Автореферат и диссертация по медицине (14.00.15) на тему:Морфофункциональная характеристика межнейрональных взаимоотношений в центральной нервной системе при экспериментальном воспроизведении лихорадки Западного Нила
- Ученая степень
- кандидата медицинских наук
- ВАК РФ
- 14.00.15
Автореферат диссертации по медицине на тему Морфофункциональная характеристика межнейрональных взаимоотношений в центральной нервной системе при экспериментальном воспроизведении лихорадки Западного Нила
На правах рукописи
2 7АВГ2цг
Глухов Владимир Александрович
МОРФОФУНКЦИОНАЛЬНАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА МЕЖНЕЙРОНАЛЬНЫХ ВЗАИМООТНОШЕНИЙ В ЦЕНТРАЛЬНОЙ НЕРВНОЙ СИСТЕМЕ ПРИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОМ ВОСПРОИЗВЕДЕНИИ ЛИХОРАДКИ ЗАПАДНОГО НИЛА
14.00.15 - патологическая анатомия
Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук
Волгоград - 2009
Работа выполнена в ГОУ В ПО «Волгоградский государственный медицинский университет Росздрава», ГУ «Волгоградский научный центр РАМН и Администрации Волгоградской области»
Научные руководители -
член-корреспондент РАМН, Заслуженный деятель науки РФ,
_доктор медицинских наук,_
профессор Писарев Вячеслав Борисович
доктор медицинских наук, доцент Смирнов Алексей Владимирович
Официальные оппоненты -
доктор медицинских наук, профессор Дерижанова Ирина Сергеевна; доктор медицинских наук, профессор Даниленко Виталий Иванович
Ведущая организация -
ГОУ ВПО «Саратовский государственный медицинский университет Росздрава»
Защита диссертации состоится 200^г. в [0_ часов на
заседании диссертационного совета Д 208.008.01 при ГОУ ВПО «Волгоградский государственный медицинский университет Росздрава» по адресу: 400131, г. Волгоград, пл. Павших Борцов, 1.
С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГОУ ВПО «Волгоградский государственный медицинский университет Росздрава».
Автореферат разослан «_ _» ^ОЬЧЬЛОШ^ 2009 года
Ученый секретарь диссертационного совета, доктор медицинских наук
Н.В.Григорьева
ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Актуальность проблемы
В настоящее время одной из актуальных медицинских проблем является лихорадка Западного Нила (JI3H), что обусловлено расширением ареала болезни, ростом заболеваемости среди населения в России, странах Европы, Азии, Африки, Северной Америки [Львов Д.К. с соавт., 2004; Crichlow R., Bailey J., 2004; Goody R.J., 2008; Siddharthan V., 2009]. Вспышки лихорадки Западного Нила протекают в большинстве случаев с развитием серозного менингоэнцефалита и охватывают в короткий срок значительные группы населения [Писарев В.Б. с соавт., 2004; Львов Д. К. с соавт., 2004; Шмидт М.В., 2006; Писарев В.Б., Бутенко А. М., 2007].
С 1999 года на территории Волгоградской области стали регистрироваться многочисленные случаи заболеваемости лихорадкой Западного Нила [Писарев В.Б. с соавт., 2004; Савченко С.Т., Лобанов А.Н., 2007]. В течение последних десяти лет антигены вируса Западного Нила регулярно обнаруживаются в пробах комаров и клещей [Львов Д.К., Бутенко A.M., 2007]. Актуальность изучения морфогенеза лихорадки Западного Нила на сегодняшний день связана также с развитием трансплантологии и гемо-трансфузиологии, в литературе описаны случаи манифестации западно-нильского энцефалита у больных с иммуносупрессорной терапией [Cush-¡ng М.М., 2004; Costa A.N., 2008; Allain J.P, Stramer S L., 2009].
При исследовании аутопсийного материала [Григорьева Н.В., 2005; Dai J., Wang P., 2008] обнаружены морфологические изменения в головном мозге, которые характеризовались очагами некроза с последующим формированием участков изоморфного и анизоморфного глиоза и образования кистозных полостей.
При экспериментальном моделировании лихорадки Западного Нила путём внутрибрюшинного заражения мышей [Белик Т.А., 2006; Шмидт М.В., 2006; Shrestha В., 2003; Verma S., Lo Y., 2009] в различных отделах головного мозга на светооптическом уровне обнаружены выраженные дис-
трофические изменения в нейронах и глиальных клетках, наблюдалось повреждение гематоэнцефалического барьера с увеличением его проницаемости, что вело к появлению вторичных изменений во всех структурах головного мозга. Считается, что модель подкожного инфицирования вирусом Западного Нила более приближена к природному заражению [Nemeth N.M., 2006; Allain J.P., 2009]. Несмотря на накопленный материал по данной проблеме, многие вопросы этиологии, патогенеза, выраженности мор-фофункциональных изменений в различных отделах ЦНС при подкожном инфицировании вирусом Западного Нила остаются малоизученными.
Цель исследования
Охарактеризовать закономерности морфофункциональных изменений в нейронах различных отделов ЦНС при экспериментальном воспроизведении лихорадки Западного Нила.
Задачи исследования
1. Выявить на основе морфологического скринингого анализа области ЦНС с наиболее выраженными изменениями в различные периоды лихорадки Западного Нила на модели подкожного инфицирования.
2. Изучить особенности морфологических изменений нейронов головного мозга мышей при подкожном заражении вирусом Западного Нила в различные периоды инфекционного процесса.
3. Охарактеризовать структурные изменения в нейронах спинного мозга мышей в различные периоды лихорадки Западного Нила на модели подкожного инфицирования.
4. Определить особенности морфологических изменений в центральной нервной системе в зависимости от исходов лихорадки Западного Нила на модели подкожного заражения.
Научная новизна исследования
Дана комплексная структурно-функциональная характеристика изменений в нейронах различных отделов ЦНС с учётом периода лихорадки Западного Нила на модели подкожного заражения.
Впервые охарактеризованы ультраструктурные особенности и дана морфометрическая характеристика нейронов коры полушарий большого мозга, гипоталамуса, продолговатого и спинного мозга мышей при экспериментальном воспроизведении лихорадки Западного Нила на модели подкожного инфицирования вирусом Западного Нила (штамм Астр 901).
Установлены морфологические изменения в спинном мозге в зависимости от исхода лихорадки Западного Нила на модели подкожного заражения, проявлявшиеся у умерших животных выраженными обратимыми и необратимыми изменениями в нейронах на фоне нарушения кровообращения и наличия признаков серозного или серозно-геморрагического воспаления; в группе заболевших животных, выведенных из эксперимента на 14 сутки, отмечено наличие в крупных нейронах вакуолизация цитоплазмы периферических отделов перикариона при явлениях периваскулярного отёка.
Научно-практическая значимость
На основании данных патоморфологического исследования различных отделов центральной нервной системы животных дана характеристика морфологических изменений при лихорадке Западного Нила. Полученные данные позволяют расширить имеющиеся представления о морфогенезе заболевания и причинах летальных исходов и могут быть использованы в клинической и патологоанатомической практике для своевременной диагностики, прогноза и разработки новых методов лечения, а также профилактики лихорадки Западного Нила.
Основные положения, выносимые на защиту
1. При экспериментальном воспроизведении лихорадки Западного Нила на модели подкожного инфицирования выраженность морфологических изменений в центральной нервной системе носила стадийный характер и соответствовала периодам инфекционного процесса.
2. При экспериментальном моделировании лихорадки Западного Нила наиболее выраженные обратимые и необратимые изменения обнаружены в продолговатом мозге, характеризовались наличием ультраструктурных признаков повреждения в перикарионах нейронов и миелиновых нервных волокнах, начиная со 2 суток экспериментального заражения вирусом Западного Нила (штамм Астр 901).
3. У животных с клиникой лихорадки Западного Нила выраженные структурные изменения обнаружены в нейронах передних и боковых рогов спинного мозга, что сопровождалось вакуолизацией цитоплазмы перика-рионов, повреждением митохондрий с очаговым лизисом крист, нараставшим по мере прогрессирования заболевания, а так же признаками повреждения миелиновых нервных волокон наиболее выраженными в передних и боковых канатиках.
Апробация работы и публикации
Основные результаты диссертационного исследования докладывались и обсуждались на III конференции «Гомеостаз и эндоэкология» (Хур-гада, 2005); на Пироговской студенческой научной конференции (Москва, 2006); II Съезде Российского общества патологоанатомов (Москва, 2006); на Всероссийской научно-практической конференции: «Арбовирусы и ар-бовирусные инфекции» (Астрахань, 2006); 63-64 открытых научно-практических конференциях молодых ученых и студентов Волгоградского государственного медицинского университета (Волгоград, 2005, 2006); XI региональной конференции молодых исследователей (Волгоград, 2006); 66 открытой научно-практической конференции молодых ученых и студентов с международным участием: «Актуальные проблемы экспериментальной и
клинической медицины» (Волгоград, 2008); III Съезде Российского общества патологоанатомов (Самара, 2009).
Апробация работы осуществлена на совместном заседании кафедр патологической анатомии, гистологии, цитологии и эмбриологии, анатомии человека, судебной медицины ГОУ ВПО «Волгоградский государственный медицинский университет Росздрава» 2 июня 2008 года.
По теме диссертации опубликовано 13 научных работ, из них три - в журналах перечня изданий, рекомендованных ВАК РФ дня публикации результатов кандидатских диссертаций.
Реализация и внедрение результатов исследования
Работа выполнена на кафедре патологической анатомии (заведующий кафедрой, д.м.н., доцент A.B. Смирнов) ГОУ ВПО «Волгоградский государственный медицинский университет Росздрава» (ректор - академик РАМН В.И. Петров) и ГУ «Волгоградский научный центр РАМН и Администрации Волгоградской области» (дфсхгср - акадских PANfl IBJL Петров).
Полученные данные по патоморфологическим изменениям в центральной нервной системе при моделировании лихорадки Западного Нила используются в диагностической работе патологоанатомических отделений Волгоградского областного патологоанатомического бюро. Результаты данного исследования внедрены в учебный процесс на кафедре патологической анатомии ГОУ ВПО «Волгоградский государственный медицинский университет Росздрава» и лаборатории морфологии и иммуногисто-химии ГУ «Волгоградский научный центр РАМН и Администрации Волгоградской области».
Объем и структура диссертации
Диссертация изложена на 123 страницах машинописного текста, состоит из введения, четырёх глав (обзора литературы -1, материал и методы исследования - 2, результаты собственных исследований - 3, обсуждение полученных результатов - 4), выводов, практических рекомендаций и списка литературы, включающего 187 источников, в том числе 83 отечественных и 105 зарубежных. Работа содержит 10 таблиц, иллюстрирована 51 рисунком (41 микрофотография и 10 диаграмм).
s
МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
Экспериментальные исследования проводили в условиях лаборатории биологии и индикации арбовирусов НИИ вирусологии им. Д.И. Ивановского РАМН (заведующий лабораторией профессор А.М. Бутенко).
В работе использовали белых мышей-самцов массой 10±2 г в возрасте 30 суток, которые были заражены вирусом Западного Нила (ЗН), астраханский штамм (Астр 901) подкожно в разведении 10"2 0,3 мл (50 животных).
