Автореферат и диссертация по медицине (14.00.26) на тему:Обоснование использования флуренизида как противотуберкулезного препарата

РОССИЙСКАЯ АКАДЕМИЯ МЕДИЦИНСКИХ НАУК

ЦЕНТРАЛЬНЫЙ НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ИЦ-РГб О Л СТИТУТ ТУБЕРКУЛЕЗА

- На правах рукописи

ТЮТЮНЬКОВА Наталья Геннадьевна

ОБОСНОВАНИЕ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ ФЛУРЕНИЗИДА, КАК ПРОТИВОТУБЕРКУЛЕЗНОГО ПИГПАРАТА (ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНО-КЛШЙИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ)^

14.00.26 — Фтизиатрия

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Москва 1997

Работа выполнена в Ростовском государственном медицинском университете

Научный руководитель:

доктор медицинских наук, профессор Калмыкова Г.Н.

Научный консультант

доктор медицинских наук, профессор Макляков Ю.С.

Официальные оппоненты: чл.-корр. РАМН,

доктор медицинских наук, Литвинов Г.И.

доктор медицинских наук, Худзик Л.Б.

Ведущая организация: Санкт-Петербургский

Научно-исследователький институт фтизиатрии

Защита состоится «_»_199_г. в_часов на заседании диссертационного совета Д 074.29.01 в Центральном научно-исследовательском институте туберкулеза РАМН по адресу: 107564, Москва, Яузская аллея, д.2

С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке института.

Автореферат разослан «_»_1997г.

УЧЕНЫЙ СЕКРЕТАРЬ ДИССЕРТАЦИОННОГО СОВЕТА ПРОФЕССОР ФИРСОВА В.А.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Актуальность проблемы

В последнее время в России наблюдается смена тенденций эпидемического процесса при туберкулезе, выраженная в появлении среди населения значительного резервуара инфекции у лиц, с остаточными посттуберкулезными изменениями, обусловленными изменчивостью микобактерий туберкулеза , снижением резистентности в следствии заболеваний иммунодепрессивного характера, особенно в условиях наблюдающегося в последние годы экономического спада в стране (Хоменко А.Г., 1996).

Отмечается значительный рост заболеваемости всеми формами туберкулеза, так в 1990г. она составила 34,0 на 100000 населения, а в 1993г. увеличилась до 42,9 на 100000 и тенденция к росту заболеваемости сохраняется. В тоже время зарегистрирован и значительный рост летальности от туберкулеза, если в 1987г. Уровень летальности составлял 6,2%, то в 1993г. вырос в 2 раза и составил 13%.

Эффективность лечения больных представляется в виде показателей закрытия полостей распада и прекращения бактериовыделения через год после начала лечения противотуберкулезными препаратами. За период с 1987 года по 1993 год этот показатель снизился с 90,1% до 83,9%, что говорит о снижении эффективности лечения туберкулезной инфекции.

В условиях широкой распространенности туберкулеза его лечение является радикальной мерой воздействия направленной на прерывание развития эпидемического процесса в популяции людей. Отсюда

особый интерес представляет разработка и внедрение в практику новых средств для лечения туберкулеза.

Прямой предпосылкой для разработки новых средств для лечения туберкулеза является рост лекарственной устойчивости к противотуберкулезным препаратами и изониозидоустойчивых форм микобактерий даже у впервые выявленных больных (Голышевская В.И., 1989, Клименко М.Т., 1987, Приймак A.A., 1985, Рудой Н.М., 1996, Хоменко А.Г., 1996, Berliner Daniel 1987, Davidson Р.Т., 1987, Moisesu V., 1988).

А развитие устойчивости к микобактериям туберкулеза фактор лимитирующий эффективность лечения (Rossi Т., 1986).

Широко применяемый противотуберкулезный препарат изониазид — лечение без которого не считается полноценным обладает рядом отрицательных свойств. Вызывает поражения печени (Малюк В.И., 1987, Ко-лосовская В.П., 1982, Казаков КС., 1982, Пухлик Б.М., 1990, Dippenaar J., 1987, Dickinson J.M., 1987, Mitchell J.R., 1976), что также влияет на эффективность лечения. В тоже время изониазид оказывает влияние на реактивность организма, снижая показатели клеточного иммунитета, что требует введения в схему лечения туберкулеза ряда иммуностимулирующих (Авербах М.М., 1976, Александрова А.Е., 1988, Белякова О.И., 1988, Пузик В.И., 1970, Хоменко А.Г., 1995, Чернушенко Е.Ф. 1978, Barbolini G, 1985, Bardana E.J., 1985).

