Автореферат и диссертация по медицине (14.00.15) на тему:Морфо-функциональные особенности эпителия молочной железы при фиброкистозных изменениях

На правах рукописи

КОСТЮЧЕК Ирина Николаевна

МОРФО-ФУНКЦИОНАЛЬНЫЕ ОСОБЕННОСТИ ЭПИТЕЛИЯ МОЛОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ ПРИ ФИБРОКИСТОЗНЫХ ИЗМЕНЕНИЯХ

14.00.15 - патологическая анатомия

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Санкт-Петербург 2007

□□ЗОВ15Т5

003061575

Работа выполнена в Государственном учреждении Научно-исследовательском институте акушерства и гинекологии им Д.О. От-та Российской академии медицинских наук

Научный руководитель:

доктор медицинских наук,

профессор Кветной Игорь Моисеевич

Официальные оппоненты:

член-корреспондент РАМН,

заслуженный деятель науки РФ,

доктор медицинских наук,

профессор Аничков Николай Мильевич

Санкт-Петербургская государственная медицинская академия им. И.И. Мечникова

доктор медицинских наук,

профессор Рыбакова Маргарита Григорьевна

Санкт-Петербургский государственный медицинский университет им. акад. И.П. Павлова

Ведущая организация: ГОУ ДПО «Санкт-Петербургская медицинская академия последипломного образования» Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию РФ

Защита диссертации состоится » Гё-кТ^ом 2007 г в_

часов на заседании диссертационного совета Д 208.090 03 при Санкт-Петербургском государственном медицинском университете им акад И П Павлова по адресу 197022, Россия, Санкт-Петербург, ул Л Толстого, д 6/8

С диссертацией можно ознакомиться в фундаментальной библиотеке Санкт-Петербургского медицинского университета им акад. И П Павлова

Автореферат разослан « ■/£о » ¿Ьё^лг^и._2007 г

Ученый секретарь диссертационного Совета

доктор медицинских наук В Ф Митрейкин

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы

Термин «фиброкистозные изменения» широко используется в клинической практике, начиная с 1978 года, когда он впервые был введен в Международную гистологическую классификацию для обозначения патологических и пограничных с патологией физиологических перестроек ткани молочной железы (Rosen Р Р , Oberman H А . 1993) Фиброкистозные изменения (ФКИ) представляют собой сборную, разнообразную по клинико-морфологическим проявлениям группу патологических процессов (Головин ДИ, 1975, Трофимова Т H , Солнцева И А , Шарова Л Е , Бельчикова H С , 2004) Клинические проявления характеризуются появлением одиночных или множественных уплотнений молочной железы, претерпевающих циклические изменения на протяжении менструального цикла, при этом пациентки предъявляют жалобы на боль постоянного или циклического характера, выделения из соска (Dixon JM, 1991, Сайф И X . 2003). Все эти признаки не являются патогномоничными и могут встречаться при других заболеваниях молочной железы (Коган И Ю . Тарасова M А , МясниковаМО идр,2005)

В комплексной диагностике ФКИ большое значение имеет морфологическое исследование Гистологическая картина ФКИ многообразна (Пальцев M А , Аничков Н.М , 2005, Tavassoli A F, Devilee Р . 2003) Она определяется степенью выраженности пролиферативной активности различных компонентов ткани эпителиального, миоэпи-телиального, соединительнотканного, а также клеток APUD-системы (Пальцев MA, Квел ной И М., 2006) Наиболее часто малигнизации подвергается эпителиальный компонент, поэтому степень выраженности гиперплазии эпителия была положена в основу классификации ФКИ, разработанной Коллегией американских патологов Выделяют непролиферативные фиброкистозные изменения, пролиферативные фиброкистозные изменения без атипии и с атипией Однако открытым остается вопрос о биологической сущности пролиферативной активности эпителия

Ряд исследователей указывают на то, что пролиферативные формы ФКИ могут иметь большое значение в формировании рака (Dixon J M , 1991; Boccardo F., Lunardi G.L , Petti A R , Rubagotti A , 2003, Hartmann L С , Sellers T A , Frost M H , 2005) Однако, известно.

