Автореферат и диссертация по медицине (14.00.23) на тему:Морфологические изменения лимфоидных и эпителиальных клеток человека в условиях in vitro и in vivo при воздействии онкогенного вируса Эпштейна-Барр

На правах руг:сп::с:«

Сезостьянова Наталия Владимирович

МОРФОЛОГИЧЕСКИЕ ИЗМЕНЕНИЯ ЛИМФОИДНЫХ И ЭПИТЕЛИАЛЬНЫХ КЛЕЮК ЧЕЛОВЕКА В УСЛОВИЯХ INV1IRÜ И IN VIVO ПРИ ВОЗДЕСТВИИ ОНКОГЕННОГО ВИРУСА ЭПШТЕЙНА-БАРР

14.00.23 — Гистология, цитология, эмбриология 14.00.14—Онкология

Автореферат диссертации на соискание учеко^степенн кандидата медицинских ьаук

Томск -1999

Работа 3! пголнена на кпфсдрс биологии Сибирского гдсдишнского -аизгоскгета н в кг Моратории онковирусологии НИИ онкологии ТНЦ СО РАМН

П зучные руководители: доктор биопогачеасих наук,

профессор Н.Н. Ильинских кандидат кагшинских наук Т. М. Исаева

0£*пг:гльгыг: пгтгг.ь^кты: лектор аегисчнсгкх :иук,

профессор, А. С. Пукосаа доктор ыспигинских наук Л.А.Колошкц

Есдущая ерггшагция: Кеагревосая государственная мсдашисая ззгпляпа

Запала состоится июня 19Э9 г. в ч. на засекании

"чсслрттщиояного совета К 034.23.01 при Сибсфскоы иешаэшекоы ушгарситете по адресу г.Тожх, Московский трзхг 2.

С диссертацией ысахно ознакомиться в научно-ызлщинской библиотеке Сибирского медицинского университета (634050, г.Тоиск, пр Ленина 107).

Автореферат разослан 1999 г.

Ученыйсекретарь ^¡ссгрташонного созгпа, кигваат ыгшашкекзх наук,

доцент А. В. Гсрасиыаз

-!Ъ,0

Азтуальгссть проблем::. Епрусы ззпшогся едиистзенными органз»-ыаки, которым присущ паразитизм ка молехулярно генетическом уровне. Репродукция и онтогенез вирусов на всех стадиях их развития тесно связаны с клеточными структурами метабол:смом клетки. Проникая з клетку, вирус Еьпывает изменение ее структурно!!, биохимической и генетической организации (Кармышеза В. Я, 1921; Анджапаригое О. Г., Богомолова Н. Нм 1983; Збараскй И. Б., 1590; Бий К-, Шпал А., Нсрр*-Беу1м Г., 1997).

В результате взаиыолейстзия клгпсн и вируса зозшзсает комплекс морфологических и цитофизиологических изменений, которые специфнч-ны только для да;¡кого типа взаимоотношений 15 не встречаются при других патологи чесхих состояниях хяето:: (Голусез Д. Б., Сомикина А. А., Медведева М. Н., 1976; Гетаансва Т. К., Царева А. А., 1993).

Патологически: процессы, развивающиеся в хлегг.е под действием вируса, принципиально отличаются от всех иных форм патаясгли клетки, вызванных физическими или химическими воздсйстзнягш, зтн процессы возникают в резуштате молекулнрнс-бкологичесссго азаим©действия двух неродственных геномов — клеточного и вирусного. При этом возможна не только деструкция или гиперплазия отдельных кокпонентоз клетки, но и формирование нсзых Енутрихлеточныг структур, которые обеспечивают регосжацию вируса, транслорт его отдельных коапонаггез и выделение из клгш: нозой попупяит: вирисноз. Сиерть гдяаН — это лишь опии из возможных креолов ее взаимодействия с Еирусо?л. Более частым результатом является не гибель клетки, а ее сохранение, последующее актизно? размножение, развитие процессов латенцкк или тракс-формации (ХесикЯ. Е., 1976; Голубев Д. 5., МелЕедеза Т. М., 1933).

Литературные данные о поражении клеток при вирусных инфекциях свидетельствуют о том, что цитодеструкция не является частый результатом взаимодействия вирусов с клегхамк. При этом возможно разв5ггие глубоких изменений клеточного метаболизма, как происходит, при злокачественной трансформаши под действием онкогенного 21!русз (Зипьбер Л. А., 1968; Агеенко А. И., 1978).

Особое место среди цитологические исслеясзанлй занимают рабстъ!, посвященкые ¡пучению глиянгл вирусоз на хромосомный аппарат кле-леп и на клеточное деление. Важность работ тгкего ропл счелггдпа. Известно, что даже при остро?.: инфекционном процессе • повреждение генетического аппарата клетки может быть более или менее глубоким. По-иному складываются эти взаимоотношения при хронически инфекции и з особгя-ности при неопластической трансформации клеток. В последнем случае происходит интеграция генома или части генома яируса и генетического

zun арата kjxsikk. Вместе с тем при хронической инфекции взаимоотношения вируса и кзхгтхк являются связующим звеном ьгекау острой инфекцией и »ргисформгщисй клеток. Таким образом, проблема изучения влияния supycos ка spouocoшл квлястся атлузльноп, независимо от того, еьпы-гаггот лз! они острую инфекцию, хроническую или трансформацию зараженных хелгтозе (Алов И. А., 1972; Блюгшш В. Н., Жданов В. М. 1973; Млькнсзскх Н. Н., 1981).

Последние голы озкаменовгыгкь значительный! успехами в изучении колскулгрно-биологичгсхюс ы»ханизасз вирусного онкогенеза (Шяяюсезнч М. А., 1973; Вии К., Uíímaiai A., Hcppe-Seyler FM 1997). Исследование роли вирусов в процессе формкрохлн:^ злокачественней но-Еэобргзований человека представляет особую значимостью созр :кенной .медицине.

В настоящее время известно, «это РНК и ДКК-содерлгшне вирусы «сгут Еьзыватъ в организме особьш ввд :слеточной пролиферации и об-Л2Л2Г5Г cisortKKbtsjn потегтцлтмм. Среди ДНК-содерлаисзс вирухоз он-гогенкьаш по1гкци.<щн облпта ,ст тгрп^сзьуусы к который отнссхтвгфус Злнггейна-Еарр. Дсз^загг ассоциация згого зируса с тахикн злокачественными аозообразозгнухзги, ках яимфока Е^зсигга, рак косоглозси, лггзск: к ^глугсса (Evans A. S., 1935; Crawford D. Н. Ando I., 1986; Hein L. R, 1992).

До иепазнгто считалось, что вирус Эгксхгйнп-Барр персн-

ггпзруст толыго э В-Еглфоцитсх. Рабетакн рххги евторов, логазгно, «ло з;фус способен ггнфздкравазь и гпыгчиалыгые хлахл косо- и ротегоот-г::, а танке донсагхш перпферлзесхоЗ хрови ыелоаеха (Epstein М. А. 1985; Decaaos R^ Sgagiäs Н. IL, Rosenberg S. А., 1995). Вкевреше вируса в клггжу conpcBO::süc.Tcrj гпыгнекнем фукхцкокфаьаккя кдеточкгзго генома. В частности зкрусные баки способны образовывать олигомеркые арустуры с гекон-суптрессором злокачественности р53, что ведет-г суще-nsiKKObiy нз&езезкк) его понс-ор^здян, фунхцноыфоганця, иаргстакгао гсяетшсосой кестгбилькэаи глгюк (Ноежез В. Сп 1355).

