Молекулярно-генетические аспекты основных осложнений аллогенных трансплантаций стволовых гемопоэтических клеток у онкогематологических больных

Зарайский, Михаил Игоревич

Диссертации по медицине → Гематология и переливание крови

Автореферат и диссертация по медицине (14.00.29) на тему:Молекулярно-генетические аспекты основных осложнений аллогенных трансплантаций стволовых гемопоэтических клеток у онкогематологических больных

ДИССЕРТАЦИЯ

Молекулярно-генетические аспекты основных осложнений аллогенных трансплантаций стволовых гемопоэтических клеток у онкогематологических больных - диссертация, тема по медицине

Зарайский, Михаил Игоревич Санкт-Петербург 2006 г.

Ученая степень: доктора медицинских наук

ВАК РФ: 14.00.29

Оглавление диссертации Зарайский, Михаил Игоревич :: 2006 :: Санкт-Петербург

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРНЫХ ДАННЫХ

1.1. Трансплантация стволовых гемопоэтических клеток 21 1'. 1.1. Исторические аспекты 22 1.1.2. Предтрансплантационное кондиционирование

1.2. Основные осложнения ТСГК

1.2.1. Острая «реакция трансплантат против хозяина»

1.2.1.1. Клинические аспекты оРТПХ

1.2.1.2. Патогенез оРТПХ

1.2.1.3. Участие клеточных регуляторов в оРТПХ

1.2.2. Осложнения, связанные с основным заболеванием

1.2.2.1. Лейкозогенез

1.2.2.2. Теломераза

1.2.2.3. Ген р

1.2.2.4. Генетические абберации

1.2.2.5. Клоналъность Т- и В- клеточного рецептора

1.2.3. Инфекционные осложнения

1.2.3.1. Инфекционные осложнения бактериальной природы

1.2.3.2. Инфекционные осложнения вирусной природы

1.2.3.3. Инфекционные осложнения грибковой природы

1.3. Минимальная остаточная болезнь 63 1.3.1. Общие лабораторные методы диагностики МОБ

1.4. Посттрансплантационный химеризм 70 1.4.1. Лабораторные подходы к оценке ПТХ

Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

2.1. Общая характеристика исследуемых групп

2.2. Принципы формирования исследуемых групп

2.3. Получение материала и его характеристика

2.3.1. Выделение лейкоцитов

2.3.2. Выделение геномной ДНК

2.3.3. Выделение тотальной РНК

2.3.4. Приготовление кДНК

2.4. Контроль качества выделенной ДНК и РНК

2.5. Генетическое аллельное типирование промоторного полиморфизма генов (АТПП)

2.6. Генетическая детекция наличия ДНК инфекционных агентов

2.7. Качественное исследование экспрессии генов интерлейкина-23 и рецептора к интерлейкину

2.8. Качественное исследование экспрессии генов Т- и Вклеточного рецепторов

2.9. Генетическое типирование типов транслокации Т(9; 22)

2.10. Исследование клональных реаранжировок Т- и В-клеточного рецепторов

2.11. Полуколичественное исследование экспрессии генов цитокинов теломеразы bcl

2.12. Выявление мутаций в гене р

2.13. Полуколичественная детекция генетических аббераций

2.14. Статистическая обработка полученных результатов

Глава 3. ОТЛАДКА ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИХ МЕТОДИК И ИХ

КОНТРОЛЯ КАЧЕСТВА

3.1. Генетическое аллельное типирование промоторного полиморфизма генов (АТПП).

3.2. Полуколичественное исследование экспрессии генов цитокинов.

3.3. Полуколичественное исследование экспрессии гена теломеразы QiTERT).

3.4. Исследование клональных ре аранжировок Т- и Вклеточного рецепторов.

3.5. Выявление мутаций гена р53.

Глава 4. МОЛЕКУЛЯРНО-ГЕНЕТИЧЕСКИЕ МЕХАНИЗМЫ

ОСНОВНЫХ ОСЛОЖНЕНИЙ ТСГК

4.1. Характеристика пациентов, получивших аутологичную ТСГК.

4.2. Характеристика пациентов, получивших аллогенную родственную ТСГК.

4.3. Характеристика пациентов, получивших аллогенную неродственную ТСГК.

4.4. Общий дизайн обследования ТСГК-пациентов

4.5. Острая реакция «трансплантат-против-хозяина» (оРТПХ).

4.5.1. Влияние предшествующей терапии на развитие оРТПХ.

4.5.2. Участие основных интерлейкинов в развитии оРТПХ.

4.5.3. Участие гена и белка bcl-2 в развитии оРТПХ.

4.5.4. Роль экспрессии гена раннего активационного фактора ИЛ-27Р в развитие оРТПХ.

4.5.5. Роль экспрессии гена ИЛ-23 в развитии оРТПХ.

4.5.6. Роль наличия экспрессии В-клеточного рецептора в развитии оРТПХ.

4.6. Молекулярно-генетические механизмы, способствующие развитию рецидива основного заболевания в посттрансплантационном периоде.

4.6.1. Клиническое значение выявления мутаций гена р53.

4.6.2. Клиническое значение оценки экспрессии РНК гена теломеразы (hTERT).

4.6.3. Клиническое значение исследования клональных реаранжировок Т- и В-КР в оценке риска развития рецидива.

4.6.3.1. Клиническое значение исследования клональных реаранжировок В-КР в оценке риска рецидива.

4.6.3.2. Клиническое значение исследования клональных реаранжировок Т-КР в оценке риска рецидива.

4.7. Детекция генетических аббераций.

4.8. Развитие инфекционных осложнений в посттрапсплантационном периоде (ПТП).

4.8.1. Характеристика некоторых инфекционных осложнений в

4.8.2. Связь развития вирусных осложнений с аллельными вариантами промоторных областей некоторых генов.

4.8.3. Связь вероятности развития вирусных осложнений с базисной экспрессией РНК генов ИЛ-6 и -10.

Глава 5. ИСПОЛЬЗОВАНИЕ МОЛЕКУЛЯРНО

ГЕНЕТИЧЕСКОГО ПОДХОДА В ОЦЕНКЕ ПОСТТРАНСПЛАНТАЦИОННОГО ХИМЕРИЗМА

5.1. Генетическое аллельное типирование промоторного полиморфизма генов.

5.2. Динамика посттрансплантационного химеризма.

5.3. Вероятность развития рецидива от состояния химеризма в ПТП.

Глава 6. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ

6.1. Молекулярные механизмы патогенеза острой реакции трансплантат против хозяина.

6.2. Молекулярные механизмы патогенеза рецидива основного заболевания в посттрансплантационном периоде

6.3. Молекулярные механизмы патогенеза развития инфекционных осложнений в посттрансплантационном периоде.

6.4. Молекулярные механизмы, определяющие состояние пост

ТСГК химеризма.

Выводы

Введение диссертации по теме "Гематология и переливание крови", Зарайский, Михаил Игоревич, автореферат

Основные успехи в лечении ряда онкологических и, в особенности, гематологических заболеваний в последнее время обусловлены разработкой и внедрением различных режимов высокодозной цитостатической терапии с последующей трансплантацией стволовых гемопоэтических клеток (ТСГК) (10, 13). Использование такого терапевтического подхода позволило существенно повысить показатели выживаемости пациентов, а также снизить вероятность возникновения рецидивов заболевания. Кроме того, в последнее время идет интенсивная разработка немиелоаблативных режимов кондиционирования перед пересадкой СПС. С помощью внедрения данных режимов удалось существенно расширить показания для ТСГК и снизить основные побочные действия цитостатиков на организм пациента (6, 158, 206, 210). Применение таких способов кондиционирования предъявляет повышенные требования к лабораторному обеспечению ТСГК в плане создания высокоинформативных систем для оценки процесса приживления трансплантата, раннего прогнозирования развития возможных осложнений, а так же для мониторинга состояния пациента в посттрансплантационном периоде.

Наиболее серьезным осложнением аллогенных ТСГК является острая реакция «трансплантат-против-хозяина» (оРТПХ), особенно III-IV степеней, существенно определяя смертность в раннем посттрансплантационном периоде (89, 126, 240, 352,). Основными регуляторами, определяющими степень выраженности РТПХ, являются цитокины: интерлейкин-1 (ИЛ-1), ИЛ-2, ИЛ-6, ИЛ-10, ФНО-а и др. (125, 129, 168, 175, 268). Спектр цитокинов и уровень их секреции достоверно коррелирует со степенью проявления основных симптомов РТПХ (92, 93). Кроме того, данные цитокины являются гуморальными медиаторами, контролирующими процессы иммунологической реактивности организма и играющими главную роль в развитии инфекционных осложнений бактериальной и вирусной природы и септического шока (26, 75, 243). Механизмы синтеза, секреции и функционирования цитокинов сложны, многоступенчаты и реализуются как на внутриклеточном (контроль транскрипции гена, трансляции и созревания белковой молекулы), так и внеклеточном (синтез рецепторов и антагонистов) уровнях. Однако наличие внеклеточных белковых структур, специфически связывающих цитокиновые молекулы, а также снижение количества клеток-продуцентов интерлейкинов на фоне цитотоксической и иммуносупрессивной терапии, особенно в раннем периоде после ТСГК, существенно снижает диагностическую значимость рутинных иммунологических методик в оценке степени тяжести осложнений. Учитывая, что синтез белковой молекулы интерлейкина и проявление его физиологической активности в развитии осложнений являются более отсроченными явлениями по сравнению с пиком накопления соответствующих мРНК, мониторные полуколичественные и количественные исследования последних в динамике могут служить ранним прогностическим фактором изменений активности иммунной системы пациента.

Таким образом, полуколичественное исследование уровня продукции мРНК основных цитокинов и их спектра позволит осуществлять раннее прогнозирование развития различных осложнений посттрансплантационного периода и проводить быструю оценку секреторной функции клеток-продуцентов независимо от уровня цитопении.

Продукция цитокинов клетками иммунной системы обуславливается генетическими особенностями организма (21). Огромная роль в регуляции этого процессе отводится внеэкзонным областям цитокиновых генов - промоторам. Именно биаллельный полиморфизм данных областей генов, связанный с заменой одного нуклеотида на другой, определяет степень экспрессии гена, а, следовательно, и уровень секреции цитокинов (90, 103, 303). Кроме того, используя генетические области выбранных цитокинов как систему биаллельных генов, расположенных на различных хромосомах, можно проводить быструю оценку посттрансплантационного химеризма на различных сроках после ТСГК, в том числе и количественно (120).

Таким образом, определение аллельного варианта промоторной области гена цитокинов позволит прогнозировать степень выраженности иммунологических реакций пациента, таких как РТПХ, отторжение трансплантата, вероятность развития инфекционных осложнений, и проводить мониторную оценку приживления донорских СГК (75, 265).

Другим аспектом, определяющим прогноз посттрансплантационного периода, и, как следствие, эффективность ТСГК, является исследование апоптоза. Апоптоз как один из механизмов программируемой клеточной гибели осуществляет надзор за клетками, несущими дефектную генетическую информацию. В процесс апоптоза включено множество различных белковых и генетических структур, однако центральную роль в его инициации и развитии играют белки ТР53 и BCL-2.

Мутации в 5-9 экзонах гена, кодирующего белок ТР53, приводят к блокированию апоптоза, что является основой для возникновения и прогрессирования опухолевого роста (306). Встречаемость мутаций в данном гене у пациентов с онкогематологическими заболеваниями составляет от 11 до 30% (в зависимости от нозологической формы) (216, 234). Большинство таких больных имеют более короткую выживаемость и частое рецидивирование заболевания. Кроме того, у этих пациентов чаще встречается состояние резистентности к группам химиопрепаратов, реализующим свой цитостатический эффект через ТР53-зависимый путь апоптоза (алкилирующие агенты, доксорубицин, метотрексат, блеомицин и т.д.).

Немаловажная роль в контролировании процесса апоптоза, особенно при лимфопролиферативных заболеваниях, отводится и проапоптотическому белку BCL-2 (208). В норме этот белок временно предотвращает апоптоз активированных В-лимфоцитов, позволяя последним реализовать пролиферативную и эффекторную фазы иммунного ответа. В супрессорную фазу белок BCL-2 теряет свою активность, что приводит к разрушению клеток. Нарушение регуляции продукции данного белка, связанное с гиперэкспрессией гена или с транслокацией t(14;l 8), позволяет клетке вначале стать нечувствительной к внешним апоптотическим стимулам (в том числе и индуцируемым полихимиотерапией), а в последствии реализовать механизмы ауторегуляции (109). Для этих пациентов (как и в случаях с мутациями в гене белка ТР53) препараты платины, этопозид, фшодарабин и некоторые другие химиотерапевтические агенты являются препаратами выбора.

Таким образом, данные по мутационной активности гена белка ТР53 и экспрессии гена BCL-2 необходимо учитывать не только при оценке прогноза возникновения рецидивов заболевания, но и при выборе конкретных режимов кондиционирования перед ТСГК.

Немало значимым исследованием в оценке эффективности ТСГК является мониторирование минимальной остаточной болезни (МОБ). Данный методический подход обычно заключается в поиске в предтрансплантационном периоде генетических маркеров, патогномоничных для конкретной нозологической формы (14), с последующей детекцией их после ТСГК. Как правило, к таким маркерам относятся различные виды хромосомных повреждений - t(9;22), t(15;17), t(8;22), dupMLL(llq23) (247) и др. Белковые продукты этих генов либо нарушают регуляцию тканеспецифических рецепторных структур (например, Т- и В-клеточных рецепторов) (315), либо включаются в процессы управления клеточным циклом (64, 223). Поиск мРНК таких химерных генов, несмотря на свою длительность и трудоемкость, является очень чувствительным и клинически значимым исследованием. Однако существуют два основных ограничения использования данной методики.

