Автореферат и диссертация по медицине (14.00.14) на тему:Некоторые иммунологические аспекты роста и клонообразования трансплантируемых опухолей

Министерство Здравоохранения Республики Казахстан Кавахский научно-исследовательский институт онкологии и тадиологии

Р Г 5 01

На прярах рукописй - ' ■ ..........УДК 616-006.04:615.37:612- 092.9.

ТОБАГАБНЛОЕА Лявеат Толепбергеновна

НЕКОТОРЫЕ ИММУНОЛОГИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ РОСТА К КЖЖ00БРА30БАНЖ ТРАНСПЛАНТИРУЕМЫХ ОПУХОЛЕЙ

Специальность 14.00.14. - Онкология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степвйй кандидата биологических наук

Алхагн - 1995

Работа выполнена в Казахском научно-исследовательском институте онкологии у радиологии Министерства Здравоохранения Республики Казахстан

Научные руководители: - доктор медицинских наук, профессор,

член-корреспондент МАК Ксмаилов Еулат Кскаилович

- доктор медицинских наук, профессор Еаидева Сауле Абднхамитовна

Ведуиал организация /предприятие/;

Официальные оппоненты:

Алматинский Государственный медицинский институт им. С.Д.Асфендиярова

доктор медицинских наук, профессор, академик МАИ Ефимов Михаил Львович

Защита оостоится

доктор медицинских наук, профессор, заместитель директора по научной работе института питания HAH PK Цои Игорь Гиленопич

]9Э

г, в

часов на еасе-

дании Специаливирс ванного Совета Д.OS.10,01 в Кааахоком научно-исследовательском институте онкологий й радиологии по адресу: г. Алматнt 480072, пр. Абая, 91.

С диссертацией мокно ознакомиться в библиотеке института.

Автореферат равослак

199

Ученни секретарь Споциаливироьаннаго Совета доктор ывдиаинехих наух ^

—А.С.Косаев

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТУ

Актуальность проблемы. В последние десятилетия в экспериментальной онкологии большую значимость приобретают модели опухолевых субитаммов, полученные путем длительной селекции на повышение клопогонной способности и специфической органотропности к легочной ткшш. Благодаря клоналыюму происхождении (формирующихся в легких опухолевых узлов, ити субштаммы оказались весьма удобными и высокоинформативными яри изучении различных аспектов-злокачественного роста, в частности генетического полиморфизма по различным фундаментальным признакам, при определения их чувствительности к действию различных противоопухолевых агентов и т. д. Наряду о этим, широкая вариабельность эф'юктишюста клонообразования опухолей от опыта к опиту в ходе селекции, а также в пределах одного опыта при одной и toi: хе доза меточного инокуллта существенно огреничко£»т-юс использование- s облачных экспериментах. В частности, в радиобиологических и хи-мкотарапввтяческих иоследошшиях из-за большого раас;-рооа -результатов затруднена оценка радиационной и лекарственной чувствительности опухолей методом легочных колоний по величине фракции иокаших адоток л определение параметров До, п m кривим доза-

;.Ьдель внутривенной тргшсшк-штшиш опухолевых меток указанных гед.инитеапых субиташоз предполагает постоянное доотруктиь-нов Едкяьие на них циркулируем« в крош издуиоксмпетентши 'ioie~ ток, что способствует отбору имгдунорезкотонтних их вариантов в хода дон-голькой. селакоип ьа повшенио кдоногошюй способности. U ряде работ показана прямая защсимость мавду метастатической (кдо-ногенной) активностью опухолевых клеток, с одной стороны, и их резистентностью к иммунологическим воздействиям организма реципиента, о другой (У. Уататига et a#.)l$Qi;F.Hi.tcci:u.'et at I9:Jfl).

Таким образом, можно предположить, что вариации элективное-™ ти клонообразования опухолей обусловлены гетерогенностью популя-* дай животных-реципиентов по уровню противоопухолевого иммунитет«. Это обстоятельство и крайняя необходимость изучения биология кло-ногенных меток человека и животных методом клепального анализа далаат весьма актуальным!! исследования, направленные на выявление иммунологических показателей наиболее адекватно отражали* состояние систем организма, ответственных за проявления естественной йнтибластомггой резистентности,

В связи с вышеизложенным целью нашего исследования явилось изученио закономерностей изменений иммунологических показателей животных при трансплантации оцухолей.

Задачи исследования.

I.Определение иммунологическах показателей и их корреляционный анализ до и после подкожной трансплантации оцухоли в зависимости от результатов приливки,

2. Изучение характера фенотипичеокого проявления признака " э#ектИйяосгь клоносбразоиашт" в поцуляциях животных и его зависимость от показателей клеточного им1.1у;штста.

3. Изучение гетерогенности и характера фенотипического проявления иммунологических показателей в популяциях интактных животных и животикх-одухолелосителей с микро- и макрокпонаш, фор-, мирукждамися в легких при внутривенной трансплантации опухолевых ¡'леток.

4. Изучение соотноиения эффективности монообразования и иммунного статуса животных-реципиентов в уояовиях пониженной освещенности.

5. Изучение Некоторых фсйотипических и онтогенетических признаков клонов, формирующиеся при многократном пассирования в усло-

)кта пониженной освещенности.

Научная новизна.

1. Впервые на основе ретроспективного системного анатиза иммунного статуса животных-ноллеров (с отрицательной подкожной при-■.'лвпемостью опухоли) и жиЕотных-опуходенасателей (о положительной •пшкожной прививаемостью опухали) выявлены качественные различия '•.орраляцконных связей между двумя исследуемыми группами до йривив-

опухоли и закономерности изменений структуры взаимосвязей имцу-чмлогических параметров в динамика после прививки опухали.

2. Впервые показана эффективность отбора в популяциях опухо-л2них клеток на сниление злокачественности новообразований в условиях темпового режима, сопровождающееся повышением иммунологической реактивности организма животных-реципиентов (РешениеВыдаче патента Российской Федерации от 30.07.93» по.заявке № 47950^ /"М 113-3051) "Способ подавления метастазирования опухоли в легкие ■р умошял эксперимента" с приоритетом от 27.03.91.).

3. Впервые показана более выраженная чувствительность опухолевых клеток (по содеряшшг ДНК) к условиям пониженной освещенное-

ти по сравнению с нормальными клетками -лимфоцитами, содержащимися в опухолевых клеточных клонах.

4, Установлена закономерность распределения цопудяний ин-тактинх животных и животннх о легочными клонами по изменонию иммунологических показателей в зависимости от сезона года И от количественных параметров клонообравования.