Feu кг ьсхреткгась литературные данные о том, ras вирус может £л:^п> аг иорфолехкю глсхки. О способности вируса ЭпштсЗнг-Барр вызывать цитопатолотнчссске лзигнекзя з клсшу: человека inisxrcs лишь капгкчиаг работы. В ст.пзн с гпзл, иьз сочли вг^ньи изучить оссбсг-шосп! влияние вируса на йор-^ололпоЕпггса: человека.

Цель и задачи а с с л в д ов а ы на Л5з)гшть корфогогкче-етм изменения лннфекгккг а ъяягз&гзгдэя: ззтох чаювека в усгезгхх hi vitro:: hi vivo пр;з Есгагйсззки е:зсогеннсго вгфуса Элшгсйиа-Бгрр.

s

В coomzsmcmsw с nocrr.(z.'.,icnHoxi цеяъто s ¡сдачи исс-едаожя ixod's:::

1. Оие.'пггъ цитологические изменения лпмфобпастнъи В-клетох человека и клеток аяенокарцино: :ы гортани в условиях in vitro при воздействии вируса Эпштейна-Барр.

2. Провеет сравнительный анализ цитологических изменений ли^фс'ш-ных я эпителиальных клеток в условиях in vitro при остром а хроническом инфицировании е!грусо.ч Зпштеына-Барр.

3. Изучить морфологические изменения яимфошггэз периферической крови у больных опухоллмп гортани и оценить кг эоа1г??осглз1> со степенью экспрессии генома в; .руса Эпипейки-Барр.

4. Определить частоту мутаций в rc.it р53 в опухолевой ткаки снхо&сги-ческих больных.

5. Изучить корреляционные связи между цитогенетичгскими и серологическими показателями в условиях in vitro и in vivo.

Научиан понзгзнг к npair^r ¿tccas зяаптглэсп» работал Впервые показано, что вирус Эпштейна-Барр вызывает из?.;енеш1П в ядерной аппарате клеток в условиях in vitro. Хроническое к острое инфицирование хлетск, влечет за собой цитологически; и цктогенстачессие sgu£h;hhj: разной степени тяжести. С повышение?;: титра антител к антигенам вируса существенно увеличивается уровен: лимфоиггов периферической крови с различными шгтоггкетичесами игрушааклж. Установлено кглкчие в эпителиальных клеткгх 6ок.лп.-х ргкотд гортани мутаций в 5-2 гкзокгх гг.;а р53. Изучение вирусного поражения хдехезе не тодъхо предетггзгкг особенно болзиоП теоретический интерес, уо и нлеет Ht по грет™ практической лишение выяснен;« ытзпжза вирусных инфекций и других к::-дуцируеных вируса?:!! заболеваний, разработки мподог, диггнолхки, профилактики, патогенетической терапии.

Оснонвые no.-55ccsr.^, вглзосшшг за затеку. ■

— Морфологические изменения з лгшфогавплх и зшгхзвгалькых культурах клетск челсвекг, при воздействии вируса 2п:гт;;1на-3арр различаются в случая::. острого и хронического инфекционного процесса.

— Повышение уровня КЭБ-специфяческк 'аышгл и paaiatpeinie спектра охспрессирус^ьп: вирусных акпдексв сопрово:-:саегся согтовер-ными шпегенетичееккмн изменениями в опухолевых ххюзеах и шшфоцн-гах периферической крови болвпых раком гортани.

Апрсбаагв: работа:. Основные положения работы докладывались и обсуждались на конференции молодых ученых СГМУ (Томск, 1999), конференции молодых ученых России - с международным участием "Фундаментальные науки и прогресс клинической медицины" (Москва,

1992), Всгх>;си«'ж:ой кы^етки "Атмосфера. it здоровье человека" (Са^т-Псгербург, I9S3), International Congress on Oral Cancer (India, ^itcinaticnal Congress ca Anti-Сглссх Truuiaeat (Paris-France,

1559).

IIjuaiiroiiHSi. По теме диссертации опубликовано 3 работы. Сгррлург н сЗ^еы работы. Диссертация построена по общепринятом)' типу и cccioi.t кз ввгдекия, оозора литературы, результатов соб-ль«:ны>; исследований, обсуждения, выводов и библиографического указателя, ианочиоихаго в сс5я£5Язт,;чес13сннь»х и/2£гарубе:«ных источников шпгргхурьи Рибога юотострнрозаиа^исуихма и£табтк:ами.

Мгусркгл к кг/яды кссггдоаагня Hacronicie 5:гс*гао£акиг проводилось в хзух сериях гкспфиыеатов: в условии: Li vitro и in vivo.

Лсс~£дос.r, yczjcvsx in vitro. В псслелсиз:;ни был.: нспользоза-

кь: сллумшае худьтурь: пгрсктаеыых линий ¡оиток, входящих в каталог Европейской Кслл^сцлп культур :ллок (European Collection at Annual Ceil Culture C£ta!og>e.., 1950): P3HR, - есгнщгровакгилс лкм-

<>з0дгс*о1Щ1ые В-кл-лзск человека, полученные рго.тельным згутг -пзкро-вокиш кз п£р>,\:гричсасой ¿сровн больного ксзфомой Беркипа, сод=р:ха-апе геном ь^русь Згашсйка-Б^ср; и клетки Нср-2, поденные га опухо-js: 6o~i-'ioro с харш&схсй гортани. Линии загосх P3HR1 и Нер-2 получена гз сажа клеточных :.ушлур Тсчссого НИИ вззовш п сыворото:;. Fe-кудькзггроьг:::-;:: к солив срея спсэегововали ргкочатаииям (Нозохатсхкй А. С., В.Ф., Ткаченхо А. Б., Хлзажоза TJwi., 1934). Лкнгао каетсх Нер-.1iprrsjri ззкрусоы Зпшхгйк-Барр (Fop; J Л., Ноше MJL, Scott W., !5-Xi). I-з ксагочиых кшли P3KRj н Нер-2 гоювшш препараты дав кггсзггт^'.кеского ;ззучсгшх. Цгггокетлсгзскс препараты гото-Eisxii в сс<хсг^г:с2П1.л с рссоагйдацкша (Гсхгубгз Д.Б., Сошгнкиа ААМ гдензеаеза МП., 1976). В куггд^рах регаярирезгли елгаухэщне покзза-угли: хогагеествашог ссазрскалаг езу^ераъге, ггиогзггдеркых клеток; гн-яштгх::з хзкезг с иабугшшш ясфгзя, пхяеи с гахуогасацкей и дгструк-акгй ягро. AiisiKsgsoscsecb по 500 ядетсх кз каждой опытной н контрольной хфхояургл. Кошросгм аигкнли чисшс ."зеотн. Среян ю»топоги-чкгсс; пс;:^з-1тгл£н взки изучалось хшвгнне вируса ЭлаггсЗ::а-Барр на кдгтичных культур. Дпп акшг-йс пролафераткзкой eapsx2J53xa гхасгкгвазгЗ жгххс. В связи с зтгш s кгхаои туре пгхкчижшо по SCO xessc« с хорошо прсгргше1шьшй ядра; - г :г глитоткчгезвЕ аппаратов. Псясчет хпгтол с патоютчеазо» ки-ac^axss ослов; етагга.1, пгета.-хс:-Еюй И. А. Алсшыи (Алов

