Автореферат и диссертация по медицине (14.00.15) на тему:Морфогенез клеточных реакций печени при различных клинико-морфологических формах описторхоза (Ультраструктурное исследование)

2 5 СЕН 1995

Министерство здравоохранения и медицинской промышленности Российской Федерации Челябинский медицинский институт

На правах рукописи

уд к: 616.36-076.4:616.995.122.21:576.31

Рычагова Ирина Георгиевна

Морфогенез клеточных реакций печени при различных клинико-морфологических формах

описгорхоза

(Ультраструктурное исследование) 14.00.15- Патологическая анатомия

Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора медицинских наук

Челябинск 1995

Работа выполнена в Кемеровском государственном медицинском институте, МкМастерском университете (г. Гамильтон, Канада)

Научные консультанты: доктор медицинских наук, профессор, член-

корреспондент АИН РФ В.Г.Бычков;

доктор медицины, доктор философии, профессор С.Т.Бипоп

Официальные оппоненты: Действительный член МАП, Заслуженный

деятель науки и Лауреат Государственной премии Удмуртской республики, доктор медицинских наук, профессор В.Я.Глумов;

Доктор медицинских наук, профессор Б.А.Ерман\

Член-корреспондент АТН РФ, доктор медицинских наук, профессор Л.Н.Кочутипа

Ведущая организация: Научно-исследовательский институт морфологии человека РАМН

Зашита состоится " 1995 г. в ■/(? ч на

заседании диссертационного совета Д 084.04.03 при Челябинском медицинском институте по адресу: 454092, г. Челябинск, ул. Воровского, 64.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Челябинского медицинского института.

Автореферат разослан "¿У" ^¿^ПЛ^Цщ^ г

Ученый секретарь диссертационного Совета,

доктор медицинских наук, профессор В.Н.Бордуновский

общдя характеристика работы

Актуальность проблемы: В настоящее время описторхоз отнесен к группе наиболее опасных биогельминтозов, две трети мирового ареала которого приходятся на территорию России (Озерецкоьская H.H., Сергиев В.П., 1993), где зарегистрировано свыше двух миллионов инвазированных. Значимость данного паразитоза и его осложнений определяется тем, что длительное течение болезни, быстрое по темпам и массовости вовлечение в процесс новых контингентов населения существенно снижают активность и потенциал жизни инвазированных (Бычков В.Г., 1992).

Сложная эпидемиологическая обстановка побудила ученых и практических врачей к активному поиску и внедрению эффективных антигельминтных препаратов, позволяющих достичь полной дегельминтизации широкого контингента зараженных. Однако, опыт профилактической и лечебной работы в очагах гельминтоза показывает, что существенных сдвигов в оздоровлении населения не достигнуто. Свидетельством этого является тот факт, что пораженность описторхозом в гиперэндемичных очагах после более чем 15-летчего периода массового лечения хлоксилом существенно не изменилась (Бронштейн A.M., 1987; Золотухин В.А.; 19Б9 и др.), что говорит об отсутствии значительного изменения эпидемической ситуации и ощутимого социально-экономического эффекта. Одной из ведущих причин сложившейся обстановки явились многочисленные повторные заражения как до, так и после дегельминтизации, повлекшие перестройку структуры заболеваемости с преобладанием супер- и реинвазионных форм описторхоза.

Социальные, медицинские и экономические проблемы описторхоза в индустриальных регионах Западной Сибири стали еще более острыми всвязи со значительными темпами миграции неиммунного населения в гиперэндемичные зоны и за их пределы.

За более, чем 100-летнюю историю изучения гельминтоза был рассмотрен широкий круг проблем - от эпидемиологических до молекулярных. а органом, получившим глубокое морфологическое освещение, явилась печень - экониша паразитов.

Детально на уровне световой микроскопии исследована патомор-фология данного органа в различные периоды описторхозной инвазии

(Зубов H.A., 1960-1989; Глумов В .Я., 1970-1984; Бычков В.Г., Ярославский В.Е. с соавт., 1970-1994 и др.); резидуальном периоде гельминтоза и онтогенезе. Выявлена роль паразитов в канцерогенезе, формировании многочисленных осложнений: аллергических и аутоиммунных реакций, поражения почек, ЖКТ, органов дыхания. Паразитологические и паразитоценологические аспекты описторхоза заставляют пересмотреть представления о клинике, патогенезе и морфологии ряда смешанных инфекций и инвазий.

Однако, несмотря на разнообразные направления изучения описторхоза, сведения об ультраструктурных преобразованиях печеночной паренхимы и динамике клеточных реакций крайне малочисленны и ограничиваются, как правило, освещением отдельных вопросов уточняющего характера. Ранее не применялся комплекс современных морфологических исследований для оценки их ультраструктурных превращений. В многогранной проблеме взаимоотношений хозяина и гельминта наиболее актуальными и важными, требующими детальных морфологических исследований, являются вопросы реализации коадаптации членов системы, механизмов патогенного воздействия гельминтов и противопаразитарной защиты, степени обратимости возникающих при паразитозе структурных сдвигов в эконише и за ее пределами, морфогенезе клеточных реакций организма хозяина согласно эволюции гельминта.

Световая микроскопия вносит известные ограничения в освещении механизмов патологического процесса на клеточном и субклеточном уровнях. Кроме того, при таком подходе вне поля внимания исследователя остаются механизмы формирования клеточной противопаразитарной защиты, адаптации клеток печени к стрессирующему воздействию гельминтов.

Электронная микроскопия в решении вышеуказанных вопросов способна значительно углубить представления о морфологической сущности процесса, полученные на уровне световой микроскопии, осветить аспекты паразитоза, недоступные для светооптического разрешения, что продиктовало необходимость выполнения данной работы.

цель исследования: Раскрыть морфогенез клеточных реакций печени при различных клинико-морфологических формах описторхоза.

Для достижения цели поставлены следующие задачи:

1. В эксперименте, используя электронную микроскопию, мульти-элементную идентификацию, данные гисто- и биохимических исследований, выявить в динамике характер клеточных реакций печени при различных клинико-морфологических формах описгорхоза.

2. Провести сравнительный анализ цитогенеза печени у исследованных групп животных и человека.

3. Изучить ультрасгруктурную патоморфологию органа в резиду-альном периоде гельминтоза.

4. Исследовать биохимические показатели мембранодестабилизи-рующих процессов и состояния системы антиоксидантной защиты в клетках печени лабораторных животных и человека.

5. Используя полученные данные выяснить основные клеточные механизмы противопаразитарной защиты на различных этапах пара-зитоза и динамику коадаптивных реакций в зависимости от онтогенеза гельминтов; определить основные причины, снижающие эффективность лечения и препятствующие восстановлению органа в резидуаль-ном периоде описгорхоза; выделить морфологические критерии стадий паразитоза.

Научная новизна. В работе впервые проведено комплексное ультраструктурное изучение динамики клеточных реакций печени при различных клинико-морфологических формах описгорхоза и резидуаль-ном периоде.

Впервые создана концепция цитогенеза различных клеточных популяций печени при данном гельминтозе.

Новым является выделение основных клеточных механизмов противопаразитарной защиты в процессе онтогенеза гельминтов. Определены ведущие механизмы повреждения клеток печени в различные периоды описгорхоза.

Впервые описан феномен транслокации яиц паразитов в печеночной паренхиме и клеточный механизм их элиминации.

Выявлена инициирующая роль яиц паразитов в поддержании фи-бропластических реакций и гранулематозного воспаления в хроническую фазу гельминтоза и резидуальном периоде.

Определены критерии возможной экстраполяции данных эксперимента на человека.

Комплексный анализ позволил сформировать концепцию болезни с обозначением и обоснованием ее периодизации.

Впервые рассмотрена динамика происходящих при гельминтозе морфологических сдвигов с позиций теории диссипативных структур.

Практическая значимость работы. Материалы работы используются:

1. в прозекторской практике врачами-патологоанатомами областной клинической больницы № 1 г. Тюмени, Кемеровского областного патологоанатомического бюро, патологоанатомического отделения Салехардской окружной больницы, гистологической лаборатории бюро судебно-медицинской экспертизы Ямало-Ненецкого округа, пато-логоанатомических отделений медсанчастей гг. Надыма, Ноябрьска, Нового Уренгоя, где используются предложенные морфологические критерии стадий гельминтоза, резидуального периода, повторных инвазий для диагностики и представления танатогенеза при описторхозе;

2. в учебном процессе при проведении практических занятий по темам "Продуктивное воспаление", "Диспротеинозы" для лечебного, педиатрического, медико-профилактического факультетов на кафедрах патологической анатомии Кемеровского государственного медицинского института, Тюменского медицинского института и кафедре морфологии Сургутского университета;

3. в научной работе на кафедре патологической анатомии Тюменского государственного медицинского института; Тюменского научно-исследовательского института краевой инфекционной патологии, институте медицинской паразитологии^ и тропической медицины им. Е.И.Марциновского; МкМастерского университета.

Информационное письмо: "Основные клеточные механизмы про-тивопаразитарной защиты печени при описторхозе" Тюмень, 1995.

Апробация работы. Основные положения и материалы, вошедшие в диссертацию, доложены и обсуждены на заседаниях Проблемного Совета "Здоровье человека в условиях освоения Западно-Сибирского ТПК" (Тюмень, 1992; 1993; 1994), П-й межрегиональной конференции патологоанатомов Урала и Западной Сибири "Актуальные вопросы патологической анатомии". (Курган, 1993); заседаниях Ученого Совета Тюменского НИИ краевой инфекционной.патологии (Тюмень, 1993, 1994); 1У-ом Конгрессе патологоанатомов Украины (Чернигов.