Поскольку перечисленные позиции, снижают эффективность лечения туберкулеза, нами проведено экспериментально-клиническое сравнение нового препарата флуренизидз с изониазидом, имеющим известную туберкулостатическую активность, что может служить обоснованием использования флуренизида в качестве нового препарата для лечения

туберкулеза. Флуренизид (Ы-(9-флуоренилиден)-№изоникотиногвдрозид) выпускается Львовским заводом химических реактивов и аналитических фильтров «Реактив» и полностью соответствует ТУ6-С9-2159-84 и проекту временной фармакопейной статьи.

Цель работы

Обосновать возможность использования флуренизида как противотуберкулезного препарата на основании экспериментально-клинических исследований.

Задачи исследования

1. Установить бактериостатическую активность флуренизида в отношении микобактерий туберкулеза человеческого типа и его специфическую активность в условиях моделирования хронического и острого туберкулезного процесса в сравнении с действием изониазида.

2. Экспериментально изучить острую и хроническую токсичность и некоторые параметры фармакокинетики флуренизида.

3. Экспериментально обосновать оптимальную терапевтическую дозу флуренизида в условиях моделирования острого и хронического туберкулезного процесса у животных.

4. Определить иммуномодулирующее действие флуренизида в сравнении с изониазидом.

5. Определить тенденцию влияния флуренизида на течение туберкулезного процесса у взрослых больных.

Научная новизна

Впервые установлено, что флуренизид обладает бактериоста-тической активностью в отношении микобактерий туберкулеза

штамма Нз7НУ, а так же ряда штаммов микобактерий устойчивых к этионамиду, канамицину, стрептомицину, изониазиду, рифампи-цину выделенных от больных. В условиях моделирования острого и хронического туберкулезного процесса флуренизид оказывает выраженное специфическое действие. Экспериментально установлено, ЛД50 флуренизида в 20 раз превышает ЛД50 изониазида, что дает возможность применения флуренизида в большом дозовом диапазоне. Флуренизид не обладает гепатотоксичностью и не вызывает необратимых изменений в организме животных.

Флуренизид оказывает иммуностимулирующее влияние на Т-систему иммунитета животных, что подтверждено данными морфологических и морфометрических исследований.

Введение флуренизида в комплексную терапию больных с впервые выявленным туберкулезом (инфильтративный и диссими-нированный) благоприятно сказалось на течении туберкулезного процесса — полное прекращение бактериовыделения, положительная рентгенотомографическая динамика.

Практическая значимость

Работа является фрагментом комплекса научно-исследовательских работ выполняемых в Ростовском государственном медицинском университете в рамках проблемы "Разработка методов и средств по профилактике и лечению хронических специфических и неспецифических заболеваний легких среди городского и сельского населения".

Полученные результаты изучения нового лекарственного средства, позволили представить их в фармакологический комитет при МЗ РФ как новый противотуберкулезный препарат "флуренизид".

Выполненные исследования показали преимущества флурени-зида перед широкоприменяемым препаратом для лечения туберкулеза изониазидом, флуренизид обладает более выраженной бакте-риостатической и специфической активностью, чем изониазид, параметры острой токсичности и фармакокинетики флуренизида предпочтительнее, чем параметры изониазида, флуренизид обладает меньшей, чем изониазид токсичностью. Установлены оптимальные дозы для лечения экспериментального туберкулезного процесса у животных флуренизидом, доказано иммуностимулирующее действие на Т-систему иммунитета. Включение флуренизида в комплексную терапию туберкулеза у взрослых больных благоприятно сказалось на течении туберкулезного процесса.

Вопросы выносимые на защиту

1. Флуренизид обладает выраженными бактериостатическими свойствами в отношении чувствительных и устойчивых мико-бактерий туберкулеза человеческого типа и высокой специфической активностью в условиях моделирования острого и хронического туберкулезного процесса.

2. Флуренизид обладает такими показателями острой токсичности и фармакокинетическими параметрами, которые свидетельствуют о более выгодном и удобном его применении в сравнении с изониазидом.

3. Флуренизид не оказывает токсического эффекта на организм животных при хронической затравке, что дает возможность его длительно применять.

4. Определены оптимальные терапевтические дозы флуренизида для лечения хронического туберкулезного процесса у разных

видов животных (для мышей доза — 20мг/кг, для морских свинок — 50мг/кг).

