Автореферат и диссертация по медицине (14.00.16) на тему:Морфоцитогенетические изменения в лимфоцитах периферической крови детей, длительно проживающих на загрязненных радионуклидами территориях Гомельской области

w __-С ___rL, '--.-W. j.-t - f . — « « 12 w . J . *± '

ЛЩМКЛА ЯСЬЕЕКА

МОРКЕТГТСГЕНЕТЛЧЕСКПЕ ИЗМЕНЕНИЯ В ЛЙМССЕИТАХ

eep;ícef;:4ec:-'~3 к?сеи детеЛ, длительно ipgcea-zjeí

НА SATPSHEífribC'I РАЛКНУКЛШГАШ ТЕРРИТОРИЯХ ГЗЕЪСУХЙ ОБЛАСТИ 'ВРАГИН, ХОЙНИКИ:

14.". Ii. - Пзтслог'.гческая физиология

АВТОРЕФЕРАТ дигоергзш^! на зоисканле ученей степени б;:слог;^еокк наук

Набега выполнена з медпхдгнсксм пкституте. институте генетик:

и цитолог;::: АН НН. научкс-псследсвагельскс:,: институте радиационной мединины -Е .лаборатория гематологии).

Научна:: руководитель: доктор медицинск;;>: наук.

г.ро^еооор М.П.Павлова Консультант: кзкл;щзт биологических наук, ведущий научный сотрудник Л. С. Михалевич

Официальные оппоненты: доктор медицинских наук Н.К. Нечипуренко кандидат биологических наук Т.В. Шиманская

Оппонирующая организация - Гродненский медицинский

институт

Залита состоится " 25 " октября 1ЭЭ7 г. на заседании совета по гадите диссертаций ДОЗ.18.03. в Минском Государственном медицинском институте (220116, г. ;.!инск, пр. Дзержинского, 33).

С диссертацией модно ознакомиться з библиотеке Минского государственного медицинского института.

Автореферат разослан "_" сентября 1997 г.

Ученый секретарь совета по защите диссертаций доктор медицинских наук, профессор

' Г.И. Кравцова

ГУТ^ТТТДГ- V • " • Т • > гзд-пп-ГТТ

uüii^Ah /-мгиг\ i сгль i jir^-i rAhuia

Актуальность теш определяется необходимостью выявления фак-тороа риска развития гематологической и онкогематологическсй патологии (апластические состояния, лимфаденопатии, лимфосаркома, лейкозы} у детей, проживающих ка загрязненных радионуклидами территориях, и, соответственно, формирования групп риска по онкоге-матодогическим заболеваниям, для профилактических и лечебных мероприятий и диспансерного наблюдения.

Спустя более 10 лет после аварии на ЧАЭС, с целью изучения экологически детерминированной патологии детского организма, включая онко-гематологию, развилось научно-практическое направление "экологической педиатрии". Эксперты ВОЗ, в соответствии с международными стандартами, составили рекомендации для научных оценок групп здоровья: 1-я группа включает параметры, характеризующие болезнь; 2-я - содержит показатели, относящиеся к факторам риска, предшествующим заболеванию; 3-я - оперирует с показателями смертности; 4-я - включает показатели, относящиеся к процессам формирования здоровья.

Наша тема относится ко 2-й группе рекомендаций ВОЗ, факторам риска могущим предшествовать заболеванию. Всестороннее изучение факторов риска развития экспатологии приобретает особую актуальность в связи с экологической ситуацией после аварии на ЧАЭС (В.Г. Бебешко, 1993; И.В. Василевский, 1996; Ю.Е. Вельтгацез, 1995; Е.Ф. Конопля, 1996). Более 2 млн. человек, в том числе 550 тыс. детей, проживающих на загрязненных территориях цезием-137 от 5 до 4-5 Ки/км2 подвергается хроническому воздействию радиации (Спр. Белгидромет, 1989). В зтой связи, колтественная и качественная оценка лимфоцитов (Г.И. Козинец, 1980), являющихся клетками наиболее радиочувствительными, способными длительно хранить полученные лучевые повреждения (Г.И. Козинец, 1990; A.A. Яблоков, 1996), представляется весьма важной для формирования групп риска по онкогематологическим заболеваниям.

О повреждающем воздействии радпацш на лимфоциты пишут многие исследователи (А.Н. Шутко и др., 1S81; Севанькаев, 1387; С.А. Стрекалов и др., 1987; H.A. Мазник, 1987; Б.М. Хоменко и др., 1993; C.B. Комиссаренко и др., 1994). В то же время, по схеме, предложенной нами и столь длительного изучения лимфоцитов у де-

Т£И, ПрОЖИЕЗЮиДЕС КЗ. ТвррИТирИЯ/', ЗаГрЯВНеННЫл рЗДПОКуКЛПДЗМИ 3 Белоруссии, не проводилось, тогда как обнаруженные отклонения в лимфоцитах или других клетках крови могут считаться информативными только з сопоставлении с результатами предыдущих (или исследующих) исследовании, е динзмнке (Г.Л. Козинец, 1974, 1930; М. гагп et. al., 1974).

Попытка научно обоснованного решения этого вопроса определила цель и задачи настоящего исследования.

Цель работы - установить количественные и качественные изменения в лимфоцитах периферической крови детей, проживающих на территориях с плотностью загрязнения радионуклидами от 15 до 45 Ки/км2 (г.п. Братин) и от 5 до 15 Ки/км2 (г.п. Хойники) и дать рекомендации для формирования групп риска по онкогеыатологичесгаш заболеваниям.