Во-первых, в условиях выраженной цитопении, которая обычно сопровождает ранние сроки после ТСГК, невозможно выделить достаточное количество РНК из периферической крови, а иногда и из пунктата костного мозга. Во-вторых, в настоящее время описано более сотни различных форм специфических хромосомных аберраций, исследование которых не всегда возможно силами одной лаборатории.

Очевидно, что в данной ситуации более перспективным является поиск альтернативных методик, использующих в качестве мишени ДНК-маркеры (2). К ним относятся оценка клональности Т- и В-клеточного рецепторов (для лимфопролиферативных заболеваний) или отмеченная выше оценка состояния промотерного полиморфизма некоторых генов (12), в том числе и цитокиновых. Необходимо отметить, что информативность последнего подхода определяется тем, что наряду с оценкой состояния заболевания позволяет проводить быструю оценку типа кроветворения (донор-пациент) даже при условии отсутствия генетических признаков опухолевой трансформации. Использование данных методов менее трудоемко и незначительно зависит от степени цитопении, что делает их использование доступным для большинства генетических лабораторий, а при условии оптимизации позволяет проводить рандомизированные исследования.

Таким образом, исследование МОБ на уровне РНК и ДНК-маркеров позволяет получать информацию как о состоянии заболевания, так и о функционировании трансплантированной гемопоэтической ткани.

Подводя итог приведенным данным, необходимо подчеркнуть, что молекулярно-генетический метод оценки эффективности ТСГК (3) и прогнозирования возможных осложнений по своей чувствительности и специфичности, намного превосходящий рутинно используемые клинический и цитогенетический методы, является наиболее универсальным и комплексный подходом, учитывающим как патогенетические механизмы развития онкогематологических заболеваний, так и динамику изменения состояния пациента в пре- и посттрансплантационном периодах.

Цель исследования.

Обосновать и разработать информативную систему молекулярно-генетической оценки эффективности трансплантаций стволовых гемопоэтических клеток и раннего прогнозирования посттрансплантационных осложнений у пациентов онкогематологического профиля.

Задачи исследования.

1. Изучить влияние различных типов химиотерапии, проводимых до начала режима кондиционирования на развитие острой реакции трансплантат против хозяина после аллогенных трансплантаций стволовых гемопоэтических клеток у опкогематологических больных в зависимости от нозологии.

2. Оценить риск развития острой реакции трансплантат против хозяина в зависимости от исходного уровня экспрессии генов интерлейкинов -1, -2, -6 и -10 у гематологических больных до трансплантации с учетом используемых режимов кондиционирования.

3. Провести мониторные исследования экспрессии генов bcl-2 и интерлейкинов -1, -2, -6, -10, -23 и -27Р у гематологических больных в посттрансплантационном периоде и выявить клиническую значимость изменения этих параметров для диагностики и раннего прогнозирования развития острой реакции трансплантат против хозяина.

4. Изучить клиническую значимость выявляемости экспрессии гена тяжелых цепей иммуноглобулина у гематологических больных независимо от нозологии для ранней диагностики острой реакции трансплантат против хозяина.

5. Оценить вероятность развития состояния первичной химиорезистентности и возникновения рецидива основного заболевания у онкогематологических больных после аллогенных трансплантаций стволовых гемопоэтических клеток в зависимости от мутационного статуса гена р53 и уровня экспрессии гена теломеразы QiTERT).

6. Определить клиническую значимость выявления мопоклональных реаранжировок генов Т- и В-клеточного рецепторов после аллогенных трансплантаций стволовых гемопоэтических клеток у пациентов с лимфопролиферативными заболеваниями как достоверных прогностических маркеров развития рецидива.

7. Оценить информативность молекулярно-генетической автоматизированной детекции хромосомных повреждений (t (1; 19), t (4; 11), t (12; 21), del (1), t (9; 22), inv (16), t (8; 21)) для мониторирования минимальной остаточной болезни у онкогематологических больных после трансплантаций стволовых гемопоэтических клеток.

8. Оценить информативность молекулярно-генетической детекции инфекционных агентов (Кандида альбиканс, Герпес вируса типов I и II, Цитомегаловируса, вируса Эпштейн-Барра) для ранней диагностики инфекционных осложнений у онкогематологических пациентов после трансплантации стволовых гемопоэтических клеток.

9. Оценить риск развития инфекционных осложнений вирусной природы в посттрансплантационном периоде у онкогематологических пациентов в зависимости от уровня исходной экспрессии генов интерлейкина-6 и -10 до начала кондиционирования, а также в зависимости от генотипа промоторных областей данных генов.

10. Разработать и проанализировать эффективность использования тест-системы, учитывающей аллельные различия в промоторных областях генов ИЛ-6, ИЛ-10, MDR-1 и МТГФР у реципиентов и доноров стволовых гемопоэтических клеток для оценки посттрансплантационного химеризма, приживления трансплантата и ранней диагностики развития рецидива основного заболевания. 11. Изучить корреляцию между наличием различных типов химеризма у онкогематологических пациентов после аллогенных трансплантации стволовых гемопоэтических клеток с риском развития рецидива в посттрансплантационном периоде.

Научная новизна.

Впервые на молекулярно-генетическом уровне с помощью полуколичественного метода проведена оценка динамики экспрессии генов интерлейкина-1, -2, -6, -10, -23, -27Р и bcl-2 у онкогематологических пациентов после трансплантации стволовых гемопоэтических клеток в зависимости от режима кондиционирования и развития пострансплаитационных осложнений. Показано, что исследованные генетические системы во многом определяют патогенез острой реакции трансплантат против хозяина, способствуют развитию инфекционных осложнений вирусной природы. Установлено, что острая реакция трансплантат против хозяина в зависимости от сроков возникновения имеет различные активационные пути и, следовательно, требует дифференцированного лечения. Предложенный метод оценки уровня экспрессии цитокиновых генов позволяет формировать группы пациентов с повышенным риском развития основных осложнений посттрансплантационного периода.

Установлено, что патогенез развития первичной химиорезистентности и возникновения рецидива основного заболевания у онкогематологических больных после трансплантаций стволовых гемопоэтических клеток в основном определяется наличием мутаций в гене р53 и повышенным уровнем экспрессии гена теломеразы (hTERT).

Практическая значимость работы.

Установлено, что повышение уровней экспрессии генов основных цитокинов (интерлейкина-1, -2, -6, -10, -23, -27Р) у онкогематологических пациентов после трансплантации стволовых гемопоэтических клеток происходит за 7-10 дней до развития клинических признаков острой реакции трансплантат против хозяина. Это позволит не только повысить эффективность диагностики данного осложнения, но и своевременно начинать его терапию. Анализ ранних активаторов В-лимфоцитов (повышение экспрессии генов bcl-2 и интерлейкина-6) при острой форме реакции трансплантат против хозяина показал, что данные клетки могут быть вовлечены в патогенез осложнения, особенно на ранних сроках после аллогенных трансплантаций. Это свидетельствует о необходимости очистки трансплантата от донорских В-лимфоцитов.

Выявлено, что повышение экспрессии гена теломеразы QiTERT) или наличие мутационной активности проапоптотического гена р53 определяют развитие состояния химиорезистентности у пациентов, как до начала специфической терапии, так и после трансплантации стволовых гемопоэтических клеток, что имеет важное прогностическое значение.

Применение тест-системы аллель специфичной идентификации генотипов промоторных областей генов ИЛ-6, ИЛ-10, MDR-1 и МТГФР у реципиентов и доноров стволовых гемопоэтических клеток позволяет разграничивать клинические варианты посттрансплантационного химеризма, а так же оценивать приживление трансплантата и выявлять ранний рецидив у онкогематологических пациентов независимо от режима кондиционирования.

Основные положения, выносимые на защиту.

1. Риск развития острой реакции трансплантат против хозяина и инфекционных осложнений вирусной природы у онкогематологических больных после аллогенных трансплантаций стволовых гемопоэтических клеток обуславливается исходным уровнем экспрессии генов интерлейкина-6 и -10 до начала кондиционирования.

2. Увеличение уровня экспрессии гена bcl-2 в раннем периоде после аллогенных трансплантаций стволовых гемопоэтических клеток у онкогематологических больных независимо от нозологии указывает на повышенный риск развития острой реакции трансплантат против хозяина самостоятельно и, особенно, при повышенной коэкспрессии генов интерлейкина-23 и -27Р.

3. Наличие экспрессии гена В-клеточного рецептора в день восстановления гемопоэза после аллогенных трансплантаций стволовых гемопоэтических клеток у онкогематологических больных независимо от нозологии коррелирует с развитием острой реакции трансплантат против хозяина.

4. Наличие мутаций в гене р53 или повышенного уровня экспрессии РНК гена теломеразы QiTERT) у онкогематологических больных независимо от нозологии определяет состояние химиорезистентности у гематологических пациентов и повышает риск развития рецидива основного заболевания в посттрансплантационном периоде.

5. Гематологические пациенты с наличием смешанного посттрансплантационного химеризма на момент восстановления гемопоэза имеют повышенный риск развития рецидива после аллогенной трансплантации стволовых гемопоэтических клеток.

Внедрение результатов исследования.

По материалам диссертационной работы опубликовано 2 пособия для врачей, 1 учебное пособие и методические рекомендации «Организация и проведение скрининга на наличие онкогенных вирусов папилломы человека в целях профилактики злокачественных новообразований органов репродуктивной системы» (в соавторстве) СПб., 2005, утвержденные в МЗ и CP Российской Федерации. Результаты работы внедрены в практику лечебной работы СПбГМУ им. акад. И.П. Павлова, больницы №31 (СПб) и Центра превентивной медицины (СПб), а так же используются для обучения студентов и курсантов ФПО кафедры гематологии, трансфузиологии и трансплантологии СПбГМУ им. акад. И.П. Павлова.

Публикации.

По материалам диссертации опубликовано 40 печатных работ. Из них статьи в журналах - 17, статьи в научных сборниках - 3, рефератов статей - 17 (из них - 13 в зарубежной печати), пособий для врачей - 2, учебных пособий - 1.

Апробация диссертации.

Основные положения диссертационной работы доложены на третьей ежегодной Российской онкологической конференции (СПб, 1999), международных симпозиумах «Современные направления в изучении лейкозов» (Гамбург, 2000, 2003, 2005), симпозиуме «Молодые ученые и специалисты - здравоохранению Санкт-Петербурга в XXI веке» (СПб, 2000), симпозиуме по лабораторной диагностике (СПб, 2001), ежегодном симпозиуме итальянского общества патологоанатомов и цитологов (Бавено-Лого Маджори, 2002), 28-м и 31-м симпозиумах Европейской группы по трансплантации костного мозга (ЕВМТ) (Монтерей, 2002, Прага, 2005), Российском национальном конгрессе кардиологов «От исследований к клинической практике» (СПб, 2002), III симпозиуме «Биологические основы терапии онкогематологических заболеваний у детей» (Москва, 2003), III Всемирном конгрессе «Новые тенденции в изучении заболеваний сердца» (Вашингтон, 2003).

Структура и объем диссертации.

Диссертационная работа состоит из введения, обзора литературы, описания методик и материала для исследования, трех глав результатов собственных исследований, выводов, практических рекомендаций и приложений. Текст диссертации изложен на 254 страницах машинописного текста и содержит 45 таблиц, 40 рисунков и 6 фотографий. Указатель литературы включает 373 отечественных и зарубежных источников.

Заключение диссертационного исследования на тему "Молекулярно-генетические аспекты основных осложнений аллогенных трансплантаций стволовых гемопоэтических клеток у онкогематологических больных"

ВЫВОДЫ.

1. Использование поддерживающей терапии (метотрексат, г ли век, 6-меркаптопурин и др.) у гематологических больных непосредственно до начала режима кондиционирования, не зависимо от нозологии, достоверно повышает риск развития острой реакции трансплантат против хозяина по сравнению с группами пациентов, получавших интенсивную полихимиотерапию и не получавшими специфическую терапию не менее, чем за месяц до трансплантации.

2. Острая реакция трансплантат против хозяина, независимо от режима кондиционирования, достоверно чаще встречается у гематологических больных с исходно повышенным уровнем экспрессии генов ИЛ-6 и ИЛ-10 до трансплантации по сравнению с пациентами, имеющими нормальный уровень экспрессии этих генов.

3. Острая реакция трансплантат против хозяина, возникающая у гематологических пациентов до момента восстановления гемопоэза опосредована активацией гена ИЛ-6, в то время как медиатором данной реакции, возникающей после тридцатого дня от начала трансплантации стволовых гемопоэтических клеток является ИЛ-1.

4. Повышение экспрессии гена bcl-2 у гематологических пациентов после трансплантации стволовых гемопоэтических клеток является ранним достоверным диагностическим критерием развития острой реакции трансплантат против хозяина особенно при повышенной коэкспрессии генов ИЛ-23 pi -27Р на момент восстановления гемопоэза.

5. Наличие экспрессии гена В-клеточного рецептора у гематологических больных на момент восстановления гемопоэза после трансплантации стволовых гемопоэтических клеток достоверно коррелирует с ранним развитием острой реакции трансплантат против хозяина.

6. Развитие состояния первичной химиорезистентности и вероятность возникновения рецидива основного заболевания у онкогематологических больных после аллогенных трансплантаций стволовых гемопоэтических клеток определяется наличием мутаций в 5-м - 9-м экзонах гена р53 и повышенным уровнем экспрессии гена теломеразы (hTERT).