Л

J

что не каждая пролиферативная форма ФКИ подвергается малигниза-ции, в то же время, нередко рак развивается на фоне непролифера-тивных форм ФКИ (Нейштадт Э Л., Воробьева О Л , 2003)

Для расширения представлений о пато- и морфогенезе ФКИ молочной железы необходимо сопоставление гистологических изменений в железе с иммуногистохимическими показателями функционального состояния ткани

Цель исследования

Изучить морфо-функциональные особенности эпителиальною компонента молочной железы при различных гистологических вариантах фиброкистозных изменений

Задачи исследования

1 Изучить морфологические проявления гиперплазии эпителиального компонента при различных формах ФКИ молочной железы

2 Определить количественные показатели экспрессии иммуно-гистохимических маркеров апоптоза (р53, Мс1-1) при различных гистологических формах ФКИ

3 Установить количественные показатели экспрессии иммуно-гистохимических маркеров пролиферации (РС^, К1-67) при различных гистологических формах ФКИ

4 Изучить гормональную рецепцию ткани молочной железы к эстрогенам при различных гистологических вариантах ФКИ

5. Выявить наиболее информативные имм\ногистохимические показатели функционального состояния ткани молочной железы при различной степени выраженности гиперплазии эпителиального компонента

Научная новизна

Установлено, что при фиброкистозных изменениях молочной железы у женщин до 40 лет наличие атрофических изменений в эпителии, гиперплазия миоэпителиальных клеток и появление лимфо-макрофагальных инфильтратов свидетельствуют о благоприятном течении заболевания, имеющем тенденцию к регрессу. Показана перспективность детального изучения экспрессии иммуногистохимиче-ских маркеров апоптоза у пациенток позднего репродуктивного и пе-рименопаузального возраста У этой группы женщин чаще встречает-

ся атипическая пролиферация эпителия, для которой характерно снижение активности программированной гибели клеток, что сопровождается усилением экспрессии Мс1-1 по сравнению с пролиферативной формой ФКИ без атмпии

Практическая значимость

Проведенное сравнительное морфо-функциональное исследование молочной железы позволило расширить представления о механизмах развития различных форм гиперплазии, разработать объективные критерии иммуногистохимической диагностики фиброки-стозных изменений молочной железы, с выделением критериев риска малигнизации Исследование тканевого гормонального статуса может служить дополнительным диагностическим признаком изменения качества эпителиальной пролиферации в молочной железе

Положения, выносимые на защиту

1 Морфогенез фиброкистозных изменений характеризуется первоначальным появлением структурно-функциональных перестроек в терминальных дольково-протоковых единицах молочной железы с последующим возникновением изменений в системе крупных выводных протоков

2 Возрастные инволютивные изменения молочной железы, затрагивающие как паренхиматозный, так и стромальный компонент, сочетаются с усилением пролиферативной активности эпителия у женщин старше 40 лет и с атипической гиперплазией - у пациенток старше 50 лет

3 Снижение экспрессии протеина Мс1-1 в паренхиме молочной железы при пролиферативной форме фиброкистозных изменений по сравнению с непролиферативной формой свидетельствует об усилении активности апоптоза эпителиальных клеток. При атипической форме фиброкистозных изменений молочной железы по сравнению с пролиферативной формой без атипии происходит увеличение экспрессии этого белка, свидетельствующее об угнетении запрограммированной клеточной гибели

4 Выраженное снижение рецелторной чувствительности ткани молочной железы к эстрогенам при атипической форме фиброкистозных изменений обуславливает нарушение механизмов гормональной регуляции на уровне эффекторного звена

Связь с научно-исследовательской работой Института

Диссертационная работа является темой, выполняемой по основному плану НИР ГУ НИИ акушерства и гинекологии им Д О Отта РАМН

Структура и объем диссертации

Диссертация изложена на 104 страницах печатного текста и состоит из введения, 5 глав, выводов и практических рекомендаций Текст иллюстрирован 27 таблицами и 34 рисунками. Библиографический список содержит 31 отечественный и 108 зарубежных источников

Публикации

По материалам диссертации опубликовано 6 печатных работ, из них статей - 1, тезисов докладов - 5

Апробация и реализация диссертации

Основные положения диссертации доложены и обсуждены на VII Всероссийской медико-биологической конференции молодых исследователей «Человек и его здоровье» (Санкт-Петербург, 2004), на I Международной конференции «Молекулярная медицина и биобезопасность» (Москва, 2004), на научной конференции молодых ученых «Санкт-Петербургские научные чтения» (Санкт-Петербург. 2005), на И Российском симпозиуме по химии и биологии пептидов (Санкт-Петербург, 2005), на юбилейной научной конференции молодых ученых Северо-Западного региона (Санкт-Петербург, 2006), на I Съезде патологоанатомов Республики Беларусь (Минск, 2006)

