Автореферат и диссертация по фармакологии (15.00.02) на тему:Изучение и стандартизация нового лекарственного средства нейропротективного действия пептидной структуры

На правах рукописи

ГУСЕВ Антон Владимирович

ИЗУЧЕНИЕ И СТАНДАРТИЗАЦИЯ НОВОГО ЛЕКАРСТВЕННОГО СРЕДСТВА НЕЙРОПРОТЕКТИВНОГО ДЕЙСТВИЯ ПЕПТИДНОЙ СТРУКТУРЫ

15.00.02 - фармацевтическая химия и фармакогнозия

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук

I ииз168161

Москва-2008

003168161

Работа выполнена в Государственном Учреждении - Научно-исследовательский институт фармакологии им. В В Закусова Российской академии медицинских наук (г Москва)

Научный руководитель

доктор фармацевтических наук, профессор Пятин Борис Михайлович Официальные оппоненты:

доктор химических наук, профессор Харитонов Юрий -Яковлевич доктор фармацевтических наук Дегтерев Евгений Викторович Ведущая организация:

Институт стандартизации и контроля лекарственых средств ФГУ «Научный центр экспертизы средств медицинского применения» Росздравнадзора

Защита диссертации состоится « /¿ъ _ 2008 г в часов на

заседании диссертационного совета Д 208 040 09 при Московской медицинской академии им ИМ Сеченова по адресу 119019, Москва, Никитский б-р, 13

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ММА им. И М Сеченова по адресу 117998, г Москва, Нахимовский проспект, 49

Автореферат разослан

Ученый секретарь диссертационного совета доктор фармацевтических наук, профессор

Садчикова Наталья Петровна

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы Инсульт - острое нарушение мозгового кровообращения (ОНМК) с развитием стойких симптомов поражения центральной нервной системы Возникающая на фоне инсульта недостаточность когнитивных функций протекает на фоне выраженных структурных изменений мозговой ткани Для лечения возникающих нарушений целесообразно применение препаратов, сочетающих ноотропную активность с нейропротекшвной

В ГУ НИИ Фармакологии им В В Закусова РАМН был синтезировано новое соединение, представляющее собой этиловый эфир М-фенилацетил-Ь-пролилглицина (ноопепт) и обладающее ноотропным, нейропротекгивным, антитромботическим и противовоспалительным эффектом

Инсульт относится к остро развивающимся патологическим состояниям, поэтому для быстрого достижения фармакологического эффекта наиболее эффективным оказывается применение парентеральных лекарственных форм

В рамках исследований по созданию инъекционной лекарственной формы нового препарата ноопепт в ГУ НИИ Фармакологии им В В Закусова РАМН была разработана лекарственная форма препарата в виде лиофилизированного порошка для инъекций Выявленное сочетание у лиофилизированной инъекционной формы ноопепта нейропротекгивного действия с положительным мнемотропным эффектом, позволяет рассматривать препарат в качестве нейропротекгора для лечения инсультов

Исходя из сказанного выше, изучение физико-химических свойств, разработка методик анализа и установление норм качества инъекционной лекарственной формы ноопепта является весьма актуальным Цель исследования

Целью настоящей работы являлось изучение химических, физических и физико-химических свойств, разработка методик фармацевтического анализа,

установление норм качества и стандартизация инъекционной лекарственной формы ноопепта в виде лиофилизированного порошка.

Задачи исследования

1 Изучить физические, химические и физико-химические свойства субстанции ноопепта, используемой в производстве инъекционной лекарственной формы (субстанция для инъекций), изучить стабильность и установить нормы качества

2 Изучить физические, химические и физико-химические свойства, изучить стабильность и установить нормы качества ноопепта лиофилизированного для инъекций

3 Разработать методики анализа субстанции для инъекций и ноопепта лиофилизированного для инъекций с использованием современных физико-химических методов хроматографических и спекгрофотометрических

4 Для получения точных и воспроизводимых результатов при применении физико-химических методов в контроле качества субстанции для инъекций и лекарственной формы оценить возможность разработки и применения Государственного стандартного образца (ГСО) ноопепта.

5 Изучить химические, физические и физико-химические свойства серийных образцов субстанции ноопепта, разработать методики анализа, изучить стабильность и установить нормы качества для разработки первичной фармакопейной статьи (ФС) на ГСО ноопепта.

6 Разработать нормативные документы проекты фармакопейных статей предприятия (ФСП) на субстанцию ноопепта для инъекций и ноопептлиофилизированный для инъекций

Научная новизна

Впервые был проведен полный фармацевтический анализ инъекционной лекарственной формы ноотропного препарата пептидной структуры ноопепта

по всем показателям, предусмотренным для контроля качества стерильных сухих лекарственных форм

В рамках работы по созданию инъекционной лекарственной формы был предложен аналитический контроль субстанции ноопепта, используемой в процессе производства для получения лекарственной формы надлежащего качества

Изучено хроматографическое поведение ноопепта и его возможных примесей методом высокоэффективной жидкостной хроматографии Подобраны условия, позволяющие добиться оптимального разделения ноопепта и возможных примесей, проводить их идентификацию, количественную оценку, а также идентифицировать и количественно оценивать содержание активного вещества

Были изучены физико-химические свойства, определена стабильность и установлены нормы качества субстанции ноопепта с целью создания ГСО ноопепта, необходимого для анализа субстанции и лекарственных форм с применением физико-химических методов В частности, впервые в оценке подлинности серийных образцов ноопепта был применен метод масс-спекгрометрии

Проведено сравнительное исследование ЯМР!Н-спектров ноопепта, снятых в ДМСО-<)6 и дейтерированном хлороформе для выбора оптимального растворителя в анализе подлинности ГСО, в результате которого было предложено использовать спектр, снятий в ДМССМв, как более простой Была изучена зависимость соотношения транс- и цис- конформеров растворов ноопепта в ДМСО-<16 от температуры и показано, что соотношение транс- и цис- конформеров ноопепта при изменении температуры исследуемых растворов практически не изменяется

Изучено влияние различных стрессовых условий на стабильность субстанции ноопепта для инъекций Показано, что субстанция устойчива к действию повышенной влажности и солнечного света, но разлагается при действии окислителей

Изучена стабильность субстанции и лекарственной формы ноопепта при хранении методом ускоренного старения и при хранении в естественных условиях На основании полученных результатов были рекомендованы сроки годности для субстанции и лекарственной формы Практическая значимость работы

На основании проведенных исследований были разработаны

- методики анализа субстанции ГСО ноопепта, установлены показатели и нормы качества Подготовлен проект ФС(т) на ГСО субстанции ноопепта,

