Автореферат и диссертация по медицине (14.00.15) на тему:Морфологические изменения в печени при хроническом генерализованном туберкулезном процессе и лечении пролонгированным препаратом изониазида в эксперименте

РГ6 од

\1 м1

? ШЗ

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИИ

НОВОСИШРСКИЙ ОРДЕНА ТРУДОВОГО КРАСНОГО ЗНАМЕНИ МЕДИЦИНСКИЙ инстштт

На правах рукописи уж 616-002.5-031.81-085.281:616.36-018-0929

чернова Татьяна Геннадьевна

зоологические изменения в печени при хроническом генераш30еанн0и туберкулезном процессе и лечении пролонгированным препаратом иэониашда в эксперименте

X4.00.I5 - Патологическая анатомия

1в торе о ерах .шссертащш па со;;екание учено!} степени -шдидата гйдпгшсяах наук

отзоскбпрск - 19ЭЛ

Работа выполнена на базе ЦНИ1 Новосибирского ордена Трудового Красного &амени медицинского института.

Научные руководители:

Дэктор медицинских наук, профессор В.А.Шкурупий Кандидат медицинских наук, ст.н.с. Ю.Н.Курунов

Официальные оппоненты:

Дэктор медицинских наук, профессор Г.И.Непомнящих Кандидат медицинских наук, ст.н.с. Г.М.Вакулин

Ведущая организация - НИИ патологии кровообращения

(630090, г.Новосибирск, Красны!! проспект, 52). С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Новосибирского медицинского института.

МЗ РФ

Защита диссертации

часов на заседании Специализированного Совета НИИ

Автореферат разослан

Ученый секретарь Специализированного Совета кандидат медицинских наук, доцент

А.Н.Маш ак

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность пробдемн. Туберкулез и сегодня является социальной и медицинской проблемой. В стране настегивается свыве 600 тысяч больных туберкулезом (Урсов И.Г., 1991). Вое это указывает на то, что проблема профилактика й лечения туберкулеза но является до конца решенной.

Одним из факторов, препятствующих эффективному лечению генерализованных форм туберкулеза современными противотуберкулэв-ными препаратами представляется внутриклеточная персиотенция возбудителя, что приводит к формированию в тканях и органах специфических образований - гранулем. Особенности кровоснабжения последних создает трудности доставки бактериостатиков непосредственно к очагу поратанпя. Поэтику в клинической практика вннугдэпя применять большие дозы противотуберкулезЕыг препаратов, в частности изониазида, что часто сопровождается значительными токсическими поражениями печени (Блинова Т.В., 1985; Соколова Г.Б., 1986; Б.шогер А., 1989; Казаков К.С. и др., 1991).

Поэтому, разработка эффективных я менее токсичных препаратов, а также схем их применения являвтся актуальной проблемой. Так, з частности, кед пршер одного из возмогших подходов - применение иптермиттирушего режима введения противотуберкулезных препаратов (Урсов И.Г., 1987).

Основными направлениями. в реяенип этой проблемы могло би явиться создание пролонгпроЕаянкс форм баятсряостатвяов, сбеспэ-ченяе условий для проникновения препаратов в гранулему я снягг-ние при этот, разовой дота.

Известны попытки создания пролонгированных препаратов, но они не были реализованы, видимо, в связи с неудачны:,! выборе,! матрицы (Рабинович И.Г,!., 1965).

Нелательно, чтобы матрица пролонгпрованнсго препарата обладала рядом свойств: активно захватывалась макрофагами, лззоссм-тропностко, абсолютной бяоградабельяоотьв, не была токопчноЗ, обеспечивала сохранение антибактериальной активности гтогэ прэ-парата в крови я в составе эндоцитозпых вакуолей, кремз того, способна была инициировать слияние фагоссмы, содзрга^эй мтт'обак-терига туберкулеза, с лизосомой.

Поскольку в гранулеме идет постоянная с:: с "л зрелых макрофагов на молодые и продвижение их г. центру гранулемы, то полно предположить, что такой препарат мог бы доставляться в грану-

лему этими клетками.

Цель работа. Изучить морфологические аспекты терапевтической эффективности и возмогших механизмов действия пролонгированного противотуберкулезного препарата изониазида на основе декстрановой матрицы яа модели генерализованного хронического туберкулезного процесса с персистенцией возбудителя.

Задачи исследования.

1. Создать адекватную задачам исследования модель генерализованного хронического туберкулезного процесса с персистенцией возбудителя.

2. Создать комплексный пролонгированный противотуберкулезный препарат на основе изониазида и декстрана.

