Автореферат и диссертация по медицине (14.00.26) на тему:Лечение туберкулеза пролонгированным изониазидом в эксперименте

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН КАЗАХСКИЙ НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ИНСТИТУТ ТУБЕРКУЛЕЗА

РГ5 ОД

1 3 МАЙ 1936

На правах рукописи

БЕКМУХАМЕДОВА НАЯЛЯ ФАРИДОВНА

ЛЕЧЕНИЕ ТУБЕРКУЛЕЗА ПРОЛОНГИРОВАННЫМ ИЗОНИАЗИДОМ В ЭКСПЕРИМЕНТЕ

14.00.26 — фтизиатрия

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Алматы - 1996 г.

Диссертация выполнена в Казахском НИИ Туберкулеза Минздрава Республики Казахстан

Научные консультанты: доктор медицинских наук,профессор

А.Д.Дкунусбеков кандидат медицинских наук,старший научный сотрудник К. А.Туркебаева

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук,профессор А.Н.Наубетиярова

кандидат медицинских наук.старший

научный сотрудник

Е.П.Мухин

' Ведущее учреждение- Кыргызский НИИ туберкулеза

Защита состоится "_"_1996г._часов на заседании

■специализированного совета (Д.09. . .) по защите диссертаций на соискание ученой степени кандидата медицинских наук при Казахском научно-исследовательском институте туберкулеза Минздрава Республики Казахстан (480100 г.Алматы,ул.Городская,5). С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке КазНИИ Туберкулеза. Автореферат разослан "_"_1996г.

Ученый секретарь специализированного совета кандидат медицинских наук

Д.У.Урааакова

Актуальность исследования

Туберкулеа остается распространенным инфекционным заболеванием в мире. В апреле 1993 г. ВОЗ объявила о глобальном возобновлении туберкулеза. Отчет ВОЗ начинается со слов, что положение с туберкулезом грозит перейти в эпидемию прежде всего потому, что туберкулеа пользуется низким приоритетом в здравохране-нии во всем мире. В ближайшем десятилетии следует ожидать 30 миллионов смертей ежегодно (Отчет ВОЗ,1994). Из республик бившего СССР наиболее неблагоприятная эпидемиологическая обстановка по туберкулезу сохраняется на территории Казахстана, где показатели заболеваемости, болезненности и смертности в 1,8-2,3 раза превышают средние данные по СНГ и в связи с падением социального и экономического положения в стране имеют тенденцию к увеличению (К. М. Маскеев 1991 ).

В свяаи с резким сокращением флюроосмотров населения, что отмечается повсеместно, туберкулез выявляется в основном по обращаемости, при этом растет удельный вес его прогрессирующих и осложненных форм, требующих интенсивного лечения . В то же время в свяаи с ухудшением медикометозного и материально- технического снабжения лечебных учреждений, эффективность лечения неуклонно падает , о чем свидетельствуют отчетные данные по клиникам института туберкулеза и сведения,поступающие из областей Казахстана. В этих кризисных условиях среди задач противотуберкулезной службы на приоритетное место выступает совершенствование лечебных мероприятий.

Важнейшим принципом остается хороший контроль в химиотерапии (отчет ВОЗ за апрель 1994), особенно на амбулаторном этапе

- г -

лечения,на который падает до 60% всего времени (В.Ф.Шеба-нов1965).Опыт покааывает.что при пероральном приеме химиопрепа-ратов больные,как правило,нарушают режим лечения,отчего его эффективность снижается или даже сводится на нет. Дробность и нерегулярность применения препаратов не дает возможности создания стабильной концентрации химиопрепаратов в организме,приводит к развитию резистентности к ним микобактерий туберкулеза.

Выход из данной ситуации видится в создании туберкулотати-ческих препаратов пролонгированного действия. Основным лечебным средством против туберкулеза остается изониазид, применяемый пе-роралыга,внутримышечно,внутривенно или эндолимфатически. При пероральном его применении отмечено неблагоприятное влияние на же-лудочно кишечный тракт, а при приеме О.бг изониазида уже через 2 часа уровень содержания его в крови составляет всего 3.52+-0.42мкг/мл (С.С.Каневская,1970). При внутримышечном применении пик концентрации достигает 6.4+-0.78мкг/мл. Через 8 часов при любом способе применения изониазида концентрация его в крови ниже бактериостатической и составляет всего 0.04мкг/мл (Р.Н.Ви-ленская,Е.Ф.Тарасова,В.Я. Сагалович И.П.Соловьева и др).Повышение же суточной дозы приводит к ускоренной инактивации.причем не только путем ацетнлирования,но также гидролиза и окисления (Н.Ю.Янкуненне.А.А.Немова,1970). Токсико-аллергические реакции развиваются у 10-40Z больных и требуют отмены препарата (А.Е.Ра-бухин, Г.А.Смирнов, Г.Б.Соколов, 1977; Р.У.Островская,1977 и ДР).