- методики и нормы качества субстанции для производства ноопепта лиофилизированного для инъекций Подготовлен проект ФСП на субстанцию ноопепта для инъекций,

- проведено изучение физико-химических свойств ноопепта лиофилизированного для инъекций, разработаны методики анализа и определены нормы качества Разработан проект ФСП на лекарственную форму

Разработанные методики анализа внедрены в опытно-технологическом отделе ГУ НИИ Фармакологии им В В Зажусова РАМН для контроля субстанции и лекарственной формы ноопепта Апробация работы

Апробация работы проведена на межлабораторной конференции ГУ НИИ фармакологии им В В Закусова РАМН

Основные результаты диссертационной работы были представлены на XIII Российском Национальном конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, апрель 2006), на IV Международной конференции «Биологические основы индивидуальной чувствительности к психотропным средствам» (Москва, март 2006)

Публикации

По теме диссертации опубликовано 4 печатные работы

Связь задач исследования с проблемным планом фармацевтических наук

Диссертационная работа выполнена в соответствии с научным планом ГУ НИИ фармакологии им В В Закусова РАМН в рамках темы «Изучение механизмов эндо- и экзогенной регуляции функций центральной нервной системы Разработка новых оригинальных нейропсихотропных средств» № гос регистрации 012 006 06601 Базой проведения исследований являлась аналитическая группа опытно-технологического отдела ГУ НИИ фармакологии им В.В Закусова РАМН.

Основные положения, выносимые на защиту

- Результаты исследований по разработке методик анализа и установлению норм качества ГСО ноопепта

- Результаты исследований по разработке методик анализа, определению стабильности, установлению сроков годности и норм качества субстанции ноопепта для производства лиофилизированной лекарственной формы

- Результаты изучения физико-химических свойств, исследований по разработке методик анализа, определению стабильности, установлению сроков годности и норм качества ноопепта лиофшшзированного для инъекций

Объем и структура диссертации Диссертация состоит из введения, обзора литературы, главы «Объекты и методы исследования», трех глав экспериментальных исследований (результаты исследования, выводы по каждой главе, а также общие выводы), списка литературы и трех приложений Работа изложена на 207 страницах машинописного текста, содержит 43 таблицы и 21 рисунок Библиография включает 137 источников, из них 67 отечественных

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Объекты и методы исследования

Объектами исследований являлись серийные образцы субстанции этилового эфира К-фенилацетил-Ь-пролилглицина (ноопепт) (рис 1), промежуточные продукты синтеза - фенилуксусная кислота (ФУК), N-фенилацетил-Ь-пролин (ФАЛ), продукт гидролиза ноопепта - N-фенилацетил-

Ь-пролинглицин (ФАПГ), а также инъекционная лекарственная форма в виде лиофилизированного порошка

В процессе исследований были использованы методы ИК-, УФ-, ЯМР'Н, масс-спеетроскопии, высокоэффективной жидкостной хроматографии, метод титриметрии

Определение внешнего вида, растворимости, цветности и рН водных растворов, потери в массе при высушивании, температуры плавления образцов субстанции ноопепта проводили в соответствии с требованиями ФК МЗ РФ по методикам ГФ XI издания, вып 1 и 2 и в соответствии с ОСТ 91500 05 001-00

Анализ и стандартизация ноопепта для разработки ГСО

Фармакопейные показатели качества и спектральные характеристики

По внешнему виду все образцы представляли собой мелкокристаллические порошки белого цвета, легко растворимые в хлороформе, растворимые в спирте, очень мало растворимые в эфире, мало растворимые в воде при комнатной температуре (20 °С) При нагревании до 6070 °С растворимость образцов в воде увеличивалась до 1 110 Значения удельного вращения для 2% растворов ноопепта в хлороформе лежали в интервале от -116,5 до -119,0° Предварительно высушенные образцы препарата плавились в интервале 95,5-97,5 °С в пределах 1-2 °С четко, без видимого разложения Показатели «Прозрачность» «Цветность» и «рН» определяли для 0,5% водных растворов ноопепта, приготовленных при нагревании до 60-70 °С

Эмпирическая формула СпНггНгО«

Рис 1 Структурная формула ноопепта

Мм 318,39

ГСО ноопепта

Все приготовленные растворы были прозрачными и бесцветными Значение рН растворов лежало в интервале от 6,1 до 6,7 Потеря в массе ноопепта при высушивании, определенная при температуре 60 °С, не превышала 0,5%

ИК-спектр (КВг, см"1) всех образцов субстанции имеет характеристичекие полосы поглощения 1753 (карбонил эфирной группы, -COOC2Hs ), 1694 (карбонил пептидной группы, -CONH), 1635 (карбонил TSÍ-ацильной группы, N-СО-), 1558 - 1635 и 1442 - 1500 (С=С замещенного бензола) и 621 - 882 (замещение в бензольном кольце)

УФ-спегар 0,04 % растворов образцов субстанции ноопепта в этаноле в области длин волн от 230 до 300 нм имеет максимумы поглощения при 253+2 нм, 259+2 нм и 265+2 нм, наиболее выраженным из которых является максимум при 259 нм (удельный показатель поглощения 5,96±0,07) При установлении норм качества ГСО ноопепта пределы отклонения удельного показателя поглощения от среднего значения были расширены до 5,96±0,1

В ЯМР 'Н-спектре 2% раствора ноопепта, снятого при 25 °С, наблюдался двойной набор сигналов протонов CH2Gly, NHGly, С "Pro, что является следствием разной (транс/цис) ориентации заместителей относительной третичной амидной связи -C(0)-N< Изучение зависимости химических сдвигов протона NHGly от полярности растворителя (CDC13, ДМСО-с16), температуры и концентрации вещества показало, что в случае транс-конформера протон NHGly участвует в образовании внутримолекулярной водородной связи (ВМВС) с кислородом N-фенилацетила аналогично Величина химического сдвига протона NHGly транс-конформера практически не зависит от природы растворителя, что подтверждает его участие в образовании ВМВС Сигнал этого протона характеризуется меньшим значением параметра Д5 (бдмссмб ~ §азаз) Так дяя транс-конформера А5 составляет 0,81 м д, в то время как для цис-конформера AS - 2,07 м д

ЯМР 'Н -спектр ноопепта в ДМСО-<!6 (рис 2), 8, мд 1,17 (ЗН, т, СН3СН20-), 1,70 - 2,25 (4Н, м, 3-СН2, 4-СН2Рго); 3,35 - 3,50 (2Н, м, 5-СН2Рго), 3,66 (2Н с, СН2С6Н5), 3,79 (2Н, д, CH2Gly), 4,08 (2Н, кв , СН3СН20-), 4,31 (1Н

