Автореферат и диссертация по медицине (14.00.36) на тему:Иммунобиологические взаимоотношения между матерью и плодом в условиях реакции "Трансплантат против хозяина"

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ УССР

КИЕВСКИЙ ордена ТРУДОВОГО КРАСНОГО ЗНАМЕНИ МЕДИЦИНСКИЙ ИНСТИТУТ имени академика А. А. БОГОМОЛЬЦА

На правах рукописи ФЕДОСОВ Евгений Алексеевич

УДК 612.017.1:616-056.43-02:578.089

ИММУНОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ВЗАИМООТНОШЕНИЯ МЕЖДУ МАТЕРЬЮ

И ПЛОДОМ В УСЛОВИЯХ РЕАКЦИИ „ТРАНСПЛАНТАНТ ПРОТИВ ХОЗЯИНА"

( Э к с п е'р'и меТГт а л ь н о е исследование)

14.00.36-аллергология и иммунология

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени доктора медицинских наук

Киев — 1991

Работа выполнена в Смоленском медицинском институте МЗ РСФСР.

НАУЧНЫЕ КОНСУЛЬТАНТЫ:

доктор медицинских наук, профессор А. С. Шевелёв;

доктор медицинских наук, профессор В. В. Зарудин.

ОФИЦИАЛЬНЫЕ ОППОНЕНТЫ:

член-корреспондент АЕН РСФСР, доктор медицинских наук, профессор А. А. Ярилин;

доктор медицинских наук, профессор Г. Н. Дранник;

доктор медицинских наук А. А. Чумак.

Ведущая организация — 2-й медицинский ордена Ленина государственный институт^А. г.^Ой^г^

Защита состоится « (£ »—- 199 I года

в « _» часов на заседании специализированного совета

Д 088.13.06 при Киевском ордена Трудового Красного Знамени медицинском институте им. акад. А. А. Богомольца (г. Кнев-57, проспект Победы, 34, мединститут, морфологический корпус, аудитория № 3).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Киевского ордена Трудового Красного Знамени медицинского института им. акад. А. А. Богомольца по адресу: 252057, г. Киев, ул. Зоологическая, д. 9, стоматологический корпус.

Автореферат разослан

Ученый секретарь специализированного совета, доктор медицинских наук

В. Г. БОРДОНОС.

/ ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

1~г - " ;'А к т;'у альность проблемы. Сравнительно недавно сформировалось и бурно развивается новое научное направление - иммунология репродукция, изучающая роль кимушых факторов и иммунологических механизмов в процессе подового размножения. Успехи о этой области позволяв® также погасить эффективность исследований в таких областях как трансплантационный и противоопухолевый иммунитет, аутоиммунные болезни, иммунодефяцятные состояния п др.

При изучения гсдиунобаологичесянх ззакмоотновекпй меяду матерыо и плодом на первый план обычно аыступапг прикладные задачи, диктуемые требованиями профилактического направления медицины - не допустить поврездения развивающегося плода и не создать угрозу для здоровья матеря в связи с береыэнностьв. Следовательно, актуальность проблемы иммунология берешнно-сти во многой определяется необходимостью выявления причин возникновения осложнений беременности, заболевания потомства и самих матерей.

В настоящее время не вызывает сомнений, что иммунологические факторы играют валнуп роль иэ только в выншгпвашш беременности, но и в возникновения различных фора патологии (бесплодие,

выкидыеш, поздние токсикозы беременности н др.) (Волкова Л.С.,1970; Хаитов Р.М.,Вербицкий Ы.Ш.,1986; Говал-ло В.И.,1987). При этом хорошо утвердились факта, на которые впервые обратил втшанио О.Е.Вязов (1962), о том, что различные органы и ткани плода, в том числе и ялыунная система, формируются под влиянием одноименных органов иатзри. На этом основании било высказано предположение о взаимосвязи иекду

нарушениями в иммунной системе матери я возникновением аналогичных или сходных нарушений у её потомства.

Олнано до сих пор не ясно, в какой степени изменения в иммунной системе матери могу*? влиять на развитие беременности и на развитее потомства. Не изучен такие вопрос о возможном влиянии беременности на последующий иммунологический статус самих матерей. Объясняется ото прежде всего отсутствием адзкватной экспериментальной системы. Лишь в отдельных работах предпринимались попытки создания модельной патологии самок с последующим изучением развития беременности и потомства (Клемпарская Н.Н.,1972; Вербицкий M.S., Вязов 0оЕ.,1974; ¿tie CuiCcz^f'i- Я ,1977). Однако эти исследования не дают однозначного о-твета на поставленное вопросы.

Для ьгаделирования иммунологических нарушений у будущих глатерей п выявления в ovjtx условиях коегл; закономерностей в иммунобиологических взаимоотношениях ыеаду матерью а плодом ш предложили впервые применять реакцию "трансплантат против хозяина" (РШХ), индуцируя её у самок иьпей накануне или во время беременности.

Данная экспериментальная система максимально отражает в себе суть проблемы, которая возникла в последние годы в результате возросшего применения массивных ге;> трансфуэий, пересадок кроветворной ткани d комбинации с иммунодспрессанта-ып, а эакзе в связи с пироким применением в медицинской практике химических и биологических препаратов, способных вызвать фенотипическую модификации клеток иммунной системы. Бее эти манипуляции значительно увеличивают риск возникновения у пациентов, в том числе и у гегадин репродуктивного возраста,

классической и, так называемой, "ре стриктированн о Я" РТПХ ( , 1968; £, 1985).

Кроме того, применение икмунодепрессантоз таит в себе опасность активации вирусов, в частности, цитомегаловируса, который может выэьгаать усиление экспрессии антигенов гистосов-местимости I класса, способствуя этим возникновению аутояо-гичной РГПХ {Цаи-^сИ /V ,1989; И-'. Г. ,1989).

Отсутствие конкретных данных о влиянии трансплантации лимфоидной и кроветворной ткани на репродуктивную способность в клинических и экспериментальных условиях свидетельствует об актуальности данной диссертационной те>.ы.

Цель исследования - выявление закономерностей в жлгунобкологических взаимоотнопеникх между матерью и тодом в условиях трансплантации глатерк несингекных лимфоид!гых клеток и, в первую очередь, - установление патогенетической роли жлмунологичаских реакций, развивающихся у матери в условиях РШХ или сформировавшегося клеточного хи-меризма, в возникновении нарушений репродуктивной способности, которую оценивали по результатам изучения зынаиивания беременности, состояния матери лосхе беременности и родов, особенностей развития я иммунологического статуса родившихся потомков.

• Исходя из поставленной цели, было предусмотрено решение следующих задач:

I. Изучить возможность применение кммунодепрессанта (гепарина), не обладающего цитотоксическим и цитостатическим действием, для предотвращения РШХ у саыох шшеЯ с тем, чтобы разработать подхода, позволяющие прогнозировать последствия

трансплантации лимфовдной и кроветворной ткани для репродуктивной способности.

2. Изучить особенности вынашивания и исхода беременности в условиях РТПХ, индуцированной у самок мышей в разные периоды беременности, а также в условиях, когда развитие РТПХ было приостановлено в результате применения иммунодепрессанта.

3. Изучить роль генетических различий между матерью, плодами и донором лимфовдных клеток в исходе вынашивания беременности в условиях РТПХ,

4. Провести исследование особенностей развития и иммунологического статуса потомков, рожденных или только вскормленных самками с индуцированной РТПХ, а так&е глазей, получавших в первые дни после рождения яньекции плазмы крови, взятой у шшей с кндуцирозашой РТПХ и подвергнутой накануне введения ультрацентрпфугированш.

5. Выяснить состояние барьерной функции плаценты в условиях РНК по результатам изучения неточного хшермзма в лимфовдной и кроветворной ткани потомков к кх специфической иммунологической реактивности по отношения к кояным трансплантатам материнского и донорского генотипов.

Научная новизна. В раэ.уыате проведенных исследований установлены ранее неизвестные данные об изменении характера иммунобиологических взаимоотношений между матерь» и плодами в условиях трансплантации матери нескнгенкых лтафзкдаых клеток. Проведено детальное экспериментальною исследование последствий трансплантации лимфовдной и кроветворной ткани для вынашивания беременности, для здоровья матери и её потомства.

Ус71ио?лгко, что РТПХ, гадуцлровакпап у сакок во врзкя берекзгаостк :: протекатая бгз тг.ттпгчост^пс прэявлешгй, но оказывает вжшгап ка исход береиекноста. Крокэ того, естественная резистентносгь самок-гкбридоз Р| к РТПХ на разгав: стадиях беременности н а пзрвнз дни после родов подвержена фазным изменениям.

Впервне показано, что введение гепарина са?я:а:,1 накануне трансплантации та! срашп'делыю небольшого числа лшфоиджгг клеток (35 г,ли. 5 способствует предотвращения развитая РТПХ, сшивая при гтсч (Ър'".фоп:а!"'.э клеточного тпгсзрхсиа в яигфсящ-н--гс н кроветворных органах. Г са\;о:х-х:;п"зр, бютбгкзс о? РШХ, присоединившаяся через 3-7 месяцев беременность, чаще всего повторная, при определенных генетических различиях ¡¿езду плода!.® и гонором трансплантированных катера клеток кокет спро-зоцировать обострение РГПХ, вызывая при этом усиление пролиферации персистирущих лимфоцитов донорского фенотипа. Во время первой беременности у зтгас те самок, несмотря на отсутствие у них клинических проявлений РШХ а низкий уровень клеточного хшеризма, наблюдается высокая частота ослознекий (резорбция зародышей, еккцдши, . внутриутробная гибель пасти эмбрионов), в то вреда как повторная берзиекность чацэ всего развивалась без указанных наруиенпИ.

