Автореферат и диссертация по медицине (14.00.36) на тему:Модифицированные эритроциты как иммуномодуляторы в норме и патологии

- ' 1 МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РФР ИНСТИТУТ ИММУНОЛОГИИ МЗ РФР

На правах рукописи

СИПЛ ИНАЯ Любовь Евгеньевна

МОДИФИЦИРОВАННЫЕ ЭРИТРОЦИТЫ КАК ИММУНОМОДУЛЯТОРЫ В НОРМЕ И ПАТОЛОГИИ

14.00.36 — Аллергология и иммунология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук

Москва — 1992

Работа выполнена в Курском ордена Трудового Красного Знамени государственном медицинском институте, г. Курск.

Научные консультанты:

доктор медицинских наук, профессор Л. Г. Прокопенко доктор медицинских наук, профессор Б. С. Утешев

Официальные оппоненты:

доктор биологических наук Л. А. Захарова

доктор медицинских наук, академик АЕН А. Н. Чередеев

доктор медицинских наук, профессор И. С. Гущин

Ведущая организация — Российский государственный медицинский университет

Защита диссертации состоится « М » 1992 г.

в «/А часов на заседании специализированного совета Д 074.09.01 при институте иммунологии МЗ РФР по адресу: 115478, г. Москва, Каширское шоссе, 24, корп. 2.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке института иммунологии МЗ РФР (115478, г. Москва, Каширское шоссе, 24, корп. 2).

Автореферат разослан « 3 » СС&уУ^_\99zL-x.

Ученый секретарь специализированного совета

доктор биологических наук

А. В. Колобов.

ШДСУСШЛйЦ

Мз

зльность проблема. Проблема регуляции лгл-тулного ответа

и улраалс шш его развитием является одной из наиболее актуальных .•диссертаций . '

■'—В"тзоврвяенной медицине. Полек средств адъективной стимуляции и

супрессии иммуногенеза тесно связан с изучением функций различных популяций имунопр тов 2 их клеточного шпероокрухения. .Имехк щиеся в настоящее врег.*д. данные позволяют предположить, что при стрессе и в условиях патологии существенную роль в рехул.хдаи . кщуногенвзэ ггрант эритроциты (Васильев Н. Б., 1975). Об этил свидетельствует появление в крови эритроцитов, обладающих нпмупо-модулирушкли свойствам, при различных формах стресса (действие высокой внешней температура, введение гепатотропного яда, действие вибрации) (Прокопенко Л.Г. и др.,1980; Прокопенко Л.Г., Яхонтов Ю.О. ,1981; Сипдивая Л.3., Прокопенко 1. Г. ,1985), а также после введения некоторых фармакологических препаратов (трипсина, террнлитЕНа, ретинола ацетате, токоферола ацетата) (Клыкова'Г.Т. и др.,1980; Прокопенко Л.Г., Чалый ГЛ. ,1585; йшнеова Г.Н. ,1989).

-Кембрана эритроцитов является высокодинашчныи образовани-• ем, состав и структура которого легко изменяется под влиянием различных агентов. Возникающие при этом изменения консВормации глякопротеиднше структур наружной поверхности мембраны эритроцитов приводят к появлении новых элитопов, распознаваемых ииму-нокошетентшми клетками. Следствием такого распознавания монет бить взаимодействие эритроцитов с рецепторами аутологичных лимфоцитов, ускорение поглощения, эритроцитов ыакройагаш и ввделени т-куноцигаки медиаторов иммунного ответа..

Учитывая изложенное, большой интерес представляет вопрос о возможности индуцирования аа^оэдулирзгсдах свойств у эритроцитов путе:.: экстракорпорального, действия на них хишчеогкх

в физических агентов, а также об их эффективности как ишуно-модуляторов при стрессе и в условиях патологии.

Цель исследования. Выяснение возможности экстракорпорального ивдувдрования ишунодадулируквдх свойств у эритроцитов, изучение механизма их действия и о цента эффективности модифицированная эритроцитов как ишуноиодуляторов при состояниях напряжения и в условиях патологии.

Задачи: I) изучение иммуноиодулируадх свойств эритроцитов, ицдуцируошх ферментами;

2) ¡¡зучетше ишуншодулирующих свойств эритроцитов, индуцируемых ультрафиолетовым облучением (УФ-ойлучение) и магнитным полегл - (1Ж);

3) изучение влияния модифицированных эритроцитов на заделе ¡^е клеткам селезеш<и шмуномодулкрувдих факторов;

4) изучение влияния модифицированных эритроцитов и ввде-ляодихся под их влиянием шфгомодулирующих факторов на кооперативное взаимодействие Т- и В-лимфоццтов, развитие антиген-шеццфической и антигеннеспецифической шлмуносупрессив;

5) изучение химической природы, физико-химических и биологических свойств шлмуномодулирутащ факторов, выделяемых .под влиянием модифицированных эритроцитов;

6) изучение чувствительности эритроцитов животных с раз-формами экспериментальной патологии к действии агентов, индуцирующих появление ишузшмсдулирувдих свойств;

. 7) выяснение.эффективности модифицированных эритроцитов как шмуномодуляторов при вабрациошюм поражении, стафилококковой инфекции * алиментарной тяперхолестеринеиии, острой форма панкреатита, токсической зилатопатии.

Научная новизна работы. Сбнаружена возможность иццукции

ишлуномодулирующих свойств у эритроцитов периферической крови' под влиянием ферментов и физических факторов. Показано, что мембрана тяжелых "старых" эритроцитов подвергается однотипным изменения!,1» при действии на клетки различных агентов. В результате этих изменений тяжелые эритроцита становятся способными сталировать'развитие ищунного ответа на Т-завислмые антигены.

Установлено, что модифицированные тяжелые эритроциты штудируют ввделезше им,уностимулируадего фактора макрофагами селезенки, охарактеризована его природа и йтшциоиальная активность. Изучена роль эритроцитов в регуляции иммунного ответа при некоторых формах патологии и в условиях стресса. Установлено, что при действии на организм вибрации, при алиментарной • лшерходестерлнешга, при остром панкреатите в кровотоке появляются легкие "молодые" эритроцита, обладающие пш.глгосупрв с сорной активностью; нрп токсической гепатопатил выявлены тяжелые эритроциты, скшулируювде развитие иимунного ответа на Т-зави-сише антигены. Выявлено, что эритроциты животных с различными формами экспериментальной патологии, аналогично эритроцитам интактшх животных, чувствительны г. действии ферментов и физических агентов. Обнаруженное явление открывает возможность -использования модифицированных эритроцитов как эффективных шлуномодулягоров при некоторых формах патологии, характеризующихся нарушением иммунологической реактивности.

Практическая значимость работы. Обнаружена возможность , индукции тдуношдулирушдас свойств у эритроцитов путем экстракорпоральной обработки их некоторыми ферпентош?, У$-лучат и Ш. Разработаны способы стимуляции иг.».!униого ответа в экеде- ■ г рж.!енге путец введения эритроцитов эх^чшсорпорально, обрабо-

тайных лизоцилюм (Д. с. Л 156Ш76) и подвергнутых действию Ш (положительное решение от 10/12.90 г. по заявка # 4750670/14).

Предложен способ супрессии иммунного ответа путем введения эритроцитов, подвергнутых: действию папаина при ловшенной температуре (положительное решение от 14/3.91 г. по заявке й 46477448/ 14). Предложен способ выявления ншуностшулирувдих свойств эритроцитов (полсеттелыюе решение' от 3/1.92 г. по заявке 1И912102/ 14) и способ стимуляции физической работоспособности Сполоаитбль-ное рекенае от 16/3.92 г. по заявке й 4S26866/I4).

Доказана эйфектавпость эритроцитов, шдншкцировашшх лизо-цимом и УФ-облучением как ишуномодуляторов при вибрационном поражении, стафилококковой ш-йаквди, алиментарной хзшерхолестери-неши а обоснована перспективность клинических испытаний модифицированных эритроцитов в качестве блолотеческого средства коррекции шгмунного статуса и иммунологической реактивности при указанных и других форглах патологии, характеризующихся развитием вторичного шлуиодеу&цита.