Весь экспериментальный материал был разделен на 6 групп: 1 группа - контрольные ложноинфицированные животные, которым подкожно вводили 0,3 мл 0,9% раствора хлорида натрия (10 животных); 2 группа -животные, инфицированные вирусом Западного Нила и выведенные из эксперимента на 2 сутки (инкубационный период -10 животных); 3 группа - животные с клиникой лихорадки Западного Нила, выведенные из эксперимента на 7 сутки (период разгара -10 животных); 4 группа - животные, с клиникой лихорадки Западного Нила, умершие в период с 6 по 9 сутки (6 животных); 5 группа - животные с клиникой лихорадки Западного Нила, выведенные из эксперимента на 14 сутки (период реконвалесценции -10 животных); 6 группа - животные, инфицированные вирусом Западного Нила, у которых не отмечалось клинической симптоматики заболевания, выведенные из эксперимента на 14 сутки (4 животных).
После заражения мыши содержались в стандартных лабораторных условиях, с обычным режимом кормления, движения, освещения. При уходе за животными, питании и проведении экспериментов руководствовались базисными нормативными документами: Приказом МЗ №750, Рекомендациями комитета по экспериментальной работе с использованием животных при Минздраве России, рекомендациями ВОЗ [Шалимов С.А., с соавт., 1988; Березовская И.В., 1993; Абидов М.Т., 1996; Червонская Г.П., с соавт., 1998; Zutphen L.F., 1993]. Животных забивали в различные периоды заболевания под эфирным наркозом в соответствии с «Правилами проведения работ с использованием экспериментальных животных».
Образцы головного и спинного мозга фиксировали в нейтральном забуференном 10% формалине с дальнейшим обезвоживанием в батарее спиртов и изготовлением парафиновых срезов толщиной 4-6 мкм, которые окрашивали по стандартным методикам гематоксилином и эозином, тио-нином по методу Ниссля [Лилли Р., 1969; Меркулов Г.А., 1969; Саркисов Д.С., Перов Ю.Л., 1996].
Иммуногистохимическое исследование с целью определения экспрессии антигенов вируса Западного Нила проводили с использованием моноклональных антител предоставленных лабораторией биологии и индикации арбовирусов НИИ вирусологии им. Д.И.Ивановского РАМН. Визуализацию проводили с помощью непрямого иммунопероксидазного метода с высокотемпературной демаскировкой антигенов [Петров C.B., Рай-хлин Н.Т., 2000; Григорьева Н.В., 2005; Велик Т.А., 2006].
Микрофотосъемку гистологических препаратов проводили на микроскопе «Micros» (Austria) цифровой фотокамерой «Olympus» (Japan).
Фиксацию кусочков головного и спинного мозга для электронно-микроскопического исследования размером до 1 ммЗ проводили в течение 12 часов в 4 % растворе параформа на 0,1 M какодилатном буфере с последующей постфиксацией в течение 2 часов в 1 % растворе тетраокиси осмия на 0,1 M какодилатном буфере (pH = 7,4) при температуре +4 С0. После промывки в нескольких порциях раствора какодилатного буфера материал подвергали дегидратации в спиртах возрастающей концентрации и заливали в смесь эпона и аралдита. Ультратонкие срезы толщиной 50-90 нм получали на ультрамикротоме LKB-8800 и монтировали на медные сетки. После контрастирования в 2,5%-м растворе уранилацетата на 50° этаноле в течение 40 минут и 0,3%-м растворе цитрата свинца в течение 20 минут срезы изучались в электронном микроскопе Tesla BS-500 при ускоряющем напряжении 60 кВ. Фотодокументирование проводили с использованием фотопластинок «Для ядерных исследований». Электронные микрофотограммы изготавливали на фотографической черно-белой бумаге «Унибром 160 БП».
На фронтальных срезах головного и спинного мозга с помощью системы анализа изображений, программы «Ввдеотест-Морфо-4» (Россия) определяли следующие морфометрические показатели: удельная площадь перикарионов нейронов и нейропиля, площадь перикарионов нейронов, их ядер и цитоплазмы, рассчитывали отношение удельной площади перикарионов нейронов к нейропилю, ядерно-цитоплазматическое отношение.
Вариационно-статистическую обработку данных (вычисление средней арифметической величины, среднего квадратичного отклонения, доверительный интервал, коэффициент вариации, дисперсию, ошибку репрезентативности для каждого параметра в исследуемых группах животных, сравнение средних значений по критерию Стьюдента) проводили на ЭВМ 1ВМ-11йе1-Се1егоп-2400 с использованием программы 8ТАТ18Т1СА 6.0. Значимыми считали различия, если вероятность ошибки Р была меньше 0,05. При проведении регрессионного анализа рассчитывали коэффициент корреляции для нормальных распределений [Гланц С., 1999].
РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
При моделировании лихорадки Западного Нила (ЛЗН) путём подкожного введения вируса Западного Нила белым беспородным мышам, начиная с 5-6 суток, обнаруживались клинические симптомы заболевания. Отмечалась гипертермия, снижение аппетита, парезы и параличи конечностей, у части животных наблюдались подёргивания и судороги некоторых мышц. В тяжёлых случаях отмечено нарастание общемозговой симптоматики, развитие глубокой мозговой комы. Летальность с 6 по 9 сутки заболевания составила 15%. У выживших животных к 10 - 14 суткам отмечалось постепенное снижение выраженности клинической симптоматики ЛЗН.
На вторые сутки эксперимента у животных не наблюдались клинические проявления ЛЗН, поэтому данный срок эксперимента рассматривался как инкубационный период заболевания. При морфологическом исследовании нейронов различных отделов головного мозга наблюдались
признаки перицеллюлярного отёка, отмечалось умеренное набухание перикарионов нейронов с появлением гиперхроматоза в отдельных нейронах коры полушарий большого мозга в лобной и теменной долях. При исследовании белого вещества наблюдались слабовыраженные неспецифические изменения в виде умеренного перицеллюлярного отёка и очагового полнокровия сосудов микроциркуляторного русла.
При морфологическом исследовании нейронов различных отделов спинного мозга на вторые сутки эксперимента отмечались умеренное набухание перикарионов части нейронов, явления слабовыраженного перицеллюлярного и периваскулярного отёка, признаки гиперхроматоза в отдельных нейронах преимущественно в передних и боковых рогах спинного мозга.
У заболевших животных на седьмые сутки эксперимента с клиническими проявлениями лихорадки Западного Нила (период разгара) в различных отделах головного мозга наблюдался выраженный перицеллюляр-ный отёк. Выявлялись признаки экссудативного (серозного, а в некоторых случаях серозно-геморрагического) и продуктивного воспаления. В цитоплазме перикарионов части пирамидных нейронов V слоя лобных долей полушарий большого мозга (прецентральная извилина) при окраске по методу Ниссля отмечались явления выраженного гиперхроматоза, что сопровождалось сморщиванием нейронов, появлением признаков кариопикноза, кариорексиса и кариолизиса. В других нейронах обнаруживались признаки набухания и вакуолизации цитоплазмы. В просвете третьего желудочка в ряде случаев наблюдался геморрагический экссудат. При исследовании промежуточного мозга изменения встречались в нейронах гипоталамуса в виде обратимых и необратимых изменений.
В перикарионах нейронов латеральной гипоталамической области при электронно-микроскопическом исследовании выявлены признаки внутриклеточного отёка, вакуолизации, признаки повреждения митохондрий, что свидетельствует о нарушении энергетического обмена. Отмечено относительное уменьшение количества цистерн гранулярной эндоплазма-тической сети, появление вакуолей различных размеров с содержимым
низкой электронной плотности, представляющих собой резко расширенные цистерны гранулярной и агранулярной эндоплазматической сети. Обнаруживались в значительном количестве свободные рибосомы. В ядрах отдельных нейронов отмечались скопления конденсированного хроматина в периферических отделах. Отмечались менее выраженные неспецифические ультраструктурные изменения в миелиновых и безмиелиновых нервных волокнах.
В ядрах нейронов ствола головного мозга встречались интенсивно базофильные включения, располагавшиеся свободно и ассоциированные с ядрышком. Обнаруживались выраженные нарушения кровообращения в сосудах микроциркуляторного русла, явления перивасхулярного отёка, серозного экссудата в белом и сером веществе, очаги плазматического пропитывания. В единичных случаях отмечались кровоизлияния диапедезного характера, что свидетельствует о развитии серозно-геморрагического воспаления.
При электронно-микроскопическом исследовании продолговатого мозга заболевших животных (7 сутки эксперимента) в нейронах выявлялась вакуолизация цитоплазмы перикарионов, более выраженная в вентро-латеральных отделах. Отмечались признаки повреждения митохондрий в перикарионах и аксонах нейронов в виде набухания и очагового лизиса крист. В нейронах часто выявлялась гипертрофия и изменение очертания ядрышек, которые приобретали неправильную форму с преобладанием гранулярного компонента. В ядрах отдельных нейронов отмечались явления кариопикноза и кариорексиса. В миелиновых нервных волокнах наблюдалась вакуолизация аксоплазмы различной степени. Встречались аксоны с многочисленными везикулами различного диаметра, ограниченные одной мембраной с содержимым низкой электронной плотности. В некоторых аксонах данные везикулы практически полностью занимали аксо-плазму. В более сохранных аксонах в центральных отделах обнаруживались митохондрии округлой формы с ламинарными кристами, а также мелкие везикулы с содержимым умеренной электронной плотности. Мие-
линовая оболочка в части волокон была разрыхлена, отмечалось увеличение расстояния между ламеллами.
При иммуногистохимическом исследовании ЦНС заболевших животных определялась выраженная экспрессия антигенов вируса ЗН в нейронах ствола головного мозга, эндотелии капилляров мозга и сосудов мягкой мозговой оболочки.
Согласно литературным данным [Писарев В.Б., Григорьева Н.В., 2005, Велик Т.А., 2006; Шмидт М.В., 2006; Johnson S., Diamond M.S., 2008] на модели внутрибрюшного заражения морфологические изменения на светоогггаческом уровне наблюдались в коре головного мозга, продолговатом мозге, гипоталамусе и мозжечке в виде выраженных дистрофических изменений. Результаты нашего исследования, проводимые на модели подкожного инфицирования, выявили наибольшие изменения в головном мозге в гипоталамусе и продолговатом мозге, что, в целом, свидетельствует об адекватности используемой модели.
У заболевших животных на седьмые сутки эксперимента от момента инфицирования с клиническими проявлениями лихорадки Западного Нила в различных отделах спинного мозга наблюдался выраженный перицеллю-лярный отёк. В цитоплазме перикарионов нейронов передних и боковых рогов спинного мозга при окраске по методу Ниссля отмечались явления выраженного хроматолиза. Выявлялись признаки гидропической дистрофии. В ядрах отдельных нейронов наблюдались явления кариорексиса и кариолизиса. Часть нейронов характеризовалась грубыми нарушениями структуры ядра. Встречались ядра, которые содержали конденсированный гетерохроматин по периферии в виде полулуний, при сохранной ядерной оболочке. Обнаруживались выраженные изменения со стороны сосудов микроциркуляторного русла, явления периваскулярного отёка, глиоз, очаговые кровоизлияния диапедезного характера.