Практическая цен и ость.

1. Процесс формирования микроклонов (мйкрометастазов в легких) может бнть использован в качаотве модели для изучения ' биологии модаакнопролиферирусщйх опухолевых клеток, в частности их метастатического потенциала и в плана их имйуночуветви-тельйостй.

2. Вариабельность иммунологических показателей животных в зависимости от времени года И светового режима должны быть учтены при анализе биология злокачественного роста И ари проведении антибластомной терапии новообразований.

Апробация работы. Основные положения диссертации дало*? toi и обсувденн на II Республиканском съезде онкологов И радиологов Казахстана (Алма-Ата» 1988), на Всесоюзном симпозиума "Актуальные вопросы иммунотерапии опухолей'' (Рига, 1988), на III Всесоюзной съезде по хронобиологии и хроНомедИ-цйне (Москва, 1990), на III оьеэдо онкологов й рентгенорадио-логс.в Республики Казахстан (Алмяты, 1994)*

П у ö л и к ft и и и. По темо диссертации опубликовано 12 работ.

Структура и. о, б ъ е и диооертации. .

Диссертндая состоит из общей характеристики роботы а формулировкой актуальности, ноли, задач, новизны и практической значимости; Четырех глав, вллючасщих обзор литераторы, описание материалов и методов исследований» изложение собственных результатов с их обсуждением; общего заключения и выводов.

Диссертация изложена на 191 страница маяинонисного текста и проиллюстрирована 8 таблицами и 49 рисуйкама. Библиографический указатель включает 142 работа отечественных и 100 работ зарубежных авторов.

ИАТЕРИШ И МЕТОДЫ ЙССЛКДОВАШЯ

В работе иопользовекк отселектироввниие на повышенную кло-ноггнцую способность а оргинотроаность к легким субитяши рвб- ;

домиосаркрма РА-2 и карщщооаркома АФКСУ, которые в виде суспензии одиночных клеток вводили а хвостовую вену белым беспородным ц черноголовым крысам обоего пола» маооой 100-120 г. Доза инокулята р 0,2 ад среда составила для РА-2 - 10 ООО и для АфКСУ - 150 ООО клеток. Подсчет легочных клонов и взятие крови для иммунологических иослгдсаашй производили после дзкешгисования наркотизированных эфиром крыс Да 16-20-е сроки опухолевого росте. -2 в ряде опытов прививалась подкожно в виде гоыо-геиатов в объема 0,2 мд ореды» •

Лимфовдты выделяли из гапаривизированной кровй градаент-ннм центрифугированием на растворе фикодла-верографяйа местностью 1,077 г/мл при 1500 об/шн,

Определение Е-РОК проводили по методу Ц972}

в реакции роэеткообразования с эритроцитами барана, явяяших-ся маркером Т-лиц1оцктов (Г, И, Виноградов и др., 1968). Для изучения резервной активности Е-рецац?орного аппарата реакщш розеткообразования проводили при совдюогней индубаш лимонитов с фитогемагглютиниксм (ФГА) в концентрации 12,5 шкг/^л (Т. И. Гришина, 1280), Количество функционально активных клеток, образующих ранние розетки [АЕ-РОЮ определяли по 1^3т1£к в модификации Г.В, Порядана (1984). г-лйлфокнты, способные к роае*-кообраЗовашш с аутолагичнши эритрсцитвш (АТ-РОК) идентифицировали по методу Я.Ро. 2асиоз (1881)4 Саре деление Комплементарных РОК, относящихся у крыс к субпопуляции В-дищоцйтов СО.С. Райцкна и др., 1977) проводили по методу С. ЕНаНсо (1985)( где в качестве несущих комплемент частиц использоватй гранулы зимовала ( гС-РОК), инкубированные о Нормальной машинной сывороткой по методу С. Чс&ег е1 а?., (Ш5Ь

Постановку реакции спонтанного роэоткообраэовашя иэ Малого Количества кровЙ4 взятой ив хвостовой вены животных, проводили по методу О,В. ЖеболеНко (1982)»

Для оценки функциональной активности нойтрофшов использовали метод определения орсолообравующи* Клеток (ОСК) ив В» С. Кислякову (1976). .

Количество ДНК в лимфоцитах и опухолевых клетках легочных клонов выявляли в реакции Фельгена, подочзт которых проводили на цитофотометрсз в зеленой зоне спектра, площадь ядер клеток из

мэряли на автоматическом, цитологическом анализаторе "Интеграл-

Обработку полученных результатов осуществляли стандартными методами математической статистики:'в группах оценивали средние значении параметров и среднакиадратическую .ошибку. Достоверность ргаличий оценивали по 1 -критерию Стьюдента. Х'Ш изучения вариабельности иммунологических'показателей определяли иоа^фициенты вариаций. Корреляционный анализ осуществляли с помощью методов дискретно-дйнашчаскоГо ангин:за и специальной программы на ЗШ.

РЕЗУЛЬТАТ« .-ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Известно, что прививаемость экспериментальных опухолей зависит, с одной стороны , от биологических особенностей (злокачественности) трансплантируемых меток, с другой стороны, от степени выраженности иммунологической реактивности организма животных-реципиентов (Р*Е.Конецкий, 1967{ Лавровский В»А., 1901; М,Доб4л5 198о! СУес/е 1ьв7( Б,Т. Вилы не кий и др., 1991).

Ретроспективный анализ иммунологического статуса крыс с отрицательной (жипотйые-ноллори) ц положительной (ждэотные-опухо-леносители) подкожной прививаемо сты? РЛ-У на этапа взаимодействия организма с оставшимися поело тряномаитшдаи (на З-о сутки) опухолевым» клетками позволил обнаружить между исследуемыми группам животных существенные качественные и количественные различия корреляционных 'связей иммунологических пар шлет ров при одинаковых их значениях (рио, 1), В.эти сроки исследования у ноллеров обнаружено исчезновений 1/2 части парных корреляций, характерных для этой группы животных а норма (до прививки опухоли) и появление большого количества новых связей, за счет чего уровень общей связности изученного фрагмета иммунной системы уиаличиБ&я-ся вдвое, В то время как, у кивотних-опухолепоейтелей шчвлон почти однотипный комплекс взаимосвязей до и на 3-а сутки после прививки опухоли* Поскольку количество взаимосвязей а система свидетельствует о степени ее упорядоченности, напряженности (И. А* Горохов, 1984), то можно аакйочить, что у кийотннх-иоллвров напряженность иммунной системы после прививки опухоли повышается. Судя по отрицательным ре зультатад прививки опухоли, такое поеикание'напряженности иммунной системы и качественные особзи-ноств связности отдельных ее компонентов, складываыщеся аи ав-

