Автореферат и диссертация по медицине (14.01.12) на тему:Новая диагностическая панель для выявления наследственной предрасположенности к развитию рака молочной железы и рака яичников

На правах рукописи

Батенева Елена Ильинична

Новая диагностическая панель для выявления наследственной предрасположенности к развитию рака молочной железы и рака яичников

14.01.12 - онкология

Автореферат

13 МАЙ 2015

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

005568887

Москва-2015

005568887

Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном научном учреждении «Российский онкологический научный центр имени H.H. Блохина»

Директор

академик РАН, профессор

Давыдов Михаил Иванович

Научные руководители

доктор медицинских наук доктор биологических наук

Любченко Людмила Николаевна Трофимов Дмитрий Юрьевич

Официальные оппоненты Боженко Владимир Константинович

Зикиряходжаев Азиз Дильшодович

Ведущая организация

доктор медицинских наук, профессор ФГБУ «РНЦРР» Минздрава России, руководитель отдела молекулярной биологии и экспериментальной терапии опухолей

доктор медицинских наук, профессор МНИОИ им. П.А. Герцена - филиала ФГБУ «ФМИЦ им. П.А. Герцена» Минздрава России, заведующий отделением онкологии, реконструктивно-пластической хирургии молочной железы и кожи

Федеральное государственное бюджетное учреждение «Медико-генетический научный центр» РАМН

■ часов на заседании

Защита диссертации состоится с&Зл^'/^? 2015 г. в ч

диссертационного совета Д001.017.01 в Федеральном государственном бюджетном научном учреждении «Российский онкологический научный центр имени Н.Н.Блохина» по адресу: 115478, Москва, Каширское шоссе, 23.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГБНУ «РОНЦ им. Н.Н.Блохина» по адресу: 115478, Москва, Каширское шоссе, 24 и на сайте www.ronc.ru Автореферат разослан 2015 г.

Ученый секретарь диссертационного совета /)

д.м.н., профессор " "

Шишкин Юрий Владимирович

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы

Рак молочной железы (РМЖ) и рак яичников (РЯ) представляют собой важную социально-медицинскую проблему в связи с высокой заболеваемостью и смертностью среди женского населения. В целях снижения заболеваемости и смертности от РМЖ и РЯ необходимо внедрение в клиническую практику инновационных высокотехнологичных методов ранней, в том числе доклинической, диагностики заболеваний.

Генетическая предрасположенность является одним из основных факторов риска развития РМЖ и РЯ: от 5 до 10% случаев РМЖ (Newman В. 1988, Имянигов E.H. 2010), от 10 до 17% случаев РЯ (Любченко JI.H. 2009, Lalwani N. 2011) являются наследственными.

По данным многочисленных исследований, 30-50% наследственных форм РМЖ (Ferla R. 2007, Wooster R. 2003) и 90-95% - РЯ у женщин (Lalwani N. 2011, Narod S.A. 2004) обусловлены мутациями в генах BRCA1 и BRCA2 (синдром наследственного РМЖ/РЯ). Гены BRCA1 и BRCA2 крайне важны для поддержания геномной стабильности: кодируемые ими белки играют ключевую роль в репарации двухцепочечных разрывов ДНК путём гомологичной рекомбинации (Narod S.A. 2004). Наследственные формы РМЖ и РЯ также могут быть обусловлены гетерозиготными мутациями в других генах, вовлеченных в репарацию ДНК: СНЕК2, NBN, BLM, PALB2, ATM, BRIPJ, RAD50. Эти мутации редко встречаются в популяции и характеризуются средней пенетрантностью (Meijers-Heijboer H. 2002, Cybulski С. 2007, RippergerT. 2009, BogdanovaN. 2011, Часовникова О.Б. 2012, Sokolenko А.Р. 2012, Prokofyeva D. 2013).

В попуняционной генетике описан эффект основателя (founder effect) - преобладание нескольких мутаций, специфичных для определённой этнической группы или географического региона. Этот эффект находит отражение в спектре мутаций в генах наследственной предрасположенности к РМЖ и РЯ (BRCA1, BRCA2, СНЕК2, NBN, BLM и других) во многих популяциях, в том числе в российской (Ferla R. 2007, Любченко Л.Н. 2009). Существование эффекта основателя делает возможным создание соответствующих скрининговых программ и значительно упрощает генетическое тестирование.

При проведении полногеномных ассоциативных исследований (GWAS) было

идентифицировано множество однонуклеотидных полиморфизмов (SNP) в различных генах и

хромосомных локусах, связанных с повышенным риском развития РМЖ и РЯ. Они обладают

низкой пенетрантностью, но предполагается, что кумулятивный эффект при носительстве

нескольких аллелей риска может быть достаточно выраженным. К однонуклеотидным

полиморфизмам, ассоциированным с повышенным риском развития рака молочной железы,

относятся, например, rs2981582 в гене FGFR2, rs3817198 в гене LSP1, rs889312 в локусе 5qll,

3

rsl3281615 в локусе 8q24, rsl3387042 в локусе 2q35, rs3803662 в локусе 16ql2 (Easton D.F. 2007, Stacey S.N. 2007, Boyarskikh U.A. 2009, Peng S. 2011, LuP.H. 2011); рака яичников -rs3814113 в локусе 9p22, rs2072590 в локусе 2q31 (Song H. 2009, Goode E.L. 2010).

Работ, посвящённых определению ассоциаций однонуклеотидных полиморфизмов и среднепентрантных мутаций в других (не BRCA1 и не BRCA2) генах с риском развития РМЖ и/или РЯ, в России проведено немного, хотя подобные исследования представляют несомненный научно-практический интерес. Дополнение существующих панелей новыми молекулярно-генетическими маркёрами расширит возможности выявления наследственной предрасположенности к раку молочной железы и раку яичников и позволит проводить мероприятия, направленные на их профилактику и раннюю диагностику в группах генетического риска.

Цель работы

Повысить эффективность выявления наследственной предрасположенности к развитию рака молочной железы и рака яичников с помощью диагностической панели, включающей клинически значимые молекулярно-генетические маркеры.

Задачи работы

1. Сформировать коллекции образцов крови и библиотеку ДНК больных раком молочной железы и/или раком яичников и здоровых женщин-доноров первичной кроводачи (контрольная группа).

2. Разработать реагенты для генотипирования известных мутаций в генах BRCA1 (185delAG, 4153delA, 5382insC, 3819delGTAAA, 3875delGTCT, 300TXJ (C61G), 2080delA, 2963dell0), BRCA2 (6174delT, 1528delAAAA, 9318delAAAA), CHEK2 (1100delC, IVS2+1G>A, И57Т), NBN (657deIACAAA (657deI5)), BLM (1642C>T (QS48X)), однонуклеотидных полиморфизмов rs2981582 в гене FGFR2, rs3817198 в гене LSP1, rs889312 в локусе Sqll, rsl3281615 в локусе 8q24, rsl3387042 в локусе 2q35, rs3803662 в локусе 16ql2, rs3814113 в локусе 9р22, rs2072590 в локусе 2q31 методом ПЦР в режиме реального времени.