3. Изучить патоморфологические изменения, происходящие в гранулемах в динамике хронического генерализованного туберкулезного воспаления.

4. Провести сравнительный анализ морфологических изменений

в печени и терапевтической эффективности при лечении одним изониа-зидом и комплексным пролонгированным препаратом изониазида при различных схемах их применения у животных с хроническим генерализованным "туберкулезным процессом.

Научная новизна работы. Впервые создан пролонгированный препарат изониазида на декстрановой матрице с молекулярной массой 30000-4000С ДальтонГи. исследована его терапевтическая активность • в разных режимах пршгнения.

Впервые с применением методов светооптической и электронной трансмиссионной микроскопии, морфометрии исследован количественный состав и структурная организация мононуклеарных фагоцитов гранулег.ш в динамике генерализованного хронического туберкулезного процесса. Впервые установлена стимуляция декстраном (реополи-глисином) процессов диффоренцировки клеток макрофагального ряда в составе туберкулезной гранулемы.

Впервые на основании патоморфологических, питологических данных сформулированы возможные механизмы влияния декстрана в составе комплексного противотуберкулезного препарата изониазида на увеличение микробицидной активности макрофагов и снижение его токсичности для паренхиматозных клеток.

Практическое значение работы. Полученные результаты по исследованию структурных изменений, происходящих в туберкулезной гранулеме могут быть использованы для преподавания по курсу общей патологической анатомии в разделе "Специфическое воспаление".

Результаты исследования влияния пролонгирующей матрицы в составе комплексного препарата изониазида на персистирующую внут-риклеточно форму микобактерий могут быть испояьзовйнн, как основа при разработке пролонгированных препаратов о клеточной адресацией для лечения других заболеваний, сопровождающихся образованием гранулем и снижения курсовой дозы препарата (антибиотика, бэкте-риостатика).

Полученный комплексный препарат изониазида на декстрановой матрице является более активным противотуберкулезным препаратом, чем изониазид и при предложенной схеме лечения туберкулезного хронического процесса с персистенцией возбудителя, обладает значительно меньшей токсичностью.

Основные положения, вносимые на защиту.

1. Комплексный препарат изониазида на декстрановой матрице является пролонгированным противотуберкулезным препаратом.

2. Пролонгированный комплексный противотуберкулезный препарат изониазида обладает более выраженным, по сравнению с чистым изо-ниазидом, терапевтическим эффектом.

3. Пролонгированный комплексный препарат изониазида оказывает значительно менее выраженное повреждающее воздействие на клетки паренхимы печени по сравнению с чистым изониазидом з связи с различными механизмами их биотрансформации в гепатоцитах.

4. Комплексный препарат изониазида на основе декстрановой матрицу стимулирует пластические и репаративянз процессы в макрофагах и гепатоцитах.

Апробадля работы. Основные положения диссертации изложены и обсуждены на XI Всесоюзной съезде (Фтизиатров в Москве, 1991; на Всесоюзной конференции в Москве "Актуальные проблемы химиотерапии бактериальных инфекций", 1991; на 52-й научной сессий молодых ученых, 1991 в Новосибирске; на конференции молодых ученых в Улан-Удэ, сентябрь, 1991; на Всесоюзном симпозиуме с международным участием "Патогенез хронического воспаления", сентябрь, 1991; в Гиринском медицинском институте (КНР), 1991 на меякафедральном семинаре; в Монгольском медицинском университете (Улан-Батор), 1992 на юбилейной конференции ММУ; на Национальном конгрессе по болезням органов дыхания в Санкт-Петербурге, 1992.

Работа выполнена в рамках теш "Изучение неспеци<?ических и специфических проявлений острых и хронических нарушений обменных процессов в системе кровь-ткань и разработка эффективных методов их профилактики и коррекции". Гос. per. № 0IS5.00BI056.

Публикация. По материален диссертация опубликовано 7 работ. Имеется положительное решение на изобретение.

Структура и обьеы диссертации. Диссертация состоят из введения, 3 глав, заключения и выводов, списка литература. Работа изложена на 199 страницах вавашопнсного текста, иллюстрирована 48 рисунками. Список литературы содераш? 572 источников отечественное и иностранное лцтературы.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Материалы и методы исследования. Работа выполнена на 150 двухмесячных мылах-самках линии ВАХЬ/с с кассой тела 18-20 г.

Объектом исследования была печень, край левой латеральной доли для целей световой и электронной микроскопии и верхние отделы правого легкого только для световой микроскопии.

В работе использовали изониазпд, комплексный препарат изониазида, представляющий его пролонгированную <?орму и реополвглгаин.