аивоиныа-нрллары

кизогные-олухолвносители

до прививки опухоли

посла прививки опухоли

А

ТФ

о

Рио.1. Схема корреляционных взаимосвязей изжду иийунологлчеокиим показателями И разные сроки исследования у кивотнйх-реци-пнентоа до и пооле подкожной прививки РА~2. Сплошные линии-положигельние корреляции; пунктирные линии-отрицатольныв корреляций, а

1-ООК} 2-лейкоияты| З-Е^РШ.або.ед! ^-свгмвктоядерныв нейт рофилы,%> 5-лии$оци1Ы4?&1б-Е-Р0к7-овП»еИтойдарныа нейтр филы, ебс.вД! 8-лим$оцигы,або.ед*

ЛФ, ЭФ, ТФ - ла?ентная, вкспоненциальнан и терминальная фазы роста опухоли.

Чйяыюм «mm о er аномалии пзшксстногсошЬ мезд опухоль» и гшмзиом, по-ьидямоыу, лкяя&тся дшобходолш'дол обеспечения vor го уг<озия фунмщо1шро»»шя У-шунн«»' сисгеак, -«otopoe j.\q«íí?ú4>>¡; дня пош/шлкл противоопухолевой розаетентностд оргамам; Ос«и<-над часть, вопвмввшсоя посла тр-люпдактя^яи опухоли, иоррал/г.;«- ' онних овкаой в группе «ивотних-поддарои харс>л«в}г,50йглг.<!?» шк'Сг;-бкяьноотыэ и по нора отдаления -сроков исолодлзт:^. в побттшц*--пдантационно.м периоде (на 23-о в 3S-0 сутки) ooor.'MC:no!uw и походных Koppa.mvuionnux связей претврпвеа-чо кэш-иншо в иге*-рону BOOCf&HoafdiWii изначального ах соотгш;.. Напиоглн, у от-, »шх-онухешанешгелои это осотиойошо нг. стадиях о«спош;и;!!рлт>~ uoi'o к твршийяьнох'о роста опухоли яэичаддось я сбр^хнся Лвнкц, "JO есть nï'-ii'iyiiiî.-iociii oiiasmwd чисдп пйр!Ш.ч корродлшЬ, ort» наруженних до прииавки' опухоли к аовкаонае ке^.'встьа поанх «ял* oaä. Развив квчвйтйвкний' состав зяо'аь шчмшадсл ш.жл я t>sw-> поношу! альпую » фазу powïH овухок?. ymWtWï нг. то,

ЧТО Д/Ш KfBUftúi* US ЭТИХ ОГЭДйН Xl\p.M:Ti!pl¡0 СВОП ОМрОД'ЗЛОННС-.: CÛÛ"

Tomme илиуиолош' 'С.сого статуса организма, В cv^,3¡u.vu>nya- .¡:;(ьу, когда в нолаей мра проявляг.тся токтчеохое опухоли,

до новых ЪлнзоИ маэд имгдунологкчоеш.« Bf!pa,.:&??c.vii было ь Í: раза шле, чем я иксгажв|«»а.тьну» ^аяу. Кориаанаа тлимое?««-» но« Büx пьршх корролЛ13511 в уодо».<«дх aporpoooispyr-ceco 'poetn спука»--ли нпблвдадооь при допсиьно' раэшх измвиинаЯ иолпчоэтзадви х ну. аначений, Некоторые из которих инелн, нро1Ийс>пслажчую 1ш;';вцг,а-нность по оряшшшю о' nuuvmwkoü этих показатолаа у j-riicïiwx-tiii-Ллеров в novi,Kj4tí cpoiai (на 35-« сутки) пооттрансгпаш-зтоннсл'й периода. Гшоота о тем, при различии двух йссд.'дуошх гру;:п животных по динамика отдвдг.иих показателей обнаружено сходство овотвмцн* взримоовлзйй ив;кду изучетш?щ параметра]в пкедонгци. mtaiuiyu' и. терминальную стадии опухолевого роото о кср>АШ&«г.м, устадоачс'пиыш у жи «шшх-нйм о роз, сеотгегмнло, до крн №.'«•• кй и на сроки но<у{о нрчиипки oityxau«, Ото шкет o¡«потчуй,-отломать с возможных - резервных способностях противоопухолевой резиот е¿itнооти орггишьма опухспйноситадя на по'З/игих огадп-чх poo-vu опухоли к мобилизации здилтнух сил, h' тирккнедьнуй Фазу и на 3-е срока после лришшкн опухоли у лишотных-на'троь лвна почти полная идентачноагь вз.шмоов^г-йи, Иокжлюнцм a их группах состони.'Ш лишь пврцна .оычмн ийр^метр^а, «ото(«о,

бозможно, и определяют баланс их иммунной системы и исход ее взаимоотношений о трансплантируемой опухолью. При этом,, необходимо отметить, что отличительными связями у животйых-нол-леров явились корреляции количества 00К о содержанием лейкоцитов и форменных элементов крови, которые в резных сочетаниях выявлялись На воех этапах исследования до и после трансплантации опухоли.

В следующих исследованиях проведена оценка степени слаженности работы иммунной системы организма животных-реципиентов при формировании легочных клонов (метастазов) ^финйтет-ного субшташа РА-2 на 18-20-е оутки посла ддутриввнной прививки суопейзии одиночных опухолевых клеток.

С помощью диокрегно-динашчвскоро айвлйва на основании выявления четких нарушений зависимостей между отдельными параметрами в уолойийх росте клонов обнаружен выраженный дисбаланс в иимунйой сиотемэ животных-рециаиеИтов, Что проявлялось в изменении направленности большого чиояа регистрируемых взаимосвязей (рис,2), утрате корреляций, который йаблюДаЛяаь у ян-такткых кпвотдах (цао43) и появлении Новых связей (рйо.4).

ГетврогайностЬ опухолевой системы по нролйферативной активности, определяемой по размеру отдельных клоков Позволила нам выделить отдельдуг группу животных (25$) только о медлвн-йопролиферируадймй клеточными клонами (шкроклойалй размером <0,1 мм), -животных (12,б£) только о мшроюгожШ (размером от I до 5 мм) и животных с микро- и макрокЛонами (62(5^), у которых количество шкрогиойоа находилось в пропорциональном соотношений с суммой микро-.и Макрокяойой.