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Материал и методы исследования Характеристика исследуемого материала

Объектом исследования служила ткань, полученная при секторальной резекции молочной железы, проведенной у 118 женщин в возрасте от 16 до 56 лет Критерием включения в группу исследования служила гистологически верифицированная форма фиброкистоз-ньгх изменений молочной железы Критериями исключения из исследования являлись беременность, лактация, использование гормо-

нальных средств в течение 6 месяцев, предшествующих операции, признаки злокачественного новообразования молочной железы, острые воспалительные заболевания молочной железы Из иммуногисто-химического исследования были исключены варианты фиброкистоз-ных изменений со значительным фиброзом и выраженной атрофией эпителиального компонента, а также фиброкистозные изменения в сочетании с воспалением

Гистологические методы

Кусочки молочной железы объемом 1 см3 фиксировали в 10% забуференном формалине (pH 7,20), обезвоживали с помощью автоматической станции Leica TP 1020 и заливали в парафин Для обзорной окраски использовали гематоксилин и эозин

Иммуногистохимические методы

Иммуногистохимическое исследование проводили авидин-биотиновым иммунопероксидазным методом на парафиновых срезах ткани молочной железы с использованием моноклональных мышиных антител к PCNA - Anti-Proliferatmg Cell Nuclear Antigen, Clone PC-10 (1-300, Dako), Ki-67, Clone Ki-67 (1 25, Dako), p-53, Clone DO-7 (1.25, Dako), Mcl-1, Clone 38G3 (1.100, Novocastra), рецепторам эстрогенов - ER, Clone 6F11 (1 40, Dako)

Количественная оценка результатов иммуногистохимического исследования

Количественную оценку результатов иммуногистохимических реакций проводили с использованием системы компьютерного анализа микроскопических изображений, состоящей из микроскопа Nikon Eclipse Е400, цифровой камеры Nikon DXM1200, персонального компьютера на базе Intel Pentium 4, программного обеспечения АСТ-1, версия 2 12 и «Видеотест-Морфология 4 0»

Оценивали долю иммунопозитивных «структур» молочной железы в процентах (доля иммунопозитивных долек и протоков в общем числе долек и протоков во всем гистологическом срезе в процентах) и содержание исследуемых белков в клетке (ядре), используя показатель средней оптической плотности, и соотношение иммунопозитивных и иммунонегативных клеток (ядер) в ткани, используя показатель относительной площади иммуногистохимического окрашивания Измерение площади экспрессии производили в пикселях (X/Y=l).

Локальная оптическая плотность рассчитывалась по формуле: Эл = lg(^/lo),

где Ол - локальная оптическая плотность; 1ф - средняя яркость фона микрофотографии; 1о - яркость объекта в точке

Интегральная оптическая плотность рассчитывалась по формуле:

DH = £Ол,

где Dh - интегральная оптическая плотность, которая является суммой локальных плотностей всех точек (пикселей) объекта Средняя оптическая плотность рассчитывалась по формуле

Dc = Dh/N,

где. Dc - средняя оптическая плотность, N - количество точек изображения (пикселей), принадлежащих "объекту" (ядру, клетке)

Относительную площадь экспрессии (S, %) для маркеров р53, PCNA, Ki-67, ER вычисляли как отношение площади иммунопози-тивных ядер эпителиоцитов (S(+)„ep) к общей площади ядер эпителио-

Щ1ТОВ (Эвсеч ядер)

С = С /с

° °{+)ядер/1:,все\ ядер

Относительную площадь экспрессии (S, %) Мс1-1 вычисляли как отношение площади иммунопозитивных эпителиоцитов (S(+),nHTeJWii) к

Общей ПЛОЩаДИ ЭПИТеЛИОЦИТОВ (S^eroэпителия)

S S(+j3nHTeflHii/SBCero эпителия

Методы статистической обработки

Статистическая обработка материала выполнялась с использованием стандартного пакета программ прикладного статистического анализа (Statistica for Windows v. 6 0). Критический уровень достоверности нулевой статистической гипотезы (об отсутствии значимых различий или факторных влияний) принимали равным 0,05

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Морфогенез и возрастные особенности фиброкистозных изменений молочной железы