дд, 2НРго), 7,14 - 7,35 (5Н, м, СН2С6Н5), 8,29 (1Н, т, №Ю1у) (транс-конформер) Сигналы характерные дня цис-конформера 1,16 (ЗН, т, СН3СН20-), 3,62 (2Н. с, СН2С6Н5), 3,85 (2Д д, СН201у), 4,10 (2Н, кв, СН3СН20-), 4,17 (1Н, дд., 2НРго), 8,63 (1Н, т 1\тН01у) Интегрированием интенсивности сигналов протонов ИН-группы глицина в транс- цис- конформерах их соотношение оценено как 60 40

Химические сдвиги протонов во всех изученных образцах ноопепта были одинаковы

Масс-спектр образцов субстанции ноопепта был получен при следующих условиях энергия ионизирующих электронов 70 эВ, температура ионизационной камеры 150 °С, нагрев образца до 350 °С, скорость нагрева 2,7 °/с В масс-спектре исследуемых образцов наблюдался пик молекулярного иона, значение массового числа которого (318) отвечает структуре молекулы ноопепта. Распад молекулярного иона, также полностью соответствовал структуре этилового эфира К-фенилацетил-Ь-пролилглицина В спектре наблюдались пики, обусловленные отрывом из молекулярного иона групп

ОС2Н5, NHCH2COOC2Hs, CONHCH2COOC2Hs, ионов С6Н5СН2+, C4H8N+ Масс-спектр, m/z (1ота) 318 (27), 273 (7), 216 (8), 188 (65), 118 (5), 91 (60), 70 (100)

е « V ki..... «еж -" 1 w

Рис 2 ЯМР1!! спектр ноопепта в ДМСО-cU

На основании проведенных исследований методы ИК-, УФ- и ЯМР 'Н -спектроскопии были предложены для идентификации ГСО ноопепта Определение посторонних примесей в ГСО ноопепта Поскольку разработанный ранее метод ТСХ обладал низкой чувствительностью, для определения посторонних примесей в субстанции ноопепта было предложено использовать метод ВЭЖХ

Исследования проводили на жидкостном хроматографе, снабженном УФ-детекгором с переменной длиной волны

Чтобы обеспечить высокую чувствительность методики, в качестве аналитической при определении содержания посторонних примесей была выбрана длина волны 205 нм При этой длине волны чувствительность обнаружения примесей ноопепта (ФАЛ, ФУК и ФАПГ) составляла около 0,004 мкг, что позволяло определять примеси в содержании 0,05% и более

В результате изучения хроматографической подвижности ноопепта и примесей в качестве подвижной фазы была выбрана система ацетонитрил -вода - ледяная уксусная кислота (500 500 1), рН 3,6 ± 0,2 В выбранных условиях относительные времена удерживания ФАПГ, ФАП, ноопепта и ФУК составляли 0,64±0,01, 0,84±0,01,1,00 и 1,08±0,01 соответственно

В качестве рабочей была выбрана концентрация ноопепта 0,4 мг/мл, при которой наблюдалось оптимальное разделение пика ноопепта и его возможных примесей, а минимальное содержание индивидуальной примеси, которое можно было обнаружить в субстанции, исходя из данных по чувствительности, при этой концентрации составляло 0,05% Содержание посторонних примесей рассчитывали с использованием калибровочных коэффициентов (определены экспериментально), поскольку прямолинейная зависимость отклика пика от концентрации при концентрации ноопепта 0,4 мг/мл не соблюдалась

Проверку пригодности хроматографической системы проводили по следующим критериям число теоретических тарелок должно быть не менее 6000, фактор асимметрии пика ноопепта должен быть не более 1,5, коэффициент разделения пиков ноопепта и ФУК должен быть не менее 1

С использованием разработанной методики были проанализированы образцы субстанции ноопепта. Во всех образцах была обнаружена примесь ФАД содержание которой не превышало 0,2 % и фактически составляло от 0,04 до 0,14 % Других примесей обнаружено не было

Изучение стабильности и установление сроков годности субстанции ГСО

ноопепта

Изучение гигроскопичности субстанции ноопепта При 90% относительной влажности (камера с серной кислотой) образцы субстанции поглощали не более 0,1% влаги Качество образцов по показателям «Внешний вид» и «Посторонние примеси» после 90 суток хранения в указанных условиях по сравнению с исходными образцами не изменялось Изучение стабильности субстанции ноопепта при хранении Изучение стабильности проводили методом «ускоренного старения» в течение срока, эквивалентного 2 годам хранения в естественных условиях и при хранении в естественных условиях в течение 2 лет Было установлено, что качество образцов субстанции по всем показателям после хранения методом «ускоренного старения» и в естественных условиях не изменилось На основании полученных данных был установлен предварительный срок годности ГСО ноопепта - 2 года.

На основании результатов анализа были установлены предварительные нормы качества субстанции ГСО ноопепта и разработан проект ФС(т)

Нормы качества ГСО ноопепта

ПОКАЗАТЕЛИ МЕТОДЫ НОРМЫ

Описание Визуальный Белый кристаллический порошок

Растворимость ГФХ1,вып 1,с 175 Мало растворим в воде, растворим в спирте 95%, легко растворим в хлороформе, очень мало растворим в эфире

Подлинность ИК-спекгроскопия Совпадение положения полос поглощения с прилагаемым спектром

УФ-спектроскопия 0,04% раствор в спирте этиловом 95% в области от 230 до 300 нм имеет максимумы поглощения при 253 ± 2 нм, 259 ± 2 нм, 265 ± 2 нм

ЯМР'Н-спектроскопия Совпадение с прилагаемым рисунком спектра

Температура плавления ГФ XI, вып 1, с 16 От 95,5 до 98,0 "С

Прозрачность раствора ГФ XI, вып 1, с 198 Прозрачный (0,5 % раствор в воде)

Цветность раствора ГФ XI, вып. 1,с 194 Бесцветный (0,5 % раствор в воде)

рн ГФ XI, вып 1, с 113 6,0 - 6,8 (0,5 % раствор в воде, потенциометрически)

Удельный показатель поглощения УФ-спектроскопия 5,96 ± 0,1 (0,04% раствор в спирте этиловом 95 %, определенный при 259 нм)

Удельное вращение ГФ XI, вып 1,с 30 Ог-1 ¡6,00 до -1 ¡9,5 0 (2% раствор в хлороформе)

Посторонние примеси ВЭЖХ Индивидуальной примеси не более 0,5%

Потеря в массе при высушивании ГФ XI, вып 1, с 176 Не более 0,5%

Сульфатная зола и тяжелые металлы ГФ XI, вып 2, с 25, ГФ XI, вып 1, с 172 Не более 0,1% Не более 0,001%