Обнаружен, характер строго правосторонней ассиметрйи распределения жкйотных по количеству форгЛИрующйхой в легких клопов, где животные о ьинроклонамИ (независимо от их чйопа) составили модачмкЯ класс сродй особей'о разным количеством макроклонов, имевши очень троаую вариабельность (от I до 1531). Среди животных с макроклонами модальный клаоо составили особи 0 НаИМеНЬ-еш! их числом.

Закономерный характер распределений числа клоной йа Искав- • чает его обусловленности индивидуальными различиями иммуноло-гаческого статуса животных-о пухоленооятелой, которые, в овою очередь, обусловливают широкий диапазон колебаний его Показателей.

60 ¡л

20

-20 -60

Л* 2

У У

у

I * 9 <е

■<2 -в 15 16'

22

г-1 Д 19 & Г

ЩРт

23

У

7<г 2Г

Рис. 2, Иммунологический дисбаланс у гивотных-опутсоленосителей с легочными клонами ЕА-2 (эаитрихованныв столбвкв) в сравнении с иммунным статусом ингактвых хивогных (явзаатрихованныв столбика).

По оси ординат — разность хехду значениями варьируемого параметра; ко оси абсцисс-амиунологическав показателя:

I. 2С-Р0К,абс.ед.(лейхоциты); 10.'Е-РОК,ЯССК);

Е-РОК,2(2С-РОХ,£); II-. АТ-Р0Х,$(ли1фаци?ь:,%);

3. Е-гСК£га,а6с.ед.(лейкоциты); 12. Е-?СКфгали^с::;:ги,%);

Е-РСН,абс.ед.(2С-РСИ,Я; .13. Ъ-РОХ.Ялыфопяти.Ъ);

5. АТ-РОК.аСс.ед.Слии^оцитк.^); 14. 1С-Р0К,£С2СК};

6. Е-РОК,;га,абс.ед.(АТ-РСК,%); 15. Е-РОК ,/ДАТ-РОК,%); ?. 1С-?ОК,абс.ед.(ли^оцггц,2); 16. лшг$оцкгы,2(0£й);

. 8. 2-РС<$га,ЯАТ-Р0К,?); 1?. ь-Р0К$га,Я2С-Р07.,%);

19. Е-РОКфга.ЯОСЖ);

20. ОСК(лин$оцити,*);

21. лии5оц2ты,£(АТ-РСШ,%)■;

22. Е-Р0К$га,збс.ед.(00г[);

23. А1-РСХ,£(00К);

24. л^оциты.збс.ед. (ГС-РОХ,?);

25. лс£коцкты(лии*оцита,%);

9. АТ-РОК(Е-РСК,%);

18. лак*оцига.абс.вд.(АТ-РСЗ;26. гс-РОХ,абс.ед.(Е-РОК.

~J.Ü->

SO í*

JO

£c

-la -Z0 -

"30 -

6 7 8

ir

¡'m* 3. Kopj!c.«H«Boimae ' взаимосвязи иймукологичооких иарвмвгрс

у ИКТйКТНЫХ ЖЫЪО'ИНКХ.

lio оса ордмтт - разностьмежду япачоияями напвируви« паршшхр&;

по о ои абсцисс-- иммунологические параметра:

1. лТ-POiv » ьбо.вд.(лккфоциты)Í

2. At.-rCÄv, % (ß-I-CK,£); '

3. 1;-Х0Кфга,$ (лю^ицмти,;:?); i:. Е-Рйф», JS { 2С-РСК.5&)?

•. ' 5. t-РШфга,.% (oat); ■ ..

С, лкмфоияти,(лейкоциты);/' -?. лймфонитц, абс.вдД ZC-PGK,J6); "8.'лойнйцми ■(лни^оциты,^)..

70Г 60 $0

40 30 20 10

6 7 в & /О Н

•/а -го

■30

•4о -.го -60 -76

».и. Корреляционные взаимосвязи иммунологических параметров у яивотних-апухолвноситвлай.

По оси ординат - разность между значениями варьируемого параметра;

по оси ао'ецисс - иммунологические параметры: К ООК (лайноциты); 7. Е-РОК ,абс.ад.(лимфоциты,

2. И-РОК.айс.ед. (В-РОК8. АТ-РОК,або1вд.( -,ГС-РОК'

3. СОК ( гС-РОК, Я; 9. Е-РОК,або.вд,(АТ-РОК,/Ь)}

А. Е-РОК.аби.ед.(лимфоциты,Я; 10. ООК (Е-Р0К,?Ь);

5. лимфоциты,¡4 ( 2С-Р0К,Я; П. 2С-РоК (аЙо.ад.(*Т~РШ,%),

6. лейкоциты (АТ-РОКД);

-■f 2-

Отмочонн почти ncuiHH« ядентичнооть характера распродало-яил популяций иптактьых ШШОТНЫХ и ЗКИВОТИИХ-ОПУХОЛвНОСИТвЛиЯ

яо иммунологическии покаактелям (tí-ГОК, ZC-POií, АТ-РОК, лой-коадгш и СОК), а именно одаовершиниооть,. непрерывность, a тяк-too пр(и>осторйniц!я нссиматрля, за исключенном распределения «иола .шфэцгхо», имеющие левостороннею оосиметрию. Основная часть Йндавидуйтьных значений каждого показателя орадпяваешх групп híibotjhíx перекрывалась, хотя, при этом, различающаяся чяогь параметров у интактных животных находилась справа от совпадающая зоны (на сторона больших значений), а у животных-ону-хслонссихелей - олова. Большая совпадающая зона распределений двух исследуемых групп животных, по-видамоаду, отражает ту часть популяции животних-опухолоносителай, у которых обнару-/шшиоь только микроклоны и малое число «акроклонов, то есть 4\У оубпогулящт амеогйшс-реципиентов, которые составляли модальный кипой но эЭД'вктиишоти клоиооброэовашя. При изучении ^«определения кивотних-реанггиеитов йо. шфч?«алогическим пока-Ььтвлдм в отдельности у гшвотных о микро- и макроклонами обнаружена большие значения модального числа показателей, ила . Остылая их внрикешшохь у животных с микроклонаш, чаи у животных о макрокдскаш(ргю.5). '

Вышейзлекенйые результаты позволтт отнести гшвотных с Дякроклонаий и самостоятельную субпопуляцию с более выраженной по сравнению о другими аявотныт-рецйпиентащ природной Противоопухолевой резистентностью. С другой стороны, ети ка результаты, по всей вероятности, свидетельствуют о наличии в опухолях субпопуляцки клеточных клонов с крайне низкой скорости пролиферации.

