Автореферат и диссертация по медицине (14.00.13) на тему:Нарушения липидного обмена и функции мембран эритроцитов при рассеянном склерозе

Г Г 5 ОД 1 1 НОЯ 1936

на правах рукописи

ВЛАСОВ ЯН ВЛАДИМИРОВИЧ

НАРУШЕНИЯ ЛИПИДНОГО ОБМЕНА И ФУНКЦИИ МЕМБРАН ЭРИТРОЦИТОВ ПРИ РАССЕЯННОМ СКЛЕРОЗЕ

Специальность 14.00.13 - нервные болезни

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Сакт-Петербург - 1996

Работа выполнена в Самарском государственном медицине университете

Научный руководитель:

доктор медицинских наук, профессор Скупченко В.В.

Научный консультант:

кандидат медицинских наук

Тимирбулатов P.A.

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор Зинченко А.П., доктор медицинских наук, профессор Головкин В.И.

Вэдущая организация НИИ невралогии Российской акад< медицинских наук (г.Москва)

Защита состоится " // "_^_ 1996

в " / (¡ " часов на заседании диссертационного со; Д106.03.10 при Военно-медицинской академии (194044, Санкт.-Петербург, ул. Лебедева, д. 6)

С диссертацией можно ознакомиться в фундаментал1 библиотеке Военно-медицинской академии.

Автореферат разослан " /0 " /О 1996 г.

Ученый секретарь диссертационного совета

доктор медицинских наук, профессор Лифвинцев В.

общая характеристика работы

Актуальность проблемы. На протяжении всей истории современной неврологии учеными исследовались различные аспекты клиники, этиологии и патогенеза рассеянного склероза (PC). Предлагались различные гипотезы, призванные вскрыть причину процесса демиелинизации,возникали теории, пытающиеся объяснить многообразие патогенетических механизмов развития заболевания.Тем не менее, до сих пор в патогенезе PC остается много ' неизученных и спорных вопросов, требующих своего решения.

За последние 10 лет заболеваемость PC в некоторых регионах земного шара возросла более чем в 2 раза. В настоящее время в мире насчитывается около трех миллионов больных и угрожаемых по этому заболеванию людей. Проблема PC остается одной из наиболее значимых в современной медицине и особо выделяется международной ассоциацией врачей (Хондкариан O.A., Завалишин И.А., Невская О.М, 1987; Sheridan Р.,1994).

Многостороннее изучение патогенеза PC показало наличие разнообразных нарушений обменных процессов, в частности, нарушений липидного обмена, ускорение окислительных процессов; выявлена генерализованная сосудистая патология.

Высказываются мнения, что PC является "болезнью депонированного холестерина". Однако, этот факт удавалось установить только на секционных препаратах при исследовании глиозных бляшек. Многие исследователи пытались обнаружить диагностически значимые изменения липидного метаболизма в сыворотке крови 'больных PC. Было выявлено, что уровень липидов в сыворотке крови пациентов с PC близок к нормальному или имеет склонность к умеренной гипер-р-липопро-теидемии. В связи с этим определение PC как дизлипидоза оказалось несостоятельным (Вилков Г.А.,1974; Ходос Х.Г., Кожова И.И., 1980; Newcombe J. et al., 1991; Semmler J. et al., 1993).

Патологоанатомические исследования при PC свидетельствует о выраженных дисгемических нарушениях в мозге. Отмечено тромбообразование в мелких сосудах, особенно внутри глиозных бляшек (Зинченко А.П., 1973; Боснев В., Чернинкова С., Йорданов В., 1987; Adams

С.Ю.М. , 1975; БапсШегд М., Levi_rlson А.1., г.ме1тап В.,1986).

Сосудистые изменения при РС нередко расцениваются как следствие аутоиммунного васкулита. Предполагается наличие аутоиммунной агрессии против вазального эндотелия и первичность иммунопатологического процесса (Малашхия Ю.А., Геладзе М.Г., 1985; Головкин В.И., 1991; БеЬ^ К. еЬ а1., 1991).

Известно также, что сосудистые нарушения возникают при повышении активности свободно-радикального окисления, в результате которого сосудистый эндотелий инвертированно реагирует на нейромедиаторы. Метаболиты реакции перео'кисного окисления липидов (ПОЛ) способны увеличивать агрегационные свойства крови, создавая у ее клеточных элементов отрицательный заряд (Роговина Н.И., Хохлов

A.П., 1980; Одинак М. М., Поздняков А. В., 1995; Си^ег1де 1.М.Б., WesterInarck Т., НаШуге11 В., 1986).

Все большее внимание исследователей привлекают мембранные нарушения при РС. Эти изменения представляются вполне закономерными с позиции, в частности, современной фазотонной теории патогенеза РС. В этой концепции клеточная мембрана рассматривается как. структурно-функциональный

элемент, отражающий непрерывно эволюционирующий нейродинамический статус организма. В связи с этим нейродинамическая дизритмия, возникающая на фоне адаптационных срывов и морфофункциональной

незрелости, неизбежно вызовет патологические изменения клеточных мембран организма (Скупченко

B.В., 1989).