При электронно-микроскопическом исследовании нейронов передних и боковых рогов спинного мозга заболевших животных (7 сутки эксперимента) в перикарионах наблюдались признаки внутриклеточного отёка, в цитоплазме обнаруживались в значительном количестве свобод-
ные рибосомы, выявлялись вакуоли различных размеров с содержимым низкой электронной плотности. Выявлялись митохондрии различных размеров с признаками набухания, кристы которых были частично сохранены. Обнаруживалось увеличение содержания гетерохроматнна, встречались гипертрофированные ядрышки неправильной формы.
В белом веществе в миелиновых волокнах наблюдались признаки вакуолизации аксоплазмы более выраженные в передних и боковых канатиках. В некоторых аксонах вакуолизация захватывала большую часть аксоплазмы. В более сохранных аксонах в центральных отделах обнаруживались митохондрии со слабовыраженными дистрофическими изменениями, а также мелкие везикулы с содержимым умеренной электронной плотности. Отмечалось разрыхление и деструкция миелиновой оболочки в значительной части нервных волокон.
Обнаруженные нами выраженные ультраструктурные изменения в спинном мозге косвенно подтверждаются данными о наличии признаков повреждения в моторных нейронах передних рогов спинного мозга, полученных на других моделях JI3H [Nemeth N.M., Hahn D.C., 2006; Goody R.J., Schittone S.A., 2008].
У животных, умерших в период с 6 по 9 сутки в период разгара заболевания, в головном и спинном мозге, в мозговых оболочках наблюдались более выраженные признаки серозного или серозно-геморрагического воспаления, чем у животных забитых на 7 сутки эксперимента с клиникой лихорадки Западного Нила (3 ipynna), а также обратимые и необратимые изменения на фоне выраженных нарушений кровообращения и реактивных изменений со стороны глиальных элементов. Отмечались признаки сероз-но-геморрагического воспаления в оболочках и веществе спинного мозга (в 71,4% случаев признаки серозного воспаления, в 28,6% - серозно-геморрагического). В стволе головного мозга обнаруживались очаги некроза. При окраске по методу Ниссля в нейронах коры большого мозга отмечались явления выраженного хроматолиза. Обнаруживались выраженные изменения со стороны сосудов микроциркуляторного русла, явления
периваскулярного отёка, глиоз, очаговые кровоизлияния диапедезного характера.
У заболевших животных, выведенных из эксперимента на 14 сутки (период реконвалесценции), в головном и спинном мозге выявлялись сла-бовыраженные признаки периваскулярного и перицеллюлярного отёка, наличие в отдельных нейронах вакуолизации цитоплазмы перикарионов. В стволе головного мозга, спинном мозге, мозговых оболочках отмечалась периваскулярная лимфоидная инфильтрация различной выраженности и очаговая пролиферация эндотелия сосудов микроциркуляторного русла.
В группе животных, инфицированных вирусом Западного Нила, у которых не отмечалось клинической симптоматики заболевания, выведенных из эксперимента на 14 сутки, в нейронах головного и спинного мозга наблюдались признаки обратимых нарушений в перикарионах нейронов в виде умеренных гидропической дистрофии, обнаруживались явления перицеллюлярного и периваскулярного отёка.
При морфометрическом исследовании продолговатого мозга отмечалось увеличение средней площади перикарионов нейронов, начиная со 2 суток на 33,7 % (при Р<0,001), на 7 сутки - на 38,2 % (при Р<0,001), а на 14 сутки - на 13,3% по отношению с контролем (табл. 1).
При стереометрическом исследовании продолговатого мозга отмечалось уменьшение удельной площади перикарионов нейронов на 7 сутки на 7,1 % (при Р<0,001), а на 14 сутки - на 6,2 % (при Р<0,001) по сравнению с контролем.
При морфометрическом исследовании нейронов спинного мозга в боковых рогах значимое увеличение площади перикарионов нейронов наблюдалось на 7 сутки на 66,4% (при Р<0,001), на 14 сутки - на 10,6% (при Р<0,001) по сравнению с контролем (табл. 2).
При стереометрическом исследовании нейронов боковых рогов спинного мозга отмечалось уменьшение удельной площади перикарионов нейронов начиная с 7 суток на 6,0 % (при Р<0,001), а к 14 суткам наблюдалось уменьшение на 6,5 % (при Р<0,001) по сравнению с контролем.
Таблица 1
Изменение морфометрическнх параметров нейронов продолговатого мозга в различные периоды ЛЗН
Морфометриче-скне параметры 1 группа (контроль, ложноин-фицирован-вые) 2 группа (2 сутки эксперимент, инкубационный период) 3 группа (7 сутки эксперимента, период разгара) 4 группа (14 сутки эксперимента, период ре-конвалесцен-ции)
Средняя площадь пернкарио-на нейрона, мкм2 276,86 ±21,78 369,08** ±32,80 380,76** ±4,73 312,74 ±9,98
Средняя площадь ядра нейрона, мкм2 83,759 ±8,44 120,07** ±10,86 145,52*** ±2,13 134,59* ±4,52
Средняя площадь цитоплазмы пернкариона нейрона, мкм2 193,10 ±14,5 249,01** ±2334 25330*** ±3,09 198,01 ±9,55
Ядерно-цитоплаз-матнческое отношение, число 0,43 ±0,02 0,54 ±0,03 0,41 ±0,02 0,54 ±0,09
Здесь и далее: * - р<0,05, ** - р<0,01, *** - р<0,001 по сравнению с контролем.
При проведении регрессионного анализа динамики изменений площади перикарионов нейронов, их ядер и цитоплазмы в латеральном ретикулярном ядре продолговатого мозга обнаружены статистически значимые прямые корреляционные связи между изменениями средней площади перикарионов нейронов и средней площади их ядер (г=0,91,при Р > 0,05), в боковых рогах спинного мозга а также - между динамикой изменения средней площади перикарионов нейронов и средней площади их ядер (г=0,99,при Р > 0,05) в ходе эксперимента.
При изучении лихорадки Западного Нила на животных моделях летальность составляет от 30 до 40% [Огег N.. 2006], а в человеческой популяции - 1,0-10% [Баринский И.Ф., Алимбарова Л.М., 2006; Львов Д.Н. с соавт., 2008]. В нашем исследовании при моделировании лихорадки Западного Нила путём подкожного инфицирования летальность экспериментальных животных составила 15,0 %, что, по-видимому, свидетельствует о
Таблица 2
Изменение морфометрическнх параметров нейронов боковых рогов спинного мозга в различные периоды ЛЗН
Морфометрнче- 1 группа 2 группа 3 группа 4 группа
ские параметры (контроль, (2 сутки экспе- (7 сутки экс- (14 сутки
ложноннфици- римент, инку- перимента, эксперимента,
рованные) бационный пе- период разга- период ре-
риод) ра) конвалесцен-
ции)
Средняя пло- 112,76 112,85 186,37 *** 123,91
щадь перикарио- ±7,31 ±10,9 ±14,3 ±5,91
на нейрона, мкм2
Средняя пло- 33,81 34,37 52,43* 34,50
щадь ядра ней- ±3,00 ±3,74 ±8,00 ±3,66
рона, мкм2
Средняя пло- 78,10 78,15 133,9*** 89,41
щадь цитоплаз- ±4,62 ±5,59 ±8,04 ±5,63
мы перикариона
нейрона, мхм1
Ядерно- 0,46 0,40 0,60 0,50
цито плаз- ±0,02 ±0,04 ±0,04 ±0,04
матическое
отношение, число
большей адекватности данного способа моделирования.
Обнаруженные нами структурные изменения в различных отделах центральной нервной системы при экспериментальном моделировании ЛЗН путем подкожного заражения свидетельствуют о возникновении наиболее выраженных обратимых и необратимых изменений в нейронах спинного и продолговатого мозга у животных с клиникой ЛЗН, умерших с 6 по 9 сутки заболевания (4 группа), а также у животных с клиникой ЛЗН, выведенных из эксперимента на 7 сутки заболевания (3 группа). Результаты нашего исследования согласуются с данными о возможности распространения ВЗН путём ортоградного и ретроградного аксонального транспорта внутри ЦНС [Samuel М.А. et al., 2007]. С другой стороны, обнаруженные улыраструктурные изменения в нейронах сочетаются с признаками повреждения гематонейронального и гематоликворного барьеров в различных отделах ЦНС, что подтверждается данными о повреждении гема-
тоэнцефалического барьера мышей при внутрибрюшинном инфицировании вирусом Западного Нила [Шмидт М.В., 2006]. Наличие серозно-геморрагического экссудата в головном и спинном мозге рассматривается нами как один из вариантов воспалительных реакций при ЛЗН, что согласуется с результатами С. СапШе [СапШе С., 2000], продемонстрировавшими геморрагический характер воспалительного процесса в спинном мозге при моделировании ЛЗН на мышах. Кроме того, отмеченное уменьшение выраженности воспалительных изменений и признаков повреждения нейронов головного мозга в восходящем направлении косвенно подтверждается данными о наличии наиболее выраженных структурных изменений в продолговатом мозге, полученными на модели внутрибрюшинного заражения [Велик Т.А., 2006].
Таким образом, при экспериментальном моделировании лихорадки Западного Нила обнаружены выраженные структурные изменения в нейронах ЦНС в различные периоды лихорадки Западного Нила, сопровождавшиеся развитием воспалительной реакции.
ВЫВОДЫ
1. На основании скринингового морфологического анализа при подкожном моделировании лихорадки Западного Нила выявляются структурные изменения различных отделов центральной нервной системы с признаками серозного и серозно-геморрагического энцефаломиелита, наиболее выраженными в период разгара заболевания.
2. Наиболее выраженные морфологические изменения в головном мозге при экспериментальном воспроизведении лихорадки Западного Нила наблюдаются в гипоталамусе и продолговатом мозге, а в спинном мозге -в шейно-грудных сегментах, соответствуют периоду развёрнутых клинических проявлений заболевания (7 сутки), сопровождаются развитием парезов и параличей, что обусловлено, по-видимому, особенностями нейро-тропного и эндотелиотропного действия вируса Западного Нила.
3. При исследовании продолговатого мозга в различные периоды лихорадки Западного Нила обнаруживаются ультраструюурные изменения в нейронах, проявляющиеся вакуолизацией цитоплазмы перикарионов, повреждением митохондрий с очаговым лизисом крист, нарастающими по мере прогрессирования заболевания, начиная со 2 суток эксперимента (инкубационный период). Наиболее выраженные структурные изменения наблюдаются в нейронах латеральных ретикулярных ядер, в которых отмечается значимое увеличение площади перикарионов нейронов на 2 сутки на 33,3 % (при Р<0,001), на 7сутки - на 38,0 % (при Р<0,001) по сравнению с контролем.
4. В период разгара лихорадки Западного Нила в спинном мозге отмечены явления хроматолиза и гидропической дистрофии в перикарионах и отростках нейронов передних и боковых рогов в сочетании с ультраструктурными изменениями в миелиновых нервных волокнах, периваску-лярным отёком, появлением серозно-геморрагического экссудата, пери-васкулярной лимфоидной инфильтрации и другими признаками, свидетельствующими о повреждении гематонейронального барьера. В нейронах боковых рогов спинного мозга наблюдается максимально выраженное
увеличение площади перикарионов нейронов к 7 суткам на 66,8% (при Р<0,001) по сравнению с кошролем.