Противоположные распределения .животных по количеству лимфоцитов и клопов, по-видимому. обусловливают выявленную мзвду эти показателями отрицательную корреляционную взаимозависимость ("Z----0,3B, Р < 0,001. при п = 102).

Корреляции количества клонов с другими имиунодогичвеки-ui.показателям!'выявлялись только по сезонам года. При этом, необходимо выделить отрицательно коррелирующие с количеством кленов в весеннее время года показатели E-F0K, Е-РОКфга,АТ-РОК, по которым совпадающая зона распрзделенйй интимных жи-

J. E-РОК

2

0/t Hfi ¿Sfi 13

k> ю

ZC-POK

1 5

So 4í> 20 O

Кг

t \

лейкоциты

■ tJ7<t 6íHH71$ I6vst>

80

60 4o го o

9jS /Ц1Я

60 ffi Zo o

лимфоцит

.•-r/í

-j—к. .i,.....t—1 _(

'fi 42 Í<T

Puo. 5'. Распределение популяций животных по иммунологический иокаааталяы.

1 - ииактиыв животные";

2 - животный о иикроклоиами;

3 — ниьотниэ с иакроклоцаии.

По оси ординат - количество животных, по оси абсцисс - классы по иммунологическим показателях.

вотдах и зщвотцых-оцухолецосителей в этот сезон существенно уменьшись? р«о, 6}, 5 весецнеэ время года по сравнению с другими сезонами обнаружена также наибольшая разбалансирован-Ноот1| фувтоондрования иммунной системы, которая оценивалась По. коэффишайгам вариации иммунологических параметров.

Распределение популяции интактных животных по иммунологическим параметрам подвергалось сильным сезонным изменениям, Что вкраяадось в появлении двух-, трех- и ллосковершинности.в изменении направленности и степени ассиметркк, В то время как, сезонная изменчивость характера распределения популяции животвых-оцухолеНосителей по изученным показателям выражалась значительно слабее при сглаживании сезонных колебаний их средних значений,

На наш взгляд, большая сезонная изменчивость характера . распределения популяции интактных яивотшх по им;ду¡¡алогическим показателям указывает, с одной стороны, на большую их приспособленность к йзмеачвдмоя факторам внешней среда, а с другой - на значительно большую их гетерогенность по способности адаптироваться к постоянно маняюшдася условиям существования. Тогда как у кивотйых-спухоленооителей адаптационные механизмы организма значительно ос лаблены.

Следующим этапом наших исследований явилось изучение влияния изменений такого внешнего физиологического фактора, Кал фоторе&им, на иммунологическую реактивность организма интактных животных к коогных-оцухоленосителсй о.легочники клонами РА-2, а также на клоногенную способность органогропного~ субшташа.

Обнаружено, что воздействие на организм животных условий пониженной освещенности (0-10 Лк) в течение всего ростового периода РА-2 (сразу после внутривенной прививки клеток до формирования видимых клонов в легких) в отличие от многих традиционных противоопухолевых агентов (Химио* и гормонопрепараты или облучение) одномоментно проявляет как стимулирующий эффект по отношении иммунологической реактивности организма яивот^Ьх-ре-ципйонтой, так и ингибкрующйй эффект -по отношению клоногенной Способности исследуемого субштамыа. Достоверные результаты (?с 0,05) подавления формирования клонов без применения химио-,

Рио. 6. Распределение популяции животных-опухолоносителей по иммунологическим показателям в весеннее время года. Сплошная линии - интакТныо животные; пунктирная линия -животные-опухоленосители; заштрихованная зона - совпадающая площадь.

По оси ординат - количество иивотных,5;

по оси 'абсцисс - классы по иммунологическим, показателям..

горконо- и раяиотирашш овидв«ольотбу»л о ростоингибирующвм

шдаяшш на ккеточ-ную пролиферацию обходи самого рошиа риз-ко оииншшюй и сутвречкой осаоииашоа'ш. Однако, в данном случае оотютоя неЕыяаншшим цопроа - влишаа темпового фактора нр прилит алокачаотванности "клопогонная способность" обуо-докиано прямим его аффектом а/или опосрадовашшм шшяшем ча-рао оргпшзм опухоленоситоия?

' 1! ялу но стимуляция орга.^эма интшшх животных при .воздействии темпового раияма в вависимооти от срока акснозищш (5, 10,1.5,20 дней), ПО ВСОЙ видимости, .говорит в пользу Прямого 111.1-муиомодулиручцого ого аффекта на организм опухоленосителя, ио» жали в пользу роотоиигибирувщвго влияния на опухолевый проиеоо. Опосредованное чороэ органаам торможение клоносбразоваши опу-дОмШ подтварздаатоя также тем, что изменения иммунологических покааитодай наблюдаются ука в ранние срони воздействия пониже» иной сювещанноохи, что совпадает с периодом свободной циркуляции опухолевых клеток в кровеносном русло.'Наиболее чувстви-тшшшш И измзнашш условий режима оовошишя из всех изученных .у .ипши'нпх етвотцих показателей оказалось содаржациа 00К, которой постоянно повышалось в течение ъовх сроков исслодоылшя, Родержанло ЕЛ-РОК увеличивалось только до опрецалашюго уровня па 10-и сутки, тогда как повышение в &ти сроки количества К-РОК было кратковременном. На Ш~е сутки возданстадя тош'ю-його рекама иовишалоя в 2,32 раза индекс Брадаква, ивидетальо-тцумьий'о поьшшш противоопухолевой резистентности организма, У жиштных-опухоло1юоателей,-находя.вшихоя в разных условиях, фогоражимп (0,10,20 Лк) повышения индексе Бродокка но сравне-' иий о контролем (обычные условия фоторамша 250 Лк) не 'наб-ладилось. .Измананию подвергались та покаэптели, который были наиболее светочувствительными у интактиих животных - новнша-лооь ■ содержание ООН по море сшшешш степени оовещения и ко» личаотво ^А-РОК в уолоьиях полного затемнения, У кивотных-опу-холелосителйй в отличие от китактиих животных в условиях по-» )Шквнцо& ооиваднл.остм майл«г»даяооь понышшше содержания ь кропи лойкоодтов, имдим,;ео при атом ирдащю зависимость от ражнма освещения, что оиидотольствуот о-стимулирующем влиянии исиы-У. лад роиимж оечклшлш т< сокрашш опухолью фактора, новы-иа»лЦ1:1чо функции лойкопоэиц. '

йоучонно подо ржания гормокоп (тироотротшп, v [шйодтиро кипя, тироксина, тестостерона) понизало, что у яшотг/чх-опухолч-носителой г» рекимах 0 и 10 Ли впихается иошцоитрецип в шлторет-нч крови тироксине. Содержание этого горючи и трайодтироняна огрели зависимость от стенали освещонил, постепенно уйнвгл по мере ее снижения. Тогда кап, в другом опыте, проводимом п во-T'.'OTERiniHX условиях освещения показзно, что концентрация п оы-воротке крови этих гормонов у животных-реципиентов по оратнщ-нию с инта шин мвотншли повышалась.