Задачи исследования:

1. Охарактеризовать количественные и качественные параметры лимфоцитов периферической крови у детей, проживающих на территориях с плотностью загрязнения радионуклидами от 15 до 45 Ки/км2 (г.п. Братин) и от 5 до 15 Ки/км2 (г.п. Хойники) и у детей контрольной группы (г. Минск) в динамике, с 1988 по 1994 гг.

2. Определить количество лимфоцитов периферической крози у детей, проживающих в г.п. Братин, Хойники и детей г. Минске (контроль), в динамике, с 1938 - 1994 гг.

3. Исследовать качественный состав лимфоцитов периферической крови в динамике.

4. Провести сравнительный анализ полученных результатов у детей, проживающих на территориях с плотностью загрязнения радионуклидами от 15 до 45 Ки/км2 и от 5 до 15 Ки/км2.

5. Разработать схему обследования лимфоцитов периферической крови, которая позволит педиатрам отбирать детей в группы рисгс по онкогематологии.

Связь работы o другими научными программами.

Диссертационная работа выполнялась в рамках Республдканскс научно-исследовательской программы "61-86".

Научная новизна исследования.

Впервые выявлены морфоцитогенетичэские изменения з лимфоцитах периферической крови в динамика, у детей в возрасте от 1 года до 15 лет, проживающих в г.п. Ерагин и Хойники, в течение

1388-1394 гг. При этом обнаружены: лимфоцитопения, макроцитсз, полинуклеарность, калгане микроядер з лимфоцитах. Показано достоверное Превышение урОЗНЛ ПОЛИН'/КЛеарКЫХ ЛПМфсЦИТОЗ И ЛПМфиЦЛТСБ с мпкроядрами у детей, родившихся до аварии на ЧАЗС, в сравнена с детьми, родившимися после аварии. Выявлена положительная связь время-эффект для обследованных нами детей, которая наиболее проявлялась у детей, родившихся до катастрофы на ЧАЗС.

Практическая ценность работы состоит в предложенной схеме морфоцитогенетического изучения лимфоцитов периферической крови, которая позволит педиатрам выявлять группы риска по оккогематолс-гическнм заболеваниям среди детей, проживающих на загрязненных радионуклидами территориях, для проведения профилактических и лечебных мероприятий и диспансерного наблюдения.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Лимфоцитопения, установленная в результате длительного наблюдения (1988-1994 гг.), у детей, проживающих на территориях с плотностью загрязнения радионуклидами от 15 до 45 Ки/км2 (г.п. Братин) и от 5 до 15 Ки/км2 (г.п. Хойники).

2. Преобладание лимфоцитопении у детей, проживающих на территории с большей плотностью загрязнения и родившихся до аварки на ЧАЗС, по сравнению с детьми, родившимися после аварии.

3. Качественные морфоцитогенетические изменения в лимфоцитах: макроциты, полинуклеарность, наличие микроядер, как у детей из г.п. Братин, так и у детей из т.п. Хойники,по сравнению с лимфоцитами детей, проживающих з г. Шнеке (контроль).

4. Еысокий уровень лимфоцитов-макрецитов и лимфоцитов с микроядрами наблюдался в течение всего периода мониторинга, преобладающий у детей, родившихся до аварии на ЧАЗС.

5. Обнаруженные изменения в лимфоцитах периферической крови (лимфоцитопения, макроцитоэ, полинуклеарность, микроядра) у детей г.п. Братин и Хойники должны расцениваться как цитогенетэтеекпе критерии биоиндикации хронического воздействия радиационного фактора, возникшего после аварии на ЧАЗС.

Личаш вклад соискателя.

Материал диссертации собран, обработан и проанализирован лично автором.

АПрОиЗЦПЛ рЭЗУлаТЯТиВ ДиССерТаЦИИ.

Материалы диссертации доложены на Республиканской научно-практической конференции по радиобиологии и экологии АН БССР, Минск, 1988; Научно-практической конференции по гематологии и трансфузиологии, Витебск, 1989; 2-ом Всесоюзном съезде генетиков, Алма-Ата, 1990; Республиканской научно-практической конференции НИИ РМ, Минск, 1991; 2-ом семинаре стран СНГ по вопросам детской онко-гематологии, Минск, 1992; 3-ей Республиканской научно-практической конференции, Гомель, 1992; 1-ом съезде детских онкологов-гематологов РБ, Минск, 1993; 2-м Белорусско-Японском симпозиуме, Минск, 1994.

Публикации.

Результаты диссертации опубликованы в 9 научных статьях и 1 монографии (под редакцией проф. М.П. Павловой).

Объем и структура диссертации.

Диссертация состоит из введения, общей характеристики работы, шести глаз, обсуждения результатов исследования, заключения, выводов, практических рекомендаций, указателя литературы, включающего 151 источник (отечественных - 123, иностранных - 28). Работа изложена на 106 страницах компьютерного текста, иллюстрирована 20 таблицами, 9 рисунками и 8 микрофотографиями.

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Материал и методы исследования.

С 1983 по 1994 гг. обследованы лимфоциты периферической крови у 1522 детей, 722 мальчиков и 800 девочек, в возрасте от 1 года до 15 лет, жителей г.п. Братин и Хойники. Контрольную группу составили 699 детей того же возраста, жителей г. Шнека. Все обследованные дети по возрастному аспекту разделены на две группы: от 1 года до 7 лет - 1-я группа и от 7 до 15 лет - 2-я.