5. При морфометрическом исследовании нейронов различных отделов ЦНС при экспериментальном воспроизведении лихорадки Западного Нила обнаруживаются значимые прямые корреляционные связи (г=0,92,при Р< 0,05) между динамикой изменения средней площади перикарионов нейронов латерального ретикулярного ядра продолговатого мозга н нейронов боковых рогов спинного мозга. Выявляются обратные корреляционные связи при сопоставлении динамики изменения средней площади перикарионов нейронов и их удельной площади в вентральных отделах продолговатого мозга (г= -0,97, при Р< 0,05) и боковых рогах спинного мозга (г= -0,87, при Р< 0,05) при прогрессирующем снижении удельной площади перикарионов нейронов в латеральном ретикулярном ядре в 2,1 раза к 14 суткам (при Р<0,001), что свидетельствует о наличии выраженных однонаправленных структурных изменений в различных отделах ЦНС, обеспечивающих контроль кардиореспираторных функций в различные периоды заболевания.
6. При сравнительном морфологическом анализе в группе умерших в ходе эксперимента животных в период разгара лихорадки Западного Нила в спинном мозге обнаруживаются в 71,4% случаев признаки серозного, а в 28,6% - серозно-геморрагического воспаления. В перикарионах нейронов встречаются признаки выраженных обратимых и необратимых изменений преимущественно в передних рогах спинного мозга на фоне выраженных нарушений кровообращения и реактивных изменений со стороны глиаль-ных элементов. У заболевших животных, выведенных из эксперимента на 14 сутки (период реконвалесценции) в спинном мозге выявляются слабо-выраженные признаки периваскулярного отёка, наличие в отдельных нейронах вакуолизации цитоплазмы перикарионов, отмечается периваскуляр-ная лимфоидная инфильтрация и пролиферация эндотелия сосудов микро-цирхуляторного русла.
ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ
Полученные данные о морфофункциональных изменениях в различных отделах центральной нервной системы можно использовать в учебном процессе для преподавания патологической анатомии в высших медицинских заведениях. Результаты ультраструкгурного исследования нейронов различных отделов ЦНС могут быть использованы при проведении научно-исследовательских работ при моделировании арбовирусных инфекций.
СПИСОК НАУЧНЫХ ТРУДОВ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ
1. Морфологическая характеристика нейронов и сосудов микроцир-куляторного русла некоторых отделов продолговатого мозга при экспериментальном воспроизведении лихорадки Западного Нила // Материалы 63-й итоговой науч. конф. студентов и мол. ученых ВолГМУ,- Волгоград, 2005. -С. 126-128. (соавт. Шмидт М.В.).
2. Морфологические изменения нейронов в области дна IV желудочка продолговатого мозга при экспериментальном моделировании ВЛЗН у мышей // Морфология процессов индивидуального развития, адаптации и компенсации: Труды ВолГМУ .-Волгоград, 2005г.-Т. 62, выпуск 1.-С. 60-63.
3. Морфологическая характеристика заднего ядра блуждающего нерва при экспериментальном воспроизведении Лихорадки западного Нила // Фундаментальные исследования - Москва, 2005.- №2,- С. 32. (соавт. Писарев В.Б., Шмидт М.В.).
4. Морфологическая характеристика некоторых ядер продолговатого мозга при моделировании Лихорадки западного Нила // Современные наукоёмкие технологии.- Москва, 2006.-№ 2.- С.34. (соавт. Смирнов A.B., Беляков М.М.).
5. Морфологические изменения в головном мозге и в лёгких мышей при экспериментальном моделировании лихорадки Западного Нила // XI региональная конференция молодых исследователей Волгоградской области." Волгоград, 2006,- С. 8-9. (соавт. Быхалов Л.С.).
6. Ультраструктурная характеристика нейронов и элементов гемато-эицефалического барьера продолговатого мозга при моделировании вирусного энцефалита // Бюллетень Волгоградского научного центра РАМН и Администрации Волгоградской области.- 2006. - №3.-С.11-13. (соавт. Писарев В.Б., Смирнов A.B., Почепцов АЛ., Шмидт М.В.).
7. Морфологические изменения в головном мозге и в лёгких мышей при экспериментальном моделировании лихорадки Западного Нила // Бюллетень Волгоградского научного центра РАМН и Администрации Волгоградской области.- 2006 - №4.-С.200. (соавт. Писарев В .Б., Смирнов A.B., Шмидт М.В., Быхалов Л.С.).
8. Морфологические изменения в головном мозге и в лёгких мышей при экспериментальном моделировании лихорадки Западного Нила // Астраханский медицинский журнал. -2007.-№2. -С. 148. (соавт. Писарев В.Б., Смирнов A.B., Быхалов Л.С.).
9. Ультраструктурная изменения в нейронах головного мозга при экспериментальном воспроизведении лихорадки Западного Нила // Бюллетень Волгоградского научного центра РАМН и Администрации Волгоградской области,- 2008.- №1.-С.21-24. (соавт. Писарев В.Б., Бутенко А.М. Смирнов A.B., Хуторецкая Н.В. Почепцов АЛ., Шмидт М.В.).
10. Структурные изменения в продолговатом мозгу и лёгких мышей при подкожном введении возбудителя лихорадки Западного Нила // Морфология.-2008.-№2.-С.107. (соавт. Писарев В.Б., Бутенко А.М. Смирнов A.B., Хуторецкая Н.В., Ларичев В.Ф., Шмидт М.В., Быхалов Л.С., Кириченко Л.С.).
11. Морфологические изменения в сосудах микроциркуляторно-го русла в головном мозгу и лёгких мышей при моделировании лихорадки Западного Нила // Морфология. - 2008.-№4.-С.88. (соавт. Писарев В.Б., Бутенко А.М. Смирнов A.B., Хуторецкая Н.В., Шмидт М.В., Быхалов Л.С., Кириченко Л.Н.).
12. Ультраструктурные изменения в нейронах гипоталамуса при экспериментальном воспроизведении лихорадки Западного Нила // Актуальные проблемы экспериментальной и клинической медицины: Материалы
66-открытой итоговой научно-практической конференции молодых ученых и студентов с международным участием. - Волгоград,-2008.-С. 200201. (соавт. Глубокая Е.И.).
13. Структурные изменения в нейронах гипоталамуса при экспериментальном воспроизведении лихорадки Западного Нила // Вестник Волгоградского гос. мед. ун-та.-2009.-№2(30)-С. 74-76. (Журнал перечня ВАК), (соавт. Смирнов А.В., Шмидт М.В., Бутенко А.М., Ху-торецкая Н.В., Ларичев В.Ф.).
Подписано в печать 03.06.09. г. Формат 60X84/16. Бумага, офс. Печать офс. Усл. печ. л. 1,0 Тираж 100 экз. Заказ М 210 400131 г. Волгоград, Пл. Павших борцов, 1. Волгоградский государственный медицинский университет
Оглавление диссертации Глухов, Владимир Александрович :: 2009 :: Волгоград
ВВЕДЕНИЕ.
Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.
1.1. Эпидемиологические и этиологические аспекты лихорадки Западного Нила.
1.2 Структурные механизмы поражения ЦНС при вирусных инфекциях.
1.3 Структурные изменения центральной нервной системе при арбовирусных инфекциях
Глава 2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.
2.1 .Методика постановки эксперимента.
2.2.Методы исследования.
Глава 3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ.
3.1 Морфологическая характеристика нейронов различных отделов ЦНС мышей, инфицированных вирусом Западного Нила и выведенных из эксперимента на 2 сутки Нила.
3.2 Морфологическая характеристика нейронов различных отделов ЦНС животных с клиникой лихорадки Западного Нила, выведенных из эксперимента на 7 сутки.
3.3 Морфологические изменения в легких мышей с клиникой лихорадки Западного Нила, выведенных из эксперимента на 14 сутки.
3.4 Морфологическая характеристика нейронов различных отделов головного и спинного мозга животных, выведенных из эксперимента на 14 сутки (период реконвалесценции).
3.5 Морфологическая характеристика нейронов различных отделов головного и спинного мозга животных, выведенных из эксперимента на 14 сутки (период реконвалесценции).
3.6 Количественная морфологическая характеристика нейронов различных отделов ЦНС животных, инфицированных вирусом ЗН
Введение диссертации по теме "Патологическая анатомия", Глухов, Владимир Александрович, автореферат
Актуальность проблемы
В настоящее время одной из актуальных медицинских проблем является лихорадка Западного Нила (JI3H), что обусловлено расширением ареала болезни, ростом заболеваемости среди населения в России, странах Европы, Азии, Африки, Северной Америки [Львов Д.К. с соавт., 2004; Crichlow R., Bailey J. et al., 2004; Goody R.J. et al., 2008; Siddharthan V. et al., 2009]. Вспышки лихорадки Западного Нила протекают в большинстве случаев с развитием серозного менингоэнцефалита и охватывают в короткий срок значительные группы населения [Писарев В.Б. с соавт., 2004; Львов Д. К. с соавт., 2004; Шмидт М.В., 2006; Писарев В.Б., Бутенко А. М., 200/].
С 1999 года на территории Волгоградской области стали регистрироваться многочисленные случаи заболеваемости лихорадкой Западного Нила [Писарев В.Б. с соавт., 2004; Савченко С.Т., Лобанов А.Н., 2007]. В течение последних десяти лет антигены вируса Западного Нила регулярно обнаруживаются в пробах комаров и клещей [Львов Д.К., Бутенко A.M., 2007]. Актуальность изучения морфогенеза лихорадки Западного Нила на сегодняшний день связана также с развитием трансплантологии и гемотрансфузиологии, в литературе описаны случаи манифестации западно-нильского энцефалита у больных с иммуносупрессорной терапией [Cushing М.М., 2004; Costa A.N., 2008].
При исследовании аутопсийного материала [Григорьева Н.В., 2005; Dai J., Wang P. et al., 2008] обнаружены морфологические изменения в головном мозге, которые характеризовались очагами некроза с последующим формированием участков изоморфного и анизоморфного глиоза и образования кистозных полостей.
При экспериментальном моделировании лихорадки Западного Нила путём внутрибрюшинного заражения мышей [Белик Т.А., 2006; Шмидт М.В., 2006; Shrestha В. et al., 2003; Verma S. et al. et al., 2009] в различных отделах головного мозга на светооптическом уровне обнаружены выраженные дистрофические изменения в нейронах и глиальных клетках, наблюдалось повреждение гематоэнцефалического барьера с увеличением его проницаемости, что вело к появлению вторичных изменений во всех структурах головного мозга. Считается, что модель подкожного инфицирования вирусом Западного Нила более приближена к природному заражению [ЗИгевЛа В. & а1., 2003; ЫетеШ Ы.М. & а1., 2006].
Несмотря на накопленный материал по данной проблеме, многие вопросы этиологии, патогенеза, выраженности морфофункциональных изменений в различных отделах ЦНС при подкожном инфицировании вирусом Западного Нила остаются малоизученными.
Цель исследования
Охарактеризовать закономерности морфофункциональных изменений в нейронах различных отделов ЦНС при экспериментальном воспроизведении лихорадки Западного Нила.