5. Флуренизвд обладает иммуностимулирующим действием на некоторые параметры Т-системы иммунитета животных.

6. Флуренизид при введении его в комплексную терапию туберкулеза у взрослых больных оказывает благоприятное влияние на течение туберкулезного процесса.

Апробация работы

Материалы диссертации доложены на симпозиуме "Экологически обусловленные заболевания" (1993г.), на конференции молодых ученых и специалистов РОДНМИ (1993г.), на I всемирном конгрессе украинских фармацевтических товариществ (1994г), на I научной сессии факультета усовершенствования врачей РГМУ (1995г.), на I научной сессии РГМУ (1996г.).

Публикации

По теме диссертации опубликовано 12 работ.

Объем и структура диссертации

Диссертация изложена на 157 страницах машинописного текста и состоит из ведения, обзора литературы (1 глава), используемых материалов и методов (1 глава), собственных исследований (4 главы), заключения, выводов, списка литературы (229 источников, в том числе 116 отечественных и 113 иностранных авторов). Работа иллюстрирована 38 диаграммами, 72 таблицами, 15 рисунками.

Морфологические исследования по данной работе выполнялись на кафедре патологической анатомии Ростовского государственного медицинского университета (руководитель — д.м.н., про-

фессор Дерижанова И.С.), биохимические исследования проводились на базе биохимической лаборатории кафедры гигиены питания и клинической диетологии Ростовского государственного медицинского Университета (руководитель — д.м.н., профессор Новодержкина Ю.Г.), фармакологические исследования проводились на базе кафедры фармакологии Ростовского государственного медицинского университета (руководитель — д.м.н., профессор Макляков Ю.С.), клиническое исследование проведено на базе Областного противотуберкулезного диспансера (глав врач Рыжков С.И.).

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Материалы и методы исследования

Разработка обоснования использования флуренизида как нового противотуберкулезного препарата проводилась в 7 этапов на основании приказа МЗ СССР №1509 от 30.12.83г. «О дальнейших мерах по совершенствованию порядка оформления разрешения и подачи для промышленного производства новых лекарственных средств».

Всего в работе было использовано: мышей беспородных — 540шт, мышей линии CBVA — 360шт, морских свинок — 180шт, крыс беспородных — 340шт. Исследования бактериостатической активности проведено на 3400 мазках.

Бактериостатическая активность определялась по обще принятой методике с использованием среды Школьниковой P.A. с добавкой 10% плазмы крупного рогатого скота. Результаты оценивались микроскопически с использованием микроскопа МБИ-15x90 с иммерсией. Оценка результатов проводилась по методике Ященко Т.Н. Использовались микобактерии штамма H37RV и микобакте-

рии штамма Нз/ИУ устойчивые к этионамиду, канамицину, стрептомицину, изониазиду, рифампицину выделенные от больных.

Специфическую активность флуренизида в сравнении с изо-ниазидом изучали в условиях моделирования острого и хронического туберкулезного процесса вызванного микобактериями туберкулеза штамма по методике Першина Г.Н. с использованием различных видов лабораторных животных.

Интенсивность специфических изменений в органах животных определяли по методике Яковлевой А.И. с подтверждением морфологическими исследованиями.

Исследование острой токсичности флуренизида проводилось с целью установления ЛД50, что в дальнейшем позволило рассчитать эффективные дозы для проведения длительной пероральной затравки лабораторных животных для выявления токсического влияния флуренизида на показатели функциональной активности жизненно важных органов и систем.

Определение фармакокинетических параметров флуренизида проводилось по методике Валленберга в сравнении с аналогичными показателями изониазида.

Для обработки полученных данных использовали двухкамерную фармакокинетическую модель с учетом поглощения первого порядка. Вычисления параметров модели проводили с помощью программы нелинейной регрессии.

Определение возможного иммуностимулирующего эффекта при введении малых доз флуренизида проводилось по методике Сипш§Ит (1965) и Еаа1Ьегд (1964) в индуктивную и продуктивную фазу иммуногенеза с выявлением дозозависимого эффекта.

Все полученные экспериментальные данные статистически обрабатывались на ЭВМ ВС-1055М с использованием пакета прикладных программ (ППП).

В основу клинического раздела работы положен анализ течения заболевания при введении в терапию туберкулеза флуренизида у 22 больных областного противотуберкулезного диспансера г.Ростова-на-Дону в период с 1993 по 1995гг. Оценка эффективности введения флуренизида в комплексную терапию оценивалась по клиническим (исчезновение симптомов заболевания) бактериологическим (прекращение бактериовыделения) и рентгенотомографиче-ским (инволюция туберкулезных изменений в легких) критериям, что позволило выявить тенденцию влияния введения флуренизида в комплексную химиотерапию туберкулеза.

РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ I. Экспериментальное исследование

Изучение бактериостатической активности флуренизида в диапазоне концентрации от 40.0 мкг/ мл до 0,078 мкг/мл в десяти разведениях на штамм микобактерий Нз/ИУ показало, что при концентрации флуренизида с 40,0 мкг/мл до 0,625 мкг/мл рост культуры не отмечался, при концентрации 0,312 мкг/мл появляются единичные микроколонии, хотя культура растущей не признается. Таким образом установлено, что МИК (минимальная ингибирующая концентрация) флуренизида для микобактерий человеческого типа (штамм НзуКУ) составляет 0,625 мкг/мл, что на порядок ниже МИК изониазида (0,03-0,1 мг/ мл).

В тоже время флуренизид показал и некоторую бактериоста-тическую активность в отношении устойчивых к эт ионам иду, ка-

намицину, стрептомицину, изониазиду, рифампицину штаммов ми-кобактерий человеческого вида выделенных от больных.

Диаграмма 1

БАКТЕРИОСТАТИЧЕСКАЯ АКТИВНОСТЬ ФЛУРЕНИЗИДА К УСТОЙЧИВЫМ ЛШКОБАКТЕРИЯМ ТУБЕРКУЛЕЗА.

Установленный бактериостатический эффект in vitro позволил перейти к определению специфической активности флуренизида in vivo в условиях моделирования острого и хронического туберкулезного процесса у белых беспородных мышей. Доза вводимого флуренизида была обусловлена терапевтической дозой изониазида 5мг/кг для данного вида животных, так как флуренизид структурный аналог изониазида.

Лечение туберкулезного процесса у мышей флуренизидом показало, что животные достоверно прибавили в весе (р<0,05) к концу эксперимента , в тоже время процент летальности в 2.5 раза ниже, чем у животных леченных изониазидом. Индекс пораженно-сти внутренних органов животных получавших терапию флуренизидом соответственно в 2 раза ниже, чем у животных получавших лечение изониазидом. Полученные данные документально подтверждаются результатами морфологических исследований.

Аналогичная динамика прослеживается и при лечении хронического туберкулезного процесса у мышей, что подтверждено результатами морфологических исследований.

Таблица 1.

Острый туберкулезный процесс Хронический туберкулезный процесс

Флурени зад 5мг/кг Изониа- ЗВД 5мг/кг Контроль Флурени зид 5мг/кг Изониа- зид 5мг/кг Контроль

Отклонение исходного веса животных от конечного веса +3,096* -0,679 -2,649* +4,601* -0,722 -3,075*

% летальности 10 25 100 15 45 100

Индекс лораженно-сти легких (М±т) 1,1&Д27 2,1ШО,28 3,90±0,12 0,7110,15 3,71 ±0,09 4,ООН),00

* — достоверное отклонение

Изучение острой токсичности флуренизида в широком диапазоне доз (от 5мг/кг до 6000мг/кг) показало, что только дозы выше 3200мг/кг вызывают изменения в поведении животных, влияют на окраску мочи. Меньшие дозы не вызывают заметных изменений в поведении животных. Используя гиперболическую модель для расчета ЛДбо установлено, что ЛД50 для флуренизида составляет 5800мг/кг, и этот показатель в 20 раз превышает значение ДЛ50 для изониазвда составляющий от 195 до 300мг/ кг, что свидетельствует о лучшей переносимости флуренизида и может положительно сказаться при его длительном применении. Изучение процессов проникновения флуренизида из крови в легкие, почки, печень, мозг позволяют оценить адаптационные характеристики организма и свести к минимуму возможное токсическое воздействие флуренизида.

Полученные результаты позволяют предположить, что фарма-кокинетика флуренизида существенно отличается от фармакокине-тики изониазида.

Таблица 2.

ФАРМАКОКИНЕТИЧЕСКИЕ ПАРАМЕТРЫ РАСПРЕДЕЛЕНИЯ ФЛУРЕНИЗИДА В ПЛАЗМЕ КРОВИ И ОРГАНАХ КРЫС.

