007 г в часов на заседании диссертационного совета Д 208 117 03 при Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Челябинская Государственная медицинская академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию» по адресу 454092, г Челябинск, у л Воровского, 64

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Государственного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Челябинская Государственная медицинская академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию»

Автореферат разослан « » . 2007 г

Ученый секретарь

диссертационного совета

доктор медицинских наук, профессор

Телешева Л.Ф

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Актуальность проблемы. Современные диагностические и лечебные технологии в медицине немыслимы без рентгеноконтрастных средств (РКС) Практически нет ни одного органа и системы в организме человека, в диагностике заболеваний которых не применялись бы контрастные вещества

Самой многочисленной группой являются препараты для паренетераль-ных путей введения, главное место среди которых занимают йодсодержащие РКС

Кроме того, в настоящее время активно развиваются методики интервенционной радиологии, которые занимают достойное место в различных областях медицины, успешно конкурируя с традиционными хирургическими методами Такими областями, прежде всего, являются кардиохирургия и абдоминальная хирургия Этот процесс продолжает развиваться в сторону расширения спектра применения катетерной хирургии, которую невозможно представить без лучевого, прежде всего рентгенологического контроля с использованием РКС При хирургических заболеваниях брюшной полости уже многие годы с успехом используются эндоскопическая ретроградная папил-лосфинктеротомия, вирсунготомия, эндоскопическая ретро- и антеградная (чресфистульная) санация желчных путей при холедохолитиазе, баллонная дилатация и стентирование холедоха при стенозирующих процессах, чре-скожное чреспеченочное дренирование желчевыводящих путей, эндоскопическое наложение обходных билиодигестивных анастомозов при опухолевых поражениях и протяженных стриктурах общего желчного протока [Савельев В С , 1989, Авалиани М В , 1998, УатапоисЬ Е, 1998]

Таким образом, потребность медицины в РКС растет с каждым годом Осознавая эту значимость, исследователи продолжают разработку новых диагностических контрастных средств Основными направлениями этих работ являются совершенствование йодсодержащих препаратов, прежде всего группы неионных трийодсодержащих РКС, а также создание контрастных средств на основе других «тяжелых» элементов Периодической системы Общее количество созданных к настоящему времени РКС превысило тысячу Вместе с тем, побочные действия йодсодержащих рентгеноконтрастных средств наблюдаются у 5—8% больных, у 0,1% больных их применение сопровождается тяжелыми осложнениями Частота смертельных исходов составляет от 1 40 ООО до 1 50 ООО, по некоторым данным — 110 ООО [Сергеев П В , 2003]

Развитие полостной интервенционной рентгенохирургии в последние десятилетия предъявляет высокие требования к используемым РКС [Сергеев П В , Свиридов Н К , Шимановский Н Л , 1993]

— высокая контрастность должна сочетаться с фармакологической, физиологической инертностью, низкой токсичностью,

— способность равномерно тонким слоем адсорбироваться на поверхности слизистой органов и стенках полостных образований, не скапливаясь в' просветах малого диаметра и не вызывать их обструкцию,

— быстро выводиться из организма,

— иметь достаточно низкую стоимость

Использование масляных и водорастворимых йодсодержащих, а также барийсодержащих РКС не дает возможности полностью оценить просвет печеночного «дерева» и протоков других органов ввиду того, что равномерное четкое контрастирование с помощью упомянутых препаратов не всегда осуществимо по ряду причин

— механическое раздражение слизистых оболочек [Воль-Эпштейн Г J1, 1978],

— препараты сульфата бария, являясь высококонтрастными, медленно выделяются из протоков, их частицы склеиваются в просвете и вызывают обструкцию, вызывая холангиты, реактивные гепатиты и панкреатиты [Феофи-ловГЛ , 1971, Johnson Т, 1971]

В настоящее время широкое распространение получили водорастворимые йодсодержащие РКС, предназначенные для парентерального введения (урографин, тразограф, омнипак, ульравист и др ) Многие препараты данной группы используются также для внутриполостного введения При этом отмечаются те же побочные эффекты, что и при внутрисосуди-стом введении Это обусловлено способностью данных РКС всасываться в кровь в тонкой кишке при контрастировании-органов желудочно-кишечного тракта и гепатобилиарной системы Отмечено их токсическое действие на кровь, почки, печень, центральную нервную систему и особенно на щитовидную же-'

Рис 1 Структура нозологических форм побочных эффектов и лезу [Арчаков А И , осложнений при применении йодсодержащих РКС [Shehadi 1975, Рабкин ИХ, W.1975] 1977, Розенштраух

Л С, 1978, Свиридов

Таинота Рвота Крапивница Зудящая сыпь Бронхоспазм Отек Кеикке Втзалгия

Падение артериального давления Отек гортани Цир*улйциснныв КОЛЛАПС Неврологаеские нарушения Остановка сердце Фибркляция желудочков Отек легких

□ 33 66

"3 15 58'

□ 12 «7

"—13 19 1^261 32 30

041 10 29 027 0 19 0 16 0 08

Н К , 1979, Knoefel Р , 1974, Harvey L А , 1983] Побочные эффекты (ПЭ) и осложнения при использовании РКС разделяют по степени тяжести на легкие (2,1%), тяжелые (1,2%) и летальные (0,2% случаев) [Рабкин И X , 1977] Нозологические формы ПЭ представлены на рис 1 Предложенные различные пробы и тесты на индивидуальную переносимость РКС оказались клинически недостоверными Исследования показали, что положительная реакция на тест-пробу слабо коррелирует с аллергическими реакциями и поэтому ее ценность в прогнозировании летального исхода или тяжелых реакций на введение диагностической дозы РКС весьма проблематична ПЭ и осложнения развиваются у больных с отрицательными тест-пробами [Hildreth Е et al, 1960, Ansel G , 1970] Кроме того, при введении йодсодержащих РКС в про-токовую систему печени и поджелудочной железы достаточно часто развиваются холангиты, острые панкреатиты (вплоть до панкреонекроза)

Таким образом, причинами, заставляющими исследователей продолжать поиск новых РКВ, можно назвать следующие

