Автореферат и диссертация по медицине (14.00.16) на тему:Морфофункциональные особенности нуклеолярного аппарата гемопоэтических клеток в норме и при гемобластозах
- Ученая степень
- кандидата биологических наук
- ВАК РФ
- 14.00.16
Автореферат диссертации по медицине на тему Морфофункциональные особенности нуклеолярного аппарата гемопоэтических клеток в норме и при гемобластозах
9 2 n 9 tt '
МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ PCSCP НОВОСИБИРСКИЙ ОРДЕНА ТРУДОВОГО КРАСНОГО ЗНАМЕНИ ЦЩЦКНСНИЙ ИНСТИТУТ
На правая рукописи УДК 616.1Б5.392 - 033.2 - 573.3
ЛЕВИТАН Himsi Васильевна
МОРСОЗУНКЦИШАЛЬНЫЕ ОСОБЕННОСТИ НШЕОШРНОГО АППАРАТА ГКОПОЭПШСКИХ КЛЕТОК В HORS И ПШ ГШОБЛАСТОЗАХ
14.00.16 - патологическая физиология 14.00.29 - гематология и переливание кровя
АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук
Новосибирск - 1990
Работа выполнена в Новосибирском ордена Трудового Красного Знамени ыздкиинскси институте
Научные руководители: доктор медицинских наук, профессор Г.С.Якобсон
доктор шдицшских наук, профессор Н.И.Лосева
Официальные оппоненты: доктор.медицинских наук,
член-корреспондент АМН СССР Л.Д.Сидорова
доктор биологических наук, М.Г.Пол як
Еедудая организация - Всесоюзный гематологический научный центр
Защита состоится "__1990 г. в_часов
на заседании специализированного совета
К.074.42.01. при Новосибирском ордена Трудового Красного Знамена издицинском институте (630091, г. Новосибирск, Красный проспект, 52, тел. 20-06-53).
С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Новосибирского медицинского института.
Автореферат разослан "_*_1990 г.
Ученый секретарь специализированного совета к.м и.
В.И.Шарапов
; • ■ • ; ОЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ
Актуальность теют. Выясненяэ мзягшкзаоз зоеншшоеенйя и развития опухолевого процесса рассматривается кап вагнойзая задача созрэмгиои* экспериментальное и клинической патологии. В сзггзи о OTÜM НОрфОЛОГИЧЭСКЯО ИССЛвДОБаННЯ ГСиСПОЗТИЧгСКНХ K2070S игярзз-лены на поиск новых цитологических критзсяоз, отрагааязк тэ прэ-обрзаоЕьния, которцэ происходя? при иалнппгшггя, Наряду о тагами извзстнеми проявлениям элсначзствзкноа ?рш£Сфор:пц:г.1 кап уволнчэкнз ядврио-цитоплааматачвсяого соотасгеияя я дзасидюта-ция хрсупиша, динзьтака структурных ¡г/етзгя.-^нс-го ш-
парата такгз слуглть вснпзоя для разработка изрфзлггпчзс-
кж: ттодоз опрадвлсняя эталсз спухзл-ззэя прогрзссип (И.А.Бшгсза, 1973; н.н.Цлмзез и др., is30; k.sne-cana et al. . is34.j o.A. Иконникова и др., 1939). ПзрспектиЕнвсть квучззгая мсрфг^ункцнеиз-лышх особенностей цухлоояярюго аппарата при гомсбзастсззх в настояззо время стала очевидной в связи с еЗнаруггнягц г::сскея частоты эовлзчэная ядризкосбр?зуягслх хромосом э хргиоссязпгэ пэ-рзстройки, спрэдмяязю элокачзстоггафз трансфоргащзз гсусасэта-ческих платок ( р.СаЪапШаз et al. , IS23, s. Fukuhara et al. i9b3, e.Fleishmtm et al. , i£39.).
Уксзгшшэ яспакты з ебеза патсфклюлогичзскоя проблема пепо-ка цитологических царкэроз иалигниаашп: пр: гзнсбластсзах пзелу-гяяи прздпоенлкзй настоящая работы.
Для оцгнкн способности лкнфошгеоа пзрк$зр:тскзЯ зргкг я активной транскрипции и пролиферации а 1970 году x.Smatana и егэ сотрудниками был разработан и эяспзртснтально обоснован иувззе-Лярный тост С k.Smetana , h.Busch , I970i КОТОрнЯ в ПОСЛСДу-
20 лзт широко испольаовалоя з енкологнчзских, г&птеяогпчэ-ских, ккмунсиорфологичзских исслэдосаняях.
Классический нуклэолярный тост k.Smetana , еснезакшЭ «а СЕЭтоептичзсксл опрэдвлэшш числа а структура ядркгэк, иапбеазэ информативен в тех случаях, когда изучаешь клетки находятся в покоящейся состоянии ( % ), либо активно функцненпруг^ги состоянии (периоды g1 , s и g2 кнторфкзы). В связи с зтпа сраи.итояьно простой н удобный для экспоратталыяпс ксслвдэва-кай и клинической практики куклзелярикй тэс? x.Smetana но уда-отся пркизнятъ для рЗГИСТраЦКЯ l!sii3k3!e.\1 3 дор1лязх на рнкта этапах порэхода хлэток ::з gq э стгууэ (Ц , клоточнггз ir.'it-ла, когда достоверного иеивнсияя поха?атэдзз нуклоояярксго тзета
на ьбиаруЕзвается.
Отчетливо Еыражзнноя зависимость кьгду ективстзя трс искр::п-циониой активности к преобразованиями ультраструктуры ядрьзка иа рангах sïanas периода отраузна в ряда ряб от отачастовнных
и варубеетыя исследователей ( i. Raska et ai. , IS33; О.В.Зг-ЦЗПЙНа К др. 1ШБ; В.1!4Ь&1Т0ГгфЭЛЬ, IÎ25; D. Kernendes- Verdun et al. , 1Ш5). Многко ядрьыкозыз маркеры в настойчзо время ï;c-польоуются в качества цитояогичоснак тостов для оценки урезки $уИХЦКенаХЫ!ОЯ АКТИВНОСТИ КЛСТСК } E.Smetbna , IÇ39/. 3 СВЯЗИ о 6тйу представлялось перспективна! болзо детально изучить прост-раисгвеинув ергелкэацга поряфзрасчой сбласта адапке и иссдодо-вать иорфефунхцясн&льиыэ особенности реорганизации околодарзлко-Ббй веш на бсзх этапах прерзпликатиного периода клеточного цикла.
Цель исслодов&дая
Разработать морфологические» кркторзш, етреггхгсла рэоргаш-бёц-ю нуклзолкрног© аппарата ге.чепо^тпчаок:-';-: клокох в дкнемике клгтечнегс цикла к оценить возможность их использования для диагностических к прогностических целей прл геиобластозах в экспери-HUHÏO К КЯЕНПКО.
Вг.гпчи исследования;
1. П„учпть особенности формирования перинуклзелярной зоны в иедзльнш: хлаточннх системах со стиыудираг&нной прелифорацкзй и разруб мать тост, позволязчнй регистрировать ргдкко отопи порзхо-да кдаткн кз стадии G0 в G^
2. Бийвить есобенности накопления и распределения нукяеоляр-иого липкдяоге когшензнта б модельных клеточных системах и разработать тостЫ) поеволказдг регистрировать прохождение клеткой ¡этапов прореплккатквного периода.
3. Изучить действие актннеынцхна Д на структурнув организаций нукдеэлярного аппарате.
4. С псиоз>в нуклаоаярноге теста с новши дополнительными кратеридоз исследовать геиопоэтичоскио клетки периферической кргвк, костного ыозга, тимуса, лодфоуглов и селезенки у беспородная кызэй н в дан шике спонтанного лшфолейкоза у шшэй линии АКР.
Б. Изучить преотранственную реорганизации нуклоалярного аппарата геаоаезтичоских клеток периферической крови при геыоблас-тезах у человека в динамика клеточного цикла и сопоставить обна-
ругзшшз изменения о особенностями иуклгэлярного аппарата з культурах СГА-слмулиросагаплс дицфзцнтоа.
6. Исслздоэать структуру пеяулякзл шафсздзшх ядвмя порл-фзрнчэскоа кропи у эдорозшс дснорээ а бэгьках-ХЛ1 о псиз^в нук-лоолярннх царкэроз к оценить прогиастачгскуп анашагость нухлэоля-. ршк каркаров при определении характера тачзная ХЛЛ.
Научная новизна.
Бпарсыэ с псасцьв различных кэтодоз сз-зтовоя п .та'гшяецзт-ноя микроскопия в «одзлышх клеточных спстгЬгах со отадошргззи-ноя прсдифзрацнзя виягхэна и изучена особая область ядра - йпз-ринугелволяриая зона". Показано, что пврмнуялголярлал зе.чз - рз-ально суцзстзувцая диняинчвекая структура интэрфавнсгз ядра, о учатся строения которая р®зработгн нозиЯ крптерза нукгзоляриегэ тзста - "ПНЗ-тбот".
На оснозо цитохиничзских изтодоз ксслэдозанзя я дзманвсцв-тного анализа получены свидетельства зависимости нанеяявння яя-пидного компонента а дар.гзхв и околоддрстдозой зона ядра от стадии газточного цикла. На основаниям получэнннх эксперазсптз-льншс данных разработаны тесты, с поис^ьв которых сцвнигавгея доля клеток, садзрЕВДПс випидныЯ ксгяскэкт в границ? пзрпнуягэо-лярной ясны дара (ЛКГПНЗ-тост)^н в теле даркдаа (НЖ-тест)?
Ногиэ двполнитадьннэ вритерия нукяеоляряого тзста, етрзЕЭ-глэ дин шику нуклзолярного сппарата в прзрепликатасноя пород клеточного цикла, использованы а комплекса с пеказатолггп пугл?-олярного теста к.Зп^впа и такзш показателен, как число
Ав А/зон. ПрэдлоЕзно взэста для использованного а работа кегла-лэкса цзтодоз нознЯ терли - "нуклзоляряая тэст-сястема".
С помогли нуклзолярноя тест-системы вперю» кэучзиа дкнгаз-ка лиыфспрояифэративного процесса при спснтакнса ягмфогойксзэ у щеэй линии АКР, а такгэ пря таких гаыобластозах человека каа хронический якмфолейкоз, хроническая шззлеззйкез, квдоторуэ варианты острого лейкоза.
Показано, что новиз нуклзолярныз иаркзры ногу? бить ися&дь-зованы а качестве прогностических критериев для определения характера развития геиебластозов.
* - ЛНГПНЗ - аббревиатура терцина "ляпндиыа кеотшен? гргнявд перннуклеолярноЯ зоны"
^ - НЛК - аббревиатура тзрш{на"нукдеелгрицЯ якпздша кегшкгэрт"
гкачгнка райотк.
Универсальность фгнсмсна "псрниуклаолкриаи scj:,. ;-L"i?.{ zzz-иогность евнерусгияя caísix структур как радасльжз тг;;'-: - sana перкнуклоолярасй зе;ш при пгучокш; шрохого сп-:сп:с о::с..зг:>
vocki1x объектов ПОЗВОЛИТ ИСПОЛЬООВаТЬ hOBUv нукле-о.'^.гг.:.;.'
рц в качестве дополнитояышх краторизв нуклсояяраого Vv-г.м к .Sse-
tana.
ПНЗ-тест uojsot бить кепельъован для регистрации пароходного состояния цуклоолярного аппарата к активному функцьонкрозаьпв, когда изучаемые клетки находятся в начальном п^рюде стадии и когда ецо не начались процессы формирования активных морфотк-пов ядршка и когда площадь дара и состояние хроматина острятся неизменными.
С помощью НЛК-тоста опредэляэтея доля клеток, находящихся в ваверзевзэй стадии периода или в S-периоде клеточного
цикла. Тост ногат быть использован для изучения ективнопроднфарх:-цувчях популяций как при гсмобласюзах, так к,пр: условии доргбо тки,для исследования других опухоловгэс процэсссз или рогслс^йц:.:.»
Прздлогзнный способ систематизации экспзримвнтальных даги.иг с помогла составления диаграмм по двум нуклаолязака capiteps« позволяет получить дополнительную информации о направлении лицфопра-лкферэтшшого процесса при хроническом лимфолейкозо.
Нп асциту выносятся следующие основниа пологаняя диссортацпз
1. Перииуклеолярная о она ядра формируется как пространство, окружаемое дкризко в первыг часы после воздействия прэлкфоратне-ного стимула, на ранних этапах прерзпликативного периода клзточ-ного цикла,
2. Ядрызки и элементы перинуклеолярной зоны в модельных клеточных системах со стимулированной пролиферацией содерглт ли-пихный компонент в определенные сроки после воздействия пролифе-ративного стимула; граница перинуклеолярной зоны - на ранних этапах прврапликативного периода, ядрыако и радиальные тяги - на аахерааацих этапах пререпликативного и в синтетической периоде клеточного цикла.
3. Формирование перинуклеолярной зоны ядра и процесс накопления липидного компонента блокируется при одновременном воздействии фитогемаглвтинина и ингибитора синтеза FHK актиномицина Д.
4. Околоядршковая область ядер ФГА-стимулированных лимфоцитов претерпевает рзорганизацию в динамике бласттрансфораации.
Аналогичныз норфофункциокальнко особенности хараяторязупт нуклэ-олярный аппарат гецопеэтнччских клеток пврлфзричвскоЯ кровп бальных хроническим яиыфолэйкозсн, хроническим ииэлолоййозси, оогрг! лейксзса, а такгэ лиифонднкэ клетки гяггзй лнюга АКР прз развитая спонтанного лимфолойкоза.
5. Использование новых дополннтедкснх кртзрагэ нупгэолгрзо-го тоста поззолпзт прогностичэскя оценить напразяэкаа фзративного процесса пра хронической .тагфолэйясзэ у человека.
Внедрение результатов исследования.
Результаты диссортацсснной работа рокемендозаны к поползо-вангао для изучения рзгекераторншс процзссов. Допеянитэгъшл критерии нуклеолярного тоста позволили более достоверно сшнявать структурно-фуикционалышо изменения ядзр гепатоцнтов з рзипяз сроки послз частичной гэпатэктсинн (акт Еяедргмня в ЦШИо НПШ от 23.01.86).
Рекомендован тест "перинуклэолярная зона ядра" в качества морфологического паркера прн изучении первичного и вторачнэго иммунного ответа. Внедрение тоста значительно погасило достоверность нуклеолярного теста в иммунологических исследованиях Сак? внедрения в ШЙУе СО Ш СССР от 10.09.85).
Результаты исследования, касающиеся изучения популяцкя сгь фоидных клеток при хроническом лиифохейксзо, рзяокендозаны к использования в клинической практике как иисвчео прогностячосксэ значение для опрэдеяения характера точения заболевания (акт гкэд-рения от 20.09.90).
Апробация материалов диссертации.
Наторкали диссертация дологзны на Всоосззнся спгасзпуггэ по ннуунологии воспроизведения. Москва, 1Г31; на Всассзэнся симпозиуме "Ядерные белки и экспрессия генома", Киев, 1983; на Всзссзэ-но!д сгезде кед цинсккх генетиков, Киев, 1?34; на Всесеэзнем оки-позиуые "Липиды биологических мембран", Пуэдно, 1334; на Мплэй-ной сессии НГМИ, 1985; заседаниях проблемна* сокиссий Н0Т7ШН "Структурны® основы гомаостаза", 1985; "Физиологические а патофизиологические основы гшеостаза", 1986; пленума патофизиологов Ч1еханизиы патологических реакций", Тшзнь, 1937.
Объем и структура диссертации.
Диссертационная работа излоана на 225 (собственно текста 146) страницах машинописного текста и состоит из зведзняя, сбве-ра литературы, 4 глав экспериментальные исследований» главн,
посвгдсиной oöey£.~oi£3 результат«* ксекэдздогс;** - -i-
лкогрл0!Чбско?о укйьыгадя, вмачсг^гс ÏG3 Сл. ..
киострглших источников. Длгасртс.ц::г> с? '„.:,; -
кк, 51 рзсуккоа и 5 ысшсксгл кг истер*:
Н&сгоезд: работа вгльзтся часть» ucimn-j ;c;u:r-c ^о^-до;;;;:.;.: гсисбластсзоз прсаедаогв im кг^здра гослагидькс.) сер::/;.;.: nc;.y.> ка ЕЛ! под рулоЕОДсадси пр.ъ-/сео5рл ИЛиЛсоо:;;;: (ü;гсс. j... тращш C381.5357.254), ь таказ чсстьз коддопсиэго нее;;: :;о-rue:: иахсшзакзв рзгуяяции прзцгссоь Езостамгглсгп.г: патолог.:'!..?/.:.. изионощцк органов, проаодхзтх на кайздро пз?с.;гг581-ло: :.. руководстве» прсфассоре Г.С.Яксбсоиа (нсд:зр ras. рг-с*- .ц--" 0185.0065.631).
Натарлалц н истоды исследссшпгя:
Нскболоз прюшгсздга ыодеяьыма кетгочлсп схотздё^д да.-, исследования ядр:акй с&ипрпгиаш:: ЬГА-стйиуйнрогаык»' шг^зш-^;: периферической крэги при 0-72 чьсозсц кугмкгпргггйпк!, гопсгсс.:-ты ияокспитсозах после частичной гспгпктс-ии:!, порггхаакх:- к..-.-точгплз культуры s стационарное и логар'фкчзепо;; раета,
клоткы иэрист«уы растсний прл прорастают. Рг.ар^богёа носьк методов оц;нки актибкостк нуклеояярного сшмрата прагодааа прз ао-пользовиши 4-х визаукааашш иодзяышх свстау.
Культуру аагфоцитоз пор::фор::чоской кров:; £0 здоров» декоров ставили пс ебс-прЕлятии катодам (Лши, 1970). Б качаете» прелпр--рагасиого агкцуяс испольоозан СТА ( dixco р ) и ксасчног, кеща-нтрзцгл 5 и;:гЛ:л.
Культивпрозаккс перзЕКваегаг: культур Heia « Нер-2 , fi проводеось и теченло 72 часов до достигши стац55онарлой стадап роста, поело этого, для поровода культуру в логарп^ипчаскуэ ста-дкэ роста, производилась сцонз сродн.
Операцяа частичной гепстэктогяш проводили по изтоду Ху.ггнлс-Аидероокс, алзотних оперировали в различное враля суток, чтобы квЕДОчание пачели на различна® срою: регенерации (3-43 часов) проводить в утрзинао часы для исключения вариаций, накладываемых суточкьа: puïuoi:. В к&вдуо экспериментальную группу входило 10-12 ашотнше.
ВияБЛСККО Filii проводилось ПО USÏОДУ K.Smetana ,В 100 КЛОТ-ках на прзпарато подсчитывали число ядр-шок (нуклзолярныЯ коэффициент) н дола нуклооляр5Сж тапов (кешактныз, кольцовидиыэ. иикро-ядрцакя).
Для выявления Лг -белков использовалась методика Likov-ski , Sraetana ÍI98I).
Проведение реакции Фельгена проводилось по модификации общепринятого метода, предлокэнной Г.И.Козинцсм и В. М. Ко та ль к::ко : г.; (1986), цитофотсметрня и определение стадии клеточного цикла осуществляли таксе по рекомендация« випеукезанных авторов. Цито-фотометрию ядер, окрашенных по Seльгену, проводили на цитофото-нетре ЛШАМ-ПМ-П, снабженного скоростные скатарув^'м столикой и настольной SEM "Электроника 60М".
Уровень синтеза РШ оценивался по вклзчгл:;;э Н3- урядина (уд. активность 814 ГБк/моль). Регистрация включения меченного предшественника проводилась по общепринятой методике Епифановой О.И. (1973).
Визуализация внутриядерных липидоз проводилась с поцоцьв бензо/а/пирена, фосфина ЗР, родамина В, 3-мотоксибонзантрсна»
Группу больных ХЛЛ составили 40 человек в'возрасте 51-73 лет. Для определения стадии заболевания использовалась классификация K.Rai et al.(1975).
Группу больных острил лейкозом составили 20 человек, из которых у 9 диагностировался острый миелобластний лейкоз (СУЛ), у 7 - недифференцированный вариант острого лзахсэа (СИЛ), у I -острый ыиеломонобластный лейкоз (С'ШонЛ), у I - острый цонобласт-ный лейкоз (ОНонЛ), у I - острый эритробластный лейкоз (ОЭД), у I - острый лимфобластный лейкоз (ОЛЛ). У 4-х больных исследованая • проводили на протяжении курса лечения, у 5 - в начале и конце курса лечеьля. Группу больных ХИЛ составили 2 больных, исследование было проведено в стадии бластного криза, пэрэпэдзэго з терминальное состояние. У I больной исследование било проведено на протяжении курса лечения.
В связи с тем, что в настоящем исследовании били разработаны и использованы для оценки иорфофункционального состояния гомспо-этических клеток новые цитологические тесты, прогздэно специальное исследование по новым дополнительным критерия1* нухлеоллриого теста периферической крови у 100 здоровых доноров.
Результаты исследования и их обсуждение
I. Разработка и экспериментальное обоснование дополнительных критериев нуклеолярного теста
При исследовании периферической зоны дарнлка з модедышх клеточных системах со стимулированной пролиферацией выявлена об-
цая заквн&м^рнозть - обнаружение структурных изменений в спало-ядршкозсй аеиу ядра наряду с преобравойатеяьтик прэцас«:\.1 самом дцрыяко.