У всех детей проведено комплексное ыорфоцитогенетическое исследование лимфоцитов периферической крови. Для подтверждения инкорпорации организма радионуклидами у 37 детей, в возрасте от 4 до 15 лет, из контролируемых районов, проведен спектральный анализ крови и мочи. Исследования проводились в институте ядерной

энергетики AKFE на гзмма-сп-ктрсыетре "А^КАМ" фирмы "Сртек" (CSА).

Анализ крови ярсэслагся з даСорзтсраи диспансера НШ' НМ :: лабораториях Брагинской л Нспникскоп НРБ. Окраошвзлпсъ мазки на гематэке австрийской фирмы "Байер". 2 гемограмме определяли количество лимфоцитов, наличие дзулдерных и лолпядеоных форм лтфслп-тов, провсд;ыась дптсметрия лзмфсцитов выявлялись мзкрспиты), подсчитызалось количество лимфоцитов с миксоядрами.

Зитометрия лимфоцитов периферической крови, - микроскопический метод измерения диаметра лимфоцитов, проводилась по методу Е.А. Кост (1975).

В периферической крови встречается малые лимфоциты, имеюгше диаметр (D) 7-9 мкм, средние и большие "широкоцитоплааменнке", размер которых может достигать 12-13 мкм у детей дошкольного возраста 5-7 лет (А.И. Абрамов, 1988). В связи с этим, у детей 1-й возрастной группы макроцитэми считали лимфоциты, у которых D был свыше 13,5 мкм., а у детей 2-й возрастной группы - свьне 10 мкм.

Микроядра определяли з моно- и полинуклеаряых лимфоцита;-: с использованием иммерсионного объектива микроскопа "Arnpleval" Фирмы "Carl Zeiss".

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Инкорпорированные радионуклиды в организме детей из контролируемых районов

Установлено, что в крови обследуемых нами детей из загрязненных радионуклидами районов ;:мевт место следующие радионуклиды (РН): Сз-124, 02-137, К-40, 2г-95, ЗЬ-125, А£-'1Ю. В моче зтнх детей, кроме перечисленных изстслсз, обнаружены: 1-125 (май-;ж:-:ь 1936), С-14 (июнь 1536), Ни-106. Се-144, гп-55, ¿г-95 (1986-1987-1983 гг.) (табл.:, 2). Как заднс из таблиц, по сразне-

- а -

шпо с излучателями естественного происхождения, всегда обнаруживаемыми б организме, у детей из контролируемых районов инкорпорированы искусственные: 0з-124, Са-'ГЗ? и Др.

Таблица 1

Радионуклиды в организме детей из контролируемых районов

Цезий-134 Цезий-137 Калий-40 Цирконий-95 Сурьма-125 Серебро-110 Рутений-106 Церий-144 Цинк-65

1Активность в пределах колебаний. Ки/л!

Радионуклиды !С у б с т о ат исследования!

1 Кровь 1 Моча 1

0,127х10~э-1,17 0,13 Х10"э-6,86 2,073х10-э-6,7 0,97 х10~9-1,46 2,45 х10~э-0,21 5,6 х10_11-6,7

хЮ-9 0,199х10~э-9,75х10~э х10-э 0,57 х10~9-2,5 хЮ"7 хЮ"3 1,586х10~3-6,7 х10~3 х10~9 0,973х10~э-0,34х10~9 х10~9 хЮ'

-10

0,648х10~9-2,162х10"э 2,23хЮ~э -0,648x10"® 1,1х10~10 -1,189х10~9

Важным свойством живого организма является стремление к сохранению оптимального внутреннего радиоактивного фона с установившейся к нему филогенетически закрепленной адаптацией (Ю.К Кудриц-кий и др., 1987). Это свойство организма - стремление "очиститься" и приобрести снова оптимальный фон при внедрении искусственных РН, с которыми выводятся и определенные количества естественны;-: радиоактивных изотопов калия-40, в частности и лежит, вероятно, в основе выведения радионуклидов. Феномен выведения калия -40 из организма при дополнительных облучениях в малых дозах известен ( А.И. Даниленко, И.Н. Шевченко, 1981). Калий-40 необходим для нормального функционирования миелокариоцитов, синтеза ДНК, митозов. У калий - "истощенных" клеток обнаруживают дисбаланс ДНК и РНК, что так или иначе отражается на функции клетки. Известно также, что ионы калия так же, как и кальция оказывают радиозащитный эффект (М. Поспишил, 1986).

Показатели СРП (счетчик радиометрии поисковый) и СИЧ (счетчик излучений человека) в 1987-1988 гг. у обследованных детей были в предела:-; 120-3060 мкр/ч и 0,01-1,66 мкКи/организм (по це-

i .гц,—. 1С,.