1) токсические воздействие йодсодержащих РКС на систему крови [Сергеев П В , 1966,1997, Жукоцкий А В , 1992, Knoefel Р, 1974], печень [Сергеев П В , 1997, Winzer К, 1954, Pieracci Р, 1985], почки [Наполов Ю К , 2004, Harvey L А , 1983, Gomes A S , 1989, Nelson I Н , 1996, Morcos S К, 2001], поджелудочную железу [Loperfido S, 1998, Goebel С, 2000, Masci Е, 2001], центральную нервную систему [Свиридов НК, 1979], эндокринную систему (в особенности на щитовидную железу) [Розенштраух Л С 1978, Heitz С 1979, Morcos S К 2001],

2) местно-раздражающее действие РКС на слизистые оболочки, в том числе эпителий трахеобронхиального «дерева», печеночных и панкреатических протоков, эндотелий артериальных, венозных, лимфатических сосудов и сердца, мозговые оболочки [Розенштраух Л С, 1978, Сергеев ПС, 1991, Свиридов Н К , 2000, Harvey L А , 1983, Nelson I Н , 1996, Goebel С, 2000],

3) вызываемые ими различные виды аллергических реакций, в том числе и анафилактический шок [Шимановский Н Л 1988, Brasch RC 1980],

4) достаточно высокая стоимость предлагаемых фармацевтической промышленностью РКС в настоящее время, в то время как многие реитгенохи-рургические методики требуют достаточно большого количества вводимого контрастных препаратов, что значительно повышает себестоимость выполняемых оперативных вмешательств

Развитие данного раздела фармакологии осуществляется по нескольким основным направлениям

- совершенствование препаратов группы трийодсодержащих РКС, и особенно подгруппы неионных трийодсодержащих РКС [Амосов И С , 1985, Свиридов Н К,1997,2004],

- поиск новых «носителей» йодсодержащих РКС, обеспечивающих избирательное накопление РКС в органах (липосомы, мицеллы) [Сергеев П В , 1993, Seltzer S, 1988, Torchilin V, 2000],

- синтез РКС на основе других «тяжелых» элементов Периодической системы [Рабинович РМ, 1978, Мезенцев И А, 1980, Шафировский ББ, 1983, Сергеев П В , 1993, Winchell Н S , 1978],

- создание РКС со свойствами управляемого накопления в органах и системах организма (ферромагнитные РКС) [Цыб А Ф , 1981, Амосов И С , 1985],

- комбинирование РКС разных классов [Федоров Г JI, 1980],

- использования различных добавок, позволяющих уменьшить дозу комбинированного РКС (например, для биконтрастного исследования), улучшающих органолептические свойства (для энтеральнных РКС)

Основным направлением совершенствования РКС в настоящее время все же остается разработка новых йодсодержащих препаратов и улучшение ор-ганолептических свойств препаратов сульфата бария Заметным успехом стало создание неионных три йодсодержащих РКС, имеющих более низкую токсичность по сравнению ионными моно- и дийодсодержащими [Сергеев П В, 1993, Свиридов Н К , 2002]

Вместе с тем продолжается поиск средств, содержащих другие элементы периодической системы, обладающие высокой плотностью и низкой токсичностью для организма Большой интерес исследователи проявляют к группе редкоземельных элементов, в частности танталу, лантану, иттрию, ниобию, цирконию, гафнию [Сергеев ПС, 1993, Зуев МГ, 1997, 1999, Nadel J А , 1968, Wolf W, 1968, Gramger К, 1971] Из группы танталатов уже описано и доклинически оценено РКС — ортотанталат иттрия [Карташов В М, 1995, Куничан А Д , 1995, Можокина Г Н , 1995, Зия А В , 1995, Зуев М Г , 1997] Данный препарат показал высокие контрастные свойства при его сравнительной оценке in vitro с сульфатом бария, тразографом, урографином и in vitro при бронхографии порошкообразной формой препарата

Основной сложностью для использования водонерастворимых РКС является то, что водная суспензия этих препаратов представляет собой крайне неустойчивую систему время полного оседания взвеси составляет всего несколько минут даже при высокой дисперсности препарата Все это вызывает ряд сложностей, ограничивающих применение данной формы РКС

- техническая сложность хранения и непосредственного введение в организм РКС (препарат быстро оседает на стенках емкостей, практически сразу вызывает окклюзию просвета инъекционной иглы, мелких протоков),

- недостаточная рентгенодиагностическая ценность, обусловленная неполным заполнением РКС мелких полостных образований и невозможностью получения, тем самым, целостной рентгенологической картины печеночного «дерева», недостоверность диагностики окклюзионных процессов,

- высокий риск воспалительных и гнойно-септических осложнений хо-лангитов, гепатитов, панкреатитов, пакреонекрозов, холангиогенного сепсиса (при холангиографии)

Цель исследования: создать новое химическое соединение - ортотанталат лантана, в виде жидкой гелевой формы, специально адаптированной для контрастирования желчевыводящих путей и желудочно-кишечного тракта

Задачи. 1 Обосновать преимущества в рентгеноконтрастности химического соединения на основе «тяжелых» элементов III и V групп Периодической системы лантана и тантала в сравнении с йодсодержащими рентгено-контрастными веществами

2 Создать препарат на основе ортотанталата лантана в лекарственной форме, пригодной для внутриполостных рентгенологических исследований и рентгенохирургических вмешательств

3 Оценить острую и хроническую токсичность гелевой суспензии ортотанталата лантана

4 Отработать концентрации гелевой суспензии ортотанталата лантана, пригодные для рентгеноконтрастных исследований и вмешательств на органах желудочно-кишечного тракта и желчевыводящих путей, и сравнить его рентгеноконтрастные свойства с йодсодержащими и барийсодержащими препаратами

5 Провести сравнительную оценку токсического воздействия гелевой суспензии ортотанталата лантана на гелевой основе и урографина на слизистую оболочку желчевыводящих путей лабораторных животных

Научная новизна. В качестве нового отечественного рентгеноконтра-стного средства предложено соединение на основе элементов III и V групп Периодической системы Доказаны высокие рентгеноконтрастные свойства, безопасность для организма гелевой суспензии ортотанталата лантана (OTJI) в сравнении с йодсодержащими РКС и стандартной водной суспензией сульфата бария (СВССБ)