Структурная реорганизация периферии ядрыака ю-ракя-с* в формировании зоны, ограниченной йШ-содоргагдага гр^улакя, нязщикися с едршком радиальными тяжами. В дальнеЕзем ул c';.ilcль обозначается как "пзринуклеолярная зека" - ПНЗ. Р<1зрознзнность и малочисленность литературных данных об околоядрь-а.-соаой -с;..• ядра поставили перед нами задачу: изучить характерные «геологические особенности, природу зтего района ядрз в услс-л.ях i мально близких к прижизненным с цельв показать рзалиш^'ь (,2нс цуканной структуры.
Для объективизации исследований 1Ш ным проводам о кьуч^в морфологии ядер как в изолированной форма, так и Длтактных клерках. Крема того, применялись и различные метода пригото&яоннк препаратов: изолированныз дара растений помещались в каазидаор-нуа среду, в. которой нз происходит деформации ни ядер, чи внутриядерных структур, В клетки культур ткэног Heia , Нер-2 , II исследовались как в прижизненна условиях е каморе при 37сС, v?.к и в виде предварительно подсушенных препаратов; лимфоциты периферической крови человека такта изучались в прижизненных услоси-ях с пгмощью фазовоконтрастной микроскопии, и, параллельно, в подсменных мазках.
Приязненно выявляемая с пемещьзэ фазозокснтрастнои Ылкро-скопии в н&разругенных клетках и изолированных ядрах в модель-них клоточжяс системах, а такт» при цитохкынчзекоч выязшхш ИШ по K.Gmetana , сферическая область, округвяцая ядр^ко, кюяа идентичную структуру (граница, радиальныа тяжи) , что поеду,жло убедительным свидетельством реальности обнаруЕэнного феномена.
Унквзрсальность выявленных закономерностей показана в 4-х типах модельных клеточных систем in vivo и in vitro ; ФГА-стнмулированныэ лимфоциты; перевиваемые культуры Hein , Нер-2 » Fl в стационарной и логарифмической стадиях роста; гепатоциты крыс после частичной гепатэктомии; клетки меристемы растений при прорастании.
Обнаружение новых структур в клетке при действии пролифера-тивного стимула обусловило проведение серии экспериментов' по вы-явлони» связи мэдду реорганизационными процессами в г.колоядрыз-ковей зоне и прохождением клеткой стадий клеточного цикла.
Совокупность полусонных данных о морфефункциональном состо-
жил ЕГА-стамулнрозанних лимфоцитов свидетельствует (глс. I) как о преобразовательных процессах з даракв (рост иидзиеа чения Н3-урид1ша, доли гомогенных ядркгзк, числе /+/зсн),
так и о реорганизации периферии даркзха (доля клэток с ПНЗ).
ипгы
Р/с. I. Динамика показателей, характеризуп^зх нухгзйалпаЗ аппарат ^ГА-стимутеровагаш: лимфоцитов в 0-72 чассг^х культурах.
1 - процентов» содержание клеток в С^
2 - процентное седерзание клеток с гсиоггшпдл!
ядрыгками
3 - индекс мэчения Н3-уридина
4 - ЕНЗ-тест (деля клэток с пер'шуклеолярной зеной)
5 - ЛНГПНЗ-тест (доля клэток с липиднка коипенентеа
з границе поркнуклеолярнея зе:ш) 2 - процентное содержание гомогенных ядригак з культурах при одновременном введении £ГА и ахтниодоцина Д 4' - ПНЗ-тост в культурах при одновременном взэдениа ФГА и актиномицина Д.
Прогедашз сравнительного анализе дашах пс ра^ч.»^ сядршх ¡г шютнческкх показателей (рис. 1,2) указизсо? что формирование IE13 пргдэхявуот пассов сиу ксргхсду из
сЬсгояшя покоя й0 в прзргпликатдшЯ пср~гд ( c-c-g„ > соответствуем 3-6 чгсгл культигиркзскяя
Рис. 2. Динсынка пекааатолей, характеризуищгх нуклоолярник аппарат 2ГА-стимулнрованных лимфоцитов в 0-72 часовых культурах
1 - процентное содержание клеток в Cj
2 - процентное содержание клеток в S
3 - НЛК-тест (доля клеток, содержащих нуклеолярный
липидный кошонент)
4 - число AgA/вон в ядре
5 - нуклеолярный коэффициент
Максимальные значения процентного содержания лимфоцитов с ПНЗ наблюдались в 6-24 часовых культурах (до 32,2+2,6%), когда происходило резкое возрастание доли клеток в &1 (70,3+4,7%). В послодувцие сроки культивирования отмечена тенденция к сникэ-
нип доли клеток с ПКЗ (до 15,6+0,8%) при рзэксм асзрастахна процентного содергания клеток в 3 стадия клеточного цяяла (дэ 2в, 1+1,755).
Выззуказашпга даншо позволяэт прадпэдоллть, что фаза иирогания IUÍ3 соэтвэтствует ранним срокам g1 , а фаза фуияса-онирозания - более поздним срокам этого периода. Следует указать еще один аспект данного вопроса. Сшкжпо дола ялетэк с ПНЗ в культуре могзт бить связано о нзпрспорциенальнкм узэличскяеу диаметра ШЗ, поэтому, возмогно, совргмаишя цетоды цихрасксппз из позволяют выявлять границу ПНЗ вблизи сссбсяиа крупных В современной литература описывается болкзоз разнесбрзгяо логических проявлений перехода нуклоолярного аппарата дшфсцятод под воздействием ЗГА: увеличение площади и числа фпбриляярнш: центров и Ао/+/зен, изменив структуры этих ЕнутраядрщхоЕих образований (' wachtier , IS80, Field , IS34, Задзпнна О.В. н др., 1985, Челидзе П.В., IS86), рост числа nucleoiini ( Geni , 1976) и др. Очевидно, формирование ПНЗ явдязтся одной из иерфэ-логических особенностей этого процесса.
Изучение показателей активности нуклоолярного аппарата ят-фоцитов в условиях кнгибирования синтетических процессов в ядри-шко проводилось с целью показать коррелятивно связь • формирования ПНЗ с переходом gq - gn
Вызываемое действием актиноыицана Д глубокое подавленна ав-тивноста нуклоолярного аппарата оказало влияние и на врггапззадгэ околоддрыиковой зоны (рис. I). Если в 3-х часовых культурах о ФГА отмечалось наличие ПНЗ в 13,0+2,1$, то в культурах, содержащих актинюшцин Д и ФГА одновременно - 0,81+0,0^. В послэдув™9 сроки отмечались еще большие отличия.
Следовательно, обнаружение сопрягэнноста процзссоэ форярэ-вания ПНЗ и роста функциональной активности ядpices в начала дает основание использовать такой морфологический признак как ПНЗ в качестве маркера перехода G0-G,, СПНЗ-теот).
Выявление липидного компонента в ядрах тех гэ модельных клеточных систем, которые были использованы для разработка ШЗ-теста, проводилось люминесцентным и цитохимическим натодап в помещьв бензо/а/пирена, фосфгаа 3 н , S-ua тохскбензаитрепа н pV даиина Б. Ляпидный компонент выявлялся в ядерной еболвчка, хроматине, а при действии пролифаратязиога стимула - в ядряяе, радиальных тягах, граница ПНЗ. Перераспределение лкпздез а ядрах ФГА-стимулираванных лимфоцитов вырагалось а поогэдезатеяьнга на-
ксадении в граьичнкх структурах ПНЗ (3-24 часа кудьтлс-.грсааш'.:;), в цдризке и радиальных тяг.-.х (24-72 паса). Б условиях псдавлокп. синтеза рГНК ькткнешщинсл Д накопления липучего кс^снзн'ггs льелг.зних структурах кз неблздалось (р:;с, I ).
Васекая степень кьрреляциеннеа ськан С г = 0,69+0,02, . р* 0,01) ыввду долей клеток с ПНЗ и с сзщдкки ксыясьектсд ь граница ПНЗ yxasusao? на идентичность г-кявлясиж структур пр:: визуализации Kffl и лкпкдов.
Накопление липиднего компоненте. в ядриз«:е и ргдиальк!.г: тягах ОТНОСИТСЯ К более ПОЗДНИМ срок&и куи.TKESpCSSBK.*« кьгдя урогеш» активности нуклеовярного аппарата шгагш&и са) s: происходят рзст доли клеток прелкфзративгюго пула.
Следовательнов яаличиз ягшидов в грашшз ГК5 codtec-tcix"-"" ргшпзд проявления* ектквацкй иуккзеяярнего аппарата и cry-
гзсь utpnepoy перехода G0- 'X, , как и ПНЗ-тост. Этот кож крлгорий в дальнойаел сбссначаотся ЛНГШЗ-тес« (ьббрг-виьтург. «героина "яняидный кешонект границы ПНЗ"). Н&коалгнне гкпщ.с:. и едлгисе и радиальных тяаах происходит в бс«сз поздние сроки npspsnsiaaiiiBHoro «ерзода Gi и в стадам £ и клото-:«;сгг-цикла. Ддя рвгпстрации максимального уровня актаЕДОета нукл-:одяр-наго сяпьрита в ста периода клеточного цикла разработан к окспо-риыенталыю обоснован НЛК-тест (аббревиатура «¿ериинь "нуклоыкп-ний лпплдння ке^пенгнт").
Раграбстанниэ новые морфологические критерии ПНЗ-тзст, ЛКГПНЗ-тзст и НЖ-тест бил;: использованы для изучения этапе-: лейкоаогеноси у иьлей линии АКР и при ХЛЛ и ОЛ у чолезека. Кс-еяедгванко било предпринято с целью поиска цитологических критериев, отрагаювдх характер точения гемсбластозов.
2. Норфсфункциснальныз особенпостк лнмфоидных глоток в норуе у беспородных ышай и в динамике спонтанного лиифолейкоза у шшзй линии АКР
Mish линия АКР генетически наследуют способность к спонтанному зсэникновеикзз лкьгфолейкеза, этиологическим агентом которого является вирус Гросса, вызывавший гибель большинства животных посла I года гязни. В эксперименте были использованы 2-х, 6-ти и 12-тн месячные ишн линии АКР и беспородные мыли соответствующих возрастов.
2-х цзгячныз клинически здоровые мызи линии АКР сформировали группу для поиска ранних диагностических признаков лейкоза.
С-?.: гит-.'."* •:••::: рчсс:х.ч-тр;тг?г.:*.сл кля "прздг.-зй-
'СОГЛАСНО /•' "ч '' -1),
Г2--с л;..:..-: Л.£? oSjiapyrnra.vi зсз сдяьгсвсгсо
'".г а.
И":от .•„•гг.атздь.юст.* «рфояоглчосхлх гзи?изикл в ж^зкдиах
:сготкг..ог.зл'ггик;:;:.! лк^'фсл'СЕ.Ч'оао прсдсгг.влспа нигз:
? .клггуу^с;«? одгасркд пгяс'ГИ'Д
■ , •.'ер'сдрссигл Ei? ь ;.:',ифсн,иых -клетках тимуса (31,4+1,6% при :;ентр*льк;;х знгтс-кц.*« 4,0+0,22).
',?Г~!Э в линфслдлгх клетках тиггуса (32,7+2,1 прз „.г.з-;е:;:1лл 5,2+0,33). • . "лсдллзйкезн?:з" гизотнкз . С^г.:;"/•••."." ¡г; ПНЗ в клетках периферической кравя
•• г- ' го/;ч.1,1 s пср^зрйчбск&й крови, 43,6+3,2 а гл!уез). ЛКГПНЗ з лй^фсндн'^х &гетгсгас периферической креп (1?,1+1,3 в перьфэричоскоЯ крози и 45,2+2,3 в т::.*усо).
;.'„ НЛК в лкыфопдазх клетках тииуса (23,7+1,3 прл
I.IvO,: и контре-?).
4. 'о -.¡пзлз ÄoA/зок з лимфоидных клотках ткиуеа (3,3+
¿С,'-; рел 2,Ь0Д в контроле).
3» J ироиен-гнсп содержим лихгфеиуяяс клеток с гслоген-
i.v.::: —рзкечи в тлпусэ (£0,1+1,7 при 1в,6+1,2 з нкгероаэ).
0. доли лиуфоидиых клеток прсли.^зрарусг.зго пула в •::: «ус • (0,9^0,02 прл 0,3+0,01 в контроле).
12 узегпзв: генеря.лизованная фсрь;а лкигеолоякеза
1. Увеличение доли лнмфоидкых хлоток с ШЗ во всех гемспоэтичос-ких органах (44,0+2,25 в периферической крови, 21,3+1,4$ з костнсу иозге, 54,2+3,1% в тимусе, 25,9+I,3iS в лимфоузлах, 26,8+2,2:5 з селезенке).
2. Увеличение доли лимфеидних клеток с НЛК во всех геуопсзтичес-ккх органах (21,6+1,4» в периферической крози; 23,7+1,15 а костном мозге; 43,5+23& в тииусв; 27,9+2,0 в лимфоузлах; 25,8+1,2 в селезенке).
3. Рост числа AgA/зон во всех геиопоэтических органах (2,5+0,3
в периферической крови, 2,9+0,2 з костном иозге, 4,1+0,2 в тимусе, 3,0+0,2 в лимфоузлах, 2,8+0,1 з селезенке).
4. Рост процентного содержания гемогетатле ядризек во всех rsuo-поэтических органах (33,3+2,1 в периферической крови, 32.3+ +1,7 в костной мозге, 85,4^3,7 в тимусе, 45,8+3,3 в лимфоузлах, 51,1+3,2 в селезенке).
5. Появление лимфоидных клеток пролиферирувщего пула во всех ге-мопоэтических органах (1,6+0,1% в периферической крови, 6,3+ +0,2% в костном мозге, 11,6+0,3 в тимусе,' 5,740,2 в лимфоузлах, 2,9+0,01 в селезенке).
МЕСЯЦЫ кизни НУКЛЕОЛЯРНЫЕ МОРФОТИПЫ ПРИ ВИЗУАЛИЗАЦИИ:
РКП по Зп^шза Липидного компонента А9А/30н
2 а О о,
6 ®о 1 О' о <3
12 ^/гл 6 7/ е л ^у • © 2
Рис. 3. Преобладающие нуклеолярные морфотипы в лимфоидных клетках периферической крови мышей линии АКР 2-12 месяцев жизни. I - кольцевидное ядрышко, 2 - АдА/зона, 3 - радиальные тяжи, 4 - граница перинуклеолярной зоны, 5 - липидный компонент границы перинуклеолярной зоны, 6 - гомогенное ядрышко, 7 - микроддрыпко, 8 - нуклеолярный липидный компонент.
Приведенное выше схематическое изложение этапов активации лимфоидных клеток показывает, что использование догшштельных
нуклоолярг::: тостов в значительней меро дг'.здизируот существовавшее ганое лрздстаяяожю о pasoamn лейксзного процесса у мшеа
Л1нни АКР.
Дзг,стг::о гтг.-гогешого фактора в'ягзнлось прзгдв всего в фер-.■.мрозшгпи перпнухлеолгрноя зону, затем в накоплении ЛКГПНЗ, увеличении числа Ag/+/cou и доли гомогенких ядр'шзк.
Нг.рстанио морфсцитохимических изменений з нуклеоляриси аппарата сопровождалось мсрфометрическими и кинетическими изменениями у 12-месячных лейкозных згивотннх и охватывало все гэиопоэти-ческие органы, проявляясь в высоких значениях ПНЗ-теста, ЛКГПНЗ-теста, НЛК-теста, числа Ад/+/зон, доли гомогенных ядркиек.
Сказанное позволяет утверждать, что при развитии лимфопро-лиферативиого процесса in vivo наблюдаются те se морфоци-тохимическке, морфометрические и кинетические изменения, которые происходят з культурах ФГА-стимулированных лимфоцитов in vitro при этом новкэ морфологические критерии - ПНЗ-тост, ЛКГШЗ-тест и НТК-гост занимают центральное место при выявлении ранних признаков спонтанного лимфолейкоза.
3. fienSo функциональные особенности гзм"опос.тичосхих клеток чилсгека з норме и при гемобластозах
Результаты исследования лимфоидных клеток кызэй линии АКР в процессе лзйкозогекеза дали осксваниз предположить, что сходные морфологические признаки свойственны и для гемопозтических клеток человека при развитии лейкозного процесса.
Морфологические особенности лимфоидных клеток при ХЛЛ представлены ниже (табл. I). В периферической крови 40 больных выявлено 4 морфосубпопуляции по нуклеолярнкм маркерам. Морфос.убпопуляция "О": составляет основу популяции лимфоцитов периферической крови здоровых людей (93,9+0,7^) и больных ХЛЛ с начальными признаками ХЛЛ (95,2+1,3$). (Эти клетки содергат I кольцевидное ядрышко, I А§/+/зону, ПНЗ-негативны, ЛКГПНЗ-негативны, НЖ-негативны. Такие лимфоциты находятся в стадии G0 клеточного цикла).
Мор&осубпопуляция I: составляет значительную часть популяции лимфоидных клеток больных ХЛЛ с иодленно-прогрессируючим течением заболевания. Эти клетки содержат I кольцевидное дпрмшко, I Ад/+/зону, ПНЗ-позитивны, ЛКГПНЗ-позитивны, НЛК-негативны. По методу Г.И.Козинца и В.М.Котельникова такие лимфоциты определяются, как находящиеся в стадии G. клеточного цикла.
1С/ЛЦЦВ I
Норфсфункциональная характеристика лиифоидных клеток периферической крози больных ХЛЛ и здоровых дснорог
I группа и = 14 М + ы 2 группа и 14 М + м 3 группа п » 12 11 + ы Контроль Н ° 20 Ц + ы
Ыодленно-програсси-руюдий вариант течения ХЛЖ Еыстро-прзг-рессирувкий вариант точения ХЛЛ - Здоро- Б'аЗ доноси
Лнифоциты (0) 73,3+2,8 81,7+2,4 82,5+3,8 32,3*2,5
Пролимфоциты (■%) 0,8+0,01 2,4*0,2 5,2+0,2 0
Лицфобластш ($) 0 0,3+0,01 0,5+0,01 0
Клетки в С0 {%) 95,2+1,3 96,8+1,7 71,3+4,1 93,9+0,7
Клетки в С1 (%) 4,8+0,5 3,2+0,5 19,7+0,5 6,1+0,5
Клетки в к /0>2 Ф 0 0 9,4*0,8 0
Нуклеолярный
коэффициент 1,21+0,01 1,22+0,04 1,30+0,2 1,21+0,1
Гомогенные
ядршки {.%) 2,2+0,3 8,6+0,4 20,7+1,6 3,2+0,5
Кольцевидные
ядрыяки {%) 79,7+1,8 77,5+2,3 70,4+1,5 92,5+3,7
Ликроядршки {%) 18,1+1,8 13,9+2,2 9,3+1,3 4,3+0,6
ПНЗ-тест {.%) 12,2+2,3 65,8+3,9 30,2+2,3 2,0+0,3
ЛКГПНЗ-тест Ш 13,0+1,9 63,9+2,4 31,8*4,0 2,2+0,1
НЛК-тест Ф 0 0,1+0,01 10,9+0,3 0
Число А§/+/зон
в ядро 9 0,99+0,08 1,35+0,1 1,94+0,2 1,08+0,03
Площадь ядра(мюГ) 22,4+3,1 25,2+3,7 44,5+5,0 21,6+4,3
Периызтр ядра(мкм) 19,3+2,6 20,6+3,1 37,8+2,9 18,9+1,2
Коэффициент округ-
лости ядра 1,01+0,1 1,03+0,1 1,11+0,2 1,01+0,1
Иорйосубпопуляния П: составляет больсуя часть популяции периферической крови больных ХЛЛ с быстро-прогрессирующим характером точения заболевания. Клетки этой ыорфосубпопуляции содержат 1-2 гомогенных ядрышка, с 2-3 А§/+/зонами, ШЗ-позитивны, ЛКГПНЗ-пози-тивны, НЛК-негативны, находятся в стадии 00 клеточного цикла. ЫотхЬосубпопуляция В; составляет часть популяций лимфоидных клеток
периферической кропя больных о быстрг-лрог^зсахруэдям характере» течения Г' наиболее агрессивной фор-.«. Эти ¡глотан характеризуется максимально;! степенью активности нуклеолярного аппарата: 1-3 го-i.:orei«-bix яярст'.а, до 6-7 AgA/зок в ядрстнв, ИЛК-псзитивии,. ШЗ-яезитазнн, ЛлГ11НЗ-познтирны, находятся в S1 , S , ®2 стадиях .■'лоточного цикла.