Проведенные исследования позволили установить, что на начальных этапах развития фиброкистозных изменений молочной железы патологические процессы происходят в терминальных дольково-протоковых единицах, в последующем распространяясь в восходящем направлении и захватывая систему крупных выводных протоков Такая закономерность подтверждается преобладанием дольковых вариантов ФКИ у женщин в возрасте 34-35 лет, протоковых и смешанных - у пациенток старше 40 лет Качественные изменения эпителиальной пролиферации характерны для женщин старше 50 лет; в этой возрастной группе резко увеличивается частота встречаемости атипической формы ФКИ

Возрастные изменения ткани молочной железы характеризуются, с одной стороны, активизацией пролиферации эпителия, с другой -усилением явлений регрессии, появлением кист, атрофией паренхиматозного компонента

Иммуногистохимические показатели пролиферации и апоптоза дополняют картину атрофических изменений в железе в более старших возрастных группах Тенденция к снижению экспрессии К1-67 в дольках и протоках молочной железы и увеличение оптической плотности ядер эпителиоцитов по маркеру К1-67 свидетельствуют о том, что с возрастом сокращается популяция делящихся клеток Возрастное снижение экспрессии антиапоптозного фактора Мс1-1 отражает активацию запрограммированной гибели эпителиоцитов молочной железы

Гистологические признаки благоприятного течения фиброкистозных изменений

Появление в ткани лимфо-макрофагальных инфильтратов и гиперплазия миоэпителиальных клеток свидетельствуют о преобладании явлений регрессии в ткани молочной железы при фиброкистозных изменениях (табл 1).

Таблица 1

Сочетание лимфо-макрофагальной инфильтрации и гиперплазии миоэпителия с признаками пролиферативных и регрессивных изменений эпителиальной ткани молочной железы

Изменения в ткани Частота сочетаний

с лимфо-макрофагальной инфильтрацией (%) с гиперплазией миоэпителия (%)

Ложные сосочки 1,8% 1,8%

Истинные сосочки 0,0 % 0,0 %

Солидные пролифераты в дольках 6,3 % 6,2 %

Солидные пролифераты в протоках 0,9 % 0,9 %

Криброз 3,5 % 1,8%

Кисты 10,6% 5,3 %

Атрофия эпителия 8,0 % 18,4%

Иммуногистохимические особенности ткани молочной железы при фиброкистозных изменениях с отсутствием пролиферации эпителия

Низкие значения оптической плотности ядер по показателю экспрессии РСЫА и высокие - по показателю экспрессии К ¡-67 согласуются с отсутствием гистологических признаков гиперплазии. Вступление клеток эпителия в митотическое деление снижено В эпителио-цитах происходят процессы, связанные с репарацией ДНК, о чем свидетельствует повышение экспрессии PCNA в отдельных клетках и в ткани в целом Локальное накопление дефектного белка р53 свидетельствует о блоке р53-опосредованного пути восстановления генетического аппарата в отдельных клетках Высокая экспрессия МсМ в ткани молочной железы отражает низкую активность запрограммированной гибели клеток; в апоптоз вступают лишь отдельные клетки эпителия с низкой экспрессией данного белка.

Иммуногистохимические особенности ткани молочной железы при фиброкистозных изменениях с умеренной пролиферацией эпителия

Фиброкистозные изменения с умеренно выраженными гистологическими признаками пролиферации характеризуются незначительной экспрессией Кл-67; отмечаются нарушения репаративных процессов ДНК, что подтверждается усилением экспрессии протеина р53; восстановление генетического аппарата происходит путем активации синтеза и накопления РС^, однако в отдельных клетках этот процесс нарушается В целом в ткани возрастает активность апоптоза. Данная группа фиброкистозных изменений отличается появлением отдельных клеток, которые, несмотря на свой низкий пролифератив-ный потенциал, имеют генетические дефекты и практически не вступают в апоптоз

Иммуногистохимические особенности ткани молочной железы при фиброкистозных изменениях с выраженной пролиферацией эпителия

Для фиброкистозных изменений ткани молочной железы с выраженной пролиферацией эпителиального компонента характерна высокая активность апоптоза Об этом свидетельствуют низкие значения площади и доли Мс1-1-иммунопозитивных эпителиальных структур Иммуногистохимические показатели экспрессии маркеров пролиферации (Кл-67 и РСМА) и нарушения репаративных процессов ДНК (р53 и PCNA) по содержанию в ткани отличаются незначительно.