Таким образом, через иммуио- й гормональные факторы организма в общей системе противоопухолевой резистентности проявляется один из механизмов ипгибирующего влияния условий пониженной освоишшссти на рост клонов. Однако, нользя исключить и прямое действия пониженной освешамностп на'клонообраяовшме, как зто бкло выпячено по отношению повышения активности опухоли к выделении фактора, стпмулирукдего образование лейкоцитарных колоний.

В условиях теигавого режима сохранялась правосторонняя ас-симотрия распределения числа клопов, отралтящ&п, по вое Я вида« мости, готерогтшость по метастатическому потенциалу опухолевых меток я »ученного субштакма, гдо большую долю оостяьигот клетки о низкой кдоногашой способностью, Однако, при этом, В условиях пониженной освещенности по сравнению о остостяениим фоторзюшом отмочено отсутствие крайних вариантов (нлнотиих о высоким числом клонов). Сужение вариабельности количества клонов при ймфноотвчуляфтг должно свидетельствовать о снижении доли клеток с высокой мотастатической активность®..

Отмечена более выраженная объективность отбора на онике- ■ яие ююидгэиной способности РА-2 по сравнению о лфКС7 в процессе серийного (семикратного) пассирования их и условиях пониженной освещенности, что говорит о различии этих оубитамкев по степени'гетерогенности их клеточных популяций по признаку "фо-точувствптолыюсть". Сроки формирования клонов обеих опухсле-.. вых субшгаммоз после прг-ла'дэ Иного серийного пассирования в условиях темногого режима удлинялись на G суток, что ■свидетельствует о значительном снижений- темпов пролиферации опухолевых, клеток.

Выявлецо снижение среднего содержания ДНК как в внут-риклональных лимфоцитах, так и б опухолевых клетках клонов АфКСУ, полученных после серийного пассирования в .условиях пониженной освещенности. Отмечено повышение доли клеток с низким содержанием ДНК и 'уменьшение числа клеток с оолее высоким количестиоы ДКК. При атоы, опухолевые клетки оказались более чувствительными к воздействии темнового фактора, чем лимфоциты, что выражалось в более выраданном повышении числа клеток с меньшим количеством ДНК (рис.?)

Эффективный отбор на снижение клопогонной опосооности опухолевых субшташов и достоверное снижение содержания ДНК ъ клетках легочных клопов указывают на наследственные изменения в структура популяции опухсловых клеток в сторону снижения изменчивости и злокачественности, а также на наследственную обусловленность признака "фоточувствитальность" опухолевых .клеток.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ .

Определение специфических особенностей ввнимосвявей отдель-ннх компонентов иммунной системы органинма кивотннх-рвципиеитов в вависимости от ревультатов положительной или отрицательной подкопной привипки опухоли Позволяет отметить bucokjd чувствительность жипотннх-ноллеров к опухолевому трансплантату, что проявлялось в повышении напряженности /свявности/ системы иммунитета в ранние сроки после прививки опухоли с последует расслаблением ее и тенденцией восстановления изначального состава керреллци-йынш свявея, У «ивотннх-опухоленоситвлеП в динамике роста опухоли наглодалась противоположная направленность указанных изменений.

Испольвование нами в иммунологических исследованиях моделей формирования вксперимвнтальни* мотьстаео», иметоуи клепальное про-искондвние , представляют интерос в точ плане, что гетерогенность опухолевой системы по Пролифаративной активности, определяемой по равмару отдельны*: клонов, повволяет выявить.отдельную груплу ки-ботинг о иедлвннопрозифврируивныи клетсчшми клонам vi Лшкроклокй.-v.*/. 'Дышал субпопуляцкя кивотти-реципиентов по уровни иммунодс-nmftíiu пок&в&твлен находилась между группами интакткнх «квотных ч м^тииг-йпухолоноептелеи о какроклонами. Продолжение и углуОле-

to SO 46 30

гс (О

oj м

SP

■io Jfi гЬ

fa

12

hz

—i -

Of gi i,1i 1Щ7

(tO

л;

40 so

fö

âi 6È

___ju

to sa

jo to fû

Bi

О' 'y / Z.

// f./s, 171

¿Ли. X Íií/Л

or SS m i97

Peo. 7. ■Рчтцврплвнип- лНифоиитоз (A,Ay) и-опухолевых ялдтоя (Б,Б^) по кол мча ми у ДНК в различних уо'лпвйях фотррезмш. По оби ординят - количество ллэтоиД} ho oeil абоЦисо - клневы по сЬдврхяни» *'ШК,- отн.ед,

С.Э9ТЛЫ8 ОТОЛбйКИ - ООТ«Ш'ГВ0Н!ШЙ СЯ8Т0В0Й рвЖИМ} з&ирихолашшв столбики - темновой ]ч};*ич.

ние исследовании иммунологического статуса животных-реципиентов микроклонами должна представлять огромный интерес в плане клинической онкологии. Поскольку указанный феномен трудно поддается иаученис у больных в условиях клиники, результаты наших исследований по выявлении групп животных с нихроклонаыи при трансплантации клеток специально отселектирононных опухолевых субштамнов предста^ляит исклсчигельный матерое. Данная модель помет быть, ж пользована для изучения биологии медленнопролиферируптих клеток и их клонов, их взаимоотношений с иммунной системой органиама-опухоленосителя и т.д.

4 Закономерное варьирование числа клонов -/правосторонняя ас-симетрил их распределения/ обусловлено иммунологической гетеро-генпостьв животных-реципиентов. Научение индивидуальной вариабельности иммунологических покаеателеЯ по диаграммам частот показало, что основная часть интактних животных и животних-опухо-леноситвлей по.наученным параметрам иммунитета имаст одинаковые еначения. Если сопоставить эти данные о гистограммой раепределе ния животных по числу клонов, то вдась обнаруживается вависи-мость влияния опухоли рааноя степени елокачественности /определяемой по количеству клонов/ на иммунологическую реактивность органивма реципиента.

