Автореферат и диссертация по медицине (14.00.25) на тему:Нейрофармакологическая характеристика и механизм нейропротективного действия инъекционной формы препарата нооцепт

Актуальность исследования.Разработка веществ с нейропротективной активностью является одной из самых актуальных задач современной фармакологии. Действие препаратов данного класса направлено на защиту клеток головного мозга в условиях развивающихся метаболических нарушений, которые имеют место при ней роде генеративных расстройствах (болезнь Альцгсймера. Паркинсона), травме мои а. инсультах Хотя для каждого из этих заболеваний имеются свои специфические механизмы, существуют и общие патогенетические звенья указанных состояний: метаболическая триада (увеличение высвобождения глутамата во внеклеточное пространство, усиление входа кальция в нейроны и гиперпродукция свободных радикалов), накопление провоспадитсльных цитокипов, дефицит различных факторов роста (Dumuis A. et al 1998, Qureshi A l el a) 201)3, Mayer S.A. et al 2005). Общими являются и отсроченные проявления данных заболеваний - развитие неврологического дефицита, когнитивных и двигательных нарушений. Исходя из универсальности механизмов тгих неврологических заболеваний, нейропротсктивные препараты могут иметь широкий спектр применения. Внедрение в клиническую практику новых нейро протекторов позволит снизить процент смертности и степень тяжести развивающихся осложнений патологий.Наиболее распространенной формой острого нейродегенеративного состояния является инсульт (Moosmann В. et al 2002). Согласно статистическим данным, это заболевание занимает третье место в структуре общей смертности населения, уступая сердечно-сосудистым и онкологическим заболеваниям. Ежегодная смертность в мире от инсульта составляет 4.7 млн. человек (Верещагин II.В. и соавт. 2001; Гусев Е.И.. Скворцова В.И. 2001. Welch К. el al 2004, Reiler R.G. et al 2005). В настоящее время разработан и применяется ряд препаратов для лечения инсульта. Однако, показав себя в качестве эффективных средств на стадии экспериментального воспроизведения ишемии in vivo и in vitro, значительная часть этих препаратов не выявила положительною эффекта при клинических испытаниях (Knapp A. et al 1997, Calzada J. el al 2002, Wardlaw J.M. ei al 2003, Sharma M. el al 2005). Это связано с тем, что большинство нейропротекторов действуют преимущественно на одно из звеньев указанного патобиохимического каскада.Существенным недостатком большинства нейропротекторов является и то, что они оказываются малоэффективны относительно снижения когнитивного дефицита, а порой и вовсе его усугубляют, кроме того, многие препараты имеют ряд побочных эффектов (Виленский Б.С., 1995: Гусев Е.И.. Скворцова В.И. 2001; Baskys A- ei al 2005).Недостаточная эффективность существующих в настоящее время средств коррекции последствий инсультов побуждает исследователей к разработке новых препаратов. При поиске веществ с многокомпонентным типом действия привлекают внимание пептиды как многофакторные регуляторы (Ашмарян И.П. 1988). Применение сложных по структуре пептидов в качестве препаратов встречает некоторые трудности из-за их низкой биологической устойчивости и плохой проницаемости для них гематоэнцефалического барьера. Имеются определенные успехи в использовании олигопептидных препаратов, характеризующихся достаточно высокой специфической биологической доступностью для мозга. Была выявлена эффективность аналогов вазоинтестиналького пептида (VIP) и тиротропин-высвобождающего гормона {Go/es I. el al 2003, Faden A. el al 2004).Продемонстрирован защитный эффект тстрапсптида гафцина (Каменский А.А. и соавт.1989). Аналог адрепокоргикотропиого гормона, гептапетид семаке. в интраназальной форме продемонстрировал эффективность при инсульте (Ашмарин И.П., Каменский А.А. и соавт.1997: Мясоедов Н.Ф. и соавт. 1999, Гривенников И.А. 2006). Особое место занимает класс дипептидов, для которого показана высокая биологическая устойчивость и наличие специфических систем транспорта через клеточные барьеры, в том числе АТФ-зависимой системы транспорта щеточной каймы энтероцитов кишечника (Fricker G. el al 1996). В частности, продемонстрирован нейропротективный эффект дипептидного препарата кармозин в экспериментах с ишемией мозга (Федорова Т.Н. 2003).Оригинальный подход, развиваемый в ГУ НИИ фармакологии, может быть охарактеризован как попытка дизайна пептида иа основании имитации структуры нспептидного нейротропного средства с заданным видом активности. Гудашевой Т А . и соавт. (1985) была выдвинута гипотеза о пептидергическом механизме действия родоначальника класса ноотрогюв пирацетама; исходя из этого предположения был создан ряд N-ацильных производных пролина (Seredenin S.B. с! al 1995, Gudasheva Т. А. е( al 1996).Из этой серии на основании наиболее чёткого антиам нести чес кого эффекта и высокой биодоступности для мозга был выбран ноопепт (этиловый эфир М-фекилацетил-Ьпролинглицина. ГВС-111) . имеющий структурное сходство как с пи ранетам ом, так и Nконцевым фрагментом основного метаболита вазопрессина. АВП .,ч. Ноопепт превосходил пирацетам по уровню эффективных доз (в 1000 раз) и по спектру мнемотроиной активности (Oslrovskaya R.U. е! al 1994: Островская Р.У. и соавт. 2002). Была выявлена нейропротективная активность субстанции иоопепта на различных моделях ишемии (Назаренко И. В.. Каменский А. А. и соавт. 1998, Ostrovskaya R.U. et al 1999; Романова ГЛ.