Иммуногистохимические особенности ткани молочной железы при фиброкистозных изменениях с атипической пролиферацией эпителия

При фиброкистозных изменениях ткани молочной железы с атипической пролиферацией эпителия локальная продукция белков РС№А, Кь-67, р53, Мс1-1 в детально изученных пяти полях зрения практически одинакова. Отличия появляются только при рассмотрении препарата в целом Наряду с процессами повреждения ДНК и

делением клеток активно протекают репарация генетического аппарата и элиминация эпителиальных клеток путем апоптоза.

Особенности экспрессии иммуногистохимических маркеров апоптоза и пролиферации при различной степени выраженности пролиферативной активности эпителия молочной железы

Более выраженная экспрессия Мс1-1 в группе непролиферативной формы фиброкистозных изменений по сравнению с группами пациенток с пролиферативными и атипической формами фиброкистозных изменений в молочной железе свидетельствует об общей активации апоптоза в паренхиматозном компоненте при гиперплазии (табл 2).

Таблица 2

Показатели экспрессии протеина Мс1-1 при различной степени выраженности пролиферации эпителиального компонента молочной железы

Формы фиброкистозных изменений Бс Б ППС

непролиферативная 2,11±0,24 72,82±7,66 65,31 ±9,15

с умеренной пролиферацией 1,73±0,35 14,3±11,16* 10,39±3,95*

с выраженной пролиферацией 1,42±0,71 0,41±0,21*** 2,81±1,61**

с атипической пролиферацией 2,16±0,32 21,13±6,04* 16,64±1,14*

Примечания Отличия соответствующих признаков достоверны по сравнению с группой непролиферативной формы ФКИ * - (1=4,49; р<0,001); ** - (1=3,82; р=0,03); *** - (1=5,29, р<0,001) и по сравнению с группой атипической формы ФКИ (1=2,34; р=0,05).

Достоверные различия в группах непролиферативной формы ФКИ и пролиферативных форм как с атипией, так и без нее были получены по доле иммунопозитивных структур и оптической плотности экспрессии РСМА (табл. 3), а в группах без пролиферативной активности и с умеренной пролиферацией - по показателю оптической плотности экспрессии протеина Ю-67 (табл. 4).

Таблица 3

Показатели экспрессии протеина РСЫА при различной степени выраженности пролиферации эпителиального компонента молочной железы

Формы фиброки-стозных изменений Ос Б ППС

непролиферативная 1,96±0,04 23,26±5,40 58,60±9,21

с умеренной пролиферацией 2,12±0,05* 45,53±10,58 22,51±7,79**

с выраженной пролиферацией 2,11 ±0,07 44,16±5,52 21,55±8,80***

с атипической пролиферацией 2,05±0,02 35,63±2,23 60,72±7,23

Примечания. Отличия достоверны по сравнению с группой не-пролиферативной формы ФКИ * - (1=2,20; р<0,05); ** - (1=2,41; р<0,04) и атипической формы ФКИ (г=3,49; р<0,05), *** - (1=3,25; р<0,02).

Таблица 4

Показатели экспрессии протеина К1-67 при различной степени выраженности пролиферации эпителиального компонента молочной железы

Формы фиброки-стозных изменений Ос Б ППС

непролиферативная 2,07±0,02 20,27±2,81 29,02±6,85

с умеренной пролиферацией 2,15±0,02* 29,77±3,31 16,99±7,32

с выраженной пролиферацией 2,08±0,10 33,95±8,77 26,56±8,33

с атипической пролиферацией 2,11 ±0,25 28,43±6,23 37,22±9,18

Примечания. * - отличия достоверны по сравнению с группой непролиферативной формы ФКИ (1=2,19, р<0,05).

Таким образом, при усилении гистологических признаков пролиферации без атипии нарастает активность апоптоза. В группе атипи-

ческой формы фиброкистозных изменений, в отличие от фиброкм-стозных изменений с выраженной пролиферацией эпителия, происходит «срыв» механизма элиминации клеток, противостоящего быстрым темпам увеличения численности клеток эпителия

Общее увеличение PCNA в ткани при появлении признаков ати-пии свидетельствует об усилении пролиферации и, кроме того, может быть расценено как фактор, сдерживающий переход атипической формы фиброкистозных изменений в рак т situ

Экспрессия рецепторов к эстрогенам в ткани молочной железы при фиброкистозных изменениях

Изучена экспрессия а-эстрогеновых рецепторов (ER) в эпителиальном компоненте молочной железы при различных морфологических проявлениях гиперплазии Так, миоэпителиальная гиперплазия сопровождалась очаговым усилением экспрессии aER, что, возможно, связано с увеличением потребности в модулирующем влиянии данного типа рецепторов на pER миоэпителиальных клеток.