Для получения пролонгированного комплексного препарата изо-виазнда использовали коммерческий плазмо замещающий препарат "Рео-нолиглисин" - декстран о молекулярной масоой 30000-40000 Дальтон в коммерческий препарат иэониазида для внутривенных иМузий. Из-этих препаратов получали коншгат с содергааием 30 молей иэониазида на I моль декстрана (2Ъ% по весу).

Комплексный препарат изониазида получали перйодатным окисле-ииеы декстрана до-диаб^згддакстрана (Хомяков К.П. г др., 1965) рзагируюззго с гидраз^ой группой изониазида с образованием изо-НЕКогвЕошйчщразова ¿фальдеигиддехстрана.

1роничэоке2 генерализованный нуберкулазный прсцзсс моделировала па гзаазс яутем пятраперитонеального введения вакцины НШ в дозе I кг на одно адвотнез. Чзр-эз кесяц всех животных разделили на 7 групп по 20 особей б «ездой.

В 1-й груше яивотных не подвергали никаким."., воздействиям.

2-й группе оледаешо вводили изониаззд (И) шзтраперитовеально, в дозе 14 мг на I кг массы тала, 3-я группа получила пвониазпд так-ео в той же во8э, во в интермиттвруБщем реншге 2 раза в иедолв, через 3 дня. 4-й группе мшей интераперитовеально вводили комплексный препарат ивонвааада (КПИ) ежедневно, причем, содержание изониазида в

нем было равно разовой дозе, вводимой в предыдущих группах. 5-я группа мышей тем ае способом получала аналогичный препарат в интер-миттирующем режиме, как было изложено выше. 6-й группе ежедневно вводили коммерческий препарат реополюглюкин е доев 0,01 мл на I г

пассы тела животного, а 7-я группа получала тот же препарат, тем же способом, но г интермиттиругоиек режиме. Лечение животных во всех группах продолжали в течение трех месяцев. Образцы печени получали для исследования через I, 2, 3 месяца от начала лечения.

Для морфологического исследования в каждой группе использовали по 5 мкяеи. Ehfothhx умерщвляли под эфирным наркозо?! путем дислокации позеонкое в пенном отделе.

Для светоопткческоп микроскопии образ1щ органов Фиксировали в 10? растворе нейтрального Формалина, обезвоживали е серии спир-тое возрастающей концентрации и заключали в парафин (Волкога О.В., Елецкии С.К., I9R2). На санном микротоме готовили срезы теплиной 5-G мкм, окрашивали гематоксилином !*а?ера, эозиког: к заключали в канадский бальза:.

Горгометопческое исследование пе-еш" проводили в ооответстЕИИ с рекомендациями ряда авторов (Вейбель Е.Р.,..1970; Христолюбова Н.Б., Автандилов Г.Г., I9R0).

Относительный объем дистрофически и некробиотически изменных • гепатоцитов определяли на гистологических срезах при увеличении сгетового микроскопа в 105 раз. Использовали закрытую тестовую систему из 25 точек.

Исследовали численную плотность и диаметр гранулем в тканях печени и легких; относительное количество разных типов клеток в гранулемах печени, которое Егоажали в процентах. Количество всех клеток в гравулеие принимали за IOCf. Учктнвал! монопитн, переход-нге гогмн мег.ду моноцитами и эпктелиовдчи.-и клетками, эпителиоид-нре клетки, клетки гГ-пбробластического генеза, лемРопил? и плазматические клетки.

Для исследования в трансмиссионном электронном микроскопе пре-паратигнуг-о подготовку образцов печени проводили по общепринятой методике (Укккли Б., 1975). Гз образцов печени от каждого животного изготавливали по 5 блоков. Ка катдого блока на улътоатоме LKB RPOO получали срезы, их коатгастгровали годними растворами уоаяилацетата и нитрата сричпа ( Reunolds ... S. , IPS2).

Ультгатонкие срезк исследовал' в электронном микроскопе. Для г'опТомгтгг^есного исследггания клеток грануле?- печени образцр ¡*©?о-гге^ггогтп при увеличении 2РСО. С ультратонких ere ров от киготнкх кгждoi: г-'-'пп) готоггаспровали по ГО эпптелнокднмх клеток типа А.

ГопГ огетриг эпктелгоидних клеток типа А проводили по негаткв-нп: згоОггеялям ультратонкнх ene пор этих клеток, спроецированных

на многоцелевую тестовую ско тему при конечном увеличении 56000.

Выбор тестовых систем проводили в соответствии о рекомендациями ( в. w«lb«i , 1979). Вероятность достоверности различий сравниваемых средних величин проводили по критерии Спвдента. Достоверными считали различия при значениях Р— 0,05.