7. Наличие моноклональных реаранжировок гена В-клеточного рецептора после аллогенных трансплантаций стволовых гемопоэтических клеток у пациентов с В-лимфопролиферативными заболеваниями является достоверным прогностическим маркером развития рецидива.

8. Исследование клональных реаранжировок генов Т- и В-клеточного рецепторов у пациентов с лимфопролиферативными заболеваниями в посттрансплантационном периоде является чувствительным методом мониторирования раннего развития рецидива.

9. Высокая информативность молекулярно-генетической детекции хромосомных повреждений (t (1; 19), t (4; 11), t (12; 21), del (1), t (9; 22), inv (16), t (8; 21)) при использовании автоматизированного протокола имеет важное значение в мониторировании минимальной остаточной болезни у онкогематологических больных после трансплантации стволовых гемопоэтических клеток.

10. Молекулярно-генетическая детекция инфекционных агентов вирусной природы (Герпес вируса типов I и II, Цитомегаловируса, вируса Эпштейн-Барра) является достоверным методом ранней диагностики инфекционных осложнений у онкогематологических пациентов после трансплантации стволовых гемопоэтических клеток.

11. У гематологических пациентов с «С/G» генотипом промоторной области гена ИЛ-6 (в положении -174) достоверно чаще развиваются инфекционные осложнения после трансплантации стволовых гемопоэтических клеток по сравнению с пациентами, имеющими генотипы «С/С» и «G/G».

12. Риск развития инфекционных осложнений вирусной природы в посттрансплантационном периоде был достоверно выше в группе гематологических пациентов с повышенным уровнем экспрессии гена ИЛ-10 до начала кондиционирования по сравненшо с пациентами, имеющими исходно нормальный уровень экспрессии этого гена.

13. Использование диагностического подхода, учитывающего аллельные различия в промоторных областях генов ИЛ-6, ИЛ-10, MDR-1 и МТГФР у реципиентов и доноров стволовых гемопоэтических клеток, позволило в 76,7% случаях проводить оценку посттрансплантационного химеризма, включая состояния приживления трансплантата и ранней диагностики рецидива независимо от режима кондиционирования.

14. Наличие смешанного химеризма или отсутствие химеризма в группе гематологических пациентов после аллогенных трансплантации стволовых гемопоэтических клеток на момент восстановления гемопоэза достоверно коррелирует с риском развития рецидива в посттрансплантационном периоде по сравнению с группой пациентов, имеющих донорский химеризм.

Практические рекомендации

1. Исследование исходного уровня экспрессии генов интерлейкина-1, -6 и -10 до начала кондиционирования у онкогематологических пациентов крайне важно для прогнозирования развития острой реакции трансплантат против хозяина и инфекционных осложнений после трансплантации стволовых гемопоэтических клеток.

2. Для ранней диагностики острой реакции трансплантат против хозяина и оценки эффективности ее терапии необходимо проводить мониторные исследования экспрессии генов интерлейкина-1, -2, -6, -10, -23 и -27Р и гена bcl-2 в посттрансплантационном периоде у онкогематологических пациентов.

3. Определение экспрессии гена В-клеточного рецептора у гематологических пациентов независимо от нозологии на момент восстановления гемопоэза после трансплантации стволовых гемопоэтических клеток является дополнительным диагностическим критерием риска развития острой реакции трансплантат против хозяина.

4. При формировании групп гематологических пациентов с повышенным риском развития рецидива основного заболевания после трансплантаций стволовых гемопоэтических клеток необходимо учитывать наличие мутаций гена р53 или повышенный уровень экспрессии гена теломеразы QiTERT).

5. Для ранней диагностики рецидива в посттрансплантационном периоде у пациентов с лимфопролиферативными заболеваниями необходимо проводить мониторинг клональных реаранжировок генов Т- и В-клеточного рецептора.

6. Генотипирование аллельных различий промоторных областей генов ИЛ-6, ИЛ-10, MDR-1 и МТГФР у реципиентов и доноров стволовых гемопоэтических клеток является эффективным методом детекции посттрансплантационного химеризма, приживления трансплантата и ранней диагностики рецидива независимо от режима кондиционирования и нозологической формы.

Список использованной литературы по медицине, диссертация 2006 года, Зарайский, Михаил Игоревич

1. Абдулкадыров К. М., Бессмельцев С. С., Рукавицын О. А. Хронический миелолейкоз,- М.: Спец. лит., 1998. 464 с.

2. Виноградская Г.Р., Маринец О.В. ПЦР-технологии в диагностике, прогнозе и контроле терапии онкологических заболеваний // Вопр. онкологии,- 2001,- Т.47, №1.- С.7-17.

3. Владимирская Е.Б. Роль ростовых факторов в регуляции кроветворения // Гематология и трансфузиология 2000,- №6.-С.4-9.

4. Воробьев А.И., Франк Г.А., Кочемасов В.В. и др. Приоритеты в изучении гемобластозов// Вестн. РАМН,- 1999.- №11.- С.56-59.

5. Воронова О.Ю., Волкова М.А., Френкель М.А. и др. Анализ результатов различных немиелоаблативных программ терапии острых лейкозовМ0-М2, М4-М7 ФАБ-вариантами (по данным РОКЦ РАМН им. Блохина) // Гематология и трансфузиология-2003.-№3.-С. 10-13.

6. Карпов Р.С., Канская Н.В., Осипов С.Г. Роль иммунной системы в развитии гиперлипопротеидемий,- Томск: Изд. Томск ун-та, 1990,- 156 с.

7. Кассирский И.А., Алексеев Г.А. Клиническая гематология. -М., 1970.-800 с.

8. Лушников Е. Ф., Абросимов А. Ю., Габай В. Л. В и др. Гибель клетки (апоптоз).- М.: Медицина, 2001,- 192 с.

9. Максимов А.А. Соединительная ткань и кроветворные ткани // Руководство по микроскопической анатомии,- 1927.

10. Маторова О.Н., Зеегер К., Румянцев А.Г. Генетический полиморфизм ферментов, участвующих в метаболизме лекарственных препаратов и его роль в канцерогенезе // Гематололия и трансфузиология- 2000,- №6,- С.40-43.

11. Меиткевич Г.Л., Долгополов И.С., Попа А.В. и др. Трансплантация стволовых клеток крови в детской онкологии //Вестн. РАМН.-2001,- №9,- С.89-92.

12. Моисеев С.Н., Мартынкевич И.С., Грицаев С.В. и др. О значении цитогенетических исследований в процессе лечения острого миело бластного лейкоза // Гематология и трансфузиология-1996.- Т.4.- №1,- С.41-43.

13. Никитин Е.А., Грецов Е.М. Минимальная остаточная болезнь при В-клеточном хроническом лимфолейкозе // Соврем, онкология,- 2006.- Т.8, №1,- С.43-47.

14. Порешина Л.П., Донсков С.И., Зотиков Е.А. и др. Варианты эритроцитарного химеризма при аллогенной трансплантации костного мозга онкогематологическим больным: Докл. на III Всероссийском съезде по трансплантологии и искусственным органам, Москва, 2005г.

15. Программированная клеточная гибель / Под ред. B.C. Новикова. СПб.: Наука, 1996. - 276с.

16. Руководство по гематологии. В 2 т. Т.1 /Под ред. А.И. Воробьева, Д.И. Лорие. М., 1985. - 446 с.

17. Румянцев А.Г., Владимирская Е.Б. Статус педиатрической онкогематологической службы в России //Гематология и трансфузиология 1996.- №2.- С.3-7.

18. Савченко В.Г., Паровичникова Е.Н., Глясова Г.А. и др. Результаты 2,5 летней работы Российского Мультицентрового Исследования по лечению острого миелоидного лейкоза у взрослых// Терапевтический архив,- 1995.- №7.- С.8-12.

19. Сенников С.В., Силков А.Н., Козлов В.А. Аллельные варианты и изоформы цитокинов в диагностике и патогенезе иммунопатологических состояний // Иммунология.- 2002.-Т.23, №4.- С.243-250.

20. Скворцова Ю.В., Балашов Д.Н., Дышляева З.М. и др. Реакция "трансплантат против хозяина": встречаемость, клиническая структура, результаты прфилактики и терапии // Вопр. гематологии/онкологиии иммунопатологии в педиатрии.-2004,- Т.З, №2,- С.64-71.

21. Скворцова Ю.В., Скоробогатова Е.В., Масчан А.А. Реакция «трансплантат против хозяина» при аллогенной трансплантации гемопоэтических стволовых клеток у детей II Вопр. гематологии/онкологиии иммунопатологии в педиатрии,- 2004.- Т.З, №1.- С.83-90.

22. Тотолян А.А., Балдуева И.А., Бубнова Л.Н. и др. Стандартизация иммунофенотипирования человеческой крови и клеток костного мозга. // Клинич. лаб. диагностика.- 2001,-№8,- С.38-45.25. http://www.ncbi.nlm.nih.gov/

23. Abdallah A.N., Boiron J.M., Attia Y. Plasma cytokines in graft vs host disease and complications following bone marrowtransplantation // Hematology cell therapy- 1997,- N 39(1).- P.27-32.

24. Affleck D.G., Bull D.A., Albanil A. et al. Interleukin-18 production following murine cardiac transplantation: correlation with histologic rejection and the induction of INF-gamma // Journal interferon cytokine research.- 2001.- N 21(1).- P.l-9.

25. Aldous W.K., Marean A.J., DeHart M.J., Moore K.H. Fluorescent detection of telomerase activity // Methods molecular biology. -2002,-N 191,-P.137-146.

26. Amundson S.A., Myers T.G., Scudiero D. An informatics approach identifying markers of chemosensitivity in human cancer cell lines // Cancer research. -2000,- N 60(21).-P.6101-6110.

27. Anasetti C. Advances in the prevention of graft-versus-host disease after hematopoietic cell transplantation // Transplantation.- 2004,-N 77. P.79-83,- Suppl. 9.

28. Anasetti C. Advances in unrelated donor hematopoietic cell transplantation: improved matching and use of blood stem cells // Haematologica.- 2002.- N 87.- P. 1-3. Suppl. 8.

29. Annino L., Ferrari A., Lamanda M. et al. PCR-detectable transcripts in long-term remission of P190(BCR/ABL)-positive acute lymphoblastic leukemia // Blood.- 2000.- N 95,- P. 40184019.

30. Archuleta T.D., Devetten M.P., Armitage J.O. Hematopoietic stem cell transplantation in hematologic malignancy // Panminerva medica.- 2004.- N 46,- P.61-74.

31. Au W.Y., Chan E.C., Lie A.K. Poor engrafitment after allogeneic bone marrow transplantation: role of chimerism analysis in treatment and outcome // Annals hematology.- 2003.- N 82(7).-P.410-415.

32. Awad M.R., Webber S., Boyle G. et al. The effect of cytokine gene polymorphisms on pediatric heart allograft outcome // Journal heart and lung transplantology.- 2001.- N 20(6).- P.625-630.

33. Bacigalupo A., Frassoni F., Van Lint M.T. Bone marrow or peripheral blood as a source of stem cells for allogeneic transplants // Current opinion in hematology.- 2000,- N 7(6).- P. 343-347.

34. Bacigalupo A., Palandri F. Management of acute graft versus host disease (GvHD) // Hematology journal.- 2004,- N 5(3).- P.189-196.

35. Bacigalupo A., Valle M., Podesta M. et al. T-cell suppression mediated by mesenchymal stem cells is deficient in patients with severe aplastic anemia // Experimental hematology.- 2005.- N 33(7).-P. 819-827.

36. Bacigalupo A. Second EBMT Workshop on reduced intensity allogeneic hemopoietic stem cell transplants (RI-HSCT) // Bone marrow transplantology.- 2002,- N 29(3).- P. 191-195.

37. Baker S.J., Fearon E.R., Nigro J.M. et al. Chromosome 17 deletions and p53 gene mutations in colorectal carcinomas // Science.- 1989.- N 244(4901).- P. 217-221.

38. Baran-Marszak F., Feuillard J., Najjar I. et al. Differential roles of STAT1 alpha and STATlbeta in fludarabine-induced cell cycle arrest and apoptosis in human В cells // Blood.- 2004,- N 104(8).-P. 2475-2483.

39. Barfield R.C., Otto M., Houston J., et al. A one-step large-scale method for T- and B-cell depletion of mobilized PBSC for allogeneic transplantation // Cytotherapy.- 2004,- N 6(1).- P. 1-6.

40. Barry M., Bleackley R.C. Cytotoxic T lymphocytes: all roads lead to death // National review of immunology.- 2002,- N 2(6).- P. 401-409.

41. Basara N., Roemer E., Kraut L. et al. Reduced intensity preparative regimens for allogeneic hematopoietic stem cell transplantation: a single center experience // Bone marrow transplantation.- 2002.- N 30(10).- P. 651-659.

42. Becker К., Pan D., Whitley C.B. Real-time quantitative polymerase chain reaction to assess gene transfer // Human gene therapy.- 1999,- N 10(15).- P. 2559-2566.

43. Beilhack A., Schulz S., Baker J. et al. In vivo analyses of early events in acute graft-versus-host disease reveal sequential infiltration of T-cell subsets // Blood.- 2005,- N 106(3).- P. 11131122.

44. Bensinger W.I., Martin P.J., Storer B. et al. Transplantation of bone marrow as compared with peripheral-blood cells from HLA-identical relatives in patients with hematologic cancers // New England journal of medicine.- 2001,- N 344(3).- P. 175-181.