Различий в экспрессии рецепторов к эстрогенам при непролифе-ративной форме ФКИ, ФКИ с умеренной, выраженной и атипической пролиферацией обнаружено не было, ни при выявлении гистологических признаков гиперпластических процессов, ни при иммуноморфо-логическом исследовании с антителами к Ki-67 и PCNA По показателю оптической плотности экспрессии ER достоверно отличались лишь ФКИ с отсутствием пролиферации (Dc=2,16±0,01) и с атипической пролиферацией эпителия (Dc=2,09±0,02, t=3,24, р=0,004).

При объединении групп с умеренной и выраженной пролиферацией эпителия были получены достоверные отличия по доле ER-иммунопозитивных долек и протоков между группами пролифера-тивной и атипической форм фиброкистозных изменений (табл 5)

Таблица 5

Экспрессия эстрогеновых рецепторов при непролиферативной, пролиферативной и атипической формах фиброкистозных изменений молочной железы

Форма фиброки-стозной болезни Ос Б ППС

непролиферативная 2,16±0,01* 36,71±5,58 64,08±8,72

пролиферативная 2,12±0,02 39,84±4,32 78,01 ±6,45**

атипическая 2,09±0,02 37,13±1,95 55,88*2,84

Примечания Достоверно относительно атипической формы фиброкистозных изменений * - (1=3,24, р=0,004), ** - (1=2,17; р=0,04)

Данные, касающиеся зависимости экспрессии аЕК от активности апоптоза, противоречивы Уменьшение количества белка Мс1-1 в клетках эпителия молочной железы сопровождается снижением накопления а-ЕЯ С другой стороны, положительная корреляционная связь наблюдается между неактивной формой белка р53 и аЕЯ (табл 6)

Таблица 6

Зависимость экспрессии эстрогеновых рецепторов от экспрессии белков-регуляторов апоптоза (по результатам линейного корреляционного анализа)

Показатели экспрессии белков-регуляторов апоптоза и эстрогеновых рецепторов п г Р

Эс Мс1-1 и Рс ЕЯ 14 0,65 0,011

Б р-53 и Б ЕЯ 17 0,53 0,029

Б р-53 и ППС ЕЯ 17 0,49 0,048

ППС р-53 и Б ЕЯ 17 0,53 0,029

Таким образом, при атипической форме фиброкистозных изменений синтез и накопление эстрогеновых рецепторов носят очаговый характер. Отсутствие однонаправленных тенденций в величине экспрессии белков, участвующих в регуляции апоптоза, и рецепторов к эстрогенам связано с тем, что Мс1-1 и р-53 ответственны за разные пути реализации программы гибели клеток Кроме того, значение р-53 не ограничено участием только в апоптозе, этот белок участвует в репликации и репарации ДНК.

ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЯ

Анализ результатов изучения молочной железы при различных вариантах фиброкистозных изменений, с использованием гистологического и иммуногистохимического методов, позволил определить ряд диагностических факторов, играющих значительную роль в определении пролиферативного потенциала эпителия

Пролиферативные процессы в эпителии молочной железы часто сочетаются с явлениями регрессии, что может быть обусловлено как различной чувствительностью клеток к гормонам и факторам роста, так и механическими причинами.

Благоприятному течению гиперпластических процессов в молочной железе присуще появление лимфо-макрофагальных инфильтратов и гиперплазия миоэпителиальных клеток Оба признака сочетаются с явлениями регрессии в ткани железы при фиброкистозных изменениях Это согласуется с данными литературы Миоэпителиаль-ные клетки являются естественным барьером, разграничивающим строму (с базальной мембраной) и эпителий При гиперпластических процессах в молочной железе миоэпителий остается резистентным к факторам роста эпителия (Barsky S.H , Karlin N J , 2005) и выступает в роли супрессора опухолевого роста (Gudjonsson Т., Adriance М С., Sterniicht M.D et al, 2005).