Излучатели естественного происхождения з организме человека (По данным м. Эйзенбад, 1967 и рекомендаций MKPS)

Элемент гХпзякескнл! i Период полураспада! Место

í символ ¡излучения i i максимального

' I í ¡ накопления

Тритий Н3 бета 12,4 года Есе тело

Углерод С14 сета 5 400 лет Есе тело

Калий ,¡40 бета, гамма 1,2x10® лет Мышцы, эритроциты

Ванадий у50 бета, гамма 1012 лет -

Рубидий R37 бета 6,1х1010 лет -

Индий In115 бета 1014 лет -

Сурьма Sb123 бета очень большей -

Йод т129 бэта, гамма 0,72x107 лет Щитовидная железа

Теллур Те130 бета 1021 лет Почки, кровь

Лантан La133 бета, галла 7х1010 лет Кости

Неодим Nd144 альфа 1,5 хЮ15 лет -

Самарии Sm147 альфа 6,7 хЮ11 лет -

Лютеций Lu176 бета, гамма 4,56хЮ10 лет -

Вольфрам Wl?3 гамма 21,5 дней -

Рений Ke197 бета 1011 лет -

Висмут Bi205 альфа 2,7 хЮ17 лет -

Свинец pb210 бета 22 года Кости

Полоний po210 альфа,гамма 139, 4 дня -

Радий Ra226 альфа, гамма 1 622 дня Кости

Радий Ra228 бета, гамма 6,7 года -

Актиний A c227 альфа, бета 22 года Печень, кости

Протакти pa231 альфа, гамма 3,43х104 лет -

НИИ

Торий Th232 альфа, гамма 1,39хЮ10 лет Кости

Торий Th230 альфа,гамма 3,0 xlQ4 лет -

Уран l,23S альфа, гамма 4,4 хЮ9 лет Почки, кости

Уран ц235 альфа, гамма 7,13x10® лет -

Плутонии p„23S альфа, гамма 24 400 лет Кости

siBo-137). K.E. Hau и ГЛ1. Михадьцевач (1993) установили достоверную корреляцию между загрязнением почвы цевием-137, радиоактивностью мочи и показателями СИЧ у детей.

У детей контрольной группы (100 человек, г. Минск) показатели СИЧ были от О до 0,009 мкКн/оргзнизм (по цезкю-137).

Таким образом, в организме детей, проживающих на загрязненных радионуклидами территориях имеют место дополнительные к естественным радионуклидам, искусственные, к которым нет филогенетической адаптации и которые создают дополнительные дозы радиации, воздействующие на клетки (табл.1, 2).

Количественные показатели изменений лимфоцитов в периферической крови обследованных детей

Абсолютное количество лимфоцитов в периферической крови называют чувствительным "биологическим индикатором" при воздействии ионизирующих излучений на лимфопоэз и лимфоциты в организме человека (Козинец Г.И., 1980). Содержание лимфоцитов ниже 2,5х109/'л у детей 1-й группы, проживающих в г.п. Братин, отмечено нами в 1988, 1939, 1990, 1994 гг., соответственно: в 29,6+4,92 случаев (контроль - 5,0+0,8%), (Р< 0,05); 1б,0+2,2Х (контроль 3,0+0,5%), (Р<0,05); 35,5+5,5% случаев (контроль - 5,7+1,3%), (Р<0,05); в 1994 году - не отличалось от контроля. Уровень лимфоцитов ниже 1,5х10э/л, у детей 2-й группы, родившихся до аварии на ЧАЭС и проживающих в г.п. Братин, соответственно был: в 9,5+1,82 случаев, (контроль-0); 7,2+1,3% (контроль-1,0+0,3%), (Р<.0,05); 8,0+1,6% (контроль-5,2+1,4%), (Р<0,001); 17,4+3,2% случаев, (контроль-0). Как видно, в 1994 году увеличилось число детей 2-й группы с лимфоцитопенией.

По данным литературы, у детей длительно проживающих на территории, загрязненной РН, наблюдаются колебания гематологических показателей, выходящие за пределы физиологической нормы (Л.А. Еулдаков и др., 1990, М.Н. Чуйко, Р.Г. Полющкч, 1993).

У детей 1-й группы, проживающих в г.п. Хойкики, лимфоцлтопе-ния выявлена в 1988, 1989, 1990 и 1S94 гг., соответственно: в 53,1+8,5Х случаев (контроль - 5,0+0,8-1), (Р<0,05); 61,4+14,1% (контроль - 3,0+0,5%), (Р<0,05); 64,2+12,8?; (контроль

5,7+1,2"), (?<0,С5); и з 9.1+1.3% случаев (контроль - 0). У детей 2-й группы, лтйоцитопешш, выявляемая з течение всего периода обследования, была, соответственно: в 27,0+4,4% случаев (контроль - и); 23,3+4,3% (КОНТРОЛЬ - 1,0+0,3%), (Р<0,05); 26,5+4,3% (контроль - с,2т_1,4%), (г<0,С5.1; 3,6+0,7% (контроль - 0);, И, К 1994 году, как видно, почти исчезла, составив небольшой процент детей, родивисП'ЮЯ до аварки на -1АЭС. Однако, у этих детей обнаружены плазматические клетки, в 1994 году отсутствующие у детей из г.п. Братин.

Из вышесказанного следует, что у детей 7-15 лет, родившихся до авар;п! на ЧАЭС и проживающих в г. п. Братин, лимфоцитопения сохраняется. Возможно, что это связано с более высоким внутренним радиационным фоном у них, с задержкой созревания и выхода в периферическую кровь лимфоцитов. В момент аварии на ЧАЭС это были дети млашей возрастной группы, с более радиочувствительной лиыфо-идной системой , похучившей облучение в определенной дозе. И они продолжают проживать на территории, загрязненной радионуклидами, подвергаясь внутреннему и внешнему воздействию ионизирующего излучения. У детей, проживающих в т.п. Хойники, к 1994 году частота выявлений лимфоцитопении стала меньшей, но у этих детей обнаружены плазматические клетки, что, вероятно, связано с более высокой ксмпенсатсрно-адаптационной реактивностью лшфоцитсв (Л.Г. Борт-кезич и др., 1996).