Задачи исследования
1. Выявить на основе морфологического анализа областей ЦНС с наиболее выраженными изменениями в различные периоды лихорадки Западного Нила на модели подкожного инфицирования.
2. Изучить особенности морфологических изменений нейронов головного мозга мышей при подкожном заражении вирусом Западного Нила в различные периоды инфекционного процесса.
3. Охарактеризовать структурные изменения в нейронах спинного мозга мышей в различные периоды лихорадки Западного Нила на модели подкожного инфицирования.
4. Определить особенности морфологических изменений в центральной нервной системе в зависимости от исходов лихорадки Западного Нила на модели подкожного заражения.
Научная новизна исследования
Дана комплексная структурно-функциональная характеристика изменений в нейронах различных отделов ЦНС с учётом периода лихорадки Западного Нила на модели подкожного заражения.
Впервые охарактеризованы ультраструктурные особенности и дана морфометрическая характеристика нейронов коры полушарий большого мозга, гипоталамуса, продолговатого и спинного мозга мышей при экспериментальном воспроизведении лихорадки Западного Нила на модели подкожного инфицирования вирусом Западного Нила (штамм Астр 901).
Установлены морфологические изменения в спинном мозге в зависимости от исхода лихорадки Западного Нила на модели подкожного заражения, проявлявшиеся у умерших животных выраженными обратимыми и необратимыми изменениями в нейронах на фоне нарушения кровообращения и наличия признаков серозного или серозно-геморрагического воспаления; в группе заболевших животных, выведенных из эксперимента на 14 сутки, отмечено наличие в крупных нейронах вакуолизация цитоплазмы периферических отделов перикариона при явлениях периваскулярного отёка.
Научно-практическая значимость
На основании данных патоморфологического исследования различных отделов центральной нервной системы животных дана характеристика морфологических изменений при лихорадке Западного Нила. Полученные данные позволяют расширить имеющиеся представления о морфогенезе заболевания и причинах летальных исходов и могут быть использованы в клинической и патологоанатомической практике для своевременной диагностики, прогноза и разработки новых методов лечения, а также профилактики лихорадки Западного Нила.
Основные положения, выносимые на защиту
1. При экспериментальном воспроизведении лихорадки Западного Нила на модели подкожного инфицирования выраженность морфологических изменений в центральной нервной системе носила стадийный характер и соответствовала периодам инфекционного процесса.
2. При экспериментальном моделировании лихорадки Западного Нила наиболее выраженные обратимые и необратимые изменения обнаружены в продолговатом мозге, характеризовались наличием ультраструктурных признаков повреждения в перикарионах нейронов и миелиновых нервных волокнах, начиная со 2 суток экспериментального заражения вирусом Западного Нила (штамм Астр 901).
3. У животных с клиникой лихорадки Западного Нила выраженные структурные изменения обнаружены в нейронах передних и боковых рогов спинного мозга, что сопровождалось вакуолизацией цитоплазмы перикарионов, повреждением митохондрий с очаговым лизисом крист, нараставшим по мере прогрессирования заболевания, а так же признаками повреждения миелиновых нервных волокон наиболее выраженными в передних и боковых канатиках.
Апробация работы и публикации
Основные результаты диссертационного исследования докладывались и обсуждались на III конференции «Гомеостаз и эндоэкология» ( Хургада, 2005); на Пироговской студенческой научной конференции (Москва, 2006); II Съезде Российского общества патологоанатомов (Москва, 2006); на Всероссийской научно-практической конференции: «Арбовирусы и арбовирусные инфекции» (Астрахань, 2006); 63-64 открытых научно-практических конференциях молодых ученых и студентов Волгоградского государственного медицинского университета (Волгоград, 2005, 2006); XI региональной конференции молодых исследователей (Волгоград, 2006); 66 открытой научно-практической конференции молодых ученых и студентов с международным участием: «Актуальные проблемы экспериментальной и клинической медицины» (Волгоград, 2008); III Съезде Российского общества патологоанатомов (Самара, 2009).
Реализация и внедрение результатов исследования
Работа выполнена на кафедре патологической анатомии (заведующий кафедрой, д.м.н., доцент A.B. Смирнов) ГОУ ВПО «Волгоградский государственный медицинский университет Росздрава» (ректор — академик РАМН В.И. Петров) и ГУ «Волгоградский научный центр РАМН и Администрации Волгоградской области» (директор - академик РАМН В.И. Петров).
Полученные данные по патоморфологическим изменениям в центральной нервной системе при моделировании лихорадки Западного Нила используются в диагностической работе патологоанатомических отделений Волгоградского областного патологоанатомического бюро. Результаты данного исследования внедрены в учебный процесс на кафедре патологической анатомии ГОУ ВПО «Волгоградский государственный медицинский университет Росздрава» и лаборатории морфологии и иммуногистохимии ГУ «Волгоградский научный центр РАМН и Администрации Волгоградской области».
Публикации
По теме диссертации опубликовано 13 научных работ, из них три - в журналах перечня изданий, рекомендованных ВАК РФ для публикации результатов кандидатских диссертаций.
Объём и структура диссертации
Диссертация изложена на 123 страницах машинописного текста, состоит из введения, четырёх глав (обзора литературы - 1, материал и методы исследования - 2, результаты собственных исследований - 3, обсуждение полученных результатов - 4), выводов, практических рекомендаций и списка литературы, включающего 187 источников, в том числе 83 отечественных и 105 зарубежных. Работа содержит 10 таблиц, иллюстрирована 51 рисунком (41 микрофотография и 10 диаграмм).
Заключение диссертационного исследования на тему "Морфофункциональная характеристика межнейрональных взаимоотношений в центральной нервной системе при экспериментальном воспроизведении лихорадки Западного Нила"
101 выводы
1. На основании морфологического анализа при подкожном моделировании лихорадки Западного Нила выявляются структурные изменения различных отделов центральной нервной системы с признаками серозного и серозно-геморрагического энцефаломиелита, наиболее выраженными в период разгара заболевания.
2. Наиболее выраженные морфологические изменения в головном мозге при экспериментальном воспроизведении лихорадки Западного Нила наблюдаются в гипоталамусе и продолговатом мозге, а в спинном мозге — в шейно-грудных сегментах, соответствуют периоду развёрнутых клинических проявлений заболевания (7 сутки), сопровождаются развитием парезов и параличей, что обусловлено, по-видимому, особенностями нейротропного и эндотелиотропного действия вируса Западного Нила.
3. При исследовании продолговатого мозга в различные периоды лихорадки Западного Нила обнаруживаются ультраструктурные изменения в нейронах, проявляющиеся вакуолизацией цитоплазмы перикарионов, повреждением митохондрий с очаговым лизисом крист, нарастающими по мере прогрессирования заболевания, начиная со 2 суток эксперимента (инкубационный период). Наиболее выраженные структурные изменения наблюдаются в нейронах латеральных ретикулярных ядер, в которых отмечается значимое увеличение площади перикарионов нейронов на 2 сутки на 33,3 % (при Р<0,001), на 7сутки - на 38,0 % (при Р<0,001) по сравнению с контролем.
4. В период разгара лихорадки Западного Нила в спинном мозге отмечены явления хроматолиза и гидропической дистрофии в перикарионах и отростках нейронов передних и боковых рогов в сочетании с ультраструктурными изменениями в миелиновых нервных волокнах, периваскулярным отёком, появлением серозно-геморрагического экссудата, периваскулярной лимфоидной инфильтрации и другими признаками, свидетельствующими о повреждении гематонейронального барьера. В нейронах боковых рогов спинного мозга наблюдается максимально выраженное увеличение площади перикарионов нейронов к 7 суткам на 66,8% (при Р<0,001) по сравнению с контролем.
5. При морфометрическом исследовании нейронов различных отделов ЦНС при экспериментальном воспроизведении лихорадки Западного Нила обнаруживаются значимые прямые корреляционные связи (г=0,92,при Р< 0,05) между динамикой изменения средней площади перикарионов нейронов латерального ретикулярного ядра продолговатого мозга и нейронов боковых рогов спинного мозга. Выявляются обратные межнейрональные корреляционные связи при сопоставлении динамики изменения средней площади перикарионов нейронов и их удельной площади в вентральных отделах продолговатого мозга (г— -0,97, при Р< 0,05) и боковых рогах спинного мозга (г= -0,87, при Р< 0,05) при прогрессирующем снижении удельной площади перикарионов нейронов в латеральном ретикулярном ядре в 2,1 раза к 14 суткам (при Р<0,001), что свидетельствует о наличии выраженных однонаправленных структурных изменений в различных отделах ЦНС, обеспечивающих контроль кардиореспираторных функций в различные периоды заболевания.
6. При сравнительном морфологическом анализе в группе умерших в ходе эксперимента животных в период разгара лихорадки Западного Нила в спинном мозге обнаруживаются в 71,4% случаев признаки серозного, а в 28,6%) - серозно-геморрагического воспаления. В перикарионах нейронов встречаются признаки выраженных обратимых и необратимых изменений преимущественно в передних рогах спинного мозга на фоне выраженных нарушений кровообращения и реактивных изменений со стороны глиальных элементов. У заболевших животных, выведенных из эксперимента на 14 сутки (период реконвалесценции) в спинном мозге выявляются слабовыраженные признаки периваскулярного отёка, наличие в отдельных нейронах вакуолизации цитоплазмы перикарионов, отмечается периваскулярная лимфоидная инфильтрация и пролиферация эндотелия сосудов микроциркуляторного русла.
ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ
Полученные данные о морфофункциональных изменениях в различных отделах центральной нервной системы можно использовать в учебном процессе для преподавания патологической анатомии в высших медицинских заведениях. Результаты ультраструктурного исследования нейронов различных отделов ЦНС могут быть использованы при проведении научно-исследовательских работ при моделировании арбовирусных инфекций.
Список использованной литературы по медицине, диссертация 2009 года, Глухов, Владимир Александрович
1. Анохин П.К. Узловые вопросы теории функциональной системы. М., 1980.-447 с.
2. Автандилов Г. Г. Проблемы патогенеза и патологоанатомической диагностики болезней в аспекте морфометрии. М.: Медицина, 1984. - 288 с.
3. Автандилов Г.Г. Основы количественной патологической анатомии. -М.: Медицина, 2002. 240 с.
4. Абрамова Л.И., Терских И.И., Скворцова Т.М., Львов Д.К. Патогенные свойства для приматов вируса Батай, штамм ЬЕ 1У23 Астрахань // Вопр. Вирусол. 6. - 1983. - С. - 660-663.
5. Абрамова Л.И., Савостина Н.С., Львов Д.К., Терских И.И. Некоторые биологические свойства вируса Тягиня, выделенного в Заполярье // Вопр. Вирусол.-3,- 1988.-С.-348-351.
6. Абидов М.Т. Новые подходы к созданию адекватной экспериментальной модели сепсиса //Труды1-го съезда Российского общества патологоанатомов.-М., 1996.-С. 9-10.
7. Андросова СВ., Рогаткин А.К., Козлова Т.А., и соавт. Изучение распространения арбовирусов на территории Астраханской области. Сборник научных трудов; Новороссийск, 1994. Вып. 1. - С. 307-310.