Результаты проведенных экспериментов существенно расширяют и углубляют существующие представления о ради эритроцитов в развитии различных форм иммунологического реагирования на 1-зависи-ше.антигены. Они позволяют сформулировать представление о метаболическом уровне регуляции иммунного ответа при отрессе в в уо-лсв&ях патологии, вакнш звоном которого являются эритроциты.

Основше полокешш, выносимые на защиту;

• I. Экстракорпоральное действие на эритроциты различных химических и (ризических агентов нвдуцирует появление у :шх иммуно-«одулируюцих свойств. Иммуности1>5улируюцие свойства приобретают айк&ше, а ш.шуносупрессирующие - легкие эритроциты.

й. Модифицироваише тяжелые эритроциты ицдуцируют. виде-

ленде макрофагами фактора или факторов пептидной природа, ак-• тлвирузощего Т-лшг^оцигь!, усиливающего коолеративноз взаимодействие Т- и В-лиифоцитов'и угнетающего развитие аатигенспо-цифической и питагенне специфическол инцупосупрессии.

3. Модафкцированше эритроциты играют существенную роль в регуляция ик.гунного ответа пр! состояниях напряжения и в условиях патологии.

4. Эритроциты квотных с различными формами экспериментальной патологии чувствительны к действию лизоцима и ультрафиолетового облучения.

5. Модифицированные эритроциты являются эффективными иль мушыодулятораш при некоторых формах экспериментальной патологии, характеризующихся нарушением иммунологической реактив-

■ ности организма.

Апробация работы. Основные положения диссертации доложены и обсугдеш на научных конференциях Е^грского государственного мединститута'(1907,1989,1991), на заседаниях Невского отделения Всесоюзного научного общества иммунологов ( 1985, 1990), на заседаниях курского отделения Всесоюзного научного общества иммунологов (1985,1986,1988,1990), Всесоюзном симпозиуме с мвздународши участием "йимунсдефицаты тг аллоргия" (Москва, 1986), на Всесоюзном симпозиуме "Нейрохуморальная регуляция имцунного ответа" (Ленинград, 1986), I Всесоюзном съезде иммунологов (Догошс-СочиД989), заседании Совета'2-го отдела Института ишунолокщ МЗ РФ (1992).

Публикация. По материала!.: диссертации опубликовано 14 статей и утворздено 5 заявок на изобретения.

' Структур и объем работы. Диссертация состоит из "Введения", 13 глав, "Заключения^ "Внводов л'списка литературы".

Работа изложена на 294 страницах машинописного текста, содер-

. каг 81 таблицу и 15 рисунков. <

Модели и методы

Эксперименты выполнены на беспородных кроликах, крысах • Вистар, мих СВЛ и Р^ССВАхбТВЬ ).

Модели экспериментальных фот патологии

Исследования нроведеш на здоровых животных а на животных с различима, экспериментально вызванными, формам! патологии.

Вибрационное поражение осуществляли на электрическом виб-. ростевде марки СТ-600 путей действия постоянной вертикальной вибрации частотой 50 Гц и амплитудой 0,5 ш по 3 ч ежедневно в течение 14 дней.

Стафилококковую инфекции у мшней вызывали введением живой культуры стафилококка (штамм 210) в дозе 4»10® микробных тел (летальная доза дая мышей). Наблюдение аа да&ицировакныш животными проводили в течение 10 дней. На протяжении этого периода определяли выживаемость шшей в % и среднш продолжительность жизни в днях. Модель локализованной стафилококковой инфекции у мышей воспроизводила по методу Моргунова И.Н. н др. (1982).

Острый панкреатит вызывали путем сочетания перевязки протока и сосудов поджелудочной кадезы и травмы селезеночного сегмента, органа (Шалимов С,А. и др., 1989).

■ , Гиперхшшетеринешю вызывали ежедневным введением в пищевой рацион 0,5 г холестерина в течение 24 недель.

Токсическое поражение печени вызывали введением 5Q& раст-'вора гетрахлорштана в сшивкова,. маоле в количество 0,3 мл на 0,1 кг массы тела в течение 5 дьой.

у

Иммунизация и оценка выраженности ю.г.гушюго ответа

Гуморальный иммунный отвот (ГОО) индуцировали введением Т-завполшх антигенов - зритроцитов барана (ЭБ) и бычьего сывороточного альбумина (БСА), а тают Т-независшого антигена -бактериального липополисахарида (ЛПС). Уровень антиэритроцп-тарных антител определял!! реакцией прямой гемагглютинации, антитела к БСА и ЛПС реакцией пассивной гемагглютинацшз (Кэ- ' бот Е., Мейер И., 1368). Содержите -антител устанавливали после разрушения lgM-антигал' 0,2 М раствором 2-меркаято-этанола. В селезенке определяли количество антитело- и розет-кообразуших клоток к ЭБ (АОК и РОК). Число АОК к ЭБ методом прямого, а к БСА и ЛПС непрямого локального гемолиза (Маль-борг К.,-Зигль 3., 1987). Количество РОК определяли по методу, описанному Зауэр X. (1987).

Ггтерчувс гаи тел ыгос ть замедленного типа (1ST) у крыс т-дуцаровади введением ЗБ {Черноусов А.Д, и др., I97S). О выраженности ГЗТ судили по величине различия массы и количества ядросодержащих клеток регионарного и контралатералыюго лим-фатлческих узлов, спустя' 24 ч после введения разрешающей дозы' ЭБ.

Антигенспецифическую шмунорупрессяю у крыс, обусловленную Т-супрессорада, индуцировали введением животным гийбртмутази-рующей дозы ЭБ (Хаитов P.M. и др., 1980).

Кооперацию Т и В клеток определяли на модели трансплан-тахдаи тшоцитов и костномозговых клеток летально облученным сингетшм реципиентам ( MtllerM^Wicheli G., I&68).

Выделение, фракционирование и индукция тлуномодулпруюдих свойств у аллогекнюс. сингенных и аутологичшх эритроцитов

Эритроциты, использованные в качестве ишуноыодояторов, выделяли из крови шшей, крыс и кроликов и фракционировали в градиенте плотности яичного альбумина (Кобозев Г. В. и др., 1378). фракционирование эритроцитов во избежание гемолиза тяжелой фракции проводили ех ^тоеге .

йгмуноиодудируицие свойства у эритроцитов индуцировали путем обработки их фармацевтическими препаратами протеолити-ческих и гликолитических ферментов - кристаллическим папаином (фирма "могг.ь * ), террилитиноы, кристаллическим яичным лизо-цимоы, гиалуронидазой (препарат "Лидаза"), выпускаемых объединением "Моспредараты" им. Л.Я.Карпова. Препараты ферментов вводили внутримышечно, трехкратно, с интервалом 24 ч: папаин в дозах 0,05 и 0,15 ыт, террилитин - 5 и 15 ПЕ, лиэоцим -0,5 и 1,5 мг, гиалуронидазу в дозах 0,5 и 1,5 УЕ на 0,1 кг массы тела. Экстракорпорально эритроциты и их фракции обрабатывали растворами препаратов ферментов,- содержащих 2 и 10 ыкг папаина 5 и 25 ПЕ террилитина, I и 5 ыг лизоцяма, I и 5 УЕ гиалурош-

7

дасы. В I ш раствора фермента ресуспендировали 10 эритроцитов и инкубировали в стерильных скликонн зирова иных пробирках В течение I ч при 3?°С.

' игыуномодулирующае свойства у эритроцитов индуцировали такке УФ-облучошем (ртутно-кварцевая лэша ШШ-П) и Ш (стационарный электромагнит). Эритроцит и их фракции подвергали действию УФллучвй душной 250 Ш в течение 20 или 40 шн и Ш напрягешюстью 500 или 1000 эрстед в течение 20 шн. Мо-.. ' дифицироиашшв эритроциты и фракции вводили внутрибрюшинно, двухкратно еж пятикрчтно, с, интервалом 24 ч, л дозе клеток

на ОД кг массы тела.