Срок годности 2 года

Анализ и стандартизация субстанции ноопепта для инъекционных лекарственных форм

Физико-химические свойства и спектральные характеристики По внешнему виду все образцы субстанции представляли собой мелкокристаллические порошки белого цвета. В таблице 1 представлены результаты изучения физико-химических свойств субстанции ноопепта дня инъекций

Таблица 1

Физико-химические свойства субстанции ноопепта дшг инъекций

N серии Показатели качества

Растворимость Прозрач ность Цвет-ть РН 1 пл, °С И. 0 Потеря в массе при высуши вании, %

вода спирт этиловый 95% хпоро форм эфир

1-06 1 200 1 15 1 75 1 1700 прозрач ный б/ц 6,30 96 0-96 5 -116,4 0

2-05 1 200 110 1 2,5 1 1000 прозрач ный б/ц 6,00 95,5-97 0 -115,8 0

3-05 1 250 1 20 1 5 1 3000 прозрач ный б/ц 6 61 95,5-96,5 -119 8 0,068

4-05 1 230 1 20 1 10 1 1500 прозрач ный б/ц 6,05 95,5-96,5 -114,0 0 067

5-05 1 220 1 20 1 3 1 3000 прозрач ный б/ц 5,95 95 0-96,0 -114,5 0,040

Спектроскопия в инфракрасной области По положению и интенсивности полос поглощения ИК-спектры образцов субстанции ноопепта для инъекций были практически идентичны спектрам, полученным для образцов, используемых для создания ГСО Предложено проводить идентификации ноопепта по совпадению полос поглощения в ИК-спектре анализируемой субстанции с полосами поглощения в ИК-спектре стандартного образца.

Спектроскопия в УФ-области Спектры образцов ноопепта в этаноле, снятые в диапазоне длин волн 230 - 300 нм имеют максимум поглощения при 253+2 нм, 259+2 нм и 265+2 нм, наиболее выраженным из которых является максимум при длине волны 259 нм Удельный показатель поглощения при этой длине волны (Е1%!см) 6,17, молярный показатель поглощения (е) 200 Идентификацию ноопепта предложено проводить по наличию соответсвующих максимумов в УФ-спектрах растворов препарата в этаноле 253 ± 2 нм, 259 ± 2 нм, 265 ± 2 нм

ЯМР'Н- спектроскопия ЯМР'Н - спектры стандартного образца (СО) ноопепта и субстанции ноопепта для инъекций в ДМСО-с1б практически идентичны по положению и интенсивности сигналов

Определение посторонних примесей в субстанции ноопепта для инъекций методом ВЭЖХ

Определение посторонних примесей в субстанции ноопепта для инъекций проводили при условиях, подобранных ранее для анализа ГСО ноопепта. Содержание индивидуальной примеси в образцах субстанции было предложено определять методом внешнего стандарта с использованием ГСО ноопепта

При анализе образцов субстанции с помощью разработанной методики была обнаружена примесь ФАП в содержании, не превышающем 0,3 %, а также пики неиндифицированных примесей с относительными временами удерживания около 0,82 и 0,89 в содержании не более 0,5% и 0,4% соответственно

Количественное определение субстанции ноопепта для инъекций Для определения количественного содержания ноопепта в субстанции для инъекций была воспроизведена методика титриметрического определения содержания ноопепта Однако добиться точных и воспроизводимых результатов не удалось даже после попыток оптимизации методики, поэтому было предложено использовать физико-химические методы анализа, требующие применения стандартного образца

Метод УФ-спектрофотометрии в количественном анализе ноопепта Исследования проводили при длине волны 259 нм, ноопепт растворяли в этиловом спирте 95% Прямолинейная зависимость оптической плотности раствора от концентрации ноопепта наблюдалась в интервале от 0,05 мг/мл до 0,8 мг/мл Коэффициент корреляции 0,9999 Рабочей была выбрана концентрация 0,4 мг/мл (оптическая плотность около 0,250)

Определение содержания ноопепта в субстанции для инъекций было определено путем сравнения оптических плотностей анализируемого раствора и раствора ГСО и с использованием значения удельного показателя поглощения (Е1%1сы) ГСО ноопепта (см табл 2 и 3) Было установлено, что разница между средними значениями количественного определения ноопепта в субстанции для инъекций с использованием стандартного образца и удельного показателя поглощения статистически не значима

Таблица 2

Результаты количественного определения ноопепта с использованием

ГСО

Номер серии 1-05 2-05 3-05 4-05 5-05

Количественное 100,00 99,16 101,28 101,12 99,72

содержание 99,16 100,00 100,85 101,57 100,13

препарата, % 99,58 99,58 100,00 101,55 99,31

99,16 99,16 100,00 101,54 99,31

99,58 99,58 100,43 101,68 99,31

Метрологические Хср=99,49 ХсР=99,49 Хор= 100,51 Хс=101,54 Хср=99,56

характеристики S=0,35 S=0,35 S=0,55 S=0,42 S=0,37

(п=5, Р=95%) SXcp=0,16 SXcp=0,16 Sxcp=0,25 SXcP=0,19 SXcP=0,17

ДХ=0,44 ДХ=0,44 ДХ=0,69 ДХ=0,52 ДХ=0,46

е=0,44% е=0,44% s=0,68% е=0,52% 6=0,47%

Таблица 3

Результаты количественного определения ноопепта с использованием _ удельного показателя поглощения_1__

Номер серии 1-05 2-05 3-05 4-05 5-05

Количественное 100,33 99,48 100,60 101,43 100,01

содержание 99,48 100,33 100,18 100,27 100,43

препарата, % 99,91 99,91 100,33 100,85 99,59

99,48 99,48 100,33 100,44 99,59

99,91 99,41 100,76 101,27 99,59

Метрологические ХсР=99,82 Хср=99,82 Хср=100,44 ХсР=100,85 Хср=99,84

характеристики 5=0,36 3=0,36 3=0,55 8=0,54 5=0,37

(п=5, Р=95%) 8хф=0,16 ЗХср=0,16 ЗХср=0,25 ЗХср=0,24 5хср=0,17

ДХ=0,44 ДХ=0,44 ДХ=0,69 ДХ=0,67 ДХ=0,46

£=0,44% £=0,44% £=0,68% £=0,67% £=0,46%

Количественное определение субстанции ноопепта для инъекций методом ВЭЖХ

Количественное определение ноопепта проводилось при длине волны 259 нм в условиях определения посторонних примесей по методу внешнего стандарта.