Для создания равномерной бактериостатической концентрации изониазида в крови , тканях и устранения некоторых негативных качеств коммерческого изониазида,для пролонгации его действия

стали применять полимеры-носители активного вещества,создающие в организме его депо с равномерным освобождением лекарства в процессе разрушения препарата.Эти работы начали проводится с конца 60 годов и более интенсивно в последнее время.Ряд авторов: (Е.С. Коробков,1976; Ф.Н.Белькинд и соавт.1986;И.Л.Гринюк и Г.А.Калиничев 1986;F. Onor.G.Capan,S.Ras,1939),используя в виде матриц производные целлюлозы предложили и испытали в эксперименте пролонгированные препараты изониазчда в виде таблеток. Другие же (С.М.Княжецкий,1971;Ш,Наджимутдинов и соавт.1973;Р.А.Алда-шев.А.З.Сеитов.З.С.Нуркеева, Е.Е.Ергашин, В.А. Шкурупин, Т.Г.Чернова, Ю.Н.Курумов 1993, К.А.Туркебаева и соавт.) предложили водорастворимые препараты изониазида пролонгированного действия для парэнтералыюго введения. В качестве носителя изониазида исследователи использовали в основном синтетические полимеры. Но как указывают А.М.Килькин и соавт. препараты на синтетической основе слабо биодеградируют,обладают коммулятивными свойствами,что снижает их позитивные качества. Некоторые полимеры токсичны и обладают антигенностью.

В производстве медицинских препаратов различного назначения нашли применение биополимеры,которые лишены недостатков,присущих синтетическим полимерам.В частности,пектиновые вещества,которые представляют собой природные полимеры из класса полисахаридов , получаемые из дешевого растительного сырья,оказались пригодными для создания некоторых лекарственных препаратов.Соединения пектина с антибиотиками обладают пролонгированным эффектом (M.Makeev.Yousof,1975;В.Philip,W.Bock 1979,Nakano Sinhai.Dzunui Batoku 1983;Г.Б. Аймухамедова и соавт.1984) предложили способы изготовления таблеток и капсул,способных дозированно поставлять

лекарства в организм.Во фтизиатрии прошел испытания в эксперименте новый препарат рифапектрин с недельной дозой введения (I.Dhillon,I.M.Dickinson,D.A.Mitchison,1992). Следует отметить, что пектин и сам обладает рядом целебных качеств.При отсутствии токсичности и антигенности он является неплохим сорбен-том-дезинтоксикантом (A.Malavicov; R.Kohn,19f79; C.Katchanov 1981), может подавлять рост некоторых микроорганизмов (Yukotzu-ka,Matrudo 1984),способен снижать уровень холестерина в крови (Zazneckam,1982).

Другим весьма привлекательным биополимером является белок коллаген, основными достоинствами которого является отсутствие токсических и концерогенных свойств, прочность и устойчивость к тканевым ферментам, способность образовывать комплексы с различными веществами (F.Schmitt 1964). При соединении с новокаином, метилурацилом,гентамицином,окситетрациклином создаются препараты пролонгированного действия (Л.П.Истратов,Е.А. Курбасова 1984,F.Cincl,А.Ciacciod, 1984).

Вместе с тем мы не встретили сообщений о применении биополимеров при изготовлении препаратов из изониазида-основного ту-беркулостатического вещества.Поэтому проблема конъюгации препаратов изониазида на биополимерах остается открытой, а исследования в этом направлении целесообразными.

Цель исследования

Создание препаратов изониазида пролонгированного действия на биполимерах (пектин,коллаген) и определение эффективности лечения в эксперименте.

Задачи исследования

1.Отработать новую методику количественного определения изониазида, выводимого из организма с мочой и на ее основе изучить уровень содержания в моче коммерческого изониазида при различных способах его применения с цель» выбора оптимального метода лечения.