8. Аристова В.А., Колобухина Л.В., Щелканов М.Ю., Львов Д.К. // Вопр. вирусол. -2001. №4.- С. - 7-15.
9. Беклемищев В.Н. // Вопр. вирусол. 1963. -№2. - С.- 240-242.
10. Велик Т.А. Патоморфологические изменения головного мозга при экспериментальном воспроизведении лихорадки Западного Нила // Дисс. канд. мед наук. В., 2006.
11. Березин В.В., Чумаков М.П., Семёнов Б.Ф. серологические данные о роли о роли птиц в циркуляции вируса Синдбис в дельте Волги // Вопр. Вирусол.-4.- 1968.-С.-461-466.
12. Березин В.В., Миграция птиц дельт южных рек европейской части СССР в связи с проблемой межконтинентального переноса арбовирусов //
13. Материалы научной сессии Института полиомиелита и вирусных энцефалитов.-3,- 1968.-С. 162-163.
14. Березин В.В. Миграция птиц дельт Азовского и Каспийского бассейнов, их возможная роль в распространении арбовирусов // трансконтинентальные связи перелётных птиц и их роль в распространении арбовирусов. Новосибирск. 1972. - С. - 183-186.
15. Брудный P.A., Пиликова О.М., Рубахова Ю.В., Львов Д.К. Распространение арбовирусов и вируса ГЛПС в Краснодарском крае // Вопр. риккетсиологии и вирусологии (сборник научных трудов), Астрахань-Москва, 1996. С. - 76-83.
16. Бутенко A.M., Столбов Д.Н. История изучения арбовирусных инфекций в Астраханской области. // Вопросы риккетсиологии и вирусологии. Сб. Научн. Трудов. Астрахань-Москва, 1996. - С. 51-57.
17. Бутенко A.M., Ковтунов А.И., Хуторецкая Н.В. и др. Выделение штамма Act 901 вируса Западного Нила из крови больного человека в Астраханской области в 2000 г. // Вопр. Вирусол. 2001. - № 4. - С. 31-32.
18. Бутенко A.M. Геморрагическая лихорадка Крым-Конго. В кн.: В.И. Покровский, Г.Г. Онищенко, Б.Л. Черкасский. Эволюция инфекционных болезней в России в XX веке. М.: Медицина. - 2003.- С.- 365-374.
19. Баринский И.Ф., Алимбарова Л.М. Лечение вирусных инфекций центральной нервной системы. // Материалы расширенного пленумапроблемной комиссии «Арбовирусы» и научно-практической конференции «Арбовирусы и арбовирусные инфекции» Москва, — 2007. — С. 35-46.
20. Варгин В.В., Семенов Б.Ф. Угнетение функции макрофагов мышей при экспериментальной инфекции вирусом Тягиня // Вопр. вирус.- №2, -1983. С.-235-238.
21. Вышемирский О.И., Жуков А.Н., Прилипов А.Г. и др. Выделение вируса лихорадки Западного Нила от больного менингоэнцефалитом в Волгоградской области в 2000 г. // Вопр. Вирусол. 2001. - № 4. - С. 33-34.
22. Галкина И.В., Бутенко A.M., Кузнецов A.A., Громашевский В.Л. Изучение циркуляции вирусов серогруппы калифорнийского энцефалита на территории Поволжья //Итоги науки и техники. Вирусология.-Т.-27.- 1992.-С.-61-69.
23. Гланц С. Медико-биологическая статистика. Пер. с англ. — М., Практика, 1999,-459с.
24. Григорьева Н.В. Патоморфология органов и систем при лихорадке Западного Нила (клинико-экспериментальное исследование). Автореф. дисс. д-ра мед. наук.- Волгоград, 2005.- 42с.
25. Демихов В.Г., Чайцев В.Г., Бутенко A.M., Недялкова М.С. Изучение заболеваний, вызванных вирусами серогруппы калифорнийского энцефалита // Итоги науки и техники. Вирусология.-Т.-27.- 1992.-С.-112-118.
26. Деконенко Е.П., Ларичев В.Ф., Бутенко A.M. Тяжелая форма энцефаломиелита, вызванная вирусом Западного Нила.// Неврологический журнал. 2002. - Т. 7. - № 6. - С. 19-22.
27. Естратов Ю.В., Маркин C.JI. О приролной очаговости арбовирусных инфекций на левобережной Украине // Итоги науки и техники. Вирусология.-Т.-27.- 1992.-С.-92-93.
28. Ерман Б.А., Конев В.П., Ройхель В.М. Вирусные инфекции центральной нервной системы (патологическая анатомия, патогенез, диагностика).- Екатеринбург, 1996. С. 73.
29. Ефременко В.И., Брюханова Г.Д., Лямкин Г.И. Эпидситуация по ККГЛ в районах Ставропольского края, подвергшихся наводнению // актуальные проблемы эпидемиологической безопасности: Сб. науч. тр. — Ставрополь. 2002. - С.-94-95.
30. Кицак В.Я. Изменение наследственных свойств вируса Синдбис при длительном культивировании в условиях снижающейся температуры // Вопросы вирусологии,- №2.- 1970. С. -177-181.
31. Ковтунов А.И., Колобухина Л.В., Москвина Т.М. и др. Заболеваемость и заражаемость населения Астраханской области лихорадкой Западного Нила в 2002 г.// Вопр. Вирусол. 2003. - № 5. - С. 9-11.
32. Конев В.П. Естественный морфогенез и индуцированный патоморфоз клещевого энцефалита: Автореф. дис. д-ра мед. наук. Омск, 1995.
33. Кицак В.Я. Изменение наследственных свойств вируса Синдбис при длительном культивировании в условиях снижающейся температуры // Вопросы вирусологии,-№2.- 1970. С. -177-181.
34. Крыжановский Г.Н. Дизрегуляционная патология. М., 2002. - 230 с.
35. Кучин В.В., Янович Т.Д., Бутенко A.M. // Крымская геморрагическая лихорадка. Материалы 3-й обл. науч.-практ. конф. — Ростов-на Дону. 1970.-С.-61-64.
36. Лилли Р. Патогистологическая техника и практическая гистохимия. -М., Мир.- 1969.- С. 541-543.
37. Львов Д.К. Арбовирусные инфекции в субтропиках и на юге умеренного пояса СССР // Арбовирусы и арбовирусные инфекции. М. Медицина, 1989. -С.235-249.
38. Львов Д.К. Новые и вновь возникающие вирусные инфекции// Врач -2000. -№ 8. С. 13-14.
39. Львов Д.К., Скворцова Т.М., Кондрашёва Н.Г. Этиология карельской лихорадки, новая арбовирусная инфекция // Вопр. вирусол. 1982. - № 6. -С. 690-692.
40. Павловский Е. П. Учение о природной очаговости трансмиссивныхболезней человека // общие проблемы паразитологии и зоологии. АН СССР. -М.-1961,-С.-193-195.
41. Львов Д.К., Писарев В.Б., Петров В.А., Григорьева Н.В. Лихорадка Западного Нила: по материалам вспышек в Волгоградской области в 19992002 гг.- Волгоград, 2004. 104с.
42. Львов Д.К., Клименко С.М., Гайдамович С.Я. Арбовирусы и арбовирусные инфекции. М., 1989.
43. Львов Д.К. Лихорадка Западного Нила.// Вопр. Вирусол. 2000. № 2. С. 4-10.
44. Львов Д.К. Проблема нерегистрируемых и непредсказуемых инфекций. // Журнал микробиологии, 1997. № 5.- С. 104-109.
45. Львов Д.К., Ильичев В.Д. Миграции птиц и перенос возбудителей инфекции. М., 1979.
46. Мотавкин П.А. Мозговой ствол // В кн. Руководство по гистологии. В 2 т. Том II. СПб: СпецЛит, 2001. - С.553-563.
47. Меркулов Г. А. Курс патологогистологической техники. Л.: Медгиз, 1969. - 424 с.
48. Москвитина Э.А., Водяницкая С.Ю., Ломов Ю.М. крымская геморрагическая лихорадка в Ростовской области: эпидемиологическое районирование и активность природного очага // Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол.- 2002. №6.- С.-26-30.
49. Непомнящих Л.М. Патологическая анатомия и ультраструктура сердца.- Новосибирск: Наука, 1981.- 323 с.
50. Онищенко Г.Г. Об эпидемиологической обстановке по особо опасным, природно-очаговым и другим инфекциям на территории Южного федерального округа // Журнал микробиол., эпидемиол. и иммунобиол.-2000,-№2.-С.-23-30.
51. Онищенко Г.Г., Ефременко В.И., Бейер А.П. Крымская геморрагическая лихорадка. М.-2005.
52. Прометной В.И., Пичурина Н.Л., Голубев Б.П., Кругликов В.Д., Новиков Д. Н., Баташев В.В. Распространенность арбовирусов на территории Ростовской области // Вопросы риккетсиологии и вирусологии (сборник научных трудов). Астрахань-Москва. 1995. -С.-70.
53. Петров В.А., Алюшин A.M., Жуков А.И. Диагностика ЛЗН в Волгоградской области // Актуальные проблемы медицинской вирусологии.
54. Петров В.А., Краснова Е.М., Львов Д.К. и др. Клиника и эпидемиология лихорадки Западного Нила в Волгоградской области (1999 и 2000 гг.). // Вопр. Вирусол. 2000. - № 4. - С 22-26.
55. Писарев В.Б., Бутенко A.M., Григорьева Н.В., Ларичев В.Ф., Кириченко Л. Н., Феоктистова A.B., Белик Т.А. // Вестник Волгоградской медицинской академии. 2001. №7. Т. 57. Вып. 6. С. 9-11.
56. Писарев В.Б., Бутенко A.M. Моделирование лихорадки Западного Нила. // Проблемы морфологии: Тез. докл. общерос. конф. с международным участием. М., 2002. С. 61.
57. Писарев В.Б., Григорьева Н.В., Петров В.А., Бутенко A.M. Патоморфология лихорадки западного Нила. // Архив патологии.- 2004 — №5.-С.15-18.
58. Погодина В.В., Фролова М.П., Ерман Б.А. Хронический клещевой энцефалит. Этиология, иммунология, патогенез. Новосибирск, 1986.
59. Погорелов Ю.В. Гистогематические барьеры // В кн. Руководство по гистологии. В 2 т. Том 1. СПб: СпецЛит, 2001. - С.465-494.
60. Решетников И.А., Березин В.В. Изучение роли птиц в экологии арбовирусов Западного Нила и Синдбис в дельте реки Кубани // Материалы VI симпозиума по изучению вирусов, экологически связанных с птицами. Омск. -1971. С.-92-93.
61. Семенов Б.Ф., Варгин В.В., Ожелков C.B. Влияние вируса Тягиня на персистенцию вируса Лангат в центральной нервной системе мышей // Вопросы вирусологии. №6.-1981.-С.-724-727.
62. Скоферца П.Г., Степанова О. А. Арбовнрусные инфекции и лимфоцитарный хориоменингит в Молдове // Итоги науки и техники.Вирусология.-Т.-27.- 1992.-С.-97-101.
63. Саркисов Д.С. Перов Ю.Л. Микроскопическая техника М.: «Медицина»,- 1996.-С. 320.