Впервые для анте- и ретроградной холецистохолангиографии (ХХГ) успешно применено водонерастворимое РКС - гелевая суспензия OTJI Созданный препарат обладает высокими рентгенодиагностическими свойствами при контрастировании желудочно-кишечного тракта (ЖКТ) и желчевыводящих путей (ЖВП) экспериментальных животных Особого внимания заслуживают факты отсутствия токсических свойств полученного препарата при ХХГ в отличие от традиционно используемых йодсодержащих РКС

Практическая значимость работы

Гелевая суспензия OTJI является новым препаратом класса твердотельных РКС Не обладает острой токсичностью, общей хронической токсичностью, местно-раздражающим, кожно-резорбтивным, сенсибилизирующим, мутагенным действием, отрицательным влиянием на функцию основных органов и систем организма

Гелевая суспензия ОТЛ по рентгенодиагностическим свойствам при ХХГ не уступает современным йодсодержащим РКС, но, в отличие от них, не обладает токсическим воздействием на слизистую оболочку ЖВП Это делает новый препарат перспективным и безопасным для использования в абдоминальной хирургии при эндоскопической ретроградной холангиопан-креатографии (ЭРХПГ), интраоперационной, чресфистульной ХХГ, методиках эндобилиарной интервенционной радиологии (ЭИР) Внедрение гелевой суспензии ОТЛ в клиническую практику при рентгенодиагностических и рентгенохирургических вмешательствах на желчных протоках позволит из-

бежать самих ПЭ и осложнений, связанных с токсическим действием самого РКС

Кроме того, новый препарат имеет низкую себестоимость Несомненным достоинством изучаемого РКС является отсутствие необходимости в профилактике и лечении ПЭ и осложнений, связанных с токсическим действием РКС Нет необходимости в использовании дополнительного рентгеновского и эндоскопического оборудования Рентгенография с использованием гелевой суспензии ОТЛ производится на стандартных физико-технических условиях

Положения, выносимые на защиту

1 Ортотанталата лантана представляет собой новое поколение твердотельных рентгеноконтрастных средств, эффективно поглощающих рентгеновское излучение Максимум рентгеноконтрастности препарата приходится на диапазон рентгеновского излучения, используемого в современной рент-генодиагностической медицинской аппаратуре

2 Гелевая суспензия ортотанталата лантана нетоксична, не обладает ме-стно-раздражающим действием, кожно-резорбтивным, сенсибилизирующим, мутагенным действием, не оказывает отрицательного действия на функциональное состояние основных органов и систем

3 Ортотанталат лантана в гелевой диагностической форме не уступает по рентгеноконтрастным свойствам йодсодержащим рентгеноконтрастным средствам, превосходит барийсодержащие препарата и имеет преимущества при контрастировании желчевыводящих путей

Апробация результатов исследования. Основные положения и результаты диссертации доложены и обсуждены на 60-ой научной конференции молодых ученых и студентов, Екатеринбург, 2005, научно-практической конференции, посвященной 75-летию медицинской службы и 10-летию госпиталя ГУВД Свердловской области, Екатеринбург, 2005, Всероссийском конкурсе молодых ученых, СПб, 2006, проблемной комиссии «Общая патология» Уральской государственной медицинской академии, 2007

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 7 статей

Внедрение в практику. По результатам исследований получен патент на изобретение (Ш 2261114 С1 от 27 09 05)

Объем и структура диссертации. Диссертационная работа изложена на 120 страницах компьютерного текста и состоит из введения, обзора литературы, главы материалов и методов исследования, четырех глав собственных исследований заключения, выводов, практических рекомендаций списка цитированной литературы, иллюстрирована 21 таблицами и 58 рисунками Библиографический список содержит 142 источника, из них 79 отечественных и 63 зарубежных

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Краткая характеристика экспериментальных животных

В процессе экспериментальных исследований препарата ОТЛ на гелевой основе) использовали теплокровных животных 4-х видов животных (белых беспородных мышей массой 18-22 г - 160 особей, мышей линии СВА

С57В1/6 массой 16-18 г - 40 особей, белых крыс подтипа линии Вистар массой 155-170 г - 440 особей, кроликов породы Шиншилла массой 2,5-3,3 кг -36 особей, беспородных собак массой 15-20 кг - 22 особи) обоего пола Теплокровные животные содержались при температуре 18-20°С в условиях естественного светового цикла на стандартном рационе вивария, при свободном доступе к воде и пище Все исследования проводили в соответствии с «Правилами проведения работ с использованием экспериментальных животных», утвержденных Приказом МЗ СССР №75 от 12 08 1977 г и Руководством по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ, Москва, 2000 г

Материалы и методы исследования

В качестве исходных компонентов для высокотемпературного синтеза ОТЛ использовали порошкообразные оксид тантала Та205 (марка ТаО-1 и ТаО-2) и оксид лантана Ьа203 (марки ЛаО-Д) Смесь обжигали в печи в алун-довых тиглях при температуре 1350-1400°С в течение 50 ч Синтез проводили согласно твердофазной реакции Ьа203 + Та205 = 2ЬаТа04

Полноту образования ОТЛ оценивали с помощью люминесцентного и рент-генофазозового анализа [Зуев М Г, 1997]

В качестве стабилизирующей гелевой основы использовали ксантано-вую кислоту и каррагенан Соотношение компонентов препарата следующее

Ортотанталат лантана 0,1+29,9

Природный полисахарид с кислотными функциональными группами

(ксантановая кислота и каррагетшн ) 0,4+1,0

Консервант О,13-0,40

Вода остальное

Препарат готовится следующим способом В емкость объемом 250 мл помещали воду из расчета 100 мае % -масс % сухого остатка 0,13 г (0,13 мае %), добавляли смесь метил- и про-пилпарабена (0,10 г метилпарабена и 0,03 г пропилпарабена) Полученную смесь нагревали до 50 °С при перемешивании до полного растворения компонентов Охлаждали до комнатной температуры Вводили 0,40 г (0,40 мае %) каррагенана и продолжали перемешивание в течение 1 часа Затем добавляли 0,01-0,30 г (0,10-0,30 мае %) порошкообразного ОТЛ (в зависимости от требуемой конечной концентрации ОТЛ в препарате) с диаметром частиц 7 мкм и перемешивали до образования однородной массы Однородность массы устанавливали методом центрифугирования пробы в количестве 5 г, когда в течение 5 минут толщина прозрачного слоя не превышает 5 мм