3. С помощью разработанных реагентов определить частоты выбранных мутаций/однонуклеотидных полиморфизмов в российской популяции у больных раком молочной железы и/или раком яичников и в контрольной группе; используя статистические методы, выявить наличие или отсутствие ассоциаций выбранных мутаций/однонуклеотидных полиморфизмов с развитием РМЖ и/или РЯ.

4. Определить оптимальный состав диагностической панели наиболее распространенных в российской популяции мутаций в генах BRCAI/2 для проведения молекулярно-генетического скрининга в различных группах больных РМЖ и/или РЯ и здоровых лиц.

5. Обосновать целесообразность включения в диагностическую панель других молекулярно-генетических маркёров (мутаций в генах СНЕК2, ИВЫ, ВЬМ, полиморфных аллельных вариантов в различных генах и хромосомных локусах).

6. Сформулировать алгоритм проведения молекулярно-генетической диагностики для выявления наследственной предрасположенности к развитию РМЖ и РЯ с учётом характерных для РФ особенностей.

Научная новизна

Впервые разработана и апробирована панель из 24 молекулярно-генетических маркёров для выявления наследственной предрасположенности к развитию рака молочной железы и рака яичников методом ПЦР в режиме реального времени с помощью определения температуры плавления примыкающих олигонуклеотидных зондов, основанная на отечественной технологической базе.

Впервые получены комплексные данные о частотах мутаций в генах ВЯСА1 (185(1е1АО, 4153(1е1А, 53821шС, 3819скЮТААА, 3875<1еЮТСТ, 300Т>С (С6Ш), 208(ША, 2963с1е110), ВЯСА2 (6174ск1Т, 1528ае1АААА, 9318delAAAA), СНЕК2 (110(Ме1С, 1У32+Ю>А, П57Т), МЫ (657(1е1АСААА (657del5))) ВЬМ (1642С>Т (Q548X)), полиморфных аллельных вариантов в генах (гз2981582), Ь$Р1 (^3817198), хромосомных локусах 5ц11 (гб889312), 8q24

(Г513281615), 2ц35 (Г513387042), 16ql2 (ге3803662), 9р22 (г53814113), 2Ч31 (г$2072590) в больших выборках больных РМЖ и/или РЯ и здоровых женщин в российской популяции.

Впервые в России показаны высокая частота встречаемости мутации ГУ52+Ш>А в гене СНЕК2 в группах больных РМЖ и больных РЯ и её статистически достоверная ассоциация с высоким риском развития рака молочной железы.

Впервые в России показана ассоциация однонуклеотидного полиморфизма гб13281615 в локусе 8д24 с риском развития рака молочной железы.

Практическая значимость

Выполненная работа является прикладным исследованием, результаты которого имеют

важное значение для клинической онкологии и генетики.

Созданная в ходе работы диагностическая панель для определения распространённых в

российской популяции мутаций в генах ВЫСА1 и ВНСА2 зарегистрирована в МЗ РФ и внедрена

в клиническую практику ФГБНУ «РОНЦ им. Н.Н.Блохина», ФГБУ «РНЦРР» Минздрава РФ и

других специализированных научных и клинических центров РФ, а также ряда

диагностических лабораторий. Получено регистрационное удостоверение №ФСР 2010/08415 от

22 июля 2010 г. на набор реагентов для определения генетических полиморфизмов,

ассоциированных с риском развития онкопатологии, методом полимеразной цепной реакции

(ОнкоГенетика) по ТУ 9398-030-46482062-2011 производства ООО «Научно-производственное

5

объединение ДНК-Технология». Разработанный набор реагентов «ОнкоГенетика» может бьгть рекомендован для включения в национальные скрининговые программы по выявлению наследственной предрасположенности к РМЖ и РЯ с дальнейшей индивидуализацией профилактики, диагностики и лечения этих онкологических заболеваний.

Издано пособие для врачей «Медико-генетическое консультирование и ДНК-диагностика при наследственной предрасположенности к раку молочной железы и раку яичников», содержащее рекомендации по проведению МГК и молекулярно-генетического тестирования, ведению пациентов из групп высокого генетического риска (особенностях профилактики, ранней диагностики и лечения РМЖ и РЯ).

Основные положения, выносимые на защиту

1. Разработана панель из 24 молекулярно-генетических маркеров для выявления наследственной предрасположенности к развитию рака молочной железы и рака яичников методом полимеразной цепной реакции в режиме реального времени с анализом кривых плавления, основанная на отечественной технологической базе.

2. Определен состав диагностической панели наиболее распространённых в российской популяции мутаций в генах ВКСЛ1 и ВЯСА2: 5382тзС, 300Т>С, 4153(1е1А, 2080с1е1А, 185с]е1АО, 3819с1еЮТААА, 3875с1еЮТСТ в гене ВЯСА1 и6174с1е1Т в гене ВКСА2.

3. Впервые показана ассоциация мутации 1УБ2+Ш>А в гене СНЕК2 с высоким риском развития рака молочной железы в российской популяции (отношение шансов (ОИ)=11,22).

4. Рак молочной железы у. носителей мутаций в гене СНЕК2 в сравнении с носителями мутаций в гене ВКСА1 характеризуется более поздним возрастом манифестации (50,1±12,4 года и 41,5±8,5 года, соответственно), меньшей частотой опухолей высокой степени злокачественности (18,4% и 55,3%, соответственно), более высокой частотой РЭ-позитивных (83,7% и 29,8%, соответственно), РП-позитивных (64,3% и 25,5%, соответственно) и НЕЯ2/пеи-позитивных (40,0% и 11,9%, соответственно) опухолей (р<0,05). В группе больных РМЖ с мутациями в гене СНЕК2 в сравнении с группой больных без мутаций достоверно хуже общая 12-летняя выживаемость (60,0% и 97,8%, соответственно, р<0,05).

5. Показаны ассоциации следующих однонуклеотвдных полиморфизмов с риском развития рака молочной железы: ге3803662 в локусе 16ц12, гз2981582 в гене гэ13387042 в локусе 2д35 (максимальные риски в этой группе молекулярно-генетических маркеров: 011=1,30, 011=1,25 и 011=1,19, соответственно), ге13281615 в локусе 8я24, ге889312 в локусе 5д11. Для полиморфизма гз 13281615 в локусе &ц24 ассоциация с риском развития рака молочной железы в российской популяции показана впервые.

6. Оптимизирован алгоритм проведения молекулярно-генетической диагностики для выявления наследственной предрасположенности к развитию рака молочной железы и рака яичников, первым этапом которой является скрининговое исследование с помощью разработанной диагностической панели.