Вадаташе. фракцпоторованио л лнкубацпя спленоцнтов

Сллекодаш вцделшш из селезенки путем выдавливания в стеклянном гомогенизаторе в среде 199, аутологичные эритроциты, удаляли гемолитическим шоком (Бурмойстер Ю., 1979) и фракционировали по способности прилипать ¡с стеклу (Псшуикина Э.Ф. и др., 1983). Спленоциты и их фракции инкубировали в присутствии модифицированных эритроцитов или их фракций. Клеточше взвеси инкубировали в срсдо 199 с добавлением 5% телячьей эмбриональной сыворотки а антибиотиков {пенициллина и стрептомицина) в течение разных сроков (от 3 до 48 ч) 'в ламинарном боксе ЛБ-БОКВ-ТБ И при периодическом обновлении газовой среды №5% Од и С02).

■Дшкдаощрозаиие белков, сыворотки и супернатанта клеток

селезенки

■ -.,.111.1 I ' I. л ^

Белки сыворотки крови фракционировали на хроматографичес-кой колонке, заполненной сефадексом 0-200, белки супернатанта■ на колонке с сефадексом 0-150. Молекулярную массу (Г®) белков сыворотки крови и супернатантов оценивали на основе сравнения объёмов выхода исследуемых белков а белков с известной Ш (Детермап Г., 1970). •

№.юуномодулпрг*«цуи активность йелков сыворопси крови, супернатантов и их фракции определяли путем однократного внутри-бршшшого введения их интактннм животным в объеме, содержавши соответственно 5 мг, 0,5 н 0,2 мг на 0,1 кг массы тела, одновремезшо с инъекцией антигена-0 ХишческоЙ природе ишу-поиодулпрующнх факторов супернатантов су,-ада по их инактивации йерд;ента:!и. С этоЗ-цашз пынршоятет «кшзше хрсгатогрэ-

. ю

фические фракции супернатантов (0,5 мг/мл) инкубировали с рав-ними объемами кристаллического папапна, трипсина, проназы и нейрошнвдази (I иг/ыл) при 37°С в течение 0,5 ч.

Определение общей протеолитической и антипротеолитической активности, активности альйа-Г-антапротеаз (АПЙ) и адьоа-2-»акроглобулина (АШ в сыворотке крови

• Обцун протеа'1ИИ!чос1!у5о и шшшрстоадитаческув активность определяли аетодагш Вершеенко К.Н. с соавт. (1975), активность ДТП! и А2.1Г - методом, предлокегаши ПартнковоЙ В.Я. и Пасхиной Т.О. (1979).

Статистическая обработка цифрового материала

Статистичвскуи обработку цифрового материала проводили путей вычисления средней арифметической (М) и квадратического отклонения Со'). Существенность различий средних величин оценивали с помощью критериев Стьюдента и Вилкоксона-Манна-Уитши

РЕЗУЛЬТАТ» ИССЛЕДОВАНИЙ

Ишуномодулирующие свойства эритроцитов иитра-корпоральио индуцируемые ферментами

В условиях стросса и особенно патсдопш изменяется проницаемость моточных ыоыбран, что приводит к накоплению в 'сосудистом русло метаболитов,.способных оказывать влияние на активность ишуноцитов. Метаболический механизм ишуиосупрес-С1и в условиях патологии обусловливает необходимость использования для лечения многих заболеваний мшлуноиодуляторов, первично влияющих на метаболические процессы. К таким модуляторам можно отнести протеолитические и гликодитические ферменты

Изучено влияние протеадатеских ферментов (паивина, тер-

рилитина) зз гликолятаческих (лизоцша и гвалурошадазы) на развитие иммунного ответа к ЭБ, БСА и ШС у здоровых животных." Установлено, что введение крысам террилитина, лизощша и . гиалуронидазы стимулирует.развитие ГИО на Т-зависиыые антигены • (ЭБ и БСА)и ГЗТ на ЭБ , но не влияет на иммунный ответ, пндуци-' ровазшый Т-независимым антигеном (ШС). Инъекции папаина не изменяли интенсивность иммунного ответа к Т-зависимым и Т- . независимым антигенам. Инъекции ферментов животным вызывают сложный каскад реакций,в результате которых в сосудистом русле накапливаются соединения, оказывающие влияние на свойства и функциональную активность клеток крови. Одной из главных мишеней для тагах соединений могут быть эритроциты. В связи о этим исследовано влияние эритроцитов животных, получавших • ферменты, а такш эритроцитов лктактных крыс, обработанных сывороткой животных, получавших фермента,па развитие яммугто-го ответа, квдуцировагогого ЭБ, БСА и ЛПС. Установлено, что введение крысам террилитина, лизоцша и ивдуронвдазы приво- • дат к появлению в сосудистом русле эритроцитов, обладающих свойством стимулировать. ШО и ГЗТ на Т-зависиыые антигены при аллогешгоы переносе. Появление адыоваитных свойств у эритроцитов обусловлено действием на них сывороточных факторов (табл." I). '

№д.гун0м0дулируюше свойства эритроцитов. экстракорпорально иишштдгеше Ферментами и Физическими агентам

Исследовано влияние препаратов ферментов папаина, тер-' ралитлна, лизоцгола и гиалуронидазы, УФ~облучения и Ш на им-муномодулирующие свойства эритроцитов.

Установлено, что эритроциты, экстракорпорально обработанные при 37°С■ терри лившоы п-ливоцимом, приобретают свойство

стимулировать развитие Ш) и ГЗТ на ЭБ. Йлыуноыодулирущая • активность эритроцитов, инкубированных с указанными фермента-"ми, неодинакова - более выракена она у эритроцитов, обработанных лизодаыом. Обработка эритроцитов интактных крыс папаином и гиалуронвдазой при 37°С не приводила к появлению у них иы-муномодулирующих свойств. Аналогичное влияние оказывают модифицированные ферментами эритроциты на развитие иммунного ответа, ивдуцированного БСА. Эритроциты,экстракорпорально обработанные папаином, террилиишоы, лизоцшом и гиалуронвдазой, не влияли на развитие П10, вызванного ЛПО. Зыракенпость изменений структуры иеибраш эритроцитов при обработке их ферментами зависит от температуры инкубационной среды (Евсе.ЗайШо-9. et а1., 1975"; эи.воп А, а* а1., 1975). Учитывая это, были исследованы ишуноыодулирущие свойства эритроцитов, инкубированные с ферментами при 42°С.' Оказалось, что повышение тешературы инкубационной среды не влияет на эффект, вызываемый террилитииогл и лизоциыом. Инкубация эритроцитов о гиалуронвдазой при 42°С>так :хе как инкубация при 37°С,не сопровождалась появлением у клеток иммуномодудирующих свойств,- Инкубация эритроцитов с папаином при 42°С вызывала появление у эритроцитов пммуносупрессирующих свойств.

Эритроциты, циркулирующие в сосудистом русле, представляют собой гетерогенную популяцию клеток, отличающихся по Возрасту и соответственно этому по плотности, структуре мембраны,. функциональной активности ( Тапшяч Сь. е1; а1. , 1977).

Учитывая это, было исследовано влияние ферментов на ишу-номодулируюище свойства разных по плотности фракций эритроцитов. С этой целью в градиенте шотности яичного альбумина выделены: легкая фракция эритроцитов плотностью, меньшей 1,079

г/см^, промежуточная по плотности фракция эритроцитов (1,0911,105 г/сы^), тяжелая Трагедия эритроцитов плотностью, превы-

«3

лающей 1,117 г/сг.г. Установлено, что после обработки эритроцитов террилитином и лизоцимом июлуностамулирующие свойства . приобретала тяжелая фракция эритроцитов, а обработка папаином (при 42°С) ивдуцировала появление шлмуносупрессирующих свойств у легкой фракции эритроцитов (табл.1). Наиболее выраженной стимулирующей активностью обладала тяжелая фракция эритроцитов, обработанная лизоцимом. '

Таблица I

Ишуногюдулирущее действие ферментов при интракорпорйшьном введении и экстракорпоральном действии на эритроциты