Акалспяяыз мот>фсткпц лимфочдных клеток характерны для культур -1ТЛ~с7я:!улирезанных якнфсцитоэ. Сравнительный анализ Я52г$с»д-KiDC клвто;; при ХЛЛ и в культура in vitro проведентдмаграь'иах по двум нукяэолярякч маркера»! (рис. 4). Сравнение показало, что ^ер^осубпсяуяяшя I состЕЭтствует 6-ти часовым куяьтурад ( °о~®1)» морфссубпопуляцил П - 12-24 часовк« культурам ( <*<\ ), иорфссубпо-пуляцпя Г! - 43-72 часовым культурам ( Gi , s ,G2 ^
Следовательно, нуклеолярныо показатели, в тс« числе и дснод-нятеяыплэ нуклеолярннэ критерии - ПНЗ-тест, ЛКГПНЗ-тэст и НЯХ-. ■г,зет - позиоляот выделить варианты ХЛЛ с различны?,! темпом прогрэ-ссирОБ-гиия, что указывает на их прогностический характер.
Еолсо дотальноо изучение отдельных случаев ХЛЛ било предпринят; пр,: .^совпадении клинической и цитологической оцгнкя пнтгя-си'г-ности опухолевой прогрессии. С этой целью по избрзнчк! пара« тостов составлялись двумерные распределения частоты.встрзчасусс-ти определенных нуклеолярных маркеров (рис. 4)
На cxei.-з наглядно показано, что в зависимости от значений. ПНЗ-тоста (¡;сь ординат) и процентного содергания клеток с гс.чо-гзлша:а гдрьпками (ось_абсцисс), точки на диаграмма группировались в скопления, соответствовавши контролю (К) я группеи больных Ш (I, 2, 3). Так, например, популяции яимфоадных клеток периферической крови I и 2 групп больных ХЛЛ с медленно-прогрес-сирувцим вариантом течения заболевания характеризовались низ in"! процентным содержанием клеток с гомогентми ядрыякаыи. В то гэ время, резкие отличия в значении ПНЗ-тзста у этих групп ( 0,01) обусловили формирование четко обособленных "облаков" точек I и 2 на диаграмме. Точки, относящиеся к 3 группе больных ХЛЛ, таняэ образовали на диаграмме отдельное скопление, что было обусловлено резкими ( р< 0,01) различиями по процентному содержанию гоуогзн ных ядрьшек.
Особсз положение на диаграмме занимали точки, соответствовавшие данным нуклеолярного теста больных ХЛЛ, которые согласно данным только классического лабораторного анализа и клиническим показателям могли бы быть стносенн к о г.гггеш группам I, 2 и 3.
Рис. 4. Сопоставление распределения 40 случаев ХЛЛ./I, II/ и 15 культур ФГА-стимулированных лимфоцитов здоровых доноров /Ш, 1¥/ по двум нуклеолярньм маркерам
I, Ш - по оси ординат значения ПНЗ-теста {%)
по оси абсцисс - доля гомогенных ядрышек (.%)
II, IУ - по оси ординат - значения ЛШШЗ-теста (%)
по оси абсцисс ~ значнния НЛК-теста Ю «- больные с опухолевым вариантом ХЛЛ
Однако, т.к. нуклеолярные маркеры показали отличия данных по
oír.:.! (fo«-;-.m!rt о? ccncmut групп, бчли сформированы спошгалыггэ пс-;;групп-; I V, 2 "а", 3 "а".
Так, у »Í0.-5HC1 3., г/з~зр:ой з подгруппу I "а" ебнаругсмо
' сг пи группа I значение ПНЗ-тезта (5£л) при у-;■:-";!(•:: ) гг':сгс:п*:;х ядр^'^з;:, a у бсл-ьпсй Г» -
. 7v;y-.H-;::o гс:!0г0кч::х -yiprrc!; £11;'). Овдгн-н^,, ¡гуклооляр-
'ír-pv' г; г? случаях прогностически указали на прогроссп-
;:гог ;.:г.:;?прол^эр«5тяз!Юго процесса при сохсзне:зш •'.^"fxo-r i с статор-«« пара-летгров на урогна, соотвотстэуз~си пачазь-. ¡ стлл.;,г' ДальнеГ.глзо наблюдение показало, что у
Только 1 3. раапитио процесса пезло по i'-здденнему г-арпя.нту, а У бсльнол Г, -- по бистро~прогрзссирувг*ему.
К 2 "а" поггругаге били отнесени трое больных у хоторух по-г.'.-ззлт'дн "Ч3-"ста, НЛК-тсста л процентное содорглшкз гсхогоикух •уразея кпотйтздьно прзв^зхя норлу, з то зромя как для ссиоктой групп-г 2 "я,п1:стзр:!1г."л являлись лета зысокиз значения ШЗ-тзстз. У-ит^ззя то обстоятельство, что у всах болышх подгруппу 2 "а" 7«*гкос'Л'рОтаИ 2.уси-нт ХМ с ЕКраГЗННКМ опухолввидю.-! ростом ЯКУ-гсу?;:01', ло-гидх-слу, причину столь рзэких отличий донгах нуачво-дярнол тсст-с:!сгг:*ч по этой подгруппа модно связать с ссобекнсс-Tipsn рззгития данного вариант? ХЛЛ. Последую:?« наблэдекгя за этини больно.® показали достаточно быстрое нарастание хлкнихо-гсметслсгичоской дег.сгетенсацки наряду со значительна! ростом лм-•-фсузлоп, увеличением печени, селезенки. Через год пссг.а исследования нуклеол.триого аппарата лкмфоидннх клеток периферической крови все из больных это!) подгруппы скончались.
У двух больных подгруппы 3 "а" заболевание протекало з наиболее агрессивной форме,'что соответствовало и данным кукласлрр-bOí! тест-сиетомы (рис. 4, I, П). На диаграмма показано достаточно обособленное пологзние точек, относящихся к данным этой подгруппы. В бояьпей мере это относится к рис. 4.П, где показано расположение точек по 2 нуклеоляриым маркерам: НЛК-тест (ось абсцисс) и ЛКГШЗ-тест (ось ординат). Высокие значения НЛК-тоста для этих больных (ЗЗъ для больного Б., 24% для больного Н.) обусловили особое положение точек Н. и Б. на рис. 4.П. У больных Н. и Б. наблюдалось крайне быстрое прогрессировать клинических проявлений лейкоза, развитие анемии и трембоцитопанзш, смарть наступила через несколько месяцев после начала заболевания.
Следовательно, новые нуклеолярнмо маркера прздетавляят прогностическое значение для определения характера течения ХЛЛ, а
текез даэт возможность дифференцировать отдельные случаи заболевания» когда уровень активности нуклзолярного аппарата лимфоид-ных клеток не соответствует степени тяжести ХЛЛ, оцениваемой только по клинико-гематологическим показателям.
Таблица 2
Ыорфофункциональная характеристика властных клеток периферической крови больных острим лейкозом
Острый СЫЛ ОНЛ Лимфоциты
лейкоз /ОЛ/ п = 9 п = 7 доноров
п - 20 + ФГА п = 20
Лейкоциты /х 109/л/ 32,5+6,8 31,0+5,9 10,7+2,1
Властные клетки Ш 39,0+6,8 34,1+9,3 67,9^3,3
Клетки в С0 (%) 21,¿¡1,7 13,5+3,6 29,2+5,7
Клетки в С| (0) 70,4+4,6 77,^4,7 67,6+7,1
Клетки в 3/&2 й) 8,7+3,3 9,2+1,3 3,2+0,8
Нуклеолярный
коэффициент 1,99+0,2 2,7+0,1 2,2+0,3 1,41+0,1
Гомогенные ядрышки
{%) 76,2+3,0 71,3+4,2 67,5+3,9 80,3+2,4
Кольцевидные
ядрышки (%) 24,6+2,5 6,7+0,9 12,7+1,0
Микроядршки (%) 21,3+1,3 22,0+2,1 19,8+1,5
ПНЗ-тест (0) 30,2+3,7 38,¿3,1 34,3+2,7 22,3+1,8
ЛКГПНЗ-тест (%) 26,4*3,4 39,2+2,0 35,9+1,8 24,¿2,0
НЖ-тест {.%) 19,8+2,4 21,8+3,9 13,1+1,8 22,5+1,1
Число Ао/+/зон
в ядрышке 2,4+0,1 2,5 +0,8 2,2+0,7
Число АдЛ/эон
В ядре , 5,1+0,5 6,2+1,1 5,8+1,0 4,1+0,5
Плойшдь ядер
/ыкы2/ 65,8+6,0 80,0+6,2 53,1+7,1
Ыорфоцитохимически8 особенности нуклеолярного аппарата изучались у 20 больных различными вариантами 0Л. Показано, что наличие ПНЗ-позитивных, ЛКГПНЗ-позктивных и НЛК-позитивных властных клеток характерно для периферической крови при СЫЛ, ОНЛ, ОУИонЛ, ШонЛ, ОЭЛ, ОЛЛ (табл. 2). У больных ОЛ изучение морфо-
Рис• 5 Сопоставление действия актиномицина Д на йГА-стииу-
лирогзалнце ликдрогити здоровых доноров /А/ и действия цптэстатичесяих препаратов на б.часткые клетки периферически нрозч больных сстрюл лейкозом и хроническим мнэдолэй-:гозс:.! /Е/<,
1 - доля властных клеток в периферической кроэи или
культуре
2 - долг бластных клеток в стадии ^ клеточного цикла
3 - доля бластных клеток в стадии С0 клеточного цикла
4 - доля бластных клеток в стадиях 5 / С^ клеточного
цикла
5 - НЛК-тест
6 - ПНЗ-тэст
7 - нуклеолкрный коэффициент
8 - доля клеток с гомогенными ядрышками
I'- 8'- соответствующие значения вышеуказанных показателей при действии актиномицина Д(А) на ФГА-сти-мулированные лимфоциты и при действии цитостати-ческих препаратов на властные клетки больных ОЛ (Б)
функциональных особенностей нуклеолярного аппарата было проведено в динамике лечения (рис. 5). Действие цитостатических препаратов на бластные клетки периферической крови сопоставлено с данными по действия'актиномицина Д на ФГА-стимулированные лимфоциты
в культура. Сравнительный анализ свидетельствует об однонаправленное характере морфологических изменений: сшшэние доли гомогенных ядрьзш, числа AgA/зон, ПНЗ-позитивных, ЛКГШЗ-позитив-ных, НЛК-позитивных клеток, В меньшей мере этот процесс касается нуклеолярного коэффициента, что морфологически вырагается в появлении бластнкх клеток с несколькими микроядрышками.
Таким образом, изучение процессов реорганизации периферии ядршка в динамике клеточного цикла показало, что на ранних этапах прарепликатигного периода G^ , когда не отмечается изменение показателей теста K.Smetana и морфометрических параметров ядер, вблизи ядркпэк формируется особая область - перинуклеоляр-ная зона, которая содержит радиальные тяжи и пограничные структуры. Как показано на модельных клеточных системах со стимулированной пролифорациой in vitro и in vivo (СГА-стабулированные лимфоциты; перевиваемые культуры клеток Hela , нер-2 , Fi гепатоциты рогенерирующзй после частичной гепатэктомии печени крыс) - это начальная степень активации нуклеолярного аппарата. Для регистрации клеток на этом этапе разработаны 2 новых цктологи-чбских критерия - ПНЗ-тест и ЛКГПНЗ-тест.
Начальная степень активации нуклеолярного аппарата выявлена у дикфоидных клеток в группах больных ХЛЛ с медленно-прогрессирующим характер:.*! течения заболевания, в клетках тимуса и периферической крови у мышей линии АКР на доклинических стадиях спонтанного лиыфолойкоза, в 3-6 часовых культурах ФГА-стимулированных лимфоцитов, в гепатоцитах крыс через 3 часа после ЧГЭ, через б часов после смены среды в клеточных культурах Heia , Нер-2 И Fl .
В связи с этим морфологические проявления начальной стадии активации нуклеолярного аппарата можно рассматривать как прогностический (при ХЛЛ) и ранний диагностический (при лимфолейкозе у мькей линии АКР) признаки опухолевого процесса.
Максимальное проявление активности нуклеолярного аппарата выражалось в накоплении липидного компонента в структурах пери-нуклеолярной зоны и в ядрышке. Этот этап" регистрировался с помощью разработанного НЛК-теста.
НЛК-тест выявил максимальное проявление активности нуклеолярного аппарата в лимфоидных ^клетках 72-часовых культур при стимуляции ФГА, в гепатоцитах крыс через 24 часа после ЧГЭ, в лимфоидных клетках 12-месячных мышей линии АКР, а та гаге в лимфоцитах периферической крови больных ХЛЛ с быстро-прогрессирующим вариан-
тем течения заболевания, в бластимх клетках во всех случаях ОЛ и
ХМЛ.
Действие актшсмиинна Д на клетки в культуре и использование цитостатических препаратов в клинике приводило к снигзкга активности нуклеолярного аппарата, что морфологически выряяалось в падении значения всех нуклеолярных показателей, в том число и Пиа-тзста, ЛКГППЗ-теста и КЛК-теста.
Следовательно, представленный в работе фактический материал по экспериментальному обоснованию и использованию новых морфологических тестов мотет слулить основанием для расширения нуклеоля-рного теста к.Бг^апа . ПНЗ-тест и ЛКГПНЗ-тест при этом будут регистрировать более ранние проявления н^клеолярной активности, чр>( тзст к.Бл^апа , а НЛК-тест - максимальную активность нуклеолярного аппарата, что могят слувать основанием для расширения диапазона использования теста к.втекала
'ВЫВОДЫ
1. Процесс роорганиаашш нуклеолярного аппарата в модельных клеточных системах со стимулированной пролиферацией и при злокачественной трансформации характеризуется морфологическими изменениями на периферии ядрыяка. В этом районе интерфазного ядра - "перинуклеолярной зоне" - образуются радиальные тяет и структуры, распологзнныв на границе околоядркзковой области.
2. Формирование перинуклеолярной зоны ядра предшествует переходу ФГА-стимулирозанных лимфоцитов из &0 в &т период клеточного цикла и характерно для 3-6 часовых культур.
3. Получены экспериментальные данные о зависимости выявления нуклеолярного липидного компонента от стадии клеточного цикла. Накопление нуклеолярного липидного компонента в ядршках СГА-стимулированных лимфоцитов происходит через 24-48 часов культивирования и соответствует периоду активного функционирования нуклеолярного аппарата в С|, 3 и Сг, стадиях ¿меточного цикла. •
4. Для регистрации этапов активации нуклеолярного аппарата разработаны новые морфологические тесты, в основу которых положены выявленные особенности реорганизации периферической области ядрышка. Тесты учитывают процентное содержание клеток, обладавших перинуклеолярной зоной и нуклеолярнкм липидным компоненте;! в границе перинуклеолярной зоны, г--опальных тягах и ядркаке.
5. Изучение морфологических ■->сс5ен:-:сстей нуклеолярного аппарата лимфоидных клоток мьшай АКР, проведенное в динамике спон-
тонного лкифолейкозя, выявило раши8 проявления предлейкозного состояния У 2-х и 6-ти месячных тавотных, характеризующиеся формированием перинуклеолярной зоны и накоплением липидного компонента в лимфоиднцх клетках тимуса и периферической крови.
6. Действие 5ГЛ на лимфоциты в культуре in vitre и злокачественная трансформация геыопоэтичэских клеток при хроническое лшфолейкозе, остром лейкозе, хроническом миелолейкозе у человека приводят к сходный морфологическим проявлении! активации нуклеолярного аппарата, Ингибирующзе синтез pFriK действие актиномицина Д на клетки в культуре и цитостатических препаратов в клинике морфологически такяе проявляется сходным образом: снижением доли активных морфотипов ядрьшка, отсутствие« перинуклеолярной зоны и нуклеолярного липидного компонента.
7. Комплекс цитохимических и кинетических методов исследования, включая нуклеолярные паркеры, использован для выявления двух вариантов течения хронического лиыфолейкоза. Начальный этап активации нуклеолярного аппарата, характерный для лиыфоидных клеток при переходе G0 - Gj, отмечался при благоприятном медленно-прогрессирующем варианте. Накопление нуклеолярного липидного компонента, сопровождающее максимальное проявление активности ядрышек лиифоидних клеток у Gj, S и Gg стадиях клеточного цикла, наблюдалось у больных с быстро-прогрессирующим вариантом заболевания-
Слисок рзбот, опубликованных по материалам диссертации
1. Мосолов А.И., Левитан Н.В,, Бондарева A.A., Трунова Л.А. Лозовой В,П. Строение ядрышка в иммунном ответе. - Тезисы П Всесоюзного симпозиума по иммунологии воспроизведения. М., IffiO. С. 81.
2. Левитан Н.В. Роль липидного компонента ядрышка в реализации генетической ьрограмки в норме я при патологии липидного обмена. Тез. I Всесоюзного съезда медицинских генетиков. Киев, 1984, - С. 189.
3. Лепитан Н.В., Мосолов А.Н. Исследование липидсодериацего компонента ялркя-а d качества тест-системы для регистрации уровня еуш'шональнов активности генетического аппарата. Тез. научн. кон*. НГМИ, Новосибирск, 1965. - С. 72.
4. Лег:?так Н.В., Носолов А.Н., Монахова М.А. Выявление и характеристика перинуклеолярной зоны ядра - нового морфологического критвыя нуклооляркого теста. Биологические нзуки, 1936. -
7. - С, 49-55.
5. Левитаь Н.В. Действие актиномицина Д на нуклзолярный аппарат лимфоцитов периферической крови человека б ранние сроки бласт-трансформацяя. В сб. "Механизмы патологических реакций". Томск, IS88. - С. 54-66.
6. Дсвктлн Н.В., Шорина Г.Н. Тест-систзма для изменил перестройки нуклеолярного аппарата гепатоцитов в регенерирующей после частичной гепатэктомии печени крыс. В сб.: "Механизмы патологических реакций". Томск, 1968. - С. 145-148.
7. Лосева М.И., Левитан Н.В., Монахова М.А. Новые нуклеолярные маркеры гемопоэтических клеток у человека и у мышей линии АКР. Тез. П Всесоюзного съезда медицинских генетиков, 1990. -С. 176.
8. Левитан Н.В., Шорина Г.Н., Дегтярева М.М., Лосева М.И. Якобсон Г.С., Монахова М.А. Пространственная организация перинуклеолярной зоны гемопоэтических клеток при лейкозах у человека. Биологические науки, 1990, J? II. - С. 38-45.
Подписано к печати 29.09.90 г.
Зак. 5589 Тир. 100 экз.
Печ. л. I „
Тип. СО АМН СССР. г.Новосибирск.
Зак. 5589 Печ. л. I
1990 г.
Оглавление диссертации Левитан, Нина Васильевна :: 1990 :: Новосибирск
ВВЕДЕНИЕ .б
ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1.1. Цитологическая характеристика гемобластозов
1.2. Структурные компоненты ядрышка и их топография в зависимости от функциональной нагрузки
1.3. Морфологические особенности нуклеолярного аппарата опухолевых клеток.
1.4. Пространственная организация периферических структур ядрышка.
Глава П. МАТЕРИМЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ. КЛИНИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА БОЛЬНЫХ ГШ0БЛАСТ03АМИ
И КОНТРОЛЬНЫХ ГРУПП ЗДОРОВЫХ ДОНОРОВ.
Глава I. РАЗРАБОТКА И ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЕ ОБОСНОВАНИЕ
ДОПОЛНИТЕЛЬНЫХ КРИТЕРИЕВ НУКЛЕОЛЯРНОГО ТЕСТА . 58 3.1. Морфологические особенности перинуклеолярной зоны в динамике клеточного цикла.
3.X.I. Нуклеолярный аппарат ШГ'А-стимулированных лимфоцитов периферической крови человека в динамике клеточного цикла.
3.1.2. Изучение действия актиномицина Д на нуклеолярный аппарат iTA-стимуяиро ванных лимфоцитов.
3.1.3. Характер взаимосвязи между перинукле'олярной зоной и околоядрышковым хроматином в ЩГА-стимулированных лимфоцитах
3.1.4. Нуклеолярный аппарат клеток перевиваемых культур Heia, Нер-2, 11 в стационарной и логарифмической стадиях роста.
3.1.5. Нуклеолярный аппарат гепатоцитов регенерирующей после частичной гепатэктомии печени крыс.
3.2. Распределение липидсодержащих структур околоядрышковой зоны ядра в динамике клеточного цикла
Глава 1У. МОРФОШШЩЙОНМЬНШ 0С0БЕНН0Ш ЛИМФОИДНЫХ KIET0K В НОШ 7 БЕСПОРОДНЫХ МЫШЕЙ I В ДИНАМИКЕ СПОНТАННОГО ЛШШШШЮЗА У МЫШЕЙ ЛИНИИ АИР
4.1. Клиническая характеристика мышей линии АКР в динамике спонтанного лимфолейкоза от 2-х до 12-ти месяцев жизни
4.2. Морфоцитохимические и кинетические особенности лимфоидных клеток гемопоэтических органов беспородных мышей в динамике 2-12 месяцев жизни
4.3. Нуклеолярный аппарат лимфоидных клеток мышей линии АКР.
4.4. Морфометрическая характеристика ядер лимфоидных клеток мышей линии АКР в динамике лимфолейкоза
4*5. Кинетическая характеристика лимфоидных клеток мышей линии АКР в динамике лимфолейкоза.