Апробация работы

Диссертация апробирована и рекомендована к защите 25 ноября 2014 г. на совместной научной конференции лаборатории клинической онкогенетики, отделения клинической фармакологии и химиотерапии, научно-консультативного отделения, отделения опухолей молочных желбз, отделения реконструктивной и пластической онкологии, гинекологического отделения НИИ КО, лаборатории регуляции клеточных и вирусных онкогенов НИИ канцерогенеза ФГБНУ «РОНЦ им. H.H. Блохина», кафедры онкологии Первого МГМУ им. И.М. Сеченова.

Материалы диссертационной работы были представлены и обсуждены на следующих российских и международных конгрессах, научно-практических конференциях и съездах:

XV—XV11I Российских Онкологических Конгрессах (Москва, 2011-2014), Седьмой Российской Конференции по Фундаментальной Онкологии «Петровские чтения» (Санкт-Петербург, 2011), 26th European Immunogenetics & Histocompatibilty Conference (Liverpool, 2012), Конференции с международным участием «Современная стратегия лечения ранних стадий рака молочной железы» (Москва, 2013), European Human Genetics Conference 2014 (Milan, 2014), VIII Съезде онкологов и радиологов стран СНГ (Казань, 2014), IV конференции «Общества специалистов онкологов по опухолям репродуктивной системы» (Москва, 2014).

Публикации

По теме диссертации опубликованы 14 печатных работ, в том числе: 6 статей в научной печати, из них 4 в научных изданиях, рекомендованных ВАК РФ для публикации материалов докторских и кандидатских диссертаций, 1 пособие для врачей, 7 публикаций в материалах отечественных и международных конференций и конгрессов.

Объём и структура диссертации Диссертация изложена на 126 страницах машинописного текста, содержит 23 таблицы, 8 рисунков. Диссертация состоит из следующих глав: «Введение», «Обзор литературы», «Материалы и методы», «Результаты и обсуждение», «Выводы», «Список литературы». Библиография включает 183 источника.

Личный вклад автора Все использованные в работе данные получены при непосредственном участии автора: на этапах постановки цели и задач, сбора клинического материала, разработки реагентов для

генотипирования, проведения молекулярно-генетической диагностики, обработки, анализа и обобщения полученных результатов, написания и оформления рукописи.

Соответствие диссертации паспорту научной специальности

Научные положения диссертации соответствуют паспорту специальности 14.01.12 -онкология, конкретно пункту 3.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Формирование коллекций образцов крови

В исследование были включены больные и здоровые женщины, идентифицирующие себя как русские и постоянно проживающие на территории РФ. Сбор материала был проведен на базе клинических подразделений ФГБНУ «РОНЦ им. H.H. Блохина» (больные РМЖ и/или РЯ) и в отделении трансфузиологии ФГБНУ «РНЦХ им. акад. Б.В. Петровского» (доноры первичной кроводачи) в 2010—2014 гг. Перед взятием материала у больных РМЖ/РЯ и доноров первичной кроводачи было получено информированное добровольное согласие на проведение исследования.

Сформированы коллекции образцов цельной периферической крови групп больных РМЖ и/или РЯ, контрольной группы здоровых женщин-доноров первичной кроводачи, характеристики групп приведены в табл. 1. В качестве дополнительной контрольной группы в некоторых случаях использовали смешанную по полу группу доноров первичной кроводачи (1197 человек, из них 591 женщина и 606 мужчин).

Таблица 1. Характеристика групп больных РМЖ/РЯ и контрольной группы

Возраст Критерии отбора

Группа п Средний Медиана Диагноз (и/или) Другие (и/или)

Неотобранная группа больных РМЖ 963 49,6± 11,5 49,0 РМЖ Нет

Неотобранная группа больных РЯ 202 52,5±12,0 52,0 РЯ Нет

Отобранная группа больных РМЖ и РЯ 306 41,6±10,2 40,5 РМЖ РЯ Отягощенный' семейный анамнез ПМЗН2 Возраст < 50 лет

Контрольная группа 591 36,5±12,4 37,0 Здорова Нет

Всего 2062

'как минимум один родственник первой степени родства с РМЖ и/или РЯ; 2в том числе сочетание РМЖ и РЯ, двусторонний РМЖ, сочетание РМЖ/РЯ с другими ЗНО.

Выделение геномной ДНК

Выделение геномной ДНК из образцов цельной периферической крови проводили с помощью сорбентной методики («ПРОБА-ГС-ГЕНЕТИКА», ДНК-Технология, Россия).

Дизайн и синтез олигонуклеотидов При разработке олигонуклеотидов использовали базы данных нуклеотидных последовательностей GenBank, dbSNP (сервер NCBI, http://www.ncbi.nlm. nih.gov) и программное обеспечение Oligo 6.0. Синтез праймеров и олигонуклеотидных флуоресцентно-меченых зондов для ПЦР в режиме реального времени проводили на синтезаторах ДНК ASM-102, ASM-800 и ASM-2000 (Биоссет, Россия). Использовали коммерчески доступные (отечественные) флуорофоры (FAM, HEX, Су5) и гаситель флуоресценции (BHQ1). Олигонуклеотиды очищали методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (Phenomenex, США). Чистоту полученных олигонуклеотидов контролировали масс-спектрометрическим методом на приборе Microflex™ LT (Bruker Daltonik GmbH, Германия).

Генотипирование проводили модифицированным методом примыкающих проб (adjacent/kissing probes), используя оригинальные олигонуклеотиды. Метод основан на определении температуры плавления флуоресцентно-меченых олигонуклеотидых зондов, которая напрямую зависит от наличия/отсутствия нуклеотидных замен в матрице ДНК в области гибридизации зондов.

С помощью данной технологии было создано 24 системы для типирования мутаций и однонуклеотидных полиморфизмов в различных генах и хромосомных локусах: BRCA1 (185delAG, 4153delA, 5382insC, 3819deIGTAAA, 3875deIGTCT, 300T>G, 2080deIA, 2963dell0), BRCA2 (6174delT, 1528delAAAA, 9318delAAAA), CHEK2 (UOOdelC, IVS2+1G>A, I157T), NBN (657delACAAA), BLM(Q548X), полиморфных аллельных вариантов в генах FGFR2 (rs2981582), LSP1 (rs3817198), хромосомных локусах 5qll (rs889312), 8q24 (rsl3281615), 2q35 (rsl3387042), 16ql2 (rs3803662), 9p22 (rs3814113), 2q31 (rs2072590).

ПЦР в режиме реального времени Для постановки ПЦР в режиме реального времени использовали реагенты «НПФ ДНК-Технология», в том числе Taq-AT-ДНК-полимеразу, позволяющую осуществить реализацию «горячего старта» без применения парафина. Полимеразную цепную реакцию и определение температур плавления олигонуклеотидных проб проводили с помощью детектирующего амплификатора «ДТпрайм» (НПО ДНК-Технология, Россия).