Прямолинейная зависимость отклика детектора от концентрации растворов ноопепта наблюдалась в интервале от 0,00125 мг/мл до 0,9 мг/мл и описывалась уравнением у = 1615324х + 3416 Коэффициент корреляции составлял 0,9999 В качестве рабочей была выбрана концен1рация 0,4 мг/мл

Результаты определения статистически обработаны и представлены в таблице 4

Таблица 4

Результаты количественного определения ноопепта для инъекций _методом ВЭЖХ _

Номер серии 1-05 2-05 3-05 4-05 5-05

Количественное содержание (%) Х= 99,89 X = 99,75 X = 99,60 X = 99,69 X = 99,79

Метрологические характеристики (Р=95%, п=5) 5= 0,0938 5х= 0,0419 ДЛ^ 0,1166 е= 0,12% 5=0,1729 5х= 0,0773 &Х = 0,2150 £= 0,22% 5=0,0787 5х = 0,0352 ДХ= 0,0978 £= 0,09% 5=0,0980 5х= 0,0438 £Л = 0,1218 £= 0,12% 5=0,1044 5х = 0,0467 ДХ = 0,1298 €= 0,13%

Поскольку ошибка количественного определения ноопепта методом ВЭЖХ меньше, чем при определении методом спектрофотометрии в проект ФСП на субстанцию ноопепта для инъекций была включена методика ВЭЖХ со следующими нормами содержание ноопепта должно быть от 99,0% до 100,5% Одновременно с количественым определением ноопепта предложено проводить идентификацию по совпадению времен удерживания пиков испьпуемого раствора и раствора ГСО

Изучение стабильности субстанции ноопепта для инъекпий под действием внешних факторов Изучена стабильность образцов субстанции ноопепта в условиях повышенной влажности, под воздействием солнечного света, под влиянием окислителей (водорода пероксид) Контроль стабильности проводили визуально (изменение внешнего вида образцов), методом высушивания до постоянной массы, методом ВЭЖХ Исследования показали, что препарат негигроскопичен, устойчив к действию солнечного света, при действии окислителей происходит разложение препарата. На хроматограмме образцов, подвергшихся действию водорода пероксида, обнаруживается пики ФУК, ФАП, ФАПГ, а также ряд пиков неидентифицированных примесей

Изучение стабильности субстанции при хранении проводили методом «ускоренного старения» в течение срока, эквивалентного 2 годам хранения в естественных условиях и при хранении в естественных условиях в течение 2 лет Контроль качества препарата проводили по методикам, разработанным для включения в проект ФСП на субстанцию

Установлено, что качество образцов субстанции после хранения методом «ускоренного старения» и в естественных условиях не изменилось На основании полученных данных был установлен предварительный срок годности субстанции ноопепта для инъекций - 2 года

На основании результатов анализа были установлены нормы качества субстанции ноопепта для инъекций и разработан проект ФСП

1В

Нормы качества субстанции ноопепта для инъекций

ПОКАЗАТЕЛИ МЕТОДЫ НОРМЫ

Описание Визуальный Белый кристаллический порошок

Растворимость ГФ XI, вып 1,с 175 Мало растворим в воде, растворим в спирте 95%, легко растворим в хлороформе, очень мало растворим в эфире

Подлинность ИК-спектроскопия Полосы поглощения в ИК-спектре препарата должны совпадать с полосами поглощения в ИК-спектре стандартного образца

УФ-спекгроскопия 0,04% раствор в спирте в области от 230 до 300 нм должен иметь максимумы поглощения при 253 ± 2 нм, 259 ± 2 нм, 265 ±2 нм

ВЭЖХ Время удерживания основного пика на хроматограмме испытуемого раствора должно совпадать со временем удерживания основного пика на хроматограмме раствора стандарта

Температура плавления ГФ XI, выл 1, с 16 От 95,0 до 98,0 °С

Прозрачность раствора ГФ XI, вып 1, с 198 Прозрачный (0,5 % раствор в воде)

Цветность раствора ГФ XI, вып 1, с 194 Бесцветный (0,5 % раствор в воде)

рН ГФ XI, вып 1, с 113 5,5 - 7,0 (0,5 % раствор в воде, потенциометрически)

Удельное вращение ГФХ1, вып 1, с 30 От -ИЗ,0 0 до -120,0 ° (2% раствор в хлороформе)

Посторонние примеси ВЭЖХ индивидуальной примеси не более 0,5% сумма примесей не более 1,0%

Потеря в массе при высушивании ГФ XI, вып. 1,с 176 Не более 0,5%

Количественное определение ВЭЖХ От 99,0 до 100,5%

Срок годности 2 года

Изучение физико-химических свойств лекарственной формы По внешнему виду все образцы лиофюшзированной инъекционной лекарственной формы ноопепта представляли собой массу белого цвета в

ампулах вместимостью 2 мл Растворы содержимого 5 ампул препарата в 5 мл воды всех серий препарата были прозрачными и бесцветными Значение рН находилось в интервале от 5,9 до 6,3 Отклонения от средней массы всех образцов лиофшшзированной лекарственной формы ноопепта не превышало установленных ГФ XI норм ± 10%

Проведенные исследования по изучению стабильности ноопепта показали, что содержание влаги является важным показателем для препарата, поэтому было предложено определять также потерю в массе при высушивании лиофилизированного ноопепта. Потеря в массе образцов лиофилизированной лекарственной формы не превышала 1% (60 °С)

Определение содержания посторонних примесей в лекарственной форме Определение показателя «Посторонние примеси» в ноопепте лиофилизированном для инъекций проводили методом ВЭЖХ в условиях, разработанных для анализа субстанции ноопепта.

Для того чтобы исключить влияние маннита, входящего в состав лекарственной формы ноопепта, на результаты анализа, был проанализирован модельный раствор маннита с концентрацией, соответствующей содержание маннита в испытуемах растворах (0,4 мг/мл) (Рис 3)

ШАЬз

40

20

4 -474

О

о

5

10

ГШ п

Рис 3 Хроматограмма раствора маннита

ТПАЬ8

40 20

О

Рис. 4 Хроматограмма лиофилизированной лекарственной формы На хроматограммах раствора манита, так же, как и лиофилизированного ноопепта (рис 4), присутствовали два пика с относительными временами удерживания 0,44 (3,97 мин) и 0,50 (4,47 мин) Однако ни одна из примесей в субстанции ноопепта, а также ни один из продуктов синтеза или гидролиза ноопепта, по времени удерживания не совпадали с пиками из раствора маннита, поэтому присутствие маннита не мешало проведению анализа

При анализе чистоты лиофилизированной лекарственной формы ноопепта было установлено, что в ней могут присутствовать примеси из субстанции ФАП, а также до двух неидентифицированных примесей в содержании не более 0,5% каждой, а также примесь ФАПГ (продукта гидролиза ноопепта), содержание которой не превышало 1% (таблица 5)