1993); 1-ом Межреспубликанском симпозиуме "Печень, стресс, экология" (Иркутск, 1994); Ш-м съезде анатомов, гистологов, эмбриологов Российской Федерации (Тюмень, 1994); Н-й научно-практической конференции "Актуальные вопросы гастроэнтерологии" (Томск, 1994); на заседании Проблемного Совета "Здоровье человека на Севере" Тюменского научного центра СО АИН РФ (Тюмень, 1994); Проблемной комиссии "Морфогенез и регенерация" (Тюмень, 1994); на заседании Проблемной комиссии КГМИ (Кемерово, 1994); УШ-м Всемирном Конгрессе паразитологов - 1СОРА-УШ (Измир, 1994), а также кафедральных совещаниях патологоанатомов Кемеровского, Тюменского и Челябинского медицинских институтов (1993, 1994, 1995); междепарта-менском совете МкМастерского университета (Гамильтон, 1993). По теме диссертации опубликовано 20 работ.

Объем и структура диссертации. Работа состоит из введения, обзора литературы, глав, посвященных методам исследования и включающих собственные данные, главы "Обсуждение полученных результатов", выводов, внедрения в практику и указателя литературы. Материал изложен на 370 страницах, иллюстрирован 102 рисунками, 33 таблицами, 11 графиками, 1 схемой. Указатель литературы содержит 421 публикацию, в том числе - 280 отечественных и 141. зарубежную.

материал и методы исследования

Характеристика экспериментального материала

Всего в эксперименте находилось 263 хомяка разводки питомника "Столбовая" АМН России массой 100.0-110,0 г. Все животные разделены на следующие группы:

1 - инвазия описторхисами

2 - суперинвазия

3 - резидуальный период

4 - реинвазии

5 - контроль - интактные животные

1 серия эксперимента

Инвазия осуществлялась путем введения в глотку хомяков 50 жизнеспособных метацеркариев описторхисов, выделенных из язей одного биотопа.

Извлечение личинок выполняли методом ферментативного переваривания искусственным желудочным соком (Глазков Г.А., 1977). Жизнеспособность инвазионного материала определяли по выходу гельминтов под воздействием человеческой желчи. Забой животных производился на 1-е, 3-е, 7-е, 10-е, 16-е, 20-е, 24-е, 29-е, 41-е, 62-е, 96-е, 120-е сутки эксперимента.

2 серия эксперимента

Суперинвазия осуществлялась на 35-е сут. описторхоза путем дополнительного введения 25 метацеркариев. Забой животных производился на 7-е, 16-е, 29-е, 62-е, 96-е, 120-е сут. после повторного заражения. Суперинвазии вызывали свежевыделенными личинками.

3 серия эксперимента

Инвазированные животные (32 хомяка) на 41-е сут. дегельминти-

зированы празиквантелем в дозе 400 мг/кг в 2 приема с интервалом в 2 часа. Данная схема лечения наиболее эффективна (Молокова O.A., 1988, 1991), т.к. дает в этот период гельминтоза наиболее высокие показатели эксгенсэффективности (процентное соотношение животных, полностью освободившихся от инвазии, к пролеченным). После лечения осуществлялся неоднократный контроль полноты дегельминтизации по N.Stoll. Дополнительно производилось полное гельминтологическое исследование по К.И.Скрябину забитых на 27-е, 127-е сут. животных после приема празиквантеля.

4 серия эксперимента

Моделирование реинвазионного описторхоза. На 41-е сут. описторхоза группа сирийских хомяков (70) была дегельминтизирована по схеме, аналогичной в 3 серии эксперимента, затем проводился неоднократный контроль полноты излечения по N.Stoll. Полная дегельминтизации была достигнута у 56 животных (показатель экстенсэффгктивно-сти составил 79,2%).

На 30-е сут. резидуального периода хомяки были реинвазированы 50 жизнеспособными метацеркариями описторхисов. Забой животных осуществлялся на 7-е, 16-е, 29-е. 62-е, 96-е, 120-е сут. после повторного заражения. Кроме того, из этой группы было забито 6 хомяков в день реинвазии для оценки фонового состояния печени .

Группу контрольных животных составили 9 хомяков, которые содержались в стандартных условиях вивария (З.Ф.Лоскутова, 1990).

Количество единиц наблюдения вычислено с учетом рекомендаций по достаточности выборки (Автандилов Г.Г., 1980, 1990), при этом пользовались первым порогом вероятности безошибочного прогноза.

Забой животных проводился под эфирным рауш-наркозом после 12 часов голодания, в одно и то же время суток (с 8 до 10 ч.).

Помимо экспериментальной части, объем исследований предполагал изучение аутопсийного материала печени животных (кошки) - естественных хозяев описторхисов.

В гиперэндемичном очаге был произведен отлов и забой под эфирным наркозом 9 кошек с массивной степенью инвазии (400-600 гельминтов) при полном гельминтологическом исследовании печени по Скрябину К.И.

Характеристика клинического (операционного) материала

Исследовано 12 случаев операционного материала печени больных описторхозом. Забор ткани осуществлялся во время операций на этом органе в хирургическом отделении областной клинической больницы г. Тюмени при наличии показаний для данного исследования. Глубокую благодарность за помощь в выполнении этого раздела работы приносим хирургам: д.м.н. Б.К.Гиберту, к.м.н. Е.Л.Янину. Всего получено 12 биоптатов печени людей зрелой возрастной группы (1-2 периоды) с различными клинико-морфологическими формами описторхоза: хроническая инвазия, супер- и реинвазия.

Методы электронной микроскопии, мультиэлементного анализа

Для данного раздела работы кусочки печени фиксировались в 2% забуференном растворе четырехокиси осмия (префиксатор - глюта-ральдегид в 0,2 M фосфатном буфере), обезвоживали в спиртах восходящей концентрации и заливали в spurr. Полутонкие и ультратонкие срезы изготовляли стеклянными и алмазными ножами на ультрамикротоме Lk.B-Nova (Швеция) и контрастировали уранилацетатом и цитратом свинца на приборе Ultrostain с использованием фирменных растворов.

Трансмиссионная электронная микроскопия проводилась на микроскопе системы JEOL-1200 Biosystem Transmission Electron Microscope

под ускоряющим напряжением 80 кВ. Амплитуда увеличений - 800100000 раз.

Для сканирующей электронной микроскопии взяты образцы печени размером 15x5x2 мм. Кусочки фиксировали в 3% растворе глютара-льдегида в 0,1 M фосфатном буфере. После промывания их дополнительно фиксировали в 1% растворе четырехокиси осмия на фосфатном буфере (12 ч), дегидратировали в спиртах восходящей концентрации и инкубировали на 12 ч в диэтиловом эфире. Далее кусочки печени или паразитов замораживали в жидком азоте и подвергали вакуумной сушке, после этого материал устанавливали на объектодержателе и поочередно напыляли углеродом и золотом в вакуумном испарителе. Образцы исследовали в сканирующем режиме на электронном микроскопе марки Philips 501 Scanning Electron Microscope.

Одновременно с трансмиссионной электронной микроскопией для уточнения микроэлементного состава отдельных участков ткани проводилась многоэлементная идентификация срезов с использованием мультиканального анализатора и Tracor Northen Х-гау детектора.

Методы биохимического исследования

Возникающие патохимические реакции тем или иным образом способны реализоваться в мембранодестабилизирующих процессах. Для более полной интерпретации результатов субмикроскопического изучения тканей было произведено их сопоставление с показателями мембранодеструктивных процессов, состоянием систем антиоксидант-ной и фосфолипазной активности, а также отдельных метаболитов описторхисов, как факторов, инициирующих дестабилизацию клеточных мембран.

Биохимические реакции для изучения структурно-функциональной организации мембран клеток печени представлены в таблице 1.

Динамика патогенетических механизмов дестабилизации мембран воспроизводилась соответственно онтогенеза паразита в макроорганизме - в острой (10 сут) и хронической (60, 90 сут) стадиях инвазионного процесса.

Параллельно с данными исследованиями изучались поверхностные фракции фосфолипидов в смывах с наружных оболочек мембран половозрелых описторхисов в абсолютных (мг/г ткани) и от носитель-

ных (%) величинах - лизофосфатидилхолин, фосфатидилсерин, фосфа-тидилхолин, сфингомиелин, фосфатидилэтаноламин, а также фосфо-липазная активность (мМоль/мин). Определение фосфолипидного спектра проводили методом тонкослойной хроматографии на силика-геле (ШтальЭ., 1965).

Таблица 1

Биохимические реакции для изучения структуры и функции мембран клеток печени

Выявленное соединение Единицы измерения Автор метода

Диеновые конъюгаты полиненасыщенных липидов нМоль/г ткани И. Д.Стальная (1977)

Р-харотин мкМоль/л А.А.Покровский (1969)

Фосфолипазная активность, К.Ф.3.1.1.4. мМоль/мин Х.Брокерхов, Р.Дженсен (1978)

Супероксидцисмутаза К.Ф.1.1.15. ед. активности В.Н.Чумаков, Л.Ф.Осинская (1977)

Вышеперечисленные биохимические реакции выполнены на сирийских хомяках.

Учитывая, что описгорхисы провоцируют мембранодесгабилизи-рующие процессы и за пределами очага инвазии, обеспечивая генерализованное повреждение цитомембран, регистрировались отклонения физико-химических свойств эритроцитов у больных описторхозом и сопоставлялись с аналогичными показателями здоровых людей. Выявлялось содержание гидроперекиси липидов (мкМоль/106 клеток), диеновых конъюгатов (нМоль/мг липидов), малонового диальдегида (нМоль/мг липидов), определялись фосфолипазная активность (% гемолиза) и механическая стойкость эритроцитов (% гемолиза).

Методы морфометрии и ультраструктурного стереологического

анализа

Для оценки выраженности патологических процессов на клеточном и субклеточном уровнях использовались следующие морфометри-ческие показатели.