: Ишуноста-: Ишуности-: Игя.туностиму- : Иммуности-: : лулирувдий: мулирущие: лчрующие свой-.-мулирумцие :эффект :свойства :ства эритроци-:свойства Фермента :ферментов ."эритроци- гтов иптактных :эритроцитов, :при интра-:тов при :крыс, обрабо- :экстракор-:корпораль-:интракор- :танных сыво- ' :порально :ном введе-: пора льном :роисой, полу- :обработан-: нии : введении :чавпих инъек- :ных фермен--: : :цип ферментов : таш

Папалн -

Террилитин ++ ++ ++ ++

Лизоцим +++ ■ +++ +++ . +++

ХЬалуронидаза + + •' +

Тяжелые фракции притроцитов, экстракорпорально обработан ные террилитином или лизоцимом, вызывают пирогенннй эффект и нерезко выраженное увеличение количества лейкоцитов в периферической крови. Введение' модяфицлрованннх эритроцитов по принятой охепе не вызывало реакции ШО. п ГБТ, выявляемых с яо-нощыо использует ¡кх тестоз. '

и

Результаты проведенных исследований показали, что при ■ экстракорпоральной обработке эритроцитов терршштинои и лизо-цамом появляются выраженные иммуностимулирующие свойства. Это мо^ет быть следствие;/! адсорбции ферментов на мембране эритроцитов или результатом модификации поверхностных структур мембраны эритроцитов, сопровождающейся появлением новых згштопов, распознаваемых шиуноциташи Для решения этого вопроса получали кроличьи антисыворотки против тяжелых эритроцитов,- обработанных лизощшом, и против свободного лизоциш. Титр антител против модифицированных лизоцймом эритроцитов равнялся 1:1260, титр антител против лизоцима 1:256. Истощение антисыворотки к модифицг.ровашшм эритроцитам ферментом и антисыворотки к ферменту шдифицированныш эритрсдеташ не оказывало влияния на величину тигров антител в этих сыворотках. Вместе с тем, истощение первой антисыворотки модифицировании;®! эритроцитами, а второй-ферментом снижало титры соответствешю до 1:4 и Ii2. Эти данные позволили прийти к выводу об отсутствии на мембране модифицированных эритроцитов лизоцша в количествах, выявляемых при шыуниаадаи или постановке реакции гемагглвтинации;

■ Индукцию иммуностимулирующей активности у эритроцитов при ' вцу тришсечном введении ферментов вряд ли можно объяснить прямым действием проникающих в сосудистое русло соединений на мембрану эритроцитов. Более вероятно, что ферменты в место введения шш в сосудистом русле инициируют цепи последовательно осуществляющихся реакций, которые приводят к образованию метаболитов, модифицирующих мембрану эритроцитов. Принципиально важным является тот факт, что действие на мембрану эритроцитов разных по каталитической активности ферментов и соединений, накапливающихся иод их влиянием в крови, как правило, приводит

к возникновению одинакового эффекта - появлению у тяжелых эритроцитов иммуностимулирующих свойств. Это свидетельствует о наличии на мембране тяжелых эритроцитов молекулярных структур, одинаково реагирующих на неодинаковые химические сигналы. Воз- • никновение однонаправленного эффекта при иптра- и экстракорпоральном действии различных по химической природе и функциональным свойствам биоорганических соединений позволяет дума-ь, что ' появление иммуностимулирующих свойств у тяжелых эритроцитов иокет играть существенную роль в поддержании иммунного гомео-стаза при различных формах стресса и патологии. Одной из первых реакций на действие чрезвычайных раздражителей является усиление секреции глюкокортлгеоадов и повышение пх концентрации в крови (Панин Л. 3., 1963). Этим в значительной степени обусловлено угнетение функции иммунной системы, характерное для стресса л штагах форм патологии. Не исключено, что появление в кро-^ ви в этих условиях эритроцитов, обладающих иглмуноотшлуллрующп-ми свойствами, является реакцией, направленной на ограничение-тдяшосупроссорного эффекта, вызываемого ъоргакостеровдаш.

Эффективность действия иммуномодуляторов определяется также их влиянием на устойчивость иммунной системы в отношении агентов, изменяющих выраженность ее реакции на антигенные раздражители. .Введение ферментов, или обработанных ими эритроцитов-изменяет чувствительность иммунной системы к действию физичео- . кой нагрузкп (плавание в течение 2 ч с грузом, соогавляэдим 5% массы тела) и кратковременному (в. течение 24 ч) голодают. Физическая нагрузка, выполняемая в указанном режиме, у всех животных, получавших ишуномодудяторы, угнетала развитие иммунного ответа на ЗЕ. Выраженность этого угнетения у крыс, которым вводили препарат» Зерлентов, была значительнее, че\? у т-

воишх, получавших инъекции модифицированных ферментами эрит-• роцитов. Кратковременное голодание угнетало развитие ишунно-'го ответа у крыс, которым вводшш ферменты, но не влияло на этот процесс у животных, получавших инъекции обработанных фер-.ментами эритроцитов (табл.2).

Результаты этих экспериментов показывают, что чувствительность 'иммунной системы к действию неспецифическях агентов при интракорпоралыюгл действии ферментов сикается в большей степени, чем при введении экстракорпорально обработают; ими эритроцитов. Это объясняется разнонаправленным характером им. вдгсгамодулирущих эффектов реакций, индуцируемых ферментами в целостном организме. Такая раэнонаправлешюсть нарушает тонко отрегулированное взаимодействие различных физиологических систем, '^чествующих в регуляции иммунного ответа. Введенные в организм модифицированные ферментами эритроциты, вероятно, включают только небольшое число реакций, однонаправленно влияющих на развитие иммунного ответа. Это в меньшей степени, чей инъекции препаратов, нарушает сбалансированное взаимодействие систем от.шуноре1уляцщг. Вое изложенное свидетельствует о том, что экстракорпорально модифицированные ферментами эрит-' роциты являются более эффективными иммуномодуляторамм, чем йрепараты соответствующих ферментов.

При лечении различных заболеваний используют аутологичнуы кровь, экстракорпорально подвергнутую действию УФ-ойдучения и Ш. Введение такой крова в роде случаев повышает нвсн'ецифи-ческуы резистентность и иммунологическую реактивность организма, однако этот эффект воспроизводится недостаточно стабильно (Поташов Л.В. и др., 1988; Карякин H.A. и др., IQ36). По-видимому, в такой тюгокоше^нтной системе как цаяьная ■

Таблица 2

Влияние физической нагрузки и дозированного голодания на развитие иммунного ответа при итаекции ферментов и обработанных ими аллогенных эритроцитов

Иымуноыодулятор

Контроль

Физическая : Кратковременное

нагрузка : голодание

17,5+1,8 21,6+1,

Р ^ 0,05 Р > 0,05

К = 0,25

20,&+2,2 27,4+2,6

Р 0,05 Р < 0,05

К о 0,35 К = 0,15

27,6+2,5 36,2+3,0

Р < 0,05 Р' с 0,05 '

К = 0,42 К = 0,23

33,2+3,1 40,0+3,2

Р <Г 0,05 Р> 0 ,05

К -- 0,22

49,6+5,0 '58,8+5,3

Р 0,05 Р> 0,05

К = 0,19

Контроль (без ищу- 23,4+2,1 номодулягора)

Террилитш

Лизоцим

32,3+3,4

47,6+4,4

Эритроциты, обрабо- 43,0+3,8 ташше террили таном

Эритроциты, обрабо- 61,3+5,7 танные лиз.оцимом

Примечание: К - коэффициент супресспи

К = (?.! контроль - 1,1 опыт) / и контроль

кровь изменения молекулярных и клеточных структур под влиянием указанных агентов пол;ет неоднозначно влиять на функциональные системы организма,® том- числе и на ;:.,!,тук.г<7/» систему.

Исследовано влияние УФ-облучения и Ш на иммуномодулирую-щие свойства эритроцитов (и их фракций) интактных крыс. Уста' новлено, что эритроциты иитактных кизотвдх, подвергнутые действию Уф-облучения или экспонированные в МП, стимулируют-развитие ШО и ГЗТ на Т-зависише антигены, но не влияют на интенсивность иммунного ответа, индуцированного Т-пезависимшл антигоном (ЛПС) у интактных лшвотныл (рпс.1). Имлукостпмули-рующно свойства приобретают тяжелые эритроциты. Таким образом, экстракорпоральная обработка эритроцитов химическими и физическими агентами шдуцирует появление ишлуностимулпрущпх свойств у тяжелых эритроцитов.