Обнаружено, что РТПХ, индуцированная у матерей во время беременности, способствует возникновения у рэдмпаегося потомства характерного заболевания, которое ыозет протекать з острой или хронической форме я приводит к гибели в первые месяцы или на втором году етзни. Заболевание иыеет большое клиническое и патоморфологическое сходство с проявления!® систем-

ной РТПХ, но отличается высокой частотой амиловдоза и опухолей лимфсидной ткани, начиная уже с первых: месяцев жизни.

Вскрыты механизмы, лежащие в основе иммунологических нарушений у потомков, родившихся в условиях НИК. Показано, ¿что РТПХ, индуцированная у матерей, не ведёт к возникновении клеточного химеризыа в лимфоидной и кроветворной ткани эмбрионов к новорожденных. У потомства таких матерей не наблюдается изменения иммунологической реактивности по отношению к трансплантационным антигенам, присутствующим в тканях матери к в трансплантированных ей клетках.

Впервые установлено, что аналогичное заболевание, со-провокдающееся иммунояогиче с отми нарушениями, включая ашло-кдоэ к злокачественные лимфомы, монет развиваться также у шзгей, розданных нормальными самками, ко вскормленных приёмными матерями с индуцированной у них РШХ, Такое же заболевание может развиваться у мышей, которым в первые дни после рождения, но не с 5-го дня, вводили плазму крови, взятую о? шшей с индуцированной РШХ и подвергнутую перед введением ультрацентрифугирования при 100 000^.

На основании полученных данных экспериментальная система рекомендована для моделирования вроздёкных иммуиодефицкг-нызс состояний, а также для дополнительной омзнки шкунодеп-рессантов, которые можно было бы применять для предотвращения РТПХ у реципиентов кроветворной ткани с возможным сохранением у них репродуктивной способности.

Совокупность вскрытых экспериментальных фактов позволила сформулировать новое, перспективное для дальнейшего изучения положение о том, что юмунные процессы, возникающие у самок

после трансплантации несингенной лимфоядной ткани, могут стать причиной невынашивания беременности или возникновения иммунопатологических: процессов после беременности и родов у самих матерей и у их потомства.

Обнаружение такого рода нарувений у потомков представляет собой установление новой разновидности врожденных имцуно-дефицитных состояний, в основе которых лежит повреждение иммунной системы плодов под воздействием неспецифических гуморальных факторов, вероятнее всего,нешыуноглобулинозой природы, образующихся в иммунной система штери в результате модуляции клеточных взаимодействий.

Полученные данные демонстрирует новый тип иммунобиологических взаимоотношений матери и плода, матери я коворсн-денных к тлеет непосредственное отношение я актуальным проблемам иммунологии и онтогенеза.

Установленные научные факты и сделанные на их основе заключения являются новыми к составляют предмет наней запеты.

Практическая ценность работы. Результаты проведенных исследований позволяют поставить вопрос о максимальном сокращении показаний к массивным гемотрансфу-зияи, трансплантации кроветворной ткани я другим воздействиям на иммунную систему будущей матери, которое повышаю? риск развития у нее РГПХ и сходных с ней состояний. В детородном возрасте такого рода лечение следует проводить только по жизненным показаниям, предупреждая при этом о возможных последствиях в случае возникновения беременности в будущем.

Выявленная в наших опытах способность беременности провоцировать обострение РГПХ, развитие которой ранее было при-

остановлено с помощью иммуноыодулятора, позволяет рекомендовать данную экспериментальную систему в качестве модельной для дополнительной оценки препаратов, которые можно было бы применять для предупреждения РШХ, сохраняя при этом репродуктивную способность у реципиентов.

Полученные нами данные о возникновении у потомков, родившихся в условиях РШХ, различных иммунологических нарушений, включая амилоидоз и злокачественные ли»«фомы, позволяют рекомендовать эту систем для моделирования врожденных имыу-нодефицнтных состояний, а также в качестве модельной системы при изучении проблем швиоадоза и онкогенеза лимфоцдной гяани.

Полученные впервые данные о способности гепарина предотвращать развитие РШХ у шзей в случае трансплантации км сравнительно небольшого числа лкьфовддавс клеток позволяю? поставить зсярос о исзыогнси применения гепарина для аналогичная цолей в клшвгсасхве условиях посла соотазястоукцсй апробация.

2 а о д р о к и с р о э у л ь г а о в послед о а с. п п я. Осиогкиз полоазкяя диссертационной рхбаа кс-польэуажм а иаугко-ясследохйзз-зльсиой работе, а гаше в лекционном курсе и гздении прахтичеинк занята" на кафедрах биологии, микробиологии, патологической ана^ЕЛ-аг и клюсгеве-ной иммунологии Смоленского -пединститута. Частично материалы диссертации вопли в монографии А.С.Шевелёва "Реакция етракс-плантат против хозяина" а трансплантационная болезнь" (1976).

Апробация работы. Основные положения диссертации доложены на: заседаниях проблемной комиссии "Общая и прикладная юааунология" Смоленского мединститута (1975-

1988); заседании Всесоюзной проблемной комиссии по трансплантационной иммунологии (Ташкент,1977); Учёном Совете Ш СССР (Москва,1977); заседаниях иммунологического семинара Смоленского мединститута (1987); на Всесоюзном симпозиуме "Иммунология опухолей" (Киев,1975); на П Всесоюзном симпозиуме "Ранние проявления тканевой несовместимости" (Звенигород,

1976); на У1 Всесоюзном съезде патологоанатомов (Иваново,

1977); на УШ Всесоюзном съезде патологоанатомов (Тбилиси, 1969); на X Всесоюзной конференция по трансплантации органов и тканей (Киев,1985); на научной конференции слушателей факультета повышения квалификации преподавателей медицинских институтов (Киев,1985); на научной конференции Смоленского мединститута (1986); на Ш Всесоюзном симпозиуме с международным участием по иммунологии репродукции (Киев,1987).

Публикации. .По основным материалам диссертации опубликовано 35 работ в отечественных, зарубежных журналах и сборниках.

Объём и структура работы. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследований, изложения полученных результатов собственных исследований и их обсуждения (в двух частях по две главы в каждой части), заключения, выводив и указателя литературы. Работа изложена на 375 страницах машинописного текста. Из них 136 представлены рисунками, таблицами и указателем литературы. Текст диссертации иллюстрирован 50 рисунками и 31 таблицей. Указатель литературы занимает 60 страниц, содержит 506 наименований, из которих 91 отечественных и 415 зарубежных источников.

На защиту выносятся следующие положения диссертации:

I. Представление о феномене "полуаллогенной супрессии" -неспособности гибрида Р^ осуществлять развитие специфических иммунологических реакций на' Н-2 антигены гистосовместимостя одного из родительских гаплстипов, если его иммунная система уже стимулирована такими же антигенами другого родительского гаплотипа, - как о причине невынашивания беременности и обострения РТПХ, спровоцированного беременностью, у долгоживу-щих клеточных самок-химер "родитель-гибрид Р|".

¡2. Представление О РПК, развивающейся у матерей во время беременнооти, как одной из причин возникновения врожденных иммунодефицитных состояний, которые могут проявляться клинически как в раннем, тан я в зрелом возрасте, характеризуются многообразием иммунологических нарушений, имеющих большое сходство с проявлениями РТПХ, но отличаются от неё высокой частотой амилоидоза и злокачественных опухолей ликфоидной ткани с первых месяцев жизни.

3. Представление о зависимости процессов формирования иммунной системы эмбрионов к новорожденных в адаптивном периоде от. характера клеточных взаимодействий я щиуниой система матери, осуществляемых при участии неспецифич&снь. гуморальных факторов негашуногяобудиновой природа.

МАТЕРИАЛЫ И метода ИССЛЕДОВАНИЙ

В опытах использовано около 5000 шбрсддах шявй. &лга линий СБА (Н-2(Н-2В),^/./(Н-2К), ЬаМ/с (Н-2*), ДВА/2 (Н-2^> и гибрвды первого поколения этих линий подучены из питомника линейных животных АШ СССР "Столбовая". &ига

линии СВА/Н и сингенная субпопуляция СВА/Н ТбТб завезены из вивария Всесоюзного Онкологического центра (В0НЦ) и размножены согласно требованит! инбредного разведения животных. Инбредность животных периодически проверяли с помощью синген-ных кожных трансплантатов, а у мышей СВА Т6Т6 проверяли также наличие хромосомного маркёра Тб. Некоторые разновидности гибридов Р|, а также все разновидности гибридов получены наш в процессе выполнения экспериментов. Для получения гибридов ?2 применяли прямое и возвратное скрещивание. Животных содержали в оптимальных условиях светового, пигцезого и температурного режимов. Все болезненные процедуры проводили с применением эфира или гексенала.

С целью изучения влияния РТПХ на иммунобиологические ззаимоотношения матери и плода взвесь клеток селезенки и лимфатических узлов вводили самкам шаей за несколько месяцев до скрещивания их с самцами или в разные периоды беременности.

Клеточные взвеси, предназначенные для трансплантации, готовили из селезенок и лимфоузлов с соблюдением правил асептики и хранили на льду. Селезенки и лимфоузлы измельчали раздельно в стеклянных гомогенизаторах, добавив раствор Хзнкса или среду 199. Полученные взвеси фильтровали через капроновый фильтр, а затем через 2-3 слоя хлопчатобумажной ваты для задержания крупных частиц, стромальных элементов а мёртвых клеток, способствующих обычно возникновению тромбоэмболии ("Удостоверение на рационализаторское предложение" М5 от 14 мая 1973 г. Смоленский мединститут). Затем клетки отмывали дважды центрифугированием при 1500 об./мин. в течение 10 мин. В счётной камере подсчитывали количество живых (не-

окрашенных) клеток. Жизнеспособность клеток определяли смешивая 0,1 мл взвеси с 1,9 мл раствора, содержащего равные части 0,1 % трипановой синьки в дистиллированной воде и 0,1 % эозина в двухкратном растворе Рингера. После подсчёта клеточные взвеси, приготовленные раздельно из селезёнок и лимфатических узлов, смешивали в соотношении 1:1 и вводили внутривенно в ретроорб итальный венозный синус в объёме не более 0,5 ыл. При трансплантации большого числа клеток (180-400 млн.) клеточную взвесь вводили в несколько приёмов с интервалами в 20-30 минут.