Степень воспалительных и склеротических процессов регистрировалась в полутонких срезах посредством индекса площади воспалительной инфильтрации (%), занимаемый клеточным и волокнистыми компонентами, и доля последнего (%) в составе инфильтрата. При этом

была использована в световом микроскопе квадратная тестовая система площадью 6400 мкм2, нанесенная на окуляр.

Единую функциональную систему с гепатоцитами образуют синусоидальные клетки, которым отводится ведущая роль в поглощении экзо- и эндогенных веществ, метаболизме и выведении продуктов обмена, секреции биоактивных веществ, элиминации продуктов распада и жизнедеятельности аутологичных тканей, регуляции пролиферации гепатоцитов (Аруин Л.И., 1985; Шербаков В.И., 1989 и др.). Ввиду этого регистрировалось синусоидально-гепатоцитарное число - количество синусоидальных клеток на 1000 гепатоцитов (Самсонов В.А., 1975). Несмотря на очевидную общность синусоидальных клеток (Секамова С.М., Бекетова Т.П., 1989), проводилась их дифференцировка при мо-рфометрии ультраструктур согласно критериям E.Weibel (1972), т.к. их реакция в стрессовых ситуациях не является полностью идентичной (Шкурупий В.А., 1989). При проведении морфометрии звездчатых ре-тикулоэндотелиоцитов (ЗРЭ) и эндотелиальных клеток соблюдался принцип их равного представительства от каждого исследуемого объекта: число профилей срезов (50 - для ЗРЭ; 100 - для эндотелиоцитов), обусловлено особенностями презентации CK в печени.

С целью выяснения закономерностей морфогенеза реакции печеночных клеток оценивались морфометрически межклеточные промежутки и внутриклеточные органеллы: ядерно-цитоплазматическое отношение, объемная плотность лизосомальных структур и их состав (%), митохондрии, каналов эндоплазматического ретикулума, число фиксированных и свободно расположенных рибосом. В синусоидальных клетках кроме вышеуказанных структур регистрировалась объемная плотность пиноцитозных везикул. Для уточнения резервных возможностей гигантских многоядерных клеток (ГМК) в процессе оводеструк-ции сопоставлялась объемная плотность фаго- и лизосом в разных фенотипах ГМК и аналогичными показателями в макрофагах.

При проведении морфометрии печеночных клеток использовали по 120 их негативов, для морфометрического анализа ГМК - 91 негатив с изображением клеток до 10 мкм. Морфометрические исследования выполнены на компьютерной тестовой системе "MOP -Sistem".

Статистическая обработка полученных данных проводилась с необходимой корректировкой на ЭВМ систем "IBM/PC/XT" с применс-

нием специальных программ. В работе использованы только корректированные показатели, одновременно с указанием которых в сводных таблицах приводились критерии вероятности различия между группами животных (Р).

Стереологические параметры вычислены согласно рекомендациям В.\Уе1Ье1 (1972, 1979), их номенклатура приведена в соответствии с указаниями Международного стереологического общества.

Электронномикроскопические и морфометрические исследования, мультиэлементный анализ образцов печени выполнен в лаборатории электронной микроскопии МкМастерского университета (г. Гамильтон, Канада, зав. лабораторией профессор С.Т.Бтоп); биохимический анализ - в клинической биохимической лаборатории ТГМИ (зав. лабораторией - профессор В.А.Жмуров).

Коллективам и руководству лабораторий ТНИИКИП, Тюменского государственного медицинского института, МкМастерского университета приносим глубокую благодарность за предоставленную возможность выполнить исследования в полном объеме, консультативную помощь и поддержку.

результаты исследования и обсуждение

Результаты исследования экспериментального материала

Анализ ультраструктурной организации органа в динамике показал, что морфологические сдвиги в нем развиваются после попадания описторхисов в экстрамуральные желчные протоки на 3-й сутки инвазии. Изменения затрагивают преимущественно протоки крупного калибра, их перидуктальные пространства и заключаются в пролиферации холанпюцитов, появлении в них признаков апокриновой секреции, разобщении клеток. Это свидетельствует о том, что структурные преобразования в печени фиксируются с момента непосредственного контакта гельминтов с эконишей, когда их жизнедеятельность полностью зависит ог ее способности обеспечить питание. Интактность печеночной паренхимы в первые сутки паразитоза, вероятно, связана с тем, что в данный отрезок времени метацеркарии. а, затем, и высвободившиеся описторхисы располагаются в просвете желудочно-кишечного тракта и продвигаются к желчным путям, используя в качестве трофи-

ки питательные запасы метацеркария. Исходя из этого, их токсичсское и механическое воздействие невелико, а данный этап паразитоза можно определить как инкубационный период, так как в этот отрезок времени описторхисы достигают фазы онтогенетического развития, позволяющей им активно влиять на организм хозяина для получения адекватной трофики.

В силу непосредственного контакта с гельминтами, холангиоцел-пюлярное звено печеночной паренхимы (ХЦД) на начальных этапах паразитирования подвержено более выраженным некротическим, про-лиферативным изменениям, в то время как структурные превращения гепатоцеллюлярного дифферона (ГЦД) были незначительными. Суть происходящих в ХЦД преобразований сводилась к активизации ауто-фагоцитоза, объектом которого становились мембранные структуры или основное вещество цитоплазмы, подверженное распространенной сегрегации. Из-за энергозависимости аутофагоцитарных процессов, обеспечение энергией осуществлялось за счет распада гликогена и усиления ее синтеза на митохондриях, что сопровождалось достоверным (Р^0,05) повышением их объемной плотности (18,2±0,86%), укрупнением; удлинением и беспорядочным расположением крист, просветлением митохондриального матрикса и очаговым лизисом мембран. Пролиферация эпителия сопровождалась появлением в ряде клеток признаков апокринововой секреции, указывающей на защитную местную реакцию в ответ на токсическое, механическое влияние паразитов.

Объемная плотность ЭПР, численная плотность рибосом повышалась медленными темпами, что указывает на то, что пластические ресурсы для наращивания объема клеток и их пролиферации высвобождались, главным образом, за счет реконструкции органелл в лизосо-мальном аппарате. Это является скоростным способом адаптации печеночных клеток в ответ на стрессовое воздействие (Шкурупий В.А., 1989). Принципиальное отличие стресса при паразитозе заключается в том, что индуктором описанных изменений в равной степени является и токсическое (антигенное) влияние описторхисов и их ростстимули-рующий эффект, а также необходимость осуществления противопара-зитарной защиты (выработка факторов местного иммунитета). Пролиферация холангиоцитов базируется на адекватном энергетическом и

пластическом обеспечении на основе гипертрофии и гиперплазии структур, аутофагоцитозе, потере гликогена.

Острый описторхоз

С 3-х сут. инвазии наблюдалось включение клеточной антипаразитарной защиты; она заключалась в направленном движении эозинофи-лов в просвет желчных протоков, осуществляемом межэпителиально по расширенным межклеточным контактам пролиферирующей выстилки. В указанный срок хемотаксис имеет характер единичных клеточных пассажей, однако в дальнейшем этот процесс приобретает интенсивный характер. С 7-х сут. инвазии и на протяжении всего острого периода эозинофил выступает основной клеткой-эффектором противо-паразитарной защиты. Структура эозинофильных гранулоцитов соответствовала фенотипу - hypodens, которым присуща способность растворять базальную мембрану эпителиоцитов за счет высвобождения из их гранул протеина (S.Tsuda et al., 1992). Это свойство клеток могло в значительной степени "облегчить" процесс их продвижения через эпителиальный барьер, т.к. для осуществления основной функции эозино-филам необходим прямой контакт с паразитом. Попадая в просвет желчных протоков, многочисленные эозинофилы дегранулировали, а выделенные гранулы располагались свободно или фиксировались на тегументе паразитов и апикальном полюсе холангиоцитов, что сопровождалось деструктивными изменениями в последних. Исходя из изложенного, можно предположить, что в острую фазу описторхоза некроз холангиоцитов индуцирован не только механическим и токсическим действиями паразитов, но и влиянием эозинофилов. Данные P.Filley et al. (1982) показывают, что действуя токсически на паразита, ГОБ эозинофильных гранул может повреждать и клетки хозяина.

Эозинофильная инфильтрация и дегрануляция не являются экстраординарным феноменом при гельминтозах. Однако мы впервые столкнулись с этим процессом в желчи - среде, не являющейся естественной для локализации данных клеток. Дегрануляция эозинофилов в желчи не является следствием их закономерной гибели в чужеродном веществе, а процессом, с которым сопряжено высвобождение пероксида-зных везикул и тубул из специфических гранул, возможный только в момент распада клеток (A.M.Dvorak, 1992). Поскольку возможен непосредственный контакт цитотоксических клеточных элементов организма хозяина с паразитом, становится спорным вопрос об абсолютной

"защищенности" описторхисов от клеточного эффекторного воздействия в силу их внутрипротокового расположения.

Анализ полученных результатов позволил сделать вывод, что основной клеткой - эффектором ранней клеточной антигельминтной защиты является эозинофильный гранулоцит. По мере хронизации описторхоза первостепенное значение этих клеток в значительной мере утрачивается, передаваясь ГМК.

Воспалительный инфильтрат при остром гельминтозе имеет преимущественно перидуктальную ориентацию и состоит из клеток гематогенного происхождения, среди которых доминируют эозинофилы -25,9±3,2%, лимфоциты - 15,7±1,8%, плазматические клетки - 23,5+2,2% (табл. 2). Данный процесс сопряжен с достоверным увеличением числа (138±11 на 1000 гепатоцитов) и гипертрофией синусоидальных клеток, что влечет за собой уменьшение пространства Диссе, затруднение трофики гепатоцитов и развитие в них дистрофических, некробиотических изменений: количество погибших гепатоцитов составило 147±9,6%о. Цитотоксических контактов клеток гематогенного происхождения и гепатоцитов зарегистрировано не было, а коллапс балок, некроз клеток печени был связан с нарушением пластических реакций, мембрано-дестабилизирующим эффектом гельминтов, а не аутоиммунными реакциями.