Таблица 5

Содержание посторонних примесей в ноопепте лиофилизированном для ___инъекций_

5. 6 72« 1 ? 256 тает

№ серии содержание примесн,% Сумма

ФАП (и, = 0,84) ФАПГ Ом* = 0,64) Невдентифицированные примеси

I (1^ = 0,82) ¡1(1^ = 0,89)

1-06 — 0,41 0,18 — 0,59

2-06 0,26 0,33 — — 0,59

3-06 — 0,72 0,21 — 0,93

4-06 — 0,65 0,21 — 0,86

5-06 — 0,20 0,43 0,35 0,98

Количественное определение ноопепта в лекарственной форме Количественное определение было проведено методом ВЭЖХ в условиях, описанных для субстанции ноопепта с использованием внешнего стандарта Результаты определения статистически обработаны и представлены в таблице 6

Одновременно с количественным определением предложено проводить идентификацию ноопепта в лиофилизированной лекарственной форме по совпадению времен удерживания пиков испытуемого раствора и раствора ГСО

Таблица 6

Результаты количественного определения ноопепта в _ лекарственной форме __

Номер серии 1-06 2-06 3-06 4-06 5-06

Количественное содержание (мг) Х~ 1,0040 X = 0,9980 X = 1,0080 X = 1,0080 X =1,0020

Метрологические характеристики (Р=95%, п=5) 5= 0,0126 5л =0,0056 АХ =0,0157 Е- 1,56% 5=0,0084 =0,0038 АХ =0,0104 £=1,04% 5=0,0131 5а = 0,0059 АХ =0,0163 £=1,62% 5=0,0148 5х = 0,0066 АХ =0,0184 £=1,83% 5=0,0130 5* =0,0058 АХ =0,0162 £=1,62%

Определение показателя «Однородность дозирования» Отклонения по показателю «Однородность дозирования», определенного методом ВЭЖХ в условиях количественного определения, во всех образцах лиофилизированной лекарственной формы ноопепта не превышали установленных ГФ XI норм и укладывались в пределы ± 15%

Изучение стабильности и установление сроков годности лекарственной формы ноопепта

Изучение стабильности проводили методом «ускоренного старения» в течение срока, эквивалентного 1 и 2 годам хранения в естественных условиях

В процессе хранения в указанных условиях происходило изменение качества по следующим показателям «рН раствора», «посторонние примеси», «количественное содержание» Наблюдалось снижение значения рН, которое при выпуске лиофилизированного ноопепта составляло от 5,9 до 6,3, после

одного года хранения составляло от 5,6 до 5,9, а после двух лет хранения - от 5,3 до 5,8

Определение содержания посторонних примесей в препарате показало, что при хранении происходит увеличение содержания ФАПГ во всех образцах в среднем на 0,6% за два года. По истечении 2 лет хранения содержание ФАПГ составляло от 0,87 до 1%, а суммарное содержание примесей находилось в пределах интервала 1,06 - 1,65% Содержание любой другой индивидуальной примеси в препарате в течение 2 лет хранения не изменялось и по окончании срока хранения не превышало 0,5%

Количественное содержание ноопепта в лиофилизированной лекарственной форме при хранении также уменьшалось При выпуске препарата оно составляло в среднем 1,003 мг/амп, а по истечении 2 лет хранения - 0,969 мг/мл

Изучение стабильности лекарственной формы не завершено и в настоящее время продолжается

В результате проведенных исследований разработаны предварительные нормы качества для ноопепта лиофилизированного для инъекций 1 мг и разработан проект ФСП

Нормы качества ноопепта лиофилизированного для инъекций

ПОКАЗАТЕЛИ МЕТОДЫ НОРМЫ

Описание Визуальный Масса белого цвета в ампулах вместимостью 2 мл

Подлинность ВЭЖХ Время удерживания основного пика на хроматограмме испытуемого раствора должно совпадать со временем удерживания основного пика на хроматограмме раствора стандарта

Средняя масса и однородность по массе ГФ XI, выл 2, с 140 0,011 г Не более ± 10%

Прозрачность ГФ XI, выл 1, с 198 Прозрачный (раствор 5 ампул в 5 мл воды)

Цветность ГФ XI, вып. 1, с 194 Бесцветный (раствор 5 ампул в 5 мл воды)

РН ГФ XI, выл I, с ПЗ, потенциометрически От 5,0 до 7,0 (раствор 5 ампул в 5 мл воды)

Посторонние примеси ВЭЖХ Единичной примеси - не более 1,0% Суммарное содержание примеси не должно превышать 2,0%

Однородность дозирования ВЭЖХ Не более ± 15%

Потеря в массе при высушивании ГФ XI, выл 1, с 176 Не более 1,0%

Количественное определение ВЭЖХ 0,9-1,1 мг в ампуле

ВЫВОДЫ

1 Изучены физико-химические свойства, спектральные характеристики (ИК-, УФ-, ЯМР'Н и масс-спектры), а также хроматографическая подвижность (ВЭЖХ) субстанции стандартного образца ноопепта.

2 С использованием инструментальных методов разработаны методики определения подлинности, чистоты, необходимые для оценки качества ГСО ноопепта.

3 Изучена стабильность образцов субстанции ноопепта при хранении методом «ускоренного старения» и в естественных условиях Установлены нормы качества, срок годности и разработан проект фармакопейной статьи на субстанцию ГСО ноопепта.

4 Изучены физические, физико-химические свойства и спектральные характеристики субстанции ноопепта для инъекций Определены фармакопейные показатели качества субстанции, получены ИК-, УФ-, ЯМР'Н -спектры, показана возможность идентификации ноопепта в субстанции этими методами

5 Разработаны методики идентификации, определения посторонних примесей и количественного определения субстанции ноопепта для инъекций методом ВЭЖХ с использованием стандартного образца.