Системную РТПХ вызывали у самок мышей СБА и гибридов [СВ#+Сб¿1 . Донорами лимфоидных клеток для индукции ПЕК служили мыши Сбг8£- . В аллогенной системе самкам СБА вводили ликфоидные метки доноров , предварительно

сенсибилизированных против аллогенных мышей СНА. Контрольным самкам вводили живые клетки сингеннкх доноров или мёртвые клетки от мьшей С, убитые нагреванием на водяной бане при +56*С в течение 30-60 мин. Локальную РТПХ в подколенных лимфоузлах вызывали по методу ^о^сС сЛ а/. (1970) в модификации.

В процессе разработки подходов, позволяющих прогнозировать последствия трансплантации лгафэидь^й и кроветворной ткани для репродуктивной способности, возникла необходимость в иммунодепреесанте, который в условиях эксперимента обладал бы способности предотвращать РТПХ, не оказывая при этом ци-тотоксического,цитостатического действия. В качестве такового вами был выбран гепарин. Поскольку данные о влиянии гепарина на РТПХ в литературе отсутствовала, нами было прове-

дено изучение ¡этого вопроса и разработана метода:;а применения гепарина для предупреждения РГ11Х у мшей. Для введения животным применяли гепарин из двух источников: "Рихтер" (Венгрия) - зпдкий, стзрилышй, активксатью 5 тыс.ед./ил и "Спофа" (ЧССР) - сухой, без консерванта, активностью 120 ед./мл.

Количественную оценку синдрома FT11X проводили по продолжительности жизни реципиентов. G целью выявления клеточного химеризма после трансплантация клеток у самок-реципиентов и зге потомков проводили цитологическое исследование лим-феидных и кроветворных оргакоз с помощь® хромосомного маркёра Тб по методу Jot(1956).

У потомков изучали среднее количество мшат и их соотношение по полу в помётах, выялваемость и продолжительность жизни, динамику нарастания массы тела, иммунологический статус в разные периоды глзии, гистологическую картину а орга-ннх, частоту возникновения опухолей лимфоидной ткани. С целью выявления изменений в иммунологическом статусе проводились следующие исследования:

1. Определяли общее количество лейкоцитов я число лимфоцитов з кропи.

2. С помощью прямой реакции Куцбса проверяли наличие противоэритроцитарных аутоантител, Сухая кроличья сыворотка против глобулинов кыши готовилась в лаборатории сывороток (зав. - проф. Шаханова Х.Л.) ИЭН АМН СССР ш. Н.Ф.Гамалеи. '

3. Методом дискового электрофореза в поляакриламвдном геле проводили электрофоретическое исследование белков сыворотки крови по общепринятой методике (Маурер Г., 1971),

предварительно обработанной 1,5 $ растворе® риванола с це-лыз удаления всех: других белков, кроме иммуноглобулинов ^ и трансферринов (Тихонов В.il., Жаркова С.Ф., 1973). Денсито-граммы с гелей снимали на микроденситометре фирмы "Карл Цейс" фиа, , ГДР).

4. Часть мышей забивали в разном возрасте и определяли у них число Т-лимфоцитов в селезёнке и лимфоузлах ыикроцито-токскческим тестом К, £AJ973). Моноспецифи-

ческуа анти-тэта-сыворотку готовили по методике ( Я. <П„ JlßCßHr /. и'., 1964), иммунизируя кьшей линии ЯМ Д. клетками тицуса шггей CSA.

5. У мышей разного возраста изучали способность к иммунному ответу на эритроциты барана, полисахаридный Ви- ан-ген бактерий брюшного тифа и на трансплантационные антигены. Эритроциты хранили в растворе Олсвера и по мере надобности отмывали в физиологическом растворе. Би-антиген получен из лаборатория кшунологш (зав. проф. Краскяна H.A.) Московского НИИ ЭИ.

fcaS юедунк чровали путём ваедения внутркбршинно 200 шм. эритроцитов барана или 10 ккг Бя-антигенг и на 5-й день после пмцунизеция определяли число бляшообразущих клеток (БОК) в селезенке шгодом локального гемолиза в агаре по штоду Ернэ (1963) в соответствующих модпфикациях {Си,ыи.nfha,tn Л.1., ÎZÉttétl^-jl* 1968; Корукова A.A. 1971). Трансплантационный »шауните? оценивали по длительности приживления коиаос аляотрансплантатов от мыпей ДВА/2-Трансплантацию кожи проводили по модифицированной методике Биллингева и Йёдавара ( IS55).

С целью изучения состояния естественного противомик-робного иммунитета часть мышей в возрасте I мес. заражали внутрибрюлинио 100 млн. брюшнотифозных бактерий (шт&ш tjf -2, № 4446), мышатам в гозрасте 12-15 мес. вводили по 500 илн. таких же бактерий.

Гистологическому исследованию подвергали тимус, селезенку, паховые, подмышечные, подчелюстные и мезентериаль-ные лимфоузлы, кусочки печени, почек, лёгких, сердца, поджелудочную железу и кишечник. Ткани фиксировали в жидкости Карнуа, 12 % нейтральном формалине и заливали в парафин. Срезы окрашивали гематоксилин-эозином, конго красным, смесью метилового зелёного и пиронина по Браше и реактивом Шиффа по Хочкиссу. Протоколы гистологического описания изменений в лимфоузлах и селезенке заполняли согласно предложениям по их стандартизации комиссии ВОЗ (Котье А. и др., 1973). Классификацию опухолей лимфоидной ткани проводили по town, ЗА. (1954, 1968).

В части случаев для дифференциального диагноза опухолей, кроме гистологического метода, дополнительно" применяли биологический тест - перевивку опухоли с помощью клеточных трансплантатов и с помощью бесклеточного экстракта.

Для выявления отложений иммунных комплексов в почечных клубочках использовался прямой вариант иммуногистохими-ческого метода Кунса {toons ЛЯ., i960).

Аналогичные исследования были проведены среди потомков, рожденных нормальными самками, но вскормленных приёмными матерями с иедуцированной у них PTUX, а также среди шлей, которым в первые дни жизни вводилась плазма крови, взятая у

IB

мышей с РГПХ и подвергнутая ультрацентрифугированию при 100 ООО £ .

Чтобы исключить гибель потомков от возможного недостатка молока, каждый помёт вскармливался 2-3 приёмными самками, а с 14-го дня к нки подсаживались нормальные кормящие сашш.

Ультрацентрифугирование плазш крови проводили с целью освобождения её от возможного присутствия эндогенных ретро-вирусов (.M-s MûSteî* J. ,1975), которые активиру-

ются с результате FÜJX {pkli&fSS. -.U.b). 8ïa часть рабоsa проводилась в лаборатории физиологии онко-рказпрусов Московского института вирусологии ш, Д.И.Ивановского совместно с док. биол. наук Алыатейном А.Д, Центрн-фугкросали в роторе SW 39 (bptifcû , модель I) в течение 2 часов при 100 ООО г?.. После центрифушиоования препарата

О

хранили при-20гС.

При статистической обработке результатов исследований использовали параметрический метод оценки достоверности полученных результатов с вычислением критерия -¿ Сгавдента и ке-паракзгргческий этод Шишера для четырёхпольной таблицы (IN/блор-Е.Б., Генккн АД., 1973; Рогащний ПЛ., IS5I).

результата исследивши И ИХ ОБОТВДИШ

Часть I. ВЛИЯНИЙ РШХ, ИНДУЦИРОВАННОЙ У С/ЛЖ ШШ^М, НА ШШШИВАШ5 БКРКШШитм И tE ИУШВДЗХЕйЯ ДЛЯ HATJffïM.

1,1. Вымаливание беременности в условнях Р111Х, индуцированной кг разных стадиях беременности.

Все подопытные самки-гибриды скрещенные с сингенны-

ш самцами за 2-4 суток до трансплантации км 40 млн. живых

лимфоидных клеток от мышей СнВС- , погибли от РП1Х значительно раньше (продолжительность жизни 19,4 ? 3,6 суток) по сравнению с девственными самками (28,7 + 3,0 суток; р<$,05). Из 34 подопытных самок 10 погибли до наступления предполагаемого срока родов. На вскрытии в матках у них обнаружены эмбрионы, погибшие на разных стадиях развития. У остальных самок за несколько суток до их гибели наблюдались выкидыши, рождение мертвых плодов, приостановка родов. Аналогичные результаты были получены при скрещивании подопытных самок с самцами родительских линий.

В контрольных группах при введении беременным самкам а первом триместре живых лимфоидных клеток от сингенных гибридов или убитых клеток от мышей у матерей не наблюдалось каких-либо нарушений ни во время беременности, 1га после родов.

Введение беременным самкам-гибридам родительских лимфоидных клеток в 3-м триместре не оказывало отрицательного влияния на исход беременности. Результаты изучения потомства этих самок приводятся во второй части диссертации. У самих матерей в первые 2-3 недели после родов не наблюдалось признаков заболевания и они хорошо лактиргэали. Однако позднее у некоторых из них появились признаки трансплантационной' болезни, от которой они быстро погибали. Частота развития болезни зависела от числа трансплантированных лимфоидных клеток и генотипа самцов, взятых для скрещивания.