И. А., !972). Учет г.а—тсг.мес^'.г. шпозсз есушестзллли на 100 просмотренных клеток. Ц;ггсггпгг^:сс.^с ¡смгнекия к изучены." клеточных ку^-турах оцеиквали с помощью хроиоссмнсго анзл:гга и ?,г.ссроядгркс гс-тесга. Анализ хромосомного набора клеточных линии ?3HR| н Кср-2 проведен на препаратах, пр:тог:>ал:нных по мстогу Moorhead с*, а! (19с0), з кагклом случае анализировали по ICO мстафаз с учетом предложений НЛ. Бсчкова (1974). Среда аномалий учитывали лроь:осс54г.ь;=, хроматканые разрыты п сопит. Для пг.озедеккя шжреядерного препараты гоаозили общепринятой м-тол. ir: (?J. Schuid, 1975). Учет мгсероядер проводили с использованием крьгериез. :{т::о:ке:п;ых íi. II. Ильинских, (1952). Подсчет зсолггестга нш:ро.-лср npo^ozr'jzi на 1ССЛ0 :дгегэк. Учет результата з npo'.cfrs (7с.-). Урззиа антжлл х атгггг;--—. вируса Эпшхгйнг-Iapp определяла з f еахкяи .чепрякой :шму;:сфлгсср^:-ценции, по модифицированному методу W. Ht¿2e et al. (1979). Учет ре-ад-шм прозосли на лкжнигсц^тио.м :.па:рсскспе NHOVAR-2F (ReicheiT-Jung, Австрия). Клсгси, снкт;с::руго'дне специфически? аьглггны, были окрашены з изу^грудно-зелгный цвет и хорошо зс!лрас1з;р-п^^Г:£ ка ф ->ке кепродуцирутоипс: хлепж, охраненных синьксЗ з хрчеко-оурыЛ

цвет.

Ifcaudotcsea eyciotiazin \iw. 3 хачссгаг сбьосга иселегювгнип пгпель-зезади кровь, сыворотку кр-ози, с-пухэлеяьй матерная от больных зл^са-чсстзенпъг:л нсзос.бразогак'.'зл":, г:аходшесгел ::а дечегаш в едгедгт-п:?-: опухолей головы и шеи НИИ оккодегки ТНЦ АМН Poccini. Контроле.'.' послушай периферическая кропь, сыворотка от 20 здорозкх со-

поставимого пола н ~с,?ргсга. В иссяедезанне были поточены больные с морфологически подгкеряссеяньпи диагнозом рака полости рта п гертано-глстки I-FV стгдкЗ. Оценка схгпкА злохачестзекнсго процесса грог,о—-лась до начала лечения по отечественной хпассгфшсгшш н ксхауняро--яоа сисгахе 7NM (Трапспшкоза Н. Н., !?31; Кгпмг:сда И. П., " гглсого из обследосанкых сцсш-зсипг 5унзоп-:о»:ал1н>-э гдпо:-?:^ фошегез з ?Б7Л, спгшфгсгскиЗ ищунныЛ охзс- :: гарусу Srxrr:-"-rc-Барр и наличие аузаций з гене р53. Длл каяхего с6с:гг,'«гого прср.о::.: :~г следующие длрпаяпа реадшап спокхакная рггазм "ПТЛ. р-хчинл с кто-гаиголтойпюм (Бзлгшоз 1С Е., Ес£со А.Н., Гл?™.- .--.В, >: — Подсчет процента бластхраксфсргяфсванкьп: про-одг^х.1

езгуошю! образов: cSssc кошяссго (Г-ГО :сл) под:™--

тывалп -д«.сло л:шфс5ластсв. Рсзуьзпзы з^гржпз^д! г (?'а). Mr.

данных препаратах кам^г таксе у-игс,Е:аш:с& длгпш с цт:гогатодог;5ей. К кз&1 оп;гсди Ешфоблзсах с димфэшт-j с :-.-сср-слдр2Г.тп,

zsynsepíibic л;п;фс'бласты. Подсчет лпифсшяоз с пато.топ£е15 ос^тсегтзля-

о

ei кз. 500 клеток. Уровни антител к антигена:.! вируса Зпштейна-Еарр определяли в сыворотке крови реакцией непрямой нммунофлморесцен-ции, по модифицированному методу \V. Henle, G. Henle, (1979). Клетки, синтезирующие специфические антигены, были окрашены в изумрудно-зеленый цвет и хорошо контрастировали на фоне непродуцируюших клеток, окрашенных синькой Эванса в красно-бурый цвет. Титром антител считали конечное разведение сыворотки, при котором еще можно было обнаружить специфическое свечение клеток.

Еядаени: ДНК. Забор с долевого материала проводился во время хирургического вмешательства. Объем исследуемой опухоли составлял 0,10,51. Выделение ДНК проводит: по стандартной методике с использованием протеи: ;азы К и экстракции фенолом-хлороформом (Дейвис К., 1990). ПЦР проводили к последовательности 5,7 и 8 эззоноз гена р53 ам-плифицировалм с использованием олигонуклеотидовпрайыеров, комплементарных концам экзонов. Полученные в ходе исследования данные об-р^батывглм методом вариационной стап.стихи с использованием t-кр-гтерия Стьюдента. При несоответствии распределения нормальному закон)' использовали непараметрический критерий Вилкоксона-Манна-Уип.и (Лакин Г. Ф., 1980; Иваноз Ю. И., Погорелюк О. Н., 1990).

Результаты исследований и их о&узденг.е

Клеточные куш туры — уникальная эксперимегггальная модель, позволяющая изучать разные стороны взаимодействия вирусов и клеток (Голубев Д. Б., 1933). В ходе данной работы нами было обнаружено увеличение содержания двумерных и многоядерных клеток в Еируссодержа-ших клеточных линиях ?3HRt и Нер-2. Установлено, что при заражении культуры Нер-2 вирусом Эпштейна-Барр наблюдалось существенное увеличение числа двуядерных и многоядерных клеток (7,2±1,1% при 3,3±0,8% в контроле, при р<0,01). Для сравнения важно отметигъ, что в вируспро-дуцируюшей культуре P3HR, число дзуядерных клеток достигло 10,0±0,8% (р<0,05). Анаг^з многоядерных клеток показал, что в культурах содержащих ВЭБ в латентной форме число таких клеток достоверно больше, чем в ке^сраженной культуре Нер-2 ( 4,5±0,2; 3,6+0,7; 1,5±0,1; со-ответсгЕспно, р<0,05). При анализе форм патологий клеточного ядра в исследованных культурах нами установлены следующие изменения: патологические формы ядер, вакуолизация ядер, деструкция ядра (кариорексис, кариолизис).