Острую токсичность ортотанталата лантана изучали в различных формах в виде надосадочной жидкости, водной взвеси ОТЛ и гелевой суспензии ОТЛ Полученные жидкости ОТЛ вводили каждой из 6-ти групп белых мышей (по 10 мышей обоего пола в каждой группе) по 1 мл внутрибрюшинно и по 1 мл в желудок через зонд, а 7-ой и 8-ой контрольным группам мышей

вводили дистиллированную воду в этих же объемах Белым крысам подтипа линии Vistar испытуемые жидкости вводили этими же путями в объеме 5 мл Состав и количество групп были аналогичными, что и в опыте с белыми мышами Наблюдения за поведением животных вели в течение первых суток каждый час, последующие 14 суток - каждые сутки После эвтаназии животных проводили макроскопическое изучение состояния внутренних органов Хроническую токсичность оценивали по следующим критериям

- общая токсичность,

- местно-раздражающее действие,

- кожно-резорбтивное действие,

- сенсибилизирующее действие,

- влияние на функцию сердечно-сосудистой системы, системы внешнего дыхания и центральной нервной системы,

- мутагенная активность

При планировании хронического эксперимента нами были определены дозы 1/100 и 1/10 от максимально вводимых объемов препаратов, использованных в остром эксперименте Эксперимент проводили на 200 крысах (по 2 группы на каждый препарат) Сначала использовали 1/100 этих доз 2-м группам вводили 50%-ую надосадочную жидкость OTJI, 2-м -25%-ую водную взвесь ОТЛ, 2-м - 25%-ую гелевую суспензию OTJ1 внутрижелудочно 2-м группам 50%-ую надосадочную жидкость вводили внутрибрюшинно Еще 2-м группам вводили дистиллированную воду Затем опыт повторили с 1/10 доз, использованных в «остром» эксперименте Жидкие формы ежедневно течение 180 суток крысам в дозах 12,5 г/кг и 1,25 г/кг, 0,6 г/кг и 0,06 г/кг, 0,6 г/кг и 0,06 г/кг соответственно каждому препарату Объем вводимого препарата составлял 0,05 мл и 0,5 мл (1/100 и 1/10 от объема, использованного в «остром» эксперименте) На протяжении всего эксперимента наблюдали за общим состоянием животных, потреблением корма и воды, состоянием шерстного покрова, массой тела

Оценку местно-раздражающего действия на слизистую глаз проводили на 4-х группах кроликов обоего пола (каждая группа состояла из 5-ти животных) Двум группам животных за веко правого глаза ежедневно вносили по две капли 50%-ой надосадочной жидкости ОТЛ, а следующим двум контрольным группам за веко левого глаза ежедневно закапывали по две капли дистиллированной воды Экспозиция эксперимента составила 180 сут Визуально оценивали состояние слизистых глаз кроликов, радужной оболочки, состояния передней камеры глаза, состояние капиллярного рисунка

В другом опыте изучали действие ОТЛ на слизистую полости рта Для этого было сформировано 8 групп кроликов (по 5 животных обоего пола в каждой группе) 2-м группам наносили на слизистую рта по 3 капли 50%-ой надосадочной жидкости ОТЛ, 2-м группам - по 3 капли 25%-ой взвеси ОТЛ, 2-м группам - по 3 капли 25%-й гелевой суспензии ОТЛ, 2-м группам - по 3 капли дистиллированной воды Препараты наносили ежедневно в течение 180 сут Визуально оценивали состояние слизистых оболочек ротовой полости в конце эксперимента

Кожно-резорбтивное действие OTJ1 исследовали на крысах обоего пола (8 групп по 10 животных в группе) Животных фиксировали в индивидуальных клетках, при этом их хвосты помещались в пробирки с испытуемыми жидкими формами OTJI на 5 часов У 2-х групп животных хвосты помещали в 50%-ую надосадочную жидкость ОТЛ, у 2-х - в 25%-ую водную взвесь ОТЛ, у 2-х - в 25%-ую гелевую суспензию ОТЛ, у 2-х - в дистиллированную воду Ежедневно оценивали их активность в «открытом поле» (горизонтальное передвижение, вертикальное перемещение, груминг, процесс обследования «нор») Длительность эксперимента составила 30 сут

С целью выявления сенсибилизирующих свойств у надосадочной жидкости, взвеси ОТЛ и гелевой суспензии ОТЛ были проведены эксперименты на 8-ти группах кроликов обоего пола (по 5 животных в группе) Препараты втирали 1 раз в день в течение 30-ти сут на выстриженный от шерсти участок правого бока животного площадью 4x4 см (2-м группам - 50%-ую надосадочную жидкость ОТЛ, 2-м - 25%-ую взвесь ОТЛ, 2-м - 25%-ую гелевую суспензию ОТЛ, 2-м - дистиллированную воду) На 7-ые, 14-ые, 21-ые и 28-ые сутки на подобный участок противоположной стороны втирали то же вещество с целью разрешения сенсибилизирующей пробы

Функциональное состояние сердечно-сосудистой системы, системы внешнего дыхания и центральной нервной системы белых крыс оценивали перед началом и по окончании 180-суточного «хронического» эксперимента Состояние сердечной деятельности оценивали с помощью кардиографа ЭК-1, внешнего дыхания - по частоте и глубине дыхательных движений, определяемых визуально Оценка влияния ОТЛ на функцию центральной нервной системы анализировали при использовании методики «открытое поле» ежемесячно