Результаты и их обсуждения. Пооле введения животным вакцины БЦЕ в печени и легких наблюдали типичные для данного инйекта гранулемы, что указывало на генерализовааность туберкулеэного процесса (Струков А.И., Соловьева И.П., 1986; Ерохин В.В., 1987; Струков А.И., Кауфман О.Я., 1989; >йашя О, , 1983).

Спустя месяц после заражения наблюдали гепатопиты с явлениями вакуолярной, гидропической и балонной дистрофии, реже в состоянии некробиоза. Площадь, занимаемая этими клетками существенно нарастала к концу 3-его месяца после заражения (рис. I). Гранулемы в течение трех месяцев не изменялись в размерах и количестве (табл. I).

Наряду с этим, по данным электронной микроскопии, отмечали неоднородный состав эпителиоидных клеток. Одни из них (тип А) количественно преобладали, характеризовались высокой насыщенностью цитоплазмы органоидами, другие - тип В имели меньшее количество органоидов и типичные образования, подобные секреторным гранулам (Ерохин В.В., 1987; Струков А.И., Кауфман О.Я., 1989)', В течение трех месяцев количество клеток типа А значительно нарастало, а содержание клеток В уценивалось (табл. 2).

Ъ цитоплазме глнтелиоидных клеток типа А наблюдали первичные и вторичные лизоаомы. К третьему месяцу их количество увеличивалось (рис. 2)'.

Число свободных рибосом возрастало почти в 3 раза и почти во столько же увеличивалось количество прикрепленных рибосом (рис. 3). Значительно возрастала суммарная "поверхностная площадь мембран« питоплазматических органоидов (рис. 4). Эти данные указывают на то, что в гранулемах во все периоды наблюдения активно пли процессы дифференцировки клеток макрофагального ряда.

При ежедневном введении иаоняазида в терапевтической дозе, сформировавшиеся при заражении вакциной ВДВ гранулемы претерпевали, некоторые изменения в отличии о нелеченннх животных, что можно связать с бактерицидным эйсйектом изониазида.

На это указывает снижение количества гранулем в печени более, чем п 2 раза за период лечения чистым иониазидом (табл. I). В течение трех месяцев лечения отмечали ускорение процессов дифференцировки макрофагальннх клеток, о чем свидетельствует сокращение количества

Рис. I. Результаты морфсметрического исследования суммарной плопеди дистрофически изменных гепатоцитов

1-1 месяц после заражения животных вакциной НЕ. П - 2 месяца после заражения нивотных еэкпиной ЩН. И - 3 месяпа после заражения животных вакциной НИ.

1 - группа, нелеченннх яввотных;

2 - группа мшей, леченных изояиазидом ежедневно;

3 - группа япвотннх, леченных изониазидом в интермиттирутяем

региме;

4 - группа мшей, леченная комплексным препаратом изониазида,

ежедневно;

5 - группа нивотных, леченная комплексным препаратом изоняа-

зида з интер!яттирукцем регдмз;

6 - группа мыпей, получавшая реополяглккин, ежедневно;

7 - группа мнзей, получаваая реополнглюкин з иятермиттпруклем ; режиме.

На всех последующих аналогичных рисунках услогнне обозначения те яе.

Таблица I

Результата стереометрического исследования размеров и количества гранулем в печени мышей (?.!+ т )

Условия эксперимента

Периоды после заражения еэкпиног НЩ е гесяпах

Коли- t Диаметр'Коли- ' Диаметр!Коли- !Диаметр честЕО ! !чество ! 'чество!

Нелеченные животные +4,52 "0,26 +8,28 ±0,35 +4,31 ±0,26 4P., 27 "0,09 +4,1 ±о;г +8,24 ±0,47

Изониазид ежедневно +4,25 "0,15 +5,68 "0,20 +2,41 "0,19 +5,52 "0,06 +2,0 "0,18 +5,40 "0,34

Изониазид, интермитти-ругощий режим +2,51 "0,19 +6ДЗ "0,25 +2,50 "0,19 +6,02 "0,27 +1.5 "0,02 +4,33 "0,59

Комплексный препарат ежедневно +1,5 "0,12 +4,10 "0,31 +1Д "0,68 +3,88 "0,40 +1,0 "0,12 +3,82 '"0,41

Комплексдый препарат; интермитти-рующий режим + 1,42 "0,14 +3,66 "0,24 +0,9 "0,12 +3,59 "0,19 +0,8 "0,11 +3,01 "0,47

Декегран ежедневно +4,56 0,26 +7,75 0,15 +4,3 0,26 +7,27 0,21 +4,0 0,25 +7,25 0,21