3 частности, при введении реципиентам 35 млн. клеток у большей части самок, скрещенных с сингенными самцами, после родов длительное время (более 100 суток) вообще не отмеча-

лось признаков болезни и за. это время погибло лишь 7,7 % животных, в то время как у девственных самок от РТПХ в течение месяца погибло 86,6 %. У мышей, получавших по 90 млн. лиыфоидных клеток летальность от РШХ была высокой как в опытной группе (71,7 %), так и в контрольной (100 %). Однако продолжительность жизни подопытных самок была выше (34,0 + 4,6 суток) по сравнению с девственными (18,5 + 2,1 суток; р<0,01),

Аналогичные результаты, свидетельствующие о повышении естественной резистентности беременных самок-гибридов к FOIX в 3-м триместре, были получены в группе самок, которых скрещивали с самцами родительской линии СВА. В то же время у самок, беременевших в результате возвратного скрещивания с самцами C$?ߣ повышения естественной резистентности к РТПХ не наблюдалось. При скрещивании таких же самок с аллогеннымн сащами линии ДВА/2 было обнаружено лишь незначительное повышение естественной резистентности этих самок к РТПХ.

Следовательно, в тех случаях, когда для скрещивания брались своды, генетически отличающиеся от доноров трансплантируемых саыкгш яныфоидиых клеток,'беременность способствовала ловшеняэ резистентности этих сак^к к РТПХ в 3-м триместре.

В дальнейшем при изучении чувствительности самок-гибридов Fj к системно^ и локальной РТПХ в первые дни после родов наш установлено, что у самок, скрещенных с самцами родительской линии СВА, после родов вместо повышенной резистентности к РШХ обнаруживается повышение чувствительности по

сравнению с девственными самками. Наиболее чёткие результата получены в опытах с локальной РД1Х. Так, относительные показатели массы регионарных лимфоузлов у соответствующих подопытных самок составили 4,42 (2,0 - 7,7), а у девственных - 2,87 (1,6 - 5,0; Р<0,025. В то же время у подопытных самок, скрещенных с самцам» родительской линии показатели были равны 2,89 (2,0 - 5,0).

Таким образом, по мере развития беременности чувствительность самок-гибридов к РП1Х претерпевает фазные изменения, что зависит от стадии эмбриогенеза, а на поздней стадии бе-реыенности-и от генотипа плодов.

На основании полученных данных можно сделать вывод о том, что неодинаковая чувствительность самок к РГПХ на разных стадиях беременности и после родов является результатом физиологических изменений в иммунной системе матера, связанных с имплантацией, вшааиванием плодов и родами. Кроме того, вполне очевидно, что специфические иммунологические реакции, причастные к изменению чувствительности самок-гибрвдов ¿у к РШХ на поздней стадии беременности и в первые дни после родов, рестриктированы антигенами хистосовместимости двух родительских гаплотипов, присутствующими а тканях их плодов.

1.2. Вынашивание беременности и её последствия для матери после родов у самок мышей с индуцированной РШХ, выживших ранее в результате применения им-мунодепрессантов (гепарина). Беременность как фактор, провоцирующий обострение РТПХ.

В предварительных опытах нами установлено, что введение гепарина реципиентам накануне трансплантации им лимфоид-ных клеток способствует повышению резистености к РТ11Х, в то

время как после обработки донорских клеток <л или

<-1 способность их к ГОК даже несколько увеличивается. Ишунодепрессивные свойства гепарина в опытах с РТПХ максимально проявлявтся при трансплантации реципиентам сравнительно небольшого числа лимфоидных клеток (30 или 40 млн.). Б 2-й случае клинических проявлений РТПХ и летальности вообще не отмечалось, во 2-м - из 15 мышей за 100 суток погибло лишь 2; в контрольных группах за это же время погибло, соответственно, из 48 мышей 12 и из 12 - II.

Через 3-7 месяцев после трансплантации лимфоидных клеток 37 самок, выживших от РТПХ под защитой гепарина, были спарены с нормальными самцами, в результате чего 33 самки забеременели (табл. I). У 24 из них отмечались осложнения во время беременности. 3 самки погибли' до родов или во время родов. На вскрытии у них обнаружены эмбрионы, погибшие на разных стадиях развития. У 19 самок наблюдались маточные кровотечения, выкидыши. 3 из них были забиты ь на аутопсии в матках наряду с погибшими и разложившимися эмбрионами обнаружено несколько р^сцессов. &цё у одной такой самки абсцесс вскрылся самостоятельно наружу, после чего "на выздоровела.

Кроме отмеченных здесь 6 самок, у остальных 27 общее состояние во время беременности оставалось удовлетворительным, несмотря на то, что у 16 из них беременность сопровождалась выкидышаии или заканчивалась родами нежизнеспособного потомства. У некоторых из них после выкидышей часть эмбрионов продолжала развиваться и беременность заканчивалась нормальными родами живых шпат.

Часть подопытных сшййс» не яагкаюс после родов шшниче-

Таблица I

Вынашивание беременности и е? последствия для самок мышей , вшивших

ранее от РЛ1Х, индуцированной лимфоидныыи клетками мышей ¿У/ после введения самрам гепарина накануне трансплантации.

Летальность самок после "беременности иродов 65Йёё~число~чйсло наблюдавши- павших р хся после самок родов мышей

№ Число Вве- %сло Число ___Исход беременности

груп-лиы- дение мышей забере- погй5лй выкйдышйТ нормальные

фонд- гепа- в менев- до ро- мёртво- роды

гш них рина труп- ших дов или рождения,

кле- пе самок после несостоя-

ток родов вшиеся (млн.) роды

I 40 + 13 II 2 9 • 6 5 =0,025

2 30 + 24 22 Г 12 9 19 14 =0,025

3 30 - 21 19 • 2 - 19 19 5

4 30 - 15+ - 15 2

5 30 + 18+ - . 18 I < 0,025

6 - + 10 10 2 - 10 ю -

Й

Примечание: + самок не скрещивали с самцами

ских проявлений болезни, скрещивалась с самцами повторно. У некоторые из них при повторной беременности также отмечались выкидыши, но количество рождающихся при этом живых мышат в помётах увеличивалось в среднем с 1,18 при 1-й беременности до 4,38 при повторной. Кроме того, у 19 самок из 25, не имевших во время беременности явных признаков болезни, спустя некоторое время после родов появлялись признаки болезни, характерные для РШХ, от которой они погибали в течение 2-3 месяцев. Возникновение заболевания у самок в этих условиях следует рассматривать как обострение РТПХ, спровоцированное беременностью, поскольку среди самок в контроле, выживших от РТПХ и не имевших затем беременности, летальность за последующие 8 месяцев была невысокой, независимо от того, получали они ранее инъекции гепарина или нет. Поскольку у самок в контрольной группе, получавших только инъекции гепарина, беременность протекала без осложнений, все эти данные позволяют считать, что осложнения во время беременности у подопытных самок являются результатом изменения у них иммунологической реактивности, вызванного сочетанным воздействием на иммунную систему гепарина и трансплантированных лимфоидных клеток.

Данное предположение косвенно подтверждается результатами наших дальнейших исследований, в которых ..оказано, что нарушения беременности и обострения РТПХ, спровоцированные беременностью, чаще всего наблюдаются у подопытных самок-гибридов, спаренных с сингенйыьш самцами и с самцами родительской линии СВА, и значительно реже у таких же самок, спаренных с самцами С£{8£ я с ажлогенными самцами ДВА/2. Эти данные свидетельствуют о наличии прямой зависимости между степенью

выраженности наследуемых фетоплацентарным комплексом генетических детерминант родительского гаплотипа СБА и частотой возникновения указанных нарушений у самок. Они указывают на специфичность иммунологических реакций у подопытных самок, возникающих в одном случае под влиянием трансплантированных донорских лимфоцитов, в другом - под влиянием тканей фето-плацентарного комплекса. Всё это позволяет с большой вероятностью предположить о причастности специфических иммунологических реакций к возникновения в данных условиях иммунологического конфликта между матерью и плодом и я обострению РТПХ, спровоцированного беременностью.

Данное предположение частично подтвервдается и уточняется результатами изучения динамики клеточного химеризма у подопытных самок в условиях, способствующих предотвращению и обострению РТПХ.

8 частности, введение гепарина самкам накануне индукции у них Р111К способствует болне интенсивной пролиферации донорских клеток в селезенке и лимфоузлах йа 4-е сутки (34 и 56 %%) и на 10 сутки ( 20 и 42 по сравнению с мышами, не получавших инъекций гепарина (15 и 37 и 18 и 22 %%, соответственно). Через 25 суток после трансплантации число донорских митозов в селезенке и лимфоузлах у опытных самок значительно снизилось по сравнению с предыдущим сроком 1до 2 и 8 %%). У контрольных мышей, в отличие от опытных, я этому времени появились признаки 'трансплантационной болезни, а количество донорских митозов у них возросло до 48 и 71 5Й5.

У самок, выживших от РТиХ под.защитой гепарина и спустя 4 месяца забеременевших, число донорских митозов во время бе-

реыенности, протекавшей без осложнений или осложненной выкидышами, а также через 1,5-2 мес. после родов при отсутствии у них проявлений РТПХ было невысоким и во всех случаях не отличалось от показателей у таких же самок, но не имевших беременности (0,5 - 7 %%). Однако у подопытных самок с появившимися через 2 месяца после родов признаками трансплантационной болезни наблюдалось резкой увеличение числа донорских митозов в селезенке я лимфоузлах (62 и 98

С учётом результатов, полученных при изучении клеточного химериэыа, становится очевидным, что введение гепарина самкам накануне трансплантации им лимфовдных клеток способствует формированию клеточного химеризма с временной утратой способности донорских клеток осуществлять РТПХ, но в определенных условиях, зависящих от генотипа плодов, беременность может способствовать восстановлению утраченной реактивности этих клеток.