4.6. Сопоставление морфоцитохимичееких, морфометрических и кинетических данных по оценке характера течения лимфопролиферативного процесса у мышей линии АКР .»•»*
Глава У. МОРШОШШКЦИОНАШШ ОСОБЕННОСТИ ГЕМОПОЭТИЧЕСКИХ
КЛЕТОК ЧЕЛОВЕКА В НОРМЕ И ПРИ ГЕМ0Б1АСТ03АХ
5.1. Морфоцитохимическая характеристика нуклеолярного аппарата лимфоцитов здоровых доноров
5.2. Морфофункциональные особенности лимфоидных клеток периферической крови при ХЛЛ
5.2.1. Морфоцитохимические особенности нуклеолярного аппарата лимфоидных клеток периферической крови больных ХЛЛ
5.2.2. Морфометрическая характеристика лимфоидных клеток периферической крови больных ХЛЛ
5.2.3. Кинетические особенности популяций лимфоидных клеток периферической крови больных ХЛЯ.
5.2.4. Сравнительная оценка морфофункциональных особенностей лимфоидных клеток периферической крови больных ХМ и С1 А-стимулированных лимфоцитов здоровых доноров . 134 5.3. Морфофункциональная характеристика бластных клеток периферической крови больных различными вариантами острого лейкоза и хроническим миелолейкозом.
5.3,1. йорфоцитохимические особенности нуклеолярного аппарата бластных клеток периферической крови больных острым лейкозом
5.3.2. Морфоиетричеекая характеристика ядер бластных клеток периферической крови больных острым лейкозом
5.3.3. Кинетические особенности популяций бластных клеток при остром лейкозе
5.3.4. Сравнительная оценка морфофункциональных особенностей бластных клеток периферической крови при остром лейкозе и ШГ А-стимулиро в анных лимфоцитов в культуре . 144 5.3.5, Морфофункциональнал характеристика бластных клеток периферической крови больных острым лейкозом в динамике цитостатической терапии.
5.3.6. Морфофункциональнал характеристика нуклеолярного аппарата бластных клеток периферической крови больных хроническим миелолейкозом в стадии бластного криза
ОБШДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЯ
Введение диссертации по теме "Патологическая физиология", Левитан, Нина Васильевна, автореферат
Выяснение механизмов возникновения и развития опухолевого процесса рассматривается как важнейшая задача современной экспериментальной и клинической патологии. В связи с этим морфологические исследования гемопоэтических клеток направлены на поиск новых цитологических критериев, отражающих те преобразования, которые происходят при малигнизации. Наряду с такими известными проявлениями злокачественной трансформации как увеличение ядер-но-цитоплазматического соотношения и декомпенсация хроматина, динамика структурных изменений нуклеолярного аппарата также может служить основой для разработки морфологических методов определения этапов опухолевой прогрессии 26,68,104,133,257,474 . Кроме того, перспективность изучения морфофункциональных особенностей нуклеолярного аппарата при гемобластозах в настоящее время стала очевидной в связи с обнаружением высокой частоты вовлечения ядрышкообразующих хромосом в хромосомные перестройки, определяющие злокачественную трансформацию гемопо этических клеток 238,288,298] .
Указанные аспекты в общей патофизиологической проблеме поиска цитологических маркеров малигнизации при гемобластозах послужили предпосылкой настоящей работы.
Для оценки способности лимфоцитов периферической крови к активной транскрипции и пролиферации в 1970 году K.Smetana и его сотрудниками был разработан и экспериментально обоснован нуклеолярный тест
459,47s], в последующие 20 лет широко используемый в онкологических £[84,265,4ш], гематологических ^26,74,76,153, 163,473], иммуноморфологических [l69,138,274,46?] исследованиях.
Классический нуклеолярный тест K.Smetana, основанный на светооптическом определении числа и структуры ядрышек, наиболее информативен в тех случаях, когда изучаемые клетки находятся в покоящемся состоянии (Go), либо активнофункционирующем состоянии (периоды G-i, s и g2 интерфазы)» В связи с этим сравнительно прос той и удобный для экспериментальных исследований и клинической практики нуклеолярный тест K.Smetana не удается применить для регистрации изменений в ядрышках на ранних этапах перехода клеток из Go в стадию G1» клеточного цикла, когда достоверного изме нения показателей нуклеолярного теста не обнаруживается*
Установление определенной зависимости между активацией тран скрипционной активности и преобразованиями ультраструктуры ядрыш ка на ранних этапах периода «И отражено в ряде работ отечественных и зарубежных исследователей 55,110,184,324,43lJ. В связи с этим представлялось целесообразным обратить внимание на недостаточно изученную пространственную организацию периферийной области ядрышка и исследовать морфофункциональные особенности реорганизации околоядрышко вой зоны на всех этапах пререпликативного периода клеточного цикла.
Цель исследования. Разработать морфологические критерии, от ражавдие реорганизацию нуклеолярного аппарата гемопоэтических клеток в динамике клеточного цикла и оценить возможность их использования для диагностических и прогностических целей при гемо блаетозах в эксперименте и клинике.
Задачи исследования:
1. Изучить особенности формирования перинуклеолярной зоны в модельных клеточных системах со стимулированной пролиферацией и разработать тест, позволяющий регистрировать ранние этапы перехода клетки из стадии G0 в .
2. Изучить особенности накопления и распределения нуклеоляр ного липидного компонента в модельных клеточных системах и разра ботать тесты, позволяющие регистрировать прохождение клеткой этапов пререпликативного периода.
3» Изучить действие актиномицина Д на структурную организацию нуклеолярного аппарата.
4. С помощью нуклеолярного теста с но вши дополнительными критериями исследовать гемопоэтические клетки периферической крови, костного мозга, тимуса ,, лимфоузлов и селезенки у беспородных мышей и в динамике спонтанного лимфолейкоз а у мышей линии MP.
5. Изучить пространственную реорганизацию нуклеолярного аппарата гемопоэтических клеток периферической крови при гемоблас-тозах у человека в динамике клеточного цикла и сопоставить обнаруженные изменения с особенностями нуклеолярного аппарата в культурах ФГА-стимулированных лимфоцитов.
6. Исследовать структуру популяции лимфоидных клеток периферической крови у здоровых доноров и у больных XII с помощью нук-леолярных маркеров.
7. Оценить прогностическую значимость нуклеолярных маркеров при определении характера течения XII.
Научная новизна.
Впервые с помощью различных методов световой и люминисцент-ной микроскопии в модельных клеточных системах со стимулированной пролиферацией выявлена и изучена особая область ядра - "перинук-леолярная зона". Показано, что перинуклеолярная зона - реально существующая динамическая структура интерфазного ядра, с учетом строения которой разработан новый критерий нуклеолярного теста -иПНЗ-теети.
Впервые с использованием цитохимических методов и люмини-сцентного анализа получены свидетельства зависимости накопления липидного компонента в ядрышке и околоядрышковой зоне ядра от стадии клеточного цикла. На основании полученных экспериментальных данных разработаны ЖГПНЗ-тест и НЖ-тест, с помощью которых оценивается доля клеток, содержащих липидный компонент в границе перинуклеолярной зоны ядра и в теле ядрышка.
Новые дополнительные критерии нуклеолярного теста, отражающие динамику нуклеолярного аппарата в пререшшкативный период клеточного цикла, использованы в комплексе с показателями нуклеолярного теста K.Smetana и таким показателем, как число %/+/зон. Предложено ввести для использованного в работе комплекса методов новый термин - «нуклеолярная тест-система».
С помощью нуклеолярной тест-системы впервые изучена динамика лимфопролиферативного процесса при спонтанном лимфолейкозе у мышей линии АКР, а также при таких гемобластозах человека как хронический лимфолейкоз, хронический миелолейкоз, некоторые варианты острого лейкоза.
Показано, что новые нуклеолярные маркеры могут быть использованы в качестве прогностических критериев для определения характера развития гемобластозов.
Практическое значение работы.
Универсальность феномена "перинуклеолярная зона*, возможность обнаружения таких структур как радиальные тяжи и граница перинуклеолярной зоны при изучении широкого спектра биологических объектов позволяют использовать новые нуклеолярные маркеры в качестве дополнительных критериев нуклеолярного теста K.Smetana.
ПНЗ-тест может быть использован для регистрации переходного состояния нуклеолярного аппарата к активному функционированию, когда изучаемые клетки находятся в начальном периоде стадии G^ и когда еще не начались процессы формирования активных морфотипов ядрдака и когда площадь ядра и состояние хроматина остаются неизменнши.
С помощью ЩЩ-теста определяется доля клеток, находящихся в завершающей стадии периода или в s-нериоде клеточного цикла. Тест может быть использован для изучения активнопролиферирующих популяций как при гемобластозах, так и при условии доработки для исследования других опухолевых процессов или регенерации.
Предложенный способ систематизации экспериментальных данных с помощью составления диаграмм по двум нуклеолярный маркерам позволяет получить дополнительную информацию о направлении лимфо-пролиферативного процесса при хроническом лимфолейкозе.
На защиту выносятся следующие основные положения диссертации:
1. Пержуклеолярная зона ядра формируется как пространство, окружающее ядрышко в первые часы после воздействия пролифератив-ного стимула, на ранних этапах пререпликативного периода клеточного цикла.
2. Ядрышки и элементы перинуклеолярной зоны в модельных клеточных системах со стимулированной пролиферацией содержат липид-ный компонент в определенные сроки после воздействия пролифератив-ного стимула; граница перинуклеолярной зоны - на ранних этапах пререпликативного периода, ядрышко и радиальные тяжи - на завершающих этапах пререпликативного и в синтетическом периоде клеточного цикла.
3. Шормирование перинуклеолярной зоны ядра и процесс накопления липидного компонента блокируется при одновременном воздействии фитогемаглютинина и ингибитора синтеза РНК актиномицина Д.
4. Разработанные новые критерии нуклеолярного теста позволяют выявить ранние признаки предлейкозного состояния при спонтанном лимфолейкозе у мышей линии АКР.
5. Околоядрышковая область ядер iTA-стимулированных лимфоцитов претерпевает реорганизацию в динамике бласттрансформации. Аналогичные морфофункциональные особенности характеризуют нуклео-лярный аппарат гемопоэтических клеток периферической крови больных хроническим лимфо лейкоз ом, хроническим миелолейкозом, острым лейкозом.
6. Использование новых дополнительных критериев нуклеолярного теста позволяет прогностически оценить направление лимфо-пролиферативного процесса при хроническом лимфояейкозе у человека.
Внедрение результатов исследования.
Результаты диссертационной работы рекомендованы к использованию в ЦНИЛе Н0ШЗМЙ для изучения регенераторных процессов в печени крыс (акт внедрения от 23.01.86). Дополнительные критерии нуклеолярного теста позволили более достоверно оценивать структурно -функциональные изменения ядер гепатоцитов в ранние сроки после частичной гепатэктомии.
Рекомендован к использованию в ШШМе СО АМН СССР тест "пери-нуклеолярная зона ядра" в качестве морфологического маркера при изучении первичного и вторичного иммунного ответа. Внедрение теста значительно повысило достоверность нуклеолярного теста в иммунологических исследованиях (акт внедрения от 10.09.85).
Результаты исследования, касающиеся изучения популяции лимфоидных клеток при хроническом лимфолейкозе, рекомендованы к использованию в клинической практике как имеющее прогностическое значение для определения характера течения заболевания (акт внедрения от 20.09.90).
Апробация материалов диссертации.
Материалы диссертации доложены на Всесоюзном симпозиуме по иммунологии воспроизведения, Москва, 1981; на Всесоюзном симпозиуме "Ядерные белки и экспрессия генома**, Канев, 1983; на Всесошзном съезде медицинских генетиков, Киев, 1984; на Всесоюзном симпозиуме "Липиды биологических мембран", Пущино, 1984; на Юбилейной сессии НШИ, 1985; заседаниях проблемных комиссий НОТКЗМИ "Структурные основы гомеостаза", 1985; "Шизиологические и патофизиологические основы гомеостаза", 1986; пленуме патофизиологов "Механизмы патологических реакций", Тюмень, 1987.
Объем и структура диссертации.
Диссертационная работа изложена на 250 (собственно текста 146) страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, 4 глав экспериментальных исследований, главы, посвященной обсуждению результатов исследования, выводов и библиографического указателя, включающего 198 отечественных и 3X7 иностранных источников. Диссертация проиллюстрирована 30 таблицами, 61 рисунком и 5 выписками из истории болезни.
Заключение диссертационного исследования на тему "Морфофункциональные особенности нуклеолярного аппарата гемопоэтических клеток в норме и при гемобластозах"
В н В о д ы
1. Процесс реорганизации нуклеФлярного аппарата в модельных клеточных системах со стимулированной пролиферацией ш при злокачественной трансформации характеризуется морфологическими изменениями на периферии ядрышка. В этом районе интерфазного ядра: - "перинуклеолярной зоне" - образуются радиальные тяжи и структуры»расположенные на границе околоядрышковой области-!.
2.Формирование перинуклеолярной зоны ядра предшествует переходу ФГА-стимулированных лимфоцитов- из Gq в C-j период клеточного цикла и характерно для 3-6 часовых культур,
3. Получены экспериментальные данные о зависимости выявления нуклеолярного липидного компонента от стадии клеточного цикла* Накопление нуклеолярного липидного компонента в ядрышках ФГА-стимулированных лимфоцитов происходит через 24-48 часов культивирования и соответствует периоду активного функционирования нуклеолярного аппарата в Gj, S , и C-g стадиях клеточного цикла.
4, Дяя регистрации этапов активации нуклеолярного аппарата разработаны;новые морфологические тесты,в основу которых положеш выявленные особенности реорганизации периферической области ядрышка. Тесты учитывают процентное содержание клеток, обладающих перинуклеолярной зоной и нуклеолярный липидным компонентом в границе перинуклеолярной зоны, радиальных тяжах и ядрышке.
5. Изучение морфологических особенностей нуклеолярного аппарата лимфоидных клеток мышей линии АКР,проведенное в динамике спонтанного лимфолейкоза^выявил© ранние проявления пред-лейкозного состояния у 2-х и б-ти месячных животных характеризующиеся формированием перинуклеолярной зоны и накоплением липид ного компонента в лимфоидных клетках тимуеа и периферической крови,
6, Действие §ГА на лимфоцита в культуре in vitro и злокачественная трансформация гемопоэтичееких клеток при хроническом лимфолейкозе ,остром лейкозе,хроническом миелолейкозе приводят к сходным морфологическим проявлениям активации нуклеолярного аппарата* йнгибирующее синтез рРНК действие актиномицина Д на клетки в культуре и цитоетатических препаратов в клиник© морфологически также проявляется сходным образом; снижением доли; активных морфотипов ядрышка, отсутствием перинуклеолярной зоны; и нуклеолярного липидного компонента.
7. Комплекс цитохимических и кинетических методов исследования, включая нуклеолярные маркеры,использован для выявления двух вариантов течения хронического лимфолейкоза. Начальный этап активации нуклеолярного аппарата, характерный для лимфоидных клеток при переходе Gq ^ Gj-, отмечался при благоприятном медленно-прогрессирующем варианте. Накопление нуклеолярного липидного ком понента,сопровождающее максимальное проявление активности ядрышек лимфоидных клеток в Gj, В и Gg стадиях клеточного цикла, наблюдалось у больных с быстро-прогрессирующим вариантом: заболевания»
174 ЗАКЛЮЧЕНИЕ
Проведенные исследования позволили установить, что злокачественная трансформация клетки при гемобластозах, как и стимуляция пролиферативных процессов в модельных клеточных системах приводит к активации нуклеолярного аппарата, выражающейся в разнообразных морфологических изменениях его структуры.
Изучение процессов реорганизации периферии ядрышка в динамике клеточного цикла показано, что на ранних этапах пререпдика-тивного периода Gi, когда не отмечается изменения показателей теста K.Smetana и морфометричееких параметров ядер, вблизи ядрышек формируется особая область - перинуклеолярная зона, содержащая радиальные тяжи и пограничные структуры. Как показано на модельных клеточных системах со стимулированной пролиферацией in vitro и in vivo (ШГА-стимулированные лимфоциты; перевиваемые культуры клеток Hela, Нер-2, Е1; гепатоциты регенерирующей после частичной гепатэктомии печени крыс), формирование перинуклеолярной зоны - это начальная степень активации нуклеолярного аппарата. Для регистрации этого типа разработаны 2 новых цитологических критерия - ПНЗ-тест и ЛКГПНЗ-тест.
Начальная степень активации нуклеолярного аппарата выявлена у лимфоидных клеток в группах больных ХЛЛ с медленно-прогрессирующим характером течения заболевания, в клетках тимуса и периферической крови у мышей линии АКР на доклинических стадиях спонтанного лимфолейкоза, в З-б часовых культурах 1ГА-стимулиро ванных лимфоцитов, в гепатоцитах крыс через 3 часа после ЧГЭ, через б часов после смены среды в клеточных культурах Hela, Нер-2 и F1.
В евязи с этим морфологические проявления начальной стадии активации нуклеолярного аппарата можно рассматривать как прогностический (при ХЛЛ) и ранний диагностический (при лимфолейкозе у мышей линии АКР) признаки развития опухолевого процесса.
Далее процесс активации нуклеолярного аппарата в указанных выше клеточных системах выражался в смене морфотипов ядрышка, увеличении числа Ag(+) зон, росте нуклеолярного коэффициента. Степень выраженности этих показателей колебалась в определенных пределах, однако тенденция к их параллельному прогрессивному росту отмечена во всех экспериментах со стимулированной пролиферацией.
Максимальное проявление активности нуклеолярного аппарата выражалось в накоплении липидного компонента в структурах перинуклеолярной зоны и в ядрышке. Этот этап регистрировался с по мощью разработанного НЖ-теста.
НЛК-тест выявил максимальное проявление активности нуклеолярного аппарата в лимфоидных клетках 72-часовых культур при стимуляции ШГА, в гепатоцитах крыс через 24 часа после ЧГЭ, в лимфоидных клетках 12-месячных мышей линии АКР, а также лимфоцитах периферической крови больных ХЛЛ с быстро-прогрессирующим вариантом течения заболевания, в бластных клетках во всех случаях ОЛ и ХМЛ,
Действие актиномицина Д на клетки в культуре и использование цитостатических препаратов в клинике приводило к снижению активности нуклеолярного аппарата, что морфологически выражалось в падении значений всех нуклеолярных показателей, в том числе и ПНЗ-теста, ЛКГПНЗ-теета и НЛК-тест а.
Таким образом, представленный в работе фактический материал по экспериментальному обоснованию и использованию новых морфологических тестов может служить основанием для расширения нуклеолярного теста K.Smetana. ПНЗ-тест и ЛКГПНЗ-тест при этом будут регистрировать более ранние проявления нуклеолярной активности, чем тест К.Smetana ,а НЛК-тест - максимальную активность нуклеолярного аппарата,
Список использованной литературы по медицине, диссертация 1990 года, Левитан, Нина Васильевна
1. Абелев Г,И. Молекулярная биология В-клеточнък неоклазий: анализ природы и клинические перспективы // Журн. Всесоюзн. химич. общ. им.Д.Й.Менделеева. 1986. - т.31,- вып. 3. - C.3I8-326.
2. Авдулов А.К. Кариосистематическое исследование семейства злаковых. I., 1931, 121 с.
3. Автандилов Г.Г., Невзоров В.П., Невзорова 0.§. Системный анализ ультраструктур клеток. Кишинев: Штиинца, 1984. 168 с.
4. Автандилов Г.Г., Яблучанский Н„й., Губенко В.Г. Системная стереометрия в изучении патологического процесса. М.: Медицина, 1981. 192 с.
5. Алесенко А.В,, Бурлакова Е.Б., Пантаз З.А. Влияние сфинтомие-лина на активность РНК-полимераз в ядрах нормальной и регенерирующей печени крыс/УВиохимия. 1984. - т.49. - вып.4.1. С.21-626.
6. Алесенко А.В., Пантаз Э.А. Различия в составе фосфолипидов ядра и хроматина в ходе пролиферации клеток печени крыс после частичной гепатэктомии/УБиохимия, 1983. Т.48. - Вып.2.1. С.263-268.
7. Амосова А.В., Бадаев Н.С., Дьяченко А.§. и др. Площадь Ag-ок-рашенных ядрышко образующих хромосом мягкой пшеницы коррелирует с содержанием рибосомальньк генов//Докл. АН СССР, 1989. -Т.305. f 2. - С.453-457.
8. Амосова А.В., Подугольникова О,А», Каминир А»В. Количественная оценка площади ^-окрашенных ядрышко о бр аз ующих районов хромосом человека. Тезисы У Всесоюзн. сов, "Структура и функция хромосом*. Пущино, 1985. « C.I32,
9. Андрианова М.Н, Роль зобной железы в канцерогенезе//Вопр. онкологии. 1970. - Т. 16. - $ 12. - 0.94-103.
10. Аристархова С*А,, Архипова Г,В., Бурлакова Е.Б. и др. Регу-ляторная роль взаимосвязи изменений концентраций антиоксидан-тов и состава липидов клеточных мембран// Докл. АН СССР» 1976. Т.228. - Ш 1. - С.215-218.
11. Арееньева М.А., Дорошенко Г.Г* Культура лейкоцитов периферической крови человека в гематологии и радиобиологии. М.: Наука, 1974. 150 с.
12. Бабенко Н.А. Возрастные особенности фосфолипидного спектра ядерных структур печени белых крыс. Автореф. дисс, . канд. биол, наук, Харьков, 1985.