Результаты проведенных исследований позволяют предположить, что обработанные ферментами и физическими факторами эритпоциты аффективнее взаимодействуют с иммуноцитами и вызывают их реакцию, приводимую к усилению или ослаблению развитая итутюто ответа на Т-завдснше антигены. Попшешзв эффективности взаимодействия эритроцитов с макрофагами и лимфоцитами может быть обусловлено как физико-химическими (снижение заряда поверхности эритроцитов), так и биохимическими (появление структур, распознаваемых рецепторами имыуноцитов) причинами. Установлено, что обработка тяжелых эритроцитов терридитином, 'лизошшом, Уф-облучением д Ш приводит к снизшшю величины их дзета потенциала (до обработки он равнялся 17,8+1,5 мв, после обработки - соответственно 12,6±1,2 мв; 11,2+1,1 мв;11,8+1,3 Ш)).-В то жо время дзета потенциал этих клеток не изменяется после инкубации их с гиалурошздазой. Дзета потенциал легких нативных эритроцитов (20,4+1,8 мв) несколько выше, чем тяжелых ' и обработка их папаином привода* к его иижекию (до 16,5+1,7 мв). Снижение дзета потенциала эритроцитов,вероятно,облегчает

ш*

60 40

го

/г

>И8

п

7 а 9

/о

/г /э

Рис.1. Шуу1юдадулирувщие свойства аллогенных эрптооцптов и фракций, подвергнутых действии

УФ-облучевия и Ш

По осп ординат: количество' АОК 103/ор'ган. По оси абсцисс: I - контроль (без введения эри^ • роцитов); 2,3,4,5 - введение нативных эритроцитов и фракций (легкой,промежуточной по плотности, тякелой); 6,7,8,9 - введение УФ-облученных эритроцитов и фракций;- 10,11,12,13 - ' введение Ш эритроцитов и фракций.

их взаимодействие с иммуноцитамв, но не влияет на направленность вызываемых ими эффектов. Последняя, по-видяыому, определяется типом клеток, преимущественно взаимодействующих с легкими в тяжелыми эритроцитами.

Появление шлыуношдуливувдих свойств, вероятно, обусловлено образованием или деззкранированиеи на мембране эритроцитов новых эго)топов, распознаваемых рецептораш иммуноцитов. Для проверки этого предполонения получены кроличья антисыворотки против нативных эритроцитов крысы (АсНЭ) и против УО-облученных эритроцитов крысы'(АсУЭ). Обе сыворотки истощали • нативныш ели УФ-облученныш эритроцитами. Титр антиэритроци-тарных антител к нативным и УФ-облучекным эритроцитам в АсНЭ до истощения равен 1:1024, а в АсУЭ - 1:2048. После истощения АсНЭ нативнши и УО-облученными эритроцитами титр антител при реакции с обоими пулами эритроцитов снизился до 1:4, 1:2. Истощение АсУЭ нативныш эритроцитами привело к снияешда тигра антител до 1:4 при постановке реакции о нативныш эритроцитами и до 1:256 при использовании в качестве тест-антигона УФ-облученшх эритроцитов. Истощение АсУЗ-облучешщш ьритро-циташ привело к снижении титра антител до 1:4 с УФ-облучен-нымй эритроцитами. На основании этих данных можно заключать, что в АсУЭ имеются антитела, которых нет в АсНЭ. Вероятно, эти антитела специфичны в отношении антигенных детерминант, появляющихся ка У^облученных эритроцитах, но отсутствующих на нативных эритроцитах.

Иотощеше нативныш и УФ-облученными эритроцитами АсКЭ и АсУЭ использовали для разрушения (гемолиз в присутствии комплемента) эритроцитов, имеющих на мембране эштопы, специфически реагирующие с антгтелами истощенных сыворотРК. Установлено,

что истощенная нативными эритроциташ АсУЭ снижала количество' негемолизированннх клеток в суспензиях тяжелых УФ-облученшх эритроцитов на 24-35$. АсУЭ, истощенная УФ-ойлучензшми эритроцитами, такого эффекта не вызывала- Суспензии тяжелых УФ-облу-ченных эритроцитов после шшубавдв с АсУЗ, истощенной нативными эритроцитами крысы, не стимулировали развития иммунного ог-вета на Т-зависимне антигены при аллогенном переносе. £ отличав от этого АсУЗ, истощенная УФ-облученкыми эритроцитами, не сникала количества негемолизированных теток в суспензии тяжелых УФ-облучонных эритроцитов и не лишала их свойства усиливать развитие иммунного ответа на Т-зависимые антигены.- Аналогичные результаты получены при обработке неистощенной м истощенной АсУЭ суспензий тяяелых эритроцитов, экспонированных в Ш. -

Полученные даиные позволяют прийти к выводу о том, что под вкгяшгем УФ-лучей и Ш на мембране тяжелых эритроцитов появляется новые; близкие по структуре эпигоны, обусловливав' вд;е их кщуносгимулируадио свойства.

.Эритроциты тяжелой фракции представлены в основном "старыми" эритроцитами, мембрана которсас в процессе циркуляция в сосудистом русле претерпевает различные изменения и которые интенсивнее поглощаются макрофагами (1.о1Ьоу1сЬ г. еЛ аг. , 1930). Б процессе фагоцитоза макрофаги ввделяют многочисленные биоорганпческие вещества: протеояиткческие фермента,' ли-зоцим, интерлейкшш, обладающие способностью усиливать развитие иммунного ответа па-Т-эзвисимые антигены' (Карпов С.П. и др., 1978; Ковальчук Л. В., Чередеев А.Н., 1991). ¡-Ложно пред-полоюзть, что поглощение какрофагаип тяголих тюдифгздгрованных эгл!71».!5-:тоз лр:;5э.пт:г г. Ьц-дазхю г^пногсн!, которые ока-

зывают стимулирующее влияние на функциональную активность различных субпопуляций лимфоцитов.

Изучение механизма иммуномодулитадвдего действия шдтТмцироваШмх эритроцитов

Исследовано влияние модифицированных эритроцитов на выделение иымуноиодулирующих факторов клетками селезешш неиммун-1шх сиигешшх гивотанх. С этой целью интактным мышам вводили сингонше модифицированные лизоцимом или УФ-лучами эритроциты. Через 24 ч после последней инъекции модифицированных эритроцитов выделяли клетки селезенки, получали супернатант и выявляли наличие в нем пммуноыодулирующих факторов.

Установлено, что клетаси селезенки неиммуиных животных, получавпшх инъекции сингенних модифицированных эритроцитов, водсляют в ишсубацяо1шую среду фактор, стимулирующий развитие иммушюго ответа на Т-завясиыый-антиген ЭБ. Введение суперна-танта не вызывало изменений интенсивности иммунного ответа, индуцируемого- Т-незавмсшым антигеном - ЛИС. Спленоцаты животных и человека представляют гетерогенную популяцию клеток,состоящую в основном из лимфоцитов (до 88$), макрофагов и поли-.морфпоадернш; лейкоцитов.

Для вшенеиия вопроса об участии определешюгб типа клеток в выделении иммуностимулирующего фактора, спленоциты, ос-вобоздешше от аугологичных эхл1трощгов, фракционировали по способности прилипать к отмму на две фракции: прилипающую и неприлипавщую. Прилипающие к стеклу клетки на 80-85$ представ-лэш макрофагами, неприлипающие соленоциты в основном состоят из Т-и Ъ-мтфощтов. Прилипающие и непршшпаадпе клетки такишх мышей инкубировали с сингенншли модифицированными эритроцитами к полученный супернатант вводили сингоиннм 'живот-

ним. Оказалось, что инкубация прилипающих к стеклу клеток селезенки интактиых мышей с сингеннши модифицированными эритроцитами. индуцировала или усиливала вццеленио ими имыуиомодулирую-щего фактора. Супернатант прилипающих клеток инкубированных с модифицированными эритроцитами (СПКМЭ) стимулировал развитие иммунного ответа к ЭБ, но не изменял интенсивность иммунного ответа к ЛПС при сингенном переносе.