Определение мутагенной активности исследуемого соединения проводили с использованием теста Эймса по учет> количества колоний ревертан-тов обратных мутаций от ауксотрофности по гистидину к прототропности В качестве тесткультуры использовали Salmonella typhimunum Результаты эксперимента оценивали согласно методическим указаниям «Методы первичного выявления генетической активности загрязнителей среды с помощью бактериальных тест-систем», а анализ хромосомных повреждений в ме-тафазных клетках костного мозга млекопитающих - в соответствии с «Методическими рекомендациями по проверке мутагенных свойств новых лекарственных препаратов» [Бочков Н П , 1972] На каждый вид эксперимента брали по 40 мышей СВА С57В1/6, анализируя по 100 метафазных пластинок от каждого Отбор метафазных пластинок и анализ хромосомных аббераций соответствовали общепринятым методам Для анализа отбирали метафазы с хорошим разбросом хромосом Идентификацию аббераций проводили согласно существующим критериям [Бочков Н П , 1972] Отмечали одиночные и парные фрагменты, перестройки обменного типа Ахроматические пробелы не учитывали Критерием отличия фрагмента от пробела считали смещенное положение фрагмента относительно оси хроматиды

Изучение рентгеноконтрастных свойств ортотанталата лантана проводили на рентгеновском аппарате РУМ-20М In vitro оценивали контрастные свойства изучаемого препарата в сравнении с СВССБ и урографином Геле-вую суспензию ОТЛ готовили в концентрациях 0,25-30% Сравниваемые РКС помещали в стеклянные флаконы емкостью 10 мл

Кроме того, сравнительную оценку рентгеноконтрастных свойств геле-вой взвеси ОТЛ, проводили при компьютерной томографии (KT) На аппарате «Syntec-2000 I» (General Electric, USA) проведено аксиальная томография с шагом 5 мм толщиной среза 5 мм трубчатых емкостей с образцами РКС 76%-го урографина, 30%-го урографина, 10%-ой, 20%-ой, 30%-ой гелевой эмульсией ОТЛ и СВССБ

Эксперименты по оценке рентгеноконтрастных свойств при контрастировании ЖКТ проводили на 6 группах подтипа линии Vistar крыс обоего пола (по 10 животных в группе) 2-м группам с помощью металлического зонда вводили по 5 мл 25%-ой гелевой суспензии ОТЛ, 2-м - по 5 мл СВССБ, 2-м — по 5 мл 30%-го урографина Рентгенографию производили непосредственно после введения и через 1, 3, 6, 12, 24 часа Результат оценивали визуально

Для изучения реакции других тканей на изучаемое РКС 2-м группам белых крыс обоего пола (по 10 животных в каждой) в область правого бедра подкожно вводили по 1мл 25%-ой концентрации препарата Другим аналогичным группам внутрибрюшинно вводили по 3 мл гелевой взвеси ОТЛ такой же концентрации Рентгенографию проводили через 1, 3 и 7 суток

Изучение специфических свойств нового препарата при контрастировании печеночного «дерева» у собак проводили интраоперационно Эксперимент проводили на 22-х собаках (11 групп по 2 животных обоего пола в каждой) 3-м группам вводили исследуемое РКС в полость желчного пузыря (ЖП) через инъекционную иглу или резиновую дренажную трубку в концентрациях 10%, 20%, 30% в объеме 5-8 мл 3-м группам РКС вводили в тех же концентрациях после введения в полость ЖП конкрементов Ретроградное введение 30%-го РКС в ЖВП проводили у 4-х групп собак после дуоде-нотомии и катетеризациии большого дуоденального сосочка (БДС) с помощью канюли для ЭРХПГ ХХГ проводили с помощью рентгеновского аппарата "Арман - 1" сразу после введения РКС и через 1, 2, 3 и 6 часов Забор материала стенки ЖП для морфологического исследования осуществляли через 1 час после ретроградного введения РКС Две собаки составили контрольную группу

Биохимический состав сыворотки крови определяли в группе в 4-х группах собак после ретроградного введения 30%-ых гелевой эмульсии ОТЛ и урографина на 1-ые, 3-й и 7-ые сутки на полуавтоматическом анализаторе "Stat-Fax" фирмы "Awareness Technology Inc " (США)

Гистологические препараты фиксировали 10%-м раствором формальдегида Гистологическому изучению были подвергнуты печень, почки, селезенка, надпочечники, сердце, желудок, кишечник крыс, желчный пузырь собак Кусочки печени, надпочечников резали на замораживающем микротоме,

срезы окрашивали на жир Суданом черным В Остальные органы заливали парафином, срезы окрашивали гематоксилином и эозином

Расчеты и анализ цифровых данных выполнили с использованием набора специализированных программ и дополнительных макрокоманд из пакета MS Office ХР (Word, Excel), в операционной среде Windows ХР (Microsoft corp, USA< 2001) Для количественных показателей определяли среднюю величину, стандартное отклонение, стандартную ошибку среднего (М±т) Для выявления статистической значимости различий между переменными использовали критерий Стьюдента (t), непарамегрические критерии Круска-ла-Уоллиса, Манна-Уитни для сравнения двух независимых выборок Достоверными считались различия показателей при р<0,05 (уровень значимости а = 5%)

Результаты собственных исследований и их обсуждение

Полученное соединение — OTJT (LaTa04) представляет собой белый порошок без цвета и запаха, не растворим в воде и спирте, обладает высокой химической стойкостью к кислотам (HCl, HN03, H2S04, Н3 Р04, НСЮ4) и щелочам (NaOH) Плотность р1ПМ= 7,9 г/см3, температура плавления Та1 = 1930°С, теплопроводность \2о°с = 12,72 кДж/мольхград Полнота образования ОТЛ в ходе высокотемпературного синтеза, оцениваемая с помощью люминесцентного и рент-генофазозового анализа, составляла 72-97%

Возможность Та-Ьа-опосредованной рентгенографии основывается на физических свойствах этих элементов Ослабление прохождения Х-лучей через ткани также зависит от энергии фотонов Х-лучей, отрывающихся от к-энергетического уровня атомов Оба эти элемента имеют по два электрона с соответствующей энергией фотонов 67,4 кэВ и 39 кэВ, против 33 кэВ у йода

Экспериментально показано, что пик в диагностическом спектре рентгеновского излучения приходится на величину 72±6 кэВ [O'Hare N J, 1992] Поэтому считают, что контрастность изображения лучше с препаратами элементов-лантаноидов, чем йода При значениях ниже максимума этого киловольтажного пика, йод будет обеспечивать контрастность изображения лучше, чем лантаноиды Поглощение OTJI рентгеновского излучения во всем практически используемом диапазоне энергии квантов обеспечивается тем, что в состав данного соединения входят одновременно два эффективных поглотителя, К-скачки которых лежат в разных участках указанно-