45. Ben-Yosef Y., Miller A., Shapiro S. et al. Hypoxia of endothelial cells leads to MMP-2-dependent survival and death // American journal physiology and cell physiology.- 2005,- N 289(5).- P. 1321-1331

46. Billinham R.E., Brent L. A simple method for inducing tolerance of skin homografits in mice // Transplantology bulletin.- 1957,- N 4(2).-P. 67-71.

47. Biondi A., Rambaldi A. Acute promyelocytic leukemia.-Leukemia.- 7th edn.- Philadelphia.- 2002,- P. 529-543.

48. Blaha P., Bigenzahn S., Koporc Z. et al. The influence of immunosuppressive drugs on tolerance induction through bone marrow transplantation with costimulation blockade // Blood.-2003.- N 101(7).- P. 2886-2893.

49. Blazar B.R., Taylor P.A., Panoskaltsis-Mortari A. et al. Opposing roles of CD28:B7 and CTLA-4:B7 pathways in regulating in vivo alloresponses in murine recipients of MHC disparate T cells // Journal immunology.- 1999,-N 162(11).-P. 6368-6377.

50. Boissonnas A., Combadiere B. Interplay between cell division and cell death during TCR triggering //European journal of immunology.- 2004,- N 34(9).- P. 2430-2438.

51. Bonifazi F., Bandini G., Giovamiini M. et al. GVHD and prognostic factors // American journal hematology.- 2006,- N 81(3).-P. 221-222.

52. Bottcher S., Ritgen M., Pott C. et al. Comparative analysis of minimal residual disease detection using four-color flow cytometry, consensus IgH-PCR, and quantitative IgH PCR in CLL after allogeneic and autologous stem cell transplantation //

53. Leukemia.- 2004.- N 18(10).- P. 1637-1645.

54. Boxer L.M., Dang C.V. Translocations involving c-myc and c-myc function // Oncogene.- 2001.- N 20(40).- P. 5595-5610.

55. Brown A.T., Sims R.E., Raybould T.P. et al. Oral gram-negative bacilli in bone marrow transplant patients given chlorhexidine rinses // Journal dent research.- 1989,- N 68(7).- P. 1199-1204.

56. Brown G.R., Thiele D.L. T-cell activation and differentiation are regulated by TNF during murine DBA/2->B6D2Fl intestinal graft-versus-host disease // Journal clinical immunology.- 2000,- N 20(5).-P. 379-388.

57. Brunori M., Luciano P., Gilson E., Geli V. The telomerase cycle: normal and pathological aspects // Journal molecular medicine.-2005.-N83(4).-P. 244-257.

58. Campana D., Coustan-Smith E. Minimal residual disease studies by flow cytometry in acute leukemia // Acta haematology.- 2004,-N112(1-2).-P. 8-15.

59. Campling B.G., el-Deiry W.S. et al. Clinical implications of p53 mutations in lung cancer // Methods molecular medicine.- 2003.- N 75,-P. 53-77.

60. Cartwright N.H., Keen L.J., Demaine A.G. et al. A study of cytokine gene polymorphisms and protein secretion in renal transplantation // Transplantation immunology.- 2001,- N 8(4).- P. 237-244.

61. Cavet J., Lennard A., Gascoigne A. et al. Constrictive pericarditis post allogeneic bone marrow transplant for Philadelphia-positive acute lymphoblastic leukaemia // Bone marrow transplantation.2000,-N25(5).-P. 571-573.

62. Chen X., Pan Q., Stow P. et al. Quantification of minimal residual disease in T-lineage acute lymphoblastic leukemia with the TAL-1 deletion using a standardized real-time PCR assay // Leukemia.2001,-N15.- P. 166-170.

63. Cheng X., Chelc Z., Wang W. et al. Relationship among telomerase activity, expression of human telomerase reverse transkriptase (hTERT) and expression of c-myc in acute leukemia // Chinese Journal of Cancer.- 2003,- N 22(11).- P. 1175-1179.

64. Cimino G., Elia L., Rapanotti M.C. et al. A prospective study of residual-disease monitoring of the ALL1/AF4 transcript in patientswith t(4;ll) acute lymphoblastic leukemia // Blood.- 2000,- N 95,-P. 96-101.

65. Cohen J.S., Paz I.B., O'Donnell M.R. et al. Treatment of perianal infection following bone marrow transplantation // Disease Colon Rectum.- 1996,-N 39(9).-P. 981-985.

66. Comar M., D'Agaro P., Andolina M. et al. Hemorrhagic cystitis in children undergoing bone marrow transplantation: a putative role for simian virus 40 // Transplantation.- 2004,- N 78(4).- P. 544548.

67. Consoli U., El-Tounsi I., Sandoval A. et al. Differential induction of apoptosis by fludarabine monophosphate in leukemic В and normal T cells in chronic lymphocytic leukemia // Blood.- 1998,-N91(5).-P. 1742-1748.

68. Contassot E., Robinet E., Angonin R. et al. Differential effects of cyclosporin A on the alloreactivity of fresh and ex vivo-expanded T lymphocytes // Bone marrow transplantation.- 1998.- N 22(11).-P. 1097-1102.

69. Cooke K.R., Ferrara J.L. A protective gene for graft-versus-host disease // New England journal of medicine.- 2003.- N 349(23).- P. 2183-2184.

70. Cora Т., Acar H., Kaynak M. Molecular cytogenetic detection of meiotic segregation patterns in sperm nuclei of carriers of 46,XY,t(l5; 17)(q21; q25) // Journal of andrology.- 2002.- N 23(6).- P. 793-798.

71. Counter C., Gupta J., Harley C. et al. Telomerase activity in normalleukocytes and in hematologic malignancies // Blood -1995,-N9.-P. 2315-2320.

72. Couriel D.R., Saliba R.M., Giralt S. et al. Acute and chronic graft-versus-host disease after ablative and nonmyeloablative conditioning for allogeneic hematopoietic transplantation // Biology blood marrow transplantation.- 2004,- N 10(3).- P. 178185.

73. Curtis R.E., Rowlings P.A., Deeg H.J. et al. Solid cancers after bone marrow transplantation // New England journal of medicine.-1997,- N 336(13).- P. 897-904.

74. Das H., Imoto S., Murayama T. Kinetic analysis of cytokine gene expression in patients with GVHD after donor lymphocyte infusion // Bone marrow transplantation.- 2001,- N 27(4).- P. 373-380.

75. Daser A., Mitchison H., Mitchison A. et al. Non-classical-MHC genetics of immunological disease in man and mouse. The key role of pro-inflammatory cytokine genes // Cytokine.- 1996.- N 8,- P. 593.

76. Dausset J., Degos L., Fellous M. et al. Formal genetics of the HL-Aregion// Genetics.- 1975.- N 19.- P. 251-262.

77. De Santis D., Bishara A., Witt C.S. et al. Natural killer cell HLA-C epitopes and killer cell immunoglobulin-lilce receptors both influence outcome of mismatched unrelated donor bone marrow transplants // Tissue antigens.- 2005.- N 65(6).- P. 519-528.

78. Deeg H.J. Cytokines in graft-versus-host disease and the graft-versus-leukemia reaction // Internal journal hematology.- 2001,- N 74(1).-P. 26-32.

79. Del Bino G., Li X., Traganos F., Darzynkiewicz Z. Altered susceptibility of differentiating HL-60 cells to apoptosis induced by antitumor drugs // Leukemia.- 1994.- N 8(2).- P. 281-288.

80. Del Poeta G., Venditti A., Del Principe M.I. et al. Amount of spontaneous apoptosis detected by Bax/Bcl-2 ratio predicts outcome in acute myeloid leukemia (AML) // Blood.- 2003,- N 101(6).-P. 2125-2131.

81. Dickinson A.M., Cullup H. et al. GvHD risk assessment in hematopoietic stem cell transplantation: role of cytokine gene polymorphisms and an in vitro human skin explant model // Human immunology.- 2000.- N 62.- P. 1266-1276.

82. Dickinson A.M., Cavet J., Cullup H. et al. GvHD risk assessment in hematopoietic stem cell transplantation: role of cytokine gene polymorphisms and an in vitro human skin explant model // Human immunology.- 2001.- N 62(11).- P. 1266-1276.

83. Dinarello C.A. Role of pro- and anti-inflammatory cytokines during inflammation: experimental and clinical findings // Journal biology regulation homeostasis agents.- 1997.- N 11(3).- P. 91103.

84. Double J.A. Telomerase as a therapeutic target. Therapeutic potential of telomerase inhibitors // Methods molecular biology.-2003.-N191.-P. 209-16.

85. Double J.A. Telomerase as a therapeutic target. Therapeutic potential of telomerase inhibitors // Methods molecular biology.-2002.-N191)7).- P. 209-16.

86. Duffner U., Lu В., Hildebrandt G.C. et al. Role of CXCR3-induced donor T-cell migration in acute GVHD // Experimental hematology.- 2003.- N 31(10).- P. 897-902.

87. Durrant I.J., Richards S.M., Prentice H.G. et al. The medical research council trials in adult acute lymphocytic leukemia // Hematology/oncology clinics of North America.- 2000.- N 14(6).-P. 1327-1352.

88. Eckert С., Landt О., Taube Т. et al. Potential of LightCycler technology for quantification of minimal residual disease in childhood acute lymphoblastic leukemia // Leukemia.- 2000.- N 14(2).-P. 316-323.

89. Ehninger G., Neubauer A Rapid quantification of mixed chimerism using multiplex amplification of short tandem repeat markers and fluorescence detection // Bone marrow transplantation.- 1999,-N 23,-P. 1055-1060.

90. Ellison C.A., Natuik S.A., Mcintosh A.R. et al. The role of interferon-gamma, nitric oxide and lipopolysaccharide in intestinal graft-versus-host disease developing in F1-hybrid mice // Immunology.- 2003,- N 109(3).- P. 440-449.

91. Elmaagacli A.H. Real-time PCR for monitoring minimal residual disease and chimerism in patients after allogeneic transplantation // Internal journal hematology.- 2002,- N 16- P. 204-205.

92. Engelhardt M., Mackenzie K., Drullinsky P. et al.Telomerase Activity and Telomere Length in Acute and Chronic Leukemia, Pre- and Post-ex Vivo Culture // Cancer research.- 2000,- N 60,- P. 610-617.

93. English D., Klingemann H.G. The foundations of cellular therapy: Barnes and Loutit, 1957 // Journal hematotherapy stem cell research.- 2001,- N 10(3).- P. 323-324.

94. Faderl S., Talpaz M., Estrov Z. et al. The biology of chronic myeloid leukemia // New England journal of medicine.- 1999,- N 341,-P. 164-172.

95. Fenaux P., Preudhomme C., Quiquandon I. et al. Mutations of the P53 gene in acute myeloid leukaemia // British journal haematology.- 1992,- N 80(2).- P. 178-183.

96. Fenk R., Ak M., Kobbe G. et al. Levels of minimal residual disease detected by quantitative molecular monitoring herald relapse in patients with multiple myeloma // Haematologica.- 2004.- N 89(5).-P. 557-566.

97. Ferra C., de Sanjose S., Gallardo D., et al. IL-6 and IL-8 levels in plasma during hematopoietic progenitor transplantation // Haematologica.- 1998,-N 83(12).-P. 1082-1087.

98. Ferrara J.L., Cooke K.R., Teshima T. The pathophysiology of acute graft-versus-host disease // Internal journal hematology.-2003.-N78(3).-P. 181-187.

99. Ferrara J.L., Yanik G. Acute graft versus host disease: pathophysiology, risk factors, and prevention strategies // Clinical advanced hematology oncology.- 2005.- N 3(5).- P. 415-419.

100. Foster A.E., Marangolo M., Sartor M.M. et al. Human CD62L-memory T cells are less responsive to alloantigen stimulation than CD62L+ naive T cells: potential for adoptive immunotherapy and allodepletion // Blood.- 2004,- N 104(8).- P. 2403-2409.

101. Frostegard J., Ulfgren A.K., Nyberg P. et al. Cytokine expression in advanced human atherosclerotic plaques: dominance of proinflammatory (Thl) and macrophage-stimulating cytokines // Atherosclerosis.- 1999.-N 145(1).-P. 33-43.

102. G. Kogler, M. Wilke, M. Wilke. et al. Cytokine gene polymorphism of the recipient influences the development of acute graft versus host disease in HLA mismathed cord blood transplants // Bone marrow transplantation.- 2000.- N 25.- P. 4.

103. Gallardo D., Rodriguez-Luaces M., Arostegui J.I. et al. Follow-up of cliimerism status after allogeneic HLA-mismatched stem cell transplantation by detection of non-sliared HLA alleles // Haematologica.- 2000.- N 85,- P. 848-854.

104. Garcia-Sanz R., Lopez-Perez R., Langerak A.W. et al. Heteroduplex PCR analysis of rearranged immunoglobulin genes for clonality assessment in multiple myeloma // Haematologica.-1999,-N84(4).-P. 328-335.

105. Gasparetto E.L., Ono S.E., Escuissato D. et al. Cytomegalovirus pneumonia after bone marrow transplantation: high resolution CT findings // British journal radiology.- 2004.- N 77(921).- P. 724727.

106. Ghosh K., Shenoy A.K., Al-Mahrooqi Z. Bacteriological infections during the first hundred days of allogenic bone marrow transplantation-experience from Oman // Journal association physicians India.- 2002.- N 50,- P. 910-912.

107. Glucksberg H., Storb R., Fefer A., et al. Clinical manifestations of graft-versus-host disease in human recipients of marrow from HLA-matched sibling donors // Transplantation.- 1974.- N 18,- P. 295-304.