Есть основания полагать, что изучение показателей липидного обмена в крови одновременно с исследованием состояния мембран эритроцитов (МЭ)' может существенно дополнить представления о механизмах дисгемических нарушений, вскрыть важные патогенетические моменты развития РС, выделить диагностические критерии различных форм, фаз и типов течения этого заболевания.

Цель исследования. Определить характер

патологических сдвигов в эритроцитарных мембранах у больных РС. Изучить взаимосвязь между показателями ЛО в СК и результатами исследования состояния МЭ у

больных РС. Определить дополнительные

дифференциально-диагностические критерии различных форм РС.

Задачи исследования:

• установить наличие изменений функционального состояния МЭ у больных различными формами РС;

• уточнить характер нарушений липидного метаболизма в крови больных РС;

• разработать дополнительные дифференциально-диагностические критерии для различных форм РС.

Научная новизна. Впервые изучены изменения функционального состояния и характер перестроек МЭ при различных формах РС и определена их вероятная роль в формировании патологического процесса. Отмечен определенный характер изменения показателей Л О в крови больных РС в виде относительной гипохолестеринемии."

Выявлена взаимосвязь между тяжестью клинического проявления, длительностью, формой, фазой течения РС и изменениями показателей ЛО крови и МЭ. Определены дополнительные дифференциально-диагностические

критерии различных форм РС. Впервые при изучении РС применен метод математического моделирования зависимости эритроцитарной дисфункции от липидного дисбаланса СК.

На защиту выносятся следующие положения:

1.Для рассеянного склероза свойственны патогенетически значимые изменения функционального состояния мембран эритроцитов.

2.Дизлипидемия является одной из существенных особенностей патогенеза рассеянного склероза.

3.'Имеется взаимосвязь между формой течения рассеянного склероза, изменениями функционального состояния мембран эритроцитов и особенностями липидного обмена.

4.Результаты мембраного тестирования и показатели липидного обмена крови имеют дифференциально-диагностическую значимость при обследовании больных различными формами рассеянного склероза.

Практическая ценность. Выявленные структурно-функциональные изменения МЭ и нарушения липидного метаболизма имёют диагностическую ценность. Выделены дополнительные критерии диагностики различных форм и

типов течения PC. Полученные данные позволяют более направленно осуществлять контроль за развитием заболевания и оценивать эффективность лечения.

Внедрение в практику. Практические рекомендации, вытекающие из результатов исследований, нашли применение в работе неврологических отделений Областной Клинической Больницы им. М.И.Калинина в г. Самаре. Основные положения и выводы диссертации включены в лекционный курс и содержание практических занятий со студентами, врачами-интернами,

клиническими ординаторами кафедры неврологии и нейрохирургии СГМУ. Материалы диссертации

использовались в методических разработках кафедры нервных болезней и нейрохирургии СГМУ для врачей по диагностике и лечению PC.

Основные положения диссертации доложены на Всероссийском симпозиуме с международным участием "Нейроиммунология на пороге XXI века" (Ст.-Петербург, 1994), на Самарской экологической конференции врачей "Мозг и экология" (Самара, 1994), на IV-й научной конференции с международным участием

"Нейроиммунология, нейроинфекция, нейроимидж" (Ст,-Петербург, 1995), на международной Ко-Конференции "Neuroimmuno Interactions and Environment (ICONEv95)" (Ст.-Петербург, 19 95).

Апробация работы проведена на заседании Самарского отделения Всероссийского общества невропатологов и нейрохирургов 29 ноября 1995 года.

По теме диссертации опубликовано 12 научных работ.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 173 страницах машинописного текста и состоит из введения, 5 глав (в том числе 3 главы результатов собственных исследований), обсуждения результатов, выводов, приложения, указателя литературы из 329 наименований, в котором приводится 151 отечественный и 178 зарубежных авторов. Диссертация включает 45 рисунков, 4 графика, 2 схемы и 24 таблицы.

содержание работы

Характеристика больных и методов исследования. Обследовано 136 больных PC в период с 1989 по 1995 год. Среди наблюдаемых пациентов были 71 женщина и 65

мужчин (соответственно 52,2% и 47,8%). В возрасте 16 - 25 лет было обследовано 46 человек (20 мужчин и 26 женщин), в возрасте 26 - 35 лет было 68 больных (31 мужчина и 37 женщин); наблюдались также 22 пациента старше 35 лет, из них 14 мужчин и 8 женщин . В изученной группе 66 человек (48,5%) имели длительность заболевания менее 5 лет, 70 челевек (51,5%) - более 5 лет.

В качестве контрольной группы (КГ) обследовано 50 практически здоровых лиц (22 мужчины и 28 женщин) в возрасте 20 - 30 лет, у которых при исследовании нервной системы патологии обнаружено не было. Основная часть больных РС связывает его дебют с перенесенными острыми респираторными вирусными инфекциями и гинекологическими вмешательствами 30,15%, с психическим перенапряжением - 8,1%. Не могут связать с чем-либо начало своего заболевания 16,2% больных РС.