Таблица 2

Клеточный состав воспалительных инфильтратов портальных трактов печени лабораторных животных в динамике экспериментальной инвазии описторхисами (%)

Сроки наблюдения (сут) эозинофилы лимфоциты плазматические клетки фибро-бласты нейгро-филы гистио- , циты

7 18,7±0,38 32,16+1.95 6,7310,85 4,1410.63 10,6212,9 -

10 24.17+2,02 21,42±2.15 13.5211;45 9,5210.82 6,1511,8 6,9210,93

16 25,90±3.14 15.67±1.8 22.5312,28 10,2611.06 4,1211,07 12.0510,86

24 28,81+2,93 14,9310,86 23,6811.96 12.1811.21 2,3610,91 14,3611,08

29 18; 16+1 ,64 15,310.62 26,6012.82 14.5811.36 2,1010.66 20,4312.13

. 41 20,1 ±1,13 9,9210,26 28.312,81 12.513,16 1.210,08 31,0814,24

(7 10,8913,14 8.0311.63 28,6314,18 11,5512,26 1.1310,10 42,6716,22

96 4.09+0,11 7.1410,13, 17.9111,58 16,3111,13 0.9010.06 45,8615.36

120 4,69±0.56 13.09+1.64 30.1412,33 17.6714.18, 3,1910,05 28,5113.34

Потенциал мембранодеструкции несет в себе само формирование описторхозной инвазии в силу биологического свойства гельмннтов контактного пищеварения.

Через 10 сут. после заражения в печени лабораторных животных резко повысилась (Р<0,001) активность эндогенных фосфолипаз и накопление диеновых конъюгатов - первичных продуктов перекисного окисления липидов (210,5% по отношению к нормативному уровню), менее заметно повышение активности свободнорадикального окисления липидов (8,3%) (табл. 3). Поскольку реакции ПОЛ протекают преимущественно в липидной фазе мембран, они нарушают их проницаемость и микровязкость, ионный транспорт и энзимную активность (Логинов A.C., Матюшин Б.Н., 1991). Вероятно, это является одним из механизмов разрушения мембран и фиксируемой фрагментации ЭПС, каналов комплекса Гольджи, митохондрий. Кроме указанного, избыточная активность мембранодеструкции при остром описторхозе могла быть детерминирована метаболитами описторхисов. При изучении поверхностных фракций фосфолипидов в смывах с наружных оболочек мембран гельминтов установлено, что содержание лизофосфатидилхо-лина вдвое превышает уровень фосфатидилхолина. Наряду с этим, у паразита выявлен определенный уровень активности фосфолипаз (3,8±0,6 мМоль/мин). Лизолецитины. обнаруженные в описторхисах, резко изменяют текучесть мембран и способствуют высвобождению медиаторов воспаления и аллергии, обладают выраженным проокси-дантным действием, обусловливая детергентное влияние на клетки (.1. Axelrod. 1980).

Таким образом, при остром описторхозе мембранодеструкция патогенетически связана с аллергическими реакциями. Клеточная фаза, ответственная за местное воспаление, имеет, очевидно, то значение, что она вовлекает другие медиаторы, например эозинофильный хемо-гаксический фактор анафилаксии (НХВ - А), фактор, агрегирующий тромбоциты (ФАГ), индуцирующие активацию В-лимфобластоидных клеточных линий (В.Mazer et al.. 1990). высвобожденные вещества влияют на сосуды и свертывающую систему крови. Поэтому, аллергические реакции раннего периода описторхозной болезни проявляются прежде всего морфологически выраженными явлениями сосудисто

гуморального характера, а не прямого повреждающего действия на печеночные клетки.

Таблица 3

Показатели перекисного окисления липидов, активности эндогенных фосфолипаз гомогената печени в различные периоды гельминтоза

Анализируемые показатели Количественное выражение показателей в печени лабораторных животных

контроль инвазия Юсут инвазия 62сут инвазия 96 сут

Диеновые конъюгаты, нМоль/г ткани 172,3±7,3 186,6±14,5 Р| 228±11,5 Р. Р2 191,0±10,7 Р. Рг

Фосфолипазная активность, мМоль/мин 9,5±1,6 29,5±1,6 . Р. 15,6±2,14 Р| Р2 18,5±1,6 Р1 Рг

Супероксидцисмугаза, ед. 0,21 ±0,07 0,45±0,2 Р| 0,19±0,06 Р| Р2 0,11 ±0,03 Р1 Р2

Р'^0,05 Р"<0,01 Р"*20,001

Р| - вероятность случайности различия с аналогичным показателем в

контрольной группе Рг - вероятность случайности различия с аналогичным показателем в предыдущий период наблюдения

Патогенетическая роль антител и циркулирующих иммунных комплексов реализуется, вероятно, в более поздние сроки - период полового созревания гельминтов и начала яйцепродукции.

К этому моменту элементы холангио- и гепатоцеллюлярного диф-феронов претерпевают изменения, однотипные по характеру, но несинхронные по времени. Более скоростной реализация коадаптивных механизмов была в ХЦД, где к 16 суткам инвазии регистрировалось ослабление деструкции', снижение объемной плотности лизосомального аппарата (0,36±0,06%), повышение доли синтетических органелл. Активная пролиферация эпителиальной выстилки приводит к полиморфизму клеток (митотический индекс - 5,6±0,7%о). В гепатоцитах, наоборот, начинают превалировать процессы аутофагоцитоза (Уу-лизосомальных структур - 2,2±0,2%), активизация энергосинтеза, потери гликогена. Усиливается апоптоз, указывающий на адаптивные реакции на основе реконструкции в границах клеточного уровня. Число погибших гепатоцитов достигает 167±12%о.

Накоплением в паренхиме продуктов клеточной деградации можно объяснить повышение числа синусоидальных клеток (СК) (147±16 на 1000 гепатоцитов), сопряженное с увеличением их объема, так как фагоцитарная функция значительно усиливается при поступлении фагоцитируемого материала, в том числе и некрозе гепатоцитов (Аруин Л.И., 1985). В СК регистрировалось увеличение объемной плотности лизосомальных структур: 24,6% - в клетках Купфера; 13,0% - в эндоте-лиоцитах. Немаловажной в раннем периоде гельминтоза, когда разрушение печеночных клеток носит распространенный характер, является протекторная роль ЗРЭ. Доказано, что при повреждении синусоидов клетки Купфера могут внедряться в них и пломбировать место разрыва (Маянский Д.Н., 1981), а так же обезвреживать продукты распада и жизнедеятельности аутологичных тканей, КК способны синтезировать основные компоненты комплемента, лизоцим, интерлейкины, простаг-ланднны (В.М.Се^э, 1979), посредством чего участвовать в формировании местного иммунитета и ограничении воспаления. В эндотелиа-льных клетках помимо усиления микропиноцитоза сохранялась высокой синтетическая активность, что можно объяснить их ролью в синтезе базалыюй мембраны синусоидных капилляров (К..А.Вагс)ас1т, У.ЮеБтеШ, 1985). Последнее в дальнейшем имеет важное значение в "капиллярнзации" синусоидов и перигепатоцеллюлярном склерозе.

Анализ клеточных реакций печени в острый период инвазии показывает, что равновесия в системе "паразит - хозяин" нет, т.к. организм хозяина вынужден совершать большую дополнительную внутреннюю работу по адаптации к стрессору в антипаразитарной защите и "содержанию" паразита.

патологически измененной печени преобладают процессы внутриклеточной регенерации, которая является ведущим способом восстановления утраченных функций при любой патологии данного органа. В ранни)! период инвазии наблюдалось нарастание количества гипертрофированных и двуядерных гепатоцитов, которое достигает наибольшего значения на 16-29 сутки инвазии (68-70%о), снижаясь к 62 суткам (58,2±4,47%о), а наиболее отчетливое понижение их наблюдалось к 120 суткам (45,2+6,19%.). Содержание гипертрофированных гепатоцитов оставалось повышенным и но прошествии острого периода, к 96-м суткам гельминтоза их доля составила 77,5±8%<> (табл. 4).

Таблица 4

Показатели регенерации печеночных клеток в различные периоды экспериментальной инвазии описторхисами (%)

Сроки Исследуемые параметры

наблю- гипертрофи- двуядерные ге- митотический митотический

дения рованные гепа- патоциты индекс гепа- индекс холан-

(суг) тоциты тоцитов гиоцитов

3 62,8±4,13 30,8±5,08 1,0610,31 1,610,23

Р1 Рг Р| Р2 Р. Рг Р| Рг

7 60,4±3,2 68,7±10,9 0,910,12 2,2810,68

Р. Рг Р| Р2 Р. Рг Р. Рг

10 72,0±2,58 74,3±3,55 0,81+0,02 4,0810,22

Р1 Рг Р. Р2 Р. Рг Р. Рг

16 75,6±2,8 78,8±4,01 0,710,08 4,611,07

Р| Р2 Р. Р2 Р| Рг Р| Рг

24 83,114,06 85,3±4,18 1,110,02 5,810,81

Р| Р2 Р. Рг Р| Рг Р| Рг

29 80,3±3,25 74,6±3,92 1,0310,05 6,9311,07

Р| Рг Р| Рг Р. Рг Р| Рг

41 76,16±5,80 65,5± 1,38 2,4210,92 5,6310,71

Р. Р2 Р| Рг Р. Рг • Р| Рг

62 73,6517,68 58,1814,47 1,910,08 3,4411,02

Р> Р2 Р| Рг Р| Рг Р. Рг

96 77,5+8,86 50,6113,92 2,5610,86 2,0510,07

Р. Рг Р. Рг Р| Рг Р| Рг

120 68,8±7,92 45,1816,19 3,01+0,23 1,0410,62

Р| Р2 Р( Рг Р. Рг Р| Рг

Р<0,05 Р<0,01 Р<0,001

Р| - вероятность случайности различия с контрольной группой

Рг - вероятность случайности различия с в предыдущим сроком наблю-

дения

Данный феномен можно объяснить тем, что в условиях значительной альтерации, воспалительных изменений, когда уровень некроза высок, внутриклеточная регенерация позволяет не прерывать деятельное состояние клетки, т.к. мйтотически делящаяся клегка не способна выполнять жизненно важные функции, находясь в функционально покоящемся состоянии во время митоза (Саркисов Д.С. с соавг., 1987). Достоверное (р<0,05) повышение мнтотического индекса гепагоцитов наблюдается по мере хронизации паразнтоза.