13. Берггольц В.М,, Еремеев B.C. Лейкозы человека// В сб,: ВИНИТИ Итоги науки и техники, сер. Онкология. 1977, - Т.9,1. С.47-126*
14. Берман А#1,, Лебкова Н.П,, Артамонова В.А., Збарекий Й,Б. О различиях между конденсированным и диффузным хроматином нормальных и опухолевых клеток// Мол. биол, 1970, - Т.4.-№ 6. - С.224-231,
15. Блинов М.Н., Владимирова А,Д,, Луганова И,С. Низкомолекулярные ядерные РНК в лимфоцитах здоровых и больных хроническим лимфолейкозом// Вопр. онкологии. 1978, - f 5.- С,14-17.
16. Болезни крови у пожилых. Под ред. Н.Дк.Дэнхема, И.Чанарина, М.: Медицина, 1989. 352 с.
17. Боровягин В.1, Клеточные мембраны// Биофизика, 1976. Т,16.- № 4. С.746-767,
18. Восток К., Самнер Э, Хромосома кариотической клетки, М.: Мир,1981. 599 с.
19. Бурлакова Е.Б., Алесенко А.В., Молочкина Е.М. и др. Биоанти-оксиданты в лучевом поражении и злокачественном росте.: Наука, 1975. 214 с.
20. Бурлакова Е.Б,, Архипова Г.В., Голощапов А.Н. Мембранные липиды как переносчики информации //В кн.: Биоантиокислители в регуляции метаболизма в норме и патологии, М.: Наука,1982. С. 74-84.
21. Бурлакова Е.Б., Пальшина Н.П. Регуляторная функция мембран при злокачественном роете // Веетн, АМН СССР. 1982. - № 3.- С.74-86.
22. Бутенко З.А., Барановский Н,А., Науменко О.й. Лейкозные клетки: происхождение, ультраетруктура» дифференцировка. Киев: Наукова думка. 1984. - 214 с.
23. Бутусова Н.Н. Автоматизированная морфометрия интерфазных ядер лимфоцитов в норме и при сегментарной гиперлипопротеинемии
24. П типа: Автореф. дисс. . канд. мед. наук. М., 1986.
25. Быкова И» А. Особенности структуры и функции нуклеолярного аппарата лимфоцитов периферической крови человека. Автореф. дисс. . канд. биол. наук. М., 1973.
26. Васильев Ю.М. Опухолевые клетки и их окружение // Вопр. онкологии. 1984. - Т.25. - № 2. - C.96-I03.
27. Владимирова А.Д., Блинов М.Н,, Луганова H.G. и др. Особенности действия некоторых химиотерапевтических препаратов на течение лейкозов и их влияние на метаболизм рибонуклеиновых кислот лейкоцитов // Пробл. гематологии. 1979. - № 9.-С.23—25.
28. Владимиров Ю.А,> Добрецов Г.Е. Флуоресцентные зонды в исследовании биологических мембран. М,: Наука. 1980. 215 с.
29. Владимиревская Е.Б., Кошель И.В., Курмаищв В.Й. Кинетическая оценка ожидаемой эффективности индукционной терапии острого лейкоза у детей J J Пробл. гематол. 1981. - № 8. - С. 26-30.
30. Владимировекая Е.Б., Кошель И.В., Курмашов В.И. и др. Клиническое и прогностическое значение кинетических параметров опухолевого роста при острых лейкозах // Пробл. гематол.-1961. -17. С. 14-17.
31. Вольпе П. Биохимия клеточного цикла, М.: Мир, 1979. 93 с.
32. Втюрин Б,В., Калашникова Н.М. К вопросу о функциональной морфологии ядерной оболочки и ее пор // Арх. патол. 1972.17. - G. 31-37.
33. Гаврилов O.K., Шайнштейн §.Э., Ковалева Л.Г. и др. Результаты кооперированных исследований по химиотерапии острых лейкозов У/ Пробл. гематол. 1980. - № 4. - С.3-9.
34. Гаррис Г. Ядро и цитоплазма. М.: Мир, 1973, 152 с.
35. Гаспарян Г,Г., Терских В.В,, Заларян Г.Г. и др. Факторы, контролирующие скорость размножения стационарных культур, стимулированных к пролиферации (I) /У Цитология 1980, - Т.22. -С.48-693,
36. Гаспарян Г,Г., Терских В.В., Зосимовская А.й. и др. Продолжительность пребывания клеточных культур в стационарной фазе роста // Цитология, 1980. Т.22. - С.684-688.
37. Глазко Т.Т. Подходы к анализу взаимного расположения хромосом в клетках костного мозга мышей // Цитология. 1988. - № 7. -С.867-874.
38. Голенков А.К., Касаткина В.В., Козинец Г,И. и др. Кинетическая характеристика опухолевого роста при множественной миеломе // Гематол. и трансфузиол. 1988, - f 12, - С, 34-36.
39. Глазер В.М., Лучник А.Н. Различия в плотности топологических витков ДНК злокачественно трансформированных и нормальных клеток сирийского хомячка // Докл. АН СССР. I9SI. - Т.258,- 9 2. С.1227-1231.
40. Глузман Д.§., Сидоренко С.П., Надгорная В. А. Цитохимия и им-муноцитология злокачественных и лимфопролиферативных заболевший, Киев: Наукова думка, 1982. 240 е.
41. Григорович Н.А., Алекса Т. i. Использование цитофлуоресцент-ных методов для идентификации лимфоцитов и макрофагов, оценки их функционального состояния // Иммунология. 1984, - № I.- СЛ0-15.
42. Гублер Е.В. Вычислительные методы анализа и распознавания патологических процессов, М.: Медицина, 1978. 294 с.
43. Грузова М.Н. Кариосфера в онтогенезе // Цитология. 1975. -Т.17, - $ 3. - C.2I9-237.
44. Гущин В, А. Связь между волнами пролиферации гепатоцитов после гепатэктомии и волнами суточного ритма митотической активности // Цитология. 1976. - Т. 19. - C.I339-I346,
45. Деденков А.Н. Прогнозирование реакции опухолей на лучевую и лекарственную терапию. 1.: Медицина, 1987,
46. Дронова Л.М. Кинетические закономерности развития перевиваемого лейкоза АКР /У Вопр. онкологии. 1978. - Т.24. - № 9.- С.65-71.
47. Домкус B.C., Маркявичуе А.И., Садаускас Л.Б. Измерения ДНК-синтетического периода в лимфоидных клетках при лейкемичес-ком процессе // В кн.: Сборник работ ин-та цитологии АН СССР. 1977. - Вып.17. - СЛ00-108.
48. Добрецов Г.Е. Илуореецентные зонды в исследовании клеток, мембран и липопротеидов. М.: Наука. 1989. - 276 с.
49. Дульцина С.М,, Дягилева О.А., Талаленова И.М, и др. Активность В-глюкоронидазы и ультраструктура клеток лимфатических узлов при злокачественных неходжкинских лимфомах // Эксп. онкология. 1986. - Т.8» - № I. - C.I7-2I.
50. Епифанова О.И. Изучение регуляторных механизмов митотическо-го цикла с помощью ингибиторов транскрипции и трансляции /У В кн.: Клеточный цикл / Ред. О.й.Епифановой. М.: Наука, 1973. С. 72-103.
51. Епифанова О.И., Терских В.В., Полуновский В.А. Покоящиеся клетки. М.: Наука. 1983. - 180 с.
52. Захаров А.В., Бенюш В.А., Кулешов Н.П. и др. Хромосомы человека. Атлас. М.: Медицина. 1982. - 363 с.
53. Зацепина О.В., Сметана К. Электронно-микроскопическое исследование локализации Ag-белков в ядрышках лимфоцитов человека // Цитология. 1985. - Т.27. - № II, - C.I228-I232.
54. Зацепина О.В,, Челидзе П.В, Структурные и количественные изменения фибриллярных центров в дифференцирующихся эритроблас-тах мши // Тез. докл. симп. "Структура и функции клеточного ядра", Черноголовка. 1987. - С. 12.
55. Зацепина О.В., Воронкова Л.Н., Сахаров В.Н, и др. Структура интерфазных ядрышек клеток СПЭВ при компенсаторной гипертрофии и деградации, вызываемых локальным -облучением // Цито183 .логия* 1988. - Т.ЗО. -17. - G.787-794.
56. Зацепина О.В., Сметана К. Ультраструктурное выявление белков ядрышкообразукзщих районов хромосом с помощью импрегнации серебром // Тез. докл. "Структура и функции клеточного ядра", Пущино. 1984. - С.45.
57. Збарский Й.Б. Организация клеточного ядра. М.: Медицина. -1988. 368 с.
58. Зедгенидзе А.Г. Закономерности цитогенетичееких нарушений в процессе развития лейкозов. Автореф. Дис. . докт. мед. наук. М., 1987.
59. Зеленин А.В. Флуоресцентная цитохимия нуклеиновых кислот // Цитология. 1988. - № 12. - C.I323-I336.
60. Зеленин А.В., Кущ А,А. Активация хроматина и некоторые проблемы регуляции генетической активности в эукариотической клетке // Мол. биология. 1985. - Т. 19. - $ I. - G.285-294.
61. Зитаре Й.Л., Гранте Э.А., Мурниеке Э.В. и др. Индекс ядрышек как показатель чувствительности опухолевых клеток к цитоста-тикам // Лаб. дело. 1986. - № 2. - C.9I-95.
62. Зорин А.В. Имитационное моделирование кинетики популяций нормальных и облученных клеток. Автореф. дис. . докт. биол. наук. Я-д., 1983.
63. Зорин В.П. Физико-химическая характеристика лимфоидных клеток при пролиферативных процессах. Автореф. дис. . канд. биол. наук., Минск, 1984.
64. Зыбина Т.Г., Зыбина Е.В. Количественное изучение Ag-положительных участков ядрышек, выявляемых в интерфазных ядрах клеток трофобласта соединительной плаценты методом серебрения // Цитология. 1989. - T.3I. - № II. - С.1292-1305.
65. Иконникова О.А., Ленская Р.В., Зацепина О.В. и др. Состояние ядрышко о бр аз ующих районов в клетках костного мозга и крови при остром лейкозе у детей УУ Гематол. и трансфузиол, -1989. № 8. - С.41-46.
66. Каждан И.Л,, Цвейбах А.С, Возможные механизмы регуляции вступления нормальных и неопластических клеток в фазу синтеза ДНК // Цитология. 1988. - № 5. - С.516-523.
67. Карташова О.А., Залкмане В.К., Солдава Л»А. Включение в ядрах гепатоцитов УУ Цитология, 1974. № 12. « G.I475-I480.
68. Клиническая гематология. Под ред. Берчану Ш., Бухарест: Мед. изд-в», 1986. 1222 с.
69. Козинец Т.Н., Дульцина С.М., Касаткина В.В. и др. Цитологическая диагностика гемобластозов УУ В кн.: Диагностика и лечение заболеваний системы крови на современном этапе. Л-д, 1984. С.67-69.
70. Козинец Г.И., Котельников В.М., Гольдберг В.Е. Цитофотометрия гемопоэтических клеток. Томск: йзд-во ТГУ. 1986. - 242 с.
71. Козинец Г.И. , Шишканова З.Г,, Дульцина С.М, Морфофункциональная характеристика лимфоцитов больных острым и хроническим лимфолейкоз ом УУ Сов, Медицина. 1981. -19,- С. 23-28.
72. КозинецТ.Й,» Шайнштейн Ф.Э., Хохлова М.П, Морфологические особенности острых лейкозов. Тбилиси: Сабчота сакортвело, 1979. 258 с.
73. В кн,: Лабораторная диагностика. Тезисы i Всесоюзн. съезда врачей-лаборантов, М,, 1985, Т,42. - С.37-38.
74. Лоеева 1,й., Цирельников й.й,, Зюбина Л.Ю, Цитофотометрия клеток лимфогрануломатозной ткани // Пробл. гематол. и перелив. крови. 1976. - Т.21. - № 3. - С.25-28.
75. Малакова Л.В., Ротару В.В., Газнев А.й. Различия нуклеотид-ных последовательностей ДНК ядерного матрикса микомицета
76. Ph.ро 1усepiiaium в g2h s фазах клеточного цикла УУ Цитология.- 1986. Т.28. - Ш 8. - G.885-890.
77. Мамаев Н.Н,, Бебия Н.В., Мамаева G.E. и др. Оценка активности ядрышковых организаторов опухолевых клеток у больных раком пищевода и желудка // Бюлл, эксп. биол. и мед. 1985. -ТДОО. - » 4. - С. 477-479.
78. Мамаев Н.Н., Мамаева Е.Е., Бандакадхайл Д. и др. Изучение активности ядрышкообразующих районов хромосом нормальных лейкозных и опухолевых клеток человека с помощью окрашивания азотнокислым серебром УУ Цитология, 1980. Т.22. - № 2. -C.I6I-I67,
79. Мамаев Н.Н., Мамаева С.Е,, Либуркина Й.Л, и др. Активность ядрышковых организаторов нормальных и лейкозных клеток костного мозга человека УУ Цитология, 1984. Т.26. - С.46-51.
80. Мамаев Н.Н., Мамаева Е.Е., Ушакова Е.Е. и др. Результатыизучения активности ядрышковых организаторов клеток костного мозга больных множественной миеломой // Цитол. и генетика, 1986. Т.20. - № 2. - G.91-97,
81. Мамаев Н.Н., Мартинее У., Морозова Е.О. и др. Характеристика окрашенных серебром ядрышек в бластных элементах больных острыми лейкозами // Цитология, 1988. Т.30. - 1 12.1. СЛ478-1482.
82. Майнтейфель В.М., Бандрина Й.Н., Зеленин А.В. Электронно-микроскопическое изучение хроматина в ядрах гепатоцитов в первые часы после частичной гепатэктомии // Мол. биология, 1980, ТЛ4. - С, 568-574.
83. Майнтейфель В.М,, Епифанова 0,В., Зеленин А.В. Электронно-микроскопическое морфометрическое изучение активированного хроматина лимфоцитов // Мол. биология, 1982. T.I6.1. СЛ051-1062.
84. Майнтейфель В.М., Ершов Ю.В., Бандрина И,Н, и др. Электронно-микроскопическое исследование хроматина в ядрах гепатоцитов in situ в первые часы после частичной гепатэктомии // Мол. биология, 1977. T.II, - 13. - С.677-684,
85. Майнтейфель В.М., Зеленин А.В. Ультраструктурная перестройка . ядер гепатоцитов морских свинок через 2,5 часа после ЧГЭ //
86. Цитология, 1976. Т.18. - № 9. - С.1063-1067. ПО. Майнтейфель В.М., Челидзе П.В. Изменение тонкой организации неактивных кольцевидных ядрышек зрелых лимфоцитов крыс наранних стадиях бласттрансформации // Мол. биология, 1986.-Т.20. Вып. 2. - G.564-572.
87. Майнтейфель В.М., Челидзе И.В., Зеленин А.В. Перестройки ядрышек в стимулированных к пролиферации гепатоцитах и усиление их трансрикционной функции // Мол. биология, 1987. -Т.21. Вып. 2. - С.403-413.
88. Мдивани Т*В., Агладзе А.Г., Туманишвили Г.Д. Изменение ультраструктуры ядрышек гепатоцитов крыс при двусторонней адре-налэктомии и после введения кортизола // Цитология и генетика, 1989. Т.23. -14» - G.3-7*
89. ИЗ» Милютина Н.А., Карманов П.А., Красюк F.K. и др. 0 природе удлинения g2 фйзы митотического цикла в клетках паренхимы печени мышей // Журн. общей биол., 1989. T.I. -14. -С.458-469.
90. Митерев Т,Ю. Иммунологическая маркерная характеристика бластных клеток и клеточные показатели иммунитета в периоде ремиссии у больных острым лейкозом. Автореф. дис. . канд. мед.-----------Жаук,М., 1977. 23 с. "
91. Морозова В.Т,, Барышников А.Ю., Злобина Е.Н. и др. Отологические параллели при хроническом лимфолейкозе и зрело клеточной лейкемизации лимфомы // Гематол. и трансфузиол., 1987. -№ II. C.2I-24.
92. Морозова Е.О., Блинов М.Н. Сравнительное изучение белоксин-тезирующей активности лимфоцитов доноров и больных хроническим лимфолейкозом // Вопр. онкологии. 1981. - Т.27.12. С.28-33.
93. Морозова Е.О., Самускевич И.Г. Определение содержания рибосом как возможный диагностический метод течения хронического лимфолейкоз а // В кн.: Лабораторная диагностика. Тез. 3 Всесоюзн. съезда врачей-лаборантов. М., 1985. - 4.2. - С.II.
94. Монахова М.А. Шенотип интерфазного ядра // Тез. докл. 8 Всесоюзн. симп. "Структура и функции клеточного ядра". Пущи-но, 1984. - С.20.
95. Морфологическая оценка резистентности и чувствительности опухолей и химиотерапии. Рига: Зинатне, 1983. - 128 с.
96. Мурадян Л.Б. Особенности пролиферативных процессов в костном мозге при хроническом миелолейкозе. Автореф. дие. . канд. мед. наук. М., 1987.
97. Мхитарова Е.В. Структурный полиморфизм и функционирование ядрышкообразующих районов хромосом человека. Автореф. дис. . канд. биол. наук. Тбилиси, 1987.
98. Науменко О.И. Электронно-микроскопическая характеристика клеток крови при остром миелобластном лейкозе // В сб.: Гематология и перелив, крови. Киев: Здоровье, 1989. - f 24, - С.20-23.
99. Поспелова Т.В. Регуляция клеточной пролиферации в лимфоцитах человека, стимулированных к делению <£ГА. Автореф. дис, . канд. биол. наук. Новосибирск, 1977.
100. Райхлин Н,Т, Общие принципы электронно-микроскопического анализа новообразований // В сб.: Функциональная морфология органов в патологии. Рига, 1980. - С.75-79*
101. Робинсон М.В., Топоркова Л.Б., Труфакин В.А. Морфология и метаболизм лимфоцито?. Новосибирск: Наука. - Г986. - 126 с,
102. Роничевская Г.М. Проблемы цитогенетики злокачественного роста, Новосибирск: Наука, 1977. - 189 с,
103. Ромейс Б. Микроскопическая техника, М,: ИЛ. 1953. - 364 с,
104. Румянцев А,Г,, Владимировская Е.Б, Перспективы и пути развития гематологии детского возраста // Гематол. и трансфузиол.- 1989. № 9. - С. 3-8.
105. Сабанеева S.B. Специфичность окрашивания ядрдаковых организаторов азотнокислым серебром // Цитология, 1989. Т.31.1. I, G.5-I3,
106. Сабурова В.И. Сравнительное исследование изменений липидного состава клеток и тканей при старении и злокачественном росте- М., 1985, 129 с.
107. Сакене В.Э,, Пташкене P.G. Цитофотометрическое изучение изменения содержания ДНК в ядрах лимфоцитов крови человека при системной красной волчанке // Цитология. 1984. - № 10. -C.I2I2-I2I6.
108. Саркисов Д.С., Пальцин А.А., Втюрин Б,В, Электронно-микроскопическая радиоавтография клетки. М.: Медицина, 1980,- 262 с,
109. Сахаров В.Н., Воронкова Л.Н., Валова Т.М. и др. Окрашивание серебром ядрышек клеток ШЭВ при гиперактивации и ингибироваши синтеза ядрдаковой РНЕ -микрооблучениемУУЦитология, 1988.«Т.30,8.-С.949-955.
110. Семенова-Кобзарь Р.А. Получение жизнеспособных опухолевых клеток человека и их характеристика при культивировании в диффузных камерыхУУЭксп.онкология, 1987,- № 2.-С.40-45.
111. X, Сидорова В,§», Рябинина З.А, Регенерация печени у млекопитающих, -Л.: Медицина,1966.-703 с,
112. Скрябин Б.Н. Исследование полиморфизма в пределах кластера генов рРНК человекаУУГенетика, 1989.-Т.25.7.-С.1302-1309.153» Сметана К, К вопросу о структурной организации, цитохимии и функции ядрыше кУУЧехо сл. медицина, 1988.~Т ЛI.I,— С.20—30.
113. Соболева Т.Н. Метаболические особенности лимфатических клеток при лимфопролиферативных заболеваниях. Автореф, дис, . канд, мед. наук, М,,1987.
114. Соболева Т#Н,, Лукина Е,А, , Мокеева Р*А, и др. Цитохимическая и иммунологическая характеристика лимфоцитов при лимфопролиферативных заболеванияхУУЛаб. дело,1984.9.-С.515-520.
115. Соболева Т,Н,, Морозова ВД,, Касаткина В»В. и др. Авторадиографическое изучение лимфоидных клеток крови в злокачественных лимфомахУ/Лаб. дело, 1988,-№ I2.-C.27-33.
116. Трапезникова Н.Н. Клиническое использование опухолевых маркеров. Критическая оценка. М. ,1989.-13 с.
117. Троицкая 1.П., Кузьмина G.H., Бульдяева Т.В. и др. Электронно-микроскопическая характеристика ядерного матрикса и его фракций//Цитология, 1981. -Т .23. -№ 6. -С. 620-627.
118. Труфакин В.А., Чигирь Г.Н., Робинсон Н.В. Цитологическая идентификация лимфоцитов у высоколинейных мышей линии АКР/ в онтогенезе. Влияние соматотропного гормона на клеточный состав лимфоидных органов//Цитология, 1977.-Т.19.-С.821-825.