После внесения в параметры анализа температур плавления олигонуклеотидных зондов генотипирование выполняется автоматически (модуль «Анализ полиморфизмов, плавление») (рис. 1).

-f- Lk!.-J { «'62.6 С' b05_Y Щ MajK« f H P««WWi4№P*BP9 ЯК*»«]

Настройки Помсщ "^j ГЪэтскоп j^":,^""" ;

плавче v ^ т У Ш Ш ! El Ф

dF/dT - !**♦: „ Hf.

Ф P^atTnii_PCB : - ■ . : ruisaflewji BK

Рисунок 1. Анализ кривых плавления и определение генетических полиморфизмов в программном обеспечении к прибору «ДТпрайм».

Дополнительный контроль результатов ПЦР в режиме реального времени осуществляли методом электрофореза в 2% агарозном геле.

Секвеннрование ДНК по Сэнгеру Результаты генотипирования подтверждали путем секвенирования продуктов амплификации по Сэнгеру (Sanger F. 1977) на автоматическом капиллярном секвенаторе ДНК «ABI PRISM 3100» (Applied Biosystems, США).

Создание контрольных образцов При разработке наборов реагентов были клонированы все аллельные варианты для использования в качестве положительных контрольных образцов (Евроген, Россия).

Статистическая обработка результатов Оценку соответствия выявленных в контрольной группе частот генотипов закону Харди-Вайнберга проводили по критерию %2-квадрат в сравнении с ожидаемыми частотами генотипов равновесного распределения (Quo S. 1992).

Статистическую ошибку распределения частот аллелей вычисляли по формуле:

л, = sqrt(p(l -p)/2N) (I)

где p - частота аллеля, N—число индивидов в группе.

Для сравнения частот аллелей в группах больных и контрольной группе применяли анализ таблиц сопряжённости с использованием двустороннего точного критерия Фишера. Различие групп полагали статистически значимым при р<0,05.

Отношение шансов (OR - odds ratio) рассчитывали по формуле:

OR = (с\А)/(пс\Л) / (с\В)/(пс\В) (2)

где с - число аллелей А1, пс- число аллелей А2, А - группа больных, В - контрольная группа.

Для оценки выживаемости больных РМЖ и больных РЯ в зависимости от наличия мутаций использовали интервальный метод построения таблиц дожития "Life-table" по Каплану-Мейеру, рекомендованный для применения Международным противораковым союзом (UICC). Срок прослеженности оценивался на момент 01.01.2015. Для сравнения таблиц выживаемости использовали тесты Cox's F-test и Wilcoxon. Достоверность различия в определенный момент времени рассчитывали по критерию Стьюдента. Достоверными считали различия с вероятностью не менее 95%, т.е. р<0,05.

Обработку полученных результатов проводили в программном пакете StatSoft Statistica 7.0.

РЕЗУЛЬТАТЫ II ОБСУЖДЕНИЕ Оптимальный состав диагностической панели мутаций в генах BRCA1/2 для первичного генетического скрининга больных РМЖ и/или РЯ

Для определения оптимального состава диагностической панели мутаций в генах BRCA1 и BRCA2 был проведён молекулярно-генетическин скрининг в неотобранных группах больных РМЖ (963 человека) и больных РЯ (202 человека). Мутации в генах BRCAI и BRCA2 были обнаружены у 58 больных раком молочной железы (6,0%) и 46 больных раком яичников (22,8%), см. табл. 2 и рис. 2.

Проанализированы частоты и спектр мутаций в генах BRCA1 и BRCA2 у больных РМЖ и/или РЯ в РФ, критерием включения в диагностическую панель служило выявление мутации как минимум в трех независимых исследованиях. В состав диагностической панели вошли восемь наиболее распространённых в российской популяции мутаций: 5382insC, 300T>G, 4153delA, 2080delA, 185delAG, 3819delGTAAA, 3875delGTCT в гене BRCAI и 6174delT в гене BRCA2.

Таблица 2. Частоты мутаций в генах ВКСЛ1 и ВКСА2 в неотобранных группах больных раком молочной железы и больных раком яичников

РМЖ (n=963) РЯ (п=202)

Ген Мутация Принадлежность Число Частота в Число Частота в

(номенклатура скрининговой носите- выборке носите- выборке

BIC) панели лей (%) лей (%)

BRCA1 5382insC + 42 4,4 27 13,4

BRCA1 4153delA + 7 0,7 5 2,5

BRCA1 300T>G + 2 0,2 4 2,0

BRCA1 2080delA + 2 0,2 5 2,5

BRCA1 185delAG + 1 0,1 2 1,0

BRCA1 3819delGTAAA + 1 0,1 0 0

BRCA1 3875delGTCT + 1 0,1 0 0

BRCA2 6174delT + 2 0,2 3 1,5

BRCA1 2963dell0 - 0 0 0 0

BRCA2 1528delAAAA - 0 0 0 0

BRCA2 9318delAAAA - 0 0 0 0

Всего 58 6,0 46 22,8

Получено регистрационное удостоверение: №ФСР 2010/08415 от 22 июля 2010 г. на набор реагентов для определения генетических полиморфизмов, ассоциированных с риском развития онкопатологии, методом полимеразной цепной реакции (ОнкоГенетика) по ТУ 9398-03046482062-2011 производства ООО «Научно-производственного объединения ДНК-Технология».

Показания к проведению молекулярно-генетического тестирования с целью выявления мутаций в генах BRCA1/2

Высокая частота мутаций в генах BRCA1 и BRCA2 в неотобранной группе больных РЯ -22,8% - в сочетании с особенностями распределения больных РЯ по возрасту: у 32,6% пациенток РЯ диагностирован в возрасте 51 года и старше, обусловливают целесообразность проведения генетического скрининга всем больным раком яичников (Suspitsin E.N. 2009, Walsh Т. 2011).

Частота выявления мутаций в генах BRCA1 и BRCA2 в неотобранной группе больных РМЖ (6,0%) предполагает применение дополнительных критериев отбора больных для проведения молекулярно-генетического тестирования.

При анализе различных критериев отбора больных РМЖ из неотобранной группы показано, что наиболее эффективным вариантом выборочного тестирования явилось бы использование любого из следующих клинико-анамнестических признаков или их сочетания:

1. Онкологически отягощенный семейный анамнез (наличие в семье двух и более случаев РМЖ, РЯ или других ЗНО независимо от степени родства и возраста их развития):

2. Двусторонний РМЖ, сочетание РМЖ и ЗНО другой локализации;

3. Возраст манифестации РМЖ до 50 лет включительно.

5382тэС

1,7% 1,7% (А) у больных раком молочной железы

5382ш$С

5ж

жI

- - ^^ ...;. .