Анализ полученных в ходе эксперимента данных свидетельствует, что сам паразит, как внешний фактор, не может ни вызывать, ни породить в организме хозяина ничего сверх того, что в последнем имеется в виде эволюционно развившихся потенций. Стереотипность специфических видовых реакций и есть реализация этих потенций в виде проли-феративной, продуктивной, клеточных реакций, фагоцитоза, цитоток-сического воздействия на гельминты. Данное положение прослеживается как на клеточном, так и на субклеточном уровнях, где особенности преобразования органелл и цитокинеза соответствуют реакции на стрессовое воздействие (Шкурупий В.А., 1989).

Поскольку паразит и хозяин составляют единую устойчивую, но неравновесную систему, то их совместная эволюция идет по пути сближения связей и установления структурных контактов, наиболее ярким примером которых является занос яиц гельминтов в толщу печеночной паренхимы. Этому могло способствовать нарушение целостности эпителиального барьера, как результат его повреждения паразитом или хемотаксиса гематогенных элементов.

Хронический период описторхоза

Яйцепродукция, сопровождающаяся поступлением яиц паразитов за пределы желчных протоков, коренным образом изменяет характер клеточных реакций. Основной чертой данного периода инвазии является смена клетки-эффектора. Эозинофилы утрачивают свое первостепенное значение, их число достоверно ( р<0,01) снижается, появляются гигантские многоядерные клетки (ГМК), которым принадлежит ведущая роль в элиминации яиц гельминтов. Этот феномен обусловлен биологическими свойствами указанных клеток. Эозинофилию вызывают крупные антигены нефагоцитируемых размеров, меньшие частицы не обладают таким действием (М.А.Шеп й а!., 1983). Фагоцитоз опистохисов невозможен, его яйца, являясь персистирующим раздражителем, доступны фагоцитозу, а ГМК - единственные клетки в организме хозяина, способные осуществить утилизацию яиц. В ходе эксперимента наблюдалась полная оводеструкция в цитоплазме гигантских симпластов. Данный процесс длительный, по протяженности он может быть сравнен с хронической инвазией, однако его завершенность не вызывает сомнений. ГМК отводится так же основная роль в фагоцито-

зе паразитарного пигмента и метаболитов. Гигантские многоядерные клетки, фагоцитирующие яйца паразитов и продукты их жизнедеятельности, отличаются по составу. ГМК, содержащие яйца описторхи-сов, имеют неупорядоченную ориентацию ядер (типа клеток инородных тел), а клетки с метаболитами гельминтов характеризуются упорядоченным расположением ядер (типа Пирогова-Лангганса). В основе описанных отличий, лежат разные пути формирования ГМК в зависимости от инициатора. При фагоцитозе яиц приближаются несколько макрофагов с внедрением мелких цитоплазматических выростов и удерживаются какое-то время между собой за счет интердигитаций мембран или десмосом до полного слияния. Эти клетки не имеют упорядоченного расположения ядер, но облндают большей объемной плотностью лизосом, что имеет немаловажное значение в оводеструкции. Подобный механизм образования ГМК, вероятно, является унифицированным для фагоцитоза трудноперевариваемых объектов. Т.БЫгаЬата с соавт. (1971) описал аналогичное формирование перитонеальных ГМК вокруг агрегатов инородного материала размером более 10 мкм.

В перидуктальной зоне и паренхиме обнаруживался пигмент, расположенный между клеток в виде "дорожек"; мультиэлементная идентификация, проведенная с помощью многоканального анализатора, отвергло его гемоглобинное происхождение (железо отсутствовало), а выявила преимущественное содержание меди. Следует отметить, что медь может оказывать гепатотоксический ^|)фект, особенно в случае выраженного холестаза, поэтому одним из защитных механизмов в печени является ее связь с белком (\V.Humbert, 1982).

В нашил 'наблюдениях элиминация меди осуществлялась- через формирование ГМК и гранулем. * - , . ,

Фагоцитоз метаболитов-описторхисов осуществляется уже сформированными гигантскими многоядерными клетками, для которых свойственен больший кумулирующий эффект и меньшая (Р<0.05) объемная плотность лизосомальных структур.

Появление персистирующих антигенов способствует гранулемо1 е-незу. Так как инициатор образования гранулем известен, то они несут черты специфичности. Согласно ■ классификации А.И.Струкова и О.Я.Кауфмана (1985) их можноотнесги к гранулемам с установленной этиологией (А.1), инфекционным (А.1.1.). В шСти Б.они являются мм-

мунными гиперсенситивными (Б.1.), возникающими на основе гиперчувствительности замедленного типа (Б. 1.1.) с установленным антигеном (Б.1.1.1.). По мере хронизации процесса большое количество пери-дуктальных гранулем подвергается фиброзу, влекущему к холестазу, что значительно маскирует защитную роль ГЗТ и обеспечивает своеобразную патологическую симптоматику, обусловленную сужением или облитерацией протоков.

Яйцепродукция является одним из основных факторов хронизации гельминтоза. Она изменяет направление тканевых реакций, основными чертами которых является смена клетки-эффектора и активация фагоцитоза, достоверное (Р<0,001) увеличение числа высокодифференциро-ванных иммунокомпетентных клеток, усиление склероза, снижение деструкции холангиоцитов.

В хроническую фазу описторхоза акцент некробиотических реакций переносится на гепатоцеллюлярный дифферон. Наблюдался распространенный некроз гепатоцитов и аутолитические изменения в них, сопряженные с пери- и эмпериополезом, накоплением в воспалительном инфильтрате плазматических клеток и плазмобластов, являющихся морфологическим свидетельством иммунопатологических реакций. Возможность последних может быть обусловлена особенностями анти-генообразования при гельминтозах, характерной чертой которого является выработка иммуноглобулинов, легко диссоциирующих из комплексов, способных образовывать мелкие циркулирующие иммунные комплексы, функционально активные по отношению к тканям хозяина (Помогаева А.П.. 1994)..

Неблагоприятные условия для трофики гепатоцитов создаются в узлах-регенератах в связи с фиброзом и пролиферацией элементов ХЦД. Это приводит к тому, что несмотря на активное восстановление печеночных клеток в регенератах, сохраняется их деструкция и диспла-зия с недоразвитием органелл. .,, . • ,

, Для холанг иоцитов в хроническую стадию гельминтоза свойственно снижение пролиферации; индекс митотической активности на 62-е сутки гельминтоза падает до.3,4%о, 96-е - 2,05%о, 120-е - 1,1%о. Динамика превращений элементов , холангио-целлюлярного дифферона заключается в формировании ими псевдожелезистых структур, подвер-

гающихся в последствии кистевидному расширению (спонгиозный "гепатит") или склерозу.

В отдаленный период гельминтоза регистрировалось ограничение воспалительной реакции в печени, усиление склеротических процессов, отмеченное по приросту индекса площади фиброза (62,1±6,2% площади воспалительной инфильтрации на 120-е сут. инвазии) (рис 1).

Реакция синусоидальных клеток (СК) в поздней фазе описторхоза имела следующие особенности: после "пика" их количества в острый период (16-е сут.) наблюдалось снижение содержания СК. Новый подъем числа синусоидальных клеток определялся на 96-е сут. инвазии (136±16 на 1000 гепатоцитов), что можно объяснить выполнением ими ряда важных функций в этот период. Накопление СК в хроническую фазу гельминтоза, когда выраженность альтерации и воспаления снижаются, а процессы регенерации оживляются, может быть обусловлено их ростсгимулирующей функцией, посредством синтеза веществ, способных стимулировать пролиферацию гепатоцитов (Щербаков В.И., 1989). Последнее является важным условием для сохранения системы "паразит-хозяин", поэтому ростстимулирующее влияние на печеночную паренхиму дублируется. Одним из примеров этого является усиление эритрофагии клетками Купфера, являющейся одним из факторов, способных инициировать рост паренхимы посредством транспорта в гепатоциты продуктов превращения гемоглобина.

Кроме того, между СК и клетками, синтезирующими коллаген, существует взаимодействие по типу обратной связи (Секамова С.М., Бекетова Т.П., 1989). Усиленное коллагенообразование в хроническую стадию заболевания инициирует синтез коллагеназы, что может явиться одной из причин очередного подъема количества С К.