По радиочувствительности лимфоциты превосходят клетки миело-идного ряда, однако развивающаяся лимфоцитопения может быть информативной только в сопоставлении с результатами предыдущих исследований, в динамике. Мы обследовали детей, проживающих в г.п. Братин и Хойники в течение ряда лет и это позволяет считать полученные нами данные информативными.

Качественные показатели изменений з лимфоцитах периферической крови обследованных детей

Изучение качественных изменений в лимфоцитах у детей, проживающих на загрязненных радионуклидами территориях, проведено с

ЦсЛЪЮ ВЫЛЕЛЭпКН фЗКТириБ piiOKS. ПО ГеыОПаТКЯМ (маКриЦИТСЗ, НуКЛб-арнооть, микроядра).

Макроцитоз лимфоцитов более существенным оказался у детей, проживающих в г.п. Братин, родившихся до агарии на ЧАЗС, и составил к 1934 году 49,7+9,8% клеток, превысив в 1,8 раза значение 1988 года и в 2 раза - контрольный показатель (25,5+6,3%), (Р<0,05). У детей, проживающих в т.п. Хойники, макроцитоз, выявляемый в течение всего периода обследования в обеих группах, к 1994 году стал выявляться меньше, хотя у детей, родившихся до аварии на ЧАЭС процент макроцитов - 47,0+8,9% клеток, в 1,8 раза превысил контрольный показатель (25,5+6,3%), (Р<0,001).

По данным эксперимента известно, что постоянное пребывание крыс в 30-ти км зоне после аварии на ЧАЭС, приводит к выраженному нарушению лимфопозза, проявляющемуся в количественных и качественных изменениях лимфоидных клеток на всех стадиях их дифферен-цировки (М. Silva, 1992; Б.М. Хоменко и др., 1993), что подтверждает наши показатели, (рис. 1).

ЕЙ ВТ

54.3 4?. 4 43.9

38.4 32.9

27.4

21.5 16.4 10.9 5.45

19888т ~j988ffli 1983 Вс 1989Kh 1Э906г НЭДЬ 1й48г 1994Kli

Рис. 1. Сравнительная динамика лимфоцитов-макроцитов По вертикали - процент клеток, по горизонтали - годы обследования и районы; 1 - дети 1-7 лет; 2 - дети 7-15 лет Вт - Братин, КЬ - Хойники

Изучал морфология ЛПК детей из г.п. Ерагин ;г Хойяики, мы выявили в гвуядернне клетки. Частота встречаемости их у детей, родившихся дс- аварии на -IASC большая, чем у детей, родившихся .тесле аварии. *.рсме тсго, частота встречаемости двуядерных лршфо-•.гптсз у детей, родившжся до аварии на ЧАЗС достоверно большая в 1SS4 году, ~о сравнешзо с 1988 годом. В "1988 году число таких лимфоцитов у детей 7-15 лет иг т.п. Ерагпн составило 2,3+0,4% клеток; з 1989 - 2,0+0,4%; в 1990 - 5,9+1,2% и в 1994 году -4,7+0,97. клеток, (контроль-0). У детей того же возраста, из г.п. Хс-йники, частота встречаемости двуядерных лимфоцитов также увеличилась з 1994 году, по сравнению с 1988 годом. В 1988, 1989, 1990 и 1994 гг. двуядернке лимфоциты встречались, соответственно: в 1,3+0,3%; 2,8+0,5%; 2,3+0,4%; 4,1+0,8% клеток (рис. 2).

Рис. 2. Сравнительная динамика двуядерных лимфоцитов По вертикали - процент клеток, по горизонтали - годы обследования и районы; 1 - дети 1-7 лет; 2 - дети 7-15 лет Ег - Братик, Kh - Хойники

Как ВИДНО, ЧаСТОТа ВСТреЧНВМОСТИ ДВуЯДерНЫл ЛИМфОЦЛТОВ у Д&~ тей, родившихся до аварии на ЧАЭС большая в 1994 году, по сравнению с 1988 годом, что модно связать с длительностью воздействия внутреннего и внешнего облучения на органы лимфопоэза и лимфоциты. Клетки функционируют нормально до начала деления, ео время митоза повреждения становятся видимыми: делятся только ядра, что приводит к образованию двуядерных лимфоцитов. У ряда молодых клеток ни ядро, ни цитоплазма не сохраняют способности к делению, а так как рост клетки продолжается, то образуются большие и гигантские лимфоциты ( М.М. Dunn et. al., 1986). По данным Л.Я. Носовой и С.М. Кононенко (1989) любые изменения морфологии ядра по сравнен™ с нормой, выявление динамики этих изменений, могут расцениваться как критерии риска возможного развития димфопролифератив-ных заболеваний.