108. Gorin N.C. Autologous stem cell transplantation in acute myelocytic leukemia // Blood.- 1998,- N 92(4).- P. 1073-1090.

109. Gratwohl A., Baldomero H., Horisberger B. et al. Current trends in , hematopoietic stem cell transplantation in Europe // Blood.- 2002,1. N100(7).-P. 2374-2386.

110. Gratwohl A. , Baldomero H., Demirer T. et al. Hematopoetic stem cell transplantation for solid tumors in Europe // Annals of oncology.- 2004,- N 15,- P. 653-660.

111. Greider C.W., Blackburn E.H. A telomeric sequence in the RNA of Tetrahymena telomerase required for telomere repeat synthesis // Nature.- 1989,- N 337(6205).- P. 331-337.

112. Grigg A., Vecchi L., Bardy P. et al. G-CSF stimulated donor granulocyte collections for prophylaxis and therapy of neutropenic sepsis // Australian New-Zeland journal of medicine.- 1996.- N 26(6).-P. 813-818.

113. Grigg A. et al. Prophylaxis and treatment of patients with aspergillosis: an overview, including the Royal Melbourne Hospital experience // Journal antimicrobial chemotherapy.- 2002,-N49 Suppl l.-P. 75-80.

114. Grimwade D. The pathogenesis of acute promyelocytic leukaemia: evaluation of the role of molecular diagnosis and monitoring in the management of the disease // British journal haematology.- 1999,-N106,-P. 591-613.

115. Gump J., McGavran L., Wei Q. Analysis of TP53 mutations in relapsed childhood acute lymphoblastic leukemia // Journal pediatrics hematology oncology.- 2001.- N 23(7).- P. 416-419.

116. Gurkan E., Tanriverdi K., Baslamisli F. Telomerase activity in myelodysplastic syndromes // Leukemia research.- 2005,- N 29(10).-P. 1131-1139.

117. Harris L.J., Larson S.B., Hasel K.W. The 3-demensional structure of an intact monoclonal antibody for canine lymphoma // Nature.-1992.-N360,-P. 369-372.

118. Hayflick L., Moorhead P.S. The serial cultivation of human diploid cell strains // Experimental cell research.- 1961,- N 253,- P. 585621.

119. Heibert S.W., Lutterbach В., Durst K. et al. Mechanisms of transcriptional repression by the t(8;21)-, t(12;21)-, and inv(16)-encoded fusion proteins // Cancer chemotherapy pharmacology.-2001.- N 48 (Suppl 1).- P. 31-34.

120. Higaki Y., Yamada O., Okamura T. et al. Granzyme-B-containing lymphocyte involvement in epidermal injury in graft-versus-host disease // Dermatology.- 2001,- N 202(2).- P. 94-98.

121. Hoffer E., Akria L., Tabak A. et al. A simple approximation for busulfan dose adjustment in adult patients undergoing bone marrow transplantation // Therapy drug monitoring.- 2004.- N 26(3).-P. 331-335.

122. Hogan W.J., Storb R. Therapeutic applications of non-myeloablative hematopoietic stem cell transplantation in malignant disease // Immunology research.- 2003.- N 28(1).- P. 1-11.

123. Hu G., Zhang W., Deisseroth A.B. P53 gene mutations in acute myelogenous leukaemia // British journal haematology.- 1992,- N 81(4).-P. 489-494.

124. Huang P., Sandoval A., Van Den Neste E. et al. Inhibition of RNA transcription: a biochemical mechanism of action against chronic lymphocytic leukemia cells by fludarabine // Leukemia.- 2000,- N 14(8).-P. 1405-1413.

125. Huang Y., Pledgie A., Rubin E. et al. Role of p53/p21(Wafl/Cipl) in the regulation of polyamine analogue-induced growth inhibition and cell death in human breast cancer cells // Cancer biology and therapy.- 2005,- N 4(9).- P. 1006-1013.

126. Hussain S.P., Harris C.C. p53 biological network: at the crossroads of the cellular-stress response pathway and molecular carcinogenesis // Journal of Nippon Medical School.- 2006,- N 73(2).- P. 54-64.

127. Hussain S.P., Hofseth L.J., Harris C.C. et al. Tumor suppressor genes: at the crossroads of molecular carcinogenesis, molecular epidemiology and human risk assessment // Lung cancer.- 2001.- N 34 Suppl 2,-P. 7-15.

128. Ichilci Y., Bowlus C.L., Shimoda S. et al. T cell immunity and graft-versus-host disease (GVHD) // Autoimmunity review.- 2006,-N5(1).-P. 1-9.

129. Imoto S., Oomoto Y., Murata K. et al. Kinetics of serum cytokines after allogeneic bone marrow transplantation: interleukin-5 as a potential marker of acute graft-versus-host disease // Internal journal hematology.- 2000.- N 72(1).- P. 92-97.

130. Inamoto Y., Oba Т., Miyamura K. et al. Stable engraftment after a conditioning regimen with fludarabine and melphalan for bone marrow transplantation from an unrelated donor // Internal journal hematology.- 2006,- N 83(4).- P. 356-362.

131. Invernizzi R., Travaglino E., Benatti C. et al. Survivin expression, apoptosis and proliferation in chronic myelomonocytic leukemia // European journal hematology.- 2006.- N 76(6).- P. 494-501.

132. Jaffe E.S., Harris N.L., Stein H., Vardmin J.W. (eds). World Health Organization Classification of Tumours. Pathology and Genetics of Tumours of Haematopoietic and Lymphoid Tissues. Lyon: IARC .- 2001.

133. Jantunen E., Anttila V.J., Ruutu T. Aspergillus infections in allogeneic stem cell transplant recipients: have we made any progress? // Bone marrow transplantation.- 2002,- N 30(12).- P. 925-929.

134. Janus F., Albrechtsen N., Dornreiter I. et al. The dual role model for p53 in maintaining genomic integrity // Cell molecular life science.- 1999,-N 55(1).-P. 12-27.

135. Johnson R.A., Shepard E.M., Scotto K.W. Differential regulation of MDR1 transcription by the p53 family members. Role of the DNA binding domain // Journal biology and chemistry.- 2005,- N 280(14).-P. 132-139.

136. Ju X.P., Xu В., Xiao Z.P. et al. Cytokine expression during acute graft-versus-host disease after allogeneic peripheral stem cell transplantation // Bone marrow transplantation.- 2005.- N 35(12).-P. 1179-1186.

137. Katiyar S.K., Roy A.M., Baliga M.S. Silymarin induces apoptosis primarily through a p53-dependent pathway involving Bcl-2/Bax, cytochrome с release, and caspase activation // Molecular cancer therapy.- 2005.- N 4(2).- P. 207-216.

138. Kawamura M., Olmishi H., Guo S.X. et al. Alterations of the p53, p21, pl6, pl5 and RAS genes in childhood T-cell acute lymphoblastic leukemia // Leukemia research.- 1999.- N 23(2).- P. 115-126.

139. Kernan N.A., Dupont B. Minor histocompatibility antigens and marrow transplantation // New England journal of medicine.-1996,- N334(5).- P. 323-324.

140. Kida Y. Interleukin-10 and graft-versus-host disease // New England journal of medicine.- 2004.- N 350(13).- P. 1361-1362;

141. Klintman D., Li X., Thorlacius H. Important role of P-selectin for leukocyte recruitment, hepatocellular injury, and apoptosis in endotoxemic mice // Clinical diagnostic and laboratory immunology.- 2004,- N 11(1).- P. 56-62.

142. Koduru P.R., Raju K., Vadmal V. et al. Correlation between mutation in P53, p53 expression, cytogenetics, histologic type, and survival in patients with B-cell non-Hodgkin's lymphoma // Blood.- 1997,-N 90(10).-P. 4078-4091.

143. Kolen S., Weijtens M., Hagenbeek A. et al. Monitoring of developing graft-versus-host disease mediated by herpes simplexvirus thymidine kinase gene-transduced T cells // Human gene therapy.- 2003,- N 14(4).- P. 341-351.

144. Kourti M., Vavatsi N., Gombakis N. et al. Increased expression of multidrug resistance gene (MDRl) at relapse in a child with acute lymphoblastic leukemia // Pediatrics hematology oncology.- 2006.-N23(6).-P. 489-494.

145. Landstrom A.P., Tefferi A. Fluorescent in situ hybridization in the diagnosis, prognosis, and treatment monitoring of chronic myeloid leukemia // Leukemia lymphoma.- 2006.- N 47(3).- P. 397-402.

146. Lane D.P., Crawford L.V. T antigen is bound to a host protein in SV40-transformed cells// Nature.- 1979.- N 278(5701).- P. 261263.

147. Langabeer S.E., Gale R.E., Harvey R.C. et al. Transcription-mediated amplification and hybridisation protection assay todetermine BCR-ABL transcript levels in patients with chronic myeloid leukaemia // Leukemia.- 2002.- N 16(3).- P. 393-399.

148. Langenau D.M., Jette C., Berghmans S. et al. Suppression of apoptosis by bcl-2 overexpression in lymphoid cells of transgenic zebrafish//Blood.-2005,-N 105(8).-P. 3278-3285.

149. Langerak A.W., van Den Beemd R. et al. Molecular and flow cytometric analysis of the Vbeta repertoire for clonality assessment in mature TCRalphabeta T-cell proliferation // Blood.- 2001,- N 98(1).-P. 165-173.

150. Lang-Rollin I., Maniati M., Jabado O. et al. Apoptosis and the conformational change of Bax induced by proteasomal inhibition of PCI2 cells are inhibited by bcl-xL and bcl-2 // Apoptosis.-2005,-N 10(4).-P. 809-820.

151. Lee H., Baek S., Joe S.J. et al. Modulation of IFN-gamma production by TNF-alpha in macrophages from the tumor environment: significance as an angiogenic switch // Internal immunopharmacology.- 2006,- N 6(1).- P. 71-78.

152. Lee S.J., Zahrieh D., Alyea E.P. et al. Comparison of T-cell-depleted and non-T-cell-depleted unrelated donor transplantation for hematologic diseases: clinical outcomes, quality of life, and costs // Blood.- 2002.- N 100(8).- P. 2697-2702.

153. Liem L.M., van Houwelingen H.C., Goulmy E. Serum cytokine levels after HLA-identical bone marrow transplantation // Transplantation Oct 15;66(7).- P. 863-871, 1998.

154. Linzer D.I., Levine A.J. Characterization of a 54K dalton cellular SV40 tumor antigen present in SV40-transformed cells and uninfected embryonal carcinoma cells // Cell.- 1979,- N 17(1).- P. 43-52.

155. Long G.D., Blume K.G. Allogenic and autologus stem cell transplantation // Williams hematology.- 5th ed.- New-York: McGraw-Hill, 1995,-P.172-194.

156. Look A.T. Oncogenic transcription factors in the human acute leukemias // Science.- 1997.- N 278,- P. 1059.

157. Lossos I.S., Breuer R., Or R. et al. Bacterial pneumonia in recipients of bone marrow transplantation. A five-year prospective study // Transplantation.- 1995,- N 60(7).- P. 672-678.

158. Lunn R.A., Sumar N., Bansal A.S. et al. Cytokine profiles in stem cell transplantation: possible use as a predictor of graft-versus-host disease // Hematology.- 2005,- N 10(2).- P. 107-114.

159. Maeda Y., Levy R.B., Reddy P. et al. Both perforin and Fas ligand are required for the regulation of alloreactive CD8+ T cells during acute graft-versus-host disease // Blood.- 2005.- N 105(5).- P. 2023-2027.

160. Maloney D.G., Sandmaier B.M., Mackinnon S. et al. Non-Myeloablative Transplantation // Hematology.- 2002,- N34,- P. 392-421.

161. Mandal M., Borowski C., Palomero T. The BCL2A1 gene as a pre-T cell receptor-induced regulator of thymocyte survival // Journal experimental medicine.- 2005,- N 201(4).- P. 603-614.

162. Maris M., Storb R. The transplantation of hematopoietic stem cells after non-myeloablative conditioning: a cellular therapeutic approach to hematologic and genetic diseases // Immunology research.- 2003,- N 28(1).- P. 13-24.

163. Marks D.I., Lush R., Cavenagh J. et al. The toxicity and efficacy of donor lymphocyte infusions given after reduced-intensity conditioning allogeneic stem cell transplantation // Blood.- 2002.-N 100(9).-P. 3108-3114.

164. Massenkeil G., Nagy M., Le Coutre P. et al. Nonmyeloablative stem cell transplantation in patients with ALL and AML results in low nonrelapse mortality despite high rate of infections and GVHD // Hematology journal- 2004,- N 5(5).- P. 395-402.

165. Mathe G., Amiel J.L., Schwarzenberg L. Successful allogenic bone marrow transplantation in man: chimerism, indusedspecific tolerance and possible anti-leukemic effects // Blood.- 1965,- N 25,-P. 179-196.

166. Mazurik V.K., Moroz B.B. On the mechanisms of radiobiological events in relation to the regulatory role of p53 gene and protein // Patology fiziology eksperimental terapy.- 2003,- N 1.- P. 11-18.

167. Mazza P., Prudenzano A., Amurri B. et al. Myeloablative therapy and bone marrow transplantation in Jehovah's Witnesses with malignancies: single center experience // Bone marrow transplantation.- 2003,- N 32(4).- P. 433-436.

168. Mehes G. Chromosome abnormalities with prognostic impact in B-cell chronic lymphocytic leukemia // Pathology oncology research.- 2005,- N 11(4).- P. 205-210.

169. Melo M.B., Ahmad N.N., Lima C.S. et al. Mutations in the p53 gene in acute myeloid leukemia patients correlate with poor prognosis // Hematology.- 2002.- N 7(1).- P. 13-19.