185с1е1АС 4,3%

(Б) у больных раком яичников Рисунок 2. Спектр обнаруженных мутаций в генах ВЯСА1 и ВЯСА2 у больных РМЖ (А) и у больных РЯ (Б) (неотобранные группы). При исследовании отобранной группы больных РМЖ и РЯ была оценена значимость этих признаков. Наиболее значимыми в отношении обнаружения мутаций в гене ВИСА1 критериями отбора больных в нашем исследовании были:

1. у пробанда: а) рак яичников, в том числе в сочетании с РМЖ,

б) двусторонний и второй первичный РМЖ,

2. РМЖ или РЯ у родственника первой степени родства.

13

Как дополнительный критерий отбора для генетического тестирования также используется рецепгорный статус опухоли: показано, что около 68,5% ВЛСЛ./-ассоциированных опухолей молочной железы являются трижды негативными (РЭ-, РП-, HER2/neu-) (Mavaddat N. 2011). В нашем исследовании рецепгорный стапус опухоли был определён в общей сложности у 840 больных РМЖ. Из них у 53 больных были обнаружены мутации в гене BRCA1, при этом у 31 пациентки - 58,5% - опухоли являлись трижды негативными. Доля носителей мутаций в гене BRCA1 среди пациенток с трижды негативными опухолями молочной железы была высока и составила в среднем 30,4%. Также мутации в гене BRCA1 чаще встречаются при редкой морфологической форме РМЖ - медуллярном раке (Da Silva L. 2010, Mavaddat N. 2011). В неотобранной группе больных РМЖ в нашем исследовании медуллярный рак был диагностирован всего у 9 пациенток, из них 3 являлись носительницами мутаций в гене BRCA1.

Таким образом, с учётом результатов нашего исследования и анализа мировых данных определены следующие показания к проведению молекулярно-генетического тестирования с целью выявления мутаций в генах BRCA1 и BRCA2:

1. Рак яичников, рак фаллопиевых труб, первичный перитонеальный рак в любом возрасте;

2. ПМЗН, в том числе двусторонний РМЖ, сочетание РМЖ и РЯ;

3. Онкологически отягощённый семейный анамнез (наличие в семье двух и более случаев

РМЖ, РЯ);

4. РМЖ в возрасте до 50 лет включительно;

5. Медуллярный РМЖ;

6. Трижды негативный (РЭ-, РП-, HER2/neu-) рецепгорный статус опухоли МЖ.

Кроме того, показаниями являются РМЖ у мужчин (в личном и/или семейном анамнезе), этническая принадлежность (ашкеназские евреи).

Для более полного выявления наследственных форм РМЖ и РЯ проведение генетического скрининга с использованием диагностической панели, включающей наиболее распространённые мутации в генах BRCAI и BRCA2, оправдано для всех больных РМЖ и РЯ, учитывая доступность этого исследования.

Мутации со средней пенетрантностью в генах СНЕК2, NBN, BLM-частоты встречаемости в группах больных РМЖ/РЯ и у здоровых женщин

Частоты встречаемости среднепенетрантных маркёров наследственной предрасположенности к раку молочной железы и раку яичников в группах больных и здоровых женщин представлены в табл. 3. Частота мутаций (за исключением более распространённой мутации I157T в гене СНЕК2) составила 0,21—1,00% в группах больных РМЖ и/или РЯ и 0— 0,34% в группе здоровых женщин-доноров первичной кроводачи.

Таблица 3. Частоты среднепенетрантных маркёров наследственной предрасположенности к РМЖ и РЯ в группах больных и здоровых

Неотобранная Неотобранная Отобранная

группа группа группа

Ген Мутация больных РМЖ больных РЯ больных РМЖ

(п=963) (п=202) и РЯ (п=306)

% абс. % абс. % абс. % абс.

СНЕК2 1100(1е1С 0,21 2 0,50 1 0,65 2 0 0

1У82+Щ>А 0,93* 9 1,00 2 0,98* 3 0 0

1157Т 5,71 55 4,95 10 8,17 25 6,60 39

ЫВЫ 657<1е15 0,93 9 0,50 1 0,98 3 0,34 2

ВЬМ 0548Х 0,21 2 1,00 2 0,98 3 0,34 2

Всего' 2,28 22 2,97 6 3,59 11 0,68 4

*достоверные различия с контрольной группой (р<0,05); 'за исключением мутации 1157Т в гене СНЕК2.

Суммарная частота редких мутаций (1100(1е1С и 1У32+Ш>А в гене СНЕК2, 657(1е1АСААА в гене NBN, ()548Х в гене ВЬМ) составила 2,28% в неотобранной группе больных РМЖ (22/963) и 2,97% - в неотобранной группе больных РЯ (6/202). В отличие от мутаций в генах ВИСА1 и ВЫСА2, которые намного чаще встречаются у больных РЯ, чем у больных РМЖ (22,8% 6,0% в неотобранных группах в нашем исследовании), распространённость мутаций в генах СНЕК2, Л'ВЛ' и ВЬМ в данной работе была сопоставима у больных РМЖ и больных РЯ.

Впервые в России показана высокая частота встречаемости мутации 1У32+Ю>А в гене СНЕК2 в группах больных РМЖ и РЯ, её ассоциация с риском развития рака молочной железы статистически достоверна (011=11,22; 95% С1, 9,16-13,29; р=0,007).

Частоты встречаемости мутаций 1100с1е1С, 1У52+Ю>А, 1157Т в гене СНЕК2, 657с1е]АСААА в гене NBN, (3548Х в гене ВЬМ в российской популяции обусловливают целесообразность дальнейшего изучения их роли в развитии РМЖ и РЯ в масштабных мультицентровых исследованиях.

Частота двойной гетерозиготности составила 1,91% (5/262) среди носителей мутаций в генах ВВ.СА1, ВЯСА2, СНЕК2, ВЬМ и 0,34% (5/1471) в общей группе больных РМЖ и/или РЯ. Выявление молекулярно-генетических маркёров со средней пенетрантностью следует проводить одномоментно с анализом генов В КС АI и ВЛСА2, учитывая возможность сочетания мутаций в разных генах предрасположенности к РМЖ и РЯ.

Контрольная группа (п=591)

Клинико-морфологические характеристики опухолей молочной железы и яичников в зависимости от наличия мутаций

Средний возраст манифестации PWAC в неотобранной группе у носителей мутаций в гене BRCAI составил 41,5±8,5 года, у носителей мутаций в гене СНЕК2 - 50,1±12,4 года, у больных без мутаций, входящих в состав диагностической панели, - 50,3±11,4 года. Доля женщин с мутациями в гене BRCA1, заболевших в возрасте до 40 лет, была достоверно выше, чем среди больных с мутациями в гене СНЕК2 и в группе без мутаций (44,4%, 18,4% и 18,8%, соответственно, р<0,01), а доля женщин, заболевших в возрасте >51 года-ниже (16,7%, 42,9% и 47,9%, соответственно, р<0,01).