2(К)3). В отличие от большинства известных кейропротекторов, действующих изолированно на один из компонентов метаболическою каскада, ноопепт проявляет многокомпонентный нейропротективный эффект. Он повышает выживаемость нейронов, подвергшихся действию глутамата в нейротоксичекой концентрации {Андреева Н А . и соавт. 2000), блокирует потенциал-зависимые кальциевые каналы (Solntseva Е. el al 1997) и кальцийзависимые калиевые каналы (Bukanova Ju. el al 2002). В опытах in vivo и in vilro был выявлен широкий спектр интнокеидаптпой активности ноопепта (Лысенко А. В. и соавт.1997. Менджерицкий А. М. и соавт. 2003. Pealsman A. el а! 2003). Ноопепт проявляет также анти коагулянт ну ю и фибринолитическую активность (Островская Р.У.. Ляпина Л.А. и соавт.2002) и выраженный противовоспалительный эффект {Коваленко Л.П., Мирамедова М Г и соавт. 2002).Выявленная в эксперименте эффективность ноопепта в сочетании с достаточно высокой биодоступностью для мозга при введении препарата внутрь, подтвержденной фармакокинетическими исследованиями (Бойко С. и соавт. 2004), определила целесообразность создания лекарственной формы препарата в виде таблеток для клинических испытаний ноопепта. При проведении клинических испытаний у больных с психоорганическими расстройствами сосудистого и травматичного гене:)а было установлено, что препарат, начиная с 10-14 дня курсовой терапии, демонстрирует способность ослаблять когнитивные расстройства (нарушения внимания, памяти), оказывать акксиолитическое действие (снимать тревогу, повышенную раздражительность), ослаблять выраженность нарушений ночного сна (Teleshova E.S. el al 2005). В настоящее время завершена 111 фаза клинических испытаний ноопепта в качестве иоотропного средства, препарат выпускается в таблетках по 10 мг (регистрационный номер ЛС-001577 от 12.05.2006). Однако при остро развивающихся патологиях для быстро достижения эффекта необходимо назначать препараты в форме для парентеральною применения \i связи с этим в наставшее время в Опытно-технологическом отделе ГУ НИИ фармакологии (зав- - проф.. д.ф.н Пятин Б.М.) осуществляется разработка инъекционной формы ноопепта (заявка на выдачу патента РФ 2005., Гусев А.В. и соавт. 2006). предназначенной для лечения больных с инсультами. Представляется необходимым экспериментальное исследование свойств ноопепта в новой, инъекционной форме.Цель работы. Оценка ноотропного и нейропротсКШВНОГО эффекта препарата ноопепт в инъекционной форме, а также изучение основных механизмов его иейропротективного действия.Задачи исследования.1. Оценка влияния ноопепта на обучаемость и дефицит памяти, вызванный блокадой х ол и но- ре цепторо в 2 Исследование ноотротюго эффекта ноопепта в условиях дефицита памяти. вызванного фокальным ишемическим повреждением (фтоиндуцированный тромбоз сосудов префронтальной коры) и интрацеребральной посттравматической гематомы (модель геморрагического инсульта)3. Оценка нейропротешттюй активности ноопепта на моделях локального ишемического инсульта - фоюиндуюфонанного фомбоча сосудов префронтальной коры и окклюзии задней ветви средней мозговой артерии 4. Анализ влияния ноопепта на спонтанное и стимулированное высвобождение гяутамата срезами коры головного мозга крыс 5. Количественная оценка такиокеидвнтиозо действия ноопепта на модели Fe2+индуцированной хемидюминеспешши липопротеинов сыворотки крови здоровых доноров 6. Изучение фарчаткинетики инъекционной лекарственной формы препарата в сопоставлении с субета Научная новизна.В данном исследовании впервые изучен спектр ноотропной и нейропротективной активности инъекционной формы препарата ноопепт (0.5 мг/кг). Препарат проявил выраженный когничтроимый >ффек'т на модели УРПИ н трехкамерчой модификации.Наиболее ярко эффект ноопепта выявился при отставленном тестировании, что свидетельствует о его положительном влиянии на извлечение памятного следа.Нейропротсктивная активность инъекционной формы ноопепта была впервые продемонстрирована на модели массивного ишемического инсульта - кортикального повреждения, вызванного окклюзией средней мозговой артерии В условиях моделирования посттравматической интрацеребра.тьной гематомы (геморрагического инсульта) впервые выявлен четкий протсктивный эффект препарата Ноопепт был эффективен при условии введения через 4 часа после экспериментального повреждения, что свидетельствует о достаточной широте «терапевтического окна».Впервые исследован новый компонент нейропротективного действия ноопепта воздействие на высвобождение глутамата. В работе продемонстрирована способность препарата угнетать спонтанное и К'-стимулированное высвобождение глутамата. что является одной из причин выявленной ранее способности ноопепта ослаблять кейротоксические эффекты глутамата. В плане приближения к клинической ситуации впервые выполнено изучение эффекта ноопепта на оксидантный статус сыворотки крови здоровых доноров. Выявлена способность препарата способствовать сохранению эндогенного антиоксидантного потенциала и показана его более высокая эффективность но этому показателю, чем у препаратов сравнения ноотропа пирапскша. ловушки свободных радикалов PBN и маннита. Впервые проведены фармакокипетические исследования инъекционной формы ноопепта в сравнении с субстанцией препарата.Научно-практическое значение.Результаты данного исследования расширяют представления о веществах пептидной природы с ноотропным и нейропротективным типом действия и способствуют целенаправленному поиск) новых препаршив с протек швпой активностью Применяемые в настоящем исследовании модели экспериментального повреждения воспроизводят развитие ишемичеекого и геморрагического инсульта в клинических условиях и являются адекватными для оценки активности фармакологических средств Согласно современным представлениям, массивное высвобождение глутамата во внеклеточное пространство и активация перекисного окисления липидов являются ключевыми звеньями в патогенезе нейротоксического повреждения мозга не только при инсульте, но и таких состояниях как гипоксия, гипогликемия, травма мозга, нейродегенеративные расстройства (болезни Альцгеймера, Паркинсона). Полученные данные о способности ноопепта снижать высвобождение глутамата и сохранять эндогенный антиоксидантный потенциал способствуют лучшему пониманию механизмов, лежащих в основе положительного нейропротективного действия фармакологических препаратов. Результаты данной работы позволяют считать целесообразным клиническую оценку инъекционной формы ноопепта у больных с ишемическим и геморрагическим повреждением мозга.Апробация работы.Основные результаты диссертационной работы были представлены на научной конференции нейрохимического общества Неирохимия фундаментальные и прикладные аспекты» (Москва, март 2005). на 8-ой Региональной конференции Европейской коллегии но нейропсихофарчакологии F.CNP (Москва, апрель 2005). на Всероссийской конференции молодых исследователей «Физиология и медицина» (Санкт-Петербург, апрель 2005). на международном симпозиуме "Biosensors and glutamale measurement (Лунд. Швеция, июль 2005). на 4-ой международной конференции "Биологические основы индивидуальной чувствительности к психотропным препаратам (Москва, март 2006). на международном симпозиуме -Hippocampus and memory» (Пущиио. июнь 2006).Публикации. По теме диссертации опубликовано 10 работ, из них 5 статей и 5 тезисов в материалах российских и международных конференций.Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 163 страницах

выводы

1, Уошомн» положительное влияние инъекционной формы ноопепт* (0.5 мг/кг> ни обучение н намят)., действие препарата проявляется преимущественно в отношении долговременной памяти. Ноопепт устраняет дефицит АроетршКпенной памяти, вызванной введением М-холииоблокатора сконоламнна По выражен иости эффекта ноопепт превышает ттрештрат сравнения пнрацетач

2 Показана способность ноопетгга эффективно снижать расстройства ЦНС в условиях моделирования локального ншемнчсского повреждения н на модели геморрагического инсульта

3, Ноопепт в инъекционной форме достоверно снижает зону ншемнчсского Повреждения на модели ограниченною коркового инсульта, шмшпго фотохимическим тромбозом сосудов префронтальной коры, и в условиях массивной кортикальной ишемии - дисталыюй окклюзии задней ветви средней мозговой артсрин.