170. Michor F., Hughes Т., Iwasa Y. et al. Dynamics of chronic myeloid leukaemia //Nature.- 2005,- Vol. 435,- P. 1267-1270

171. Middleton P., Cavet J., Norden J. et al. Interleukin-6 gene polymorphism associated with mild graft versus host-disease in allogenic BMT: a possible genetic protection factor // Bone marrow transplantology.- 2000.- V. 25, Supplement 1,- P. 154.

172. Mikhailov V., Mikhailova M., Pulkrabek D.J. et al. Bcl-2 prevents Bax oligomerization in the mitochondrial outer membrane // Journal biology chemistry.- 2001,- N 276(21).- P. 18361-1874.

173. Mimori K., Kiyolcawa N., Taguchi T. et al. Costimulatory signals distinctively affect CD20- and B-cell-antigen-receptor-mediated apoptosis in Burkitt's lymphoma/leukemia cells // Leukemia. -2003.-N 17(6).-P. 1164-1174.

174. Mitchell K.O., Ricci M.S., Miyashita T. et al. Bax is a transcriptional target and mediator of c-myc-induced apoptosis // Cancer research.- 2000.- N 60(22).- P. 6318-6325.

175. Miyoshi H., Kozu Т., Shimizu K. et al. The t(8;21) translocation in acute myeloid leukemia results in production of an AML1-MTG8 fusion transcript // EMBO journal.- 1993,- N 12(7).- P. 2715-2721.

176. Moller В., Villiger P.M. Inhibition of IL-1, IL-6, and TNF-alpha in immune-mediated inflammatory diseases // Springer seminars immunopathology.- 2006.- N 27(4).- P. 391-408.

177. Monica K., LeBrun D.P., Dedera D.A. et al. Transformation properties of the E2a-Pbxl chimeric oncoprotein: fusion with E2a is essential, but the Pbxl homeodomain is dispensable // Molecular cell biology.- 1994.- N 14,- P. 8304-8314.

178. Moreno C., Villamor N., Colomer D. et al. Clinical significance of minimal residual disease, as assessed by different techniques, after stem cell transplantation for chronic lymphocytic leukemia // Blood.- 2006.- N 107(11).- P. 4563-4569.

179. Morfin F., Bilger K., Boucher A. HSV excretion after bone marrow transplantation: a 4-year survey // Journal clinical virology.- 2004,- N 30(4).- P. 341-345.

180. Mullis K., Faloona F., Scliarf S. et al. Specific enzymatic amplification of DNA in vitro: the polymerase chain reaction // Cold spring harb symp quantative biology.- 1986.- N 51,- P. 263273.

181. Nachbaur D., Kircher B. Dendritic cells in allogeneic hematopoietic stem cell transplantation // Leukemia lymphoma.-2005.-N46(10).-P. 1387-1396.

182. Nakamura H., Inokuchi K., Yamaguchi H. et al. Abnormalities of p51, p53, FLT3 and N-ras genes and their prognostic value in relapsed acute myeloid leukemia // Journal of nippon medical school.- 2004.- N 71(4).- P. 270-278.

183. Nakano Y., Naoe Т., Kiyoi H. et al. Prognostic value of p53 gene mutations and the product expression in de novo acute myeloid leukemia // European journal haematology.- 2000,- N 65(1).- P. 23-31.

184. Natarajan S., McEachern M.J. Recombinational telomere elongation promoted by DNA circles // Molecular cell biology.-2002.- N 22(13).- P. 4512-4521.

185. New J.Y., Li В., Koh W.P. et al. T cell infiltration and chemokine expression: relevance to the disease localization in murine graft-versus-host disease // Bone marrow transplantation.- 2002,- N 29(12).-P. 979-986.

186. Nomura S., Ishii K., Kanazawa S. et al. Role of platelet-derived chemokines (RANTES and ENA-78) after stem cell transplantation // Transplantation immunology.- 2006,- N 15(4).- P. 247-253.

187. Ojielo C.I., Cooke K., Mancuso P. et al. Defective phagocytosis and clearance of Pseudomonas aeruginosa in the lung following bone marrow transplantation // Journal immunology.- 2003.- N 171(8).-P. 4416-4424.

188. Okamoto Y., Ribeiro R.C., Srivastava D.K. Et al. Viridans streptococcal sepsis: clinical features and complications in childhood acute myeloid leukemia // Journal pediatrics hematology oncology.- 2003,- N 25(9).- P. 696-703.

189. Oliveira J.S., Kerbauy F.R., Colombo AL. et al. Fungal infections in maiTow transplant recipients under antifungal prophylaxis with fluconazole. Brazilian journal medical biology research.- 2002,- N 35(7).- P. 789-798.

190. Or R., Shapira M.Y., Resnick I. et al. Nonmyeloablative allogeneic stem cell transplantation for the treatment of chronic myeloid leukemia in first chronic phase // Blood.- 2003.- N 101(2).- P. 441445.

191. P. Middleton, J. Cavet, J. Norden. et al. Interleukin-6 gene polymorphism associated with mild graft versus host disease in allogenic BMT: a possible genetic protection factor // Bone marrow transplantation.-2000,- Vol. 25.-Suppl. l.-P. 154.

192. Pallisgaard N., Hokland P., Riishoj D.C. et al. Multiplex reverse transcription-polymerase chain reaction for simultaneous screeningof 29 translocations and chromosomal aberrations in acute leukemia//Blood.- 1998,- N 92(2).- P. 574-588.

193. Pallisgaard N., Hokland P., et al. Multiplex Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction for Simultaneous Screening of 29 Translocations and Chromosomal Aberrations in Acute Leukemia // Blood.- 1998.- Vol. 92,- N 2.- P. 574-588.

194. Panigrahi I., Naithani R. Imatinib mesylate: A designer drug // Journal association physicians India.- 2006.- N 54.- P. 203-206.

195. Passwegb J., Baldomeroa H., Chapuisb B. et al. Haematopoietic stem cell transplantation in Switzerland // Swiss Medicine Weekly.- 2006.- N 136,- P. 50-58

196. Pelz A.F., Kroning H., Franke A. et al. High reliability and sensitivity of the BCR/ABL1 D-FISH test for the detection of BCR/ABL rearrangements // Annals hematology.- 2002,- N 81(3).-P. 1471-1453.

197. Perez-Vera P., Frias S., Carnevale A. et al. A strategy to detect chromosomal abnormalities in children with acute lymphoblastic leukemia // Journal pediatrics hematology oncology.- 2004,- N 26(5).- P. 294-300.

198. Peters C., Minkov M., Gadner H., et al. Statement of current majority practices in graft-versus-host disease prophylaxis and treatment in children // Bone marrow transplantation.- 2000,- N 26,-P. 405-411.

199. Petrarca C., Frydas S., Donelan J. et al. Interleukin 27 (IL-27): A novel pleiotropic cytokine involved in T cell differentiation and Tcell response modulation // Internal journal immunopathology pharmacology.- 2005,- N 18(2).- P. 191-194.

200. Picard C., Silvy M., Gabert J. Overview of real-time RT-PCR strategies for quantification of gene rearrangements in the myeloid malignancies // Methods molecular medicine.- 2006.- N 125,- P. 27-68.

201. Pott C., Schrader C., Gesk S. et al. Quantitative assessment of molecular remission after high-dose therapy with autologous stem cell transplantation predicts long-term remission in mantle cell lymphoma // Blood.- 2006,- N 107(6).- P. 2271-2278.

202. Powles R., Mehta J., Kulkarni S. et al. Allogeneic blood and bone-marrow stem-cell transplantation in haematological malignant diseases: a randomised trial // Lancet.- 2000.- N 355(9211).- P. 1231-1237.

203. Probin V., Wang Y., Bai A. et al. Busulfan selectively induces cellular senescence but not apoptosis in WI38 fibroblasts via a P53-independent but ERK-P38 MAPK-dependent mechanism // Journal pharmacology experimental therapy.- 2006.- N 1,- P. 345367.

204. Prowse K.R. Detection of telomerase activity in neural cells // Methods molecular biology.- 2002,- N 198,- P. 137-147.

205. Pui C., Schrappe M., Ribeiro R. et al. Childhood and adolescent lymphoid and myeloid leukemia // Hematology.- 2004,- N 5,-P.118-145.

206. Puliaev R., Nguyen P., Finkelman F.D. et al. Differential requirement for IFN-gamma in CTL maturation in acute murine graft-versus-host disease // Journal immunology.- 2004,- N 173(2).- P. 910-919.

207. Pzepiorka D., Smith T.L., Folloder J., et al. Risk factors for acute graft-versus-host disease after allogenic blood stem cell transplantation // Blood.- 1999.- N 94,- P. 1465-1470.

208. Quintas-Cardama A., Cortes J. Kinase inhibitors in chronic myelogenous leukemia // Clinical advanced hematology oncology.-2006.-N4(5).-P. 365-374.

209. Rauramaa R., Vaisanen S.B., Luong L.A. et al. Stromelysin-1 and interleukin-6 gene promoter polymorphisms are determinants of asymptomatic carotid artery atherosclerosis // Arteriosclerosis thrombosis vascular biology.- 2000,- N 20(12), 2657-2662.

210. Reddy P., Ferrara J.L. Immunobiology of acute graft-versus-host disease //Blood review.- 2003,- N 17(4).- P. 187-194.

211. Reddy P. Pathophysiology of acute graft-versus-host disease // Hematology oncology.- 2003,- N 21(4).- P. 149-161.

212. Reles A., Wen W.H., Schmider A. et. al. Correlation of p53 mutations with resistance to platinum-based chemotherapy and shortened survival in ovarian cancer // Clinical cancer research.-2001.- N 7(10).- P. 2984-2997.

213. Remberger M., Ringden O., Blau I.W. et al. No difference in graft-versus-host disease, relapse, and survival comparing peripheralstem cells to bone marrow using unrelated donors I I Blood.- 2001 .-N98(6).-P. 1739-1745.

214. Rocha V., Cornish J., Sievers E.L. et al. Comparison of outcomes of unrelated bone marrow and umbilical cord blood transplants in children with acute leukemia // Blood.- 2001,- N 97(10).- P. 29622971.

215. Roit I., Brostoff J., Male D. Immunology, fifth ed.- 1999,- P.422.

216. Romano M.F., Avellino R., Petrella A. Rapamycin inhibits doxorubicin-induced NF-kappaB/Rel nuclear activity and enhances the apoptosis of melanoma cells // European journal of cancer.-2004,- N 40(18).- P. 2829-2836.

217. Ross E.A., Douglas M.R., Wong S.H. et al. Interaction between integrin alpha9betal and vascular cell adhesion molecule-1 (VCAM-1) inhibits neutrophil apoptosis // Blood.- 2006,- N 107(3).-P. 1178-1183.

218. Rossi M., Arpinati M., Rondelli D. et al. Plasmacytoid dendritic cells: do they have a role in immune responses after hematopoietic cell transplantation? // Human immunology.- 2002.- N 63(12).- P. 1194-1200.

219. Rosti G. Solid tumor working party and registry // 2000,- 170 c.

220. Rowley J.D. Molecular genetics in acute leukemia // Leukemia.-2000.-N 14,-P. 513-517.

221. Roychowdhury M., Pambuccian S.E., Asian D.L. et al. Pulmonary complications after bone marrow transplantation: an autopsy study from a large transplantation center // Archives pathology laboratory medicine.- 2005,- N 129(3).- P. 366-371.

222. Ruiz S., Santos M., Paramio J.M. Is the loss of pRb essential for the mouse skin carcinogenesis? // Cell cycle.- 2006,- N 5(6).- P. 625-629.

223. Saavedra S., Jarque I., Sanz G.F. et al. Infectious complications in patients undergoing unrelated donor bone marrow transplantation: experience from a single institution // Clinical microbiology infections.- 2002,- N 8(11).- P. 725-733.

224. Sadasivam S., Gupta S., Radha V. et al. Caspase-1 activator Ipaf is a p53-inducible gene involved in apoptosis // Oncogene.- 2005,- N 24(4).-P. 627-636.

225. Sahu G.R., Das B.R. Prognostic significance of p53 and Bcl-2 in acute lymphoblastic leukemia // Oncology reports.- 2002.- N 9(6).-P. 1391-1398.

226. Saikia Т.К., Advani S.H., Parikh P.M. et al. Results of allogeneic bone marrow transplant in chronic myeloid leukaemia following conditioning with busulfan and cyclophosphamide // Journal association physicians India.- 1999,- N 47(8).- P. 770-773.

227. Sankaran D., Asderalcis A., Ashraf S. et al. Cytokine gene polymorphisms predict acute graft rejection following renal transplantation // Kidney internal.- 1999,- N 56(1).- P. 281-288.

228. Scharf S.J., Smith A.G., Hansen J.A. et al. Quantitative determination of bone marrow transplant engraftment using fluorescent polymerase chain reaction primers for human identity markers // Blood.- 1995.- N 85(7).- P. 1954-1963.

229. Shay J.W., 2005 Meeting report: the role of telomeres and telomerase in cancer // Cancer research.- 2005,- N 65(9).- P. 35133517.

230. Shlomchik W.D. Antigen presentation in graft-vs-host disease // Experimental hematology.- 2003,- N 31(12).- P. 1187-1197.

231. Shortt J., Hutton E., Faragher M. et al. Central nervous system graft-versus-host disease post allogeneic stem cell transplant // British journal haematology 2006.- N 132(2).- P. 245-247.

232. Simpson D. New developments in the prophylaxis and treatment of graft versus host disease // Expert opinion pharmacotherapy.-2001,-N2(7).-P. 1109-1117.