Параметры органы Плазма Мозг Легкие Печень Почки

препа рать! ФЛ ИЗО ФЛ ИЗО ФЛ ИЗО ФЛ изо ФЛ ИЗО

А1 (икг/мл) 9.6 10.32 42.58 7.58 114.63 11.32 100.63 8.80 100.31 7.79

А2(мкг/мл) 8.91 3.35 13.94 1.77 34.73 2.00 56.99 4.08 38.10 2.73

Т 1/2КА (ч) 0.21 0.04 0.534 0.16 0.406 0.15 0.382 0.14 0.477 0.15

T J/2A4 (ч) 0.S9 0.68 1.947 0.50 1.505 0.65 1.266 0 1.212 0.41

T 1/2BT (ч) 12.52 4.73 11.730 7.64 13.864 7.73 15.576 7.01 14.351 7.23

АИСммхч/ш 165.37 41.30 334208 23.97 912.630 31.71 1395.17 46.53 889.209 32.25

T 1 /2 А4 — период полувыведения по L-фазе распределения

Т 1 /2 ВТ — терминальный период полувыведения по В-фазе элиминации

Т I/2KA — период всасывания

ФЛ — флуренизид

ИЗО — изониазид

Так, площади под кривой концентрации флуренизида в плазме крови (АИС) примерно в четыре раза выше, чем у изониазида, при введении препаратов в равных дозах. АИС флуренизида в легких больше подобной величины для изониазида в 28,8 раз, что можно расценивать как фактор ведущий к накоплению флуренизида в легких, что не может ни сказаться на эффективности лечения туберкулезного процесса в легких. В тоже время сравнение периода полувыведения флуренизида и изониазида из плазмы крови и ткани легких показало, что флуренизид в 2,6 раза дольше задерживается в плазме и в 1,8 раз в легких и свидетельствует о более выраженной способности флуренизида к коммуляции.

Длительная 8-ми месячная пероральная затравка животных флуренизидом в различных дозах (65мг/кг = 7,5%ЛДбо — эффективная доза, 125 мг/кг — 15% ЛД50; 325 мг/кг = 50% ЛД50) с

последующим 2-х месячным восстановительным периодом позволила установить, что изменений в общем состоянии животных не произошло. Прибавка в весе за весь период эксперимента входила в возрастную норму для данного вида животных. Установлено, что все изученные показатели функциональной активности печени (общий белок, общий холестерин, глюкоза в сыворотке крови, активность трансаминаз — АЛаТ и АСаТ) менялись в продолжении всего времени эксперимента, однако ни один из показателей функциональной активности печени не вышел за крайние границы физиологической нормы. В то же время по окончании 2-х месячного восстановительного периода все перечисленные показатели приблизились к первоначальным значениям.

Все выше изложенное позволяет считать, что флуренизид не обладает гепатотоксическими свойствами в отличие от изониазида.

Не установлено токсического влияния флуренизида на показатели функционального состояния выделительной системы ( мочевина в сыворотке крови, креатенин и мочевина в моче), влияния флуренизида на сократительную способность миокарда, что подтверждается результатами расшифровки ЭКГ животных.

Проанализировав уровень содержания форменных элементов периферической крови (эритроциты, лейкоциты, лимфоциты, моноциты, па-лочкоядерные лейкоциты, эозинофилы, сегментоядерные лейкоциты) и содержание гемоглобина установили, что введение флуренизида в различных дозах на протяжении 8-ми месяцев не вызвало изменения их содержания достоверно выходящих за рамки физиологической нормы. В то же время за 2 месяца восстановительного периода все перечисленные показатели вернулись к исходным значениям.

Необходимо отметить, что введение флуренизида на протяжении всего эксперимента повлияло на нервную деятельность животных, так достоверно уменьшились (р<0.05) показатели поведенческих реакций крыс («норковый рефлекс», «вертикальный компонент»), что позволяет говорить о некотором седативном действии флуренизида на животных. По окончании эксперимента все показатели вернулись к фоновым значениям во всех экспериментальных группах.

Установлено, что хроническая пероральная затравка флуре-низидом даже в дозах значительно превышающих терапевтические не вызывает необратимых изменений функциональных показателей белых крыс, а все возникшие изменения после 2-х месячного восстановительного периода возвращаются к исходным значениям.

Сделанный вывод нашел документальное подтверждение по результатам морфологического изучения внутренних органов экспериментальных животных.

Установлены оптимальные терапевтические дозы для различных видов лабораторных животных в условиях моделирования хронического туберкулезного процесса.

Основываясь на том, что доза флуренизида в 5мг/кг уже оказывает специфический эффект и исходя из установленных фармако-кинетических параметров флуренизида теоретически установили, что терапевтическая доза флуренизида для животных находится в пределах от 20мг/кг до 50мг/кг веса.