Способностью прилипать к стеклу обладаю! макрофага и некоторая часть Т-лимсЬоцитов. Установлено, что предварительная обработка прилипающих клеток селезенки антиткмичесхой сывороткой в присутствии комплемента вызвала лизис 12-1% клеток и на влияла на способность неразрушивпшхся сшшвоцитов выделять иммуностимулирующий фактор при инкубации с модифицированными эритроциташ. Это позволяет считать, что модифицированные эритроциты индуцируют выделение шдаунос ¡симулирующего фактора макрофагами селезенки.

Установлено, что иммуностимулирующий фактор, выделяемый прилипающими клетками, под влиянием модифицированных лизоцимоы или УФ-лучами эритроцитов не диализуется, однако в ЙШЭ содержится диализуемая субстанция, ослабляющая действие и;дмуно-отимулируйщего фактора. Фракционирование СПКЫЭ на сефадексе 0-150 позволило ввделить три белковые фракции. Основная масса белка, около 705?, выходила в свободной объеме 60-70 мл и, следовательно, имела Ш, превышающую 150 кД (I фракция). Остальные две фракции, окало 20 и 10$ соответственно, выходили в объеме 120-130 и 160-170 мл и имели 50-60 кД (П фракция) и 10-12 кД (Ы фракция).

При введении хрома тмрафических фракций здоровым ■ схшгешшм

животным, иммуност1удцрутащей активностью обладали субстанции, входящие в состав ti белковой фракции. У агеотшх, получавоих шпьекцш этой фракции, количество ДОК било в 3,8,.а РОК в 4,0 раза выше, чем у контрольных животных. Введение I фракции СПКМЭ вызывало супрессии иммунного ответа у скнгекшх лввот-ных (по сравнению с контрольной группой количество A0IÍ уменьшалось в 1,9, а РОК в 2,2 раза). П белковая ¿jipaкздя СШМЭ не оказывала влияшя на развитие иммунного ответа у евнгешшк тавотных.

feiynoc табулирующий фактор оказался относительно термоустойчивым, он сохранял активность при 56°С в течение I ч, но разрушался в случае прогревания в течение I ч при 60°С, инак-тивпровался протеслцтическими ферментами (трипсином, проназой), но был устойчив 1С действию иейрашшдазы. Результаты этих экспериментов свидетельствуют о том, что хшмуносгамулкрующий диктор , выделяемый макрофагами селезенки, под влиянием модифицировании" оуигроштов, является достаточно болызим поляпепищои, на протяжении которого имеются связи, расщепляемые разными по каталитической специфичности протеазами, и об отсутствии в его составе углеводного компонента или о необязательности его наличия дез осувдстддашя пм1.1упосгльулпрушего действия фактора.

Пэвостпо, что уснюние процессов анаэробного гликолиза в лн:л;}о;ята:: яаднзтея биохимическим признаком их способности реагировать на действие антигеном ;:дп питогенов (Cordialli-Рсi п. , It»80). i3 свяы1 с отим было исследовано влияние'

лгллшанщи:: меток сечеэоикм, инкубированных с мог.;:.;.:::;:роаг.ннгг.з' дизоцпмом пли 7(%облучснгасд:; арнтроццгамп, г:; х-чTvV;c:u:c .;:ак4'«га, шуугэдровсиглос ОГД. Скзгалссь, что ;в

ЙШ.1Э содержатся не только факторы,стацулирующиэ ладуцируомое ФГА, выделение лактата, но и субстанцпп, которие сами по ccöo (ÖG3 ФГЛ) усиливают ззыделезше лактата кдеисамз» еалезезпш зш-тактных »ошоишх. Это позволило прийти к заключсшю, что одшш из этапой ишдуиомодулируюаего действия СШи.!Э являогся активация анаэробного энергообеспечешш функций лимфоцитов солозешш.

Выралсоззззость иммунного ответа на Т-зависише антнгезгц в значительной степени определяется эффективностью кооперативных взаимодействий кымуиокомлетезтшх клеток. Учитывая это, исследовано влиязшо СПКМЭ на кооперацию Т- п В-лп:.)фоцптов. С этой тделью мышаи-доцорам тиыоцитов л костномозговых клеток вводили супврнатант прзшгааючдах клеток,шпсубпровашзых с эритроцитами, обработанными лизоцшлоы и У5~дучаш. Рецнзшеытаи гашоцитов и клеток костного мозга былл летальз-зо облученные мыши.

Установлено, что при введезши СПКМЭ донорам тимоцитоз и костномозговых клеток в селезенке облученных рещшиезиов, иммунизированных ЭБ, образуется в 2 раза больше AGK, чем у реципиентов -клеток тимуса и зсостыого моз1ц газвотных, не получавши инъекции СПКМЭ. Такое же зеолззчество ДОК образуется в селезенке облученных реципиентов зизеток тпмуса мшей, падучавдшх изаекцин СПКМЭ и костномозговых зелетозе животных, которым супернатант не вводилзз. При обратной постановке опыта (введение тпмоцитоз мышей, не получавших СПКМЭ и клеток костного мозга иивотных, xto-торым вводили супернатаззт) число АОК, образующихся в селезенке облученных реципиентов, было такззм «о,зсак у мышей, которым вводили гемоциты и зязелоциты от ииволшх, не получавших СШС.13 (табл.3). Результаты этззх исследований локазалзз, что СПКМЭ усиливал кооперативное взаимодействие Т-и В-лпмфоцнтов, что это усиленно обусловлено влиянием фаз.тора (ов> сузз'ернатаззта

Таблица 3

Влияние супернатанта прилипающих клеток селезенка, ин;суби-рованных с УФ-облучешмш эритроцитами, на кооперативные взаимодействия Т- и В-лимфоцитов в иммушоы ответа

Условия опыта та: : Количество: Количество АЭД, 1 кивотннх 1 10^/орган

I. Контрольные лшвотше (без введения супернатанта) 9 26,9+2,6

2. ООлучешше ;,швотше 40 1,7+0,2 Р| 4 0,05

о. Введение облученным животным тимоцитов и миелоцитов гнтакт-шх шшей 40 8,7+0,5 Р1 ¿0,05. ?2 0,05

4. Введение облученным яивотныы тимоцитов и миатоцитоа мыыей, получавших СПКГ.13 . 40 17,2+1,8 Рх ¿0,05 Р2 0,05 ' Р3 ^ 0,05

5. Введение облученным гзшогнш ■ шюцитоп мышей, получавших СПКМЭ и ¡.нюлоцптов интактных мышей ' . 35 16,4±1,8 ?! С,05 Р3 0,05

Р4 > 0,05

С. Введение облученным зхпвотным 35 8,4^1,5

та.оцитов интактннх мышей п Рт 0 05

гаелохдатов мшен, получавшх .

С1ПС1Э • ■ % > 0,05

Р4 ^ 0,05

на активность Т-лнмфоцитов. ]1нтенмшность иш^ашого отвеаа в значительной степени определяется мехата:змом аптпгепспоцифя-ческой нммупосупроссхш, являющийся пахшим звено;.! рмудтцш нэпржешостп шатунного ответа на Т-зависшлые антигены. Вешв-лено, что пеприлшаищие клелсп селезенки гиперпшуинзировашшх мыпей; которым вводили СШ-3,13, вызывали у реципиентов супрессию развития иммунного ответа па ЗБ, по эта оупросспя была впраке-на слабее, чем у животннх, которым вводили непрплппаю^ю клот-ка доноров, не получавппх инъекции СШС.!Э. Таким образом, иммуностимулирующий эффект, вызываемый сингшшшн модпйнцпровашш-ми эритроцитами, обусловлен их влиянием lía к на кооперативное взаимодействие Т- и Б-лимфоцитов, так п га функщио антпгенспе-цифических Т-супрессороа.

Стабильное функционирование любой кибернетической систем!!, в том числе и иммунной, в значительной степени зависит от реализации обратных отрицательных связей. Результаты наших экспериментов ползали, что по крайней мере один из механизмов ан-тигенспецифической иммуносупрессии - активация сулрессоров при введении модифицированных эритроцитов оказывается угнетенным. Естественно баю предположить, что в этих условиях начинает функционировать какой-то дополнительный сулрессотлшй механизм.