Кроме того, есть основания утверждать, что донорские клетки, перситирущие в данных условиях, непосредственно не участвуют в повреждении плодов, а способствуют этому косвенно, инициируя у матерей развитие специфических иммунологических реакций, которые и становятся причиной выкидышей.

Таким образом, полученные факты м их аколиз позволяет прийти к выводу, что иммунологический механизм, с помощью которого создаются условия для персистенции трансплантированных самкам лимфоидных клеток с одновременной утратой ими способности осуществлять РЮХ, становится препятствием для реализации матерью специфических иммунологических реакций, необходимых для вынашивания беременности. После одной или нес-

кольких повторных беременностей данное препятствие ослабевает или полностью исчезает, что в свою очередь приводит к нормализации условий для вынашивания беременности, но вместе с тем - и к восстановлению ранее утраченной способности донорских лимфоцитов осуществлять РТПХ у матери.

Обращает на себя внимание факт,- что все обнаруженные в наших опытах иммунологические эффекты (изменение естественной резистентности самок-гибридов Р} к РТПХ в 3-м триместре я в первые дни после родов; возникновение у подопытных самок, выживших от РТПХ под защитой гепарина, осложнений во время беременности и обострение у них РТПХ, спровоцированное беременностью) рестриктированы Н-2 антигенами двух родительских генотипов. Это означает, что в условиях, когда у гибрида Р^ возникают иммунологические реакции на родительские антигены одного из гаплотипов, его способность отвечать аналогичными реакциями на родительские антигены другого гаплотипа угнетается, в то время как реактивность на антигены аллогекной линии почти не изменяется»

Обнаруженное нами явление в литературе не описано (условно его можно обозначить как "полуаллогенная супрессия"). Однако известен целый ряд сходных иммунологических феноменов, которые относятся к проявлениям иммунологической супрессии: супрессия аллотипов {Мл/>е, £.^.,1975) и идиотипов там. -^Ц1975), неспособность Т- и В-лимфоцитов долгоживущих клеточных химер "родитель - гибрид Р^ или "гибрид - родитель" кооперировать с клетками другого родительского гаплотипа (9*. , 1972), преобладание экспрессии аллоантигенов материнского гаплотипа над отцовскими на поверхности тро-

фобласта (&Oiit W, ,-1989), изменение экспрессии антигенов гистосовместимости I клесса разных родительских гаплотипов под воздействием появившихся в организме гибрида Рj клеток одной из родительских линий , 1984).

Поскольку для всей этой группы эффектов общим является альтернативный характер функционирования двух одинаковых генов разных аллотипов, идиотипов или гаплотипов, результаты наших исследований позволяют предположить о существовании у гибрида иммунологического механизма, с помощью которого в клетках, вероятно, исключается возможность одновременного $; жцкокирования двух одинаковых генов разных гаплотипов.

Биологический смысл такого механизма может заключаться в контроле за синхронностью процессов в определенной популяции клеток, возможно, с целью стабилизации их фенотипа. Не исключено, что этот механизм выступает такие в роли биологических часов, определяющих время наступления родов. Из этого следует, что незапрограммированное или преждевременное изменение экспрессии антигенов гистосовместимости разных родительских гаплотипов на поверхности трофобласта может стать причиной выкидышей или преждевременных родов.

Часть П. ИЗУЧЕНИЕ РОМ РКАКЦШ "ТРШСШ1АНШ* ПРОТИВ ХОЗЯИНА" В ВОЗНИШЮВШДО ВРОЖДЕННЫХ ШШУИОдаИЦИ'ГНЫХ

состояния.

2,1. Влияние PTUX, индуцированной у самок мышей во время беременности, на потомство.

Большинство мышей, родившихся от самок и СВА с РНК, индуцированной в 3-м триместре беременности в первое время развивалось нормально. Однако на 15-20 сутки у некоторых из них, в том числе у мышей, вскармливаемях нор-

мальндаи приёмными матерями, появились признаки болезни, сходные с РТИХ, которая приводила их к гибели в течение 1-3 месяцев. Частоаа заболевания потомков в этот период не зависела от их пола.

При введении самкам-гибридам (табл. 2) сравнительно небольшого числа донорских живых лимфоцитов (35 млн.) от мышей С£~г££ летальность среда потомков в первые 4 месяца была невысокой (3,4 %), но значительно возрастала при увеличении »гасла трансплантированных клеток до 90 млн. (18,7-39,5 ?<,%), оставаясь примерно на таком уровне при дальнейшем увеличении числа клеток до 400 млн» (20,7 %), Частота заболевания среди потомства подопытных самок-гибридов была примерно одинаковой ках в прямом (18,7-39,5 %%), так и в воз*

вратном скрещивании (23,1-23,2 %%). Аналогичные показатели летальности были у потомков, родившихся от самок СБА, получавших во время беременности инъекции 180 млн. сенсибилизированных лимфоидных нлеток от мышей (39,2 %). При введении самкам клеток, убитых нагреванием, летальность у потомков в первые 4 месяца жизни не отличалась от показателей естественного отхода у нормальных самок (3,8-4,9 %%).

Из 767 мышей, родившихся от всех подопытных самок, 226 (29,4 %) погибли или были забиты в плохом состоянии в возрасте до 4'месяцев. В контрольных группах за это время погибло II % животных из 200. Из 166 подопытных потомков, выживших в первые месяцы жизни в дальнейшем, в основном на 2-м году жизни, погибло 112 (67,4 %), летальность среди самцов у них в два раза превышала летальность у самок (85,Г % я 42,2 %). В контрольной группе за этот же период погибло 12,3 % мышей

Таблица 2.

Летальность потомков, родившихся от самок мышей после транс-

плантации им а 3-м триместре беременности лнмфоидных клеток мышей .

^ Сам- Чис- Чис- Число Число, потомков, погибших в разные периоды жизни______

— "" РОДИ- в первые 25 суток с 25 дней до 4-х тс. с 4-х мес. до

груп- цы пы

ло

ло

скре-щива-вания мен- ных самок фовд-ся ных мышей : клеток (млн.) абс г %% Р1 абс. %% Р2 абс. %% рз

I РГ 16 35 103 15 10,6 >0,05 3/88 3,4 >0,05 5/21 23,8 <0,05

2 Р1 16 90 108а 17 15,7 >9,05 17/91 18,7 <0,01 23/28 83,1 <0,01

3 Р1 14 90 946 16 17,0 <0,05 10/78 12,8 <0,01

4 Р1 10 90 65в 17 26,2 ¿0,05 19/48 39.5 <0,01

5 Р1 8 400+ 58 5 8А >0,06 11/53 20,7 <0,01 16/22 72,7 <0,01

а р1 10 - 72 8 11,2 1/64 1,6 3/22 13,6

7 9 90 60 8 13,3 ?0,05 12/52 23,1 <0,01 17/26 65,3 <0,01

8 СБА 12 , 90 79 10 12,6 >0,05 16/69 23,2 <0,01 15/22 88,2 <0,01

Примечание: а) с первого дни жизни потомков вскармливала приёмная нормальная мать; б}потомкои вскармливались одновременно собственной и нормальной лриэмной матерями; в)приемная нормальная мать подсаживалась с 10-12 дня жизни; + взодились сенсибилизированные клетки? в числителе число погибших потомков, в знаменателе - общее число.

со

о

с одинаковыми показателями летальности среди самцов и самок.

При изучении иммунологического статуса у всех мышей, заболевших в первые месяцы жизни, а также у части подопытных потомков, не имеющих в этот период клинических проявлений болезни, обнаружены изменения, свидетельствующие о нарушении Т- и В-систем иммунитета. Это выражалось (табл. 3) в снижении общего числа лейкоцитов и числа лимфоцитов крови, уменьшения числа Т-лимфоцитов в селененке и лимфоузлг •<, угнетении имун-ного ответа (числа БОК) на тимусзависимый эритроцитарный антиген и на тимуснеэависимый бактериальный Ви-антиген, замедленном отторжении кожных аллотрансплантатов, повышении чувствительности к экспериментальной инфекции.

У подопытных потомков, выживших в первые месяцы жизни и исследованных в возрасте 10-18 месяцев, обнаружено уменьшение числа Т-лимфоцитов в лимфоузлах, изменение общего числа лейкоцитов крови, снижение иммунного ответа на эритроцитарный антиген и одновременное повышение способности реагировать на Ви-антиген, что позволяет предполагать о нарушении хелперной и супрессорной функции Т-лимфоцитов. Отмечалось также повышение уровня сывороточных иммуноглобулинов ^ и трансферринов, отложение иммунных комплексов в почечных клубочках, более частое образование противоэритроцитарных аутоантител. Всэ это указывает на дисфункцию иммунной системы, приводящей к стимуляции В-иммунитата и возникновению аутоиммунных поражений.

При гистологическом исследовании органов подопытных потомков выявлены изменения, соответствующие обнаруженным функциональным нарушениям. У потомков, не имеющих клинических

Т а б л и ц а 3.

Иммунный статус потомков, родившихся от самок мышей )3ч о Р1ПХ, индуциро-

ванной в 3-м триместре беременности лимфовдными клетками мышей С Si B¿ .