2.Изготовить препараты изониазида пролонгированного действия на биополимерах (пектин,пектовая кислота,коллаген) и изучить их физикохимические свойства.

3.Исследовать фармакокинетику и биологические свойства новых полимерных препаратов изониазида.

4.Определить эффективность лечения экспериментального туберкулеза биополимерными препаратами пролонгированного действия.

Научная новизна

1.Впервые произведена иммобилизация коммерческого изониазида на полимеры- носители полисахаридной и белковой природы (пектин, коллаген).

2.Определено, что полимерные препараты неангигенны, нетоксичны, биосовместимы и биодеградируют в течении 5 дней.

3.Установлена высокая эффективность пролонгированного иаониа-зида в лечении экспериментального туберкулеза за счет создания лекарственного депо в месте введения и постепенного высвобождения изониазида с обеспечением бактериостатической концентрации препарата в крови в течении 3 суток.

Практическая значимость

Препараты изониазида на полимерах полисахаридной и белковой природы не обладают антигенными свойствами,нетоксичны.биосовместимы и являются медикаментами пролонгированного действия.

Этим препаратам свойственна высокая терапевтическая активность в лечении экспериментального туберкулеза.

Парентеральное введение новых препаратов обеспечивает бак-териостатическую концентрацию изониазида в крови в течении суток, что дает основание для рекомендации их применения в клинике о целью проведения контролируемой химиотерапии с точной дозировкой.

Основные положения .выносимые на защиту

1.Препарат изониааида,созданный на основе пектина пригоден для парентерального применения,обладает бактериостатической активностью в течении 3 суток,менее токсичен,чем коммерческий изониазид, не обладает антигенными,канцерогенными свойствами и био-деградирует в течении 5 суток.

2.Изониазид,пролонгированный на основе коллагена может применятся для внутримышечного или подкожного использования и создает в организме депо лекарства в бактериостатической дозе на протяжении 3 суток,не токсичен,не антигенен,обладает большим сродством к организму, чем изониазид на пектиновой основе.

3.Перечисленные препараты изониазида,пролонгированного действия менее токсичны и более эффективны чем коммерческий изониазид.

Апробация работы Материал!! диссертации доложены на IV съезде фтизиатров Казахстана (Алматы 1992 ).

Внедрение в практику Результаты исследований методики внедрены в практику клинической лаборатории КазНИИ Туберкулеза и клинической лаборатории Алматинского облтубдиспансера.

Публикации

Основные положения работы опубликованы в 5 научных статьях, получены удостоверения на два рационализаторских предложения -"Суммарное определение концентрации изониазида в крови N449 от 01.10.91г;"Определение динамики выхода изониазида и его метаболитов о мочой Сольных туберкулезом", Ы 464 от 10.05.93.

Объем и структура диссертации Диссертшртонное исследование состоит из введения,обзора литературы, 4 глав собственных исследований,заключения,выводов, указателя литературы,включающего 85 отечественных и 50 иностранных источников.

Работа изложена на 90 листах машинописного текста,иллюстрирована 29 таблицами и 25 рисунками.

Материалы и методы исследования Известно,что парентеральное введение изониазида является более эффективным методом лечения,чем его пероральный прием.Среди методов парентерального применения лекарства в последние годы

получил признание способ зндолимфатического введения. Поэтому с целью уточнения лечебного эффекта различных способов терапии мы провели исследование скорости выведения из организма иаониааида с мочой у 40 больных,причем суммарное определение концентрации иаониааида в биологических жидкостях проводили по разработанной нами биохимической методике.

К 0.5 мл пробы добавляли 4 мл хлорамина, 0.1 мл трихлорук-сусной 20% кислоты, 0.5 мл 1% роданида аммония, все перемешивали стеклянной палочкой,затем оставляли при комнатной температуре на 15 минут,после чего доводили И! среды до 6.0-6.5 при помощи 10% НаОН,прибавляли 2 мл фосфатного буфера и 0.5 мл 2% спиртового раствора димедона. Учет реакции осуществляли через 35-40 минут. Измерение содержания изониааида в пробах осуществляли по степени их окрашиваемости на фотометре при длине волны 530-540 нм против холостой пробы. Расчеты производили по колибровочному графику.