64. Смирнова С.Е. Крымская-Конго геморрагическая лихорадка: этиология, эпидемиология и лабораторная диагностика: Дисс. в виде науч. доклада д-ра мед. наук. М. - 2003. - С.- 121.
65. Фёдорова М.В. Комары-переносчики вируса Западного Нила на территории России. // Материалы расширенного пленума проблемной комиссии «Арбовирусы» и научно-практической конференции «Арбовирусы и арбовирусные инфекции» Москва, - 2007. - С. 168-175.
66. Чебан Д.С, Кицак В.Я. Изменение некоторых биологических свойств вируса Синдбис в результате длительного пассирования при низких температурах //Вопросы вирусологии. -№4.- 1972.- С. 451-453.
67. Шмидт М.В., Писарев В.Б., Смирнов A.B., Бутенко A.M. Морфологическая реакция астроцитов различных отделов головного мозга мышей при моделировании лихорадки Западного Нила // Архив патологии.-2006.- Т. 68, №4.-С.25-27.
68. Шмидт М.В. Морфологическая характеристика гематоэнцефалического барьера при экспериментальном воспроизведении лихорадки Западного Нила // Дисс. канд. мед наук. В., 2006.
69. Alvarez J.I, Teale J.M. Evidence for differential changes of junctional complex proteins in murine neurocysticercosis dependent upon CNS vasculature. // Brain Res. -2007,- Vol.- 12;1169.-P.98-111.
70. Asnis D.S., Conetta R., Waldman G. et al. The West Nile virus encephalitis outbreak in the United States (1999-2000): from Flushing, New York, to beyond its borders. // Ann. N. Y. Acad. Sei. 2001. - Vol. 951. - P. 161 -171.
71. Braun E., Zimmerman T., Hur T.B., Reinhartz E., Fellig Y., Panet A., Steiner I. Neurotropism of herpes simplex virus type 1 in brain organ cultures. J Gen Virol. -2006,- VoI.-87(Pt I0).-P.2827-37.
72. Banet-Noach C., Malkinson M., Brill A. Phylogenetic relationships of West Nile viruses isolated from birds and horses in Israel from 1997 to 2001. // Virus. Genes. 2003. - Vol. 26(2). - P. 135-141.
73. Bernard K.A., Mattei J.Y., Jones S.A. et al. West Nile virus infection in birds and mosquitoes, New York State, 2000.//EMERG. Infect. Dis. 2001. - Vol. 7. - P. 679-685.
74. Berther F.X., Zeller H.G., Drouet M.T. et al Extensive nucleotide changes and deletions within the envelope glycoprotein gene of Euro-African West Nile viruses.// J. Gen. Virol. 1997. - Vol. 78. - P. 2293-2297.
75. Biggerstaff B.J., Petersen L.R. Estimated risk of transmission of the West Nile virus through blood transfusion in the US, 2002. // Transfusion. 2003. -Vol. 43(8).-P. 1007-1017.
76. Bin H., Grossman Z., Pokamunski S. et al. West Nile fever in Israel 19992000: from geese to humans. // Ann. N. Y. Acad. Sei. 2001. - Vol. 951. - P. 127142.
77. Blackmore C.G., Stark L.M., Jeter W.C. et al. Surveillance results from the first West Nile virus transmission season in Florida, 2001. // Am. J. Trop. Med. Hyg. 2003. - Vol. 69(2). - P. 141-150.
78. Blitvich B.J., Fernandez S.I., Contreras-Cordero J.F. et al. Serologic evidence of West Nile virus infection in horses, Coahuila State, Mexico. // Emerg. Infect. Dis. 2003. - Vol. 9(7). - P. 853-856.
79. Bosanko CM., Gilroy J., Wang A.M. et al. West Nile virus encephalitis involving the substantia nigra: neuroimaging and pathologic findings with literature review. // Arch. Neurol. 2003. - Vol. 60(10). - P. 1448-1452.
80. Bellizzi M.J, Lu S.M, Gelbard H.A. Protecting the synapse: evidence for a rational strategy to treat HIV-1 associated neurologic disease. //J Neuroimmune Pharmacol. 2006 Mar; 1 (l):20-31.
81. Crichlow R., Bailey J., Gardner C. Cerebrospinal fluid neutrophilic pleocytosis in hospitalized West Nile virus patients. // J Am Board Fam Pract. -2004. Vol. 17(6). - P. 470-2.
82. Costa A.N., Grossi P., Porta E., Venettoni S., Fehily D. Measures taken to reduce the risk of West Nile virus transmission by transplantation in Italy. // J. Vet. Diagn. Invest. 20038. -Vol. 15(4).-P. 324-329.
83. Campbell G.L., Ceianu C.S., Savage H.M. Epidemic West Nile encephalitis in Romania: waiting for history to repeat itself // Ann. N. Y. Acad. Sci.-2001.-Vol. 951.-P.94-101.
84. Cantile C, Del-Piero F., Di-Guardo G. Pathologic and immunohistochemical findings in naturally occuring West Nile virus infection in horses.// Vet. Pathol. 2001. - Vol. 38(4). - P.343-347.
85. Ceianu C.S., Ungureanu A., Nicolescu G. West Nile virus surveillance in Romania: 1997-2000. // Viral. Immunol. 2001. - Vol. 14(3). - P.251-262.
86. Diamond M.S., Shrestha B., Marri A. et al. B cells and antibody play critical roles in the immediate defense of disseminated infection by West Nile encephalitis virus.//J. Virol. 2003. - Vol. 77(4). - P. 2578-2586.
87. Edwards M.J. Hyperthermia in utero due to maternal influenza is an environmental risk factor for schizophrenia. // Congenit Anom (Kyoto).- 2007 Vol.- 47(3).-P. 84-89.
88. Fratkin JD, Leis AA, Stokic DS, Slavinski SA, Geiss RW. Spinal cord neuropathology in human West Nile virus infection. // Arch Pathol Lab Med. -2004,- Vol.-128(l 1): 1210.
89. Haley M., Retter A.S., Fowler D. et al. The role for intravenous immunoglobulin in the treatment of West Nile virus encephalitis. // Clin. Infect. Dis. 2003. - Vol. 37(6). - P. 88-90.
90. Hall R.A., Scherret J.H., Mackenzie J.S. Kunjin virus: an Australian variant of West Nile?// Arm. N. Y. Acad. Sei. 2001. - Vol. 951. - P. 153-16.
91. Harrington T., Kuehnert M.J., Kamel H. et al. West Nile virus infection transmitted by blood transfusion. // Transfusion. 2003. - Vol. 43(8). - P. 10181022.
92. Hayes C.G. West Nile fever.// The Arboviruses: Epidemiology and Ecology / Ed. T.P Monath. Boca Raton, 1989. - Vol. 5. - P. 59-69.
93. Hayes C.G. West Nile virus: Uganda, 1937, to New York City, 1999// Ann. N. Y. Acad. Sei. 2001. - Vol.951. - P. 25-37.
94. Hershberger V.S., Augsburger J.J., Hutchins R.K. et al. Chorioretinal lesions in nonfatal cases of West Nile virus infection. // Ophthalmology. 2003. -Vol. 110(9).-P. 1732-1736.
95. Hiatt B., DesJardin L., Carter T. et al. A fatal case of West Nile virus infection in a bone marrow transplant recipient. // Clin. Infect. Dis. 2003. -Vol. 37(9). - P. 129-131.
96. Hong D.S., Jacobson K.L., Raad I.I. et al. West Nile encephalitis in 2 hematopoietic stem cell transplant recipients: case series and literature review.// Clin. Infect. Dis. 2003. - Vol. 37(8). - 1044-1049.
97. Holopainen I.E. Seizures in the developing brain: cellular and molecular mechanisms of neuronal damage, neurogenesis and cellular reorganization. //Neurochem Int. 2008.- Vol.- 52(6):935-47.
98. Huhn G.D., Sejvar J.J., Montgomery S.P. et al. West Nile virus in the United States: an update on an emerging infectious disease. // Am. Fam. Physician. -2003.-Vol. 68(4).- 653-660.
99. Iwamoto M., Jernigan D.B., Guasch A. et al. Transmission of West Nile virus from an organ donor to four transplant recipients. // N. Engl. J. Med. -2003. -Vol. 348(22). P. 2196-2203.
100. Janousek T.E., Kramer W.L. Surveillance for arthropod-borne viral activity in Nebraska, 1994-1995. // J. Med. Entomol. 1998. - Vol. 35(5). - P. 758762.
101. Jupp P.G. The ecology of West Nile virus in South Africa and the occurrence of outbreaks in humans // Ann. N. Y. Acad. Sei. 2001. - Vol. 951. -P. 143-152.
102. Juricova Z., Pinowski J., Literak I. et al. Antibodies to alphavirus, flavivirus, and bunyavirus arboviruses in house sparrows (Passer domesticus) and tree sparrows (P. Montanus) in Poland. // Avian. Dis. 1998. - Vol. 42(1). - P. 182185.
103. Ivey N.S., MacLean A.G., Lackner A.A. Acquired immunodeficiency syndrome and the blood-brain barrier. // J Neurovirol. — 2009.- Vol.-15(2). P.-111-22.
104. Goody R.J., Schittone S.A., Tyler K.L. Experimental reovirus-induced acute flaccid paralysis and spinal motor neuron cell death. // J Neurovirol. 2008.-VoI.-67(3). - P.-231-9.
105. Knipe D.M., Cliffe A. Chromatin control of herpes simplex virus lytic and latent infection. // Nat Rev Microbiol. 2008. - Vol.- 6(3):211-21.
106. KomarN. West Nile virus surveillance using sentinel birds. // Ann. N. Y. Acad. Sei. 2001. - Vol. 951. - P. 58-73.
107. Kramer L.D., Bernard K.A. West Nile virus infection in birds and mammals. //Ann. N. Y. Acad. Sci. 2001. - Vol. 951. - P. 84-93.
108. Kreil T.R., Berting A., Kistner O. et al. West Nile virus and the safety of plasma derivatives: verification of high safety margins, and the validity of predictions based on model virus data. // Transfusion. 2003. - Vol. 43(8). - P. 1023-1028.
109. Kulasekera V.L., Kramer L., Nasci R.S. et al. West Nile virus infection in mosquitoes, birds, horses, and humans, Staten Island, New York, 2000. // Emerg. Infect. Dis. 2001. - Vol. 7(4). - P. 722-725.
110. Kumar R., Mathur A., Kumar A. et al. Virological investigations of acute encephalopathy in India. //Arch. Dis. Child. 1990. - Vol. 65(11). - 1227-1230.
111. Kuno G. Persistence of arboviruses and antiviral antibodies in vertebrate hosts: its occurrence and impacts.// Rev. Med. Virol. 2001. - Vol. 11(3). - P. 165190.
112. Kutz F.W., Wade T.G., Pagac B.B. A geospatial study of the potential of two exotic species of mosquitoes to impact the epidemiology of West Nile virus in Maryland. //J. Am. Mosq. Control. Assoc. 2003. - Vol. 19(3). - P. 190-198.
113. Lacey L.A., Lacey CM. The medical importance of riceland mosquitoes and their control using alternatives to chemical insecticides.// J. Am. Mosq. Control. Assoc. Suppl. 1990. - Vol. 2. - P. 1-93.