В группе больных РМЖ с мутациями в гене BRCA1 по сравнению с группой больных с мутациями в гене СНЕК2 и группой больных без мутаций была достоверно ниже частота опухолей in situ (3,8%, 19,3% и 20,5%, соответственно, р<0,05) и выше частота опухолей высокой степени злокачественности (55,3%, 18,4% и 21,3%, соответственно, р<0,01).

Во всех группах больных РМЖ преобладал инвазивный рак неспецифического типа, однако у больных с мутациями в гене BRCA1 частота его была достоверно выше по сравнению с группой больных без мутаций (90,6% и 75,4%, соответственно, р<0,05), инвазивный дольковый рак в этой группе встречался реже (1,9% и 16,7%, соответственно, р<0,01). У носителей мутаций в гене СНЕК2 в 85,2% случаев диагностирован инвазивный рак неспецифического типа, в 13,0% случаев - инвазивный дольковый РМЖ. Частота редкого морфологического типа - медуллярного рака молочной железы - достоверно выше у больных с мутациями в гене BRCAI (5,7% и 0,7% в группе без мутаций, р<0,05).

Рак молочной железы у носителей мутаций в гене BRCA1 в сравнении с носителями мутаций в гене СНЕК2 и группой больных без мутаций характеризуется более низкой частотой РЭ-позитивных (29,8%, 83,7% и 75,5%, соответственно), РП-позитивных (25,5%, 64,3% и 65,5%, соответственно) и НЕЯ2/пеи-позитивных (11,9%, 40,0% и 28,9%, соответственно) опухолей (р<0,05). Трижды негативный рецепторный статус опухоли МЖ достоверно чаще отмечен в неотобранной группе больных с мутациями в гене BRCA1 в сравнении с носителями мутаций в гене СНЕК2 и группой больных без мутаций (61,5%, 2,4% и 11,6%, соответственно, р<0,001).

Показано, что носительство мутаций в гене СНЕК2 у больных РМЖ является негативным прогностическим критерием, несмотря на формально благоприятный фенотип опухолей (de Bock G.H. 2004, Angelova S.G. 2012, Kriege M. 2014). В нашем исследовании в группе больных РМЖ с мутациями в гене СНЕК2 достоверно хуже общая 12-летняя выживаемость в сравнении с группой больных без мутаций (60,0% и 97,8%, соответственно, р<0,05, рис. 3).

Cumulative Proportion Surviving (Kaplan-Meier) ° Complete + Censored

1,05 1,00 0,95

x

I 0,90

x

I 0,85

m

= 0,80

0

S 0,75

1 0,70

H

к

I 0,65

Í 0,60 0,55 0,50 0,45

0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 24 _

Годы

— Больные без мутаций, входящих в состав диагностической панели (п=55) .... Носители мутаций в гене BRCA1 (п=53) ..... Носители мутаций в гене СНЕК2 (п=55)

Рисунок 3. Общая выживаемость больных РМЖ в зависимости от наличия мутаций.

Средний возраст манифестации рака яичников у носителей мутаций в гене BRCA1 составил 47,5±8,6 года, у носителей мутаций в гене СНЕК2 — 53,3±14,6 года, у больных без мутаций - 54,2±12,3 года. Доля женщин с мутациями в гене BRCA1, заболевших в возрасте 41— 50 лет, была достоверно выше, чем среди больных без мутаций (48,8% и 21,3%, соответственно, р<0,001), а доля женщин, заболевших в возрасте >51 года — ниже (30,2% и 64,5%, соответственно, р<0,001). Доля носителей мутаций в генах BRCA1 и СНЕК2, у которых РЯ был диагностирован в возрасте >51 года, была высока - 30,2% и 58,3%, соответственно, что не позволяет ограничивать молекулярно-генетическое тестирование этими возрастными рамками.

Преобладающий морфологический тип во всех группах больных РЯ - серозная аденокарцинома (86,8—96,4%). Различия в общей выживаемости больных РЯ в зависимости от наличия мутаций не показаны.

Выявление характерных клинико-морфологических признаков опухолей молочной железы и яичников, ассоциированных с мутациями в генах СНЕК2, NBN и BLM, требует дальнейшего изучения.

Однонуклеотидные полиморфизмы в различных генах и хромосомных локусах -частоты встречаемости и ассоциации с риском развития РМЖ и РЯ

Частоты встречаемости однонуклеотидных полиморфизмов у больных РМЖ в сравнении с контрольной группой приведены на рис. 4. Распределение частот генотипов для всех однонуклеотидных полиморфизмов в контрольной группе соответствовало закону Харди-Вайнберга, подтверждена их независимость (/=0,003—0,045).

rs2981582 TS3817198 rsl3387042 rsSS9312 1S13281615 IS3803662 и неотобранная группа больных РМЖ ■ отобранная группа больных РМЖ

□ контрольная группа

Рисунок 4. Частоты однонуклеотидных полиморфизмов в группах больных РМЖ и контрольной группе ("достоверные различия с контрольной группой (р<0,05)).

При сравнении частот в неотобранной группе больных РМЖ и контрольной группе достоверные различия выявлены для однонуклеотидных полиморфизмов:

1. rs29S 1582 в гене FGFR2 (OR=l,25; 95% CI, 1,10—1,40; р=0,003);

2. rs 13387042 в локусе 2q35 (OR=l,19; 95% CI, 1,04—1,34; р=0,020);

3. rs3803662 в локусе 16ql2 (OR=1,30; 95% CI, 1,14—1,45; p=0,001).

Таким образом, эти полиморфизмы являются наиболее значимыми и перспективными для включения в диагностическую панель для уточнения генетического риска развития РМЖ, в том числе у носителей мутаций в генах BRCA1 (rsl3387042, rs3803662) и BRCA2 (rs2981582, rsl3387042, rs3803662) (Antoniou A.C. 2008, 2009). Для всех изученных полиморфизмов показана тенденция к более сильным ассоциациям с РЭ-позитивными опухолями молочной железы, для большинства (за исключением rs2981582 в гене FGFR2) - с РП-позитивными опухолями молочной железы.

При сравнении частот в отобранной группе больных РМЖ и контрольной группе достоверные различия выявлены для однонуклеотидных полиморфизмов:

1. rs3803662 в локусе 16ql2 (OR=l,38; 95% CI, 1,17—1,59; р=0,003);

2. rsl3281615 в локусе 8q24 (OR=l,24; 95% CI, 1,03—1,44; p=0,040)-впервые;

3. rs889312 в локусе 5qll (OR=l,25; 95% CI, 1,03—1,46; p=0,049).