Исследования покааали.что при любых способах введения лекарства основная масса изониазида выводится в первые 8 часов, но при эндолимфатическом достигается более равномерное его выведение чем при пероральном или других способах приема. (Га 5а /)

Для создания изониазида пролонгированного действия с целью парентерального применения в качестве биополимеров нами использованы:

-Пектин цитрусовый с молекулярной массой 20-100 тыс.

-Пектовая кислота с молекулярной массой 30 тыс.

-Коллаген с молекулярной массой 20 тыс.

Взаимодействие пектина или пектовой кислоты с изониазидом проводили в воде при перемешивании реагентов в весовом отношении полимер-изониазид 2:1 при комнатной температуре в течении 24 ча-

Концентрация изониаэида в моче больных туберкулезом в процентах от дози введенного препарата

Горлица/)

Г ----- — способ введен — -I доаа часы исследования -1

чер Зч чер 6ч 1 |чер 9ч 1 |чер 12ч всего12 чер 15 чер 18 чер21 1 |чер24 ■ |аа 12 1 |вс 24

энтерально 0.6 32.2 41.2 1 10.3 1 | .11.3 1 ■ 96 1.2 0.3 0.1 | 0.1 1 1-7 | 97.7

энтерально 0.3 32.2 40 I 5.6 1 | 3.2 81 0.4 0.2 0.3 I 0.3 I 1.3 | 82.3

внутримышечно 0.6 34.5 42.2 1 9.1 1 ...... | 9.4 1 95.2 1.5 0_2 0.1 | 0.1 1 1-9 | 97.1

внутримышечно 0.3 33.6 29' 1 22.6 1 | 12.3 1 97.5 0.7 0.6 0.3 | 0.1 | 1.7* I 99.2

эндолимфатичес 0.6 39.2 34.2 1 6.3 1 I 5.6 1 85.8 4 2.9 2.3 | 1.8 1 11 I 96.8

эндолимфатичес • 0.3 22.8 . 35.9 I 17.1 > 11 | 10.6 1 I 63.6 I 3.9 3.1 2.7 | 0.9 I | 10.6 I | 74.2 1 . _ J

уа

I

сов. Наличие в структуре пектиновых веществ карбоксильных групп позволило осуществить взаимодействие с гидразидной группой изо-ниазида.Химическая связь полимеров и иаониааида-ковалентная и ионная,при доминировании последней.

Исследование скорости отщепления иаониааида иа лекарственного препарата проводили в забуференном физиологическом растворе при РН 7,3 - 7,4. Содержание свободного изониааида в пробах определяли биохимическим методом с применением димедона.

Установлено,что в первые сутки из пролонгированного препарата на основе пектина выделяется 60-652 свободного изониааида,а на основе коллагена 44Х; во вторые сутки -20-25X и 492 и в третьи сутки -10-152 н 62 соответственно,что отражено на графике.

Рис.1. Динамика высвобождения изониааида иа полимерного препарата на основе пектина и коллагена.

Бактериостатическое действие пролонгированных препаратов и свободного С Таблица 2). изониазида на музейные штаммы микобактеркй туберкулеза.

Наименование препарата

Свободный изониааид

Пектин* изониааид

Пектовая кислота+ изониааид

Колич.колоний,ИГиггами НЗТет.бала

I Колкч.колоний,КГ штамм Воу1гиБ8,балл

концентрация изониазида миг/мл

О 10.003 10.008 10.012 I 0.25 | 0.5

15+-0 |4.Б+- 3.7+- |2.7+- 1 0 0 1

|0.12 1 1 0.25 |0.25 | -

15-1—0 14.8+- 3.1+-. 12.0+- 12.7+- 0 1

|0.17 1 1 0.5 |0.1 10.5

15+-0 |4.54+- 4.1+- 13.3+- 1 0 0 I

|0:12 1 1 1 1 0.11 )0.22

О |0.С03 | 0.006 | 0.12 | 0.25 | 0.5

5+-0

5+-0

5+-0

4.9+0.11

4.8+0.17

4.7+0.17

4.1+0.25

2.3+ 0.7

4.8+0.17

3+0.25

2.3+0.33

3+0.33

I О

I

2.3+- | О 0.17 |

I 1

1 О

Мы изучили антигенные свойства пектина, лектовой кислоты, коллагена и полимерных препаратов иэониазида на их основе; были иммунизировании 36 кроликов,которым проводили три цикла иммунизации. Цикл иммунизации состоял из трех- внутривенной, внутримышечной и подкожной инъекций указанных материалов в доае 1 мг.Ре-иммунизацию проводили кровью,полученной из ушной вены кроликов на 11-12 день после каждого цикла иммунизации. Исследование антигенных свойств определяли реакцией иммунодиффузии по Оухтерло-ни.