Декстран интермиттирую-щий режим +4,40 "0,26 +7,34 "0,29 +4,2 0,26 +7,22 "0,21 +3,? "0,24 +7,21 "0,21

Примечание: Диаметр гранулем дан в мкм, количество -расчитано на 10000 мкм^ среза печени

Таблица 2

Данине соотнопения в % эпктелюиднгх клеток типа А и В

Периода после зага "ения гакигно"- ЕШ

р ! ■есятах

Условия

эксперимента I 2 ! i 3

А ! В А ! 3 ! А ! В

Нелеченные зиготные 62 38 78 22 ?С 10

Пзониазгд ежедневно 83 17 91 9 с р, 5

Кзониазпд, ките р:тг!ттгру!огиг ре>:;п: 87 13 92 8 ГГ 5

Ког'плекснр;" препарат егедне?но 92 8 93 7 97 3

Ки шлексни? препарат интергиттируошг гежим 95 5 98 2 97 3

Прггечание: число клеток лрно р г обпего колгчестга

опгтелгоглнгх клеток обеих типов принятых 1ССГ

Л, Б - тчпн эпптел'опдш'х клеток

Рас. 2. Даяянэ стереометрического исследования объемной плотности лвзооод в зпителкоидннх клетках типа & б- объемная плотность первичных лизосом; О- объемная плотность вторичных лнзосом;

рибосом в эпителяоидных клетках типа А С- свободные рибосомы; Й- прикрепленные рибосомы; О- суммарное количество рибосом обоих типов.

5,

(/

ff

*.' И

у и

S!

/ г / ♦ s 1 t t * в t t t * r

Рис. 4, Данша ствресиетрачоского исследования

суммарной величина поверхностной плотности: наружной шмбраш митохондрий, гранулярного эндоплашатичесхого ретикулума и комплекса Голузга в влитвЯЕСЯйзв клетках типа А

а- нарукнве мвыбравн митохондрий; О- мембранн гранулярного эадоплагиатэтеского ретикулуиа;

мембрана комплекса Гольдяи.

Результата количественного исследования клеточного состава гранулем в печени (Ц+ л ) мшей-самок линии здхь/о

Таблица 5

Условия эксперимента

Периода после заражения ЕакциноР НШ в месяцах

Элите-лноид-нке

клетки

Пакро-Шоно- ¡Фибро-!Эпите-ПЛакоо-!Моно- !Фибро-!Эпите-Шакро-!Моно- |Фибро' (Таги !цмтн |блас- (лиопд-!фаги ¡циты !блас- ! лиоид-! íaru |цитн ¡блас-

]ты

!ние ¡ 'клетки!

• нне

клетки

• ТН

,2В,47 +29,29 Д2.74 Д2,22 30,50 ¡25,31 25,49 Д3.49 ,32,44 24,29 23,41 13,74 ± 1,53 ~ 1,0 ± 0,35 ± 0,35 i 1,52 ± 1,01 ± 1,05 ± 0,37 ± 1,56 ± 1,49 ± 1,64 ± 0,37

,44,56 16,46 ^ 6,77 17,84 53,42 Д5,15 ^ 5,58 ТВ,80 54,20 Д3,70 J 3,21 24,98 ± 2,42 ± 0,83 ± 0,26 ± 0,42 ± 3,42 ± 0,39 ± 0,24 ± 0,43 ± 3|37 ± о|37 ± 0,18 ± 1,29

,48,12 ,14,16 4,99 .16,02 . 53,41 ДО,32 А 5,52 Д6,04 ^59,19 ^ 9,59 ^ 2,16 ¡25,75 ± 2,69 ± 0,71 ± 0,22 ± 0,40 ± 3,41 ± 0,32 ± 0,24 ± 0^40 ± 3,41 ± 0,31 ± o|l5 ± I¡59

+53,16 10,22 3,37 14,76 .60,12 7,75 2,40 19,92 ,.65,65 . 3,38 ^ 1,28 25,47 ± 3,Р4 ± 0,33 ± 0,18 ± 0,38 ± 4,17 ± 0,28 ± 0,15 ± 0,45 ± 4,81 ± 0¡IB ± o|lI ± I¡55

* о:°2о ± 8:8 ±"4:8 ± 8:8 ± 8:й т ±1$± 1-м ± 8$ ±1:8?