Доказано, что в реализации противоопухолевого иммунитета принимают участие как гуморальная, так и клеточная формы иммунного ответа, те задействованы и Т-, и B-клетки (Петров Р.В., 1987, Song А , Song J , Tang X et al, 2007) Ту морсу прессорная активность макрофагов была изучена при исследовании карцином гортани (Ferrero V., Morra В., Garetto М et al., 1990) Возможно, макрофаги, находящиеся в составе инфильтратов в молочной железе, выполняют сходные функции

Ранее Т Б. Журавлевой (1954) развитие мастопатии было описано с позиций изменений стромы и паренхимы В настоящей работе фиб-рокистозные изменения рассмотрены в соответствии с морфологическими изменениями ткани молочной железы, присущими разным возрастным группам пациенток Установлено, что морфогенез фиброкистозных изменений характеризуется первичным возникновением в дольках с последующим распространением на систему протоков.

Определено также, что, несмотря на проявления возрастной атрофии молочной железы, которая характеризуется снижением содер-

жания в ткани иммуногистохимических маркеров пролиферации и активации апоптоза, у женщин старше 40-50 лет течение фиброки-стозных изменений претерпевает качественные изменения В возрасте 40 лет и старше отмечаются гистологические признаки усиления пролиферации эпителия, после 50 лету больных повышается частота перехода фиброкистозных изменений в атипическую форму Данная особенность должна учитываться при обследовании пациенток старших возрастных категорий

Количественные показатели экспрессии РСМА, К1-67 и р-53 имеют сходные значения для непролиферативной, пролиферативной и атипической форм фиброкистозных изменений При всех морфологических формах ФКИ наиболее информативным иммуногистохими-ческим маркером, отражающим изменения тканевого потенциала, является Мс1-1 Процессы апоптоза при пролиферативной форме фиброкистозных изменений происходят активнее, чем при атипической форме Закономерно, что запрограммированная клеточная гибель при фиброкистозных изменениях без гистологических и иммуногистохимических признаков пролиферации эпителия встречается значительно реже, что отражает медленное обновление клеточного состава и, следовательно, более высокую дифференцировку ткани

Экспрессия рецепторов к эстрогенам в ткани при атипической форме фиброкистозных изменений ниже, чем при пролиферативной форме При непролиферативной и атипической формах распространенность экспрессии является почти одинаковой, при этом при атипической гиперплазии эпителия увеличивается лишь локальная экспрессия эстрогеновых рецепторов в отдельных клетках Это приводит к снижению чувствительности большей части эпителиоцитов, имеющих признаки атипии, к гормональным регуляторным влияниям.

Таким образом, анализ данных, касающихся исследований функционально-морфологических особенностей доброкачественной гиперплазии молочной железы, позволил выделить признаки, на которые следует обращать внимание при гистологической верификации фиброкистозных изменений наличие лимфо-макрофагальной инфильтрации и гиперплазии миоэпителия, что указывает на менее агрессивную динамику развития фиброкистозных изменений, экспрессия антиапоп-тозного протеина Мс1-1 и рецепторов к эстрогенам, характеризующие особенности молекулярных механизмов регуляции в ткани молочной железы, возраст пациенток, при котором с большей частотой встречается тот или иной вариант фиброкистогных изменений.

выводы

I Установлена хронологическая последовательность морфогенеза фиброкистозных изменений в молочной железе на начальных этапах развития морфологические признаки фиброкистозных изменений определяются в дольках, протоки вовлекаются в патолог ический процесс вторично

2. Гиперпластические процессы в молочной железе характеризуются однотипностью локальных морфологических проявлений

3 Патоморфологические особенности развития фиброкистозных изменений заключаются в параллельном течении двух разнородных по биологическим потенциям процессов возрастной атрофии молочной железы и качественного изменения пролиферативного потенциала эпителиальной ткани, проявляющегося переходом эпителия от состояния покоя к активному делению у пациенток старше 40 лет и приобретением эпителиоцитами признаков атипии у больных после 50 лет

4. Определение экспрессии белка Мс1-1 имеет значение для характеристики активности апоптоза в ткани при различных формах фиброкистозных изменений

5. Уменьшение количества рецепторов к эстрогенам при атипической форме фиброкистозных изменений свидетельствует о выраженном снижении гормональной чувствительности ткани.

6 Проведенное исследование показало, что наиболее информативными морфо-функциональными критериями при оценке выраженности гиперпластических процессов в эпителии молочной железы является степень экспрессии МсИ и ЕЯ

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1 При морфологической верификации формы фиброкистозных изменений и оценке гистологических изменений в динамике следует обращать внимание на наличие лимфо-макрофагальных инфильтратов в ткани молочной железы и гиперплазии миоэпителиальных клеток.