233. Slavin S., Aker M., Shapira M.Y. et al. Reduced-intensity conditioning for the treatment of malignant and life-threatening non-malignant disorders // Clinical transplantology.- 2003,- N 23,-P. 275-282.

234. Smit M.L., Giesendorf B.A., Vet J.A. et al. Semiautomated DNA mutation analysis using a robotic workstation and molecular beacons // Clinical chemistry.- 2001,- N 47(4).- P. 739-744.

235. Socie G., Loiseau P., Tamouza R.et al. Both genetic and clinical factors predict the development of graft-versus-host disease after allogeneic hematopoietic stem cell transplantation // Transplantation.- 2003,- N 72.- P. 699-706.

236. Stein H., Hummel M. Cellular origin and clonality of classic Hodgkin's lymphoma: immunophenotypic and molecular studies // Seminars hematology.- 1999,- N 36(3).- P. 233-241.

237. Sturm I., Bosanquet A.G., Hummel M. et al. In B-CLL, the codon 72 polymorphic variants of p53 are not related to drug resistance and disease prognosis // BMC Cancer.- 2005,- N 18;5.- P. 105.

238. Sullivan K.M. Graft-versus-Host disease. / Bone marrow transplantation.- 1994.- Boston: P. 339-362.

239. Hematology American society hematology education program. -2001,-P. 392-421.

240. Sun J.Y., Gaidulis L., Dagis A. et al. Killer Ig-like receptor (KIR) compatibility plays a role in the prevalence of acute GVHD in unrelated hematopoietic cell transplants for AML // Bone marrow transplantation.- 2005,- N 36(6).- P. 525-530.

241. Szymanska K., Hainaut P. et al. TP53 and mutations in human cancer // Acta biochimica Polonica.- 2003,- N 50(1).- P. 231-238.

242. Takahashi H., Furukawa Т., Hashimoto S. et al. Contribution of TNF-alpha and IL-10 gene polymorphisms to graft-versus-host disease following allo-hematopoietic stem cell transplantation // Bone marrow transplantation.- 2000.- N 26(12).- P. 1317-23

243. Takahashi S., Iseki Т., Ooi J. et al. Single-institute comparative analysis of unrelated bone marrow transplantation and cord blood transplantation for adult patients with hematologic malignancies // Blood.- 2004.- N 104(12).- P. 3813-3820.

244. Takimoto R., Wang W., Dicker D.T. et al. The mutant p53-conformation modifying drug, CP-31398, can induce apoptosis of human cancer cells and can stabilize wild-type p53 protein // Cancer biology and therapy.- 2002,- N 1(1).- P. 47-55.

245. Tamura A., Miura I., Iida S. et al. Interphase detection of immunoglobulin heavy chain gene translocations with specific oncogene loci in 173 patients with B-cell lymphoma // Cancer genetic cytogenetic.- 2001.- N 129(1).- P. 1-9.

246. Tanaka J., Asaka M., Imamura M. T-cell co-signalling molecules in graft-versus-host disease // Annals hematology.- 2000,- N 79(6).- P. 283-290.

247. Tauchi Т., Nakajima A., Sashida G. et al. Inhibition of human telomerase enhances the effect of the tyrosine kinase inhibitor, Imatinib, in BCR-ABL-positive leukemia cells // Clinical cancer research.- 2002,- Vol. 8,- P. 3341-3347.

248. Teachey D.T., Obzut D.A., Cooperman J. et al. The mTOR inhibitor CCI-779 induces apoptosis and inhibits growth in preclinical models of primary adult human ALL // Blood.- 2006,-N 107(3).-P. 1149-1155.

249. Terasaki P.I., Rich N.E. Quantative determination of antibody and complement direct against lymphocytes // Journal immunology.-1964,-N92,-P. 128-138.

250. Thomas E.D., Buckner C.D., Banaji M. One hundred patients with acute leukemia treated by chemotherapy, total body irradiation, and allogeneic marrow transplantation // Blood.- 1977.- N 49(4).- P. 511-533.

251. Till J.E., McCullough EA. A direct measurement of the radiation sensitivity of normal mouse bone marrow cells // Radiation research-. 1961,-N 21.-P. 778-782.

252. Tsutsui S., Yasuda K., Suzuki K. et al. Bcl-2 protein expression is associated with p27 and p53 protein expressions and MIB-1 counts in breast cancer // B232BMC Cancer.- 2006,- N 6(1).- P. 187.

253. Urbano-Ispizua A., Rozman C., Pimentel P. et al. Risk factors for acute graft-versus-host disease in patients ■ undergoing transplantation with CD34+ selected blood cells from HLA-identical siblings // Blood.- 2002,- N 100(2).- P. 724-727.

254. Van Dijk M.A., Voorhoeve P.M., Murre C. Pbxl is converted into a transcriptional activator upon acquiring the N-terminal region of

255. Е2А in pre-B-cell acute lymphoblastoid leukemia // Proceedings of the National Academy of Sciences of the USA.- 1993.- N 90,- P. 6061-6065.333. van Rood J.J. Leucocyte groups and histocompatibility. Vox sanguinis.- 1966,-N 11(3).-P. 276-92.

256. Vavrova J., Rezacova M., Vokurkova D. et al. Cell cycle alteration, apoptosis and response of leukemic cell lines to gamma radiation with high- and low-dose rate // Physiology research.-2004,- N 53(3).- P. 335-342.

257. Viollier R., Passweg J., Gregor M. et al. Quality-adjusted survival analysis shows differences in outcome after immunosuppression or bone marrow transplantation in aplastic anemia // Annals hematology.- 2005,- N 84(1).- P. 47-55

258. Vulliamy T.J., Walne A., Baskaradas A. et al. Mutations in the reverse transcriptase component of telomerase (TERT) in patients with bone marrow failure // Blood cells molecular disease.- 2005-N34(3).-P. 257-263.

259. Wah T.M., Moss H.A., Robertson R.J. et al. Pulmonary complications following bone marrow transplantation // British journal radiology.- 2003.- N 76(906).- P. 373-379.

260. Wallace D.J., Shen D„ Reed G.F. et al. Detection of the bcl-2 t(14;18) translocation and proto-oncogene expression in primary intraocular lymphoma // Investigation ophthalmology visual science.- 2006.- N 47(7).- P. 2750-2756.

261. Wattel E., Preudhomme C., Hecquet B. et al. p53 mutations are associated with resistance to chemotherapy and short survival in hematologic malignancies // Blood.- 1994,- N 84(9).- P. 31483157.

262. Weston L.E., Geczy A.F., Briscoe H. Production of IL-10 by alloreactive sibling donor cells and its influence on the development of acute GVEOD // Bone marrow transplantation.-2006.- N37(2).- P. 207-212.

263. Wingard J.R. Fungal infections after bone marrow transplant // Biology blood marrow transplantation.- 1999.- N 5(2).- P. 55-68.

264. Wojcik I., Szybka M., Golanska E. et al. Abnormalities of the P53, MDM2, BCL2 and В AX genes in acute leukemias // Neoplasma.-2005,-N52(4).-P. 318-324.

265. Wysocki C.A., Panoskaltsis-Mortari A., Blazar B.R. et al. Leukocyte migration and graft-versus-host disease // Blood.-2005,-N105(11).-P. 4191-4199.

266. Yamada K., Yajima Т., Yagihashi A. et al. Role of human telomerase reverse transcriptase and telomeric-repeat binding factor proteins 1 and 2 in human hematopoietic cells // Japan journal cancer research.- 2000,- N 91.- P. 1278-1284.

267. Yamazaki S., Takahashi H., Fujii H. et al. Split chimerism after allogeneic bone marrow transplantation in Chediak-Higashi syndrome // Bone marrow transplantation.- 2003,- N 31(2).- P. 137-140.

268. Yang Y.G. The role of interleukin-12 and interferon-gamma in GVHD and GVL // Cytokmes cell molecular therapy.- 2000.- N 6(1).-P. 41-46.

269. Yanik G., Cooke K.R. The lung as a target organ of graft-versus-host disease // Seminars hematology.- 2006,- N 43(1).- P. 42-52.

270. Yu X.Z., Bidwell S.J., Martin P.J. et al. CD28-specific antibody prevents graft-versus-host disease in mice // Journal immunology.2000,- N 164(9).- P. 4564-4568.

271. Yuen K.Y., Woo P.C. Tuberculosis in blood and marrow transplant recipients // Hematology oncology.- 2002.- N 20(2).- P. 51-62.

272. Zeiser R., Marks R., Beitz H., Finke J. Immunopathogenesis of acute graft-versus-host disease: implications for novel preventive and therapeutic strategies 11 Annals hematology.- 2004,- N 83(9).-P. 551-65. Epub 2004 Jun 15.

273. Zekri A.R., Mohamed W.S., Samra M.A. Risk factors for cytomegalovirus, hepatitis В and С virus reactivation after bone marrow transplantation // Transplantation immunology.- 2004.- N 13(4).-P. 305-11.

274. Zelent A., Guidez F., Melnick A. et al. Translocations of the RARalpha gene in acute promyelocytic leukemia. Oncogene.2001,-N20.-P. 7186-7203.

275. Zheng S.G., Wang J.H., Koss M.N. et al. CD4+ and CD8+ regulatory T cells generated ex vivo with IL-2 and TGF-beta suppress a stimulatory graft-versus-host disease with a lupus-like syndrome // Journal immunology.- 2004.- N 172(3).- P. 15311539.

276. Zuna J., Hrusak O., Kalinova M. et al. TEL/AML1 positivity in childhood ALL: average or better prognosis? Czech Paediatric Haematology Working Group // Leukemia.- 1999,- N 13.- P. 2224.

277. Zwiebel J.A., Nagler С., Smiley J.K. Clinical trails referral resource. Clinical trials of adenovirus-p53 gene therapy // Oncology.- 1998,-N 12(8).-P. 1172, 1175.

278. Ф.И.О. Д/з Стадия Пре-тер Возраст Пол Дата ТКМ Конд (м/н) Конд Проф РТПХ СПК Донор Д/Р Инф д- в РТПХ

279. ШАА олл 2пр 20.05.02 17 м 29.01.03 м Bu+Cy+VP CsA+MTX ПСГК р ж/м нет 13 0

280. ВАА омл перв рез 7 ж н Flu+Mel CsA+Pred ПСГК р м/ж 29 0

281. AAIO АА первнчн — 19 м 22.10.02 н Cy+ALG+Pred CsA+MTX+Pred ПСГК р ж/м ц 17 0

282. СОМ ХМЛ хрф п/держк 37 м 25.10.02 н Flu+Mel+ALG CsA ПСГК н нет 9 3

283. КСА ЛГМ 1пр 17.09.02 25 м 13.11.02 н Flu+Mel CsA ПСГК р ж/м нет 13 1б ТАА ОМЛ 2пр 20.05.02 14 м 19.11.02 м Bu+Cy+ALG CsA+MTX+Pred ПСГК н м/м нет 14 1

284. ШОВ В-ОЛЛ 2пр 18.04.02 21 ж 03.12.02 н ПСГК н нет — 0

285. СЕИ О-ОЛЛ Зпр п/держк 16 м 06.12.02 м BU+Cy+ALG CsA+MTX+Pred ПСГК н м/м Э 18 3

286. УДА с-олл Зпр п/держк 15 м 18.12.02 м Bu+Cy+ALG CsA+MTX+Pred ПСГК н м/м нет 15 ' 3

287. КММ олл 4пр 21.06.02 21 ж 23.01.03 м Bu+Cy+ALG CsA+MTX+Pred ПСГК н м/ж Ц,г 26 0

288. НОР В-ОЛЛ 5пр п/держк 40 м 28.01.03 н Bu+Flu+ALG CsA ПСГК н ж/м нет 14 2

289. КАЛ ХМЛ 1акс 11.11.02 39 ж 11.02.03 н Flu+ALG CsA+Pred км н ж/ж нет 21 313 ссс т-олл 2пр 01.09.02 14 м 18.02.03 м Bu+Cy+ALG CsA+MTX+Pred ПСГК н м/м нет 22 2

290. БТН омл 2пр 01.06.02 19 ж 08.10.03 N Н Flu+Mel+ALG CsA ПСГК н ж/ж Г 13 4

291. ГРА с-олл 1пр 31.07.03 22 м 09.10.03 м Bu+Cy+ALG CsA км р м/м нет — 0

292. ЦДЛ т-олл 2пр 10.09.03 25 м 09.10.03 н Flu+Mel CsA ПСГК н ж/м Г 11 2

293. МРА В-ОЛЛ 2пр п/держк 17 м 20.11.03 м Bu+Cy+ALG CsA+MTX ПСГК н м/м нет 17 2

294. БИА омл 1пр 20.04.02 13 ж 09.12.03 м Bu+Cy CsA+MTX ПСГК н м/ж ц 11 0

295. КИД В-ОЛЛ 2рец 17.01.04 10 м 28.01.04 м Bu+Cy+ALG CsA ПСГК н м/м нет 28 0

296. ФЛВ ХМЛ хрф п/держк 28 ж 23.03.04 н Bu+Flu+ALG CsA+MTX ПСГК н ж/ж нет 20 1

297. МЕА ОБЛ 1пр 01.04.04 19 ж 19.04.04 м Bu+Cy CsA+MTX ПСГК р м/ж ц 17 0

298. ABB омл перв рез 07.03.04 13 ж 26.04.04 н Flu+Mel+ALG CsA+MTX ПСГК р м/ж нет 21 023 пен в-олл 2рец 18.03.04 28 ж 06.05.04 м Bu+Cy+ALG CsA+MTX ПСГК н ж/ж нет 14 2