±4% ± é:i ±té:s? ±5?;i ± |g ± ш т ± ш ± ш т

+54.28 10,86 4,33 15,08 59,21 7,88 3,12 .17,25 (35,12 ^ 4,17 ^ 1,66 19,77 ± 3,77 ± 0,33 ± 0,22 ± 0,39 ± 3,37 ± 0,28 ± 0,18 ± 0,41 1 4^73 ± 0,20 ± 0,13 ± 0,44

Примечание: а) Количество клеток каждого типа дано в % от общего количества клеток в гранулеме . принятых за 100,4, включая лимсЬоиднпе и плазматические клетки. '

б; Макройаги' - переходный тип между моноцитами и эпителиоидной клеткой типа В.

Нелеченние животные

Изонпазид ежедневно

Изониазкд инте ротирующий режим

Комплексный

препарат,

ежедневно

Комплексный

препарат,

интешитти-

руюгшй режим

Декстраны ежедневно

Декстран интермитти-ругощий режим

промежуточных форм макрофагов и возрастание количества эпите/яовд-ннх клеток (табл. 3). Существенно нарастали количество клеток фибробластического генеза (табл. 3). По данным электронной микроскопии клеточный состав гранулем был представлен на 95$ клетками типа А (табл. 2). В этих клетках отмечалась тенденция увеличения количества первичных и вторичных лзвосом, что является показателем активации макрофагов и увеличения скорости дифференцировки апптеяиоидншс клеток (рис. 2). Значительно возрастало количество свободных рнбоссм. Количество прикрепленных рибосом к концу третьего месяца сокращалось (рис. 3). На протяжении всего периода лечения лявотшгг чястеи пзониазидом шло увеличение суммарной площади, занимаемой дистрофически и некробиотически измеиными гепато-цитеми (рис. I).

В группе заветных, которые получала инъекции изониазида в интермиттирующем pe-rase откочаяп ту se тенденцию в отношении изменений количества гранулем, *зто и в предыдущих группах. Вместе о тем, терапевтический эффект, судя по этому параметру, наступал раньше - количество гранулем уменьиалось уже в первый месяц-лечения (табл. I). Более выраженными в этой группе были процессы дифференцирован макрофагов, на что указывает увеличение количества эпителиоидных клеток на 42?, а количество переходных форм макрофагов - снижалось в 2,5 раза, моноцитов - в 10 раз (табл. 3).

Количество соединительнотканных элементов в гранулеме шало тенденцию к нарастанию (на 61$) по сравнению с первым !.эояцеы. Содержание этих клеток в гранулемах животных получавших изониа-зид в интермиттирующем режиме по сравнению с нелеченнкми глзема было в 2 раза большим (табл. 3).

При изучении клеток гранулем в электронном микроскопе отмоча» ли, что эпителиоидяые клетки преимущественно были представлены типе?.! А, к третьему месяцу их был<? 95^ (табл.2). В этих клетках в течение трех гасяцев отмечали увеличение объемной плотности первичных и вторичных лизосом в 2 раза (рис.2).Эти показатели значительно превосходят таковые по сравнению о нелеченной группой sa-. . вотных.

Суммарная поверхностная площадь мембран органоидов в эпителиоидных клетках типа А в группе зиготных, получении изопиазид в интермиттирующем режиме нарастала к третьему месяцу на А7%, а также значительно превосходила (па 69%) это показатель по сравнению с группой,не получашей лечение и с группой, леченной путем ежедневного введения изониазида (рис. 4).

При сравнении групп, леченных ежедневным применением изониа-зида и при интермиттирующем режиме его введения, в последней группе повреждение гепатоцитов было меньшим (рис. I).

При ежедневном использовании комплексного препарата изониази-да в клеточном составе гранулем отмечали выраженную тенденцию в плане сокращения размеров и количества гранулем (табл. I). При этом в клеточном составе последних наблюдались явления очевидного ускорения дифференцировки макрофагальных клеток, о чем свидетельствует сокращение количества моноцитов и переходных форм макрогба-гов и неуклонное возрастание эпителиоидных клеток (табл. 3).

На периферии гранулем к концу третьего месяца применения или активные процессы формирования соединительной ткани, увеличивалось количество фибробластов, о чем свидетельствуют данные, представленные в таблице 3.

Эпителиоидноклеточный состав гранулем к третьему месшу был представлен в основном эпителиоидннми клетками типа А (табл. 2). Б них резко возрастала объемная плотность вторичных лизосом, указанный показатель в отношении первичных лизосом также возрастал (рис. 2).

Количество свободных рибосом имело тенденцию к снижению и наряду с этим возрастало количество прикрепленных (рис. 3). Наблюдалась выраженная тенденция к увеличению суммарной поверхностной плотности мембран цитоплазматических органоидов (рис. 4).