Группы Воздет Общее число Число Число Т-лимфоцитов (ци- Число БОК на Юб клеток •л™«»" ,.тоц лейкоцитов лимфо- тотоксический 1 щеке) селезенки после иммуни-мышеи мышеи крови в цитов ---------------------- зацш __

I мм3 селезенка лимфоузлы

(тыс.) НОМ эритроци-_________________________________________________тами_______

средние геометрические и 95« доверительный интервал I опыт ■ 25-30 ~~ Ш & Щ «Г

8 si 77 64 й^аЖ 77 [ га 1яГ~

э'Й.Г'-"~~Bñ]9' I?ЙГ"В$¥ 1?Ш"й

----- месяца --------------------------------------------———.--------------

4 опыт 7,7 (27) 78 (27) 20 ?Гб) 56 (18) 104 (20) 100 (22)

(без ранта) 6*9 * 8,7 76 * 80 16 * 26 50 f 63 86 * 128 83 t 120

б'конт- 7~4~(14) 78" (26} 24~(14) бГ(14Г"00~(15) 8з"(Г6)

роль б|б g 8,3 71+85 22 * 27 60 f 66 89 * III • 66 * 102

б'опыт 12-18 47o"(2Ó) 45~(20) 20~(20) 32~Í20) 98~(20)+ 60~Ц5)+"

месяцев 2¿6 f 6i° 35 f - 16 * 25 _ _26 * 40_ _93 f 2Ó2 57 * 63

7~koht- 5,6~(20 ) 56~(20) 23~(I5) 4<П! Ь)~~ 57~(I8) Í04~(I8Í

роль 4)5 f 6,9. 52 i- 60 21 * 25 41 * 45 56 f 59 91 + 120

со ro

Примечание: + помечены статистически достоверные различия между опытом и контролем (р<0,05). В скобках указано число мышей. В опытных группах исследовались потомки от матерей с РТПХ, в контрольных - потомки от нормальных самок.

проявлений болезни в первые месяцы жизни, в лимфоидных органах, за исключением тимуса, преобладали пролиферативные процессы, характеризующиеся гиперплазией селезенки и лимфоуз:-лов, увеличением количества бластов, ретикулярных клеток, плазмоцитов, «егакариоцитов.

У мышей такого ке возраста, но с клиническими проявлениям болезни-рант, пролиферативные процессы в лимфоидных органах по мере развития болезни сменялись атрофическими и склеротическими изменениями. В тимусе, наряду с исчезновением в нём тимоцитов, наблюдалось повышение активности тимическо-го эпителия.

Среди нашей, исследованных на 2-м году ютзни, в селезёнке и лимфоузлах чаще всего выявлялась повышенная пролифэ-ратипная активность, характеризующаяся гиперплазией фолликулов с образованием реактивных центров, увеличением числа пи-ронинофильных бластов. Но в некоторых случаях во всей лимфоид-ной ткани преобладали атрофические и склеротические процессы.

У подопытных потомков всех возрастных групп отмечалась высокая частота злокачественна! опухолей лимфоидной ткани. У мышей, исследованных в первые 4 месяца яизна, опухоли выявлены в 68,5 % случаев, а в возрасте от 4-х мес. до 2-х лет в 28,5 %, У многих потомков, исследованных в первые месяцы жизни, лимфоидные органы, в которых гистологически выявлены опухоли, были не увеличены, а иногда даже атрофированы, Чаще всего это были потомки с проявлениями острого заболевания. Опухоли у них выявлялись в виде островков атипичных клеток на фоне выраженной или начинающейся лимфоидной атрофии. У потомков, не имеющих внешних признаков болезни, очаги атипичных клеток с проявлениями деструктивного роста выявлялись на фоне общей

гиперплазия лимфоидной ткани. У некоторых мышей обнаруживались изолированные участки с проявлениями лимфоцитолиза клеток и образованием зон клеточ юго опустошения, что характерно для картины обратного развития опухолей лимфоццной ткани (Яьчергъ "«^¿Д975).

Опухолевая природа изменений в лимфоидной ткани у потомков во многих случаях подтверждена перевивкой на взрослых и новорожденных мьшах. При перевивке опухолей на новорожденных часть из них погибала в первые 3-4 недели, обнаруживая при этом характерный рост опухоли в различных органах, а часть однопомзтных мышей погибала через 2-3 месяца с клиническими и морфологическими проявлениями болезни рант. Опухолевые клетки в последнем случае выявлялись в исследованных органах в небольшом количестве и непостоянно.

Кроме указанных изменений, РП1Х, индуцированная у матерей во время беременности, способствовала развитию амилоидо-за печени, селезенки и других органов у родившихся потомков. В ряде случаев ашлоидоз обнаружен у шлей с признаками болезни рант в возрасте 1-2 месяцев (4,3 %). Но чаще всего он развивался в возрасте от 8 мес. и старше (67,3 %),

Бесклеточный экстракт, приготовленный из ткани опухолей, обнаружении*: у потомков, будучи введенным мышам в первые 18 часов после рождения, не вызывал увеличения частоты лимфом, но в ряде случаев, как и при клеточной перевивке, способствовал возникновению амилоидоза,

У потомков, исследованных на 2-м году жизни, выявлены случаи развития иммунного гломерулонефрита, поражения сосудо< по типу периартериита и облитерирущего артериита. Характер морфологических изменений в органах потомков не зависел от

особенностей их генотипа.

Таким образом, заболевание, развивающееся у мышей, родив-шгсея □ условиях РГ11Х, индуцированной у матерей во время беременности, может протекать как в острой, так и в хронической формах. Оно имеет большое сходство с проявлениями РШХ, но отличается от не-з высокой частотой амилоидоза и злокачественных лимфом, начиная уже с первых: месяцев жизни.

2,2. Изучение механизма возникновения иммунологических нарушений у мышей, родившихся в условиях РШХ.

Учнтнзая большое сходство болезни у потогжов, родившихся в условиях РШХ, с проявлениям;! РГПХ, не исключена возможность, что я основе их развития дожит сходный механизм, а именно: проникновение через плаценту, поврежденную в результате РГПХ у матерей, материнских и донорских лимфоцитов, которые затем вызывают РТПХ и у потомков.

3 ходе проверки такого предположения при изучении клеточного хкмеризма в лимфоидной и кроветворной ткани плодов и новорожденных с использованием хромосомного маркёра Т6 не удалось выявить митозов донорского и материнского фенотипов. Результаты оказались также отрицательными при изучении у потомков специфической иммунологической толерантности или сенсибилизации к кожным трансплантатам генотипов матери и доноров трансплантированных матери клеток. Эти данные ставят под сомнение возможность развития транешгацентарной РТПХ у по-то?лхов в данных условиях.

В дальнейших опытах нами изучена возможность воспроизведения иммунологических нарушений у мышей, рожденных нормальными самками, но вскормленных приёмными матерями с индуциро-

ванной у них РГ11Х во время беременности. Такая возможность была доказана (табл. 4). Аналогичные нарушения, приводящие к преждевременной п "ели и повышение частоты амилоидоза, злокачественных лимфом, обнаружены у мышей, которым с 1-го дня после рождения (но не с 5-го, т.е. до завершения адаптивного периода формирования иммунной системы у мышей) внутрибрюшинно вводили плазму крови, взятую от взрослых мшей после индукции у них РТПХ и подвергнутую накануне введения ультрацентрифуги-ровак!га при 100 000^. Такая обработка плазмы позволяет освободиться не только от клеточных элементов, но и от вирусов.

Результаты приведенных опытов показывают, что патогенетический фактор, приводящий к возникновению иммунологических нарушений у потомков, родившихся и/или только вскормленных в условиях РТПХ, является гуморальным. Есть основания утверждать, что этот фактор или факторы, не имеют природы антител, поскольку в „ наших опытах иммунологические нарушения у потомков возникали также в генетической комбинации мышей, которая исключает возможность образования перекрэстнореагирующих антител. Такой вывод согласуется с предположением отдельных авторов 1930; Ы&огю^ & ¿¿¿ЦДЭвЗ)

о существовании нового, до сих пор неизвестного механизма регуляции иммунной системы эмбрионов и новорожденных, опосредованного супрессорними факторами неиммуноглобулиновой природы, продуцируемые Т-лимфоцитами матери. Результаты наших исследований не только подтверждают данное предположение, но и расширяют представление о феноменологии данного механизма. В частности, ранее была показана его роль в трансплацзнтарной идиотипической регуляции антителообразования употомков, В

Таблица 4.

Показатели летальности, частоты возникновения амилоидоза. опухолей лимфоидной ткани у мышей, рожденных и/или только вскррмленных самками с РТПХ, а также у тлей, получавших в первыеяни после рождения иньекции плазмы крози, взятой у мышей с индуцированной у них РТПХ Ш+м в %% и абсолютные величины).

Наименование опытных групп мьквей

Летальность мышей

Частота_амилолзоза__ о з ~р "а "с т е

Частота_ощхолей_____

I до 4 нес.

с 4 кес, с I до 4 с 4 мес, _,Ц0_2_лет____мес.._____до_2_лет_

I,Потомство самок рц ого т по отл к с РТПХ.индуциро- , )Х ванной во время* 99/391 71/98 .беременности___________________

4,3+3,0 61,9+6,1 68,5+6,7 2/46 39/63 32/46

с I до 4 с 4 мес. __мес._______Й2_2_лет_

28,5+5,7 16/63

2.Потомство нор- 15,8+2,9 65,7+7,0 мальных самок, ?л/тц7 чт/ап вскормленных ма- 10 131/4' те2ями_с_РГЦХ_________________

32,2+11,1 59,6+9,4 6/19 17/28

26,1+10,3 20,8+7,8 5/19 6/28

о

3.Потомство нор- то о-о 5 мальных самок, ' • получавших та- 12/64 екции плазмы крови от мышей с РТПХ

75,6+8,1 16,7+1 ,2 54,5+13,0 22/29 2/12 12/22

16,7+11,2 18,2+8,4 2/12 4/22

Р1,2 <0,01 >0,025 <0,01 >0,025 <0,01 '0,025

Р1,3 <0,05 >0,025 <0,01 >0,025 <0,01 70,025

Р2,3 >0,025 >0,025 =0,025 >0,02Ь >0,025 >0,025

за

наших же работах продемонстрировано существование сходного механизма, контролирующего также формирование иммунной системы потомков до завершения у них адаптивного периода.