4, Обнаружено, что ноопепт в концентрациях 10J, 10* н 10т М вызывает лостоверчюс ениженне высвобождения глутамата срезами корта головного мозга крыс. Наиболее выраженным эффект прстирот» является в отзтошеиин К'-СТВЫулярояашюго высвобождения глутамата, Препарат сравнения апираиетам уступает ноопепту в условиях этой модели

5, На модели Ре^-нилуцироваииой кемклнжинесценции ЯМПОПра теинов сыворотки крови здоровых доноров выявлена способность ноопепта (днитон концентраций от 2-l0 J до 10* М} сохранять эндогенный антнокендантпый потенциал По показателю зффективиых концентраций иоонягт превышает препараты сравнения ловушку свободных роднкашв PBN и родоначальника класса ноогропов иирацетам

6, Сравнительное фармококинетическое изучение ниъекпмоиной формы ноопента н полною раствора субстанции, которые вводили внутривенно, не выявило различий в нх основных фармакокчистичсскнх параметрах в плазме крови: константа элиминации (Ке1>, площадь под флрмакокинетачсской кривой (AUC> и период подувыведення ('Г

7, Проведенное комплексное исследование, выявившее сочетание у лньекщюнноЛ формы ноопепта нейропротсктивното действия с положительным мнемо тройным эффектом, позволяет рассматривать этот оригинальный линешцдиый препарат и качестве потснииалыюго нейропротектора для лечения инсультов

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Создание эффективны* ИШ№11 с иейропротсктивиой актИМЮСЗЫО является актуальное задачей современное психофармакологии. Действие препарат» данного класса, осуществляемое на клеточном и молекулярном уровне, направлено на защиту ткани головного мозги от распространения повреждения на здоровые клетки (1дкг М. el al 199ti. Wahlgren N.C ci al 2004). Изучение и внедрение в клиническую практику новых иейроиротекторов позволит снизить нропент смертности и риск развития осложнений (неврологического дефицита, когнитивных нарупкинй) таких болезней, как нсйродегсмсратнвиис расстройства (болезнь Альцгеймсра, Паркниеоив), травма мозга, инсульт. Хотя для каждого из этих заболеваний имеются специфические механизмы (повышение уровня мозгового {Ьамнлойда при болезни АльпгеИнеро; снижение содержания дофамина в черной субстанции н батальных ядрах при болезни t lupKHHcoira). у ттих состояний имеются н общие паписнстичесюге звенья. К их числу относится, прежде всею, гак называемая метаболическая триада усиленное высвобождение глутаматл оо внеклеточное пространство, увели черный вход кальция в нейроны н гиперпродукзшя свободных радикалов (DmtiuiM Л. et al 3948. Qureshi Л.|. ei al 2003, Mayer S.A. el al 2005) Важную роль в патогенезе чих состояний играет также накопление провосиалнтсльных цнтокгпюв н снижение синтеза нейротрофических факторов (Гусев Е.И . Скворгюва В И. 2001; Гомазков О Д 20О2, Vemu^aiUi R. cl al 2004) Исходя из универсальности механизмов ттих неврологических заболеваний, иейропротеиимиас препараты могут иметь широкий спектр применения

Наиболее распространенной формой поражения мозга является инсульт, рассматриваемый в настоящее время как острое нейродстенсратнвное состояние (Robertson GS. el al 2000, Moosmarut В. el а| 2002), Согласно международным статистическим данным, данное церебро иску я ярное заболевание занимает третье место в структуре обшей смертности населения, что позволяет считать его важной проблемой медицинской н социальной значимости (Murray CJ. ei al 1997. Верещагин Н.В. и соавт. 2001. Bontla В 2001. Welch 1С, et al 2004, Rciler R. ci a| 200S). Экспериментальное воспрогпвелсние моделей инсульта позволяет не только уточнить патофизиологические механизмы, но н оценить эффективность иейроиротекторов (Гусев 1;И, Сквориова НИ 2001; Sharmn М 2005). Существует два типа инсульта - теморрат нческий {кровоизлияние в мозг или нодобо.ючечиьи пространства> и ншеиическнй (резкое прекращение кровотока по определенной мозговой артерии) Ишемия, л свою очередь делится на глобальную и локальную. Вследствие данных процессов при развитии локальной ишемии я мозге образуется некротический очаг (ядро), который окружён га* называемой знчзумброй ■ это юна повреждения, в клетках которой частично сохранен энергетический метаболизм (Гусев till. Сквориова 1111 2001), В клетках ядра гзатобиохнмнческий каска,'] приводит в конечном итоге к некрозу, а в ненумбре изменения носят частично обратимый характер. В связи с этим, актуальным является поиск тффектнниых фармакологических средств с нсЙронротектнвноЙ активностью Действие нейршсротекторов н вправлена на восстановление метаболита клеток пеиумбрм и на прерывание роста юны инсульта на жизнеспособные клетки. Препараты ланною класса используют в первые часы после инсульта (период "терапевтическою окна").

В настояшес время поиск препаратов шея коррекции инсульта ведется срсли антагонистов различных подтипов глутачатных рсиепторов, блокаторов кальциевых и иатрзтевых каналов, веществ, обладающих антиакендаитной активностью. Классификация применяемых в настоящее время фармакологических препаратов для лечения инсультов 31риведсиы в обзоре литературы. Возможности терапии церсбриваскуляриых расстройств ограничены Так, для лечения инсультов широко используются тро.мболитнки (тканевой активатор плазминогена. урокиназа, стрептокинаэа, абинксимаб и тт.): однако в большинстве случаев их действие направлено на звенья перанчного гомеостава, и wo может взазвать кровотечение, что делает невозможным применение препаратов данного класса при геморрагическом инсульте (WanUaw J. et al 2003). Важным яесеястся и то обстоятельство, что при использовании тромболитиков происходит дополнительная генерация свободных радикалов, что делает обязательным сочепшое применен!» тромбашти»! и антиоксидантеа Лнтнкоатулянт гезызрин применяется для профилактики, в не для лечения кардзюзиболического инсульта; кроме того, его не всегда рекомендуют примет 11. в остром периоде инсульта (Rutgers SJ. et al 1993). В ряде случаев для новых веществ (в частности, азпнкоагулянтов гепаринойди и гепарина низкою молекулярной» уровня, блокаторов натриевых и кальциевых каналов) не выявляется положительною эффекта на Ш стадии клинических испытаний (Веиоп С. et «I 1991. Rogers SJ. ci al 1993. Davie* S et al 1997, Ннятет Л. 199Й, Sherman D.G. 2004. Wahlgrcn N.G. 2(104, Ba&kyc A. et al 2005). В настоящее время 1юнск npc3iapaT0e для коррекции инсульта ведется также среди антагонистов различных подтипов глутамотных рсиепторов, однако их применение в большинстве случаев сопровождается нежелательными нобочнычн эффектами со стороны ЦНС (в частности, локомоторных нарушений и кагаплекени) (Block G.A. el al 1987, Knapp A. el al 1997. Ьеспддов А.Ю. 2000; Гусев Е Й,, Сквораова

В И 2001; Akins Р cl al 2002). Не была подтверждена к клинике противоишечическая активность у антагонистов NMDA подтипа глутвнатных рецепторов сельфотелв (CGS-19755, Schmute М. cl al 1997), элипродила (Carter С. cl aJ 1997). л также иерестати I Клнрр A- cl al 1997). При использовании блокаторов кальциевых каналов L-тнпа (ннмодиннна, циниаризина) происходит эффект «обкрадываниян мозговой ткани (Гусев Е.И. Сквориова В Н. 2001) Литиатрсгзн^ы тикдоднпин и аспирин снижают риск развития вторичного инсульта. но они ие тестировались у больных с ишемнчееким инсультом, Героиня лекарственными средствами с преимущественно тнгтиоксидянтным типом действия тффективна лишь в условиях предварительною эффекта, в ие ив фогте разлившейся патологии; было показано, что применение ланнтлх препаратов не веегд» приводит к поддержанию корректного баланса про - и аитнокендантыч систем организма (.Панкин В J и соавт. 2002, Anderson М et а| 2002) Lyden Р D. et в! (1997) отмечает отсутствие эффективных препаратов для лечения геморра! ического инсульта.