Проведенные исследования показалп, что пятпкратноз введение сингенных модифацзрованних эритроцитов вызывает угнйтониэ развития иммунного ответа на Т-зависпмне антигены при введении последних через 72 ч после заключительной инъекций моди'.ицпро-ванных эритроцитов. Стимуляция иммунного ответа в условиях наших экспериментов обусловлена взаимодействием шдкфициравзгашх эритроцитов с макрофагами. В овязн с этшл воззшк вопрос - не оказывают ли факторы, выделяемые мкрефэга^л под влияньем но-

дампированных эритроцитов влияния на свойства эритроцитов. Установлено, что обработка эритроцитов СШСЛЭ индуцирует появление у легких эритроцитов ит.иупосупрсссирувдпх свойств (табл. 4). Появление иммуносупрессмруцщей активности у легких эритроцитов наблюдается при обработке их 1-й хрома тографичосксй фракцией СШШЭ, содержащей высокомолекулярные белки.

Эти наблюдения свидетельствуют о том, что ввсденио модифицированных эритроцитов изшциирует включение гак прямых лсйсеи-телышх (стимулирующих), так и обратных отрицательных (ограничивающих развитие иммунного ответа) сигналов. Сила обратных сигналов находится, по-видимому, в прямой зависимости от выраженности прлг.1ых эффектов. 3 силу этого образуется хорошо сбаданей- | рованная система регуляции иммунного ответа, равновесие в кого- ! рой вначале сдвинуто в сторону усиления иммунного ответа, а позднее - в сторону его ограничения, •

Вероятно, что иммунооупрессорное действие легких эритроцитов так;;;о обусловлено их влиянием на лмыунорегуляторные субпо-нуллшш макрофагов и лимфоцитов. Установлено, что сигнал, создаваем^ модифицированными СЛЕШ легкими эритроцитами воспри-шмастсл макрофагаш, которые затем индуцируют выделение антп-гонпослогифпчсского пммуносулрессорного фактора Т-лимфоцпташ. Иммулосупресссрнай фактор, выделяемый Т-тфоодтамп под влпя- | ют;,; медпфшдаговзшшх СЛК<:2 легких'эритроцитов, не влияет на кошераг:;впыс процессы 1- и В-лнмфоцитов, но усиливает функ-:вю1а^.оваш1е механизма антигеисноцнфпчсской нммуносупрессии. Хахактоуиой ооойс1к:оотьи «едиаторов юцуннохо ответа, вы-макго.Т-а"а.'.:;;, является ищх'онпе их з еяетеау дейозвзя спг.ил^в, оосспз'гпзагги;:;; реалпзоааз- обпаишх отр1щт.ельних свя-

Таблица 4

Влиязше СП1Ш на изшуноз-юдулирующун активность фракций сззззгез1ных эритроцитов

пл Условия опыта : ЛОК к ЭБ 103/орган ЛОК к лпс 103/орган

I. Контроль (без взедезшя

спнгенных эритроцитов) 24,5+2,6 21,0+2,3

2. Введение нативных сзшген- 23,8+2,4 23,1+2,1

ных эритроцитов Р1> 0,06 Рх > 0,05

3. Введение легких эритроцитов, 22,9+3,1 20,4+1,9

обработанных СПКНЭ Р: > 0,05 Рх > 0,05

4. Введение промежуточных по 25,1+3,3 22,1+1,8

плотности эритроцитов, обработанных СПКНЭ Рх > 0,05 Рх > 0,05

5, Введение тякелых эритроци- 1у 9 2а,4+2,2

тов, обработазпшх СПКНЭ Р-^ 0,05 0,05

6. Введение легких эритроцитов, 14,4+1,3 13,6+1,1

обработанных СПКМЭ Р3 ^ 0,05 Р3 г 0,05

7. Введезгае промежуточной по плотности эритроцитов, 24,1+2,1 20,1+2,0

обработанных СПКНЭ Р4> 0,05 Р4 > 0,05

8. Введезпзе тякелых эритроцитов , 23,9+2,3 22,9+2,9

обработазпшх СПКМЭ ?ч> 0,05 О Р5> 0,05

зей и таким путем поддергивающих стабильность фракций ишушзой ' системы. В регуляции иммунного ответа на Т-зависише антигены принимает участие система сывороточных протерп л антипротесиш-

тических белков. Обращает на себя внимание тот Факт, что фракция (ЗШЭ, содержащая иммуностшлулад^щий фактор ( И фракция СШШ), при 5-кратноы введении интактным животным вызывает снижение протеолитической активности и новыиение концентрации АШ и АЖ\ обладающих выраженными им.\1укосзгпрессорлы;.!:1 свойствами

Ь.К. , ЕДг1п^оп Т.В. , 1Э7Э; !^о1зеп СЬ.Л. с* а1., 1984). 1.5окио предположить, что повышение концентрации антппро-теолитдческих белков является одним из звеньев механизма обратной отрицательной связи, предулрездащого возникновение ги-перэргичеоких реакций па Т-зависимые антигены при действии на организм ишуностимуллрующих агентов. Вероятно, предупреждение чрезмерного увеличения иммунологической реактивности настолько физиологически важно, что эволюционио закрепилось несколько направленных на это механизмов. Два из них - индукция кммуносуп-рессирующих свойств у эритроцитов и выделение в сосудистое русло антипротсояитических белков, подавляющих активность имиуноци-тов - выявлены при введении модифицированных тяколых эритроци-' тов. Таким образом, модифицированные тяжелые эритроциты индуцируют (пли усиливают) ввделение клетками селезенки целого семейства различных по молекулярной массе и функциональной активности Факторов, которые образуют систему, регулирующую реакцию организма на Т-зависнмыв -антигош. Благодаря этому не происходит ■ . чрезмерного повышения иммунологической реактивности,организма в отношении Т-заввсимых антигенов, к числу которых относится . подавляющее количество тканевых антигенов и аллергенов.

МодгЛццитювашшо эритроциты как годгуномодудяторы • ■" пгг различны?: Формах стресса, и патологии

Лгучела ¿>сль. г гл трохи тез в рстугяцвл хигункого ответа при хй!брйП'.окко:.: пора:.-.ен2г., агалоктзгной гсперлолостеркне'СТ!," ста-

фялококковой инфекции, остром паккраатато и токсической хнзпатопа пая. Установлено, что после действия на организм вибрации в крови животных появляются два функционально различных фактора, один из которых (высокомолекулярный - фрагднл I) иццуцирует появление сильно выраженных лммушсупрессируыщих свойств у легких эритроцитов, а другой (относительно кизкомолекулярный -фракция Ш) - появление слабовыразкеннсй тиушеммулпрувдзй активности у тякаинх эритроцитов.

Результаты проведешшх исследований позволяют считать, что интенсивность развития ГИО и ГЗТ при действии на организм вибрации в опредолешюй степепн определяется соотношением в крови количества и активности этих факторов.

У животных с алиментарной гиперхолестеринемлей обнаружены легкие эритроциты, обладающие выраденной пммуносупрессорпой активностью. Появление таких свойств у легких эритроцитов животных с алиментарной гиперхолестеринемией обусловлено действие высокомолекулярной фракцией белков сыворотки крови. При алиментарной ишерхолестеринемии концентрация в крови ЛОШ и ЛИП, обладающих иммуносупрессорныш свойствами, значительно увеличивается. На исключено, что контакт с этимп соединешшыи обусловливает появление иымуносулрессирующих свойств у эритроцитов лентой фракции.

Инфицирование стафилококком по принятой нами схеме не приводило к появлению в крови эритроцитов, обладающих иммуномоду-лирующей активностью.

В сосудистом русле крыс о острым панкреатитом через 7 суток после операции обнаружены легкие эритроциты, супрессирущпе разитие пммунногь ответа при аллогеяном пероносе. Появление

имрлуяосупрессирущих свойств у легких эритроцитов индуцируется фракцией белков сыворотки крови, имеющих Ш более 150 кД. В отличие от друда (Jx>pfj патологии при токсической гепа тола таи легкие эритроцита не проявляют изялуносупрессирузошей активности, вместо с тем в крови обнаружены тяжелые эритросрты, обладающие И1.а1уностимулирующи1.ш свойствам! (табл.5).