В соответствии с классификацией, предложенной в 1987 году О.А.Хондкарианом, И. А. Завалишиным и О. М. Невской, больные были разделены на группы по степеней тяжести РС. Пациентов с I и V степенями тяжести (с.т.) не наблюдалось. У 25% больных РС бьша зарегистрирована II с.т., у 55,15% - III с.т., у 19,85% - IV с.т.

Кроме того, все больные РС были разделены на 3 группы по шкале Куртцке. В I группу вошли 16 человек, больных преимущественно церебральной формой рассеянного склероза (ЦРС), из которых 62,5% составили лица мужского пола, 37,5% - женского. Во II группу вошли больные цереброспинальной формой рассеянного склероза (ЦСРС), из них мужчины составили 45,7% испытуемых, женщины - 54,3%. У 39,4% больных ЦСРС обследование проводилось во время обострения (ЦСРСо) и у 33% - в период ремиссии (ЦСРСр) , а в 27,7% случаев заболевание имело непрерывное прогредиентное течение (ЦСРСп). III группу составили больные спинальной формой рассеянного склероза (СРС), из которых мужчин было 46,1%, женщин - 53,9%. В качестве контрольной группы (КГ) были обследованы 50 практически здоровых людей в возрасте 20-30 лет, из которых мужчины составили 44%, женщины - 56%.

Клиническое обследование проводилось в

неврологических отделениях N 1 и N 2 Самарской областной клинической больницы им.М.И.Калинина. Биохимические исследования проводились на кафедре биологической и клинической химии Самарского государственного медицинского университета.

Объектом исследования служили эритроциты (Эр) , мембраны эритроцитов и сыворотка крови . Определение активности ПОЛ проводилось в МЭ венозной крови. Для получения Эр кровь забиралась с помощью венопункции в пластиковые пробирки с добавлением 3,8% раствора цитрата натрия в соотношении 9 : 1. Для осаждения Эр проводилось центрифугирование при 1500 об/мин в течение 10 минут. К осадку добавляли ЭДТА и центрифугировали 10 минут при 1500 об/мин. В осадке получали суспензию Эр (Taverna R.D., Zangden R., 1973) . Из этой суспензии выделяли МЭ и приготавливали гемолизат, после чего проводилось исследование хлорионного электродиффузионного потенциала (ЭДП) пробоя МЭ по методике A.B.Путвинского. Принцип данного метода состоит в том, что при помещении Эр в изоосмотическую гипохлоридную среду происходит обмен С1-иона на ион Н+ через мембрану,за счет которого на ней генерируется трансмембранный водородный

потенциал. При достижении критической величины возможно явление электрического пробоя мембраны, при котором предполагается сильный ток ионов К+ наружу через поры. Определяя зависимость генерируемого потенциала pH от внешней концентрации ионов С1-, можно определить точку отклонения от логорифмической зависимости, которая и будет соответствовать искомому потенциалу.

Проводилось также определение концентрации малонового диальдегида (МДА) при инициации ПОЛ "in vitro" по реакции с тиобарбитуровой кислотой (ТБК) (Тимирбулатов P.A., Селезнев Е.И., 1981). Принцип метода определения МДА с помощью ТБК заключается в том, что при высокой температуре в кислой среде МДА реагирует с 2 н ТБК , образуя окрашенный триметиновый комплекс с максимумом поглощения при 532 нм. Для остановки реакции ПОЛ использовалась 20% раствор трехлоруксусной кислоты. Оптическая плотность определялась при длине волны 535 нм на

спектрофотометре "Specol". Для повышения

интенсивности свободно-радикального окисления

использовались 1 мМ раствор К[Мп(0)4] и 10 мМ раствор Fe [S (О) 4 ] .

В СК больных PC стандартными способами определялись: концентрация триглицеридов (ТГ) по методике Флетчера , свободного холестерина (СХ) по методике Ватсона и p-липопротеидов (в-ЛП) по методике Розенцвея. Исследование проводилось не позднее, чем через 3 часа с момента забора крови.

Полученные данные были внесены в математическую модель, представляющую собой расчетные величины сторон через диагональ параллелепипеда. Полученные ассоциации были проверены с применением методов математической статистики. Обработка данных

проводилась на персональной ЭВМ ЕС-1050 с помощью пакета программ статистический обработки на языке ФОРТРАН - 4.

результаты исследований и их

обсуждение

Нарушения липидного обмена у больных PC отмечены рядом исследователей. Эту особенность PC некоторые авторы связывают с наследственной

предрасположенностью к заболеванию, другие

рассматривают дизлипидемию как вторичную, являющуюся следствием распада миелина (Таранова Н.П.,1988; Головкин В.И., 1991; Климов А.Н., Никульчева Н.Г., 1995) .

Реакция ПОЛ за короткий период времени приводит к нарушению проницаемости МЭ путем накопления МДА в клеточной БМ, что ведет к мембранной дисфункции и лизису клетки (Владимиров Ю.А., 1989; Mequel J., Fleming J.,1988; Novarro X., Segura R., 1989).

В доступной литературе нам не удалось обнаружить сведений о проведении исследований

морфофункционального состояния мембранных структур при PC. В то же время, с позиции фазотонной нейродинамической концепции В.В.Скупченко (1989) именно патология биологических мембран (БМ) должна быть важнейшим патогенетическим звеном PC.