Севоннай характер корреляционних свяаей между эффективностью клонообрааования к показателями иммунологической реактивности укавываст на регулирусауп роль внешних факторов среди на взаимоотношения организма и опухоли. Подавление клопогонной спо собности аффинитетных субштаммов и снижение содержания ДНК в клетках их легочная клонов в условиях пониженной освещенности свидетельствует о селективных процессах в популяциях опухолевых клеток под влиянием иммунологических факторов бргацизма, стимулированных темповым режиыои, на уровне клональной организации новообразований.•

При аналнвв ревультатов всех проведенных исследований отие чоно равличие между отдолышми иммунологическими показателями г их значимости в впписимости от условий эксперимента. Это дает г можнооть при решении конкретных задач исследований испсльзоват» те или И1шо показатели иммунологической реактивности.Полученные нами данные также могут послужить основой для проведения отбор« животннх-роципиентов по состоянии иммунологического статуса с I получения балов однородного экспериментального материала /(

нм .рлрноовпьности активности клонообрааовання/.пзвволяюиае гирйть сп»хтр применения-органотропних суватаммов в различных I

ВЫВОДЫ

1. Корреляционные взаимосвязи иммунологических показателей животных с отрицательной и положительной прививаемостью опухли раэличались по количественному и качественному составу до поп-;ожной привийки опухоли и изменялись в диаметрально противополож-шх направлениях в динамике после трансплантации опухоли. Резкий ишбаланс корреляционных овяэей у животных-ноллеров наблюдался в юница сроки после прививки опухоли, а у животных-опухоленоситвлей

• в терминальной фазе ее роста.

2. Аналогичный ймиунодисбалака был обнаружен у животных-реци-1иентов и при внутривенной трансплантации опухолевых клеток, который выражался в исчезновения исходных корреляционных связей, изменении направленности й появлении их йовнх вариантов.

3. Распределение признана 11 эффективность клонообразования" опухолевых клеток в популяции животных носит одновершинный, непрерывный характер о резкой правосторонней асойметриеЙ с модальным классом из группы реципиентов с мнкроклонайи, либо о наименьшим числом макроклонов. Характер распределения иммунологических показателей у иктактных животных и животных-реципиентов были однотипными

со значительно выраженной совпадающей зоной* При этом животные с микроклонами занимали промежуточное положение между группами интак-тных *ивотКых и животных о накроклонами.

4. Корреляционные вэаимаагязи показателей иммунологической рвашивнооти организма с эффективностью клонообразования опухоли иивлй сезонный характер. Интактйыа животные й животные-реципиенты различались йо степени свзонйоопвцйфйчнасти их иммунологических параметров. Сезонная изменчивость показателей им^уйологической реактивности й характера йх распределения у животных-реципиентов по сравнению о ийгантныт! животйьшй менее выражена, что йвйдетельствует о ояйаанйй ад8ПтаЦйОйно-приопоообй1йЛьных рёакцйй йх организма к сезонный колебаниям факторов внешней оредн.

5. Обнаружена зависимость эффективности клонообразования опухолевых клеток в легких от степени освещенности условий содержания жйво!них-1зецИпиентоа. Выраженное подавление роота клонов наблюдалось при Полной темноте и при освещенности в 10 Лк. В динамике оеряйно-го, семикратного йасоирования клеток РА-2 по сравйвйй» о клвт-

[liií.ii ítjü;i:v¡i!*m А4>И0/ мгДщедвдосъ ранее дскиоверцов опадание s#ôk> WSMOÖTK 1№о«о<?0ра8ове»й», :

• 6, Шеддошдооддадо влияние' чеимво-со рамша затрагивало г.пд'дп'бльао (1елыи«о чиало шдлуисшотаоках пйршетрсщ у иитакт« них ;-/4'iu.s'í'íüíxi чем у живртийх-риши!»!*кто», Обнпр,укйна аийчитйлышл !)3¡>iiw!.aK ймцунаиогачэоких показателей но чувствительно«™ к темному фактору, Ranéeme бивгочуиотвщ-еяышъ покиьмеи/и ыыуиоло« V«чайкой рвдааыюоти ориштаеии* групп ¡лкаотквх .бил« идентичны-

¿1K-. ' , ...

?, содйр'^ещии гормона тарокоаяй я ошюротка кроы» кивотних-р* ¡(lUiut'HïOM ипменялооь' в aamiüiuioimi от ришма оовеаднноом s а обычном овргЬшы роЕИма - повымьлос*, в уолошиш птштМ ровзйшно«

ft, Ло&ле tiopíHovo иаосмровшад oJqjiumTasiiopo рубштимма в ус« лошлл илшовогр рцжима а-рпухсмашх ктках и лии&оцвувх дегочны: клонов ршшдаио ошшше обиего оодйршвния ДНК и степени гвтароге ииоотв' jgaeswjm пояудаций ¡к> ьтому дензнаку. Но органе шш о нор-мелмыде ¡¿хеткаш Чдим^оцитьш) онутвшо . метки (¡¿ладим1 йшгывп

cancai опубжковщщ работ по теглдз даисЕРТшда

1. Тобагабылова Л,Т. Клетрчнай иммунитет и адаптивность мзтастазироныны рвбдомиоспршад РА-3 крыо в легкях//5сес,кон1<. "Актуальные иопроои иммунотерапия опухолей" Рига, 1388.-'

G, 107-108.

2. Тобагабылова Л,Т. Особенности состояния дмгэдолагичес-кой реактивности пра экспериментальном метастазировании раб-домиосаркош РА-2 крыс//Второй Республиканский съезд онкологов, рентгенологов и радтдо^ов Казахстана.-Алма-АФй, IS68.-С.321-322,

3. Кураласаа А.К,., Бишапа С,А,, Тобагабшгоза Л,Т. Изменение биологических саоистз злокачественных опухолей в условиях яскусивеквого осве'Цения/ДчродательныЙ ггонгрзсо Международного общества по патофизиологии,-Моема, 1969,- 0.56-57.

4.. Тобагабылова Л,?», Йсмаилов Б.Й, Влияние темноты на процесс; экспериментального метастазировайия саухоли//Вс0о,кон$. по хронобиология и хрояомада«ййе.-Моокна4 1890,- 0,312-113,

5. Tohagatyl^v^ Jj.T», tsmailov b.I. Metastatic sffeotive-nea awi laaunologie relativity in the eanaefc hüst org&nisÄ // Burape&a federation of immunological. societies.- 1990* ¿jnster-doin. -P. 58-59.