Инсульт сопровождаете* ие только 1Крвичним повреждением мои* с морфологическими и биохимическими итменепнями. но и отсроченными проявлениями в виде расстройств обучения и памяти, нарушений двигательной активности, неврологического дефицита Однако в настоящее время акцент в выборе терштин инсультов делают на непосредственном снижении объема патологического очага, н меньше внимания уделяется восстановлению функцимшльиых нарушений ЦНС (Нил Ya el al 2002). В частности, мтюгие нейропротекторы оказываются малоэффективны относительно сииження когнитивного дефицита, а такие неконкурентные бдоквторы NMDA-подтипа глутаматных рецепторов как кетам и и и MK-S0] н вовсе усугубляют развивающиеся нарушения рабочей памяти. В связи с этим, ддя лечения инсульта и ря,'ы других патологий мозга, сопровождающихся когнитивным дефицитом (жйротровмы. сеиильные нарушения), целесообразно применение препаратов, сочетающих нейропротсктивиые и ноотройные свойства

В последние годы на смену препаратом, целенаправленно влияющим на один патогенетический ком нонет заболевания, приходят соединения с мноеокомпоиснтныч типом действия Представления о роли пептидов как универсальных многокомпонентных регуляторах (Лптмарни Н,П, 1988; Каменский Л,Л. 1989) послужили основанием для поиска нейролротекторов среди Пептидов Была выявлена нейропротектнвная активность гормонов гипофиза - ваэопрссснна и алреиокортикотрониаю терма»» (АК'ТГ) Практическому применению сложных по структуре пептидов в клинике препятствует их низкая биолотческая устойчивость и плохая проницаемость для них тсматоэицефаличсского барьера. В настоящее время осуществляется модификация молекул пептидов (D-иэомеров аминокислот, устойчивых к действию нентидаз), в также синтез фрот чей юн бни.шгически активных йен шло» к создание на их основании эффективных лекарственных среде»а. в юм числе исйроиротскторов Известно, что аналоги пеАроненгидов оказывают положительный нсйроирогектианыП и мисмотролный зффект. в том числе их применяют при ненролошчесхик заболеваниях. Был продемонстрировал нолрмшП эффект тетранстггнла тафцина препарат улучшал обучение и координацию движений, а также стимулировал двигательную активность у экспериментальных животных (Каменский Л. А. и соавт 1989) Покатано, что наиболее активным фрагментом адреиокортикотропното гормона является АКII 4ю На его основе был синтезирован препарат семаке («семь аминокислот». Mcc-Glu-His-Phc-Pro-Gly-Pnt). для которого выявлен когантотропный и иейропротсктивный эффекш (Ашмарин И.П„ Каменский А.А, и соавт I997; Мясоедов Н.Ф., Гривенников И.А. н соавт. I999), противовоспалительное н ииальгетическое действие (Иванова Д.М. Качснсхий А.А. и соавт. 2004). Препарат применяется в форме капель для иитранаэального введения (Гусев НИ и еоавг. I997, Гривенников НА. 2006) Также нрогекзивная активность была выявлена у фрагмента основного метаболита ваэопрсссина, АВП щ- у нею есть положительный миемотроиимй эффект (Shen У et al 1995) и псйропротекшвнос действие (СЪеп 0. et а] 2000).

Недостатками описанных олитопептидов является их относительно сложная структура. требующая применения специальных путей введения Особое внимание привлекает дизайн коротких пептидов в связи с их большой стабильностью, оно доступностью для мозга и наличием специфических А ГФ-зависимыл систем транспорта в эитсроцитах (Fruiter G. el at 19%). Оригинальный подход, развиваемый в ГУ НИИ фармакологии им В,В. Закусова РАМН в течение последних двух десятилетий, основан на идее создания дипептидов, имитирующих, с одной стороны, структуру непептидного иейротропного препарата, а с друюй - активного фрагмента ненгнда с аналогичной иейротропной активностью (Гудлшема Т А. и соавт. 1985; Gudi»hevi Т-А. е( al 19%) На основании гипотезы о наггндергическом механизме действия пирацетомд ТА Гудя цк вой (Гудашена ТА, н соавт 1985) был создан ряд N-анидьных производных пролнна (Seredetun S.B. et al I995). Прототипом этзтх дипептидов послужил, с одной стороны, цирацстам. а с другой - N-концевой фрагмент основною метаболита вазопрессниа, АВП 4-*- Дзя дальнейшей работы на основании наиболее четкого атгтиамнестического эффекта и высокой биодоступноети дзя мозги был выбран ноопепт miMtufl эфир Н-феиваацезш-Ыцммшглицпна. ГВС- III). ] 1оказаи четкий ноотропныЯ эффект этого препарата В настоящее прем» завершена 111 фаю клинических испытаний ноопепта у больных с пснхоорглн мческимн расстройствами сосудистого и травматичного Г слеза. препарат применяется в таблстировонной форме.

Бьига имя плена нейропротективная активность субстанции иоопепта па различных моделях ишемии (Oswov^fcaya R.U. et oJ 1999, Романова ГА. 2003). В опытах in vitro выявлены мехщппмы нейроиротективного действия препарат. Он повышает аыжноасмость нейронов, подвергшихся действию глутамата в нейротоксичекой концентрации (Андреева НА, и соавт. 2ООО) и блокирует потенциал-зависимые кальциевые каналы (Solntseva Е с1 al 1997 > В они tax in vivo н in vino был продемонстрирован широкий спектр витноксилаитной активности ноопепта (Лисенко А В. и соавт. 1497. Мснджсрилкий А. М н соавт. 2003, Pealsman A. et al 2003).

При остро развивающихся патологиях для быстрого достижения -эффект необходимо назначать препараты я форме для парентерального применения. В свази с лим на основании выявленного ми огоконио м с ипюго нейропрогектзгвного эффекта ноопепта в настоящее время в Опытно-технологическом отделе ГУ НИИ фармакологии им ВВ. Закусона РАМН осуществляется разработка инъекционной формы препарата, предназначен коп для лечения больных с инсультами (Зимина И. А. н соавт 2004. заявка на выдачу патента РФ 2005; Гусев А В и соавт. 2006). В состав формы входит основное вещество ■ ноопетгг (1мг) и ШИЮПНККШШ субстанция - манит <10 мг), находящие и виде лиофилизированиого порошка, Целью костящего исследования явилось исследование нсПропротстнвной и мясматроиной активности инъекционной формы ноопепта. а также уточнение механизмов нейропротсктнвного действия препарата.