Считают, что изменения МЭ, возникающие под воздействием каких-либо факторов, приводят к тому,

что эритроциты могут самостоятельно представлять собой микроэмболы, являющиеся причиной нарушения микроциркуляции (Galler G., Genifeld М., Yaross V., 1979; Захарова М.Н., Павлова O.A., 1995).

Предпринятое нами обследование больных ЦРС выявило, что в возрастной группе не старше 25 лет и с длительностью течения заболевания менее 5 лет абсолютные значения параметров обмена ТГ и СХ не отличались от результатов КГ. В то же время значения в-ЛП превышали верхнюю границу нормы. В пределах нормы были также показатели состояния ЛО - L и величины коэффициентов относительности Kt, КЬ, Kh. Эти данные позволяют предполагать относительную скомпенсированность ЛО у молодых людей, больных ЦРС непродолжительное время.

Для пациентов старше 25 лет и имеющих длительность течения больше 5 лет изменения ЛО были более значительными: абсолютные значения ТГ превышали показатели КГ на 46,1% (р < 0, 005), в-ЛП - на 58,5% (р < 0, 005) . Уровень СХ в CK у этой категории больных находился в пределах нормы. Изменения ЛО с возрастом увеличивались: появлялась склонность к дизлипидемии по типу относительной гипертриглицеридемии. Анализ расчетного коэффициента участия СХ в ЛО показал, что имеется относительная гипохолестеринемия со снижением Kh на 28,0%. При этом значение величины КЬ (в-ЛП) оставалось в пределах нормы, что можно расценить как соответствие концентрации в-ЛП необходимой пропорции их участия в ЛО, интенсивность которого возрасла на 19,4%.

В качестве условного интегрального показателя, характеризующего морфо-функциональное состояние мембран эритроцитов, определялась величина

М.Полученные данные свидетельствуют о том, что БМ при ЦРС претерпевают значительные изменения. Это подтверждается также снижением ЭДП МЭ при ЦРС на 31,0% ниже показателей КГ. Отмечена также наибольшая выраженность ФТРП у пациентов старше 25-летнего возраста и больных с длительностью заболевания ЦРС более 5 лет .

Эти данные коррелируют с величиной М, характеризующей функциональное состояние МЭ. Наши исследования показывают, что чем меньше возраст

пациента и длительность его заболевания, тем менее компенсированным представляется состояние МЭ, интенсивнее изменена ее функция, выше уровень МДА и меньше относительное влияние ЛО на состояние БМ.

В то же время у больных с длительным течением ЦРС и старше 25 лет отмечалась относительная скомпенсированность состояния МЭ, что выражалось в незначительном повышении величины М, снижении ЭДП БМ и уменьшении зависимости уровня МДА МЭ от влияния ЛО СК.

Выявлено, что величина ФТРП для больных старше 25 лет и с длительнотью ЦРС более 5 лет оказалась на 15,2% выше, чем у более молодых пациентов и лиц с непродолжительным течением заболевания. Это можно объяснить усугублением морфофункциональных сдвигов в МЭ с возрастом и увеличением продолжительности заболевания.

В подгруппах больных ЦРС по мере утяжеления клинической симптоматики отмечается зависимость между тяжестью клинической картины и значениями в-ЛП в СК (увеличение на 4 0-50% выше нормы) . Наряду с этим отмечено возрастание уровня ЛО (Ь) на 12 - 16% выше нормы и увеличение показателей ЛО в СК, из которых следует выделить значения ТГ, что может означать относительную гипертриглицеридемию. Значения СХ соответствовали относительной гипохолестеринемии. Соответствующие изменения происходят в МЭ. Чем тяжелее состояние пациента, тем более выражены нарушения в МЭ и сильнее изменяется кривая ФТРП. Уровень МДА на МЭ с увеличением тяжести симптоматики повышается. Приведенные данные указывают на наличие зависимости между тяжестью клинического состояния пациента и нарушениями функциональных свойств МЭ.

Данные, полученные в фазу ремиссии ЦРС, свидетельствуют о тенденции исследуемых показателей состояния ЛО и МЭ к относительной нормализации. В этот период состояние липидного метаболизма и БМ больных можно рассматривать как относительно компенсированное. Вместе с этим наблюдается склонность к Р-липопротеидемии и незначительное повышение участия ТГ в ЛО. Величина ЛО Ь

превышала значения нормы всего на 7,3%.

Было зафиксировано снижение величины ЭДП в фазе ремиссии ЦРС на 2 9,0% по сравнению с показателями КГ. Отмечено также усиление ФТРП. Несмотря на грубые изменения БМ у больных ЦРС, состояние МЭ в фазу ремиссии ЦРС можно расценивать как относительно скомпенсированное.

В фазе обострения показатели ЛО и состояния МЭ имели максимальные значения. Это выражалось в стойкой гипербеталипопротеидемии, относительной гипертригли-церидемии и относительной гипохолестеринемии (КЬ снизился на 30,0%), на фоне повышения уровня липидного обмена на 22,4% (Р < 0,001).