2 У пациенток в возрасте старше 40 лет при пролиферативных формах фиброкистозных изменений молочной железы рекомендуется проводить иммуногистохимическое исследование с использованием антител к протеинам К¡-67 и МсМ

3 Для оценки гормональной чувствительности ткани молочной железы рекомендуется проводить иммуногисточимическое исследование с использованием антител к ЕЯ

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1 И Н Коспочек, А С Покровский Прогностическое значение антиапоптозного протеина Мс1-1 при дисгормональных гиперпластических процессах в молочной железе // Человек и его здоровье Материалы научно-практической конференции - СПб, 2005 - С 138-139

2 И Н Костючек Компьютерный анализ в оценке иммуноги-стохимических реакций с маркерами гиперпластических процессов в ткани молочной железы // Санкт-Петербургские научные чтения Материалы Международного молодежного медицинского конгресса -СПб, 2005 -С 105-106

3 И 10 Коган, И Н. Костючек Количественная оценка экспрессии полипептида Мс1-1 с антиапоптозной активностью при различных типах дисгормональных гиперплазий в молочной железе // II Российский симпозиум по химии и биологии пептидов Тезисы докладов и стендовых сообщений - СПб , 2005 - С 65

4 И Н Костючек, Т Н Новицкая. В А Корякина Экспрессия ядерного антигена пролиферирующих клеток - РСЫА в ткани молочной железы при непролиферативной форме фиброаденоматоза // Состояние окружающей среды и здоровье населения Северо-Западного региона Материалы научно-практической конференции - СПб, 2006 -С 105-106

5 И Н Костючек, И Ю. Коган, И М. Кветной Методологические подходы к количественной иммуногистохимической оценке экспрессии маркеров апоптоза и пролиферации в молочной железе // Арх патологии -2006 -Т 68,№ I.-С. 47-48

6 И Н Костючек, И.Ю Коган, И М Кветной. Иммуноморфоло-гическое исследование пролиферативной активности эпителия при различных формах фиброкистозных изменений молочной железы с использованием программы компьютерного анализа изображений // Высокие технологии, их значение в клинике и перспективы внедрения в практическое здравоохранение. Материалы I съезда патологоанатомов Республики Беларусь - Минск, 2006 -С 34-36

ЛР № 020496

Подписано в печать 20 07 2007 г Заказ № 650 Формат бумаги 60x84/16 Тираж 100 экз Уел пл 1,0

Санкт-Петербургская государственная медицинская академия им И И Мечникова Типография ООО «ЛАДОГА», Санкт-Петербург, Выборгская наб, д 29

ВЫВОДЫ

1. Установлена хронологическая последовательность морфогенеза фиброкистозных изменений в молочной железе: на начальных этапах развития морфологические признаки фиброкистозных изменений определяются в дольках, протоки вовлекаются в патологический процесс вторично.

2. Патоморфологические особенности развития фиброкистозных изменений заключаются в параллельном течении двух разнородных по биологическим потенциям процессов: возрастной атрофии молочной железы и качественного изменения пролиферативного потенциала эпителиальной ткани, проявляющегося переходом эпителия от состояния покоя к активному делению у пациенток старше 40 лет и приобретением эпителиоцитами признаков атипии у больных после 50 лет.

3. Определение экспрессии белка Мс1-1 имеет значение для характеристики активности апоптоза в ткани при различных формах фиброкистозных изменений.

4. Уменьшение количества рецепторов к эстрогенам при атипической форме фиброкистозных изменений свидетельствует о выраженном снижении гормональной чувствительности ткани.

5. Проведенное исследование показало, что наиболее информативными морфо-функциональными критериями при оценке выраженности гиперпластических процессов в эпителии молочной железы является степень экспрессии Мс1-1 и ER.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. При морфологической верификации формы фиброкистозных изменений и оценке гистологических изменений в динамике следует обращать внимание на наличие лимфо-макрофагальных инфильтратов в ткани молочной железы и гиперплазии миоэпителиальных клеток.

2. У пациенток в возрасте старше 40 лет при пролиферативных формах фиброкистозных изменений молочной железы рекомендуется проводить иммуногистохимическое исследование с использованием антител к Ki-67 иМс1-1.

3. Для оценки гормональной чувствительности ткани молочной железы рекомендуется проводить иммуногистохимическое исследование с использованием антител к ER.