Площадь, занимаемая дистрофически измеиными гепатоцитами, возрастала, но была наименьшей по сравнению со всеми предыдущими группами (рис. I).

Очевидно, декстрановая матрица, обладающая лизосомотропизмом придает новые качества комплекс ноту препарату изониазида, на что указывают приведенные выше параметры.

При использовании этого же комплексного препарата изониазида, но в интермиттирующем режиме на протяжении всего срока лечения животных наблюдали уменьшение количества и размеров гранулем. Эти показатели представлены в таблице I.

Наиболее выраженными в этой группе были процессы дифйеренци-ровки клеток макрофагального ряда: при отчетливом снижении количества моноцитов и макрофагов происходило резкое возрастание количества эпителиоидных клеток (табл. 3).

Количество клеток фибробластического гене за в этой группе животных было максимальным по сравнению со всеми предыдущими группами

и оставалось таковым на всех этапах наблюдения (табл. 3).

тт - \

По данным электронном микроскопии в гранулемах присутствовали в основном эпителиоиднне клетки типа А (табл. 2). В них происходило значительное возрастание первичных и вторичных лизосом (рис. 2).

Количество свободных рибосом было наименьшим, в то ьремя как, число прикрепленных рибосом возрастало и было наибольшим по сравнению с другими сериями животных (рис. 3).

Суммарная поверхностная плотность мембран цитоплазматическгос органоидов у мышей, леченных комплексным препаратом изониазида' в интермиттиругощем режиме была максимальной в сравнении с другими группами мышей (рис. 4).

Наряду с выраженным терапевтическим аспектом, использование комплексного препарата изониазида в интермиттирующем режиме имело преимущество в плане наименьшего токсического зсМЕекта в паренхиме печени. Так, площадь, занимаемая дистрофически измеиными гепато-цитами не увеличивалась на протяжении всего срока лечения животных и на последнем этапе наблюдения этот показатель не отличался от такового у нелеченных животных (рис. I).

Это связано, по-видимому, не только со снижением курсовой дозы изониазида в составе комплексного препарата изониазида, но и со способностью пролонгирующей матрицы стимулировать пластические и репаративные процессы в клетках (Шкурупий В.А., 1987). Кроме того, при введении изониазида на матрице в связи с ее лизосомотропностыо, • препарат попадает в клетку адсорбционным пиноцитозом (Покровский A.A., Тутельян В.А., 1978; Короленко Т.А., 1984) и в составе пино-сом сливается с лизосомами.В пинолизосоме идет медленный гидролиз-матрицы, и малые количества изониазида поступают в питозоль с постепенном образованием метаболитов, что снижает токсичность комплексного препарата изониазида.

У животных, получаЕпих реополиглюкин е ежедневном и интер/ит-тиругсем режиме, даянке монологического исследования гранулем были идентичны. В то же время, введение декстрана способствовало усилению диптеренцировки макрофагальных клеток в гранулемах (табл. 3). Кроме того, введение мкяам реополиглюкина способствовало увеличению количества клеток сгибробластического генеза (табл. 3).

' Суммарная площадь, занимаемая дистрофически измеиными гепато-цитами.не отличалась от таковой в группе нелеченных животных (рис.1). Эти данные показывают, что ноЕне позитивные свойства комплексного

препарата изояяазидп обусловлены присутствием в нем декстрана, обладающего способностью стимулировать дифйеренцировку макрофагов в составе гранулем, активизировать юс лизосоыальннй аппарат, тем самым способствовать увеличению количества клеток фибробластпчес-кого генеза, усиливать пластические процессы в клетках (Шкурупий В.А., 1987).

Практические рекомендации. Полученный комплексный препарат изояиазида на декстрановой матрице является перспективным противотуберкулезным препаратом для промышленного производства в лечения хронического туберкулезного процесса с перспстенлией возбудителя.

ВЫВОДЫ

1. При введении вакцины НЩ мышам в печени и легких Нормируются типичные для этого возбудителя гранулены, что свидетельствует о генерализации хронического туберкулезного воспаления с персистенцией возбудителя.

а) В гранулемах наиболее характерны,"!; изменениями в исследованные периоды (1-3 месяцы после заражения) являются: стабильность их количества и размеров с первого месяца пооле заражения и постоянное увеличение количества моноцитов, эпнтелиоидных клеток типа А с усилением пластических процессов, реализуемых аа субклеточном уровне. , f б) В паре яхте - доминирование процессов вакуолярной и гидропической диотрофаи, значительно реге явлений некробиоза, усиливапдихся по мере увеличения периода с момента ин-фпцпровандя.