Происходит ухудшение функционального состояния МЭ (снижается величина М на 24,1%, р < 0,005), на фоне чего происходит падение показателя ЭДП на 31,0% и повышение уровня МДА МЭ на 15,8% (р > 0,001). При этом влияние свободно-радикального окисления на состояние МЭ увеличилось на 57,4% по сравнению с нормой и на 11,6% по сравнению с ремиссией при ЦРС.

Эти факты могут свидетельствовать о значительной мембранопатологии при ЦРС, которая в фазе ремиссии более склонна к компенсации за счет изменения значения коэффициента Ь, отражающего напряженность ЛО, и постоянства доли участия в ЛО в-ЛП (КЬ). Отмечено, что с увеличением возраста и продолжительности заболевания ЛО также имеет склонность к нормализации. Это выражается не столько значениями концентраций ТГ, СХ и в-ЛП в СК, сколько долей их участия в ЛО. При этом ЛО находится на новом, отличном от КГ уровне.

У больных ЦСРС в возрасте менее 25 лет отмечено наличие гипер-р-липопротеинемии и склонности к гипертриглицеридемии, причем для ЦСРСп подобные сдвиги более характерны, чем для ЦСРСр. С возрастом отмечается увеличение концентрации ТГ в СК от превышающей на 18,3% норму в возрасте 16 - 2 5 лет до 42,6% для пациентов старше 35 лет. Динамика изменения концентрации в-ЛП в СК больных ЦСРС имела сходство с изменением соответствующих показателей ТГ и также увеличивалась с возрастом от 29,3% для пациентов моложе 2 5 лет и до 5 6,1% для лиц старше 35 лет.

Отмечено, что чем старше пациент, тем выше напряженность ЛО. Это особенно заметно у больных с

ЦСРСп. С увеличением возраста наблюдалось падение значения коэффициента КЬ, определяющего относительную гипохолестеринемию, которая оказалась наиболее характерной для больных ЦСРСр в возрасте 26 - 35 лет и ЦСРСп старше 35 лет.

Состояние МЭ в различных возрастных группах больных ЦСРС оказалось примерно одинаковым. При этом среднее значение ЭДП было на 24% ниже результатов КГ. Уровень ПОЛ на МЭ превышал показатели КГ на 17% и имел наиболее высокие значения у больных в возрасте 26 - 35 лет. Показатели состояния МЭ с увеличением возраста имели отрицательную динамику, наиболее выраженную у больных ЦСРСп. Отмечено, что полученное для ЦСРС значение величины условного интегрального показателя состояния БМ характеризуется определенным уровнем ЭДП, МДА и показателями ЛО. С увеличением возраста изменения этих показателей становятся более значительными.' Максимальный дисбаланс этих величин приходится на возрастную категорию 26 - 35 лет. У пациентов старше 35 лет состояние ЛО и МЭ несколько стабилизируется.

Было отмечено, что чем продолжительнее течение ЦСРС, тем • более четко относительная

гипертриглицеридемия переходит в абсолютную, а абсолютная гипер-р-липопротеидемия становится более выраженной. Полученые данные свидетельствуют о том, что при ЦСРСп имеет место относительная гипохолесгеринемия со снижением участия СХ в формировании величины Ь более чем на 20%.

Отмечено, что проницаемость МЭ возрастала с увеличением продолжительности заболевания и характеризоватась падением величины ЭДП в среднем на 22%. Уровень свободно-радикального окисления на МЭ также имел тенденцию к повышению, наиболее выраженную при ЦСРСп. Отмечено увеличение ФТРП, что означает ухудшение состояния БМ с увеличением

продолжительности течения ЦСРС.

Полученные данные свидетельствуют о нарастании дизлипидемии и мембранных нарушений в организме больных ЦСРС с увеличением продолжительности заболевания.

При обследовании больных ЦСРС, разделенных на подгруппы с различной степенью тяжести клинической

симптоматики, была установлена склонность уровня ТГ к относительной гипертриглицеридемии. Причем с увеличением тяжести состояния пациента относительная гипертриглицеридемия обычно переходила в абсолютную. Подобная динамика наблюдалась также при исследовании в-ЛП. Коэффициенты участия СХ в ЛО в CK имели тенденцию к снижению с утяжелением клинической картины. У больных с III и IV с.т. симптоматики Kh соответствовали состоянию отосительной

гипохолестеринемии.

Ухудшение функционального состояния МЭ прогрессировало по мере нарастания тяжести клинической симптоматики. Это выражалось в увеличении проницаемости БМ, повышении уровня МДА на МЭ, большей выраженностью ФТРП.

Наиболее компенсированным можно считать состояние Л О и МЭ в фазе ремиссии ЦСРС. Причем отмечено, что тенденция ТГ и в-ЛП к увеличению обычно сохраняется, в то время как состояние холестеринового обмена, выраженное как в абсолютных, так и в относительных показателях, остаётся в пределах нормы. Напряженность ЛО сохраняется высокой.