299. КЖБ омл 1пр п/держк 2,4 ж 07.05.04 м Bu+Cy+ALG CsA+MTX ПСГК н м/ж ц 22 325 ояо т-олл 2рец 11.04.04 28 ж 12.05.04 н Flu+Mel+ALG CsA+MTX ПСГК ж/ж г 13 2

300. J1HB хмл бл кр п/держк 17 ж 24.08 04 н Bu+Flu+ALG CsA+MTX ПСГК н ж/ж г 16 2

301. РАА т-нхл 57 м 01.09.04 н Flu+Mel+ALG CsA+MTX ПСГК н нет — 0

302. СМА в-нхл 2пр 17.06.04 12 м 29.09.04 м Bu+Cy+ALG CsA+MTX ПСГК н ж/м ц 12 3

303. ЧЖВ лгм Зчр 06.08.04 32 ж 07.10.04 н Flu+Mel+ALG CsA псгк н м/ж нет 16 1

304. ГЕВ т-олл пер в рез 07.09.04 5 м 08.10.04 н Bu+Flu+ALG CsA+MTX ПСГК н м/м Г 19 1

305. БСВ в-олл Зрец п/держк 11 м 12.10.04 н Flu+Mel+ALG CsA+MTX ПСГК н м/м нет 22 2

306. МРР нхл 1пр 20.06.04 16 ж 10.11.04 м CVP2 — ауто ауто — нет 12

307. НАН в-нхл 2рец 01.06.04 59 м 10.11.04 м BEAM — ауто ауто — нет 22

308. ДГВ в-нхл 1пр 06.07.04 20 ж 18.11.04 м BEAM — ауто ауто — нет 12

309. ТЛА лгм Зрец 25.10.04 39 ж 18.11.04 м BEAM ауто ауто — нет 12

310. ШАА в-олл Зрец 19.09.04 13 ж 30.11 04 м Bu+Cy+VP CsA+MTX км Р ж/ж Щ 22 1

311. КСА в-олл Зпр п/держк 8 ж 14.12 04 м Bu+Cy CsA+MTX ПСГК н м/ж Ц 22 238 дсн т-нхл 1рец п/держк 44 м 13.01.05 н Flu+Tre+ALG CsA+MTX ПСГК Р м/м нет 15 1

312. БВМ в-олл 2пр 01.05 04 10 м 21.01.05 м Bu+Cy+ALG CsA+MTX ПСГК н м/м нет 10 2

313. БАН омл 1рец 09.04.03 27 м 26.01.05 н Flu+Mel+ALG CsA+MTX ПСГК н м/м нет 14 1

314. ABB лгм 1пр 25.10.04 21 м 02.02.05 м BEAM — ауто ауто — нет 14

315. ЯАС с-олл 2пр п/держк 10 ж 17.02.05 м Tre+Cy+ALG CsA+MTX ПСГК н ж/ж ц 11 2

316. ЛДВ омл 2рец 30.11.04 29 м 02.03.05 н Flu+Mel+ALG CsA+MTX ПСГК н нет 11 0

317. РАА лгм Зпр 01.11.04 34 м 22.03.05 м BEAM — ауто ауто — нет 11

318. ГВА т-олл 2рец 20.02.05 10 м 23.03.05 м Tre+Cy+ALG CsA+MTX км н м/м ц 11 3

319. МДЕ в-олл 1пр п/держк 21 м 05.04.05 м Bu+Cy+ALG CsA+MTX КМ н м/м нет 16 3

320. ОАА Костм первичн — 1,9 ж 05.05.05 м Bu+Cy+ALG CsA+MTX ПСГК н м/ж нет 15 2

321. КЖ мм 1рец 01.02.04 57 ж 12.05.05 м Melfalan — ауто ауто — нет 11

322. СЕФ мм первичн — 65 ж 12.05.05 м Melfalan — ауто ауто — нет 11

323. ВМО лгм 2пр 01 01 05 7 м 17.05.05 м BEAM — ауто ауто — нет 13

324. ДСН в-олл 2рец 03 06 05 18 м 15.08.05 н Flu+Mel+ALG CsA+MTX км Р ж/м Г 29 0

325. СЕА МДС перв рез 01.07.05 13 ж 18.08.05 н Flu+Mel+ALG CsA+MTX KM р м/ж нет — 0

326. МВА хмл акселер п/держк 26 ж 23.08.05 н Flu+Mel+ALG ПСГК н м/ж нет — 1

327. НЕА ОМЛ 1рсц 01.07.04 17 м 25.08.05 н Flu+Mel+ALG CsA+MTX KM р ж/м Г 18 0

328. ЯАВ ОМЛ 1рсц 24.07.05 0,3 ж 02.09.05 м Bu+Cy+ALG CsA+MTX KM р ж/ж нет 18 0

329. ПАГ В-НХЛ перв рез 21.07.05 17 ж 15.09.05 м BEAM ауто ауто нет 857 кдю с-олл 2пр 28.06.05 5 м 21.09.05 н Flu+Mel+ALG CsA+MTX ПСГК н ж/м нет 16 0

330. БДН В-ОЛЛ 5рец 27.06.05 21 м 22.09.05 н Flu+Mel+ALG CsA KM н ж/м нет 15 3

331. ГАО с-олл 1пр п/держк 1 ж 27.09.05 м Tre+Cy+ALG CsA+MTX ПСГК н ж/ж нет 20 1

332. ЛОН АА первичн — 22 ж 04.10.05 м Cy+Uro+ALG CsA+MTX KM P ж/ж нет 23 0

333. РМВ ОМЛ 2пр п/держк 15 ж 11.10.05 н Flu+Mel+ALG CsA+MTX ПСГК н м/ж Г 16 2

334. НВВ с-олл 2рец 01.09.05 16 ж 13.10.05 м Bu+Cy+ALG CsA+MTX ПСГК н ж/ж Ц 14 0

335. ВОВ ИМФ первичн 14.09.05 46 ж 08.11.05 н Bu+Flu+ALG CsA+MTX KM н м/ж асп 17 2

336. ДАС ОМЛ первичн 06.10.05 2 ж 15.11.05 н Flu+Mel+ALG CsA+MTX ПСГК н ж/ж нет 13 2

337. САС мм 2чр 01.09.05 55 м 18.11.05 м Melfalan — ауто ауто — нет 12

338. РНА ОМЛ 1пр 01.02.05 50 ж 24.11.05 м Bu+Cy+ALG — ауто ауто — нет 12

339. МВВ МДС первичн — 11 ж 28.11.05 н Flu+Mel+ALG CsA+MTX KM н м/ж нет 15 1

340. ВДВ ОМЛ 1пр 01.05.05 8 ж 29.11.05 м Bu+Cy+ALG CsA+MTX ' ПСГК н м/ж ц 13 4

341. КСА ХЛЛ 68 м 29.11.05 м ауто ауто — нет

342. БАА ОМЛ 2пр 29.09.05 3 м 06.12.05 м Tre+Cy+ALG CsA+MTX ПСГК н м/м нет 10 0

343. КСА онл 4пр 21.10.05 10 м 13.12.05 м Tre+Cy+ALG CsA+MTX пегк н ж/м 13 1

344. ТНА В-НХЛ 2рец 01.06.05 28 м 15.12.05 м BEAM — ауто ауто — нет 25

345. ФОВ хмл бл кр 04.11.05 21 ж 23.12.05 н Bu+Flu+ALG CsA ПСГК н ж/ж нет 17 374 кдг АА первичн — 14 м 22.12.05 м Циклоф-амид CsA+MTX км P ж/м нет 18 0

346. ДАА ОМЛ 1пр 15.06.05 35 м 27.12.05 м Bu+Cy+ALG CsA+MTX км Р ж/м нет 13 176 где ХМЛ БК поддерж 24 м 17.01.06 н Bu+Flu+ALG CsA ПСГК н ?

347. ДИВ ХММЛ 1рец 30.12.05 61 м 18.01.06 н Bu+Flu+ALG CsA+MTX ПСГК н 14 1

348. КАВ л Берк 1пр 10.11.05 58 м 20.01.06 м BEAM — км ауто — 1379 цюв C-OJUI 13 ж 24.01.06 н Flu+Mel+ALG CsA+MTX ПСГК H ЦП

349. ЧНА оммл 1рец 15.12.05 20 ж 03.02.06 н Bu+Flu+ALG CsA ПСГК н ж/ж ЦП

350. ДАД омл 2пр 30.11.05 4 м 15.02.06 н м/м

351. Протокол выделения лейкоцитов из периферической кровикостного мозга).

352. Подготовительный этап: включить центрифугу на охлаждение, промаркировать одну 15 мл и одну -1,5 пробирки.

353. Взять материал в объеме, соответствующем 1x10 лейкоцитов (объем костного мозга примерно 300-400 мкл). Перенести в чистую 15 мл пробирку. Добавить 0.01М PBS до максимального объема, перемешать.

354. Центрифугировать 1500 об/мин 10 мин при +4°С.

355. Осторожно удалить супернатант пластиковой пипеткой.

356. Залить осадок 1хТЕ буфером до максимального объема, полностью перемешать.

357. Инкубация 10 мин при +4°С (перемешать через 5 минут).

358. Центрифугировать 1500 об/мин 10 мин при +4°С.

359. Полностью удалить супернатант.

360. Добавить 1 мл стерильного 1хТЕ буфера, перемешать на вортексе. Перенести всю суспензию в 1,5 мл пробирку.10. Инкубация 5 мин при +4°С.

361. Центрифугировать 10 000 об/мин 1 мин.

362. Отбросить супернатант (при большом наличии эритроцитов в осадке повторить пункты 9-10).

363. К осадку добавить 1 мл стерильного 0.01М PBS, вортекс.

364. Центрифугировать 10 000 об/мин 1 мин.

365. Полностью отбросить супернатант.

366. Полученный осадок лейкоцитов использовать для выделения РНКнемедленно (допускается непродолжительное хранение на-20°С).

367. Протокол выделения ДНК с помощью "ДНК-СОРБ" (Амплисенс, Москва).

368. Приготовить термостат +56°С.7 о

369. К осадку лейкоцитов (lO'-lO5) или ~30 мг ткани добавить 20 мкл 0,2% раствора Протеиназы К тщательно ресуспендировать на вортексе.

370. Инкубация +56°С 10 минут, вортекс.

371. К осадку добавить 350 мкл Лизирующего раствора, тщательно ресуспендировать.

372. Добавить 40 мкл сорбента, вортекс.6. Инкубация+56°С 15 минут.

373. Центрифугировать 12000 об/мин 10 секунд, удалить супернатант.

374. К осадку добавить 1000 мкл Отмывочного раствора, вортекс.

375. Центрифугировать 12000 об/мин 10 секунд, удалить супернатант.

376. К осадку добавить 1000 мкл Отмывочного раствора, вортекс.

377. Центрифугировать 12000 об/мин 10 секунд, удалить супернатант.

378. Осадок высушить в открытых пробирках при +56°С 5 минут.

379. К осадку добавить 50 мкл буфера ТЕ, вортекс.

380. Центрифугировать 12000 об/мин 5 секунд.15. Инкубация+56°С -10 минут.

381. Центрифугировать 12000 об/мин 5 минут.

382. Использовать супернатант как пробу ДНК.

383. После выделения пробы хранить при 20°С до использования.

384. Протокол выделения РНК с помощью "РИБО-ЗОЛЬ-МИКРО"1. ДНК-Технология).1. День первый

385. Приготовить ледяную баню +4°С.7 8

386. Лейкоциты (10-10°) или ~30 мг ткани гомогенизировать и добавить 300 мкл лизирующего раствора D, тщательно ресуспендировать.

387. Добавить ЗОмкл ацетата натрия, вортекс.

388. Добавить 300 мкл кислого фенола, вортекс.

389. Добавить 100 мкл хлороформа, вортекс 1-2 минуты.

390. Инкубация +4°С (ледяная баня) 10 минут.

391. Центрифугировать 12000 об/мин 10 минут.

392. Перенести верхнюю фазу (около 300 мкл) в чистую пробирку.

393. Добавить 300 мкл (равный объем) изопропанола, вортекс, инкубация -20°С в течение ночи.1. День второй

394. Центрифугировать 12000 об/мин 10 минут с ориентацией пробирок.

395. Осторожно!!! удалить супернатант.

396. Осадок растворить в 100 мкл раствора D.

397. Добавить 100 мкл изопропанола, вортекс.

398. Инкубация -20°С 1час или в течение ночи. День третий1. Включить термостат +60°С.

399. Центрифугировать 12000 об/мин 10 минут с ориентацией пробирок.

400. Осторожно!!! удалить супернатант.

401. Добавить 500 мкл 70% охлажденного этанола, вортекс.

402. Центрифугировать 12000 об/мин 10 минут с ориентацией пробирок.

403. Осторожно!!! удалить супернатант.

404. Добавить 500 мкл 70% охлажденного этанола, вортекс.

405. Центрифугировать 12000 об/мин 10 минут с ориентацией пробирок.

406. Осторожно!!! удалить супернатант.10. Сушить осадок при +60°С.

407. Осадок растворить в 20 мкл РНК-дшноента.

408. Образцы хранить при -70°С до использования.

Оглавление диссертации Зарайский, Михаил Игоревич :: 2006 :: Санкт-Петербург

Введение диссертации по теме "Гематология и переливание крови", Зарайский, Михаил Игоревич, автореферат

Список использованной литературы по медицине, диссертация 2006 года, Зарайский, Михаил Игоревич

Похожие научные работы

Каталог диссертаций