По мере хронизации описторхозной инвазии (96-е сут) активность эндогенных фосфолипаз несколько спадает и в печени более отчетливо накапливаются продукты перекисного окисления липидов мембран. Однако, их соотношение сохраняет тенденции, характерные для острого периода - достоверное (Р<0,01) повышение активности фосфолипаз и накопление (Р<0,05) диеновых конъюгатов относительно контроля. Состояние системы антиоксидантной защиты в данный период характеризуется истощением механизмов антиоксидантной и антифосфоли-пазной протекции, о чем свидетельствует достоверное (Р<0,05) сниже-

%

100 90 80 70 60 50 40 30 20 10 0

Динамика индекса ПВИ в острый и хронический периоды инвазии (в % площади среза)

I %

70 60 50 40 30 20 10 0

ИПФ индекс площади фиброза (% ИПВИ)

з

■ЛГЧЛ

10,3 ЕЯ Шв ИВ 13,7

1®£ ж. Ш:

10 16 24

18,6 18,3

7 10 16 24 29 41 62 96 120 сут

г>

+ - достоверное изменение показателя по сравнению с предыдущим сроком исследования

ю со

ние активности супероксиддисмутазы и уменьшением пула ß-каротина (Р<0,05). Снижение функциональных возможностей СОД, прерывающей цепь радикальных реакций, влечет за собой повышение уровня свободных радикалов, индуцирующих сохраняющуюся мембранодест-рукцию (Логинов A.C., Матюшин Б.Н.,1991), несмотря на снижение общего уровня некроза.

Мембранодестабилизирующий эффект описторхисов распространяется за пределы экониши. Прежде всего, об этом свидетельствует выявление интенсификации в мембранах эритроцитов больных хроническим описторхозом почти всех этапов перекисного окисления липидов, что сопровождалось накоплением в избытке гидроперекиси липидов, диеновых конъюгатов, малонового диальдегида, повышением фосфо-липазной активности. Подобные изменения неблагоприятно сказываются на механической стойкости эритроцитов, отмеченной по приросту (Р<0,01) процента их гемолиза (17%). Механическая нестабильность эритроцитов формируется на фоне значительного снижения (Р<0,01) основного компонента липидной фазы мембран - фосфатидилхолина, что связано с его потреблением в активных окислительных процессах, а так же гидролизом данного класса фосфолипидов эндогенными фос-фолипазами. Наряду с этим, увеличение содержания лизофосфатидил-холина может быть обусловлено ингибированием лизолецитиназы, о чем свидетельствует регистрируемое уменьшение коэффициента соотношения фосфатидилхолина к лизофосфатидилхолину с 5,21 - у здоровых лиц до 1,57 - у больных хроническим описторхозом.

Синхронность развития мембранодестабилизирующих процессов в крови и печени при описторхозе указывает на предпосылки формирования системных изменений с реализацией мембранной патологии в других органах и тканях инвазированных, несмотря на сгрогую локализацию гельминтов в билиарном тракте.

Гистоэнзиматическое исследование печени показало, что для острой инвазии характерно усиление детоксикации, угнетение окислительных реакций, значительное снижение активности сукцинатдегидро-геназы, наиболее выраженное в холангиоцитах и гепатоцитах, прилегающих к портальному тракту. Ряд исследователей (Зубов H.A. с со-авт., 1936) высказывают мнение, что снижение активности ферментов в ранний период паразитоза связано с развитием иммунного воспаления.

Под влиянием метаболитных и соматических антигенов наступает ци-тотоксическая гипоксия, а необходимая энергия поступает за счет анаэробного гликолиза. Наряду со снижением активности СДГ повышается потенциал моноаминоксидазы (МАО) - фермента, ответственного за осуществление детоксических реакций, окислительное дезаминирова-ние. Существенным в острый период является усиление активности неспецифических кислой и щелочной фосфатаз, что говорит о напряженности биохимических процессов в клеточном инфильтрате и гепатоци-тах, повышении проницаемости мембран, активности гидролиза.

Хронизация гельминтоза сопровождается восстановлением активности ферментов, однако в эпителии желчных протоков активность МАО сохраняется высокой на протяжении всего периода наблюдения, что может быть связано с его постоянным контактом с паразитом и необходимостью усиления процессов детоксикации и адаптивных реакций.

Таким образом, морфогенез клеточных реакций при описгорхозе сложен и многообразен. Он заключается в ранней противопаразитар-ной эффекторной функции эозинофильных лейкоцитов, динамично дополняющейся пролиферацией антителопродуцирующих плазматических клеток и фагоцитарной активностью ГМК.

Аналогичная по принципу, но несинхронная по времени реакция печеночных клеток свидетельствует об их неодновременном включении в патологический процесс. Акцент деструктивных реакций в ранний период инвазии приходится на холангиоцеллюлярный дифферон, по мере хронизации гельминтоза он переносится на гепатоцеллюлярное звено. Факторы, индуцирующие некроз печеночного эпителия различны в зависимости от фазы паразитоза. Если в острый период ведущее значение имеет механическое и мембранодестабилизирующее влияние гельминтов, киллинг эозинофйлами и нарушение трофики в результате морфологически выраженных явлений сосудисто-гуморального характера, то в хроническом периоде доминируют иммунопатологические реакции, мембранодеструкция, склероз.

Хронический период описторхоза можно рассматривать как пример определенной толерантности организма хозяина к паразиту и выработки эффективных механизмов "очистки" экониши.

Особенности морфогенеза клеточных реакций при спонтанном

описторхозе

Одним из постоянных симптомов у больных и умерших с хроническим описторхозом является желтуха. Ультраструктурный анализ архитектоники печени свидетельствует о ряде условий, приводящих к хо-лестазу или являющихся его следствием. В результате длительного течения гельминтоза формируются предпосылки интер-, интра-, экстра-каналикулярной обтурации желчных путей: скопление в них половозрелых описторхисов с тенденцией продвижения паразитов в мелкие протоки, образование внутрипротоковых гранулем, перидуктальный фиброз.

Морфологические изменения желчных путей заключаются в расширении и деформации их просвета, истончении стенок, формировании нодкапсульных и внутриорганных холангиоэктазов. Пролифера-тивная активность холангиоцитов в хроническую фазу гельминтоза невелика (1,04±0,62%о), клетки уплощены, а дуктулярная выстилка имеет однослойный характер. Однако, в толще перндуктальных и междоль-ковых инфильтратов наблюдается распространенное образование ХДЦ нсевдожелезистых структур пролиферирующими элементами. Морфогенез кистевидно расширенных желчных ходов в капсуле печени и треугольной связке, следует рассматривать как результат повышения пролиферативной активности эшг.елия предшествующих аберрантных протоков, способных достигать значительных размеров.

Ультраструктурные показатели свидетельствуют о том, что ни значительное расширение желчных протоков, ни пролиферация вновь образованных дуктул не способны ликвидировать желчную пшерген-зию, поэтому холестатические изменения переносятся на гепатопеллю-лярный дифферон. Билиарный полюс гепатоцитов существенно расширяется, регистрируется уплощение и сокращение числа ворсин цито-леммы на нем. Следующей стадией является включение кристаллор желчного пигмента в цитоплазму печеночных клеток с последующей реакцией его утилизации. О последнем свидетельствует формирование около кристаллических структур лизосомальных комплексов. В динамике наблюдалось образование вторичных лизосом, фрагментации пигмента и его разрушение. Активация энергосинтеза была расценена

нами как реакция энергообеспечения фагоцитарных процессов. Расширенные, заполненные желчными цилиндрами канальцы, деформация и дезорганизация микрофиламентов клеток могут отражать "самоподдерживающий" характер холестатического процесса. Результатом его является ворсистая дегенерация цитоплазмы с распространенной сегрегацией, которая в ряде случаев завершается некрозом гепатоцитов и присоединением воспаления. Гибель печеночных клеток дополнительно индуцируется маргинальной пролиферацией желчных протоков и неадекватной трофикой внутри узлов-регенератов. Описанные изменения в сочетании с общей катаболитической направленностью процессов и блокировкой аппарата синтеза гепатоцитов могут объяснить ряд феноменов, наблюдаемых клиницистами и учеными-практиками: снижение чувствительности больных описторхозом к анестетикам, плохую переносимость наркоза, понижение летальной концентрации алкоголя (Зороастров О.М. с соавт., 1989; Бычков В.Г., Пантелеев С.М , 1990). Подобные процессы, вероятно, являются следствием подавления утилизационной функции печени на фоне "ворсистой дегенерации" гепатоцитов и переработки компонентов печени, имеющей конкурентное значение.

Холестатические изменения в печени инвазированных описторхи-сами людей были наиболее выраженными по сравнению с другими хозяевами паразитов и выступали на первый план в морфогенезе клеточных реакции. Причиной этого, вероятно, является "широкий диапазон возможностей", представленных человеком паразиту. Так, подключившись к жизненному циклу описторхисов, человек удлинил продолжительность их жизни и репродукции до 40 лет (Плотников H.H., 1981), что является фактом беспрецедентным, превышающим продолжительность жизни предшествующих хозяев гельминта. Помимо естественной блокировки желчных коллекторов взрослыми паразитами и внутрип-ротоковыми гранулемами, миграция гельминтов и их метаболическая активность вызывают грубое нарушение целостности эпителия протоков, его эрозирование и истончение дуктулярного барьера. Это влечет за собой попадание конъюгированного билирубина в перидуктальное пространство, усиливая тем самым воспалительные изменения и фиброз.

Особенность гранулематозной реакции в печени человека при данном гельминтозе заключается в ее преимущественном перидукталь-ном характере. Индуктором гранулемогенеза в этом случае кроме пер-систирующих продуктов жизнедеятельности паразитов может выступать парциально пропотевающая желчь, что наблюдается при обтура-ционном холесгазе иного генеза (Лапиш К., Шафф Ж., 1989).

Из изучаемых в настоящей работе хозяев описгорхисов наиболее адаптированными следует признать кошку. Холестатические, воспалительные изменения в ее печени были умеренными, а фиброз носил черты компенсированного. Деструкция гепатоцитов имела ограниченный характер, пограничная пластина печеночных клеток сохранилась на всем протяжении, а значительная объемная плотность митохондрий (22,6±0,62%), высокое содержание рибосом свидетельствовали о существенной синтетической активности.