Цитогенетические эффекты в лимфоцитах периферической крови детей, длительно проживающих на загрязненных радионуклидами территориях Гомельской области

Обнаружены лимфоциты с микроядрами (одноядерные, двуядерные, трехъядерные), в динамике, у детей, проживающих в г.п. Братин и родившихся до аварии на ЧАЭС. Частота лимфоцитов как одноядерных, так и полиядерных с микроядрами достоверно увеличилась к 1994 году и составила у детей 2-й группы, соответственно: одноядерные -24,2+1,1% клеток, (контроль- 1,9+0,1%; Р<0,05), двуядерные -14,4+0,8%, (контроль-0); трехъядерные - 8,7+0,6%, (контроль-0) (рис. 3).

Выявлены также и четырехъядерные лимфоциты, процент которых невелик и составил 0,3+0,1%. В контрольной группе детей такие клетки не обнаружены.

Анализируя цитогенетический эффект в ЛПК детей из г.п. Хойники, родившихся до аварии на ЧАЭС, мы получили достоверное, в 4,8 раза, повышение уровня одноядерных лимфоцитов с МЯ. Так, в 1990 году частота выявления микроядер составила 8,4+0,2% клеток, (контроль - 1,3+0,2%; Р<0,05), а в 1994 году - 40,5+1,3% клеток, (контроль - 1,9+0,1%; Р<0,05).

Следует отметить, что семилетним цитогенетическпи мониторинг лимфоцитов периферической 'крови детей, прашвакшщх на загрязненных радионуклидами территориях т.п. Братин и Хойники, выявил статистически достоверное увеличение количества микроядерных клеток и МЯ в них у детей, родившихся до аварии на ЧАЭС по сравнению с детьми, родившимися после аварии (рис. 3.) и с контрольными группами детей того же возраста.

Рис. 3. Динамика одноядерных лимфоцитов с микроядрами По зертикали - клетки с микроядрами (%), по горизонтали -годы обследования и районы; 1 - дети 1-7 лет; 2 - дети 7 - 15 лет; Вг - Брэгга, КЬ - Хойники

В целом показано, что уровень всех регистрируемых нами повреждений в ЛПК ( макроцитоз, полинуклеарность, микроядра) у детей, родившихся до аварии на ЧАЭС и прожив аклщк, как на территории г.п. Брагин, так и на территории г.п, Хойники не снижается во времени, а, напротив, возрастает. Увеличение числа МЯ зависит от дозы облучения (М.А. Анкина, Г.Ф. Михайлова, 1991). Этим можно объяснить большую частоту встречаемости микроядер у детей 7-15 лет. Инициация хромосомных нарушений с появлением МЯ связана с определенным повреждением ДНК. Радиацией нарушается соотношение между продукцией новых клеток и их утилизацией.

Таким образом, уменьшение числа лимфоцитов представляется сложным процессом, связанным с частичной их гибелью, как элемен-

гоб, приобретших неполноценность (макроцитоз, двуядерность, МЯ и др.) и задержкой ж выхода из органов гемопоэза (костного мозга, селезенки, лимфатических узлов), так как малые дозы радиации способны задерживать митозы. Вышеизложенное позволяет нал предложить схем;/ обследования для отбора детей в группы риска по гемопатиям. Семилетний мониторинг показал эффективность схемы и необходимость ее использования для массового обследования детей, проживающих на территориях, загрязненных радионуклидами после аварии на ЧАЗС.

ВЫВОДЫ

1. В результате длительного наблюдения (с 1988-1994 гг.) лимфоцитов периферической крови у детей, проживающих на территориях с плотностью загрязнения от 15 до 45 Ки/км2 (г. п. Брагин) и от 5 до 15 Ки/км2 (г.п. Хойники) установлены количественные и качественные изменения со стороны лимфоцитов, более выраженные у детей, родившихся до аварии на ЧАЭС и проживающих на территории с большей плотностью загрязнения радионуклидами.

2. Радиологическое исследование крови и мочи этих детей обнаружило наличие у них искусственных радионуклидов: цезия-134, цезия-137, циркония-95, сурьмы-125, серебра-110 (в крови); в моче, кроме перечисленных радионуклидов обнаружены йод-125, угле-род-14, рутений-106, церий-144, цинк-65.

3. Установлена лиыфоцитопения у детей, проживающих в г.п. Брагин и Хойники, отсутствующая у детей контрольной группы.

4. Показано, что лимфоцитопения преобладает у детей, проживающих на территории с большей плотностью загрязнения радионуклидами (г.п. Брагин), по сравнению с детьми, проживающими на территории с меньшей плотностью загрязнения (г.п. Хойники).

5. Обнаружено также, что лимфоцитопения преобладает у детей, родившихся до аварии на ЧАЭС, по сравнению с детьми, родившимися после нее.

6. Выявлено, что уровень лимфоцитов-макроцитов оставался высоким в течение всего периода обследования как у детей из г.п. Брагин, так и у детей из г.п. Хойники, причем наиболее значительным он был у детей, родившихся до аварии на ЧАЗС.

7. Количество дгуядерных лимфоцитов в периферической крови большее наблюдалось у детей, родившихся да аварии на ЧАЭС, по сравнешго с детьми, родившимися после нее и проживающих на терри-

Т0рШ1 с иСЛЬШеИ ПЛОТНОСТЬЮ ЗаГрЛЗЯ5КИЯ раЦИС'НуКЛ11ДаМИ.