ß» Исмаилов Б,К», Краснб®Таноа В*К.. Тобагабылова Л»Т., Ауганбаева Р,П. Модели и Методы цпучаняя наследственного полиморфизма популяции, опухолевых клаток//Реопублк1канокая конф. "Проблемы теоротичаояой к прикладной генетики в Казахстане".-Алма-Ага, .19Ш,- 0.14-16,

i, Мсмаялоэ Б.И., Нур1*алиева К»2», Тобагабылова Л,Т» Као-нальйЕЯ гетерогенность опухолей ио рздаопувствйтельностй.-Дбй» в КйЗНШ НТК ОТ 9,01,91,, 5209,

8* Бяйшзиа С.А., Куралаоой А.К,, Налгасбаава Г*Т., То-гайбаева 3»И,( Лаптева Р.М», Макарова О.И., Тобагабылова Л,Т., Сысоева ¿Ui*( Нэжннсйая Г,"., Дунаибаева А¿Б., Богданова А»Г., Ыозинова H.H. Некоторые итоги изучения иммунной ft эндокринной систем и ИХ взаимоотношения у онкологических больных// Онкология и Радиология Казахстгзна - 30 лет (lS6-:-I990rr) :Сб, ста-«ёй^-АЛма-Ата, 1990.- 0.214-222.

9. Тобаг-абылова Л.Т., Баишева С\А., Исмаялов Б.И., К?-

раласов А,К. Опорой подавления мотастьзирования опухоли в Легкие в 5СИ0ШЯХ оксперимейта,- решение о выдаче патента ГО от'30,07.93, по аеявке о приоритетом Н 4795041/14(138651).

.10, Тоб^г^бшювй Иммунологическая реактивности животных в данашкз развития опухоли в условиях подкожной тран-плантадаи/Л'рвтий сгазд онкологов и рентгокорадщадогов Республики Кнаахстшь-Алм^ты, 1994.- 0,406-408,

II. Лаптева Р.М., Тобагабвдова Л.Т., Иомеилов Б.И.Изучение роли некоторых иммунологических осооенНостей реципиента в вариабельности клоиообразования вф^инитетншс опухолевых оурштаШов//Тац же.-С.387-309,

12« ТобаГабылова Я,Т,, Исшшов Б.И, Клоногенная способность айгйНнтегпых субштаммон и содержание ДНК в их легочных клонах при пассировании в условиях напененного фоторохИма// Там хв,- С.408-410.

КЕЙЬЧР ЕК11ЕЛ1 1СЦТЕВД ВСУГ МЕН КЛОН БЕРШПН ИШНОЛОШЭД АСИЕКТШР1

ТОБАГАБЫЛОЕА Лзвват Телепбергенкйвн 14,00,14 - ОнколагйЯ

т * я н р н н

ТззНрибе ач ттсг( те1с!а гэне царатебел инбрел егвуктй-рнятарнна *ург1в1лл1. Жтмяс барйсНнда тер! астнндагн !с|к Транс» плзнтатн жзна афф!житет субштамдарвдык вкпв кландярн /РА-2 жэнв АфКСУ/, нет кандарн^ !с{к клеткалара аерттел1нд{,

Зерттеу уацсатн: Андардын имму.нологкялак хэрсетк!птер1н1н 1с1ктерд{ егу кез^нНщег! взгвру еандчлнЛтарин танЯп б!лу»

Зэрттоу тэс!лдерН 1екеленд1р1лген 1 о 1 к ялвтхаларнмвд суспензиями даЯнкдау, иикро - гене иакроклойдарды сана/! Т- *ЗнЭ В- йкиуиитвт жтЯес1н(ц, нэЯтро^илдардан Мблшер1н, канДйгН лейкоцит тер мен форкалдык эяекенттердШ саПаснн» цитофо*ометр аркнлн 1с!к клетяаларн мен клондагн ликфоцйттерд!н ДМ мелшэрГн аннКтау, ввтоматикаДнк клетка анализатора иИнтегрел~2М7" аркнлн клетка яд-роларннан колем{н еляау,

АталмНш енбекта реципиент андар 0рганизм1н1н имиунология-лНк.кереетк1йтер!Мн еНлген ЫктсрДЫ асу йене метастаз беру кевен!ндегГ рол1, от*Ц !с1ктврд1а эву сатнларнкей, «етастао бэру т^^Я^мей» жнл меэг|йдер1йен *энй фатсрожикмен байланнсты-лнгН кврЬетIлген. БгЛ зерттеу йорнтннднл&рн кйтерл! 1с1й бйология-снн сдан эр( талдау, 1с!ктердI евдеу бёрксннда ер&кйе ескэр1лу| кереи.

ЙабораторйЛйарда вгеуктйрУкТ&ранн имиунйтет1н верттеу тэ-с!лдер1 енг1э1лдЬ

sqws XWiUilOiiOOICAti ASPECTS OF TRANSPLANTED TUMOURS OHOWTH AKC CWJNE i'OHMATiON

tQBHiXBibOVj, Ljaztat lolepbexgenovna 14,00»1<i - Oncology . 8 11 Kli 1 H I

White lnb reeded olosed line black headed rats has been used In the expe£i»ents. Hypodermic transplants and lutig clone? of nphlnitetio substains, periphetibal blood, turnouts cells seiyed afc the objects or invfeatigafciohSj

The aim of the investigation *aa the conformity of animals*' immunological Indexed' ohangea during the transplantation of tunoura.

The methods of investigations were the following« the preparations of solitary tumoUrs Bells' suspensions, the counting micro- and aacroolooeS, quantitative appreoiatioa T~ and iJ-isunuoity sletems, the fupetlotta of neiitfrppiiila, detfer-ainatioh of t)HA maintenance in tumours cells and lymphocytes of clones In the oytophotooeter, the measuring of nucleus* areas in automatic cytolop;ical analyser "InfcegraJ-^MT".,

The role of different iBwunoiogieal. Indexes of ar.inal»-donue«' organisia h«» been showed during the growth and experimental tiethastajihg of transplanted tumours of different giatogenesia, their variability in the dependence on the phase of their development, methastasing ef/ecienty, the season and the pliotnreclnei These results oust be taken Into consideration during tha analysis or Malignant growth1« biology and during the Conducting «ntitiMiouif therfcpy.

Thenethods of the investigation of rats' immunity has been lneulosted lh the laboratories.