Известно, что первьи.: морфологически?! проявлением цитопатоген-ного действия вирусов на клеточные культуры служит набухание ядер клеток (Хесин ЯЛ., 1967). Эта реакция является, по-видимому, наиболее

эбщеП для нитопатической формы взаимоотношений мс.кду хдстми :s вирусами. Она н: зависит ни от свойств цитопатсгенных вирусоз, ни от хобенностей клеток. Сущность этой реакции заключатся в угеличсг:н:! к 30-40% средней площади ядер tu:t не имеющих структурных изменений слеток культуры. Набухание ядер хлеток быстро развивается во гсеГ: клеточной популяция д?же при заражающей дозе вируса, минимально необ-содчмон для развития цитопатического эффекта. Набухание ядер клеток голяется неспецифлческой реакцией клеток на присутстзне в культ)учл1~ юй среде вируса, способного к шгтопатнчесхому дейстаню hi д?н'-!.;е слетки. Стгпп1.ь \"величек;1я ядер : елею к ие зависит ст дозы вируса: если множественность заражение превышает минимальный n.oor, iibifi для развития ЦПЭ, то средняя нлошаль я тер возрастсе-п tent пвенность заралсепмл ниже этого порога, то ни ЦПЭ, ни набухани; япер теток не наблюдается. Эта реакция не зависит г:: от раз-уеров знрионов. jii от места развития вируса в клетке (цитоплазма или ядро). Согласно Ч.Е. Хесину, набухание ядер, развившись после заражения клеток, е дэг,ь-«ейшем сохраняетсг, не нграстая, вплоть до нечерпьшангя резерва морфологически сохраненных кт.еток в популяции. При отом укрупняются не шра отлельных клеток, в которых, возможно, началась подготовка к ре--федукшш вируса, а в целом ядра всей популяции клеток. Это указывает, тго набухание ядер не является прямы?.: следстзггм проникновения з клетей инфекционного вируса.

В ходе-экспериментов нами было пегазано, что а 75% зарлл:екных ВЭБ клетках Нер-2 и в Р3НРМ произошло увеличение'объема и избрание шер, изменилась форма хлеток. Ср-ди патологий отмечаются зелетки с гигантскими, вакуолизирлвакными ядрами и клетки со зг.:здчй.той формой шра. В шглистной линии Нер-2 ч:!сло гигантских клеток с набухшими ядрами составило 1,0±0,2%. В зараженных ВЭБ культурах Нер-2 этот показатель достигал 20,8±2,5%, а в хронически инфицированной культуре ?3HR, этот показатель был равен 30,5±!,3% (р<0,01).

В основе образования полиплоидов обычно' леллгт кгханиз:.; еллл-шя плазматических мембран двух клеток. Предполагается, тго паргм.с:-:овнрус может вызвать местные поврждекия липидоз гшаз м i : ч с ~: с Г; мембраны, что приводит к трансформации упорядоченного бисмокеку-тярного слоя в глобулярнг 1Й мицелий и затем к разрьззу оболочки хлетхи ^Соловьев ВД., Хесин Я.Е., Быгозский А.Ф., 1979). А. Г. Букринская и В.М. Жданов считают, что ряд симпластообразузоших вирусоз содержат Ьерменты, способные лизировать хлеточные оболочки (Букринсхая А.Г.. /Кланов В.М., 1973). Ф. И. Ершов полагает, что при формировании полиплоидов важную роль в расплавлении оболочек клеток играют хлеточные

лпзссомы. Вьтатаот íes*; формы полиплоидного действа вирусов: спия-тк извне к слияние ганухри. Спзгише извне развивается быстро, на пер-ai-D, этапах взаимодействия В1фуса и клетки. Для этого процесса не требуется полного вируса н каких-либо вирусикдуцированных синтезов. При ^л*.глро}шо-1-'икроасопичеасоа исследовании было установлено, что новообразование поликарноцктов протекает в несколько стадий. Сначала вирус вызывает агломерацию клеток, при которой кембраны двух сосед-Hint клеток тесно контактируют между собой. Далее з мест; ксктакта мембран с вдрусои происхохвп1 их разрушение, что н приводит к'полному слиянию клеток. Сияние изнутри происходят на поздних этапах вирусной инфекции глетох и связано с ннаукиней стпеза вирусспешгфическкх агпигеноз. Зхо тех пазьшае^ъш поздний потсхармошггсз. Слияние может сс^тдестдллгьсг таххсс ыеету зараженными и незаряженными клепками, что способствует распространению вируса и быстром)' вовлечению в ин-феешкоккьш процесс все бол^его числа ¡слеток. Этот процесс или захан-деструкцией культуры, или ко;;сет протекать хронически (Соловьев ВД., Баландин ИХ., 1973).

Чрспь5чайко sapairrepsaiu ioxs >шогих вирусов ¿гелг.гхг. фср«иро-zzimz внутргкдеркых п 1штспхзз?«кных вхшоченнй, ва^олей. Б настоящей работе было установлено увеличение клетох с вгиуолизаггаеЗ znp'd в иьфзпгкровакной культуре Нер-2, в сравнении с контролен. По:;а-достоверное увеличение вакусл513!фованных клето:; в остро зара-БЭБ культур;, чей в хронически JíHCímsspoBaia-ioü лнп:ш P3HR[. В^ъ-зсоцкх в кл-г; кзкзхсх с5кару>:з!&алась а ядре. Вывлени T2iz:;c vjzztz.'.: с деструхшсИ rjxpo. Б илфшз:рог.гкноП культуре Нер-2 таких кле-tcs: достоверно боклег, чем в югтгкхией яишк. Однако в вггауспродуш-рукнегйхупьтур; ТУ:¿'Ц. чкспэ ххктох с кгрнссгггруашей было выше, чек в остро 2 Нгр-2. Б процессе пгрснсгсишз: вирусов, в клетках

¿гчогзт к*; нзруцкнит. кара, ко и ггменегшя затрагивающие ц;;-

топлазку еютох. в л^кш«: клеток FjHRj были обнаружены кле-ли с вакуо-згзлшей штлвазны, а в хзшнн Нер-2 iioiz-nccmo таких кл enere было достоверно с1сс;:е::.';. Наиболее часто отксчгллсь клетки с меленнп зокуоля-ззп, прнпзт-зщим:; и'поплгзие ячеистый а;-л, s также с чгст.^ггс-а утра той части шпопдазмы хлгтаа;.'