У белых беспородных мышей доза 20мг/ кг признана терапевтической, так как увеличение дозы до 50мг/кг не вызвало достоверных изменений (р>0.05) таких показателей как продолжительность жизни животных, процент летальности, средний индекс пораженности.

Аналогичная картина наблюдалась при сравнении морфологических изменений у животных, прошедших курс лечения дозами 20 мг/кг и 50 мг/кг.

Для морских свинок терапевтической дозой была признана доза равная 50 мг/кг, так как увеличение дозы вводимого препарата привело к достоверному (р<0,05) увеличению веса животных, снизило процент летальности и средний индекс пораженности внутренних органов, что нашло документальное подтверждение и в результатах морфологических исследований.

Для проверки гипотезы о возможном иммуномодулирующем эффекте флуренизида определены некоторые параметры функциональной активности Т- и В-лимфоцитов в индуктивную и продуктивную фазы иммуногенеза.

Так на основании определения числа антителообразующих клеток установлено, что введение мышам линии СВУА флуренизида ни в одну из фаз иммуногенеза не оказало влияния на антителообразующую способность В-лимфоцитов.

С помощью реакции розеткообразования, выявили, некоторую стимуляцию Т-лимфоцитов в обе фазы иммуногенеза, под воздействием малой и терапевтической доз (5 и 20 мг/кг) флуренизида.

Что нашло подтверждение в результатах морфологических и мор-фометрических реакций селезенки мышей линии СВУА, выразилось в нарастании числа мегакариоцигов и появлении значительного числа макрофагов в красной пульпе и свидетельствует об активации Т-клеточного звена иммунитета.

Диаграмма 2.

ВЛИЯНИЕ РАЗЛИЧНЫХ ДОЗ ФЛУРЕНИЗИДА НА АБСОЛЮТНОЕ КОЛИЧЕСТВО РОК В РАЗЛИЧНЫЕ ФАЗЫ ИММУНОГЕНЕЗА.

Полученные результаты позволили сравнить влияние терапевтических доз флуренизида и изониазида на некоторые показатели активности Т-звена иммунитета в индуктивную и продуктивную фазы иммуногенеза.

Так флуренизвд достоверно (р<0.05) увеличил количество циркулирующих лимфоцитов в крови мышей линии СВУА вызвал увеличение гиперпластических процессов в селезенке мышей, а также достоверно (р<0.05) увеличил число РОК в обе фазы иммуногенеза.

Диаграмма 3.

ПРОЦЕНТНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РОЗЕТКООБРАЗУЮЩИХ КЛЕТОК (РОК) ПРИ ВВЕДЕНИИ ФЛУРЕНИЗИДА И ИЗОНИАЗИДА В ТЕРАПЕВТИЧЕСКИХ ДОЗАХ.

Установленная высокая специфическая активность флурени-зида in vitro и in vivo в отношении микобактерий туберкулеза послужило основой для решения Фармакологического комитета о начале клинических испытаний флуренизида.

II. Клиническое исследование

В группу больных, получавших монотерапию флуренизидом входило 11 человек из них:

9 человек — с инфильтративным туберкулезом легких в стадии распада (из них 8 — БК+);

2 человека — с фиброзно-кавернозным туберкулезом легких (из них 1 — БК+).

Проводимая в течение одного месяца монотерапия флуренизидом привела к прекращению бактериовыделений у 37,5% больных. У 17% больных отмечена положительная Rg-динамика, выразившаяся в частичном рассасывании очагов инфильтративных изменений легочной ткани с сохранением полостей распада.

ТаблицаЗ.

МОНОТЕРАПИЯ ФЛУРЕНИЗИДОМ В ТЕЧЕНИИ 1 МЕСЯЦА.

Формы ту- Число Наруше БК+ КАВ Rg-динамика

беркулез- боль- шебодьг До Через До Через Отри- Без Часгич Значи-

ного про- ных нич. ре- начала 1 ме- начала 1 ме- цате- дина- Н2Я тель-

цесса жиш леч-я сяц леч-я сяц льная мики ная

Инфильтра тивный 9 1 8 5 8 8 2 1 5

ТБС легких

Фиброзно-кавернозный ТБС 2 1 1 1 1 1 - 1 - -

легких

Однако, учитывая, что монотерапия в настоящее время не проводится, в связи с ее малой эффективностью, то флуренизид был включен в комплекс препаратов для лечения туберкулезом.