Как видно из результатов наших исследований, некоторые клеточные элементы иммунной системы эмбрионов и новорожденных под действием каких-то факторов, образовавшихся в результате РТПХ, очень быстро трансформируются б опухолевые элементы или в амилоидобласты. Складывается впечатление, что извращение дифференцировки клеток в этих условиях связано с изменением активности определенных: генетических структур под действием экзогенного патогенетического фактора. Есть основания предполагать, что этот процесс является каскадным и осуществляется при участии ещэ одного патогенетического звена, запускаемого экзогеннным фактором.

Во-первых, это данные о сравнительно невысокой частоте возникновения болезни рант у потомков с первые месяцы жизни во всех 3-х экспериментальных группах (табл. 4). Во-вторых, положительная корреляция между силой РГ11Х у матерей и частотой болезни у их потомков наблюдается лишь при введении сравнительно небольшого числа лимфоцитов, не превышающего оптимального количества, необходимого для индукции острой РШХ, т.е. 90 млн. При дальнейшем увеличении числа вводимых клеток до 490 млн. частота болезни не увеличивалась.'

Такого рода эффект "пороговой дозы* позволяет предположить, что под воздействием экзогенного фактора материнского происхождения в иммунной системе эмбрионов и новорожденных активируется какой-то эндогенный фактор, который и выступает в роли модулятора активности клеточного генома чувствительных к нему клеточных мишеней.

Что касается природы патогенетического фактора эндогенного происхождения, то основываясь на результатах сравнительной оценки наших данных о летальности, частоте возникновения ами-лоидоэа и опухолей у потомков всех трёх экспериментальных групп (табл. '■), можно высказать некоторые предположения.

Во-первых, у потомства нормальных самок, вскормлен;пк приёмными матерями с РГПХ или получавших инъекции плазмы крови, взятой от мышей с РШХ, частота опухолей и амилоидоза в первые месяцы после рождения была значительно меньше по сравнению с показателями у потомства самок с РГПХ.

Во-вторых, у нормальных мышей, получавших в первые дни жизни инъекции плазмы крови, частота опухолей и амилоидоза была несколько меньше, чем у потомков, вскормленных приёмными матерями с РШХ. Эти факты, наряду с данными о сравнительно невысокой и почти одинаковой частоте возникновения болезни рант у потомков в первые месяцы после ролздения во всех 3-х экспериментальных группах, можно рассматривать как доказательство существования у эмбрионов и новорожденных разной выраженности естественного иммунитета к эндогенному патогенетическому фактору.

Вместе с тем, у потомков всех 3-х групп, несмотря на существование различий в частоте амилоидоза и опухолей в раннем возрасте, показатели летальности во всех возрастных группах, а также частота амилоидоза и опухолей в старшем возрасте были почти одинаковыми. Это может означать, что в зависимости от выраженности естественного иммунитета эмбрионов и новорожденных эндогенный патогенетический фактор частично инактивирует-ся, не препятствуя тем самым развитию патологического процес-

са, а лишь видоизменяя его в каждом конкретном случае. Это находит своё отражение в изменении характера и соотношения возникающих при этом иммунологических нарушений.

Основываясь на сказанном можно предположить, что эндогенный патогенетический фактор является репопулирующим агентом и имеет, вероятно, инфекционную природу. Единственно возможной "инфекцией" для данных условий может быть персистенция эндогенных регровирусов, которые, как известно, резко активируются при различных иммунологических процессах, сопровождающихся пролиферацией лимфоцитов, в том числе, в условиях РГ11Х и при воздействии лимфокинов (Агеннко А.И., 1986;Ж&зс^ъ 1976).

Согласно современны!-! представлениям, эндогенные ретрови-русы или, точнее, их генетический аппарат функционирует в основном как часть генома нормального организма, принимая участие в процессах дифференцировки, особенно на' ранних стадиях онтогенеза. Следовательно, существует вероятность, что особые условия, в которых активируются эндогенные ретровирусы у эмбрионов и новорожденных в изученной нами системе, определяют новый тип взаимоотношений вируса и хозяина, способствуя

I

тем самым возникновению патологического процесса, развитие которого вариирует в зависимости, от возраста и состояния естественного иммунитета потомков в начальной стадии этого процесса.

ВЫВОДЫ

I. Экспериментальным путём впервые устанрвлено, что одной из причин невынашивания беременности, возникновения врождённых иммунологических нарушений, а также возникновения имму-

нопатологических процессов у матерей, спровоцированных беременностью, могут быть изменения в иммунной системе матери, связаннее с трансплантацией ей несингенных лимфоидных клеток, способных осуществлять РП1Х или временно утративших такую способность.

2. Обнаружена ранее неизвестная способность гепарина модулировать развитие системной РШХ, а именно: а) усиливать тяжесть РШХ у реципиентов, если гепарин вводить донорам трансплантируемых лимфоидных клеток или обрабатывать мл донорские клетки ¿л \гЫю накануне трансплантации; б) предотвращать развитие РТПХ и формировать состояние клеточного химеризма у гибридов если гепарин вводить реципиентам накануне трансплантации им сравнительно небольшого числа (3040 млн.) родительсгагх лимфоидных клеток.

3. Специфические иммунологические реакции, опосредующие фазные изменения естественной резистентности самок-гибридов

к РТПХ в 3-м триместре беременности и в первые дни после родов, возникновение осложнений беременности у долгоживущих клеточных самок-химер "родитель-гибрид Р^" и обострение у них РШХ, спровоцированное беременностью, - рестриктированы Н-2 антигенами гистосовместимости двух родительских гаплоти-пов и проявляют способность к конверсии, по крайней мере, после прекращения беременности. В свою очередь это означает, что в условиях, когда у гибрида Р| возникают иммунологические реакции на антигены одного из родительских гаплотипов, его способность отвечать аналогичными реакциями на такие же антигены другого родительского гаплогипа в дальнейшем угнетается (феномен "полуаллогенной супрессии").

4. В условиях РШХ, индуцированной у самок мышей во время беременности, плацента не утрачивает своей барьерной функции, по крайней мере в той' её части, которая препятствует формированию у плодов клеточного химеризма и возникновению у потомства специфических иммунологических реакций по отношению к трансплантационным антигенам материнского происхождения.

5. Уже и первые сутки после трансплантации несингенных лимфоидных клеток у реципиентов появляются неспецифические гуморальные факторы, вероятно, неиммуноглобулиновой природы, которые к'"ут проникать через плаценту, передаваться с молоком матери и в результате инъекций плазмы крови, если она даже подвергнута ультрацентрифугированию при 100 000^, и в случае воздействия на иммунную систему потомков до завершения у них адаптивного периода вызывают нарушение процесса формирования иммунитета. Предполагается существование нового, до сих пор неизвестного механизма регуляции иммунной системы эмбрионов и новорожденных в адаптивном периоде.

6. Иммунологические нарушения, возникающие у потомков под воздействием гуморальных факторов РШХ, могут проявляться клинически и приводить к гибели в первые месяцы или на 2-м году жизни, характеризуются большим разнообразием и сходством с проявлениями острой или хронической РВАХ, но, в отличие от нее, сопровождаются высокой частотой амилоидоза и злокачественных опухолей лимфоидной ткани, которые могут появляться уже в первые месяцы после рождения.

7. Эмбрионы и новорожденные мыши до завершения у них адаптивно-го периода формирования иммунной системы обладают

одинаково высокой чувстьлтельностыо к повреждающему действию гуморальных факторов, образующихся в условиях Р111Х. Частота возникновения амилоидоза и злокачественных лкмфом у таких потомков в рант-тем возрасте, но не в старшем, зависит от степени диффсренцировки клеточных элементов лимфоидной ткани и состояния естественного иммунитета в период начала развития патологического процесса.

8. Гуморальные факторы РД1Х, способствующие возникновению кммунодефицитного синдрома у пото?«сов, выступают лишь в качестве пускового механизма, под действием которого в иммунной системе эмбрионов и новорожденных включается ещё одно патогенетическое звено, представленное каким-то репопулирую-цим агентом. Предполагается, что это - активировавшиеся эндогенные ретровирусы, формирующие затем новый тип взаимоотношений с хозяином а силу (¡¡уняцноналыйгх особенностей его иммуший к

системы в адаптивном периоде развития.

ПРАКТИЧЕСКИ РШШЩЦИИ

1. Экспэриыентальная система, включающая з себя элементы трансплантации несингеиных лимфоидных клеток сажсагл накануне спарипания их с самцами или во время береисшюсти монет быть использована в качестве модельной скстеъп-а при изучении также проблем как иммунодефицжтныа состояния, 1ля/(укологкчес-кий конфликт в системе "мать-плод", акялоидоз, злокачественные лимфомы и аутоиммунные нарушения.

2. Новые положения о возможных причинах и механизме возникновения имцунодефицитшх состояний, самопроизвольных выкидышей, патологических процессов у матерей, спровоцированных беременностью, амилоидоза, злокачественных лимфом в раннем

и зрелом возрасте, а также о возможных последствиях трансплантации несингенных лимфоидных клеток в репродуктивном возрасте следует использовать в качестве материала при чтении лекций,ведении практических занятий на кафедрах биологии, патологической анатомии, клинической иммунологии и др.

СПИСОК РАБОТ. ОПУБЛИКОВАННЫХ Ю ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Дукова B.C.. Зарудин В.В., Шевелёв A.C., Федосов Е.А. Малигнизация лимфоидной ткани у потомков-гибридов с индуцированной до беременности реакцией "трансплантат против хозяина".//Докл.АН CCCP.-T.230.-W.-C.237-239.

2. Зарудин В.В., Рулянский JI.H.., Федосов Е.А., Гордилов-ская А.П. Морфологические изменения в плаценте при поздних токсикозах беременности и реакции "трансплантат

"против, хозяина".//Архив патол.-1976.-Т.38.-Ш.-С,33-39.