Основными свойствами иоотрошшх препаратов является улучшение обучаемости, памяти и внимания В данной работе иоотронный эффект ноопепта в новой, инъекционной, форме, оценивался в стандартных методах скрининга ноотронов ■ тестах УРПИ и УРЛИ (Воронина Т,А- и соавт. 2000). Для исследования влияния воовешта иа обучение и память мкрвые использовали оригинальную 3-ехкамериую модель УРПИ, предложенную Иноземцевым А.Н, и соапт (1989) Воспроизводимость УРПИ оценивали через 24 ч и при отставленном тестировании (через 14 дней) Было проведено 2 серии опытов В первой серии экспериментов иооменг (0,5 мг/кг) в ниьекииоиной лекарственной форме, положительно влиял на обучение Животным в тесте УРПИ. л при оставленном тестировании эффективно предотвращал забывание Коэффициент Мл. свидетельству ющнй о критерии обученностн. при тестировании через

24 часа составил а ни 14-ми сутки - 56 % <Р<0.01) Ранее ними было Показано. что a условия* трех камерной модели УРПИ пираиетач (200 чг.гкг> уступал Поопепту но выраженное™ ноотрояного эффекта.

Второя серии опытов была проведена с целью выявления шгтаамнсстичсской активности ноопеттта на модели скополаминовой амнезии Как при тестированттн через 24 часа, так и при отставленном тестировании и группе живот ых- которым предварительно вводился скополамин. ЛП захода в темную камеру был резко снижен по сравнению с контрольными животными fp^Q.Ol) 13 группе крыс, которым вводили 1Ю«кпт (0.5 мг/кг^скополамин, при тсептровании через 24 часа отмечена тенденции к увеличению ЛП захода в темную камеру по сравнению с группой крале, которым предварительно вводился скополамин При тестировании на 14-ые сутки, кок и в первой серии опытов, этот показатель повышался достоверно, что свидетельствует о предотвращении иоопептом забывании При тестировании через 24 часа коэффициент An составлял 29%, а на 14-ыс сутки он превысил величину (00% и составил 173% (Р<0.01) 1'пким обратим, во шорой серии экспериментов был выявлен четкий йнтиамнсстнчсекий эффект препарата, а также положительное влияние на пространственный компонент памяти: препарат не оказывал влияния на спонтанную двигательную активность животным. В обеих сериях опытов эффект иоопелта проявился более ярко при отставленном тестировании, что подтверждает полученные ранее данные о положительном влиянии препарата на извлечение памятного следа (Chliovskaya R.U. el al 1994) Эти результаты коррелируют с данными исследований Mishuna К et al (2003), относительно эффекта улучшения обучении на модели скополаминовой амнезии аналогом A VP**, NC-1900,

В тесте УРЛИ исследовался ноотрошшн эффект itooneina в условиях массированного режима обучения, при котором моделируется исходный дефицит обучаемости. Ноопепт (05 мт'кп в инъекционной форме, проявлял выраженный мнемотрошсый эффект В условиях этой модели В условию однократного введении препарат вызывал увеличение количества обучившихся животных с 30% (показатели в группе контроле) до 60 % (р<О.05) При субтропическом введении (в течение 9 дней) была выявлено дополнительное "доучивай не" первоначально не обучившихся животных Если в кигтроле показатель обучаемости на 9-ые сутки составил 40%, то и группе животных, которым вводился ноопепт, было зарегистрировало увеличение числа обучившихся животных до 100% <рс().05}- Сопоставляя полученные результаты с проведенными ранее экспериментами, можно заключить, что ИММКИТ более активен, чем пиранетам, который, будучи применяем в дозе 200 мг'кг. вызывал увеличение критерии обученное» «шинных в тесте УРАН при однократном меде КИИ, но не повышал число дополнительно обучившихся животных (Островская Р.У, Мнрзоев ТХ и соавт 2001 > Этот факт, вероятно, святой с ген. что ноопент облегчает все фаты процсссинга памяти, а пнроцетам облегчает преимущественно ранннс сто фаты, и не влияет на извлечение памятного следа (OsLrovskuya RU. et al IW .1 Полненные результаты свидетельствуют о более широком спектре носгтропных эффектов у ноопепта, чем у пирацетама

Данные, нолу<книые в настоящей работе, согласуются с результатами проведенных ранее исследований по выявлению мнемотронного эффекта ноопенга, вводимое в субстанции Нооиепт облегчает обучение в тостах УРПИ. У РАИ: проявляет антиамиестичеекнй эффект в экспериментах с амнезией, вызванной блокаторами М-холииорсцетгтороя СКополамином и Н-холнноренсптрол мекомил амином. антагонистами NMDA полтина глутамапшх рецепторов кетам югом, СРР и MK-S01, о также электротоком Он превосходит пирацетам по уровню эффективных доз (в 1000 раз) н по спектру мнемотропной активности (Oflfovdaja R-U. ei al 15><М; Остроиская Р.У. I утпикво ТА. м соавт. 2002). Поопент снижает проявление отсроченных нарушений поведения у потомства, подвергшегося пренлтадыгым повреждениям, положительно влияет на ассоциативное и нсассошщтивное обучение, облегчает ДЯККЛЬПую гигаюкамнлльиуэо нотелтигацию |Чспкош А Н. Трофимов С.С. и соавт 1995. Трофимов С.С. 1997).

Отсутствие у инъекционной формы иоонетпл МЮрелаксшпиого и седатипного действия вплоть до дозы 100 мг/кг свидетельствует о том. что мнемогропный эффект этого дипетндиого препарата является избирательным Важным дополнением является выявленное онтигииоксическое действие ноооеша ■ ШНв эффект характерен для многих ноотропов {Giurgca С. 1972).

Известна, что когнитивный дефицит сопровождает различные нарушения мозга: грашы, цсрсбро-ааскулярную недостаточность. инсульты (Aramm-skr J. с* al 199й, Хиа Ya el al 2002) Одной из самых распространенных форм пмрежлсшм мозга являются инсульты, В связи с этим в данной работе было осуществлено моделирование различных форм этой патологии мои а и изучение ноотронного эффекта ноопепта, вводимого и иньекционцой форме Использовали методику итнемичеекого повреждения -фотонндуиироваиного тромбоза сосудов прсфронтальиой коры, а также модель геморрагического инсульта - ннтрансрсбралыюй поеттравмоппкехой гематомы.

Итнсмическкй инсульт занимает 70-85% от всех видов инсультов. В основе метода локального фотогромбоза нрефроигпльиой коры лежит фотохимическая стимуляция образования тромбов it сосудах коры головного мозга крыс. Фокальны!) ншемн'нхкнй очаг образуется при взаимодействии предварительно введенного и кровеносное русло фд1 g * Iуж; «вн те л ы гого красителя Бемгадкжого розового и фокуенроватпмго светового луча от гллогеновой помпы (560 ны) (WoutB BD, cl al 1985; Романова ГА. н соавт 1998) Известно, что префроигальная хора вместе с ЛШтнпм играет большую роль в процессах обучения и памяти (Лурня А.Р. и соавт. 2ООО). 11 оказано. что при локализации ншемизируюгцего аоздсйстня в префроиталыюй коре головного мозга поражения выест место избирательный (без сопутствующих нарушений моторной координации) дефицит обучаемости и намят и. продемонстрированный на модели условного рефлекса пассивного избегания (УРПИ| В группе крыс, леченых после ишеми танин в течение 9 дней ноопецтом в ШИШКИНА форме (0,5 нгАсг). латентный период захода и темную камеру был максимально высоким Он составил 500 сек в сравнении с показателем 102 сек в группе крыс с ишемией, которым не вводился nooncirr, и 241 сек в сравнении с группой лоунооиерированных животных (р<0.05) Важно подчеркнуть, чти и экспериментах, выполненных на данной модели Романовой ГА и соавт. (2006). эталонный ноотрон пнрапетам, применяемый и дозе 200 иг.'кг, был в полтора раза «етгее эффективен, чем nootkht но выраженности нормализующего действия в условиях ттой модели