119. Туманишвили Т.Д., Челидзе П.В. Ультраструктура и функции кольцевидных ядрышек, фибриллярных центров и ядрышковых ва« куолей//Цитология.-1987.-Т. 2 5.8.-G.863-882.
120. Уманекий Ю.А., Пинчук В*Г. Лимфоциты и опухолевый рост.-Киев:Наукова думка,1982.-235 с,
121. Федоров Н.А., Овчарук И.Н., Борисов Б.Н. и др. Метилирование вновь синтезируемой ядерной ДНК регенерирующей печени крыс //Докл. АН СССР, 1977.-Т.236.5.-C.I256-I259.
122. Филев А.В., Петрова Т.Н., Быховец И.В, Особенности лимфопоэ-за при острой гипобарической гипоксии/Д|итология,1988,-Т.ЗО,10.-С.1242-1245.
123. Филлипов К.Г. Прогнозирование течения заболевания раком гортани по состоянию гормонального статуса и концентрации опухолевых маркеров//В сб.:Актуальные вопросы клинической онкологии .-Томск Д981.-С.12 X-I22.
124. Фрейдлин Й.С. Система мононуклеарных фагоцитов.-М. :Медицина, I984.-272 с.
125. Хамидов Д.Х,, Нишинбаев К,Н., Андреев А.В. Электронно-цитохимическое выявление ферментов циклических нуклеотидов на ядерных структурах клеток крови//Гез .докл.ре сп, симп. "Ядерные белки и экспрессия онома".-Киев, 1983»-С.27-28,
126. Ханчаев Ю.К., Стобецкий В.И., Миронова Л.1. Активность яд-рьшкообразукщих районов хромосом нормальных и трансформированных клеток селезенки африканской зеленой мартдаки//Цито-логия.-1985.-Т.27.10.-С.II89-I191.
127. Харрис Г. Ядро и цитоплазма. М.:Мир, 1973.-190 с.
128. Харьковская Й.А., Хрусталев С.А. Онкологическая характеристика мышей линии АКР/ //Экеп.онкология.-1984.-Т.6.-№ 4,-С.62-66.
129. Худолей В.В. Экспресс-тест для определения канцерогенности //Эксп. онкология.-1983.-№ 2.-G.77.
130. Ченцов Ю.С,, Поляков В.Ю. Ультраструктура клеточного ядра. 41, :Наука.-1974.-175 с.
131. Чертков И.1., Фриденштейн А.Я. Клеточные основы кроветворения.-М.: Медицина, 1977.-272 с.
132. Чиссов В.й., Сергеева H.G., Петров А.Н. и др. Оценка проли-феративной активности некоторых злокачественных опухолей человека непрямым иммунофлуоресцентнш методом с помощью анти-тимидиновых антител//Эксп.онкология.-1989.-ТЛI. 4. -С.44-47.
133. Челидзе П.В, Ультраструктура и функции ядрышка интерфазной клетки. Тбилиси: Меинцереба,1986.-П9 с.
134. Челидзе П.В., Зацепина 0,В. Морфофункциональная классификация ядрышек//Успехи совр.биол.-1988.-Т.105.-№ 2.-С.252-268.
135. Челидзе П.В., Майнтейфель В.М. Ультраструктура и возможная роль вакуолярного компонента ядрышек гепатоцитов//Цитология, I989.-T,3I.-f I.-G.23-28,
136. Челидзе П.В., Туманишвили Г.Д. Ультраструктура кольцевидныхядрышек в гепатоцитах куриных з ародышейУ/Цитология,1979. -Т.21*-№ 2»-СЛ23-131*
137. Шабарина 1.Й., Оухоруков В.й.» йванеева Н.В. и др. Спектро-фотометрическое исследование системы ДНК-липид//Биофизика, I975.-T.20.-f 3.-G.266-270.
138. Шалот B.C., Потапова Г.И. Методологические подходы к исследованию метаболизма опухолей и тканей организма in vivo и in vi-го //Эксп.онкология.-1986.-Т.8.-№ 2.-С.З-9.
139. Шардаев В.й. Прогностическое значение цитологических критериев в оценке агрессивности развития хронического миелолейкоза. Автореф. дис. . канд. мед. наук.-Л-д,1982.
140. Шишкин Ю.В. Пролиферативная активность опухолевых клеток при лимфоеаркоме и остром миелобластном лейкозе у детей// Педиатрия.-1987.8.-С.20-23.
141. Эренпрей Е.А., Цветкова Е.Е. Проведение реакции Шельгена на нефиксированных мазках//Арх,пат.-1977.-Т.36.6.-С.71-73.
142. Эренпрейса Е.А., Сондоре О.Ш. Связь феномена ядерной ахрома-зии с активацией клетки с пролиферацией//Эксп.онкология.-1989.-Т*П.1.-C.6I-63.
143. Зренпрейса Е.А., Сондоре О.Ю., Зирне Р.А. Конформационные изменения хроматина опухолевых клеток и феномен ядерной ах-ромазии//Эксп.онкология.-1984.-ТЛO.-f 2.-С.83-85.
144. Юдин В.М. Соотношение Т и В клеток в лимфатических узлах мышей СЗН/ и АКР/ при метилхолантреновом канцерогенезе. Автореф. дис. . канд. мед. наук. Киев, 1975.
145. Юнис Д.Д. Клиническая значимость метода задержки конденсации хромосом при изучении острых лейкозов и неходжкинских лимфом //В сб. Современная гематология и онкология.-М. :1едицина.-С.351-390.
146. Akerman M., Brandt L., Johnson et al. Mitotic activity in non-Hodgkin's lymphoma. Relation to the Kiel classification and prognosis // Br. J. Cancer. 1987. - Vol. 55• -12.1. P. 219-223.
147. Angelier 1., Hernander-Verdun D., Bouteille M. Visualization of Ag-Жог proteine or nucleolar transcriptional units.in molecular spreads // Ghromosoma. 1982. - Vol. 86. - P. 661-672»
148. Angla M., De Brux J.Occurence of intranuclear tubular structures in the human endometrium during the secretory phase, and of annulate lamelae in hyperstrogenic states // Obstet. Gynecol. 1965. - Vol. 26. - I 1. - P. 23-33.
149. Anteunis A., Pouchelet M., Gansmflller A., Robineaux R. Organization of nucleolar ША in resting lymphocytes as revealed by the diaminobenzidine technique // J. Ultrastruct. Res. 1979. - Vol. 69. - IT 2. - P. 22-27.
150. Anteunis R.H., Pouchelet M.J., Dumitrescu S., Robineaux R.E. Nucleolar organization in resting cells // J. Cell Biol. -1976. Vol. 70. - ИМ. - P. 396.
151. Anteunis A., Vial M., Robineaux R. Ultra structural nucleolar diversity of lymphocytic sub-population as revealed.by. the diamihobenzidine technique // Biol. Cell. 1980. - Vol. 39.12. P. 163-167.
152. Arden K., Pathak S., Stefther S., Ritchie E. Differential silver-positive nucleolus organizer region activity.in normal and malignant murine tissue // Cancer Genet. Cytogenet. 1989.1. Vol. 37. N 1. - P. 55-61.
153. Arden K., Johnston D., Cork A., Patnah S. Differential nucleosus organizer activity in normal and leukemic bone marrow // Amer. J. Hematol. 1989. - Vol. 30. - Ж 3. - P. 164-174.
154. Ayres J.G., Crocker J.G., Skilbeck I.Q. Differentiation of malignant from normal and reactive mesotelial cells by the argyrophil technique for nucleolar organizer region.associated proteins // Thorax. 1988. - Vol. 43. - Ж 5. - P. 366-370.
155. Babai P., Tremblay G., Dumout A. Intranuclear and intr-anucleolar tubular structures in lovikoff hepatoma cells // J. Ultrastruct. Res. 1969. - I 28. - P. 125-130.
156. Bagbu J.C., Jabourel J.D., Liiiman J.If. Glucocorticoid therapy in the preleukemie syndrome (hemopoetic displasia). Identification of responsive patients using in vitro techniques // Ann. Intern. Med. 1980. - Vol. 92. - Ж 1. - P. 55-58.
157. Barrack E.R., Coffey D.S. Biochemical action of hormones, vx. The role of nucleolar matrix in steroid hormon action // lew York: Acad. Press. Inc., 1983. 185 p.
158. Benauvente R., -Rose K., Reimer G. et al. Inhibition of nucleolar reformation after microinjection of antibodies to REA polymerase ! into ,mito tic cells // J. Cell Biol. 1987.
159. Vol. 105. I 4. - P. 1483-1493.
160. Berezney R., Coffey D.S. Huclear protein matrix association with newly syntesized DIA // Science. 1975. ~ Vol. 189.- P. 291-293.
161. Berezney R., Buchholtz L. Dynamic association of replicating DMA fragments with the nuclear matrix of regenerating liver // Exp. Cell Res. 1981. - Vol. 132. - P. 1-13.
162. Berezney R.} Coffey D. Muclear matrix. Isolation and characterization of framework structure from rat liver nuclei // J. Cell Biol. 1977. - Vol. 73. - P. 616-637.
163. Bertram C.R. Activation of pro to-oncogenes in human leukemias // Blut. 1985. - Bd. 51. - Ж 2. - S. 63-71.219» Bessis M. Living blood cells and their ultrastructure // Berlin-Heidelberg-Hew York: Springer, 1973. 767 p.
164. Beyer E.S., Bruno. E., Hoffman R. In vitro hematopoie-sis following induction chemotherapy to acute leukemia // Cancer Res. 1985. - Vol. 45. - N 11, Pt. 2. - P. 59-21-5925.
165. Bloomfield C.D., Arthur D.S., Frizzera G. et al. Ion-random chromosome abnormalities in lymphoma // Cancer Res. -1983. Vol. 43. - I 2. - P. 2975-2984.
166. Borer R., Lehner C., Eppenberger H., ligg E. Major nucleolar proteins shuttle between nucleolus and cytoplasm // Cell.- 1989. Vol. 56. - Ж 7. - P. 379-390.
167. Bourgeois C., Bouvier D., Seve A., Hubert J. Evidence for the existence of a nucleolar skeleton attached to the.pore complex-lamina in human fibroblasts // Chromosoma. 1987. -Vol. 95. - Ж 5. - P. 315-323.
168. Bouteille M., Dupuy-Coin A.Bit. Threedimensional analysis of the interphase nucleus // Biol. Cell. 1982. — Vol. 45* -13.- P. 455-468.
169. Bouteille M., Laval M., Dupuy-Coin A.M. Localization, of nucleolar function as revealed by ultrastructural autoradiography and cytochemistry // Cell Eucleous, lew York; Academic Press, 1974. P. 5-74.
170. Bouteille M., Hernandez-Versun D., Dupuy-Coin A.M., Bourgeois G.A. Nucleoli and nuclear related structures in normal, infected and drugtreated cells // The nucleolus. Cambridge: Univ. Press, 1982. P. 170-211.
171. Bucciarelli E. Intranuclear cisternal resembling structures of the Goldgi complex // J. Cell Biol. 1966. - Ж 30.1. P. 664.
172. Busch H., Busch R., Chun P. et al, lucleolar antigens in cancer tissues in "human tumor markers (Biology and Clinical applications)", 1986. P. 203-223.
173. Busch H., Smetana K. The nucleolus, lew York: Academic Press, 1970. 253 p.
174. Busch H., Busch R.K., Chan P.K. et al. Ultrastructural and purification studies on human tumor nucleolar antigens and nucleolar particles // Cancer Invest. 1983» - Vol. 1. - P. 2542.
175. Busch H, Hovel nucleolar antigens in autoimmune disease // J. Rheumatol. -.1987. I 14. - Vol. 13. - P. 74-82.
176. Busch H., Crooke S.T., Daskal J. Effects of drugs on the cell nucleus // New York: Acad. Press, 1979. 282 p.
177. Butturini A., Gale R.P. Oncogenes.in chronic lymphocytic leukemia // Leukemia Res. 1988. - Vol. 12. - Ж 1. - P. 8992.
178. Cabanillas P. Areview and interpretation of cytogenetic abnormalities identified in Hodgkin's disease // Hematol. Oncol. 1988. -Vol. 6. - I 3. - P. 271-274.
179. Carlson E.G., Ollerich D.A. Intranucleolar tubules in trophoblast III of rat and mouse chorionallautac placenta // J. Ultrastruct. Res. 1969. - Ж 28. - P. 150-160.
180. Caspersson Т.О. Cell growth and cell function. A cytho-chemical study // lev/ York, Ноrton, 1950. 311 p.
181. Cave C.F., Gahan P.B. A cytochemical'and autoradiographic investigation of nucleolar phospholipids // Caryologia. -1970. Vol. 23. - I 3. - P. 305-312.
182. Celis J., Madsen P., Lauridsen J. Mid to late S-phase replication of the nucleolus in lymphoid human Molt-4 cells // Leukemia. 1987. - Vol. 1. -ST. - P. 568-571.
183. Celis J.C., Maisen P., Melsen S., Celis A. luclear pattern of cyclin (РСЖА) antigen distribution // Leukemia Res. -1986. Ж 10. - P. 237-249.
184. Chan P.K., Frakes R., Tan E.M. et al. Indirect fluorescence studies of proliferating cell nuclear antigen in nucleoli, of human tumor and normal tissues // Cancer Res. 1983. - ^ 43» - P. 3700-3777.
185. Chatterjee A., Freeman J., Busch H. Identification and partial characterization of a M Ю5000 nucleolar antigen associated with cell proliferation// Cancer Res. 19S7. - Vol. 47. -Ж 23» - P. 6329-6335.
186. Chouinard L.A. A ligh and electronmicroscopic study of the nucleolus during growth of the oocyte in the prepubertal mouse // J. Cell Sci. 1971. - Ж 9. - P. 637-633.
187. Christenson В., Tribukai В., binder I. Cell proliferation and ША content in non-Hodgkin's lymphonoma. Plow cytometry in relation to lymphoma classification // Cancer. 1986. -Vol. 58. - Ж 6. - P. 1295-1304.
188. Comings D.E., Okada I.A. luclear proteins. III. The fibrillar nature of the nuclear matrix // Exp. Cell. Res. -1976. Vol. 103. - P. 341-360.
189. Cooper H.L.Studies on.ffiJA metabolism during lymphocytes activation // Transplant. Rev. 1972. - Vol.'11. - P. 3-38.
190. Costa A., Bonadonna G., Villia E. et al. Labelling index as a prognostic marker in non-Hodgkin's lymphomas // J. Natl.
191. Cancer Aust. 1981• - Vol. 66. - Ж 1. - P. 1-5.
192. Covey J.M., Kohn K.W., Kerrigan D. Topoisomerase Il-me-diated DM damage produced by 4'-(9-acridimglamino)methanesulton -m-anisididi and related acridines in L 1210 cells and isolated nuclei: relation to cytotoxicity // Cancer Res. 1988.
193. Vol. 48. -14.- P. 860-865.
194. Cowden R.R., Curtis S. Microphotometric demonstration of differences in nuclear structure or composition // Advances in Microscopy, Hew York, 1985. -P. 187-209.
195. Crocker J., Egan M.J. Correlation between HOR.sizes and numbers in non-Hodgkin's lymphomas // J. Pathol. 1988. - Vol. 156. - Ж 3. - P. 233-241.
196. Crocker J., Skilberg N. lucleolar organizer region associated proteins in cutaneous melautic lesions: a quantitative study // J. Clin. Pathol. 1987. - Vol. 40. -H 8. - P. 885-890.
197. Cromie C.J., Benbow E.W., Staddart R., Mc Matron R. Preincubation with a glycine solution aids the demonstration of nucleolar organizer region-associated protein // Histochemical J.- 1988, Vol. 20. - P. 722-724.
198. Danilova M.F., Kashina Т.К. luclear ultrastructure.in shoot apex of Perilla ocymoides // Phytomorphology. 1984. -Vol. 32. - Ж 4. - P.-323-334.
199. Davis P.M., Hittelman W.U., Mc Credie K.B. et al. Human malignancy associated nucleolar antigen as a marker for tumor cells.in.patients with acute leukemia // Blood. 1984. -Vol. 63. - P. 676-680.
200. Darzynkiewicz R. Drug effects on the cell cycle: discussion. In: Busch H., Crooke S.I., Daskal J. eds. Effects, of drugs on the cell nucleus, lew York: Acad. Press, 1979. P. 470 -473.
201. Daskal Smetana K., Busch. H. Evidence from studies on segregated nucleoli that nucleolar silver staining proteins 022 B23 are in fi'^iH8'1' component // Exp. Cell Res. -1980. Vol. 123. - Ж 2. - P. 285-291.
202. Derenzini M., Betts C., Eusebi V. Distribution of in-terfase nucleolar organizer regions and. diagnosis of malignancy // Lancet. 1987. - Vol. 2. - N 8553. - P. 286. .
203. Derenzini M., Betts C.M., Ceccarelli C., EusebiV.Ultra-structural organization of nucleoli in benign naevi and malignant melanoma // Virch. Arch. B. 1986. - Vol. 52. - P. 343352. - . .; .• .■•-■■ '
204. Dhainaut A. Etude cytochimique et ultrastructurale ovo-cytaire de Hereis pelagica L. (Annelide polychete) // Z. Zellforsch. 1970. - Bd. Ю4. - S. 375-389.
205. Diers В., Schenermann W. Pulsationszyklus der nucleoli in pflanzlichen Zellen. Sind Mikrofilamente an der Koutreaktion der nucleoli beteiUgt? // Biol. Zbl. 1987. - Bd. 106. - Ж 3.- S. 315-324.
206. Dimova R.M., Markov D.V., Gajdardjeva K.C. et al. Electron microscopic localization of silver staining NOR proteins in rat liver nucleoli upon D-galactosamine block of transcription // Europ. J. Cell Biol. 1982. - Vol. 28. - P. 272-277.
207. Donhuijsen K. Mitoses in Mon-Hodgkin's lymphomas. Frequency and prognostic Relevance // Pathol. Res. Pract. 1987. -Vol. 182. - Ж 3. - P. 352-357.
208. Dubner М.Ж., Crowley J.J., Schilling R.F. Limphocyte size and nucleoli as prognostic factors in chronic lymphocytic leukemia // Clin. Res. 1976. - Vol. 24. - P. 487.277» Dulbecco R. Genes in cancer // Folia biol. 1973. -Vol. 29. - P. 9-17.
209. Elsevier S.M., Ruddle F.H. Location of genes coding for 18S and 28S ribosomal R1A within the genome of Mus musculus // Chromosoma. 1975. - Vol. 52. - P. 219-228.
210. Fakai S,., Puvion E. The ultrastructural vizualization of nucleolar and extranucleolar ЕЖА synthesis and distribution // Int. Rev. Cytol. 1980. - Vol. 65. - P. 259-299.
211. Feldman L,J., Torrey J.G. Nucleolar changes, associated With cellular dedifferentiation in pea root cortial cells cultured in vitro // J. Cell Sci. 1977. - Vol. 28. - P. 87-105.
212. Field D.H., Fitzgerald P.H., Sin F.G. Nucleolar silver -staining patterns related to cell cycle phase and cell generation of PHA-stimulated human lymphocytes // Cytobiol. 1984. -Vol. 40. - N 161. - P. 23-33.
213. Fischer D.B., Mueller G.C. Studies on the mechanisms by which РЖА rapidly stimulates phospholipid metabolism of human lymphocytes // Biochem. Biophys. Acta. 1972. - Vol. 248.p. 434-436.
214. Fleishman B.W., Prigogina E.L., Ilinskaya G.W. et al. Chromosomal characteristics of malignant lymphoma // Hum. Genet. 1989. - Vol. 82. - Ж 1. - P. 343-348.- \ Г ,■■•■ 209
215. Frederiks W.M., James J., Arnouts C. et al. The influence of tritoh X-100 on the nuclear envelope of the isolated.liver cell nuclei // Cytobidlogie. 1978. - Vol. 18. - P. 254-271.
216. Fredericks W.M. Some aspects of the value of Sudan Black В in lipid histochemistry // Histochemistry. 1977. -Vol. 54. - P. 27-37.
217. Fraake W.W. Structure, biochemistry and function of the nuclear envelope // Int. Rev. Cyt.- 1974. Suppl. -14.-P. 71-236.
218. Franke W.W., Kleinschmidt J.A., Spring M. et al. A nucleolar cheleton of protein filaments demonstrated in amplified nucleoli of Xenopus laevis // J. Cell Biol. 1981. - Vol. 90. - I 2. - P. 289-300.
219. Franke W.W., Scheer V., Trendelenburg M.F. et al. Ab- . seuse of nucleosomes in transcriptional active chromatin // Cyto-biologie. 1976. - Ж 6. - P. 401-434.
220. Frei E., Schabel F.M., Goldin A. Comparative chemotherapy of АКР lymphoma and human hematological neoplasia // Cancer Res. 1974. - N 12. - P. 184-193.
221. Fonatsch C. Cytogenetics of malignant lymphomas // Blut. 1988. - Vol. 57. - Ж 3. - P. 101-109.
222. Forbes I.J., Leong A.S.-J. Essential oncology of the lymphocyte. Springer-Verlag, 1987. P. 376-388.
223. Forsheit А.В., Davidson ST., Brown D.D. An electron he-teroduplex study of the ribosomal DBAs of Xenopus laevis and Xe-nopus mulleri // J. Mol. Biol.- 1974. Vol. 90. - P. 301-309.