На комбинированной химиотерапии находилось 11 больных с впервые выявленным туберкулезом: 8 человек с инфильтративным туберкулезом легких (из них 5 — БК+) и 3 человека с диссимини-рованным туберкулезом легких (из них 2 — БК+).

После трехмесячного лечения наступило прекращение бакте-риовыделения у 71,4% больных, что подтверждено бактериоскопи-чески и бактериологически. В то же время наступило улучшение самочувствия всех больных в схему лечения которых был введен флуренизид. {^-динамика отсутствовала лишь у одного больного.

Введение в схему лечения флуренизида показало, что после 3-х и 6-ти месячной химиотерапии изменения в функциональном состоянии печени выражены значительно меньше, чем у больных контрольной группы, получавших комплексную химиотерапию с использованием изониазида по обычной схеме.

По окончании 6-ти месячного лечения больных получавших комбинированную терапию с включением флуренизида общее самочувствие хорошее, все больные прибавили в весе, исчезли симптомы интоксикации, наступило прекращение бактериовыделения у всех бактериовыделителей, что подтверждено бактериологически и бакте-риоскопически. Из 7 больных с деструктивным туберкулезом легких через 6 месяцев полости распада закрылись у 4-х. У 3-х отмечено значительное рассасывание очагово-ифильтративных изменений.

Таблица 4.

КОМБИНИРОВАННАЯ ХИМИОТЕРАПИЯ ТУБЕРКУЛЕЗА С ВКЛЮЧЕНИЕМ В СХЕМУ ЛЕЧЕНИЯ ФЛУРЕНИЗИДА-

Группы больных Опытная Контрольная

Формы туберкулезного процесса Инфшшгра тивный туберкулез легких Диссимини рованный туберкулез лендах Инфильтра тивный туберкулез легких Диссимини рованньш туберкулез легких Фиброзш-каверисэ-ный туберкулез .таких

Число больных 8 3 17 3 2

В начале лечения 5 2 13 3 2

БК+ Через 3 месяца 1 1 2 0 1

Через 6 месяцев 0 0 0 0 0

В начале лечения 5 2 16 3 2

КАВ Через 3 месяца 5 2 12 3 2

Через 6 месяцев 3 0 3 2 2

Отрицательная 3 мес - - - - -

6 мес - - - - -

диа- Без динамики 3 мес 1 - - - 1

гнос- 6 мес 0 - - - 0

тика Частичное 3 мес 6 2 10 2 1

рассасывание 6 мес 5 1 6 2 2

Значительное 3 мес 1 0 7 1 -

рассасывание 6 мес 2 1 11 1 -

Полученные данные свидетельствуют о четко выраженной положительной тенденции влияния флуренизида на течение туберкулезного процесса у взрослых больных.

ВЫВОДЫ

1. Минимальная ингибирующая концентрация флуренизида на микобактерии туберкулеза человеческого типа (штамм Н37ЯУ) составляет 0.625мкг/мл, что на порядок ниже минимальной инги-бирующей концентрации изониазида составляющей от 0.03 до 0.1 мг/мл. Флуренизид оказывает бактериостатический эффект

в отношении штаммов микобактерий туберкулеза устойчивых к этионамиду, канамицину, стрептомицину, изониази-ду и штаммов выделенных от больных.

2. Флуренизид вызывает выраженное специфическое действие в условиях моделирования острого и хронического туберкулезного процесса при использовании препарата в равных с изониазидом дозах, что выразилось в достоверном увеличении веса, удлинении сроков жизни, уменьшении среднего индекса пораженности внутренних органов животных.

3. ЛД50 флуренизида составляет 5805мг/кг веса животного, что в 20 раз превышает ДД50 изониазида, и дает возможность применять флуренизид в большом дозовом диапазоне. Площади под кривыми концентраций содержания флуренизида в плазме крови в 4 раза больше, в легких почти в 28 раз больше, чем у изониазида, что свидетельствует о большой способности флуренизида к коммуляции.

4. Хроническая пероральная затравка животных флуренизидом в течении 8 месяцев с последующим 2-х месячным восстановительным периодом не вызвала глубоких изменений функциональных показателей печени, выделительной системы, биохимических показателей крови, сердечно-сосудистой системы, показателей периферической крови, а все возникшие изменения после 2-х месячного восстановительного периода возвращались к исходным значениям.

5. Оптимальной дозой для лечения хронического туберкулезного процесса у белых беспородных мышей является доза флуренизида равная 20мг/кг, у морских свинок доза 50мг/ кг.