6 Изучено влияние на субстанцию ноопепта для инъекций повышенной влажности и действия окислителей Показано, что ноопепт не

гигроскопичен, и не подвергается гидролизу в условиях 90% влажности, но неустойчив к действию окислителей

7 Проведено исследование стабильности субстанции ноопепта для инъкций при хранении методом «ускоренного старения» и в естественных условиях Установлены нормы качества, срок годности и разработан проект ФСП на субстанцию инъекций

8 Изучены физико-химические свойства лиофилизированной лекарственной формы ноопепта для инъекций

9 Разработаны методики идентификации, определения посторонних примесей и количественного содержания ноопепта в лекарственной форме методом ВЭЖХ с использованием СО ноопепта Определены основные показатели качества лекарственной формы

10 Проведено изучение стабильности лиофилизированной лекарственной формы ноопепта методом «ускоренного старения» и установлены предварительные нормы ее качества. На основании проведенных исследований составлен проект фармакопейной статьи предприятия на лекарственную форму

По теме диссертации опубликованы следующие работы

1 Гусев А В, Грушевская Л Н, Степаненко О Б , Авдюнина Н И, Пятин Б М, Прокофьева В И Разработка норм качества субстанции ноопепта для создания Государственного стандартного образца (ГСО)// Тезисы докладов XIII Российского Национального конгресса «Человек и лекарство» - Москва, 2006 - С 779

2 Гусев А В , Грушевская Л Н, Степаненко О Б , Авдюнина Н И, Пятин Б М, Прокофьева В И Разработка норм качества субстанции ноопепта для инъекционных лекарственных форм// Тезисы докладов XIII Российского Национального конгресса «Человек и лекарство» - Москва, 2006-С 779-780

3 Гусев АВ, Пятин БМ, Авдюнина НИ, Климова НВ, Алексеев КВ Фармацевтический анализ лиофилизированной лекарственной формы ноопепта для инъекций// Тезисы IV Международной конференции «Биологические основы индивидуальной чувствительности к психотропным средствам» - Москва, 2006 - С 25-26

4 Гусев А В , Грушевская Л Н, Степаненко О Б , Авдюнина Н И, Пятин БМ Разработка методик анализа субстанции ноопепта для создания государственного стандартного образца (ГСО)// Химико-фармацевтический журнал -2007 -Т41, №12 -С 44-47

Сдано в печать 21 апреля 2008года Объем печати 1,5625п л ЗаказШ 098/8 Тираж 100 экз Отпечатано в типографии ООО НВП «ИНЭК» г Москва, Ленинградское шоссе, д 18

АКТУАЛЬНОСТЬ ТЕМЫ

Инсульт — острое нарушение мозгового кровообращения (ОНМК) с развитием стойких симптомов поражения центральной нервной системы, характер которых зависит от локализации повреждённой зоны мозга. Инсульт является второй по частоте причиной смерти на земле, ежегодно в индустриально развитых странах одна из десяти смертей связана с ОНМК.

Возникающая на фоне инсульта недостаточность когнитивных функций (внимание, память, пространственная ориентация) протекает на фоне выраженных структурных изменений мозговой ткани. Для лечения возникающих нарушений целесообразно применение препаратов, сочетающих ноотропную активность с нейропротективной. Однако применяемые в настоящее время для лечения когнитивного дефицита ноотропные препараты, имеют ряд ограничений и недостатков. Родоначальник класса ноотропов, пирацетам, в значительном числе случаев недостаточно эффективен, а большинство нейропротективных препаратов, применяемых в настоящее время (антиоксиданты, антагонисты кальциевых каналов), не обладают прямым положительным влиянием на мнестические функции. Кроме того, вводимые церебральные вазодилататоры, вызывающие «обкрадывание» мозговой ткани за счет выраженных изменений общей гемодинамики, могут даже приводить к ухудшению когнитивной активности, особенно у пожилых людей.

В НИИ Фармакологии им. В.В. Закусова РАМН была выдвинута гипотеза о пептидергическом механизме действия пирацетама [17], что послужило основой для создания серии его дипептидных аналогов [80]. Среди синтезированных дипептидов наибольшей активностью обладал этиловый эфир ТЧ-фенилацетил-Ь-пролилглицина (НООПЕПТ). У препарата было выявлено наличие ноотропного [41, 112, 113], нейропротективного [24, 34, 41, 112], а также антитромботического [42] и противовоспалительного [30] эффектов. Фармакокинетическое изучение выявило высокую специфическую биодоступность для тканей мозга [78, 79], а исследование фармакодинамики — вовлечение специфических механизмов действия [33, 42, 1 112, 114, 125].

Инсульт относится к остро развивающимся патологическим состояниям, поэтому для быстрого достижения фармакологического эффекта наиболее эффективным оказывается применение парентеральных лекарственных форм. Кроме того, у ряда больных, в силу их состояния, применение пероральных форм препарата [60] невозможно.

Основываясь на изучении физико-химических свойств ноопепта, при подборе оптимального состава вспомогательных веществ и технологии производства в опытно-технологическом отделе НИИ Фармакологии была разработана инъекционная лекарственная форма ноопепта в виде лиофилизированного порошка [21, 23, 24].

В ходе проведенного фармакологического изучения лиофилизированного порошка ноопепта для инъекций в условиях моделирования локального ишемического повреждения и на модели геморрагического инсульта была показана способность лекарственной формы эффективно снижать расстройства ЦНС. Также было установлено положительное влияние инъекционной формы на обучение и память [58].

Выявленное сочетание у лиофилизированной инъекционной формы ноопепта нейропротективного действия с положительным мнемотропным эффектом, позволяет рассматривать препарат в качестве нейропротектора для лечения инсультов [58].

Исходя из сказанного выше, изучение физико-химических свойств, разработка методик анализа и установление норм качества инъекционной лекарственной формы ноопепта является весьма актуальным.

Цель исследования

Целью настоящей работы являлось изучение химических, физических и физико-химических свойств, разработка методик фармацевтического анализа, установление норм качества и стандартизация инъекционной лекарственной формы ноопепта в виде лиофилизированного порошка.

Задачи исследования

1. Изучить физические, химические и физико-химические свойства субстанции ноопепта, используемой в производстве инъекционной лекарственной формы (субстанция для инъекций), изучить стабильность и установить нормы качества.

2. Изучить физические, химические и физико-химические свойства, изучить стабильность и установить нормы качества ноопепта лиофилизированного для инъекций.

3. Разработать методики анализа субстанции для инъекций и ноопепта лиофилизированного для инъекций с использованием современных физико-химических методов: хроматографических и спектрофотометрических.

4. Для получения точных и воспроизводимых результатов при применении физико-химических методов в контроле качества субстанции для инъекций и лекарственной формы оценить возможность разработки и применения Государственного стандартного образца (ГСО) ноопепта.

5. Изучить химические, физические и физико-химические свойства серийных образцов субстанции ноопепта, разработать методики анализа, изучить стабильность и установить нормы качества для разработки первичной фармакопейной статьи (ФС) на ГСО ноопепта.

6. Разработать нормативные документы: проекты фармакопейных статей предприятия (ФСП) на субстанцию ноопепта для инъекций и ноопепт лиофилизированный для инъекций.