Активная и пассивная анафилаксия к данным препаратам изучена на 60 морских свинках. На антигенность были испытаны кЗк носители- пектин, пектовая кислота и коллаген, так и полимерные препараты изониазида на их основе. Одной группе животных вводили носитель.другой полимерный препарат в терапевтической дозе. Через 21 день морским свинкам вводили те же препараты в разрешающей дозе.

Следующей подкожно вводили сыворотку, сенсибилизированных указанными препаратами морских свинок, а через сутки-разрешающую дозу лекарств. Явлений с признаками активной и пассивной анафилаксии у животных не обнаружено.

Исследованы бактериостатические действия на микобактерии туберкулеза пролонгированного иэониазида на основе пектина,пек-товой кислоты и коммерческого изониазида и определяли минимальную подавляющую концентрации лекарств . Препараты добавляли в среду Левенштейна-Йенсена в концентрации от 2мкг/мл до 0.003 мкг/мл. Затем делали посев суспензии микобактерий туберкулеза штамма НЗ^'КЧ и Воу1пцб-8 высокой плотности ю - кл/мл. Результаты исследования показали,что минимальная подавляющая концентрации

иэониазида в полимерных препаратах соответствует 0.025-0.05 мкг/мл в пределах ошибки опыта,и тождественна коммерческому изо-ниазиду (табл.2).

Биологические свойства пектина,пектовой кислоты,коллагена и полимерных препаратов на их основе изучали по биодестукции в мышцах экспериментальных животных.Опыт проведен на 30 морских свинках, которым однократно внутримышечно вводили испытуемое вещество.Животных выводили из опыта о помощью эфира на 2,3,4,5 и 6 сутки после инъекции. Вырезали мягкие ткани на месте введения препаратов,фиксировали в 10 растворе нейтрального формалина. Гистологические срезы окрашивали гематоксилином и эоаином.по Ван Гизону и изучали в соответствующие сроки.Введенный полимер окрашивался в срезах эозином в виде аморфного материала и частииц различных размеров. Через двое суток на месте инъекции препарата определяли отек .рыхлую инфильтрации) сегментоядерными и эоаино-филььными лейкоцитами,окружающими окрашенный полимер.На 3 сутки вокруг полимера и полимерного препарата отмечена умеренная макрофаг аль ная инфильтрация,иногда с гигантскими клетками типа инородных тел,а на 4 сутки в инфильтрате доминировали макрофаги,содержание полимерного материала и лейкоцитов значительно уменьшено. Полное рассасывание пектина и полимерного изониазида на его основе происходило в течении 5 суток.Иаониазид на основе коллагена вызывает отек и слабо выраженную микрофагальную реакцию в мышцах на месте введения полимерного препарата.По сравнению с изониазидом на основе пектина,тканевая реакция била менее выражена. Это можно объяснить большим сродством коллагена к белкам организма чем полисахарида.В этом преимущество полимерного препарата на осиопе Лолка.

Острую токсичность полимерных препаратов определяли на 300 белых мышах обоего пола,весом 20-25 грамм.Разные дозы испытуемых препаратов вводили внутримышечно для установления летальной дозы (50Х гибель животных) и максимально переносимой дозы. Срок наблюдения за животными составляет 10 суток от начала опыта. Полученные результаты обрабатывали по методу Литчфильда и Внлкинсо-на.