Характерный для циго-глхкг-жого ¿efscibrs ииоп»х'в:фусов язлгйт-св с гргл^резанлг уроме г к^еак; в: и шясплглкатичеслих Д:ггигз;а форккреваюк гхяячзсгЗ, пх форма, величина, содж«вни? в к-и ;^-гтс12»свых кнсяс? н белков им«т большое дкаггостаческое значе-к::--, г,-is ."-'ах схпичгсхсх у вирусов разнив: трупп. В хисопзэзде клеюк яа-хаянкви^гтеа схафпьаыг массь:, ссаер::д:д'.гс вирусный беле-; и РКК,

многочисленные вирусные частицы, образующие вакуоли (Агеегко А. П.. 1974). Литературные дгнные свидетельствуют, что увеличение oót гмог ядф наблюдается уже на ранних этапах ьзаимодгйствпя клет..и и вирус--. Однако при заражении клеток ДНК-сод.ржащ;ыи вирусами, которые размножаются в ядрах ¡теток (например, папова-, герпес-, аденовирусы), а тазске отдельными РНК-содержащпм:; вирусами (реовируси), насг-ханн-яд:р сохраняемся и нередко нарастает вплоть до момента ¡поели клетки. При действии многих РНК- и ДНК-солер:::а:ш1>; вирусов /же на рамл'с: стадиях вирусной инфекипи изменяется форма лдер, з клетке формирутэтг-включения. Нередко ядра прнчимают причуэтггзуго фор:.!у за с:«.г развч-пл многочисленных выступов ядерной оболочки клетки (Солэвьез ЗЛ-. Гулеви í Н.Е., Варшаве? Н.Б., 1963).

При вирусном заражении клеточных культур, наблюдаются прошс-сы массовой деструкции клеток, время наступления которой зависит ог ряда факторов (время репродукции вируса, заражающей до;ы, условий культивирована). При шгтопатогенном действии вирусов десгрукнил клетки прямо или косвенно связана с проникновением и функцконнров1 нием в ней генома Еируса. Развивающиеся вследствие этого изменения метаболизма клепки могут быгэ результатом действия одного или нескольких факторов: угнетения синтеза клеточных ДНК, РНК н белков (Авдын' АЛ.,' 1963).

В процессе вирусной инфекции происходггг изменение ср^впизадик клетки — гипертрофия и деструкция клеточек органоидов, фермкрога-кие новых внутриклеточных структур. Некоторые из этих структурных повреждении клетки вызываются непосредственно вирусспецнфичесглг.п! бедката. Например, некоторые исследователи счзпвют, 'по структурные белки энтеровирусов участвуют в развитии поздних шггоперфологиче-CKitx изменений (Bablanian R. , 1975). Зкачителыгую роль в развитии ве-струзлканых процессов в клетке :.гогуг ¡драть не только гируссяецифиче-о:кс, но к клеточные белки, в частности гидролазы лкзосом. В результате повр&етгння лнзосомалъной мембраны в К1гтсп~г;з::у выходах тдрошгш-ческие ферменты (ДНК-аза, РНК-аза, фосфатам, протеаза), что и привс-лит к быстрому и nororoLiy разругидссо !гнфнц::роз?.-:::ой глет;::: (Albor A.,LaborbaJ., 1994).

Вгагге&шгц показателе:« злт-я-вд на глггочкуто псгг\~--

цию таляется зсодичествегсгый критерий, дзрактгр^дс'гк:! сгепеш- »овде-ченпесхи хлеггок з кнфекаиокнъй процесс. Так, лр:: дссгкэсззкнз .-ами клеток Нер-2, инф:-ширсванш.к вирусом гшзхейга-З-рр, ::од,.гг:-ство клеток, гкспресснрующкг хгпслдкыЗ аки-хгя в.труса по .г:-.кгъ:?-: ггетега уч-:г»":{сфгасоресце:щи.". составляло 53% (для О-анпгтел) :: 76'о (ляп А-

агапел) при 24 часах культивирована с вирусом. При 48 ч культивирован 14 с ВЭБ набл-здалось достозерное увеличение таких клеток: 72% (для С-актнтел) и 56% (кл А-анпгхгл). Специфическое свечение отмечалось только в ятрах клеток.

ВЯ. Кармышезой, Г-Н. Сергеевой и ЛХ. Карпович показано, что цитопатические изменения в переливаемых культурах клеток (К>), зараженных вирусом клещевого энцефалита развивались постепенно. Нарастание -пггра инфекционного вируса отмечали в культуральной жидкости через 12 ч после инокуляции вируса. Максимальные титры внутриклеточного вируса предшествовали появлению первых цитопатических изменений, а наивысшие титры вируса в культуральной жидкости были установлены в период наиболее выраженного ЦПЭ. Через 43 ч после заражения в каждом поле зрения 3-5 клеток выделялись более яркой окраской цитоплазмы. Такие клетки округлились и теряли связи с соседними клетками. В их цитоплазме наблюдалось усиление реакции на РНК и белок, развивались процессы кариопиккоза. В последующие сроки процессы деструкции продолжали нарастать. Флюоресцентный анализ позволил выявить через 24 ч после заражения появление специфического свечения небольших участков околоядерной области цитоплазмы. Флюоресценция наблюдалась в 4% клеток. К 48 ч свечение становилось более ярким и захвз-. тывало значительную часть цитоплазмы вокруг ядра. Флюоресцировало уже 10% клеток. В последующие сроки свечение регистрировалось в большом количестве клеток и распространялось по цитоплазме. Через 96 ч пс:лг заражения наблюдалась гомогенная флюоресценция цитоплазмы почти Есех клеток. Развивалась мелкая вакуолизация цитоплазмы, что свидетельствовало об освобождении пфусного антигена из пораженных клеток (Карбышева В. Я., 1931). Необходимо отметить, что е наших опыта:. яр:--ого четкого сзечен:-_" в цитоплазме не наблюдалось. Пестроту кар-тч.'.'ы флюоресценции можно объяснить не одновременностью вовлечения клеток в инфекционный процесс и разной степенью их поражения (Кармышега В. Я., 1979).

При анализе ».ютоти* ескоГ: активности изучаемых н?ии клеточных культур, было установлено увеличение показателя пролиферации в линии Нер-2 на 24 ,:гсу культивирования с вирусом. Через 48 н отмечалась выселенная стимуляция процесса в присутствии ЮБ и величина мктотиче-ского индекса увеличилась на 10,5%, по сравнению с'контрольной культурой Нер-2. В хронически инфицированной культуре Р3НРМ, также обнаружен высокий пголнфгратнзный пуп клеток. 3 остро зараженной линии Нер-2 наблюдалось д стогерное увеличение клеток с патологическими митозами, в нктактной линии таких клеток было минимальное холиче-

s3

стзо. На 24 ч хуямннлрозснид Нер-2 с КЭБ еиччгио !2% делящихся глоток с аномальным:! .'¿¡позами, из которых 5% клеток с патологическими метафазами (неравномерные метафазы с отставай;:«! хромосом), 7.5" клеток имели двухгрупповуго, трехгрупг.свую нетафязу с ыоепшч, мнсго-групповуго, полую мегсфазу и 5,5%' делящихся клеток находилось я сп> -шш патологической анафазы к телофазы (трехгруппсзал анафаза с cirra-ваннем хромосом, поздняя телефаза с постом). Через 43 ч куль-пш^сзл-ния клеток с аномальными митозат-Ш узелнчжесь л 3,5 раза. Б зирусг.ро-дуцируюшей линии P3HRj число хлгтек с патолсгичсасвкн шггозаки ё:л-ло достоверно юзке, чем в остро зараженной культуре. Получением з данном исследовании результат,!, псязср;^я201ся кноготасхеккыми литературными даниыин (Алов Ii. А., 1972; Лнхксшарнюе О. Г, ссгс.чояо-ва Н. Н , 19S3; Бар;п?с:нй И. Ф„ Дсгкнгьсз И. В., IS63; Бтоьзгш 3. К-1974; Блюмкнн 3. Н.,Ждз.ксз В. М., 5973). ДНК- п РНК-ссдержашие вирусы нарушает клеточный щес.% нозтоку з гхсперимектг узучаиг пре-имушестЕенно ранние этапы гзаинодгЗспгиа зирусоз с хяжжя и ннтгн-сивность синтеза вируса на рглных фззп клеточного цикл.*. В n:nvpaType широко освящен зопрос о влиянии Шфуса простого гсрпгса на rt,K:ms & зараженных культурах. Gray, ТсЬлтг.аги и Scott (1552), изучая клеш; HeLa, зараженные ВПГ, пришли к Еызоду о cßiizcmcz^Knn трех тнпсз шгтопатического ztücrzvs. этого зируса — прслиферзтглшсго, кедров г; -.-ратиЕного (десгрухтизного) и гкгантохлеточнсго.