Научная новизна

Впервые был проведен полный фармацевтический анализ инъекционной лекарственной формы ноотропного препарата пептидной структуры ноопепта по всем показателям, предусмотренным для контроля качества стерильных сухих лекарственных форм.

В рамках работы по созданию инъекционной лекарственной формы был предложен аналитический контроль субстанции ноопепта, используемой в процессе производства для получения лекарственной формы надлежащего качества.

Изучено хроматографическое поведение ноопепта и его возможных примесей методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. Подобраны условия, позволяющие добиться оптимального разделения ноопепта и возможных примесей, проводить их идентификацию, количественную оценку, а также идентифицировать и количественно оценивать содержание активного вещества.

Были изучены физико-химические свойства, определена стабильность и установлены нормы качества субстанции ноопепта с целью создания ГСО ноопепта, необходимого для анализа субстанции и лекарственных форм с применением физико-химических методов. В частности, впервые в оценке подлинности серийных образцов ноопепта был применен метод масс-спектрометрии.

Проведено сравнительное исследование ЯМР'Н -спектров ноопепта, снятых в ДМСО-ёб и дейтерированном хлороформе для выбора оптимального растворителя в анализе подлинности ГСО, в результате которого было предложено использовать спектр, снятый в ДМСО-с16, как более простой. Была изучена зависимость соотношения транс- и цис- конформеров растворов ноопепта в ДМСО-с1б от температуры и показано, что соотношение транс- и цис- конформеров ноопепта при изменении температуры исследуемых растворов практически не изменяется.

Изучено влияние различных стрессовых условий на стабильность субстанции ноопепта для инъекций (повышенная влажность, солнечный свет, действие окислителей). Показано, что субстанция устойчива к действию первых двух факторов, а при действии окислителей подвиргается как гидролизу, так и окислению.

Изучена стабильность субстанции и лекарственной формы ноопепта при хранении методом ускоренного старения и при хранении в естественных условиях. На основании полученных результатов были рекомендованы сроки годности для субстанции и лекарственной формы.

Практическая значимость На основании проведенных исследований были впервые разработаны:

- методики анализа субстанции ГСО ноопепта, установлены показатели и нормы качества. Подготовлен проект ФС(т) на ГСО субстанции ноопепта;

- методики и нормы качества субстанции для производства ноопепта лиофилизированного для инъекций. Подготовлен проект ФСП на субстанцию ноопепта для инъекций;

- проведено изучение физико-химических свойств ноопепта лиофилизированного для инъекций, разработаны методики анализа и определены нормы качества. Разработан проект ФСП на лекарственную форму.

Разработанные методики анализа внедрены в опытно-технологическом отделе ГУ НИИ Фармакологии им. В.В. Закусова РАМН для контроля субстанции и лекарственной формы ноопепта. Апробация работы

Основные результаты диссертационной работы были представлены на XIII Российском Национальном конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, апрель 2006); на IV Международной конференции «Биологические основы индивидуальной чувствительности к психотропным средствам» (Москва, март 2006).

Публикации

По теме диссертации опубликовано 4 печатные работы. Связь задач исследования с проблемным планом фармацевтических наук

Диссертационная работа выполнена в соответствии с научным планом ГУ НИИ фармакологии РАМН им. В.В. Закусова в рамках исследований, направленных на поиск и изучение новых фармакологически активных веществ, способных воздействовать на нормальные и патологически измененные функции нервной системы. Базой проведения исследований являлась аналитическая группа опытно-технологического отдела ГУ НИИ фармакологии РАМН.

Основные положения, выносимые на защиту:

- Результаты исследования по установлению норм качества для Государственного стандартного образца субстанции ноопепта.

Результаты исследований по разработке методик анализа для контроля качества субстанции ноопепта для производства ноопепта лиофилизированного для инъекций. Результаты исследований по влиянию различных факторов на качество субстанции.

- Результаты исследования ноопепта лиофилизированного для инъекций, а именно: результаты изучения физико-химических свойств лекарственной формы и исследований по разработке методик ее анализа.

- Полученные результаты экспериментальных исследований по оценке качества субстанции и лекарственной формы с применением стандартного образца ноопепта.

- Результаты по изучению стабильности при различных режимах хранения для субстанции и лекарственной формы.

ОБЩИЕ ВЫВОДЫ

1. Изучены физические, физико-химические свойства и спектральные характеристики субстанции стандартного образца ноопепта методами ИК-, УФ-, ПМР- и масс-спектроскопии. Изучена хроматографическая подвижность стандартного образца ноопепта методом ВЭЖХ.

2. Определены фармакопейные показатели качества стандартного образца ноопепта, разработаны методики определения подлинности методами ИЕС-, УФ- и ПМР-спектроскопии и определения посторонних примесей методом ВЭЖХ.

3. Изучена стабильность субстанции ноопепта для разработки ГСО при хранении методом «ускоренного старения» и в естественных условиях. Установлены нормы качества, срок годности и разработан проект фармакопейной статьи на субстанцию ГСО ноопепта.

4. Изучены физические, физико-химические свойства и спектральные характеристики субстанции ноопепта для инъекционной лекарственной формы. Определены фармакопейные показатели качества субстанции. Получены ИК-, УФ-, ПМР-спектры субстанции ноопепта для инъекционной лекарственной формы, показана возможность идентификации ноопепта в субстанции для инъекционной лекарственной формы этими методами.

5. Разработаны методики определения посторонних примесей в субстанции ноопепта для инъекционной лекарственной формы, идентификации и количественного определения ноопепта методом ВЭЖХ с использованием стандартного образца ноопепта.

6. Изучена стабильность субстанции ноопепта для инъекционной лекарственной формы в условиях повышенной влажности и под действием окислителей. Показано, что ноопепт не гигроскопичен, и не подвергается гидролизу в условиях 90% влажности, но неустойчив к окислению в водных растворах перекиси водорода.

7. Изучена стабильность субстанции ноопепта для инъекционной лекарственной формы при хранении методом «ускоренного старения» и в естественных условиях. Установлены нормы качества, срок годности и разработан проект фармакопейной статьи предприятия на субстанцию для инъекционной лекарственной формы.

8. Изучены физико-химические свойства лиофилизированной лекарственной формы ноопепта для инъекций.

9. Разработаны методики идентификации, определения посторонних примесей и количественного содержания ноопепта в лекарственной форме методом ВЭЖХ с использованием СО ноопепта. Определены основные показатели качества лиофилизированной лекарственной формы ноопепта.

Ш.Проведено изучение стабильности лиофилизированной лекарственной формы ноопепта методом «ускоренного старения» и установлены предварительные нормы ее качества. На основании проведенных исследований составлен проект фармакопейной статьи предприятия на лиофилизированный порошок ноопепта для инъекций.