114. Levin A., Rubinstein-Guini M., Kuznetzova L., Stram Y. Cleavage of Akabane virus S RNA in the brain of infected ruminants.// Virus Genes.- 2008.-Vol.-36(2).-P. 375-81.
115. Leventhal A., Karsenty E. West Nile fever in Israel past and present. // Harefuah. - 2001. - Vol. 140(8). - P. 723-727.
116. Lozyns'kyi I.M., Vynohrad I.A. Arboviruses and arbovirus infections in the forest steppe zone of Ukraine. // Mikrobiol. Z. 1998. - Vol. 60(2). - P. 49-60.
117. Lundstrom J.O. Mosquito-borne viruses in western Europe: a review. // J. Vector. Ecol.- 1999,-Vol. 24(1).-P. 1-39.
118. Macoris M.L., Andrighetti M.T., Takaku L. et al. Resistance of Aedes aegypti from the state of Sao Paulo, Brazil, to organophosphates insecticides. // Mem. Inst. Oswaldo. Cruz. 2003. - Vol. 98(5). - P. 703-708.
119. Malik-Peiris J.S., Amerasinghe F.P. West Nile fever. In: Beran G.W., Steele J.H., editors. Handbook of Zoonoses Section B: Boca Raton: CRC Press; 1994.-P. 139-148.
120. Malkinson M., Banet C, Khinich Y. et al. Use of live and inactivated vaccines in the control of West Nile fever in domestic geese. // Ann. N. Y. Acad. Sci. 2001. - Vol. 951. - P. 255-261.
121. Marra P.P., Griffmg S.M., McLean R.G. West Nile virus and wildlife health. // Emerg. Infect. Dis. 2003. - Vol. 9(7). - 898-899.
122. Mather T., Takeda T., Tassello J. et al. West Nile virus in blood: stability, distribution, and susceptibility to PEN110 inactivation. // Transfusion. -2003. Vol. 43(8). - P. 1029-1037.
123. McLean R.G., Ubico S.R., Docherty D.E. et al. West Nile virus transmission and ecology in birds. // Ann. N. Y. Acad. Sci. 2001. - Vol. 951. - P. 54-57.
124. Meek J. West Nile virus in the United States. // Curr. Opin. Pediatr. -2002. -Vol. 14(1).-P. 72-77.
125. Menard' B. Evolutions et expansion geographique de la dengue. Geographic changes in exposure to dengue. // Sante. 2003. - Vol. 13(2). -89-94.
126. Messer W.B., Gubler D.J., Harris E. et al. Emergence and global spread of a dengue serotype 3, subtype 111 virus. // Emerg. Infect. Dis. 2003. - Vol. 9(7). -P. 800-809.
127. Meyer R.P., Hardy J.L., Reisen W.K. Diel changes in adult mosquito microhabitat temperatures and their relationship to the extrinsic incubation of arboviruses in mosquitoes in Kem County, California. // J. Med.,Entomol. -1990. -Vol. 27(4). 607-614.
128. Meynard J.B., Orlandi E., Rogier C. et al. Utilisation des satellites dans le domaine de la sante publique en milieu tropical. Use of satellites for publichealth purposes in tropical areas. // Med. Trap. (Mars). 2003. - Vol. 63(1). -P. 716.
129. Miller D.L., Mauel M.J., Baldwin C. et al. West Nile virus in farmed alligators. // Emerg. Infect. Dis. 2003. - Vol. 9(7). - P. 794-799.
130. Miller J.R. The control of mosquito-bome diseases in New York City. // J. Urban. Health. 2001. - Vol. 78(2). - P. 359-366.
131. Monath J., Tsai T.F. Flaviviruses // Clinical Virology / Eds D.D.Richman et al.-New York, 1977.-P. 1133-1186.
132. Mostashari F., Bunning MX., Kitsutani P.T. et al. Epidemic West Nile encephalitis, New York, 1999: results of a household-based seroepidemiological survey. //Lancet. 2001. - 28; 358(9278). - P. 261-264.
133. Mostashari F., Kulldorff M., Hartman J.J. et al. Dead bird clusters as an early warning system for West Nile virus activity. // Emerg. Infect. Dis. 2003. -Vol. 9(6).-P. 641-646.
134. Murgue B., Murri S., Triki H. et al. West Nile in the Mediterranean basin: 1950-2000. //Ann. N. Y. Acad. Sei. 2001. - Vol. 951. - P. 117-126.
135. Nemeth NM, Kratz GE, Bates R, Scherpelz JA, Bowen RA, Komar N. Naturally induced humoral immunity to West Nile virus infection in raptors. // Ecohealth. 2008.- Vol.-13;5(3). - P. 298-304.
136. Morrey J.D., Siddharthan V., Wang H., Hall J.O., Skirpstunas R.T., Olsen A.L., Nordstrom J.L., Koenig S., Johnson S., Diamond M.S. // J Neurovirol. 2008 Apr; 14(2). P. 152-63
137. Pealer L.N., Marfin A.A., Petersen L.R. et al. Transmission of West Nile virus through blood transfusion in the United States in 2002. // N. Engl. J. Med. -2003. Vol. 349(13). - P. 1236-1245.
138. Peiris J.S.M., Amerasighe F.P. West Nile fever. // Handbook of Zoonosses / Ed. J.Beraan. 2-nd Es. - Boca Raton, 1994. - Sect. B. - P. 139-148.
139. Pepperell C, Rau N., Krajden S. et al. West Nile virus infection in 2002: morbidity and mortality among patients admitted to hospital in southcentral Ontario. //CMAJ. 2003. -Vol. 168(11).-P. 1399-1405.
140. Perelman A., Stern J. Acute pancreatitis in West Nile fever.// Amer. J. Trop. Med. Hyg. 1974. - Vol. 23. - P. 1150.
141. Petersen L.R., Marfin A.A. West Nile Virus: a primer for the clinician.// Ann. Intern.Med. 2002. - Vol. 137 (3). - P. 173-179.
142. Pitigoi D., Popa M.I. & Streinu-Cercel A. The epidemiological process of West Nile viral infection in Romanian.// Bacterid Virusol. Parazitol. Epidemiol. 1998. - № 43 (4). - P. 281-288.
143. Pletnev A.G. Claire M.S., Elkins R. et al. Molecularly engineered live-attenuated chimeric West Nile/dengue virus vaccines protect rhesus monkeys from West Nile virus//Virology.-2003,- Vol. 314(1). P. 190-195.
144. Porter K.R., Summers P.L., Dubois D et al. Detection of West Nile virus by the polymerase chain reaction and analysis of nucleotide sequence variation.// Am. J. Trop. Med. Hyg. 1993. - Vol. 48. - P. 440-446.
145. Porterfield J.S. Flaviviridae // Viruses of Vertebrates. London, 1989. -P. 62-89.
146. Porterfield J.S. Encephalitis viruses and related viruses causing hemorrhagic disease. // Encyclopedia of Virology / Eds R.G.Webster, A.Granoff. -1994.-Vol. 1. P. 361-367.
147. Reeves W.C. Partners: serendipity in arbovirus research. // J. Vector. Ecol. -2001.-Vol. 26(1).-P. 1-6.
148. Ritchie S.A., Pyxe A.T., Smith G.A. et al. Field evaluation of a sentinel mosquito (Diptera: Culicidae) trap system to detect Japanese encephalitis in remote Australia. //J. Med. Entomol. 2003. - Vol. 40(3). - P. 249-252.
149. Roberts M.G., Heesterbeek J.A. A new method for estimating the effort required to control an infectious disease. // Proc. R. Soc. Lond. B. Biol. Sei. -2003. Vol. 270(1522). - P. 1359-1364.
150. Robinson R.L., Shahida S., Madan N. et al. Transient parkinsonism in West Nile virus encephalitis. //Am. J. Med. 2003. - Vol. 115(3). - P. 252-253.
151. Rodhain F., Petter J.J., Albignac R. et al. Arboviruses and lemurs in Madagascar: experimental infection of Ltmer Fulvus with yellow fever and West Nile viruses.// Am. J. trop. Med. Hyg. 1985. - Vol. 34 (4). - P. 816-822.
152. Roehrig J.T., Staudinger L.A., Hunt A.R. et al. Antibody prophylaxis and therapy for flavivirus encephalitis infections. // Ann. N. Y. Acad. Sci. 2001. -Vol. 951.-P. 286-297.
153. Runo G., Chang G.-L., Tsushyra K. et al. Phylogeny of the genus Fflavivirus. // J. Virol. 1998. - Vol. 72. - P. 73-83.
154. Russell R.C. Mosquito-borne arboviruses in Australia: the current scene and implications of climate change for human health. // Int. J. Parasitol. 1998. -Vol. 28(6).-P. 955-969.
155. Rutkowska E., Pancewicz S., Szpakowicz T. et. al. Hepatic reactions in the course of viral meningoencephalitis in patients hospitalized in 1985-1989.// Wiad. Lec. 1993. - Vol. 46. - P. 190-193.
156. Shrestha B., Gottlieb D., Diamond M.S. Infection and Injury of Neurons by West Nile Encephalitis Virus. // J. Virol.- 2003.- Vol.77, №24. -P.13203-13.
157. Samuel M.A., Morrey J.D., Diamond M.S. Caspase 3-Dependent Cell Death of Neurons Contributes to the Pathogenesis of West Nile Virus Encephalitis // Journal of Virology.- 2007.- Vol. 81, № 6.-P. 2614-2623.
158. Siddharthan V., Wang H., Motter N.E., Hall J.O., Skinner R.D., Skirpstunas R.T, Morrey J.D. Persistent West Nile virus associated with a neurological sequela in hamsters identified by motor unit number estimation. // J Virol.-2009.- 83(9).-4251-61.
159. Scott T.W., Wright S.A., Eldridge B.F. et al. Cost effectiveness of three arbovirus surveillance methods in northern California // J. Am. Mosq. Control. ASSOC.-2001.- Vol. 17(2). P. 118-123.
160. Samuel M.A., Morrey J.D., Diamond M.S. Caspase 3-Dependent Cell Death of Neurons Contributes to the Pathogenesis of West Nile Virus Encephalitis // Journal of Virology.- 2007.- Vol. 81, № 6.-P. 2614-2623.
161. Sejvar J.J., Leis A.A., Stokic D.S. et al. Acute flaccid paralysis and West Nile virus infection.// Emerg. Infect. Dis. 2003. - Vol. 9(7). - P. 788-793.
162. Shieh W.J., Guarner J. Layton M. et al. The role of pathology in an investigation of an outbreak of West Nile encephalitis in New York, 1999.//Emerg. Infext. Dis. 2000. - Vol. 6. - P. 370-372.
163. Tan GS, Preuss MA, Williams JC, Schnell MJ. The dynein light chain 8 binding motif of rabies virus phosphoprotein promotes efficient viral transcription. // Proc. Natl. Acad. Sei. U. S. A. 2007.- Vol.- 104(17):7229-34.
164. Zärate S., Pond S.L., Shapshak P., Frost S.D. Comparative study of methods for detecting sequence compartmentalization in human immunodeficiency virus type 1.//J Virol.-2007.- Vol.- 81(12):6643-51.