V7. Gray и др. (1970) обратила гжманке на то, что карастаингз тис-па клеток предшестзозала лаг-фаза дп::гелъносгь:о около 20 чзео.-:. Зат£:' следовала прога:ферашя хлгхск, и г. 43 часам прирост хояпчгаса клггок ссставлгл около 50%. При проллфераг.гзно;.: типе шггспигл'.чссох-о действия вируса герпс-сз. в 3 опытах из 4 лгг-фазг. резко сокращалась и длилась не солее 4 часов. Б зтих опытах :лсл:одалссг> довольно быстрое ка-расгание числа хл^тск, причем к ¡5-9 чле^м псгфсс^клгточксП пспу::яш1И ссстазялл. примерно 60%. Лгикь а одно?? опыте-каг-ф'зза прс-яс.т глась около 14 41COS. Ртлличия меацу результатам! опыта заторы соърл'мт: разной мкожесхзснкостго При яри^гнежи д:стр}лгпп:нс,г>

варианта stroyca герпеса Koirr^cno :o:szck n шфчигрег-шюй культуре HeLa сшсхаяось по сра2:-:е;ппз с ксатролсм, прнчг.ч ядг-фгза. к^нд г.::^." снижением была очень хорсгпсоЛ. Авторы полагают, ;гс ^"хшл ;:глгн.г. кяетсх, каходлаался з кср:.;й под хоктсолгп лгтрг.Ерг.-.-игпо стимулируется вирусом герпеса, который sreprasre; з ядро и б с:лс разрушает его. Вместе с те:.! число пнфидофсзанкьи клетей: т начале елдг незелн-ко, и сглмулирутощнн зффест ссазьаистся имекко на :ет--т-кгх, которые начинают деш-пгст npriMjyno в 8 ржз чаще, чем йигпси хек-

трольных культур (Блюмкин В. Н., Жданоа В. М., 1973).

М. Стокер и А. Ньютон (1%5) проЕелн изучение влияния ВПГ н; м:яоз клеток HeLa. В сходной работе отмечено снижение MHionr.ecKoi активности клеток НеЬг, зараженных ВПГ, через 20-24 часа после введе HVJ?. вируса. В эюй работе показано также наличие патологических митс зов. 40-60% делящихся клеток имели раз:лчные аномалии: разрывы хро мое ом, грехгру.хповая метафаза, многополюсиость, образовани.- анафаз ных и телофззных мостов. При этом доминирующ:й формой пагологш \::гтозоз оказались колхицинэподобные мгтафазы. Кроме того, средз аномальных митозов встречалось рассеивание хромосом в метаЬазе бе: укорочения их. Наблюдались также картины отставания одиночных хро мосом в метакинезе. Возникновение аномальных митозов азторы обьяс няюг поражением веретена деления под действием ВПГ (Бочаров А. Ф. Кицак В.Я., Бочаров Е. Ф. и др., 19S2).

Вирусы способны подобно радиации и химическим мутагенам вы зчдал значительные изменения в клетках, в условиях in vitro и in vivo Хромосомные нарушения — наиболее выраженное проявление мутаген ного действия зирусоз. Цитогенел.ческий анализ показал наличие в куль турах Нср-2 и P3HR, хлето:: с микроядрами и с аберрациями хромосом Установлено достоверное увеличение клеток с шпероядрамн в зараженньг ВЭ5 культурах, по сравнению с контролем. Знач;ггельное число клло! имело структурные нарушения хромосом. Так в линии Нер-2 зараженно1 БЭБ - 18,5% клеток имело хрематидные разрывы, 9,5% клеток с ацентри чесхнми н точкозыми фрагментами и 4,5% клеток с обменами хромосом. В культуре P3HR¡'клеток со структурными нарушениями хромосом бьш> значительно меньше.

Качало изучения вопроса о взаимодействия ыехду вирусом просто го герпеса и хромосомами было положено работой Натраг и Elliso: (1961). Авторы изучали влияния этого вируса на хслесси линии МСН Струхг.-урные хзмененна затрагивали большей частью цеьпромерную зон\ В результате разрьзоз образовывались ацентрические фрагменты хромо сом. Натраг к Ellison егшечад-д, что хроматидные разрывы встречались : культурах, зарагкенкых кеинактавированным вирусом (Блюиккн В. Н Коновалова Н. Г., 1956). Литературные об изменениях ишетя

ческой активности к .смекенни в crpy;ciype хромосом прн в:фусной ин фекцнп in vitro довольно ебшлрньз. Наши исследования и исследован: i ряда авторов, свидетельствуют что ЕПГ оказывает на деллш:-:-:ся клепс колхнцккоподобкое действие. Действие вируса герпеса связано с щггопа тичесхиы действием его на клетки. В езязи с этим нарушается и формирс занке белков фибр?ьтяярнсго аппарата ахроматинового веретена деления

IS

клеток. Наиболее сложен и наименее разработан вопрос о механизм: полегающего действия вирусов на хромосомы. Niçois счнт?ет, что дей-двие вируса на хромосомы является либо "прямой ата>;ой" вируса на ге-1етическин аппарат, либо икгибицией соответствующих клегочных ;ер-.îeïTTOB. Возмо;кно, это действие частично осуществляется через промежуточные звен; л путем влияния на клеточные органонты, в частности лизо-:омы, при разрушении которых освобождается ДНК-аза, влияющая на труктуру хромосом (Баринский И. Ф., Шублалзе А. К., Посезая Т. А., 978; Збарский И. Б., 1990).