В неотобранной группе больных РМЖ частота минорного аллеля (Т) была достоверно выше, чем в отобранной (р=0,036). Доля женщин в возрасте > 55 лет составила 33,2% и 12,5% в неотобранной и отобранной группе больных РМЖ, соответственно. Показаны ассоциации однонуклеотидных полиморфизмов во втором интроне гена FGFR2 с риском развития «спорадического» РМЖ у женщин постменопаузального возраста (Hunter D.J. 2007).

Частота минорного аллеля однонуклеотидного полиморфизма rs2072590 в локусе 2q31 составила 0,38±0,02 и 0,35±0,01; rs3814113 в локусе 9р22 - 0,39±0,02 и 0,40±0,01 в неотобранной группе больных РЯ и контрольной группе, соответственно. Различия недостоверны, требуются расширенные исследования для уточнения ассоциированных рисков.

Алгоритм проведения молекулярно-генетической диагностики для выявления наследственной предрасположенности к развитию РМЖ и РЯ

Молекулярно-генетическая диагностика для выявления наследственной предрасположенности к развитию РМЖ и РЯ осуществляется в рамках МГК. Проводится отбор пациентов согласно приведённым выше критериям (учитываются личный и семейный онкологический анамнез, клинико-морфологические признаки опухолей). Перед выполнением генетического тестирования должно быть получено информированное добровольное согласие пациента (ст. 20, ФЗ № 323 «Об основах охраны здоровья граждан в Российской Федерации» от 21.11.2011г.). После получения результатов молекулярно-генетической диагностики обсуждаются альтернативные варианты наблюдения, лечения и профилактики, оценивается прогноз здоровья потомства, предлагается обследование родственников I степени родства.

Схематично алгоритм проведения молекулярно-генетической диагностики для выявления наследственной предрасположенности к РМЖ и/или РЯ, рекомендуемый в настоящее время, представлен на рис. 5. В российской популяции, учитывая выраженный эффект основателя, обоснованным с медицинской и экономической точек зрения является использование диагностических панелей, включающих распространённые мутации в ассоциированных с развитием РМЖ и РЯ генах. Разработанные и апробированные в ходе нашего исследования диагностические панели (набор реагентов «ОнкоГенетика» (восемь мутаций в генах BRCA1 и BRCA2) и реагенты для определения популяционно-специфических мутаций в генах СНЕК2, NBM, BLM) могут успешно применяться на первом этапе молекулярно-генетического тестирования.

Учитывая технологичность и относительно невысокую стоимость данного исследования, оправданным является его использование в широких группах больных и здоровых лиц.

Определение низкопенетрантных генетических маркёров на сегодняшний день в клинической практике не используется, хотя перспективность оценки полигенного риска уже показана (Sawyer S. 2012).

Рисунок 5. Алгоритм проведения молекулярно-генетической диагностики для выявления наследственной предрасположенности к РМЖ и РЯ ("перспективный этап).

В будущем, вероятно, будут разработаны комплексные модели определения индивидуального риска, учитывающие семейный анамнез, средовые факторы, образ жизни и доступную генетическую информацию. Такой подход позволит персонализировать профилактические, диагностические и лечебные мероприятия и, как результат, снизить смертность от рака молочной железы и рака яичников.

20

выводы

1. Определён состав диагностической панели наиболее распространённых в российской популяции мутаций в генах BRCA1 и BRCA2: 5382insC, 300T>G, 4153delA, 2080deIA, 185delAG, 3819delGTAAA, 387SdelGTCT в гене BRCA1 и 6174delT в гене BRCA2.

2. Впервые показана ассоциация мутации IVS2+1G>A в гене СНЕК2 с высоким риском развития рака молочной железы (отношение шансов (OR) = 11,22) в российской популяции.

3. Частоты встречаемости мутаций llOOdelC, IVS2+1G>A, I157T в гене СНЕК2, 657delACAAA в гене NBN, Q548X в гене BLM в российской популяции обусловливают целесообразность дальнейшего изучения их роли в развитии рака молочной железы и рака яичников в масштабных мультицентровых исследованиях.

4. Рекомендовано одномоментное выявление молекулярно-генетических маркёров в различных генах предрасположенности к раку молочной железы и раку яичников в связи с вероятностью двойной гетерозиготности.

5. Рак молочной железы у носителей мутаций в гене СНЕК2 в сравнении с носителями мутаций в гене BRCA1 характеризуется более поздним возрастом манифестации (50,1±12,4 года и 41,5±8,5 года, соответственно), меньшей частотой опухолей высокой степени злокачественности (18,4% и 55,3%, соответственно), более высокой частотой РЭ-позитивных (83,7% и 29,8%, соответственно), РП-позитивных (64,3% и 25,5%, соответственно) и ШЖ2/пеи-позитивных (40,0% и 11,9%, соответственно) опухолей (р<0,05). В группе больных РМЖ с мутациями в гене СНЕК2 в сравнении с группой больных без мутаций достоверно хуже общая 12-летняя выживаемость (60,0% и 97,8%, соответственно, р<0,05).

6. Показаны ассоциации следующих однонуклеотидных полиморфизмов с риском развития рака молочной железы: rs3803662 в локусе 16ql2, rs2981582 в гене FGFR2, rsl3387042 в локусе 2q35 (максимальные риски в этой группе молекулярно-генетических маркёров: OR=1,30, OR=l,25 и OR=l,19, соответственно), rsl3281615 в локусе 8q24, rs889312 в локусе Sqll. Для полиморфизма rsl3281615 в локусе 8q24 ассоциация с риском развития рака молочной железы в российской популяции показана впервые.

7. Оптимизирован алгоритм проведения молекулярно-генетической диагностики для выявления наследственной предрасположенности к развитию рака молочной железы и рака яичников: первым этапом является скрининговое исследование с помощью разработанной диагностической панели.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

Статьи в журналах, рекомендованных ВАК РФ

1. Батенева, Е.И. Частота одиннадцати мутаций генов BRCAI и BRCA2 в неотобранной выборке больных раком молочной железы россиянок / Батенева Е.И., Мещеряков A.A., Любченко Л.Н., Кадочникова В.В., Панищева Л.А., Трофимов Д.Ю., РебриковД.В. // Уральский Медицинский Журнал.-2011.-Т. 3,№81.-С. 69-73.

2. Батенева, Е.И. Обоснование состава диагностической панели для генетического скрининга больных раком молочной железы и/или раком яичников: спектр частых мутаций в генах BRCA1 и BRCA2 в российской популяции / Батенева Е.И., Кадочникова В.В., Трофимов Д.Ю., Филиппова М.Г., Мещеряков A.A., Любченко Л.Н. // Медицинская генетика. -2013.-№7.-С. 26-31.

3. Батенева, Е.И. Выявление мутаций в генах BRCA1 и BRCA2 - перспективность проведения генетического скрининга на базе организаций службы крови / Батенева Е.И., Максименко В.А., Кадочникова В.В., КофиадиИ.А., Трофимов Д.Ю., Рагимов A.A., Алексеев Л.П. //Медицинская генетика.-2014.-№4.-С. 30-35.