2. Комплексный препарат пзониазида на декстрановой матрице обладает лизосомотродностью, выраженными признаками пролонгации, преимущественной адресацией к клеткам СМФ и поэтому перспективен для лечения генерализованного хронического туберкулезного процесса с персистенцией возбудителя.

3. Декстриновая матрица комплексного препарата изониазида способна стимулировать пластические процессы.

а) В макрофагах путем морЛзсЬункциональных преобразовании по типу "метаболического взрыва" с усилением синтеза лизосомаль-ных структур и, видит';о, микробг.цидной активности, - ускорения дифференцкровки моноцитов в зрелые макрофаги, что позволяет снизить курсовую дозу изониазида.'

б) В гепатоцитах путем усиления восстановительных процессов после повреждения токсинами микобактерий и метаболитами изониазида.

4. Применение комплексного препарата изониазида для лече-шя хронического процесса в эксперименте сопровождается увеличе-гаем количества клеток соединительной ткани на периферии грану-юм, как следствие активации макрофагов декстрановой матрицей

[ продуктами гидролиза микобактерий.

5. Интермиттирующий способ применения комплексного препара-■а изониазида по сравнению с ежедневным более предпочтителзн,; [а что указывают динамика морфологических изменений в граяуле-!ах, а также значительное снижение патомореологических прояв-1ений в паренхиме печени токсического действия метаболитов изо-шазида.

6. Снижение дистрофических и некробиотических изменений в [аренхиме печени при введении комплексного препарата изониазида ;о сравнению с чистым изониазидом, используемых в интермиттирую-1ем режиме обусловлено рядом факторов.

а) Уменьшением курсовой дозы изониазида.

б) Особенностями проникновения изониазида в гепатоциты (пиноцитоз в комплексе, вместо диффузии свободного).

в) Значительно меньшей концентрацией метаболитов изониазида в цитозоле гепатоцитов в связи с его более медленным поступлением из пинолизосом при высвобождении из комплекса в результате гидролиза декстрановой матрицы.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Изучение терапевтической активности конъюгированного декстраном изониазида //Актуальные проблемы химиотерапии бак-

ериальных инфекций. Всесоюзный научный центр по антибиотика!, ентральннй НИИ эпидемиологии, Всесоюзное научное обйество икробиологов, эпидемиологов, паразитологов гм.И.М.Мечникова: ез.докл.Всесоюзн.кощТ1., Москва, 1991. - 4.4. - С.733-735. оавторы Шкурупий В.А., Курунов Ю.Н., Краснов В.А.

2. Изменение структурного гоиеостаза печени при введеягл изосомотропных препаратов //Влияние антропогенных факторов па ортогенез и структурные преобразования в органах. Сб.паучпшс рудов. Астрахань. М., 1991. - С.176-177. Соавторы: Икурупяй В.А., аврилин В.Н., Курунов Ю.Н., Агеева Т.А.

3. Морфологические изменения в гранулемах печени при лечении экспериментального туберкулеза изониазидом, кояъюгиро-ваняым с декстраном_/У Новое в биологии и медшшне. Сб. тезисов 52-8 научной конференции. - Новосибирск, 1991. - С.209-210.

4. Морфологические изменения в печени мышей при лечении экспериментального туберкулеза декстран-ассоциированным изониазидом //Экологическая патология и ее коррекция. Сб. научных трудов. МЗ РФ, АМН РФ, Сиб. отделение. Чита, мединститут. -1991. - С.224-225. Соавторы Шкурупий В.А., Курунов D.H.

5. Морфофункциональные аспекты патогенеза туберкулезной гранулемы и патогенетического лечения хронического специфического воспаления в эксперименте //Патогенез хронического воспаления. 'Всесоюзный симпозиум. Тез. докл. - Новосибирск. -

С.54-57; Соавторы Шкурупий В.А., Курунов D.H.

6. Результаты изучения лечебного эффекта комплексного противотуберкулезного препарата на декстрановой матрице в эксперименте //Национальный конгресс по болезням органов дыхания. Тез. докл. - Санкт-Петербург. - 1-5 декабря 1992. --C.I032. Соавторы: Архипов С.А., Изурупий В.А., Курунов D.H., Видякин A.B.

7. Терапевтическая эффективность конъзэгата изониазид-дек-стран при химиотерапии туберкулеза в эксперименте //Национальный конгресс по болезням органов дыхания. Тез. докл. - Санкт-Петербург. - 1-5 декабря 1992. - С.958.

Подписано к печати 18 февраля 1993 г. :->ак. й 36. Объем 1,25 п.л. Тираж 100 экз. Тип. СО РАМН, г.Новосибирск, 1993 г.