Но данным международных исследований, 15-30% от всех Инсультов занимают геморрагические формы В икммшес время разработаны и широко применяются модели геморрагии (в обзоре литературы приведено нч описание) с виугрнмотговым или субарах ноидалышм введением аутокровн и с последующей оценкой функций высшей неригой деятельности (Ни* Ya et al 2Ю2, Prunell G F et at 20U3, Sun B. ct al 20Q6, Karwacki 2. cl al 2006), В продолжение исследований, выполнены* на модели фотохимического тромбоза Лредстаммо интерес сопоставить эффекты иоонеита и пирадктама иа модели геморрагического инсульта, затрагивающего подкорковые структуры, при котором может иметь место не только когзпгтнвная патология, но и неврологический дефицит Исследование активности поопеггтв впервые проводили па модели геморрагического инсульта, Предложенной Макаренко и соавт. (2002) -ннтрацсрсбрадыюА посттравматичсской гематомой с локализацией и области внутренней капсулы. Иа данной модели уже (нал оценен эффект нооглютзьтл (Гарибова Т.Л и соавт 2003). Проводили сравнительное исследование влияния ноопепта и иирацетама на показатели памяти, неврологический дефицит, ицроие дмсгатсдытов активности и координации движений у животных с ИШрОЦеребрйЛЫЮЯ 1юсттраичатической гематомой. Иоопепт (0.5 мг/кг) вводили однократно и повторно, а пирацегам (200 мг/кг)

- повторно; во всех случаях нерпам ииъекния Сила осуществлена черп 3,5-4 часа после операции; при повторном введении препараты вводились 14 дней, Тестирование проводили ил 1-ые. 3»н. 7-ие и 14-ые сутки после операции. которые считаются днями с недостаточным про*«.тенисм эндогенных защитных механизмов

Ноопент. введенный однократно, способствовал ослаблению неврологических нарушений, у,тупи ал копипнвиый дефицит у крыс с геморрагическнч инсультом При повторном введении эффект ноопепта выявился более ярко - препарат оказывал сильное нротсктнвиос действие в отношении неврологического дефншгта, нарушений двигательной активности и координации движений. Пират icium способствовал ослаблению легких неврологических нарушений. снижал количество животных с нарушением координации движений В целом, пираоетш. как и в случае воспроизведения фотохимического тромбоза, уступал иоопепту по выраженности защитного эффекта

Маши данные коррелируют с результатами предыдущих исследований. Ранее было выявлено положительное влияние ноопепта на нарушенные когнитивные функции при компрессии коры мозга и нрефротгтшиншЛ лобжюмни (OsWovsfcaya R.U, el al 1997; Романова Г.А. 2003), Препарат способствует восстановлению пространственной памяти, нарушенной ольфактораюП будъбэктомией (модель болезни Алъигеймера, ссыл : Бобкова Н В и соавт. 2005).

Поскольку в лонной работе применяли ноопент в инъекционной форме, предполагаемой для лечения инсультов в клинике, то в задачи исследования входило не только выявление мнемотропного эффекта препарата и условиях экспериментальных моделей инсульта, |Ю и, прежде всею, морфологически выявленное снижение зоны поврежден на мозга. Нсйропротсктивиую активность ноопечпа опешнян на двух моделях локального коркового ншемического инсульта - а) упомянутую выше модель фотоиндуцировашюги тромбоза сосудов префрон тальной коры, при которой поражение занимает около 3-4% от всего объема ипенлагаралыюго полушария и б> окклюзии тадией ветви средней мозговой артерии (ОЗВСМА} с более обширным поражением коры головного мозга - 18 -20%,

В условиях модели фотоиндунированного тромбоза животным производили очаг ШПШЧКЮГО инсульта, а затем в течение 9-тн дней вводили U00ЛОЛ в инъекционной лекарственной форме, после чего осуществляли дскапитоцию. При морфологических исследованиях отмечено достоверное двукратное уменьшение размера очага а группе животных, получавших ноопент 4р<0,05) Эти данные коррелируют с результатами проведенных ранее 1кснсрнмс1Гтов с субстанцией ноопепта: препарат тюке вызывал снижение юны инсульта на 50% ■ условия* этой модели (Otrovskaya R.U el al 1949),

Поскольку методика фотопнлуинро ванного тромбом моделнрузгт относительно мазый очаг л поверхностных отделах хоры, представлялось целесообразным изучить эффект препарата ив модели более обширного поражения мозга. Известно, что у человека большинство инсультов (до 75%) происходит в бассейне средней мозговой артерии. В связи с этим в .тайной работе впервые исследовали эффект uooneirra на модели, сочетающей ли стальную окклюзию задней астви средней мозговой артерии и Постоянную перевязку ипсилитералыюй обшей сонной артерии. После моделирования ОЗСМА животным через 35 чин. 24, 4S и 72 часа вводили iwoaieirr в инъекционной лекарственной форме, а затем дскопитнровали Введение иоопепта приводило к достоверному снижению ПДОШМИ инсульта на 34.5 % в сравнении с контрольны! группой (р<0,05) Сходные данные (снижение ишемии на 37,7?'») были получены дня комплекса пкррояндди-2*»иргутами1ЮВая кислота (Поварова О.В. 2003). Эффект по выраженности сравним также с применяемой в клинических условиях нсйропротектзЕвной смесью, состоящей из нимолипнна. лсксомспгкиш н мошнитола. вызывающей уменьшение объема поражения на 35% (Zausinger S. et al 2003), а также с влиянием дексанабИиола. неконкурентного бдокаторо NMDA рецепторов, уменьшающего зону некроза на 29 % (Leker R.R. el al 1999). В экспериментах Tailtsumafc Т. cl al (1996) было показано, что основной фактор роста фнброб,застои (bFGF) снижает зону ишемии в условиях данной модели ишсмичесхого повреждения иа 29%.

Полученные и иастоадисч не следовал и и морфологические данные об эффективное Tit иоопепта иа моделях ограниченного коркового ишемическото инсульта и массивной кортикальной ишемии свидетельствуют о его иейронротеггшмюч |ффекге in vivo В ранее проведенных экспериментах нейропратсктнвиый эффект препарат был получен как на модели глобальной ишемии (клинической смерти, вызванной пережатием ИЩИЦ от сердца сосудов, ССШ: Ниряивр И. В. Каменский А А. и соавт. 1998). так и иа модели локального ишсмического воздействия - компрессии префро!ттадьнОЙ коры головного мозга (Романова [".Л 2003). Был показан защитный эффект иоопепта tl ии модели ишемии tn vitro - npenopat снижал количество поврежденных нейронов в культуре клеток-зерен мозжечка при кзклородно-глкжоиюй денривацин (Андреева НА и соавт, 2000)

Известно, что основными факторами. определяющими степень поражения мозга во время инсульта, являются тпбызок возбуждакицих аминокислот в межклеточном пространстве, новьшкитк концентрации внутриклеточного кальция. генерация активных форм кислорода и несостоятельность систем ли тнокендаигной зашиты < "оксидантный стресс") (Siesjo В,К. 1988, Гусе» Е.И., Скворцова B.I1 2001), Биосинтез провоспадительных цнтокинов. интерлейкизюв I и 6. фактора некроза онколи, активация индуиибелыюй NO-сннзазы усугубляют ситуацию. Воздействие на пи метаболические пару шеи на может определить эффект нейропротекинн.