3. Зарудин В.В., Федосоз Е.А., Гордиловская А.П. Роль иммуно-I,«реологических изменений у матерей в возникновении имму-нодефицитных состояний у потомков.//Всесоюз.съезд патолог. 8-й: тез.докл.-М..-1989.-C.I89-I90.

4. Зарудин В.В., Шевелёв A.C., Ульянов В.И., Зарудина Н.В.,г Щербаков В.Я., Федосов Е.А., Дукова B.C. Некоторые аспекты морфологической оценки состояния лимфоидной ткани при канцерогенезе.//Всесоюз.съезд патологоан.6-й:Тез.докл.

М.-1977.-С.147. '

5. Федосов Е.А. Развитие гомологичаой болезни у беременных мышей и болезни рант у родившихся от них потомства.// Вопросы радиац.иммунол. и микробиол.:Тез.докл.УШ межин-стит.научн.конфер.-М,,1972-С.127-129.

6. Федосов Е.А. Некоторые вопросы патогенеза реакции "трансплантат против хозяина" и сходных с ней состояний (обзор литературы). /Дурн. микробиол. -1974. -№10. -С. 87-96.

7. Федосов Е.А. Реакция "трансплантат против хозяина" у мь-'ей нг поздней стадии беременности и её влияние на потомство.//Докл.АН СССР.-1975.-Т.222.-S2.-С472-475.

8. Федосов Е.А. Развитие реакции "трансплантат против хозяина" и её влияние на беременность у мышей после введения гепарина.//Бюлл.экспер.биол.-1977.-Т.83.-№3,-

С.312-315.

9. Федосов Е.А. Моделирование иммунодефицитных состояний. //Вопр.клкн. и экспер.иммунологии/Под ред.В.В.Зарудина, Е. А. Федосова. - Смоленск: С1Ш. 1986. -С. 9-14.

10. Федосов S.A. Эволюционные аспекты возникновения иммунологической недостаточности, приобретенной в антенатальном и поетнатальном периодах развития в условиях реакции "трансплантат против хозяина"./Дез.докл. Ш Всесоюз. симпоз. по иммунол.репродукции.-Киев, 1987.-С.156-157.

11. Федосов Е.А..Дукова B.C. Клеточные взаимодействия в условиях реакции "трансплантат против хозяина" (РТПХ) у нормальных и беременных мышей и особенности этой реакции после введения гепарина. /Дез.докл.Всесоюз. конф.по общей и прикладн.иммунол.-М.,1974.-С.62.

12. Федосов Е.А., Дукова B.C., Шевелёв A.C., Зарудин В.В., Забросаев'а Л. И. Реакция ?транспланта против хозяина"

у беременных мышей и их потомков как экспериментальная модель аутоиммунитета.//Проблемы аутоаллергии в практической ii едицине.-Таллин, 1975.-С. 75-76.

13. Федосов S.A., Забросаева Л.И.Изучений &у-?оиьйунного компонента трансплантационной болезни в условиях реакции "трансплантат против хозяина! // Проблемы аутоаллергии в практической медицине.- Таллин, 1975.-G.76-78.

14. Федосов Е.А., Забросаова Л.И. Иммунологические нарушения укмпей, родившихся после индукции реакции "трансплантат против хозяина* у матерей. //Билл, экспер. биол..-1986.-Т.86. -Г,Z. -С. 200-232,

15. Федосов Е.А., Зарудин Б.В. Ранняя калигкизация яикфо-кдной —'.ани у мышей, родившихся после индукции реакции "трансплантат против хозяина" у матерей.//Докл.АН СССР. -1977. -Т. 236. -Jtö. -С. 484-487.

16. Федосов Е.А., Зарудин В.В. Иммунологические нарушения и малигнизация лимфовдной ткани у потомков, родившихся и вскормленных после индукции реакции "трансплантат против хозяина" у матерей, //Радиационная микробиология и иммунология.-М,,1977.-С.78-79.

17. Федосов Е.А,, Зарудин В.В. Морфологические изменения у влышей» родившихся после индукции реакции "трансплантат против хозяйка" у матерей.//Библиографический указатель ЕИКИШ "Депонированные рукописи".-1978.11.-Б/0 27,-$2175-78.Деп. от 29.06.78.

18. Федосов Е.А., Зарудин В.В. Морфологические изменения в поздние периоды лизни у мышей, родившихся после индукции реакции "трансплантат против хозяина" у матерей. //Виол.экспер.биол.- 1979.- Т.85.- .СТ.- С. III-114.

19. Федосов S.A., Зарудин З.В. Изучение механизма возникновения иммунологических нарушений у потомков, родившихся в условиях реакции "трансплантат против хозяина*. // Современнее проблемы гемосорбции и трансплантации.-а., 1УВ0,-С.127-128.

20. Федосов Jä.A., Зарудин В.В. Иммунологические нарушения у мшей, вскормленных матерями с индуцированной у них реакцией "трансплантат против хозягпга".//Езлл,экспер. биол. -1980. -Т. В6.-М. -С. 441-444.

21. Федосов К.А., Зарудин В.В. Роли гуморальных факторов в возникновении иммунодефицитных состояний з период антенатального л постнатального развития.//Йм«уноде-фицяга п аллергия: Тезисы дояяадоа Всесоюзного симпозиума с гзездународним участие:.:.- И., 1586.-

С.95-96.

22. Федосов Й.Л., Зару/иаг В.В., Забросаева Л.И. Ранняя фаза реапш "транспканта? протип хозяйка" в условия;-: беременности и её влияние на потомство.//Ранние проявления тканевой несовместимости.-Н., 1976.-СЛ63-164.

23. Федосоа К.А., Зарудин В.В., Забросаева Л.И. Применение реакции "трансплантат против хозяина" для изучения

иммунологических взаимоотношений между матерьв я лло-дом.//Современнке методы экспериментальной иммунологии и различные аспекты их применения.-И. ,1976.-С.66-69.

24. Федосов К.А., Зарудин.В.В., Забросаева Л.И. Иалигниза-ция лимфоцдагой ткани у иыгэй, родившихся после трансплантации самкам аллогенных лимфоидных клеток.//Тезисы док.УН Всееоев. конференции по трансплантации.-Ростов-на-Дону,

1976.- С.73.

25. Федосов S.A., Зарудин В.В., Забросаева Л.И. Изучение роли реакции "трансплантат против хозяина" у матерей в возникновении врожденных иммунологических нарушений.//Актуальные вопроси пересадки органов и тканей.- ,1978,- С.104-105.

26. Федосов Е.А., Фёдоров Г.Н., Костиков A.A. Роль генетических различий между матерь» и плодами в развитии реакции трансплантат против хозяина", индуцированной у матери.// Билл.экспер.биол.- 1980.- Т.86.- ;?3.- С.340-342.

27. Шевелзв A.C., Зарудин В.В., Дукова B.C., Федосов S.A., Забросаем.. Л.И. Ыалигнизация лимфоидной ткани у матерей и потомков в условиях реакции "трансплантат против хозяина".// Иммунология опухолей.- Киев, 1975.- С.273-274.

28. Шевелёв A.C., Зарудин В.В., Федосов S.A., Дукова B.C. Применение реакции "трансплантат против хозяина" для моделирования аутоиммунных процессов и малигнизации лимфоидной ткани в условиях беременности.//Иммунитет и аллергия в инфекционной и неинфекционной патологии.- Фрунзе, 1980.-С.89-90.

29. Шевелзв A.C., Мешкова Р.Я., Федосов Е.А., Щербаков В.Я., Старшинова В.М. 0 взаимосвязи процессов регенрации и трансплантации. //Современные проблемы гемосорбции и трансплантации.- И., 1980,- C.I3I-I32.

30. Шевелёв A.C., Мешкова Р.Я., Федосов S.A. Процессы пролиферации и дифференциации лимфоидной ткани в условиях реакций "трансплантат против хозяина".//Тезисы докладов X Всесоюзной научной конференции по трансплантации органов.-Киев, 1985.- С.144-145.

31. Шевелёв A.C., Федосов Е.А., Дукова B.C., Зарудин В.В.,

Сидоренко О.Н. Влияние реакции "трансплантат против хозяина" на развитие плодов к новороуденних.//Закономерности индивидуального развития живых организмов.-Л.,1986,-0.104.

32. Шевелёв А.С., Федосов Е.А., Зарудин, В,В., Дукова З.С., Гулянский JI.H. Иммунологический надзор и налигнизация ли-фоидной ткани в условиях реакции "трансплантат против хозяина" .//Радиационная микробиология и иммунология.-М,, 1977,-C.9I-92.

33. Шевелев А.С,, Федосов Е.А., Сизов И.Е., Дукова B.C. Иммунологические коллизии при пересадке диссоциировавших клеточных трансплантатов у беременных мышей и эмбрионов.//Тезисы докладов УТ Всесоюзной научной конференции по пересадке органов и тканей.- Рига, 1972.- С.I8I-I83,

34. Iaiaunological inter^ctiono between mothers and thsir fetun daring grr.ft-versu3-ho3t reaction (GVH) /А.S.Shevelev, E.A.FedOfJOV, V.S.Dacova, V.V.Sarudln // AJRJMi Aasr. J. Reproa. Immunol. Microbiol. - 1985. - V.7. - H 2. - P.55-57 <H 43).

35- The inilueace of graft-vorsuo-hoat reaction (GVH)- on ia-mune 3jatca of pregnant and newborn nice /E.?edoaov, V. Ducova, O.Sydorenco, i7.Scbsbnlcova, A.Shevelev // Periodi-cua Biologorusi (Period. Biol.). - 1987. - V.89. - Sippl. 1. - S.128 (2? 15-06).

Формат бумаги 00X81'/« / Tup. i'GO Зак. -«Ч-ёПеч. листов £

Смоленская городская типографий Упрполиграфпздата Смоленского облисполкома Индекс 214000, ул. Маршала Жукова, 16