ц™,

см 2

Рис 2 Зависимость массового коэффициента ослабления рентгеновского излучения танталатом лантана от энергии квантов Символами Ьа и Та указаны скачки поглощения, соответствующие лантану и танталу Пунктиром обозначены границы пика диагностического спектра рентгеновского излучения

го диапазона Это демонстрирует рис 2, где по оси абсцисс отложены значения энергии квантов (Е), а по оси ординат - значения массового коэффициента ослабления рентгеновского излучения Излучения от напряжения (U) на рентгеновской трубке с вольфрамовым анодом Было выявлено, что при U>50 кВ и алюминиевом фильтре-фантоме толщиной 22 мм ОТЛ сильнее ослаблял рентгеновское излучение (несмотря на меньшую поверхностную плотность), чем металлический тантал и сульфат бария (рис 3) Нами проведена сравнительная оценка контрастности LaTa04, металлического Та и СБ in vitro У порошков металлического Та (поверхностная плотность 3,04

моль/см2), СБ (поверхностная плотность 2,36 моль/см2), ОТЛ (поверхностная плотность 1,44 моль/см2) изучалась зависимость ослабления (а) излучения от напряжения (U) на рентгеновской трубке с вольфрамовым анодом Было выявлено, что при U>50 кВ и алюминиевом фильтре-фантоме толщиной 22 мм, ортотанталат лантана сильнее ослаблял рентгеновское излучение (несмотря на меньшую поверхностную плотность), чем металлический тантал и сульфат бария (см рис 3)

Токсичность и безопасность жидких форм ОТЛ

Исследование токсичности любого вещества принято начинать с острого опыта, в результате проведения которого предусматривается получение данных о смертельных дозах и концентрациях В их диапазоне основным показателем токсичности вещества является наиболее статистически точная величина, 50%-ая смертность животных (LD50) В нашем исследовании при максимальных используемых внутрижелудочно дозах и концентрациях летальных случаев у лабораторных животных не было Также не удалось выявить признаки как острой, так и хронической токсичности Кроме того, у животных сохранялись хороший аппетит, нормальный уровень массы тела, ориентировочно-исследовательская реакция, блестящий шерстный покров

После вскрытия и макроскопических обследований грубых морфологических изменений органов не обнаружено Однако после внутрибрюшинного введения гелевой взвеси ОТЛ в тушках мышей и крыс обнаруживается ее осумкование в нижних этажах брюшной полости без признаков воспаления

" 0,35

§- 0,30

к 0,25 £

| 0,20 >-

| 015 0)

I 0 10

0

1 0 05

-танталат лантана

- тантал

- сульфат бария

40

60 80 100 Напряжение на трубке U кВ

120

Рис 3 Зависимость от напряжения на трубке (и, кВ) ослаб тения рентгеновского излучения (а/рпОВ, см2/моль) в пленках, содержащих разчичные порошкообразные РКВ (здесь а-(1о-1)/1<> 1о интенсивность падающего на пленку излучения, прошедшего через пленку, поверхностная плотность (Рпчв) пленки 1-аТа04 равна 1,44 моль/см2, Ва504 - 2,36 моть/см2, Та - 3,04 моль/см2)

Рентгенокоптрастные свойства жидких форм ОТЛ

Параллельно с изучением токсичности ОТЛ ira гелевой основе проводили исследование его контрактных Свойств in vitro и in vivo. Препараты вводили внугрижелудочно, внутри брюшин но, подкожно и в просвет ЖВП.

Исследование контрастных свойств ОТЛ in vitro проводили в сравнении с СВСС'Б и урографнном. Использовали 0,25; 0,5; 1; 3; 5; 10; 15; 20; 25; 30%-ые концентрации гелевой суспензий ОТЛ, СВССБ и М)%-ый урографип i как наиболее часто применяемая концентрация для фистулографии и ЭРХПП.

Рис.4 Рентгспоконтрастные свойства 20%- Рис.5. Рентгеноконтрастные свойства 20%-ои, 25%-ой гелевой суспензии ОТЛ в срав- ой, 25%-ой гелевой суспензии ОТЛ в сравнении дистиллированной водой и 30%-м нении дистиллированной водой и стан-урографином дартиой водной суспензией сульфата оария

Более высокие концентрации исследуемого Рк'С не брали из-за высокой вязкости состава, делающие невозможным практическое использование препарата, Оценку полученных рентгенограмм производили визуально.

На сериях сравнительных рентгенограмм показано, что гелевая суспензия ОТЛ р, концентрациях 20% и 25% йо интенсивности даваемогй затемнения соответствует 30%-ой концентрации урографйна и превосходит СВССБ (рис.4, 5), При этих Концентрациях ОТЛ сохранялись достаточные вязкость и текучесть.

Данные рештсноконтрастной плотности при компьютерной томографии (КТ) образцов гелевой взвеси ОТЛ, урографйна и СВССБ приведены в таб. 1

Таблица 1

Сравнительная рентгеноконтрастная плотность гелевой взвеси ОТЛ с урографнном и стандартной водной суспензией сульфата бария при КТ_

Виды РК( и их концентрации e-s о X If г"1 № te S i !ЧЯ a ,5 so« W К = « = Ч* й % ё 1 S 3 s о я w тс a S ci « s P s 1 H ь. 2 H s 2 я- n — I И*

с- >> О У и S t 1

yWti,

tDllunsflkl +48864325 +2764± 561 +4323± 577 +3997+1У 2 +2233±241 +2778±184

Примечание; 16 - достоверное отличие от группы показателей плотности стандартной водной взвеси сульфата бария, у'° - достоверное отличие от группы показателей плотно сти 30%-го урографйна.

Рис.6. Контрастирование пищевода, желудка, ДПК крысы: 30%-ая геле вой суспензией ОТЛ (А), стандартной водной взвесью сульфата бария (Б) и 30%-ым уро графи ном (В).