(табл.3). Острая токсичность препаратов:ЛП1 (носитель пектин), ЛП2 (носитель коллаген) и изокназида.

i-т-1-1—--1-1-1-1-1-1

|жкв |кол (изшшазид | ЛП1 |ЛДБ0|МПД | ЛГ12 |ЛД50|МПД i

| | 1-1-1-1-1ЛП1: |ЛП1:1-i-|ЛП2:|ЛП2:|

i 1 | ЛД50 |МПД 1ЛД50 |ИПД |ЛД50]МПД |ДД50|МПД |ДЦ50)МЛД I

III | | | |изон|изон| | |изон|изои|

I-1-1-ь——н-1-1-1-1-1-1-1-j

|бел.| 300 | 200 | 100 | 300 | 180 11.5 11.8 |320 |200 11.6 | 2 |

|мыши| | | | | 11(1111 i_1 ■ i »_■ > ' ■ ' ■ ■ '

Установлено,что полимерный изониазиид на основе пектина менее токсичен,чем коммерческий изониазид по показателю ЛД50 в 1.6 раза, а по показателю МПД в 1.8 раза,а на основе коллагена менее токсичен,чем коммерческий изониааид,по показателю ЛД50 в 1.6 раза,а по показателю КПД в 2 раза.

Хроническую токсичность препаратов определяли на 300 белых мышах.Препараты вводили животным внутримышечно в течение 1.5 ме-

Результаты лечения экспериментального туберкулеза полимерным ившназлдом на основе пектина н коллагена.

Г 1 "— " .... .............. ■ — 1 | группы колич.животных т- |дл.лечения мес. 1 1 — ■ - . - индекс пораженностн туберкулеа(

|1.Контрольная (не леченная) 10 1 1 Животные погибли через 6-8 |

1 1 недель.индекс 20-22 |

12.Опытная, леченная каллаге- 10 1 1

| ном 120мг/кг,1раа в 3 дня I 1 6 I

|3.Опытная,леченная полимерным 20 1 г 5 1

| иаониааидомна основе коллагена 1 з 2 |

| 30 иг/кг,1 раз в 3 дня 1 4 0 1

1 5 I - 0 1

|4.Опытная,леченная пектином 10 1 1

| 60 мг/кг,1 раз в 3 дня 1 1 6 1

|5.Опытная,леченная полимерным 20 1 2 4-5 |

| изониазидом на основе пектина 1 з 4 I

| 30 мг/кг,1 раз в 3 дня 1 4 2 I

1 5 1 0 1

|6.Опытная,леченная изониазидом 20 1 I 1 7-8 |

| 10мг/кг ежедневно 1 2 5 I

1 з 2-3 |

1 4 2 I

1 . ---------- — 1 5 1 0 1 . . _ 1

сяцев в дозах 1, 0.5, 0.2 от МПД,1 раз в 3 дня. Комммерческий кзониааид инъекцировали в 1, 0.5, 0.2 от КПД ежедневно,мыши не погибли. Проведенные исследования показали,что острая и хроническая токсичность полимерного изониааида на основе пектина и коллагена была ниже коммерческого,что демонстрирует возможность применения в качестве лекарственного средства.

Эффективность лечения туберкулеза полимерными препаратами изониазида была изучена в условиях эксперимента на 180 морских свинках,которых предварительно заражали микобактериями туберкулеза H37RV путем подкожного введения культуры в паховую область в дозе 0.01 мг.Лечение животных осуществляли через 2 недели после заражения.Длительность терапии 5 месяцев.Для оценки клинической эффективности лечения экспериментальных животных ежемесячно у них определяли в крови общий белок,показатели функции печени, циркулирующие имунные комплексы и среднемолекулярные пептиды. Убой животных проводили через 1,2,3,4 и 5 месяцев от начала лечения. При вскрытии определяли индекс пораженности туберкулезом внутренних органов по схеме УНИИТ. Гистологические срезы окрашивали гемотоксиилином и эозином по Ван Пизону. (табл.£).

Апробация полимерного препарата на основе пектина произведена на 60 морских свинках.Животные поделены на 4 группы. Первая группа контрольная,лечение животных не проводили. Вторая группа-животным вводили носитель пектин-60 мг/кг. Третья группа-животных лечили полимерным изониазидом на основе пектина в дозе 30 мг/кг,который вводили внутримышечно. Четвертая группа-животных лечили коммерческим изониазидом 10 мг/кг. Убой животных о оценкой индекса пораженности органов туберкулезом и исследованием кропи на биохимические показатели проводили ежемесячно.