Принимая зо внимание .ведения о том, что БЭБ может перелггоро-£тъ в лимфоцитах периферической крови и зшггелмзлъных клетках рстс-юсоглоткн н предполагая зсзмо:кнук> его связь с опухолями эпиг^тиаль-юго происхождения, ï-n>i провели изучение особенностей специфического ■ммунного ответа к гирусу Эпклейна-Бзрр у больных с опухолью горта-[И. Есе кгследуеные больные были разделены на три группы в загискмос-и от уровня титров тнтитед :: вирус}- Эпштейна^Барр. За низкий уровень iT к ВЭБ были приняты титры G AT к BKA — менее 1:30 и отсутствие итров A-AT к ЗКА и G-AT к РА. За средний уровень AT к ВЭБ был:! ¡риняты татры IgG к BKA от 1:30 до 1:320 и уровень IgA к BKA и IgG ic 'А — 1:10. За высокий уровень А7 к ВЭБ были при:нпы титры IgG к !КА сс 1:320 до 1.640, уровень IgA к BKA 1:!0 и IgG к РА — 1:20. У ставлено, что у всех обследованных больных имеются пшфощлы с ц;по-атолегией. Было показано достоверное снижение процентного содержать нормальных твглфодктзв периферической крови в зависимости от гепемн экспрессии вирусного генома во все.1 хрупаад• ßqni-Hbs. При ана-кзе нормальных лимфоцитов нам:: были обнаружены лимфоциты с хзк-оялрз'л":, лзшфоблзсты, димфобллсты с м;с<рО£дранн, что позволяет релполагать с нестабильности генома у онкологически: бэлькил. Среди |НК-содер::а1д.к гирусоз особый интерес выз^ззет bhjvc Зпштейна-арр семейств герпесвкрусов. С момента открыто« он привлекает к себе собое внимание, кате сбладаюгднц с;с:сге.чнм:.::1 псте:пг'г.м:-:. Сраннк-елъио к главно считалось, что ВЭБ тесно ассоциирует с теш фомой Берк-пг-1. Однако, з последнее время показана связь -того »крусв и с -другими токачгегвеннымн новообразования: ta. 3 чааностя, с опухолями сшс-н-ых зкякз, небныл каемка, герта-п: (ïïesesa Т. ?»!., Кузнецова Т. И., рглова Л. H., Псдопдлсз-: 3. Д., 1591; CiBv.iorc D. H., Ando I., 2935; 'аезше Skassas M. ГС., Ясгелсегз S. A , Sch-.-arcanîrûbsr D. I., /35).

Прозеде:33-ie naja: ксслелс-за.гкя доказала, что уровни 53Б-тегифн^еди гнтгггсл у сксогогических больных ка порядок превькдет^т

lé

а.-;алогн':::ь:е показатели у здоровых шт. Изучение специфического иммунного ответа иа аншгеиы ВЭБ показало, чго высокие титры G-акгител к ?»КА и комплексу ранних а.»гп1генов наблюдались у 22% больных раком гор гаки, А-йнт::тел к BKA бьши зарегистрированы у 50% обследованных Соленых. Таким образом у больных раком гортани, патология лимфоид-н! L\ клеток сочетается с повышением экспрессии антигенов вируса Эп-глейна-Барр, что безусловно свидетельлиусг о нарушениях в системе ш.:-Механизм действия вируса Зпштейна-Барр еще ке достаточно изучен. Повышенн; уровня г im; тел к ВЭБ, по-видимому, происходит в результате угнетения у больных функций Т-клеточно1 о звена и.".:мукнгста, зюитрэлирпошего экспрессию вируса г организме. В-лим^ошгш, иммор-- шифрованные ВЗБ, теряют азгтиген-презезгшрутешук; способность и, С1.с:обнссть аз'.и^провап гндухцию секреции цитокпнов CD4+ клетками i'Dadmau P.., Sgagias М. К., Rosenberg S. A., Schwaitzc.aniber D. J., 1995). Мо;п:о предположить, существование нескольких механизмов ьза-пмсяейсгы::-: Ь'ЗБ с клеткой в организме. Один из механизмов зазслючается в то?/, что трансформация эпителиальных клеток наступает в результате их непосредственного ког пакта с вирусом. В подтверждение этому факту имеются сообщения, показывающие на наличие р»цептороЕ к вирусу Эп-штейк-Бьрр на поверхности опухолевых клеток, при назефарннгеальной карциноме, а также клеток нормального эпителия слюнных желез (Buiz II., иНагпл А., Huppe-Seyler. F., 1997). Однако, вполч», вероятно, что эпителиальные клетки инфицируются вирусом путем трансфехции при козпакте с содержат!:.' л: геном вируса В-лимфоцтами (Thompson J. L., Epstein M. A., Achong В. С. et. al., 1983). •

Показано, что внедрение вируса в клетку сопрозо;кпается не только активацией зслетсчпъ:х онкогенов, но н способствует изменению функционировать гсна-супрессора злокачественности р53. (Ноеиков В. С., 1996).

Исскедован'ш последних лет показали, что мутацгч гена р53 - самое часто: молекулярное изменение в различных новообразованиях человека. Они обнаружены в 50-60% опухолей более чем 50 разных типов, в том чиеле к в самых распространенных - раке легкого, гортани, молочной железы , толсто": кг:лки, простаты (Levin A. J., Momand Y., Fintay С. А., 1S91). Муганпи в гене р53 вызывают десгабипизс.шло генома, увеличивая вероятность возникновения различных генетических нарушений - изменений числа хромосом, разрывов хромосом, увеличения коиийности амплификации) отдельных генов, в частности тех, которые детерминирую: ■••е'-.г-рствсш^тэ устойчивость опухолевых клеток и прогрессию нозо-oöpaici: линй. Изменения экспрессии гена р53 влияют иа дчфференцировку ге.мопоее .скнх клеток. Онкогениый потенциал аномалий р53 связывают

: различными эффектами - изменением'! рег.ттшил клеточного цикла ;: шоптоза, нарушениями днффсренцировоч1гых программ м мсрфогенсги-lecKiix реакций зелетхи (Eileen \V„ Shuen-Kwe С., Hiley-Jen L., 1997). Глаз-¡ая функция белка р53 - охрана целостности генома клетки. Мутации е.ча р53 или потеря гетерозиготноеш в большинстве случаев соприпо::с-¡ают возникновение и развитие мкошх огтухол^Г; человека. Имеются с [ения о накоплении мутангнего белка р53 з ядрах раковых зелетох при [¿благоприятном течении заболевания: низкой степени дифференцирош::;, ¡ыраженной распространенности опухоли. В настояшем исслеяозаьии |ами издалось наличие связи меллу мутгиилми з гене р53 у больных с юЕообразовангшми гортани и особенностями тншн зеског-о течения га-юлеванния. Из 13 больных у S обнаружены соматические мупшпп в nr.z >53. У 50% пациентов были выявлены мутации в 5 или з 7 зкзоне р53 и у !% ганиентов в 3 окзоне. Наличие мутли;;1'; в гене р53 у больны, опухо-ями головы и шеи ассоциировалось с высокой степенью злохачествен-юсти опухоли и неблагоприятным исходом заболевания.

М. Kastan et.al (Kastan M.B, Oniekwere О, Sitransky D. u ai., 199П первые показали, что белок р53 играет ва^з;ую роль в С-гблоке, реалн-уя тем самым функцию надзора за стабильностью генома клетка. Му-антный белок р53 не способен останавливать клетки с поврежденной [НК в С,-фазе, он запускает репликацию ДНК на позрееатенной матрн-:е, что увеличивает вероятность возникновения злокачественной трас->ормаиии к легки (Bowersox J., 1S92). Цихлии-киназкые комплексы -лавные регуляторы хлеточиого штата, действующие в o6e:ix критических очках цикла, хоммитируя клетки к переходу из G( в S-фазу и из Gi-bxiv. митоз. Нарушение регуляции клеточного и;гг~г_ на уровне цтпелнноз веет к злокачественной трансформации клетки (Pines J, Hunter Т., 19S9; lunterT, Pines J., 1S91).