4. Батенева, Е.И. Высокая частота мутаций в генах BRCAI, BRCA2, СНЕК2, NBN, BLMy больных раком яичников в российской популяции / Батенева Е.И., Филиппова М.Г., ТюляндинаА.С., Мещеряков A.A., Жорданиа К.И., Грицай А.Н., Кадочникова В.В., Абрамов Д.Д., Рагимов A.A., Трофимов Д.Ю., Любченко Л.Н. // Опухоли женской репродуктивной системы. -2014. -№4. -С. 51-56.

Пособие для врачей

5. Любченко, Л.Н. Медико-генетическое консультирование и ДНК-диагностика при наследственной предрасположенности к раку молочной железы и раку яичников / Любченко Л.Н., Батенева Е.И. - М., ИГ РОНЦ 2014 - 64 с.

Другие публикации

6. Любченко, Л.Н. Наследственный рак молочной железы и яичников / Любченко Л.Н., Батенева Е.И., Абрамов И.С., Емельянова М.А., Будик Ю.А., Тюляндина A.C., Крохина О.В., Воротников И.К., Соболевский В.А., Наседкина Т.В., Портной С.М // Злокачественные Опухоли. - 2013. - Т. 6, №2. - С. 53-61.

7. Любченко, Л.Н. Наследственный рак молочной железы: генетическая и клиническая гетерогенность, молекулярная диагностика, хирургическая профилактика в группах риска / Любченко Л.Н., Батенева Е.И., Воротников И.К., Портной С.М., Крохина О.В., Соболевский В.А., Жукова Л.Г., Хайленко В.А., Тюляндин С.А. // Успехи молекулярной онкологии. - 2014. - №2. - С. 16-25.

Материалы симпозиумов и конференций

8. Bateneva, Е. Eighteen single nucleotide polymorphisms and breast cancer risk in Russian population / Bateneva E.I., Meshcheryakov A.A., Lyubchenko L.N., Ragimov A.A., Kadochnikova V.V., Panischeva L.A., Poliakova E.A., Trofimov D.Yu. // 26th European Immunogenetics & Histocompatibilty Conference. - Tissue Antigens. - 2012. - V. 79 - P. 581.

9. Батенева, Е.И. Генетический скрининг больных раком молочной железы и/или раком яичников с целью выявления повторяющихся мутаций в генах BRCA1 и BRCA2 методом ПЦР в режиме реального времени / Батенева Е.И., Трофимов Д.Ю., Мещеряков A.A., Любченко Л.Н. // XVI Российский Онкологический Конгресс. - Злокачественные Опухоли. -2012.-Т. 2, №2.-С. 140.

10. Lyubchenko, L. N. DNA-diagnosties for inherited breast and/or ovarian cancer: standard approaches and novel technologies / Lyubchenko L.N., Abramov I.S., Bateneva E.I., Tyulyandina A.S., Krokhina O.V., Vorotnikov I.K., Sobolevsky V.A., Portnoy S.M., Nasedkina T.V. // European Journal of Human Genetics. - 2014. - V. 22. - Suppl. 1. - P. 243.

11. Батенева, Е.И. Определение ассоциаций мутаций llOOdelC, IVS2+1G>A и I157T в гене СНЕК2 с риском развития рака молочной железы и/или рака яичников в российской популяции / Батенева Е.И., Мещеряков A.A., Филиппова М.Г., Кадочникова В.В., Абрамов Д.Д., Трофимов Д.Ю., Рагимов A.A., Любченко Л.Н. // Тезисы VIII Съезда онкологов и радиологов СНГ и Евразии. Евразийский онкологический журнал. - 2014. - № 3. - С. 87.

12. Батенева, Е.И. Целесообразность проведения молекулярно-генетического скрининга для выявления наследственных форм рака яичников в российской популяции / Батенева Е.И., Филиппова М.Г., Кадочникова В.В., Абрамов Д.Д., Трофимов Д.Ю., Мещеряков A.A., ХохловаС.В., Тюляндина A.C., Жорданиа К.И., Любченко Л.Н. // Тезисы конференции «Актуальные вопросы женского здоровья». - 2014. - С. 47.

13. Батенева, Е.И. Диагностическая панель молекулярно-генетических маркеров для выявления наследственной предрасположенности к развитию рака молочной железы и рака яичников / Батенева Е.И., Трофимов Д.Ю., Любченко Л.Н. // XVIII Российский Онкологический Конгресс. - Злокачественные Опухоли. - 2014. - КгЗ. - С. 204-205.

14. Батенева, Е.И. Однонуклеотидные полиморфизмы в генах FGFR2, LSP1, хромосомных локусах 2q35, 5qll, 8q24, 16q,12 при раке молочной железы в российской популяции / Батенева E.II., Мещеряков A.A., Кадочникова В.В., Трофимов Д.Ю., Рагимов A.A., Любченко Л.Н. // XVIII Российский Онкологический Конгресс. -Злокачественные Опухоли. -2014. — №3. - С. 214.

Список сокращений

ДНК - дезоксирибонуклеиновая кислота ЗНО - злокачественное новообразование МГК - медико-генетическое консультирование МЖ - молочная железа

ПМЗН - первично-множественное злокачественное новообразование

ПЦР - полимеразная цепная реакция

РМЖ - рак молочной железы

РП - рецепторы прогестерона

РЭ - рецепторы эстрогенов

РЯ - рак яичников

BIC - Breast Cancer Information Core, международная база данных по раку молочной железы BLM - Bloom syndrome gene, ген синдрома Блума BRCA1 - breast cancer 1 gene, ген рака молочной железы 1 BRCA2 - breast cancer 2 gene, ген рака молочной железы 2

СНЕК2 - checkpoint kinase 2, S. pombe, homolog of, киназа контрольной точки клеточного цикла 2

FGFR2- fibroblast growth factor receptor 2, рецептор 2 фактора роста фибробластов

GWAS - Genome-Wide Association Study, полногеномное ассоциативное исследование

HER2/neu (ERBB2) - V-ERB-B2 avian erythroblastic leukemia viral oncogene homolog 2, вирусный

гомолог онкогена эритробластного лейкоза птиц 2

LSP1- lymphocyte-specific protein, лимфоцит-специфический белок

NBN- nibrin, нибрин

NCBI - National Center for Biotechnology Information, Национальный центр биотехнологической информации

OR - odds ratio, отношение шансов

SNP - single nucleotide polymorphism, однонуклеотидный полиморфизм

UICC - Union for International Cancer Control, Международный противораковый союз

Подписано в печать 19.01.15. Формат 60х841Лб-Бумага офисная «Бу^оСору». Тираж 100 экз. Заказ № 104. Отпечатано на участке множительной техники ФГБНУ «РОНЦ им. Н.Н. Блохина» 115478, г. Москва, Каширское шоссе, 24