Гибель полеченных животных произошла через 6-8 недель о максимальным индексом пораженноети органов туберкулезом -20-22. Животные "леченные" чистым пектином (второй контроль) 1 раз в 3 дня,погибли через 6-8 недель,но индекс пораженноети органов туберкулезом был несколько ниже -16-18. В третьей-основной группе, лечение полимерным изониазидом на основе пектина через 1 месяц терапии индекс пораженноети туберкулезом -6, а в биохимических анализах крови отмечаается снижение альбуминовой и повышение глобулиповой фракции. После 2 месяцев лечения в биохимии крови отмечается сниженный показатель альбуминов 47.5+-3.3 и повышенный глобулиновый 7.2+-0.64,индекс пораженноети 4. Через 4 месяца лечения отмечается нормализация биохимии крови- альбумины 51.9+-Б5.8 и снижение глобулинов 3.9+-0.2,индекс пораженностн-2. После 5 месяцев лечения специфических изменений не обнаружено.

При гистологическом исследовании в легких, печени и селезенке определялись туберкуллезные очаги продуктивного строения, в легких с некроаом, число которых убывало в зависимости от срока лечения. К концу опыта специфических изменений в органах не найдено.

Четвертая группа-животным ежедневно вводили внутримышечно в дозе 10 мг/кг коммерческий изониазид. Через месяц лечения индекс пораженности органов туберкулезом -7-8, через 2 -5, после 3 и 4 месяцев терапии в органах зарегистрированы единичные гранулемы, а после 5 месяцев лечения признаков специфического воспаления не найдено.

Научение полимерного препарата на основе коллагена проведено на 00 морских спинках. Животные были поделены также на 4 группы. В первой контрольной (не леченной) у пг.ох животных сформирова-

люсь регионарные лимфоадениты и свищи, они погибли через 6-8 недель от генерализованного туберкулеза при индексе пораженноети внутренних органов -20-22, причем в воспалении доминнировал эко-судативно-некротический компонент.

Животным второй группы вводили коллаген (носитель) внутримышечно 60 иг/кг одни раз в три дня. Гибель животных наступила через 6-8 недель с индексом пораженноети - 20-22. Третья группа, опытная,лечение проводили полимерным изониазидом на основе коллагена, который вводили внутримышечно в дозе 30 мг/кг,1 раз в три дня. Через месяц лечения индекс пораженноети органов туберкулезом -6, очажки в органах мелкие, с некрозом и без него. Через 2 месяца лечения индекс пораженности органов -5. Отмечено рассасывание гранулем и новообразований коллагена. В биохимии крови отмечается незначительный подёем альбуминов до 49.4 и снижение глобулиновых фракций до 7.3. КЗ месяцу лечения индекс пораженности туберкулезом органов снизился до 2. Череа 4 месяца лечения индекс поражения туберкулезом -0. В биохимии крови животных белковые фракции в пределах нормы. После 5 месяцев лечения при гистологическом исследовании внутренних органов специфического воспаления не обнаружено.

Таким образом созданные полимерные препараты изониазида на основе полисахарида и белка были более эффективны по сравнению с коммерческим изониазидом. Гистологическое излечение животных наступило на месяц раньше и устанавливалось путем рассасывания гранулем. Терапевтическая активность препарата продляется до 3 суток при однократном введении. Наиболее эффективным окапался изониазид на основе коллагена.

ВЫВОДЫ

1. Разработанная нами методика определения уровня содержания изониазида в моче с помощью димедона более точна, чем общеизвестные методики, отличается дешевизной и простотой, может бить рекомендована к применении на практике для контроля дозы и способа введения изониазида в клинике.

2. Полиимерный препарат на основе пектина при внутримышечном введетш не обладает антигенными свойствами,биосовместим,в 1.5 раза менее токсичен,чем коммерческий изониазид,легко рассасывается в тканях с высвобождением действующего начала.

Носитель пектин не антигенен,биосовместим,обладает некоторыми бактериостатическими свойствами.

3. Препарат изониазида пролонгированного действия на основе коллагена биосовместим,не обладает антигенными свойствами,легко рассасывается,токсичность его в 1.6 раза ниже,чем у коммерческого изониазида.

4. Длительность пролонгации полимерных препаратов изониазида на основе как пектина,так и коллагена при однократном внутриммышечном введении составляет трое суток с сохранением в течение этого времени Сактериостатической концентрации.

5. Лечение животных,зараженных туберкулезом,полимерными препаратами более эффективно,чем при лечении коммерческим изониази-дом, что достигается постоянной бактериостатической концентрацией лекарства и отсутствием побочных токсико-аллергических реакций.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

Полученные в эксперименте результаты по изучению биологических свойств и лечебной эффективности препаратов изониазида пролонгированного действия на основе биополимеров могут служить основанием для проведения клинических испытаний с последующим внедрением в практику.