На следующем этапе работы представлялось нигсресиым провести анализ механизмов нейропротсктивното действия ноопепта in vitro. Ранее была выявлена способность моонитта (JO* М) ломниать выживаемость зернистых нейронов в культуре клеток мозжечка при ииютоксическом восшействии глутамата. следует отметить, «гто ппролетам не оказывал задшгтный эффект на этой модели (Андреева Н А и соавт 2000). Одним нз возможных мехами шов ослабления ттейротокснческого действия глутамата может быть угнетение его нресинатгтическото высвобождения Известно, что препараты, влияющие на высвобождение глутамата (любедиэн.э. 8W619CR9) являются эффективными нейропрогекторамн (Koinig Н. е( fll 2001; Graham S.I1, с( id 1994). В связи с этим в данной роботе впервые исследовалось влияние ноопепта на уровень спонтанного и стимулированного высвобождения глутамата срезами коры мозга крыс (Mcrcrlilh R.M el at 2004, Ugrvmov MV. cl at 2004). Ноопепт во всех исследуемых концентрациях ((0\ 10"* н 107 М) достоверно снижал спонтанное н стимулированное высвобождение глутамата. Наиболее сильным действие препарата проявилось в концентрации 10*М -ноопепт снижал стимул11рованнос высвобождение глутамата на 64%, В опытах наблюдалось уменьшение эффекта ноопепта при переходе к более высокой н более низкой концентрации (от 10* М), что позволяет предполагать наличие «куполообразной» зависимости кривой <'лозаоффскг,л. характерной для действия пептидов

Представляет интерес сопоставление эффекта ноопепта и его прототипов по нх влиянию на высвобожден не глутамата. Вязолресснн, пептидный прототип ноопента. угнетает К"-стимулированное высвобождение глутамата в супроолтическом ядре (Cuttbs-Collazo М et ol 2003), а аргинин-вазопрсссин снижает высвобождение глутамата на срезах ствола мозга (Bailey T.W. ct al 2006). Что касается влияний, оказываемых на глутаматергнчсскую систему непепгидиым прототипом ноопепта пнрацетама, в исследованиях V, №ско!$оп el al (1976) показано отсутствие его влияния на обратный захват, высвобождение и метаболизм глутамата и коре головного мозга. В настоящем исследовании эффективность ноопепта была выше, чем у модулятора глутаматных рецепторов, омпакниа цииршктама - данный юотроп снижал стимулированное высвобождение глутамата только в концентрации Ю* М (на 57%). а в концентрации 10*

М препарат был неэффективен.

Лндлп нерун возможные механизмы описанного выше эффекта ноопепта. следует упомянуть, что высвобождение глутамата являлся кальций-зависимым процессом (Collins G.G.S. el al 1983, Choi D.W. 1987, Rose C. el в] 2005}. Было показано, что в отсутствии ионов Саг' в растворе для инкубации срезов, К '-стимулируемое высвобождение глутамата снижалось на 75% в сравнении с показателями в присутствии калытня (Holopaincn I, et al 1988) Ранее было показано, что ноонепт вызывает блокаду потенциал-зависимых кальциевых канонов (Solnueva Е~ « al 1997) it потенциал-зависимых кальций-зависимых калиевых каналов (Bobaiwva Ju ei al 2002), причем в -лих исследованиях ноопепт проявлял эффект концентрациях, в 1000 раз меньших, чем ниранетом. Можно предположить, что способность ноонеша уменьшать высвобождение глутамопт срезами коры связана с подавлением функциональной активности этих каналов Этому предположению способствует тот факт, что именно с эффектом блокады кальциевых каналов многие исследователи связывают нейропротсктниный эффект ничодипниа (Korcnkov A.L et al 2000). Согласно GoJdinjt Е, a al (1995). использование вепксгв, действующих по механизму канальных блока торов, более эффективно, чем. к пример}-, конкурентных антагонистов, относительно снижения высвобождения глутамата при травме мозга Таким образом, показано ннгнбируюшее влияние ноопстпа на прссинаптнчсскос высвобождение глутамата, одного из сильнейших хлеточиых факторов нейротокснчиости Ложно отметить, что эффект снижения иоопептом повышенного уровня ВАК был показан и в условиях экспериментального повреждения - на модели коркового ншемическою инсульта (II Кокова Ф. 2004).

В работе также исследовали влияние nooiiettia in) другое звено метаболической триады - увеличение продукции свободных радикалов При нерсбровжкудярнмх патологиях происходит активация псрскисного окисления липидов (ПОЛ) и. вследствие этого, повреждение продуктами окисления мембран Накопление продуктов ПОЛ приводит к переходу обратимых изменений клеточных мембран в необратимые. Многочисленными исследованиями была подтверждена иниципиня ПОЛ при экспериментальной ишемии MOrta (Halliwell В. |992г Дуиин A M., Барсков И В. и соавт. 1994; Gifttbcrg M.D. 2001. Федорова Т Н 2004). Способность предотвратят. накопление продуктов нерекисного окисления указывает на иейронротектнвиую активное п. в реализации которой определенная роль может принадлежать нормалимиии взаимоотношений про- н шттноксидпнтиых систем. В литературе имеют данные о связи эффективности нейропротекгоров с их способностью предотвращать развитие окнелителыюго стресса 4 Александровский Ю Л. u man г 1991; Дктасв К М, Воронина Т А- и соавт |995j. В частности, бил покатал шитый эффект атггиокендантов ноиола Оаннушкина И(1 и соавт 1986), тирилозада, NXY-059 (Green A.R. el al 2005) и ди пептидного препарата карнозина (Федорова Т.Н. 2003) ira различных моделях ишемии

Ранее на культуре нейронов коры головного мозга человеке кнх плодов с диагностированным синдромом Дауна, а также культуре нейронов здоровых плодов, подвергнутых воздействию Н;0- или FeSO< (Университет Fairaingtoo, Connection. USA) был выявлен антиокендантиый эффект ноопепта. Этим нейронам сиойствснна ускоренная гибель вследствие повышенной выработки свободных радикалов Ноопент (10* М) уменьшал образование свободных радикалов, ноиычил выживаемость нейронов, ослабляя выраженность нарушений целостности мембран, фрагментанин ДНК в иейроиальных культурах нз мозга абортированных плодов Нирацстам в концентрации Ю-1 уступал ноопепту но выраженности нейропротсктнвного действия в условиях этой модели (PeaJsman A. el а| 2003) Представляло интерес оценить аншоксидаитный эффект ноопепта в условиях, приближенных к клиническим.