8. Установлено, что ¡количество мпкроядеркых лимфоцитов достоверно увеличилось более, чем з 5 раз как у детей из г.п. Зра-гин, таг; и у детей из г.п. Хсйники, хстя у псследкк уровень мс-ноядеркых лимфоцитов с микролдрзми выше. Однако, количество поли-ядернкх лимфоцитов с микрсядрами з периферической косей детей, проживающих на территср!ш с плотностью загрязнения радионуклидами от 15 до 45 Ки/кы2 (г.п. Братин) в 3,8 раза больше, чем у детей, проживающих на территории с плотностью загрязнения радионуклида1,и от 5 до 15 Ки/км2 (г.п. Хойники).

Э. Разработана схема обследования лимфоцитов периферической крови у детей, проживающих на территориях, загрязненных радионуклидами для формирования групп риска по онкогематологическим заболеваниям.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Микроядерный тест в нестимулированккх лимфоцитах периферически крови может быть использован для скрикингового обследования детей, длительно проживающих на территориях, загрязненных радионуклидами.

2. Рекомендуется схема морфоцитогенетического обследования лимфоцитов периферической крови детей, прожизагщих на загрязненных радионуклидами территориях:

- с исследованием количества лимфоцитов,

- цитометрическим измерением лимфоцитов,

- исследованием лимфоцитов на нуклеарность,

- выявлением микроядер.

В группу риска по онкогематологичеасэл заболеваниям включаются дети, имеющие какие-либо изменения по данным критериям -лимфоцитопения, и (или) макроцитоз, и (иди) пслинуклеарность, и (или) микроядра.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКСЕАННЫХ ПО Г2.5Е ДИССЕРТАЦИИ

1. Динамика морфологического состава периферической крови у жителей Гсмельской области в 1983-1388 гг/,Здравоохранение Бело-русии.- 1930. - N В. - С. 49-50. З.А. Сятксзекпи, Е.Р. Лпнкезич, Л. А. Азарсва, И.В. Корсбко, Л.Я. Крылова. А.И. Немец, Л.Ф. Смор-щок

2. Показатели периферической крови детей, проживающих в зона:'. жесткого контроля//3дравоохранение Белоруски. - 1991. - N 1. - С. 8-11. Л.Н. Астахова, Л.Я. Крылова

3. Изменения размеров лимфоцитов у детей, проживающих в эаг-рязненных радионуклэдами районах Гомельской и Мигилевской сблас-тей//3дравоохранение Белорусии. - 1991. - N 11. -С. 7-9. Л.Я. Крылова

4. Содержание фетального гемоглобина у детей, проживающих на загрязненных радионуклидами территориях//Здравоохрзнение Белорусии. - 1992. - N 5. - С. 11-14. Л.Я. Крылова

5. Цитогенетическое обследование детей Лунинецкого райо-на//3-я Республиканская научно-практическая конференция. "Научно- практические аспекты сохранения здоровья людей, подвергшихся радиационному воздействию в результате аварии на ЧАЭС". Сб.материалов.- Минск, 1992.- Т. 4, N 1. - С. 136. Л.С. МихалеЕНЧ, Г.А. Перепецкая, Л.Я. Крылова, Н.Н. Чеботарева

6. Нормы периферической крови детей республики Беларусь//Ак-гуальные проблемы детской онкогематологии.(Сб.мат.1' съезда детских онкологов-гематологов РБ.) - Минск, 1993.- С. 59. М.П. Павлова, Л. Я. Крылова

7. Иммуногематологические нарушения у больных с миастенией в результате аварии на ЧАЭС//Белорусско-Японский симпозиум "Ближайшие и отдаленные последствия ядерных катастроф: Хиросима, Нагасаки и Чернобыль". - Минск, 1994.- С. 88. О.И. Кузьменок, Е.П. Ки-рилъчик, Л. Я. Крылова

8. Mikhalevich L.S., Kartel N. А., Ferepetskaya G.A.,Chebota-revaN.V., Pavlova M.P., Krylova L.J. Monitoring of cytogenetic damages in peripheral lymphocytes children living1 in radioconta-minated' areas of Belarus// In Proc.: Belarus-Japan Symposium "Acute and Late Consequences of Nuclear Catastrophes: Hiroshima-Nagasaki and Chernobyl/Minsk, 1994 .- P. 388-397.

9. Монография - "Гематологические болезни у детей"/(под редакцией проф. М.П.Павловой).- Минск, 1996.- 44Q с.

10.Mikhalevich L., Kartel N., Perepetskaya G., Chebotareva N., Pavlova M., Krylova L. Monitoring of genetic damages in peripheral lymphocytes of children living in radiocontaminated areas of Belarus/ZInternational Conference "One decade after Cherno-byl'VViena, Austria, April 8-12. - 1996 - CN-63/299.- P. 421-425.

РЕЗЮМЕ Крылова Людмила Ясьевна " Морфсцитсгенетические изменения в лимфоцитах периферической крови детей, длительно проживающих на загрязненных радионуклидами территориях Гомельской области (г.п. Братин, г.п. Хойники)."

Ключевые слова: дети, дозы, лимфоциты, лимфоцлтопения, лим-фсцлтсметрия, макрсциты, микроядра, периферическая кровь, радиа-Цл1л, радионуклиды.