Отражением быстрых темпов обновления ткани были сформированные в паренхиме узлы-регенераты, значительное содержание гипертрофированных и двуядерных гепатоцитов (85,6±10,12% и 87,2±7,48% соответственно).

В ходе исследования выявлены существенные отличия экспериментального и спонтанного описторхоза, что вносит определенные ограничения в экстраполяцию данных эксперимента на человека. Особенностями клеточных реакций печени при спонтанной инвазии опистор-хисами являются более выраженный холестаз, ограниченный характер гранулематозной реакции, преимущественно перидуктальная ориентация гранулем, умеренные темпы регенерации паренхимы.

Вместе с тем, морфогенез клеточных превращений имел единые тенденции, что отражает базисные закономерности адаптивных механизмов, свойственных данному гельминтозу. Они заключались в пролиферации холангиоцитов с ослаблением межклеточных контактов; хемотаксисе эозинофилов в желчный проток; деструктивными изменениями гепатоцитов; увеличении числа и гипертрофии синусоидальных клеток с повышением фагоцитарной и синтетической активности; гра-нулемогенезе вокруг яиц паразитов в толще паренхимы.

Суперинвазионный описторхоз

Повторное поступление заразного начала сопровождается усилением деструктивно-пролиферативных изменений протоковой выстилки. Существенным отличием пролиферативной активности холангио-цитов при суперинвазиях от аналогичного процесса при инвазиях является большая протяженность во времени.

Несмотря на падение митотической активности холангиоцитов по мере хронизации суперинвазии (от 8,04±2,46%о - на 16-е сут. до 1,13±0,42%о - на 120-е), она оставалась достоверно (Р<0,01) более высокой, чем в аналогичный период первичного заражения.

Повторная инвазия кошек морфологически характеризовалась феноменом потери холангиоцитами базальной мембраны, когда инваги-наты цитолеммы были свободно погружены в нижележащий клеточный пласт или детрит, что указывает на элиминацию препятствующих пролиферации механизмов.

Индукторы пролиферации печеночных клеток при описторхозе разнообразны, тем не менее ведущим следует признать ростсгимули-рующее влияние гельминтов (Гиновкер А.Г., 1984; Шайн A.A. с соавт., 1986 и др.). Однако, данное воздействие находится во временной зависимости от срока паразитоза, снижаясь в отдаленный период, что свойственно как для первичного заражения, так и для реинвазии.

Перманентное размножение клеток ХЦД при суперинвазиях, вероятно, можно объяснить постоянным, несинхронным ростстимулирую-щим эффектом гельминтов различной степени онтогенетической зрелости.

Поскольку клеточная пролиферация является облигатиым базисом для воздействия онкогенных факторов в любых тканях организма (Шапот B.C., 1979; D.Carten, 1985 и др.), а наивысшая эффективность канцерогенов достигается в период подъема пролиферации клеток (J.Adonson, B.Bowden, 1985 и др.) можно рассматривать суперинвазионный описторхоз как форму гельминтоза, потенциально наиболее способную к реализации канцерогенеза. Создать структурную основу для аплазии при промоторном эффекте описторхисов может как собственно дуктулярная выстилка, так и эпителий псевдожелезистых структур, характеризующихся дисплазией с недоразвитием органелл.

Повторная инвазия, яйцепродукция описторхисов характеризовались кратковременным обострением воспалительных, деструктивных процессов, увеличением количества эозинофилов. Не наблюдалось значительной перестройки в клеточном составе воспалительных инфильтратов, где наибольший удельный вес занимали плазматические клетки и пролиферирующие эпителиоциты (до 70%), а содержание лимфоцитов было минимальным за весь период наблюдения (5%). Раннее ограничение интенсивности воспалительной реакции, вероятно, можно связать с незначительным количеством лимфоцитов, способных активизировать воспаление посредством лимфокинов, а также особенностями иммунологической реактивности хозяина со специфической супрессией вторичного иммунного ответа с патологией клеточного звена (Дроздова Т.Г., 1987).

Одной из характерных черт мезенхимальных реакций при хронизации суперинвазии является увеличение числа макрофагальных гранулем, находящихся не разных стадиях развития. Причиной "несинхронности" гранулемогенеза могут быть как перманентно поступающие в паренхиму яйца гельминтов, так и вторичные аутоантигены, например, ДНК распадающихся клеток (Астафьев Б.А., 1989).

Учитывая масштабность изменений дефинитивной структуры печени, обусловленных эволюцией системы "паразит-хозяин", можно предположить длительный характер реституции органа в резидуаль-ном периоде.

Резидуальный период

В раннем резидуальном периоде (27 сут) определялась высокая степень воспалительных, деструктивных реакций, морфометрические показатели которых (ИПВИ, ЧПГ) достоверно не отличались от аналогичных показателей при остром описторхозе (табл. 5).

Клеточный состав воспалительного инфильтрата отражал напряженность иммунологических реакций с преобладанием высокодиффе-ренцированных клеточных форм, где плазматические клетки и гистиоциты определяли свыше половины (58%) его состава. 1

В основных звеньях печеночной паренхимы отмечались тенденции, противоположные по направленности. Уже в ранние сроки после полной дегельминтизации в холангиоцитах уменьшилась выражен-

ность некроза, слнзеобразования и деградации основного вещества цитоплазмы. Дуктулярная выстилка на большом протяжении восстанавливала однослойный характер и клеточные контакты. Положительная динамика наблюдалась в преобразовании митохондрий, где их мат-рикс приобретал умеренную электронную плотность, восстанавливалась параллельная ориентация и укорочение крист; лизис митохондри-альных мембран имел локусный характер.

Таблица 5

Отдельные показатели воспалительных и регенераторных процессов печени лабораторных животных в резидуальном периоде описторхоза

1 Сроки ИПВИ ЧПГ ИПФ ГГ ДЯ мих МИГ

¡наблю- с/о) (%) (%) (%) С/о) с/о) С/»)

I дения

(сут)

1 27 22,6±1,6 102,9±27,3 27,4±11,6 76,2±12,1 20,7+4,7 2,06±0,86 0,61±0,02

1 Р1 Р| Р. Р. Р. Р. Р.

157 9,3±1,8 53,18±7,8 17,8±3,9 66,9±7,14 31,2±2,91 0,9±0,07 2,10±0,86

I Р2 Р2 Р2 Р2 Р2 Р2 Р2

Р1 - вероятность случайности различия с аналогичным показателем в

контрольной группе Р2 - вероятность случайности различия с аналогичным показателем в предыдущем сроке наблюдения

В гепатоцеллюлярном звене прослеживались противоположные реакции. Регистрировалось разрушение пограничной пластины с высоким уровнем пери- и эмпериполеза (19 на 6 печеночных долек). Для ге-патоцитов периферии долек характерной была некробиотическая направленность метаболизма, активация аутофагоцитоза. Число погибших гепатоцитов достигало максимума у зон деструкции яиц и паренхиматозных гранулем, количество которых не уменьшалось после полного изгнания паразитов.

Неблагоприятное влияние на ход восстановительных процессов оказывали фиброз органа и накопление в синусоидах фагоцитарно активных синусоидальных клеток (139,8+12,6 на 1000 гепатоцитов).

Таким образом, патология печени в резидуальном периоде описторхоза есть патология гспатоцеллюлярного дифферона и мезенхима-льных реакции.

"Общий аллергический синдром" в раннем резидуальном периоде описторхоза регистрировался рядом ученых как в клинике, так и в эксперименте (Озерецковская H.H., 1975, 1986; Глумов В.Я., 1981; Молокова O.A., 1991). В его основе лежит ряд механизмов - от ликвидации супрессорного воздействия гельминтов до токсического влияния погибших паразитов и действия антигельминтика. Однако, имеется еще один фактор, влияющий на поддержание деструкции, не указанный ранее, - после дегельминтизации в паренхиме обнаруживаются яйца описторхисов, что может определять преимущественное поражение ге-патоцеллюлярного дифферона и вызывать перманентное раздражение иммунной системы посредством активации фагоцитоза. Так как руководителем клеточных ассамблей становится фагоцит (ГМК), регистрировалось падение числа эозинофилов и поддержание фиброза, вследствие индукции роста фибробластов макрофагами (Серов В.В., 1983).

Морфологические преобразования печени, возникающие в период инвазии, обратимы после полного изгнания описторхисов. Темпы восстановления зависят от скорости элиминации яиц, индуцирующих воспаление и деструкцию. Поскольку в настоящее время не существует антигельминтика, обладающего овотоксичносгью на уже выделенные яйца, процесс оводеструкции длительный и зависит от физиологических потенций фагоцитирующих клеток.

В поздние сроки резидуального периода (157-е сут) наблюдалось снижение индекса площади воспалительной инфильтрации (9,3±1,8%), уменьшение объема некроза, отразившемся в достоверном падении числа погибших гепатоцитов (53,5±7,8%), оживление регенерации. На субклеточном уровне отмечалось накопление гликогена, ограничение аутофагоцитоза и сегрегации цитоплазмы, достоверное (Р<0,05) увеличение объемной и численной плотности органелл синтеза. Однако, в паренхиме сохранялись фрагменты деструированных яиц в зонах гранулем.

Сохранение в печени яиц паразитов после полной дегельминтизации способствует длительному поддержанию антигенного раздражения, а, следовательно, и поддержанию болезни; Она переходит в новый этап, который характеризуется рядом особенностей: сменой антигена, обострением воспаления и деструкции в ранний период, распространенным некрозом гепатоцитоз, длительным сохранением фиброза и

яиц гельминтов в паренхиме, быстрым восстановлением дуктулярной выстилки. Морфогенез клеточных реакций печени в резидуальном периоде свидетельствует о том, что устранение паразитов является лишь начальным этапом выздоровления. Сформированные в период гельминтоза преобразования архитектоники органа, иммунного гомеоста-за могут уже сами по себе определять ход патологических реакций, не только задерживая обратное развитие, но и способствуя их прогресси-рованию в раннем резидуальном периоде.