Интегральная оценка структурно-функционального состояния МЭ свидетельствует об их глубоких изменениях при ЦСРС. Тем не менее, в фазу ремиссии состояние МЭ может быть охарактеризовано как наиболее скомпенсированное по уровню ЭДП, величине ПОЛ и выраженности ФТРП. Для фазы обострения ЦСРСр были характерны максимальные значения показателей ЛО. Это выражалось в абсолютно высокой гилер-ß-липопротеидемии и относительной триглицеридемии. Отмечена также выраженная относительная

гипохолестеринемии при высоком напряжении ЛО. Состояние биологической мембраны в фазу обострения, по сравнению с фазой ремиссии, изменялось менее значительно и сопровождалось увеличением

проницаемости МЭ (снижение ЭДП ка 26%) и острофазовым повышением уровня ЛОЛ на МЭ. При этом величина ФТРП соответствовала среднему значению U для ЦСРС.

Полученные данные указывают, что при ЦСРСп , вероятно , развивается состояние, напоминающее пролонгированное обострение, сопровождающееся высоким напряжением ЛО (122%) и явлениями абсолютной гипер-ß-

липопротеинемии, относительной гипертриглицеридемии и относительной гипохолестеринемии.

Уровень величины М при ЦСРСп остается на относительно низком уровне (83% от нормы), значение ЭДП снижается на 23%, величина ПОЛ повышается на 21% по сравнению со значениями КГ.

Приведенные данные свидетельствуют о том, что ЦСРС характеризуется наличием определенных нарушений ЛО и МЭ, которые закономерно изменяются в соответствии со сменой фаз компенсации и декомпенсации процесса. Признаком обострения процесса можно считать наличие повышения активности ПОЛ на МЭ и появление в СК относительной гипохолестеринемии. Причем у больных ЦСРСп также имеются признаки обострения процесса, хотя и в меньшей степени, чем при ЦСРСр в фазе обострения. Умеренные значения показателей ЛО и МЭ при ЦСРСп могут быть проявлением замедленной компенсаторной реакции на патологический процесс.

При изучении больных СРС было отмечено, что показатели ЛО и состояния МЭ не имели значительных отличий в зависимости от возраста и длительности заболевания и были близки к значениям КГ. В то же время установлено, что чем тяжелее проявляет себя заболевание, тем более выраженными оказываются изменения ЛО. Показано, что, если абсолютное значение в-ЛП с утяжелением симптоматики может переходить в гипер-р-липопротеидемию, то значение ТГ остается в пределах нормы. Уровень СХ в этом случае имеет отрицательную динамику, переходя при IV с. т. в относительную гипохолестеринемию. По мере нарастания тяжести состояния пациента отмечено повышение уровня ЛО .

При СРС прослеживается вполне определенная взаимосвязь: чем тяжелее клиническая симптоматика, тем выраженнее мембранные нарушения - выше проницаемость БМ, активнее реакции ПОЛ, значительнее ФТРП.

Полученные результаты исследования ЛО при РС свидетельствуют о наличии в СК у больных гипер-р-липопротеидемии, склонности к гипертриглицеридемии (особенно при остром и' тяжелом течении).Посредством математического моделирования взаимозависимости

показателей липидного обмена выявлена относительная гипохолестеринемия при РС, что не исключается некоторыми учеными (Таранова Н.П., 1988; Репин B.C., Смирнов В.Н., 1989; Nikkila Е.А.,1974; Wallace G.M., Holmes S., 1993).

Если рассматривать изменения ЛО при PC как следствие процесса демиелинизации , то повышение концентрации 7Т и в-ЛП в СК представляется закономерным (Рис.1).

6.0 5.9

ЦРС ЦСРС СРС кг

Рис.1.Показатели ЛО в СК больных различными формами РС и лиц КГ

а-ТГ (ммоль/л) ,б-|3-ЛП (г/л), в-СХ (ммоль/л)

Снижение количества СХ в СК подтверждает высказываемое мнение о РС как о болезни "депонированного холестерина" (Ходос Х.Г., Кожова И.И., 1980) .

Наиболее вероятным "депо" СХ может являться БМ. Данные исследования ЭДП свидетельствуют о

патологическом повышении проницаемости МЭ при всех формах РС (Рис.2).

Рис.2.Показатели ЭДП МЭ У больных различными формами PC и лиц КГ.

Получен выраженный феномен торможения реакции ПОЛ, появление которого характерно для повышения в БМ тугоплавкой фракции липидов, вероятнее всего СХ. Нарушения состояния эритроцитарных мембран, выявленные в ходе работы, дают возможность связать дисгемические нарушения при PC, наблюдаемые многими исследователями (Fisher М., Jonson M.N., Nalate М., 1987; Владимиров Ю.А., 1989), с микроэмболизацией.

Отмеченные морфофункциональные изменения МЭ приводят к ухудшению функциональных свойств БМ. Это может быть связано с тем, что избыточное включение СХ в липидный бислой клеточной мембраны ведет к нарушению функции, снижению жизнедеятельности БМ и старению клетки

В наших исследованиях МЭ была использована как модель БМ любого типа клеток. В связи с этим изменения состояния МЭ при PC могут с известной степенью условности быть отнесены и к другим клеточным популяциям.