Проведено комплексное морфоцитогенетическое обследование лимфоцитов периферической крови в динамике у детей от 1 года до 15 лет, проживающих на загрязненных радионуклидами территориях г.п. Братин и Хойники, а динамике с 1988 по 1994 гг. При этом обнаружены: лимфоцитопения, лимфоциты-макроциты, полинуклеарные лимфоциты и лимфоциты с наличием микроядер. Аналогичные исследования проведены у детей контрольной группы (г. Минск). В результате проведенной обработки и анализа полученных данных предложена схема обследования с количественной и качественной оценкой лимфоцитов периферической крови детей. Впервые проведен мониторинг детского населения, длительно проживающего на территориях г.п. Брагин и Хойники, где плотность загрязнения радионуклидами (цезием- 137) от 15 до 45 Ки/км2 и от 5 до 15 Ки/км2. Получено достовернее повышение комплекса мсрфоцитогенетических изменений в лимфоцитах периферической крови у детей, родившихся до аварии на ЧА-ЗС и с большей выраженностью у детей из г.п. Братин, чем у детей из г.л. Хойники. Показано, что уровень, регистрируемых нами повреждений в лимфоцитах у детей, родившихся до аварии не снижается во времен;!, а напротив, возрастает, в связи с чем, приобретает необходимость и обоснованность обследование детей по предложенной нами схеме, которая позволит педиатрам целенаправленно отбирать детей в группу риска по онкогематологическим заболеваниям, для профилактических и лечебных мероприятий и диспансерного наблюдения.

РЗЗГСМЭ Крылова ЛюдзмЬта Ясеуна "Морфацытагенетычныя змянеши у л1мфацытах перыферычнай кры-в1 дзяцей, доуга прашваючых ка забруджаных радывнунлхдам! тэры-торыях Гомелъскап вобласц! (Браг1н, Хойтк1)."

Ключзеыя словы: дзещ, дозы, ламфацыты, л1мфацытамятрыя, л1мфацытапян!я, макрацыты, м1краядра, перыферычная кроу, радые-нукл1ды, радыявдя.

Праведзена комплекснае морфацытагенетычнае даследЕанне л1м-фацытау перыферычнай крыв1 у дзяцей ад 1 году да 15 гадоу, пражы-вашых на забруджаных тзрыторыях г.п. Браг1н 1 Хайига., у дынзыз.-цы з 1988 па 1994 гг. Пры гэтым вызначаны: л1мфацытапян1я, л1мфа-цыты-макрацыты, пол1нукл1ярныя л1мфапыты, лХмфацыты з прысутнаспю м1краядер. Аналаг1чныя даследванн1 праведзены у дзяцей кантроль-най групы (г. М1нск). У вьтку праведзенай апрацоущ 1 анал!зу атрымаяых даных пралануецца схема даследавання з колькаснай 1 якаснай ацэнкай л1мфащтау перыферычнай крывх дзяцей. Упершыяю праведзен сям1гадовы манхторынг дз1иячага насельн1цтЕа, доуга пражываючага на тзрыторыях г.п. БраПн 1 ХойнШ, две моцнзсць забруджвання доугажывучым1 радыенукл1дам1 (па цезаю - 137) ад 15 да 45 Ки/км2 1 ад 5 да 15 Ки/км2. Атрымана даставернае павышэнне комплекса марфалаг1чных 1 цытагенетычных парушэшяу у л1мфацытах перыферычнай крыв! дзяцей, нарадз1ушыхся да катастрофы на ЧАЭС, але з на1болышм эфектам у дзяцей з г.п. Браг1н, чым у дзяцей з г. п. Хошик1. Паказана, што уароЕень рзг1страваЕых нал1 парушзн-няу у дзяцей, нарадз1ушыхся да катастрофы не пан1жаецца з цягам часу, наадварот, узраотае, у оувяз1 з чым, набызае неабходкасць 1 абгрунтаванке абследванне дзяцей па прапануемай нам1 схеме, като-рая дазволгць педыятрам мэтанак1равана адб1раць дзяцей у групу рызыкх па онкагематалагхчным захворзнням, деля праф1лактычных 1 лекавых мерапрыемствау 1 д1спансернага наглядання.

SUMMARY Krylova Ludmila Yasevna

"Morphocytogenetic changes in peripheral blood lymphocytes in children residing' at the contaminated with radionuclides territories of the Gomel Region (settlements of Eragin and Khoiniki) over a long period of time."

Key words: children, dose, lymphocytes, lymphocytopenia, macrocytes, micronuclei, peripheral blood, radiation, radionuclides.

Complex morphocytogenetic study of the peripheral blood lymphocytes h3s been carried out in dynamics from 1988 to 1994 in children aged 1-15 residing at the contaminated with radionuclides territories of Eragin & Khoiniki. As a result of the study, lymphocytopenia was revealed, as well as lymphocytes with micro-nuclei. After the processing and analysis of the obtained data, a scheme of examination with quantitative and qualitative assessment of peripheral blood lymphocytes in children has been worked out. For the first time, monitoring of children's population residing for a long time at the territories of Bragin and Khoiniki with the density of radionuclide contamination on Cs-137 of 15-45 Ci/kro2 and 5-15 Ci/kmz has been carried out. A significant increase of complex morphocytogenetic changes in the peripheral blood lymphocytes in children born before the accident was mostly expressed in children from Bragin as compared with those from Khoiniki. It has been shown that the level of recorded lymphocyte disturbances in children born in pre-accidental period does not tend to reduce with time, but, on the contrary, seems to increase. Therefore, it becomes necessary and expedient to conduct the examination of children according to the proposed by us scheme, which will allow the pediatricians to make purposeful selection of children into the groups for oncohemotological diseases risk for conducting preventive and remedial measures and for dispensary observation.