Реинвазионный описторхоз

С начальных сроков наблюдения (7 сут) реинвазии описторхисами в печени сирийских хомяков регистрировался высокий уровень воспалительных, альтеративных процессов, достоверно превышающих выраженность аналогичных реакций при сулеринвазиях и первичном заражении.

Начиная с раннего периода в клеточном инфильтрате преобладали иммунокомпетентные клетки конечного этапа днфференцировки -плазмоциты, составляя его основную массу (29,7±3,18%). Лимфоциты, плазматические клетки, разрушая пограничную пластину, внедрялись вглубь долек и цитотоксически, реагировали с гепатоцитами, о чем свидетельствовал высокий уровень пери- и эмпериполеза (21 на 6 печеночных долек). На участие в воспалительном процессе аллергических реакций немедленного типа указывал регистрируемый периваскулярно синдром Сплендре-Хопплера (Йегер Л. 1989; А.Веп^ет й а1., 1984). Выявлена прямая сильная корреляционная связь между динамикой числа погибших гепатоцитов и содержанием плазматических клеток и бластов. Мы предполагаем аутоиммунный механизм некроза гепатоцитов, так как фактическим подтверждением его роли в патогенезе активного гепатита служит плазмоклегочная инфильтрация, высокий уровень периполеза и имеющийся после дегельминтизации дефицит Т-супрессоров (5.811ег1оск, 1975; М.Мопс1е1Н, А.АсШезЮп, 1984 и др.).

Гепатотропное действие выступает на первый план в морфогенезе клеточных реакций, что позволяет выделить реинвазионный описторхоз как особую форму гельминтоза с преимущественным поражением гепатоцеллюлярного дифферона.

Характерной чертой некротических реакций явилось преобладание коагуляционного некроза печеночных клеток. На уровне электронной микроскопии обнаружена выраженная деградации гепатоци-тов, выпадение белка в виде хлопьевидной субстанции, что оценивается как реакция на длительное стрессовое воздействие, вызывающее выход жидкости из клеток в сосудистое русло (Секамова С.М., Бекетова Т.П., 1985).

Клеточная реакция при реинвазиях отражает закономерности вторичного иммунного ответа. Она проявляется в подавлении на начальных сроках пролиферации антигенпрезентирующих клеток и характерном для иммуно-морфологического комплекса увеличении клеток плазматического ряда (Йегер Л. с соавт., 1989). По мере стабилизации хо-зяино-паразитных взаимоотношений и стихания остроты иммунного воспаления их число достоверно (Р<0,05) снижается, усиливается накопление фибробластов и ассоциированное с ним распространение фиброза.

В хроническую стадию гельминтоза (96 сут) регистрировался новый, менее выраженный подъем содержания лимфоцитов (12,3+1,24%) что является стереотипной реакцией, наблюдаемой в поздние сроки инвазии и отдаленном резидуальном периоде. Указанный феномен может быть связан со способностью лимфоцитов, выделяя биологически активные вещества, не только усиливать воспаление, но и по мере его снижения тормозить пролиферацию (Бабаева А.Г., 1992). Реакция эозипофильных гранулоцитов была идентичной таковой при первичном заражении и суперинвазии, что является отражением стереотипности антигельминтной эффекторной защиты.

Реинвазионный описторхоз характеризуется развитием амилоидной дистрофии. Прослежены синтез амилоидного вещества, его выделение и периколлагеновое отложение. Несмотря на множество теорий, механизм данной патологии остается неясным, однако, для его развития при реинвазиях создается ряд условий: повышение проницаемости сосудов, что играет важную роль в начальной стадии амилоидоза (К.ЗсЬикг, 1977); поликлональная активация В-лимфоцитов (Ь.С1епа, 1979); выработка фактора, регулирующего Т-клетки и макрофагальную активность в ответ на инфильтрирующий агент (,1.\Уое1^е111ап, 1980) и др. Есть все основания связывать эту патологию при данном гельмин-

тозе с нарушениями в иммунной системе, и задача состоит в поиске звеньев стих нарушений. Не исключено наличие специализированных генов, у которых может быть изменен профиль экспрессии в результате различных воздействий, и генное детерминирование синтеза патологического белка.

Аспекты проблемы широки и многогранны, и, являясь в равной степени проблемой медицины и молекулярной биологии, амилоидоз ждет своего скорейшего разрешения.

При реинвазиях мы обнаружили морфологические признаки, присущие повторным инвазиям вообще. Среди них можно выделить усиление альтеративных, аутоиммунных реакций, переход процесса из пе-рсистирующей формы в активную; раннюю выраженную гранучемато-зную реакцию; прогрессировании склероза в ответ на повторное поступление заразного начала.

Однако, имеются черты, характерные для клеточных реакций только при реинвазионном описторхозе. К ним относятся: преимущественное поражение гепатоцеллюлярного дифферона с распространенным коагуляционным некрозом гепатоцитов; преобладание перивас-кулярной ориентации воспалительного инфильтрата и феномена Сплендре-Хопплера; раннее развитие амилоидной дистрофии; высокое содержание в воспалительном инфильтрате плазматических клеток и бластов с ранних сроков гельминтоза (7-е сут).

Таким образом, клеточные реакции при реинвазиях существенно отличаются от таковых при первичном заражении и суперинвазиях. Масштабность иммуноморфологических проявлений, некроза гепатоцитов, выраженного гранулемогенеза и амилоидное поражение характеризуют ее как качественно новую форму гельминтоза.

Заключение

Несмотря на многочисленные направления изучения описгорхоза и существенные достижения в познании сути гельминтоза, сохраняются нераскрытыми ряд проблем. В настоящее время нет целостной концепции патогенеза описгорхоза, хотя его отдельные звенья достаточно глубоко изучены. Проведенная работа внесла ряд дополнений фундаментального характера, суть которых заключается в выделении периодизации гельминтоза с обозначением временных и морфологических

границ, выявлении клеточных реакций организма хозяина в становлении системы и морфофункциональной последовательности противопа-разитарной защиты, открытии контактного клеточного эффекторного воздействия на возбудителя и механизмов очищения экониши. Чрезвычайно интересным представляется феномен миграции эозинофилов в просвет желчных протоков и фиксации на тегументе гельминтов. Ранняя клеточная противопаразитарная защита при описторхозе уникальна, что, в частности, подтверждается анализом материалов VIII Всемирного конгресса паразитологов (г. Измир, 1994). Ранняя фаза экспериментального описторхоза сможет послужить моделью для изучения не только антигельминтной протекции, но и биологических функциональных свойств эозинофильных гранулоцитов.

Обобщая результаты полученных данных о патоморфологии печени в ранней фазе болезни, мы пришли к заключению, что организм хозяина в этот период представляет крайне неуравновешенную биосистему, наиболее удаленную от аттрактора. Это впоследствии может определять разнонаправленный характер патологических процессов с формированием различных вариантов течения болезни и ее осложнений.

Морфогенез клеточных реакций при описторхозе независимо от клинико-морфологической формы трематодоза и хозяина гельминтов имеет общие тенденции, что отражает эволюционно выработанные механизмы становления хозяине-паразитной системы. Если поступление заразного начала есть временный аспект настоящего, то последующая микроэволюция системы является отражением предшествующей макроэволюции паразитоза. Фрактальность морфогенетических явлений и их векторность, позволяют предположить многовариантность исходов, которые, как и сама система, в результате бифуркаций и флюктуации могут находиться на значительном отдалении от аттрактора, завершая хаос (желчный перитонит, сепсис, канцеро-, амилоидо-генез и др.).

В выполненной работе предпринята попытка изучения болезни в контексте комплексного взаимодействия хозяина и паразита, что представляется методологически правильным, так как они формируют единую систему, развитие которой отражает динамику паразитоза.

выводы

1. Морфогенез клеточных реакций печени при описторхозе характеризуется стереотипностью основных проявлений независимо от кли-нико-морфологической формы гельминтоза и окончательного хозяина.

2. В раннем периоде первичного заражения и суперинвазиях клеткой-мишенью для деструктивных и пролиферативных процессов являются элементы холангиоцеллюлярного дифферона: акцент патологических реакций в хроническую фазу паразитоза, резидуальном периоде и реинвазиях смещается на гепатоцеллюлярное звено печеночной паренхимы.

• 3. Клеточная противопаразитарная защита характеризуется динамичной сменой эффекторных свойств эозинофильных лейкоцитов и гигантских многоядерных клеток в зависимости от онтогенетической зрелости гельминтов.

4. Основным механизмом клеточной антигельминтной протекции в начале формирования хозяино-паразитной системы является внутри-протоковый хемотаксис Иурос1еп5-эозинофилов с дегрануляцией и фиксацией содержимого на тегументе паразитов.

5. Занесенные в паренхиму яйца паразитов способны к миграции в составе ГМК.

6. Гигантские многоядерньге клетки играют ведущую роль в утилизации яиц описторхисов, мигрирующих в печеночную паренхиму, обеспечивая "чистоту" экониши в хроническую фазу трематодоза.

7. Отличительными признаками клеточной реакции при хронической описторхозной инвазии человека является выраженный били-рубиностаз и ограниченный гранулемогенез. Спонтанный гельминтоз кошек характеризуется высокой пролиферативной активностью элементов холангиоцеллюлярного дифферона. Доминирующим структурным проявлением описторхоза у лабораторных животных служит распространенная гранулематозная реакция.

8. Механизмы деструкции компонентов печеночной паренхимы зависят от фазы болезни и проявляются с преобладанием в раннем периоде патогенетического влияния механического, мембранодестабили-зирующего воздействия паразитов; цитотоксического реагирования эозинофильных гранулоцитов и нарушения кровообращения за счет