6. Оптимальный стимулирующий эффект на некоторые показатели Т-системы иммунитета животных оказывает введение флуренизида в дозах близких к терапевтическим. Стимулирующий эффект на Т-систему иммунитета, подтвержден данными морфологических, морфометрических исследований, что проявляется в увеличении площади лимфоидных фолликулов селезенки, появлением в ткани селезенки мономорф-ных гиперхромных клеток типа Т-лимфобластов, нарастает число мегакариоцитов и макрофагов. В ткани печени появление двуядерных клеток и увеличение числа митотически делящихся клеток свидетельствует о повышении функциональной активности клеток печени при введении флуренизида.

7. Введение в комплексную терапию туберкулеза легких у взрослых больных флуренизида дает благоприятную тенденцию течения туберкулезного процесса, которая проявляется: ускорением прекращения бактериовыделения, по сравнению с контрольной группой больных получавших обычное лечение, отмечена положительная рентгенотомографическая динамика при дозе флуренизида от 0,3 до 0,6г в сутки.

СПИСОК РАБОТ ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Изучение химиотерапевтической активности флурени-зида в эксперименте (Калмыкова Г.Н., Каркищенко H.H., Хо-ронько В.В)) — / / Сборник научных трудов, РОДНМИ «Экологически обусловленные заболевания». — Ростов-на-Дону, 1993г. — С.53

2. Изучение хронической токсичности флуренизада в эксперименте (Калмыкова Г.Н., Черниговец Л.Ф., Чернышева С.П.) — //Сборник научных трудов, РОДНМИ «Экологически обусловленные заболевания». — Ростов-на-Дону, 1993г. — С.55

3. Воздействие нового противотуберкулезного средства — флу-ренизида на функциональное состояние Т- и В-лимфоцитов (Калмыкова Г.Н., Чернышева С.П.) — / /Сборник научных трудов, РОДНМИ МЗ РФ «Актуальные вопросы внутренней патологии». — Ростов-на-Дону, 1993г. — С.83

4. Сравнительное изучение токсического действия флу-ренизида и изониазида при туберкулезе (Калмыкова Г.Н., Чернышева С.П.) — / /Сборник научных трудов, РОДНМИ МЗ РФ «Актуальные вопросы внутренней патологии». — Ростов-на-Дону, 1993г. — С.84

5. Изучение морфологических изменений в иммунокомпе-тентных органах мышей на флуренизид. — / /47-я научная итоговая конференция молодых ученых и специалистов РОДНМИ. — Ростов-на-Дону, 1993г. — С.47

6. Изучение бактериостатического действия флуренизида. — / /47-я научная итоговая конференция молодых ученых и специалистов РОДНМИ. — Ростов-на-Дону, 1993г. — С.47

7. Установление терапевтической дозы нового противотуберкулезного средства — флуренизида в эксперименте. — / /47-я научная итоговая конференция молодых ученых и специалистов РОДНМИ. — Ростов-на-Дону, 1993г. — С.47

8. Изучение терапевтического эффекта нового противотуберкулезного препарата флуренизида при лечении генерализованного процесса туберкулеза в эксперименте. — //47-я научная итоговая конференция молодых ученых и специалистов РОДНМИ. — Ростов-на-Дону, 1993г. — С.48

9. Результаты изучения токсичности нового противотуберкулезного средства «флуренизида» (Калмыкова Г.Н.) — / /Тезисы 1 конгресса всемирной федерации украинских фармацевтических товариществ. — Украина, Львов, 1994г. — С.451-453

10. Изучение влияния флуренизида на морфологическую и биохимическую картину крови и ее сыворотки в условиях хронического эксперимента (Калмыкова Г.Н., Чернышева С.П.) — //Научный сборник 1 научной сессии ФУВ МЗ России РГМУ, «Актуальные вопросы клинической, экспериментальной и профилактической медицины». — Ростов-на-Дону, 1995г. — С.43

11. Изучение влияния флуренизида на функциональное состояние печени крыс при его длительном применении (Калмыкова Г.Н., Чернышева С.П., Лукина М.Ю.). — //Научный сборник 1 научной сессии ФУВ МЗ России РГМУ, «Актуальные вопросы

клинической, экспериментальной и профилактической медицины». — Ростов-на-Дону, 1995г. — С.40

12. Результаты сравнительного изучения терапевтической активности изониазида и флуренизида в разных дозах у морских свинок (Калмыкова Г.Н.). — //1 научная сессия РГМУ. — Ростов-на-Дону, 1996г. — С.62