Для сравнительной оценки in vivo рентгеново! гграстных свойств гелсвой суспензий ОТЛ со СВССБ и 30%-урог рафшшм применяли концентрации исследуемого РКС 5, IÍ), 15, 20, 25, 30%. Рентгенографию осуществляли непосредственно после введения препаратов в желудок крысам и через 3, 6, 12, 24 и 48 часов. Результат оценивали визуально: при использовании гелсвой суспензии ОТЛ в концентрациях 20, 25 и 30 % на рентгенограммах были получены четкие контурн пищевода, желудка, тонкой кишки. Рентгеновское изображение контрастйро ванных 30%-ой гелсвой суспензией ОТЛ органов по интенсивности, контрастности, четкости соответствовало изображению при использовании 30%-урографнна и превосходит таковое при применении СВССБ (рис.6). При этом полное выведение ОТЛ из регистрировали через 24-48 часов в зависимости от концентрации. При внутри брюшинном введении на 7-ые сутки весь контраст локализуется в нижнем этаже брюшной полости и малом тазу. Данные факты свидетельствуют, что изучаемый препарат при парентеральном введении в организм (кроме внутрисосудистого) не всасывается в кровь.

Одной из главных целей проведения доклинических Испытаний гелевой суспензии ОТЛ является изучение его Способности контрастировать желче-выводящие пути и оценить состояние полостной системы печеночного «дерева» при интраоперациопиой ХХГ. На полученных рентгенограммах отчетливо выполнились полость желчного пузыря, пузырный проток, внутри- и внепеченочные желчные ходы, частично просвет двенадцатиперстной кишки. Отсроченные рентгенограммы производились через 1,2,3 и 6 часов. Отмечено, что полная эвакуация контраста из ЖВП при 10%-ой концентрации наступала через I час, при 20%-ой - через 3 часа, а при 30%-ой через 6 часов,

что обусловлена повышенной вязкостью высоких концентраций гслевой суспензии.

Ни втором этапе исследований па собаках нами была смоделирована ситуация с наличием конкрементов в желчном пузыре. Для этого после лапаро-томии и выделения желчного пузыря было проведено рассечение его стенки длиной не более 1 см в области дна. В полость желчного пузыря помещали три желчных камня диаметром 5, 7 и ¡0 мм. Через дренаж в полость желчного пузыря вводили препарат ОТ Л в концентрациях 10; 20 н 50%. После введения рентген ^контрастно го средства проводили рентгенографию. При этом отмечено следующее. При концентрации гелевой суспензии ОТЛ 10% на полученных отчетливо видны все три конкремента, но несколько снижены интенсивность и контрастность изображения печеночных протоков (рис.7), На рентгенограммах при концентрации гелевой суспензии ОТЛ 20% четко видны конкременты диаметром 7 и 10 мм и четко видны печеночные протоки (рис.&), При введении 30%-ой концентрации на рентгенограммах конкременты не визуализируются, но четко видны вне- и внутрипеченочные протоки.

А Б

Рис.7. Интраоперационная холецистохолэнгиограмма собаки !0%-ой геленой суспензией ОТЛ, В просвете желчного пузыря определяются три конкремента (обозначены стрелками) (А). То же с 4-х-кратным увеличением (Б).

Рис.8. Интраоперационная холецистохОлангиограмма у собаки 20%-ой ге левой суспензией ОТЛ (А). В просеете желчного пузыря определяются два конкремента (обозначены стрелками). То же с 4-х-кратным увеличением (Б).

8 третьей части экспериментальных исследований на ЖВП собак рент-геноконтрастное вещество вводили в желчные протоки ретроградно. Первой группе из 4 животных вводили 30%-ую гедеиую суспензию, второй группе, также состоящей из 4 собак - 30%-ый урографин, ! !а всех полученных рентгенограммах отчетливо определяются вне- и внутрипеченочные протоки и полость желчной) пузыря. После 1 -часовой экспозиции контрастного вещества в полостной системе 1 час производили резекцию участка стенки ЖГ] размером 5х5 мм в области дна. Полученный материал опытных и двух контрольных животных подвергли гистологическому исследованию.

При гистологическом исследовании препаратов первой группы отмечено следующее (рис.9, 10). Цилиндрический эпителий сохранен па коем протяжении, В собственной пластике соединительной ткани - полнокровие капилляров и венул, умеренная инфильтрация лимфоцитами. Мышечная и субсерозная оболочки представлена гладкомышечнОй тканью без патологических особенностей. Во второй группе отмечено отсутствий па большом протяжении эпителиальной выстилки, начиная с собственной пластики слизистой оболочки до дистальной части мышечной оболочки кровоизлияния, в некоторых случаях с крупноочаговым некрозом, лейкоцитарная инфильтрация. В мышечной оболочке спазм и отек.

Биохимические показатели сыворотки крови регистрировали у описанных выше группах через I, 3 и 7 суток после проведения им инграопераци-онной холеристохолангиографии 30%-ой селевой взвесью ОТЛ Статистически достоверных отклонений данных показателей крови мы не выявили.

Рис.9 Желчный пузырь собаки после в ведения 30%-рй гелевой суспенчии ОТЛ: эпителий слизистой оболочки сохранен, в собственном пластинке умеренное полнокровие, лимфоидный фолликул. Окраска гематоксилином и ЭОЗИНОМ. У в. х 100.

В результате произведенных исследований нами установлено^ что синтезированное вещество - гелевая суспензия ортотанталата лантана является нетоксичным по отношению к организму животных, не вызывает характерных для йодсодержащих РКС побочных эффектов. Имеет выраженную способность поглощать рентгеновские лучи и давать полноценное рентгенологическое изображение при контрастировании полых органов подопытных животных. Быстро выводится из желудочно-кишечного тракта, не вызывая дискомфорта у животных. В отличие от йодсодержащего РКС урографина не оказывает местно-раздражающее действие на слизистую оболочку желчного пузыря, не обладает спастическим эффектом на гладкую мускулатуры ЖВП.

ЖВ1 Г. Не требует дополнительного медицинского оборудования для проведения диагностических методик с использованием РКС.