224. Fukuhara S., Ohno H., Amakawa R., Edamura S. et al. Significance of extra 18 g-chromosome in Japanese t(14,18)-positive lymphoma // Blood. 1988. - Vol. 71. - Ж 6. - P. 1748-1751.
225. Gailleau R., Munro M. Chromosome patterns in the АКРmouse; spontaneous leukemia, ascites, transfers,and tissue culture cells likes //J. Hat. Cancer Inst. 1964. - Vol. 33. - Ж 4.- P. 813-824.
226. Gale R.E. , Poon K.A. Biology of chronic lymphocytic leukemia // Sem. Hematol. 1987. - Vol. 24. - Ж 4. - P. 209-229.
227. Gani R. The nucleoli of cultured human lymphocytes. I. lucleolar morphology in relation to transformation and the ША cycle // Exp. Cell Res. 1976. - Vol. 97. - P.-249-258.
228. Giaretti W., lusse M., Bruno S. et al. A new method discriminate Gg» M and G^ postmitotic cells // Exp. Cell Res. 1989. - Ж 182. - P. 290-295. ■
229. Giri D.D., Nottinghan I.Т., Lawry I. et al. Silver-binding nucleolar organizer regions (AgЖ0Rs) in benign and malignant breast lesions: correlation with ploidy and growth phase by ША // J. Pathol. 1989. - Vol. 157. - Ж 4. - P. 307-315.
230. Ghadially ЗР.Ж. Ultrastructural pathology of the cell. London, Boston: Butter Worths, 1975. 543 p.
231. Greil R., Gattinger C., Fasching B. et al. Alb-oncoge-. ne expression in non-Hodgkin lymphomas: correlation to histological differentian and clinical status // Int. J. Cancer. 1988.- Ж 42. P. 529-534.
232. Goessens G. Жис1ео1аг structure // Int. Rev. ^ytol. -1984. Ж 87. - P. 107-158.
233. Goessens G., Lepeint A. The nucleolus-organizing regions (Ж(Ш'з): recent data and hypothesis // Biol. Cell. 1979.
234. Vol. 35. Ж 2. - P. 211-215.
235. Grunet В., Schafer K.P. RNA methylation in resting and Con A-stimulated lymphocytes // Exp. Cell Res. 1982, - Vol. 140. - Ж 1. - P, 137-147.
236. Houat A.J., Giri D., Cottou D., Slater D. Nucleolar organizer regions in spitz nevi and malignant melanomas // Cancer. 1989. - Vol. 63. -13.- P. 474-479.
237. Howat A.J., Giri D.D., Wright A.L., Undernood J.C. Silver-stained nucleoli and nucleolar organizer regiouns counts are no prognostic value in thick cutaneous malignant melanoma // J. Pathol. 1988. - Vol. 156, - Ж 3. - P. 37-46,
238. Jordan G. At the heart of the nucleolus // Nature. -1987. Vol. 329. - - Ж. 6139. - P. 489-491.
239. Howard N., Dubner H., Crowley J., Schilling R. Prognostic value of nucleoli and cell size in chronic lymphocytic leukemia // Amer. J. Hematol. 1978. - Vol. 4. - Ж 4. - P. 337-341.
240. Had^iolov A. Nucleolus and ribosome biogenesis. Wien, Hew York: Springer-Verlag, 1985. 268 p.
241. Heinohen K., Rautonen S., .Siimes M.A., Kunutila S. Cytogenetic study of 101 children with acute lymphoblastic leuke-. mia // Eur. J. Haematol. -.1988. -.Vol. 41. Ж 3. - P. 237-242.
242. Hart J.S., George S.L., Erei Т.Е. et al. Prognostic significance of pretreatment proliferative activity in adult acute leukemia // Cancer. 1977. - Vol. 39. - Ж 4. - P. 16031617.
243. Hecht P., Morgan K., Kaiser-Mc Caio Hecht B. et al. Common region on chromosome 14 in T-cell leukemia and lymphoma // Science. 1984. - Vol; 226, - Ж 4681. - P. 1445-1448.
244. Henderson A.S., Warburg 33., Atmood K.C. Localization of rDIA in the chimpanzee (Pan troglodites) chromosome complement // Chromosome. 1974. - Vol. 46. - P. 435-446.
245. Henderson A.S., Atwood K.C., Ju M.T., Warburton D. The site of 5SRMA genes in primates // Chromosoma. 1976. - Vol. 56.- Ж 3. P. 29-37.
246. Hernandez-Verdun D. Structural organization in the nucleolus in mammalian cells // Meth. Achiev. exp. Pathol. -1986. Ж 12. - P. 26-62.
247. Hernandez-Verdun D., Hubert J., Bourgeois C.A., Bou~. teille M. Identification ultrastructurale de 1'organisateur nu-cleolaire.par la technique a 1'argent // C.R. Acad. Sci. 1978.- N 287. P. 1421-1423.
248. Higgins G.M., Anderson R.M. Experimental pathology of the liver I. Restoration of the liver of the white.rat following partial surgical removal // Arch. Pathol. 1931. -Vol. 12.1. Ж 1. P. 186.
249. Hirata P., Axelrod V., Iwata et al. Biochemical cascade of lipid metabolism in activated lymphocytes // Mechanisms oflymphocyte. Amsterdam, 1981. P. 41-46.
250. I-Iiller K., Meyer P., Wilius K. I11 vivo cell kinetic effects of vineristine on spontaneous АКР leukemia: recruitment on non-proliferating cells // Blut. 1982. - "Vol. 45. -11.-P. 39-45.
251. Holdrinet R., Pennings A., Drecthe-Schouk A. et al. Plow cytometric determination of S-phase compartment in adult acute leukemia // Acta Haematol. 1983. - Vol. 20. - Ж 6. - P. 369-378.
252. Hsu W.S. The nucleolar envelope in the developing, oocytes of the funicate Boltenia villosa // Z. Zellforsch. -1963. Bd. 58. - S. 660-678.
253. Hsu T.C., Spirito S.E., Pardue H.L, Distribution of 18+28S ribosomal genes in mammalian genomes // Chromosoma. -1975. Vol. 53. - Ж 2. - P. 25-36.
254. Hubbell H.R., Lau J-P., Braun R.L., Hsu T.S. Cell cycle analysis and drug inhibition studies of silver staining in synchronous Hela cells // Exp. Cell Res. 1980. - Vol. 120. -Ж 2. - P. 139-147.
255. Hutchison Ж., Pardue H.L. The mitotic chromosomes of lotopthalnus viridences. Localization of С bauding regions of ША sequences complementaring to 18S, 28S and 5S ribosomal RITA // Chromosoma. 1975.- Vol. 53. - P. 51-69.
256. Juliusson G., Robert К., Ж1азоп В. et al. Prognostic value of B-cell mitogen Induced and spontaneous thymidine uptake in vitro in chronic B-lymphocytic leukemia cells // Br. J. Haematol. 1985. - Vol. 60. - Ж 3. - P. 429-436.
257. Junis J.J., 0ken M.M., Theologides A. et al. Recurrent chromosomal defects are found in most patients with non-Hodgkin's lymphoma // Cancer Genet. Cytogenet. 1984. - Vol. 13.; 214-15. -.Р. 17-28.
258. Joneja M., Stich M. Chromosome aberrations in virus induced murine leukemia // Exp. Cell Res. -.1965» Ж 40. -P. 148-151.
259. Joensnen H., Klemi P.J., Korkeila E. Prognostic value of D1A ploidy and proliferative activity in Hidgkin's disease.// Amer. J. clin. Pathol. 1988. - Vol. 90. - Ж 6. - P. 669-673»
260. Iliakis В., Pantelias G. Effect of hyperthermia on chromatin condensation and nucleoli desintegration as visualized by induction.of premature chromosome condensation in interphase mammalian cells // Cancer res. 1989. - Ж 49. - P. 1254-1260,
261. Ilbery P., Moore P. Chromosome© in murine preleukemia // Cellular basis eatiology of late somatic.effects by ionizing radiation. London Bew York, 19бЗ- - P. 83-92.
262. Kahok Т., Kahok Т., Ohnava I. et al, Жис1ео1из-аэзоelated Ichains in myeloma cells // Sc.and. J. Haematol. 1986, -Vol. 37. - Ж 5. - P. 443-447»
263. Karasaki S. Passage of cytoplasmic lipid into interphase nuclei in preneoplastic rat liver // J. Ultrastruct. Res.- 1973. Vol. 42. - P. 463-478.
264. Kasik P., Ljenar J., Hrobon M., Smetana K. nucleoliin human.pseudostratified columnar epithelium cells // Folia Biol.- 1977. Ж 23. - P. 354-358.
265. Kaserovska H., Likovsky Z., Smetana K. Nucleolar silver stained granules in rat Yoshida sarcoma cells.after ША.synthesis inhibition // leoplasma. 1981. - Vol. 28. - P. 513-516.
266. Kamada Ж. Chromosome abnormalities.in hematopoeitic malignancies // Acta haematol. Jap. 1988. - Vol. 51. - Ж 8. -P. 12-18.
267. Keizo M., Mitsuro 0. A scanning electron microscopic observation in the nucleolus in the root meristematic cells at Vicia fabu (broad beans) // J. Electr. Micro sc. 1982. - Vol. 31. - Ж 3. - P. 253-256.
268. Mc Kenna R.W., Parkin J., Branning R.D. Morphologic and ultrastruetural characteristics of T-cell acute lymphoblas- . tic leukemia // Cancer. 1979. - Vol. 44. - Ж 4. - P. 1290-1297.
269. Kendall P., Swenson R., Borun J. et al. Nuclear morphometry during the cell cycle // Science. 1977. - Ж 196. -P. 1106-1108.
270. Kezer J., Macgregor H.C., Schabtach E. Observation on the membranous component at amphibian oocytes '.nucleoli // J. Cell, Sci. 1971. - Vol. 8. - Ж 1. - P. 1-18.
271. Kessel R.G., Beams H.W. Intranuclear membranes and nuclear-cytoplasmic exchange in young craytish oocytes // J. Cell Biol. 1968. - Vol. 39. - Ж 3. - P. 735-741.
272. Konstantinovich M., Sevalevic L. Nuclear matrix from resting and ConA treated human lymphocytes // Biochem. Biophys. Acta. 1983. - Vol. 76. - Ж 1. - P. 1-8.
273. Komitowskj D., Janson C., Szamaborski J., Czernobilski J. Quantitative nucleolar morphology in the diagnosis of. ovarian tumors of low malignant potential (borderline) // Cancer. -1989. Vol. 64. - P. 905-910.
274. Korsakova L., Pekarek J., Rovensky J. Lymphocyte nucleolar activation as a marker of.autoimmune disorders // Immunology. 1976. - Vol. 31. - N 5. - P. 803-805. .
275. Kuzmina S.N., Buldyaeva T.V., Akopov S.B., Zbarsky I.B. Protein patterns of the nuclear matrix in differently proliferating and malignant cells // Molec. Cell. Biochem. 1984.- Vol. 58. Ж 6. - P.183-185.
276. La Cour L.F., Chayen S., Gahan P.B. Evedens for lipid material in chromosomes // Exp. Cell Res. 1958. - Ж 14.1. P. 469-485.
277. Legrand E., Duplau J. Presence of an additional,metacentric chromosome in AKP/TIALD leukemic cells // Nature. 1970.- Vol. 225. Ж 5234. - P. 737-738.
278. Lenner P., Roos G., Johansson H. et al. Жоп-Hodgkin lymphoma. Multivariate analysis of prognostic factors including fraction of S-phase cells // Acta Oncol. 1987. - Vol. 26.1. Ж 3. P. 179-183.
279. Lengle E.E., Gustin Ж.С., Gonzalez E. et al. Energy metabolism in thymic lymphocytes of normal and leukemic AKR mice
280. Cancer Res. 1978. - Vol.- 38. - H. -P. 1113-1119.363* Lettre R. Observations on the behavior of the nucleolus of cells in vitro // Pine structure of cells. Gronigen: To-ordhott, 1955. P. 141-150.
281. Levey G.S. Restoration of norepinephrine responsivness of solubilized micardial adenilate cyclase by phosphotidilenosi-tol // J. Biol. Chem. 1971. - Vol. 246. - I 4. - P. 7405-7407.
282. Likovsky Z., Smetana K. Further studies on the cytochemistry and the standardized silver staining of interphase nucleoli in smear preparations of Joshida ascitic sarcoma cells in rats // Histochemistry. 1981. - Ж 72. - P. 301-313.
283. Lilleyman J.S., Hann J.M., Stevens R.F. et al. Blast cell vacuoles in childhood lymphoblastic leukaemia // Brit. J. Haematol. 1988. - Vol. 70. - Ж 2. - P. 183-186.
284. Locher J., Goldbalt P.J., leighton J. Some ultrastruc-tural features of Joshida ascites hepatoma // J. Cancer Res. -1968. Ж 28. - P. 2039-2049.
285. Manzoli P.A., Maraldi Ж.1-1., Coeco L. et al. Chromatin, phospholipids in normal and chronic lymphocytic, leukemia lymphocytes // Cancer Res. -1977. Vol.37. - Ж 3. - P. 843-849.
286. Manzoli P.A., Capitani S., Mazzolti G. et al. Role of chromatin phospholipids on template availability and.ultrastuc-. ture of isolated nuclei // Adv. Enzyme Regul. 1981. - Vol. 20.- P. 247-262.
287. Manzoli P.A., Muchmore J.H., Bonora B. et al. Interaction between sphyngomyelin and DMA // Biochim. Biophys. Acta. -1972. Ж 277. - P. 251-255.
288. Manzoli P.A., Muchmori J.H., Bonora B. et al. Lipid-ША interactions. Phospholipids, cholesterol, glicerophosphoryl-choline, sphingosine and fatty acids // Biochim. Biophys. acta.- 1974. Vol. 340. - Ж 1. - P. 1-15.
289. Manzoli P.A., Czpitani S., Maraldi Ж.М. et al. Chromatin lipids and their possible role in.gene expression. A study in normal and neoplastic cells // Adv. Enzyme Regul. 1979. -Vol. 17. - P. 175-194.■
290. Maraldi Ж.М., Caramelli E., Capitani S. et al. Chromatin structural changes induced by phosphotidilserine lyposomes on isolated nuclei // Biol. Cell. 1982. - Vol. 46. -13,1. P. 325-328.
291. Martinez G., Pereeira R., Hernandez A. et al. The mo-, lecular heterogenity of chronic lymphocytic leukemia: furtherdata // Haematologica. 1988. - Vol. 73. - Ж 3. - P. 169-172, If
292. Mary J.Y., Rigant J.P. Quantitative image analysis in, cancer cytology in histology. Amsterdam, Mew York, Oxford: Else219vier science publishers, 1986»
293. McMeekin W., Kennedy A., McUicol A. Gombined immunocyt-ochemistry and nucleolar organizer region staining: some.technical aspects //Med. Lab. Sci. 1986. - Vol. 46. - H 1. - P. 1116.
294. Mc Kenna R.W., Parkin J., Kersey J.H. et al. Chronic lymphoprolipherative disorder with unusual clinical, morphologic ultrastructural and membrane surface marker characteristics // Amer. J. Med. 1977. - Vol. 62. - I 5. - P. 588-595.
295. Menconi E., Lepri E., Bonmassar E. et al. An in vitro assay for evaluating chemosensibiling of leukaemia cells: preclinical studies, // Int. J. Tissue React. 1986. - Vol. 8. -16. - P. 485-492.
296. Miller O.L., Beatty A.R. Visualization of nucleolar genes // Science. 1969. - N 164. - P. 955-957.
297. Miller J.P.A.P. Thymus and immunity. II. The last . three decades. // Eur. J. Cancer. 1988. - Vol. 24. - If 8. -P. 1257-1262.
298. Miller O.L., Hamkalo B.A. Visualization of.REA.synthesis on chromosomes // Int. Rev. Cytol. 1972. - Vol. 33.1. P. 1-26.
299. Mirre C., Stahl A. Ultrastructural organisation, sites of transcription and distribution of fibrillar.centres.in the nucleolus of the mouse oocyte // J. Cell Sci. 1981. - Vol. 48. - P. 105-126.
300. Mitelman P. Catalog of chromosome aberations in cancer, ed. A.Sandberg, 1988. 875 p.
301. Montserrat E., Rozman C. Bone marrow biopsy in chronic lymphocytic leukaemia: a study of 208 cases // Haematologia. -1983. Vol. 16. -11, - P. 73-79.
302. Moreno-Dias E.E., Medina F.J., Risueno M.C. Correlation of nuclear activity and nucleolar vacuolation.in.plant cells // Eur. J. Cell Biol. . 1980. - Vol. 22. - Ж 2. -P. 724-729.
303. Moricard R., Moricard P. Modifications cytoplasm!ques et nucleares ultrastructurales uterines an cours de I'etat.fol-lico-luteinique a glycogene massif // Gyn. Obst. (Paris). -1964. Ж 63. - P.203-219.
304. Hewbold K.M., Rollason T.P., Luesley D.M., Ward K. Nucleolar organizer, regions and prolipherative index in glandular . . and squamous carcinomas of the cervix // J. Clin. Pathol. 1989.- Vol. 42. Ж 4. - P. 441-442.
305. Ochs R.L., Busch H. Further evidence that phosphoprote-in C23 (110D/PS 5,1) is the nucleolar silver protein // Exp. Cell Res. 1984. - Vol. 452. -.1 62. - P. 260-265.
306. Ochs R., Lischwe Ж.А., Spohn W.H., Busch H. Fi"brillariu; a new protein of the nucleolus identified by autoimmune sera // Biol. Cell. 1985. - 1 84. - P.123-134.
307. Olins A.L., Olins D.S., Franke W.W. Stereo-electron microscopy of nucleoli, balbiani ring and endoplasmic reticulum in chromosomes salivary gland cells // Eur. J. Cell Biol. -1980. Vol. 22. - Ж 2. - P. 714-723.
308. Olivier H.J. Chimie des nucleoli de I'ovocyte an cours de I'ovogenese de la lemete Lineus ruber Mflller. Paris: C.R. Acad. Sc., 1966. Vol. 263. - P. 289-291.
309. Ollerich D., Carlson E. Ultrastructure of intranucleo-. lar annulate lamellae in giant cells of rat placenta // J. Ultra-struct. Res. 1970. -Ж 30. - P. 411-422.
310. Olson M.O.G., Thompson B.A. Distribution of protein . among chromatin components of nucleoli // Biochemistry. 1983. - Vol. 22. - P. 3187-3193.
311. Omine M., Sarna G.P., Perry S. Composition of leukemic cell populations in AICR leukemia and effects of chemotherapy // Eur. J. Cancer. 1973. - Vol. 9. - Ж 11. - P. 367-377.
312. Omine M., Tsuchiya, Maekawa T. Clinical implications of cytokinetic and biochemical features of acute leukemic cells //
313. Acta Haematol. Jap. 1980. - Yol. 43. - Ж 10. - P. 1004-1021.
314. Osterwalder B. Stadieneinteilungen der chronischen lymph.atisch.en Leukfimie als Basis der Therapieentschexdung // Dtsch. rned. Y/schr. 1987. - Bd. 112. - Ж 12. - S. 473-475.
315. Paddock S., A.-Buenler G. Regidity of nucleolus during nuclear rotation in 3T3 cells // S^p. Cell Res. 1988. - Yol, 175. - Ж 2. - P. 409-413.
316. Parmley R.T., Doco L.W., Mauer A.M. Ultrastructural cell cycle-specific nuclear and nucleolar changes of human leukemic lymphoblasts // Cancer Res. 1977. - Yol. 37. - Ж 8.1. P. 4313-4325.
317. Phillips S.G., Phillips D.M. Nucleoli of diploid cell strains. Their normal ultrastructure and the effects of toyoca-mycin and actinomycin В // J. Cell Biol. 1971. - Ж 49.1. P. 785-802.
318. Pellicia P., de Capoa A., Belloni G. et al. Localization of silver staining in interphase,.prophase, and metaphase lymphocytes // Exp. Cell Res. 1978. - Ж 115. - P. 439-441.
319. Peters K.B., Comings D.E. Two-dimensional gel electrophoresis on rat liver nucleolar waches, nuclear matrix and hnRNA proteins // J. Cell Biol. 1980. - Ж 86. - P. 135-141.
320. Peterson L.C., Bloomfield C.D., Sundberg R.D. et al. Morphology of chronic lymphocytic leukemia and.its relationship to survival // Amer. J. Med. 1975. - Yol. 59. - P. 316-324.
321. Peterson L.C., Bloomfield C.D., Brunning R.D. Relationship of clinical staging and lymphocyte morphology to survivalin chronic lymphocytic leukaemia // Brit» J. Haematol, 1980, -Yol. 44. - Ж 4. - P. 563-567.
322. Ploton D., Thiry M., Menager M. et al. Behavior of nucleolus during mitosis. A comparative ultrastructural study ofvarious cancerous cell lines using the Ag-ЖШ staining procedure // Chromosoma. 1987. - Vol. 95. - P. 95-107.