Подобная точка зрения предполагает наличие при PC наследственно обусловленной общеорганизменной

мембранной дисфункции, находящейся в

скомпенсированном состоянии до возникновения стрессовой ситуации, превышающей компенсаторные возможности индивидуума. Изменяется функциональное состояние БМ, в частности ГЭБ, что может привести к поражению систем жизнеобеспечения организма, выработке противомозговых антител и развитию процесса демиелинизации (Hauseer S.L. et al., 1989; Gomi G., 1994)

Включение CX в БМ некоторыми исследователями расценивается как разновидность процесса адаптации (Selmaj К., Raine С.S., 1991). С другой стороны, повышение активности ПОЛ в организме также считается проявлением адаптивной реакции (Лопухин Ю.М. и др. 1983; Emirit I, 1986). Исследование состояния МЭ при PC позволяет высказать мнение, что влияние ЛО, в частности СХ, на состояние БМ стремится уравновесить активность ПОЛ. Чем грубее изменены МЭ, тем выше значение величины К1, характеризующей участие ЛО в формировании мембранной дисфункции. Причем в структуре ЛО наиболее динамичным коэффициентом участия - Kh - обладает СХ. Это свидетельствует о том, что при наиболее выраженных изменениях МЭ возникает уменьшение концентрации СХ в СК и увеличивается его присутствие ё-' МЭ. Подобное перераспределение- СХ может снижать концентрацию МДА и проявляться в виде уменьшения выраженности ФТРП.

Эти рассуждения не противоречат ранее опубликованным данным о токсическом влиянии продуктов свободно-радикального окисления на БМ с нарушением ее функции, жизнедеятельности и возникновением

коллоидно-осмотического гемолиза . Встраиваясь в БМ, СХ тормозит процесс ПОЛ и, выступая в роли структурного антиоксиданта, приводит к появлению ФТРП, который по нашим данным наиболее выражен при ЦРС и наименее - при СРС (Рис.3).

Избыточное внедрение стероида в БМ небезразлично для Эр, поскольку возникают нарушения, связанные с ингибированием СХ ферментов, локализованных в липидном бислое, что приводит к мембранной дисфункции, старению и гибели клетки. Повышение

активности ПОЛ при обострении процесса играет положительную роль, снижая количество СХ в МЭ, повышая текучесть БМ за счет включения МДА и увеличивая ее жизнеспособность (Владимиров

Ю.А.,Арчаков А.И., 1972; Предтеченская A.B., Иерусалимский А.П.,1991; Smith .С.Р., 1979; Saito Т., 1986) .

Рис.3.Изменение концентрации МДА в различные стадии инициации ПОЛ у больных различными формами РС и лиц КГ.

Можно предположить, что дизлипидемия и пероксидазная активность имеют как патологическое, так и адаптивное значение в патогенезе РС. Их взаимная компенсация может обеспечить ремиссию или обострение процесса. При невозможности достижения этой компенсации заболевание может приобретать прогрессирующее течение.

При всех формах РС постоянным остается коэффициент проницаемости БМ (К1:) . Его отличия в группах и подгруппах больных РС не превышали 0,6%. Наличие постоянной величины среди значительного количества других показателей ЛО и состояния МЭ позволило придти к заключению, что коэффициент №, отражая барьерную функцию БМ, является показателем уравновешенности адаптивных реакций (рис.4).

щщ

0.9-

0.8-

0.70.60.5 0.40.3 0.2 0.1

0

ЦРС ЦРСРп ЦСРСр ЦСРСр обострениие реыиссия

СРС КГ

Рис.4 Показатели К£,Кр,К1 МЭ больных различными формами РС и лиц КГ.

Интересным кажется факт, что чем острее процесс, чем неравновеснее система, тем меньше диапазон изменений относительных расчетных величин. В большей мере это относится к СРС и ЦСРСр в ;-фазе обострения, что позволяет определить их как состояния с низкими адаптационными возможностями, имеющие склонность к декомпенсации в БМ. Функциональное состояние МЭ и ЛО у пациентов этих групп отличается тем, что их результаты наиболее приближены к значениям КГ. В то же время расчетные величины, определяя глубину мембранной дисфункции и выраженность изменений ЛО, оказываются при этих формах РС максимально отличными от значений КГ. В диагностическом плане появление признаков относительной гипохолестеринемии в сочетании с относительной гипертриглицеридемией является прогностически неблагоприятным признаком.

При ЦРС интенсивность изменений БМ является наибольшей среди других форм РС. В то же время колебания относительных величин при ЦРС незначительны и сходны с результатами соответствующих расчетных величин КГ. Это может свидетельствовать о

значительном запасе адаптивных возможностей МЭ у больных этой группы.

Подобные наблюдения позволяют представить ЦРС и ЦСРСр в фазе ремиссии как наиболее скомпенсированные состояния в рамках имеющейся мембранной дисфункции, а СРС и ЦСРСр в фазе обострения как самые нескомпенсированные.

Можно сделать предположение, что по мере развития РС происходит включение значительного количества СХ в БМ, что приводит к гиперстабилизации и замедлению процессов жизнедеятельности клетки. Этот же процесс делает ВМ менее подверженными воздействию свободно-радикального окисления, что уменьшает возможность срыва адаптационных реакций. Причем барьерная функция БМ (К:И при этом остается неизменной.