Роль белка p53 в сохранении целостности генома путем временной становки клеток с поврежденной ДНК з фазе G1 не вьсьтмет сомнений, днако механизм G1-блока был раскрмт недавно. Такой 6?.к~о;? был най-ен, это белок p21/WAFl. Ок индуиируетгл v>53 в ответ на повр-ежпск.ее [НК и останавливает клеточный цикл в поздней фазе G1. До нелгг.него ремени отсутствовали убелительные данные об участки ?'*?> в ргтудяцнп легочного цикла на уровне второй критической течки перед выходом летки из фазы G2 и вступлением, в митоз. У '-■тает- :лтг • г я-.ч i регулятором ступления хлепси в митоз, начиная с дрожжей и кончая клетками тканей еловеха, является митоз-промотируюшиД фактор MFF, в ссстап которого ходят два основных компонента - сбс2 и циапт В (О Conner R.U, Ferri ).К, White GA et al., 1992).

Таблица 1

Характеристика больных опухолями голозы и шеи

Л; по Распространен Морфологи Локализация Наличие

журналу ностъ процесса ческии диаг- мута уии в прогрессироз».

по ТИМ ноз зкзонах ния заоолевания

50 ТЗШМО умфеннодиф 5 прод. рост

14 ТЗШМО умереннодлд 5 посд. рост

21 тзшмо уЛ-ОеННОДИб 5 нет

35 ТЗШМ1 низкотшф 5 поод. рост

43 ТЗШМО уиереннодиф 7 прод. рост

24 Т4ШМ0 умереннодиф 7 рецидив

37 ТЗШМО умевеикодиф 73 иет данных

31 ТЗШМО низходиф 7 рецид-Ш

42 Т2М0М0 кизкодид рецидив

45 Т4Ы1 МО уыеоскнодиб нет

47 ТЗШМО уыеренношф нет данных

39 ТЗШМО уыереннодиф кет

32 ТЗШМО уиереннодиб нет

34- ТЗШМО •уыеоеннопиф нет

25 ТЗШМО высокодиб 1 нет

9 ТЗШМО иизходиб I рецидив

29 Т2ЖМ0 низкодиф | поод. рост

1С 1 -» ТЗШМО высокодиб I кет

Примечание: ннзкоднф. — тахо^фферйндкроглкна.': опухоль, укгргнно-зиф. — укд)Сйно&|фф^ргна!ф02гкная опухать, зысокодпф. — зысоко-д:'фогр с:-:ц;;ро£а:-мая опухоль, пред, рост— продолженный рост опухоли.

В псакдзее гренл стало £пзсстно, что МР? з др1пичсс:нх то-зс^ гакла состоит не га дзух, а по меньшей ^сре кз четырех компонентов: сс;2, ш-слипа Е,р21 к ГСНА (Уа1ез IX., Ъ'гхгеп N.. Би^еп 3., 1985). Поскольку р21 — ннду1лгруетсл белкогл р53, стала опезидной ¡хкзъ между последнкк и р^дулзцией шдое. зо зтерэа хргончессой точке. В зтот ыоыгкт белок р21 иогкет д.-йстзозато не только как гшп:51Ггор дшелнн-киназы, ко н РСМА, вызывая таким образом двойной блок МРР. Очевидно, белок р53 служит одним из главных компонентов зтой системы. Улавливая изменений повреждения ДНК, он индуцирует синтез кнгкокго-

pa cdc2-m-KJiKHa В и PCNA, белка p21, который встраивается в MPF и блокирует выход клетки из G2-6a3bi в митоз (Rensfcurg Е., Erbrecht S., van Heerden Willem Ei»., Kotze MJ., 1998).

Таким образом, переход клетки из фазы G2 в митоз очень жестко контролируется несколькими системами, начиная с белка р53, белзл-р21, ингибитора cdk4, тирозинкиназы cdc2, cdc25 циклином В. Такал жесгхоя система контроля за вступлением клетки в митоз сводит х минимуму возможность возникновения м) гантных клеток и их малилшзацию.

При проведении корреляционного анализа изучаемы:; показателей, было обнаружено, что злокачественные иозооОразсзанил головы :г шеи характеризуются определенной структурой взаимосвязи ме^дгу чнтсгене-тичесхими показателями. Неблагоприятный прогноз (рецидив, продолженный рост) заболевлння имел полохзлгельну» взаимосвязь с типом днффгрениирозкл опухоли. Наличие г.гутацин в гене р53 xocpejurpcr^jio с уровнем лимфобластоз, с клетками имеющими патологию митоза к : геста-б:льность генома. Стимуляция эксгрессии раннего антигена ВЗБ сопровождалась увеличением го:м?ю5л^ст:!ь!х клеток с микрояграми.

ВЫВОДЫ

1.Прн заражении з.фуссм Эпштейка-Барр перевиваемых клеток -лено-карциномы гортани (хкп Нер-2), повьпзастся пролиферагивноя активность и наблюдается достоверное увеличение 1;нслз клетох с патологическими митозами и структурными нарушениями хромосом.

2. В условиях in vitro и in vivo продухг.Екая вирусная инфекция зьпывает достозерное повышение числа хлетсх с кариопзтологней по сравнению с латентной.

3. У больных раком гортани с высоким уровнем БЭ5-специфнчеаа:х антител наблюдается спгмулггцш! пролнферагевкон атстивносги и увеличение лим-Ьспигсз периферической крохи с хромосомными аберрашгями.

Í. При ьысохсй степени хтокачалвенносп и прогресс; гронании заболевания раком гортани в клетках опухоли наблюдаются мутации з 5 и 7 зк-зонах гена р53.

>. Наблюдается достоверная йрамопроперит-гонольнал зхзнсимость менэу частотой мутаций гена р53 с одной стороны и лггышением и; логической азгпхексстн :i хромосомной нестабильностью лимусшетх тсро-зи больных раком гортани с яругой стороны. >. Повышение уровня акткгел к раннг?."у гнгггену БЭБ corvosожда¿тел хромосомной кесхаб;пг;нсст?ю лнмфешеаз згой ЬерячеохоЗ крови у больных раком гортани.

Сплсок ргбэт, ептап!КОБЗнт.и.гс по теме диссертации

1. А;члн\:уп>гежа:й эффект гумизодя а культурах Т-лимфопитах крови, подвергнуты:: воздейсшсэ циклофосфаном II Вопросы курортологии, физиотерапии у лечебной физкультуры. - 1992. - №4, - С.46-47.

2. Антимутагенный эффект гуминсвых кислот II Фундаментальные науки и прогресс клинической медицины: тезисы докладов в материалах конференции молодых ученых России "Фундаментальные науки и прогресс клинической медицины", посвященной 240-лепдо ММА им. И. М. Сеченова.- Москва.- 1993.-С.72-73.

3. Влияние вируса Элштейиа-Барр н ионизирующего излучения на иито-гснетические изменения II Атмосфера н здоровье человека: тезисы докладов в материалах Российской конференция и выстазгл "Атмосфера а злерезье человека". - Санкт-Петербург. - 1992. - С.42-43.