СПИСОК РАБОТ,опубликованных по теме диссертации:

1.Лечение экспериментального туберкулеза полимерным изониазидом. //IV-съезд фтизиатров Казахстана: Тез.докл.-Алма-Ата, 1992-с. 158- 160. Соавт.Лак.А.В.

2.Лечение экспериментального туберкулеза полимерным изониа-зидом на основе пектина. //Здравоохранение Казахстана- 1992-N9-C.45-47. Соавт.Зельман О.Я . 3.Новый полимерный препарат изониазида в лечении экспериментального туберкулеза. //XI -съезд фтизиатров -Санкт-Питербург, 1992 -с.59 -Н176.

4.Фармакокинетика изониазида у больных туберкулезом. //IV -съ-еад фтизиатров Казахстана. Тез.докл. -Алма-Ата, 1992 -ст.140-141. соавт. К.А.Туркебаева и др.

5.Полимеры во фтизиатрии // КазНИИ Туберкулеза -Алматы, 1995, о.10-Деп.гос.ИНТИ 31.05.95 N6174-Ka95 //Депонир.науч.работы:. Реф.cö.-Алматы, 1995-Н2. о.101, Соавт.:Пак A.B.

РАЦИОНАЛЮАТОРСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1.Суммарное определение концентрации иаониааида в крови. Рационализаторское предложение 11449, 1991.

2.Определение динамики пшгода гооютазнда и его метаболитов с мочой больных туберкулезом. Рационализаторское предложение Н4Г>4, 1993.

Беккухадодова Найля Ф&ридовна

Гылыми тажгрибеде пролонгацияланган изониазидлен туберкуле® ауруын емдеу

Фтизиатрия - 14.00.2 М А 3 М У Н Ы

270 тещэ шошкалардын ( 3 цояндардын, 600 тышцандардын, 40 науцастардын нэтижелер1не байланысты гылыми такгрибе дэлел-денген. Коллаген жене пектинньщ биополимерлергн неггз туту арцылы пролонгацияланган ивониаридты дайындау эдгс мэл1меттер! керсет1лген. Зэрде изониазидтын мелшер децгей1н димедон кемегг-мен аныцтау дД1схн жэне оныц оцайлыгы арраншыльщ айырмашылы-гьшда аныдталган. Гылыми тэжгрибеде изониазидтын полимерлы препараты зертелген г сонымен б1рге биологиялык; касиеттерг, пролонгациялау мерзш1 , бактериостатикалыц белсенд1гх жэне ем иэтижелер1Н1Н салыстьгрмалы ^убылысыда зертелген. Саудальщ изониазидлен салыстырганда пролонгацияланган изониарид эсер1 1.5 рет уыттыгы темен екешн жэне булшык; етке енгхргенде онын бактериостатикалыц белсендхгг 3 таулткке деЧш сацталатынын керсеткен , ол токсико-аллергиялык; жанама эсер:нгц болмауымен жэне дэрхшц бактериостатикалыи; концентрациясынын турацтылы-гымен жетглетхнг дэлелденген.

BEKOTKHAMEDOVA ЯА7Ы rARIDOTHA

ТПЕАТНЕЛТ OF TUBEPCUbOSE WITH LONG -АСТПТС KOHTAZIDE IK HCFERIEirCE

14.00.26 - Phtisiology

Б V 11 К A P Г

The results are based on 40 patients, 600 mousen, 36 rabbits and 270 guinea-pigs. The data on methods of preparation of long-acting isoniaside on basin of pectin and collagen biopolymers were presented. The method of detennination of level of isoniazide in urine with dimedone is йоге exact, inexpensive and easy than others. It was studied the polymeri preparations of ieonla*i-de (their biological ehoracteristics, the time of prolongation, bacteriostatic activity and therapeutic effect in comparison).

It тгав narked that long-acting ieoninBide is 1,5 time less toxic than commercial isoniazide, it has not the cumulative properties and it la nonantigenic. It keep the bacteriostatic activity during 3 days after intrcmusculary injection. The treatment of animals infected with tuberculosis with polymer's preparations of isoniazide is воге effective then the treatment with commercial isoniaside. This is obtained because of stable bacteriostatic concentration of isoniazide end abeence of side effects such as toxicoellerglc reactions.