выводы -

1. Результать1 проведенных исследований дают основание полагать,что у больных рассеянным склерозом имеются нарушения липидного обмена.Дизлипидемия носит характер гипер-р-липопротеидемии, относительной гипертриглицерид- и гипохолестеринемии, выраженность которых нарастает с возрастом пациента, длительностью и тяжестью течения заболевания.

2.Патологические изменения мембран эритроцитов патогномоничны для рассеянного склероза, взаимосвязаны с нарушением липидного метаболизма и прогрессируют с возрастом пациента и длительностью течения заболевания.

3.При рассеянном склерозе нарушение липидного метаболизма и, в частности, состояние относительной гипохолестеринемии сопровождается избыточным включением свободного холестерина в клеточную мембрану, что приводит к структурно-функциональным нарушениям.

4.Изменение структурно-функциональных свойств мембран эритроцитов и нарушения липидного обмена наиболее выражены у больных церебральной формой рассеянного склероза и лиц, страдающих цереброспинальной формой рассеянного склероза в фазе обострения.

5.Обнаружение в сыворотке крови больных рассеянным склерозом изменений липидного обмена,

выражающихся в относительной гипохолестеринемии в сочетании с относительной гипертриглицеридемией, можно расценивать как прогностически неблагоприятный признак, в то время как нормальные показатели триглицеридов и свободного холестерина указывают на вероятность более блаприятного течения рассеянного склероза.

6.Мембранные нарушения эритроцитов при рассеянном склерозе сходны с возрастными характеристиками мембран эритроцитов, отмечаемыми обычно в более старшем возрасте, в связи с чем данные признаки указывают на патологическое ускорение старения организма и, вероятно, способствуют развитию дисгемических процессов.

7.Показатели структурно-функционального состояния мембран эритроцитов, липидного обмена и результатов математического моделирования могут быть использованы для расширения диагностических возможностей в качестве дополнительных критериев дифференциальной диагностики форм и фазности течения рассеянного склероза.

список публикаций

1.Изменения уровня реакции перекисного изменения липидов мембран эритроцитов морских свинок при длительной изобарической гипоксии.// Вопросы экспериментальной и клиническом пульмонологии: Материалы Всероссийской конференции.-Самара,1991.-С.39-41. (в соавт. с Н.И.Лясковской).

2.Мембранопатология эритроцитов при рассеянном склерозе.//Новые технологии в неврологии и нейрохирургии: Сборник тезисов докладов I Самарской конференции невропатологов и нейрохирургов.-Самара,1992.- Кн.1.-С.58-59.

3.Рассеянный склероз как модель преждевременного старения мозга.// Интеллект и выживание. Системный подход: Тезисы докладов Всероссийской научко-технической конференции.-Самара, 1993.-С.19-21. (в соавт. с В.В.Скупченко и Р.А.Тимирбулатовым).

4.Мембранные характеристики эритроцитов и возрастная адаптация при сосудистой патологии.//Там же.-Самара, 1 993.-С.21-22 . (в соавт. с Р.А.Тимирбулатовым) .

5.Фазотонный гомеостаз и мембранотест.//Экология и здоровье человека: Тезисы докладов Всероссийской научно-практической конференции.-Самара,1994.-С.161-162. (в соавт . с В.В.Скупченко).

6.Мембранопатология при рассеянном склерозе.//Новые медицинские технологии: Тезисы докладов первой сессии общего собрания ЕА АМН.-Нижний Новгород,1994.-С.121. (в соавт. с В.В.Скупченко и Р.А. Тимирбулатовым).

7. К вопросу о взаимоотношении актавности ПОЛ, размеров инфаркта мозга и частотой его геморрагических трансформаций.//Юбилейный сборник статей второй самарской конференции невропатологов и нейрохирургов.-Самара, 1995.-Ч.III.-С.67-73. (в соавт. с А.А.Ашман и Р.А.Тимирбулатовым) .

8.Корреляты в мембранах эритроцитов и сыворотке крови при рассеянном склерозе.//Там- же.-Самара,1995.-Ч. III.-С.73-77. ( в соавт. с К.И. Тельновой) .

9.Системный подход к патогенезу рассеянного склероза.//Тезисы докл. на VII Всероссийском съезде неврологов.-Нижний Новгород,1995.-С.140. (в соавт. с В.В.Скупченко, К.И.Тельновой, Н.Э.Посвалюк).

10.Изучение проницаемости и процессов пероксидации эритроцигарных мембран при рассеянном склерозе.//Нейроиммунология, нейроинфекции, нероимидж: материалы 4-ой научной конференции.-Санкт-Петербург, 1995.-С.109-111. (в соавт. с

B.В.Скупченко).

11.The study of penetration and peroxidation processes of erythrocytic membranes with multiple sclerosis patients.// Environmental Pollution (ICEP'95) and Neuroimmuno Interactions and Environment (ICONE'95): the International Co-Conferences .-St.Petersburg, Russia,1995.-P.167. (в соавт. с В.В.Скупченко).

12.Интерферонотерапия с позиций фазотонной теории.//Нейроиммунология, эпидемиология и интерферонология рассеянного склероза: материалы 5-ой международной конференции.-Санкт-Петербург,1996. -

C.28. (в соавт. с В.В.Скупченко).