В настоящем исследований впервые активность препарата оценивали на модели Fe''-индуцнрованной хемидюмниеспенцни липопротеннов сыворотки крови здоровых доноров (Федорова Т.Н. и соавт 1901. 2003). Для инициации окисления к пробу вводили FeSO* (2-5 mMfc затем регистрировали следующие IMUtnan хсмнлюминеецсннин (ХЛ): h - амплитуду быстрой вспышки XJl; Н максимальную интенсивность ХЛ, V -скорость окисления лююпротсииов; т - латентный период ХЛ. Препаратами сравнения служили ноотроп пи ранетам, антиоксиланг PUN и вещество с нейропротективной активность» маииит, Наиболее существенной оказалась способность ноопепта и других соединений увеличивать длительность латентного периода ХЛ (т). отражающего эндогенный антноксидлнгний потенциал человека. Максимальное увеличение длительности латентного периода отмечалось у ноопепта (в 3.4 рота но отношению к контролю) и PBN (■ 3 раза по отношению к контролю), что свидетельствует о способности этих соединений защищать липоиротеины плазмы крови человека от Fc'"-нидуонрованного дииндного переокнеяешм. В то же время ноопент оказался более эффективным, поскольку действовал при более низких концентрациях в пробе, чем PBN. Ряд возрастающей ангноксидаигной активности относительно повышения показателя т оказался следующим. зюоп«гт> PBN-- нирацстам. Дня маннита (вещества. ИИСТИОГО в качестве одного из препаратов, эффективных при отеке мозга, а также применяемого в качестве формообразующего вещества нри приготовлении инъекционной формы ноопепта) не обнаружено влияния ни на одни из исследуемых параметров хсмнлюмннесцениии Для всех эффективных препаратов выявлен дою-зависимый эффект, при этом сел и в случае PBS эта зависимость была линейной, то лла ноопепта (как и в экспериментах с высвобождением глутвмата) она носили характер куполообразной кривой, что. как известно, характерно для пептидов Суммируя представленные результаты, можно заключить, что иоопепт превосходит лрутие нсслелованныс препараты по способности сохранять эндогенный аюнокенлшгтиый потенциал Полученные нами данные коррелируют с результатами исследований антиоксидантной активное!и пирацетама, выполненных Horvath ct al (2002), - ив модели фсиазиимстасульфат-индуцированной генерации свободных радикалов сыворотки крови здоровых доноров, данный ПЮТрол прими эффект только в концентрациях, в 10 рот превышающих гераисвтическне

Ранее уже был выявлен широкий спектр дггтноксидантиых эффектов ноопепта in vivo и in vilio. Oil предотвращает вызванное иммобилнзашюнным стрессом накопление продуктов ПОЛ, снижая содержание диеновых коньки а го» н конечных метаболитов ПОЛ - шнффовых оснований (Лысенко А. В н соавт 1997). Следует отмстить, что в этой работе эффект uoouarn, вводимого в лозах 0.12 mi/кг или 0.5 мг/ki за 1 час до стрессового возлейетния, сравним но выраженности с тнгранетвмом. который вводили животным в док 300 мг/кг в течение трех последовательных ,знсй, с последней инъекцией за I час до нчмобилнштнн. Также было показано, что ноонепт повышает ахти ииость эндогенных внтиоксидантиых систем * суперокснддиемутазы (СОД), каталазы и полифуициоиального антноксидантзюго фермента плазмы иерулопмтмю (Мснджсриикий А. М. и соавт. 2003). При использовании методики хемилюмннесинн исЙтрофилов. ищутитрованной онсоннзированиым шмозаном или форболмирнс та ■ аде 1 атом, было выявлено, что .тайный npcttapaT снижает генерацию активных форм кислорода (Коваленко Jl.ll , Мирамедом МП и coaet. 2Ш2), Проявление аитиокендагггного эффекта ноопепта (10л М) особенно убедительно продемонстрировано по его способности повышать /шхнчмыоа ь нейронов на культуре нейронов коры ГОЛОВНОГО мозга человеческих планов с дмгноснромниым синдромом Дауна, а также культуре иейротюв здоровых плодов. подвергнутых воэлсйсгито HjOj или FeSO< (Университет Farmmgton, Соппсепечи, USA) (Pcalsman A. el al 2003). Можно полагать, что а условиях целого организма, гак же как и переживающей нейроналыюй культуры, препарат способствует включению дополнительных защитных механизмов, обеспечивающих устойчивость к повреждающему действию своболнораликалииыч форм кислорода

Таким обратом, а исследовании была показан iiooipollHUB эффект и ноопепта в повой. мгъехкноииой форме, проанализированы его зшщпные механизмы (рис 32). Как в условиях in vivo, так и in viiro по эффективности IQOfKOT превосходил известные ноозропы пнрлисгам и аяцрютвм» аитиокеидат PBN. а также вещество с иеЛропротсктивной активностью мангнп Проведены фармажокиистичеекие исследования ноопепта, в которых не было выявлено различий между форчаиокииети кой субстанции и инъекционной формы теста УРПИ. УРАИ

Уменьшение №мы повреждения на лимита мгкаИ'НО.Н) ишемическоео

Повышение активности TiHktsennou

ГЮФЕКГ НООПЕПТА НА РАЗЛИЧНЫХ МОДЕЛЯХ ИНСУЛЬТОВ

МЕХАНИЗМЫ ДЕЙСТВИЯ НООПЕПТА

Рне. 32. Эффективность аригинальшиа днмптидпогп препарата инъекционной форме вускминх in vho и tn viiro

Суммируя представленные данные, можно утверждать, что нооиепт является препаратом с многокомпонентным типом лействня н соответствует требованиям, которым, в свете современных представлений, должен отвечать эффективный иейронротсктар Согласно подученным нами результатам, коопеттт: на морфологическом уровне эффективно снижает зону инсульта; позитивно влияет иа развившийся когнитивный дефицит и отклонения в двигательной и координационной сфере, проявляет многокомпонентное витагоннстзгкское действие в отношении звеньев потобиохимнчсского каскада - снижает высвобождение глутамота. повышает эндогенный а1Гтиоксидаитный потенциал: обладает протияоптпокснчсекимн свойствами, имеет достаточную широту терапевтического окна; не обладает мнорслаксантным и седатилиым действием.

Следует подчеркнуть, что в настоящем исследовании Препарат в инъекционной форме бил эффективен При моделировании обоих типов инсультов - геморрашчсского н ишемическото. Этот фшгт является важным в свете того, что из-тя сложностей дифференцирован типа инсультов иа ранних этапах диагностики, пре.ююядяетея целесообразным применение нейропротспоров, эффективных при обоих типах данного шболеваиия.

В соответствии с полученными рапсе данными, иски relrT проявляет антикоогуляитиую и фнбрннолтичеекую активность и усиливает дестабилизацию фибрина (Островская Р.У., Ляпни ДА. и сопат. 2002}. На моделях острого ненчмунного И хронического иммунного воспаления in vivo выявлено выраженное противовоезилительное действие этого оригинального препарата (Коваленко Л.П. Млрамсдова М.Г. и соавт. 2002). Ноопспт проникает через гсматоэицсфалическнй барьер (Бойко С.С н соавт. 1997); согласно токсикологическим ланитам, препарат не вызывает необратимых патологических изменений в органах, животных н не обладает мутагенной н нммунотокс№1сской активностью (Коваленко Л.It, Смольникова Н .М и соавт. 2002). Выявленный в настоящей роботе профиль активности ноопепта в сочетании с подученными ранее данными обуславливает целесообразность дальнейшей разработки инъекционной формы данном» препарата для лечения инсультов