Для рентгеноскопии желудка крыс оптимальной концентрацией ОТЛ является 25% и 30%. При использовании ОТЛ п качестве рентген о контрастного вещества для рентгенографии желчевыводящих путей у собак определяется высокая разрешающая способность методики в определении состояния печеночного «дерева», желчного пузыря, в диагностике внутри полостных образований протоков и пузыря. Отмечается достаточная легкость выполнения диагностических методик с использованием ретроградного контрастирования. При этом установлено, что для холецистографии оптимальна концентрация гелевой суспензии ОТЛ 10%, для холецистохолангиог рафии целесообразно использование 20%-ой концентрации, для холангиографин - 30%-ой концентрации.

Это свидетельствует о перспективности использования ортотанталата лантана в гелевой основе в качестве рентгеноконтраегного средства для контрастирования полых органов, прежде всего ЖВП при ЭРХПГ, интраопера-ционной, чресфиетульной ХХГ и ЭИР,

Рис.10. Желчный пупырь собакн после введения урографина: обширные эрозии и язВы слизистой оболочки, кровоизлияния и й и ражен пая лейкопнтлрная инфильтрация собственной пластинки слизистой. Окраска гематоксилином и эозином. Ув. х 100.

Выводы

1 Экспериментально доказано преимущество по рентгеноконтраст-ным свойствам ортотанталата лантана над йодсодержащими рентгено-контрастными соединениями

2 Разработан метод получения гелевой формы ортотанталата лантана

3 В условиях экспериментальных исследований при однократном и длительном применении с использованием различных путей введения установлено отсутствие токсического действия гелевой суспензии ортотанталата лантана на организм лабораторных животных

4 Оптимальными являются концентрации гелевой суспензии ортотанталата лантана в интервале 20-30% При сравнительной оценке препарата доказана высокая его рентгеноконтрастность, не уступающая уро-графину в концентрациях, используемых при рентгено-эндоскопических вмешательствах на желчевыводящих путях, и стандартной водной суспензии сульфата бария

5 Гелевая суспензия ортотанталат лантана в отличие от урографи-на не оказывает отрицательного воздействия на слизистую оболочку желчевыводящих путей экспериментальных животных

Практические рекомендации

Синтезированное соединение - ортотанталат лантана изучено в эксперименте в виде гелевой суспензии, после проведения клинических испытаний может быть рекомендовано для использования при эндоскопической ретроградной холангиопакреатографии, интраоперационной, чресфистулыюй холецистохолангиографии, в эндобилиарной интервенционной радиологии Оптимальная концентрация препарата, при которой четко определяются внутриполостные образования (конкременты) желчного пузыря и желчных протоков, составляет 20% Для холецистографии целесообразней использовать 10%-ую концентрацию гелевой суспензии ортотанталата лантана, при которой наиболее четко визуализируются образования в полости желчного пузыря Для изучения состояния внутри-печеночных протоков при холангиографии лучше использовать 30%-ую концентрацию препарата Специального эндоскопического и рентгеновского оборудования не требуется Рентгенография производится на стандартных физико-технических условиях Обработка рентгенографических пленок также осуществляется по стандартной технологии

Список работ, опубликованных по теме диссертации 1 Стрекалов И М Сравнительная характеристика танталовых рентгено-контрастных средств /ИМ Стрекалов, В А Козлов, Л П Ларионов //Сборник «Актуальные вопросы современной медицинской науки и здравоохранения» Материалы 60-ой научной конференции молодых ученых и студентов -Екатеринбург, 2005 - С 321-328

2 Стрекалов И М Экспериментальное обоснование использования танталовых рентгеноконтрастных средств в диагностике /ИМ Стрекалов, В А Козлов, Л П Ларионов // Сборник «Специализированная медицинская по-

мощь» Тезисы к научно-практической конференции, посвященной 75-летию медицинской службы и 10-летию госпиталя ГУВД Свердловской области.-Екатеринбург, 2005,- С.12-14.

3 Стрекапов, И М Пути улучшения качества интраоперационной холе-цистохолангиографии /ИМ Стрекалов, В А Козлов, Л П Ларионов, Н Л Кернесюк // Сборник работ научно-практической конференции «Ратнеров-ские чтения» - Самара, 2005 - С 71-73

4 Стрекалов И М Экспериментальная оценка танталовых рентгенокон-трастных свойств ортотанталата лантана и перспективы его использования в качестве диагностического рентгеноконтрастного средства / ИМ. Стрекалов, В А Козлов, Л П Ларионов, Н Л Кернесюк, М Г Зуев // Сборник тез Всероссийского конкурса молодых ученых - СПб, 2006 - С.121-124

5 Стрекалов И М Экспериментальная оценка танталовых рентгенокон-трастных средств /ИМ Стрекалов, В А Козлов, Л П Ларионов, Н Л Кернесюк, М Г Зуев // Монография в сборнике «Новые материалы для медицины». -УрОРАН - Екатеринбург, 2006 -С 24-40.

6 Стрекалов И М. Перспективы использования нейодистых рентгено-контрастных стредств для холецистохолангиографии / ИМ. Стрекалов, Л П Ларионов, М Г Зуев, Н Б Крохина // Вестн рентгенол и радиол - 2007 -№4 - С.52-57

7 Стрекалов И М Новое диагностическое рентгеноконтрастное средство на основе ортотанталата лантана /ИМ Стрекалов, В А Козлов, Л П Ларионов, Н Л Кернесюк, Н Б. Крохина // Вестник уральской медицинской академической науки - 2007 - №2 - С 32-37

8 Патент на изобретение 1Ш 2 261 114 С1-Бюл №27 - С 297

СТРЕКАЛОВ Илья Михайлович

НОВОЕ РЕНТГЕНОКОНТРАСТНОЕ СРЕДСТВО -ОРТОТАНТАЛАТ ЛАНТАНА И ВОЗМОЖНОСТИ ЕГО ПРИМЕНЕНИЯ В АБДОМИНАЛЬНОЙ

ХИРУРГИИ (ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ)

14 00 25 - фармакология, клиническая фармакология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Челябинск -2007

Подписано в печать 18,о4 2007 Формат 60х841/16 П л 1 ,о Тираж 100 Заказ 4Ю6

Отеч.нано в цехе оперативной полиграфии ОАО «Полиграфист» 620151 I Ек.неринбург ул Тур1енеил 22