323. Ploton D., Bobichon H., Adnet J.J. Ultrastructural localization of NOR in nucleoli of human breast cancer tissue using a one-step Ag-NOR staining method // Biol. Cell !- 1982. Ж 43.- P. 229-232.
324. Potmesil M., Goldfeder A. Nucleolar morphology.and maturation of thymic lymphocytes // J. Cell Biol. 1972. - Vol. 53. - Ж 5. - P. 832-837.
325. Potmesil M., Goldfeder A. Kinetic studies of G^ phase -coutined cells in irradiated experimental tumors // Cell Tiss. Kinet. 1979. - Vol. 12. - Ж 4. - P. 666-667.
326. Potmesil M., Goldfeder A. Cell kinetics of irradiated experimental tumors: cell transition from the non-proliferating to the proliferating pool // Cell Tiss. Kinet. 1980. - Vol. 13. - Ж 7. - P. 563-570.
327. Potmesil M., Smetana K. Studies on nucleoli of lymphocytes in human peripheral blood // Polia haematol. 1970. -Vol. 94. - Ж 3. - P. 264-269.
328. Potmesil M., Smetana K. Significance of ring shaped nucleoli and mictonucleolus in human lymphocytes // Polia biol.- 1969. Ж 4. - P. 300-309.
329. Pompidou A., Rousset S., Mace В., et al. Chromatin structure and nucleic acid synthesis in human, leucocyte activation by.phytohemagglutinin // Exp. Cell Res. 1984. - Vol. 150.- Ж 1. P. 213-225.
330. Rosen P.J., Perry S., Schabel P.M. Proliferative capacity of leukemic cells in АКР leukemia // J. Nat. Cancer Inst. -1970. Vol. 45. - Ж 6. - P. 116'9-1178.
331. Prysl-Davies J., Ryder I.A., Mac Kenzie M. In vivo production of the nucleolar channel system in post.menopausal endometrium // Cell Tissue Res. 1979. - Vol. 203. - P. 443-498.
332. Rai K.R., Sawitsky A., Cronkite E.P. et al. Clinical staging of chronic lymphocytic leukemia // Blood. 1975. - Vol. 46. - Ж 2. - P. 219-234.
333. Raska I., Smetana K. A further contribution on nucleoli of human lymphocytes // Polia haemat. 1978. - Ж 101. - P. 200215.
334. Raskai J., Novak J., Smetana K. Further ultrastructural studies on lymphocytic micronucleoli // Folia Haematol. 1981. -Vol. 108. - Ж 3. - P. 367-377.
335. Raska I., Rychter Z., Smetana K. Fibrillar centeres . and condensed nucleolar chromatin in resting and stimulated.hu-, man lymphocytes // Z. mikrosk. anat. Forsch. 1983. - Bd. 97. -S. 15-32.
336. Raska I., Yarnik M., Petrasovicova V. et al. Nucleolar structure and function as revealed by.ultrastructural immunocy-tochemistry // Histochem. J. 1988. - Vol. 20. - Ж 12. - P. 730 -731.
337. Raven D., Freidlander H., Eyal-Giladi H. Nucleolar.ontogenesis in the uterine chick germ.correlated with morphological events // Exp. Cell Res. 1976. - Vol. 100.- P. 195-203.
338. Reeder R.H., Brown D.D., Wellauer P.K., David J.B. Patterns of ribosomal ША spacer lengths are inherited // J. МЫ. Biol. 1976. - Vol. 105. - P. 5°7-51б.
339. Rees K.R., Rowland G.F., Varcol J.S. The metabolism of isolated rat liver nucleoli and other subnuclear fractions // Biochem. J. 1963. - N 86. - P. 130-136.
340. Reeves B.R., Casey G., Harris H. Variation in the activity of nucleolar organizers in different tissues, demonstration by silteer staining of human normal and leukemic cells // Cancer. Genet. Cytogenet. 1982. - Vol. 6. - Ж 2. - P. 223-230.
341. Reimer G., Raska E., Tan E., Scheer V. Human autoantibodies: probes for nucleolus structure and function // Virch. Arch. B. 1987. - Vol. 54. - Ж 3. - P. 131-144.
342. Richmond H.G., Billingron R.W. Chemotherapy sensitivity testing in human tumours // J. Clin. Pathol. 1981. - Vol. 34. - Ж 1. - P. 343-350.
343. Ross D., Jen R.-f., Chae C.-B. Association of globin ribonucleic acid precursors with the chicken erythroblast nuclear matrix // Biochemistry. 1982. - Vol. 21. - P. 763-771.
344. Rose R.J., Setterfield, Powhe L.C. Activation of nucleoli in tuber slices and function of nucleolar vacuoles // Exp. Cell Res. 1972. - Ж 71. - P. 1-16.
345. Rose H.G., Prenster J.H. Composition and metabolism of lipids within repressed and active chromatin.of interphase lymphocytes //Bro-chim. Biophys. acta. 1965. - Ж 106. - P. 577591.
346. Rozman C., Mountserrat E., Pelin E., Woesaner S. Lim-phocyte size and survival of patients with chronic.lymphocytic leukaemia (B-type) // Scand. J. Haematol. 1980. - Vol. 24. -Ж 4. - P. 315-320.
347. Ruffolo J.J. The intranuclear helices of Euplotes:their substructure, localization and apparent migration to the cytoplasm // J. Morph. 1979. -.Vol. 159. - Ж 1. - P. 81-88.
348. Sadamori Ж., Kusano M., Hishiko K. Chromosome abnormalities in acute lymphoblastic leukemia // Cancer Genet. Cytoge-net. 1985. - Vol. 17. - Ж 3. - P. 279-282.
349. Sandberg A., Turccarel C. Chromosomes as human tumor, markers // Human Tumor Markers (Biology and Clinical Applications) , 1986. P. 355-377.
350. Schel J.H.H. Het skelet van de celkern kapston voor ША en eiwitten // Natuur techn. 1980. - Vol. 48. - Ж 7. -P. 526-543.
351. Scheer V., Kleinschmidt J.A., Pranke W. Transcribtio-nal and skeletal elements in nucleoli of amphibian oocytes // The Nucleolus. Cambridge Univ. Press, 1983. P. 25-42.
352. Shi L., Ni Z., Shi Z. et al. Involment of a nuclear, component, perichromonucleolin, in the condensation and decondensation of chromosomes // Proc. Nat. Acad. Sci USA. 1987. -Ж 84 (22). - P. 7953-7957.
353. Schulze C. Giant nuclear bodies (sphaericlic) in Sertoli cells of patients with testicular tumors // J. Ultrastruct, -1979. Vol. 67. - Ж 3. - P. 267-276.
354. Schultze W., Helbig W. Resultate von In-vitro~Serien-kultivierungen hfimatopoetischer Zellen im Verlauf der Behandlung akuter LeukSmien -/-/■--ib-li-a—Haematol". 1984. -"Vol. Till. -13. - P. 314-318.
355. Schwarzackr H.G., Mikkelsaar A.V., Schhedl W. The nature of the Ag-staining of nucleolus organizer regions: electron and light-microscopic studies on human cells in interphase,.mitosis and meiosis // Cytogenet. Cell. Genet. 1978. - Ж 20.1. P. 24-39.
356. Sch.warracb.er H.G., Wachtler F. Nucleolus organizer region and nucleoli // Human Genet. 1983. - Yol. 63. -13.-P. 89-99.
357. Siegler R., Rich M. Unilateral histogenesis.of AKR thymic lymphoma // Cancer Res. 1963. - N.23. - P. 1669-1676.
358. Sigmund J., Schwarzacher H.G., Mikelsaar A.Y. A satellite association frequency and number of nucleoli depend on cell, cycle duration and IfOR-activity // Hum. Genet. 1979. - Yol. 50. - Ж 1. - P. 81-91. .
359. Simard R., Bernhard W. Le phenomene de la segregation nucleolaire specifite de.l'action de certaine antimetabolites // Int. J. Cancer. 1966. - I 1. -.P. 463-479.
360. Slubowski Т., Baranska, Kujawa M., Над S. Ultrastructural morphometric cell evaluation, in chronic lymphocytic leucae-. mias // Folia Haematol. 1985. - Yol. 112. - Ж 1. - P. 141-149.
361. Smetana K. Electron microscopy of lymphocytes //.Methods in cancer research. New York: Academic Press, 1970. Ж 5. -.P. 455-478.
362. Smetana K. The structural morphology and formation, of nuclear ribonucleoprotein structure // Acta Fac. med. Brun. -1974. Ж 49. - P. 155-179.
363. Smetana K., Busch H. The nucleolus and nucleolar DNA.
364. The Cell Nucleus.-Же?/ York Academic Press, 1974. P. 75-148,
365. Smetana K., Busch H, Studies on silver stained nucleolar components. Effects of drugs on the cell nucleus. New Yorkj Academic Press, 1979. P. 89-105,
366. Smetana K., Busch R.K., Hermansky P., Busch H. Nucleolar immunofluorescence in bone marrow specimens of human.hemato-logical malignancies // Blut. 1981. - Ж 42. - S, 79-92,
367. Smetana K., Daskal I., Busch H, Cytochemistry of micro-trabecular network of compat nucleoli of hepatocytes // Exp. Cell Res. 19б8. - Ж 32. - P. 112-128.
368. Smetana K.,Gyorkey P., Gyorkey P., Busch H. Proliferating cell nuclear antigen (РСЖА- and human malignant tumor nucleolar antigens (HMTNA) in nucleoli of human hematological malignancies // Blut. 1983. - Ж 46. - S. 133-143.
369. Smetana K., Gyorkey P., Chan P.K. et al. Proliferating cell nuclear antigen (РСЖА- and human malignant tumor nucleolar antigens (HMTNA) in nucleoli of human hematological malignancy // Blut. 1983. - Ж 46. - S. 133-143.
370. Smetana K., Lejner J., Saikova J. Studies on nucleoli in rosetting I and В lymphocytes in the human peripheral blood cells // Polia Haematol. 1980. - Vol. 167. - Ж 5. - P. 720-727.
371. Smetana K., Likovsky Z., Busch R.K. Further studies on satellite nucleoli in rat and mouse hepatocytes // Exp. Cell Res. 1984. - Ж 15. - P. 80-86.
372. Smetana K,, Likovsky Z. Nucleolar silver stained granules in maturing erythroid and granulocytic cells // Cell Tiss, Res. 1984. - Vol. 237. - P. 367-370,
373. Smetana K., Raska I., Kusak M. A note on the nucleolar ultrastructure in human non-leukemic lymphocytes // Folia haemat.- 1972. Ж 98. - P. 140-146. \
374. Smetana K., Raska I., Sebesta K. The effect of the Bacillus thuringiensic on the fine nucleolar morphology and ultra-structure // Exp. Cell Res. 1974. - Ж 27. - P. 351-358.
375. Smetana K., Raska I., Sebestak K. Studies on the organization and distribution of nucleolar RMP components after the nucleolar REA synthesis and processing inhibition // REBS Proc.- 1975. Ж 33. - P. 169-174.
376. Smetana К ., Unuma I., Busch II. Ultrastructural studies on nucleic acids of nuclear granular components in Kovikoff hepatoma // Exp. Cell Res. 1968. - Ж 51. - P.105-122. .
377. Smith H.C., Puvion E., Buchholtz L., Berezney R. Spatial distribution of ЩА loops attachment.and replicational sites in the nuclear matrix // J. Cell Biol. -".1984* Vol. 99. -P. 1794-1802.
378. Sokab I., Pauly I. In vitro thymidine uptake by circulating leukocytes // J. Lab. Med. 1974. - Vol. 84. - Ж 1.1. P. 681-691.
379. Sokol E.J. Жис1ео11 of blood monocytes in malignant lymphoma. A morphometric study // Amer. J. Clin. Pathol. 1989*- Vol. 91. Ж 1. - P. 60-63.
380. Sokol R.J., Hudson G., Wales J., James Ж.Т. Morphometry of human blood leukocyte ultrastructure: its potential value In. haematology // Haematologia. 1988. - Vol. 21. - Ж 3. - P. 129139.
381. Speirs J., Birnstiel M. Arrangement of the 6,8S ЕЖА cistrous in the genome of Xenopus laevis // J. Mol. Biol. -1974. Ж 87. - P. 237-246.
382. Steffensen D.M. Chromosome architecture and the interphase nucleus: data and theory on the mechanisms of differentiation and determination // Chromosomes today, Vol. 6, Proc. 5th Int. Cont., Helsinki, 1977. -P. 247-253.
383. Stahl A., Hartung M., Deviсtor H. et al.The rDEA is located and transcribed in the dense fibrillar component of the nucleolus // Eur. J. Cell Biol. 1989. - Vol. 48. - Suppl. Ж 26.- P. 64.
384. Staher A., Lutz D., Varbiro M. et al. Morphologie und Index der Жик1ео1еп in Malignanlymphomen // Polia haematol. -1980. Bd. 107. - S. 548-558.
385. Takahashi R., Horita J., Chew H. et al. Molecular and cytogenetic studies on nucleolar cistrous (rDHA) in.mouse leukemia cells // Cancer Genet. Cytogenet. 1987. - Vol. 29. - Ж 1.- P. 109-119.
386. Takahashi A. Kariometric and cytophotometric studies of nucleic acids in culture of human lymphocytes with PHA // Virch. Arch. B. 1976. - If 2. - P. 299-311.
387. Tata J.R., Hamilton M.J., Cole R.D. Membrane phospholipids associated with nuclei and chromatin melting profile template activity and stability of chromatin // J. Mol. Biol. 1972.- Ж 67. P. 231-246.
388. Theodorakls M.S., Goldberg J. A rapid In vitro drug-sensitivity assay in acute nonlymphocytic leukemia // Amer. J. Hematol. 1983. - Vol. 15. -1.3. - P. 261-271.
389. Thiery J.R., Auris A., Bumont J. et al. Acute nonlymphocytic leukemias following chemotherapy. Ultrastructural study of erythroblastic cell line and discussion of nuclear anomalies // Blood cells. - 1981. - Vol. 7. - Ж 3. - P. 341-356.
390. Terrakis J.A. The nucleolar channel system of human endometrium // J. Cell Biol. 1965. - Ж 27. - P. 293-304.
391. Vaguer-Copodano A.M., Henderson S.A., Lissitzky S., Stahl A. The relationships between ribosomal genes and fibullarcenters in thyroid cells cultivated in vitro // Biol. Cell. -1984. Vol. 51. - P. 11-12.
392. Van der Elst J., Deleener A., Verschaewel L, et al. Comparison of metaphase and interphase nucleolar activity in Hela -CCL2 cells and PHA-stimulated human lymphocytes // Cancer Genet. Cytogenet. 1984. - Vol. 13. - I 3. - P. 209-223.
393. Vuhanovic N., Iiinsky R.H. Premiere demonstration de differences morphologigues entre des lymphocytes appartenant des populations cellularies thymodependantes et thymo-independentes // C.R. Acad. Sci. 1972. - Ж 275. - P. 1933-1936.
394. Vujanovic Ж., Kinsky R., Due H.T. Morphological differences between thymus and bone marrow-derived lymphocytes. 1, A light microscopic and experimental study in unstimulated mice // Differentiation. 1974. - Vol. 2. - 12, - P. 107-117.
395. Vio-Cigma M., Jebusque M.-J., Seite R. Improvement in selective staining of nucleolar organizer regions in block tissues of the ultrastructural level // Biol. Cell. 1982. - N 44. - P. 329-332.
396. Voets R., Lagron A., Hilderson H. et al. Characterization and transcription of bovine thyroid chromatin // Int. J. Biochem. 1983. - Vol. 15. - Ж 1. - P. 87-94.
397. Voigtmann R. Pharmakologische Interaktionen bei.der Behandlung mit Zytostatika // Dtsch. med. Wschr. 1988. -Vol. 113. - Ж 41. - P. 1604-1608.
398. Unuma Т., Smetana K., Busch H. A morphologic, study on the chromatin areas associated with the nucleolus // Exp. Cell Res. 1967. - Ж 48. - P. 665-671.
399. Wachtler E., Ellinger A., Schwarzacher H.G. Nucleolar changes in human phytohaemagglutinin-stimulated lymphocytes // Cell Tissue Res. 1980. - N 213. - P. 351-360.
400. Wachtler P., Schwarzacher H.G.,0n the fusion on nucleoli in interphase // Eur. J. Cell Biol. 1984. - Vol. 34.1. Ж 4. P. 190-192,
401. Yfesserman P., Barton A.D., Msileski W. .Electron microscopic radioautographic observations suggesting, 1969о -Vol, 95. Ж 1. - P. 1-8.
402. Willecke K., Schafer R.Human oncogenes // Human Genet. 1984. - Vol. 66. - Ж 2/3. - P. 132-142,
403. Xoffey J.M., Winter G.C.B., Osmond D.G., Meek E.S. Morphological studies in the culture of human leucocytes with phy-tohaemagglutinin // Brit, J. Haemat. 1963. - Ж 11. - P, 483497.
404. Zacepina 0., Жovak J., Smetana K. et al. Studies on nucleolar silver stained proteins in nucleoli of human.normal and stimulated and leukemia lymphocyte // Mikoskopie. 1984. -Ж 41. - P. 278-284.
405. Рис* 2. Перинуклеолярная зона ядра в изолированных ядрах мериетшш IЛ-faia . ЗЩУв.об.Х70а,б,в флуоресценция акридинового оранжевого г - фазовоконтрастный контроль ЯДК - ядрышко, ПНЗ - перинуклеолярная зона
406. Рис:; ЗА. Перинуклеолярная зона ядра в лимфоцитах периферической крови человека,стимулированных #ГА. Окраска толуидиновым голубым по Smeianoi , МИ.Ув.об.ХЮО.а 6 часовая,б - 24 часовая, в - 48 часовая, г -72 часовая культура.
407. ЯДК ядрышко, ПНЗ - перинуклеолярная зона, РТ - радиальные тяжи
408. Рис. ЗБ. Перинуклеолярная зона ядра в клетках культуры до /а/ и через S часов после смены среды /б/, Окраска толуиди-новым голубым по Smetoma. . МИ,ув. 06.XIQO. ДЩ -ядрышко ,ННЗ першукяеоляряая зона
409. ЯДК ядрышко,ПНЗ - перинуклеолярная зона,ЛКГИНЗ - липидный компонент границы перинуклеолярной зоныо ЧАСОВ1. СОП1. V .1. ЧАСОВcon•. *hi »иоп2« ЧАСА1. ИОП•onv :иоп
410. Рис. 6. Гистограммы распределения ФГА-стимулированных лимфоцитов человека по СОП / А /, ИОП / Б / и двумерные распределения этих клеток по СОП и ИОП / В / при 0 -часах культивирования./Окраска по Фельгену.
411. Рис. 7. Гистограммы распределения ФГА-стимулированных лимфоцитов человека по СОИ / А /, ИОП / Б / и двумерное распределение этих клеток по СОП и ИОП / В / при 48 72 часах культивирования. Окраска по Фельгену.
412. Рие. 8. §ГА -стимулированные лимфоциты 24 часовой культуры. Окраска толувдияовыи голубым / а,б/ ж родамином Б / в /. Ш,ув. об.ХШО.
413. ЯДК-ядрышко ,ШЗ перинуклеолярная зона, ЛКГШЗ - липидный компонент перинуклеолярной зоны, Ш1К - нуклеолярный липидный компонентв
414. Рис. 9. ФГА-стимулироваяные лимфоциты 48 часовой культуры. Окраска толуидиновым голубым / а,б,в / и импрегнация азотнокислым серебром /г/. МИ, у в. об. II00.
415. ДЦК ядрышко ,ПНЗ - перинуклеолярная зона,А<э - аргентофшгьные зоны ядрышка
416. Рис . 10. ФГА-стимулированные лимфоциты 48 часовой культуры. Окраска родамином Б.МИ,ув. еб.ИОО,
417. ШК нуклеолярный липидный компонент ,1КГПНЗ - липидный компонент границы перинуклеолярной зоны, РТ - радиальные тяжи.
418. Рис. II. Ag А/зоны в лимфоцитах периферической крови человека до /а/,после 6 часов /б/ и после 48 часов инкубации с ®?А. МЙ,ув.об. XI0Q.
419. ЯДК ядрышко ,Ag - аргентофильные зоны ядрышка
420. Рис. 12. ШГА-стимулированные лимфоциты периферической крови человека. 72 часовая культура»окраска толуидшовым голубым. №,ув.о<3. XI00.
421. ЯДК ~ ядрышко, ПНЗ перинуклеолярная зона, РТ - радиальные тяжи.1. J 'ЛЗШШЗ
422. Рис. 13. шистимулированные лимфоцита периферической крови человека. 72 часовая культура?, окраска родамином Б. Ш,ув. об. XIQ0.
423. ПК нуклеолярный липидный компонент ДКПШЗ - липидный компонент границы перинуклеолярной зоны, РТ - радиальныечасы
424. ПНЗ-тест в культурах при одновременном введении ФГА и актиномицина Д
425. Рис. 15. Динамика показателей,характеризующих нуклеолярный аппарат ФГА-стимулированных лимфоцитов в 0-72 часовых культурах1 процентное содержание клеток в Gj2 процентное содержание клеток в 53 НЛК-тест4 число Ад/+/зон в ядре5 нуклеолярный коэффициентш