Полученные результаты о появлении иымуноглодулируищих свойств у эритроцитов интакгных квотных после действия на mix ферментов или физических агентов позволили предполагать возмак- 1 ность появления аналогичных свойств у эритроцитов (фракций) животных с указанными патологиями при экстракорпоральной обработ- , ке их ферментами и физическими агентами. I

Установлено, что действие лизоцима или УФ-лучей на лелдю | Фракцию эритроцитов животных о вибрационным поражением ими алиментарной пзперхеяеетеринеши не влияло на ее ззмзлуносупрессирую- ( щую активность. Тяжелые эритроциты этих животных, а также инфзз-цировашшх стауидококзшм крнс под влиянием лизоцима и УФ-облу-чения приобретали иммуностимулирующие свойства. В то гее время тяжелые эритроциты животных с острым панкреатитом оказались ре-зистегзтнши к действию указанных модифицирующих агентов. Последнее обусловлено накоплением в крови этих животных АМГ и свя-зкюзшем их с мембраной эритроцитов. Резистентность таких зрит- . рощ;тов к действию лизоцима и У^Мучей моде г быть отменена пу-те! 1 штеснсзпзя Л.МГ с поверхности тяжелых эритроцитов неыбраннн-глн белками этих клеток.

Лрн действии УФ-обдучезшл на фракции эритроцитов гшвотных с токсической гопат^чапзей иш.;у1юстз;:^лнруюйвк активность. етаелой <iva:2sm увеавздакаеь и и:;!изукосга:,:ул1!руэдие. свойства приобре-..

Таблица 5

Ишуншодузшрующий эффект, вызываемый эритроцитами полученными от гошотных с различными фордами патологии

Эффект немодиЛицированны:; : Эффект модийицпрованккх .-Эффект дадпфнцироБазгас: эритроцитов пои введении :эритроцитов при введошш: эритроцитов при введения интактным яивотным : интактным.животным :;л1вотшк с ачэш яе фор: : тт патологии

Сорма патологии

легкие эриз?- 'тяжелые зрит'лэгкио эрит-'тя&едыо эрпт лелсао эрят'тя^елно орпт-

: роциты роциты : рсциты реццты роцдш ; роциты

Вибрационное поражение Супрессия Нет эффекта Супрессия Симуляция Нет эффекта Нормализация

Ннйиц..ровапкс стафилококком Нет эффекта Нет эффекта Нет эффекта Стимуляция Нет эффекта Нормализация

Алиментарный агеросклероз Супрессия Нет эффекта Супрессия Стимуляция Нет эффекта Нормализация

Острый панкреатит Супрессия Нет эффекта Супрессия Нет эффекта Нет эффекта Нот эффекта*

Тссическая генатопатия Нет эфйекта, позднее супрессия Стимуляция Нет эффекта позднее рез-•"о выраженная супрес- Рэзко вира- иенная стимуляция - Нет эффекта Супроссня

со ы

сия

х После обработки белками эритроцитов и лизоцимом или УФО - нормализация

тали также эритроциты промежуточные по плотности.

При действии на организм сильных раздражителей (отрессо-ров), а такие при различных патологических состояниях шблюда о тся развитие стойкого вторичного иммунодефицита (Вастрова H.A. и др., 1988; Вахидов А.Я., 1983; Киндрас LUI., 1987; Прокопенко Л.Г. и др. , 1991). В связи с этим большой интерес представляет возможность использования экстракорпорально модифицированное: эритроцитов для коррекции иммунного ответа при стрессе и патологических процессах, характеризуюпдахся^возникновением вторичной ишунологической недостаточности. Особенный ннтерео представляет возможность использования модифицированных эритроцитов, выделенных от тех ;;:о кивотных, для кор-ре!сцш1 иммунологической роактивности которых они долгой использоваться.

Установлено, что при введении модифицированных тяяелнх. эритроцитов наблюдается нормализация иммунного ответа у лпвот-ных, подвергнутых действию вибрации, длительно получавших о' пищой холестерин и инфицированных стафилокогасом,

¡Модифицированные тяжелые, эритроциты ингасшруют активность аптагоипоспецнфических клеток - сулрессоров, индуцируемых внб-, рацией im: ппфлцировашшы стафилококком, сшшаюг летальность пкфищ!роваш1Ш: ответных. Особенно следует отметить, что введение пиуицнровашшм' стафилококком швотним модифицированных епт-ешпе: эритроцитов ешиэот активность шкуцированпьк анга-гонцми стафилококка, глеток-киллеров лимфатически;; узлов, ре-шс.чарисс г. месту введения культуры стафилококка.

Парадоисалик,! на ttepnUit взгляд являотся супресслруюквШ спт, и:эчвае;М орптроштши отраатеюшх крас, зкетракорпо-

ралызо модифицированных лизоцимом или УФ-облучезгием, при введении их иивотным, отравленным готрахдорметаном. Казалось бы, что дополнительное введение некоторого количества эритроцитов, обладающих пм1.1укостш,!улирующими свойствами, но долгло существенно повлиять на состоящее иммунологической реактивности вотззнх, в крови которых цпр1улируйт эндогенно образовавшиеся иммуиологичеезш активные эритроциты. Объяснение этому кахуце-иуся парадоксу истаю дать на основе представлезшй об участии эритроцитов в ретуляция иммунологической реактивности при токсической гепатонахии. Ранее было лозазапо, что при токсической гепзтопатшз, вызванной введенной тотрахлорцетавд, в дополнение к нейрогориональззой регуляция иллуиного ответа на Т-зависимые антигены начинает ¿¡¿унзшиотшровать метаболический механизм рефляции этого процесса , яоторнй включает елвдуидао этапы*, ак-тавадая протеолитических ферментов крови, модифшидая эр;!тропи тоз, водедение макрофагами хелпершх медиаторов шшуююго ответа, вадеяезше в кровеносное русло антияротеолитичоских белков, обладающих тмушсуироссор1т,.а1 свойствами (Прокопенко Л.Г. и др., 1983).

Аиэлогичзщя последовательность событий соворщется при введезши интактпым животный модафицпровашзызс лизоцимом и облучениом тяжелых эритроцитов. Можно предположить, что равновесие, возникающее при токсической гепатопаищ мевду сигналами, усиливающими и ограничивающими развита иммунного ответа на Т-зависимые антигены, в случае введеззия модифицировашзых лизоцимом или Уф-облучением эритроцитов смещается в сторону преобладания последних. Это обстоятельство представляется очень важный. Оно свидетельствует о том. что к априорной оценке зффок-

тишости, модифицированных различными агентами эритроцитов следует относиться дифференцированно, учитывая особенности метабо-лдчеоких механизмов регуляции иммунологической реактивности, реализующихся в условиях каждой конкретной ситуации.

В процессе созревания в костном мозге формируется состав фосфолнпвдного слоя к компоненты гликолипидных и глинопротеид-шх структур мембраны эритроцитов, обеспечивающих оорбцвониую функцию этих клеток и их устойчивость в отношении доглотитель-ной активности макрофагов. Вполне возможно, что одним из следствий высокой сорбционной способности легких "молодых" эритроцитов является появление у них пи.г/носуирессоршк свойств при патологических состояниях, характеризующихся повшшшем прош-лаемостн клеток крупных паренхиматозных органов, приводящие к значительным изменениям химического состава крови. В этих уо-ловпях в сосудистое русло поступают высокомолекулярные соединения, обладающее »тунос^рессирующиш свойствам. Высокомолекулярные соединения фиксируются на мембране эритроцитов и доставляются ими в лиыфоодные оргада и в первую очередь в селезенку. Ыгоаю думать, что легкие, "молодые" эритроциты в связи с высокой сорбционной способностью являются своеобразия! "контейнерами" таких соединений. Вместе с тем нельзя исключить, что фиксация их на мембране эритроцитов приводит к изменению ксрфогаации сорбирующих.молекул и превращения их в структуры, распознаваемые рецепторами макрофагов и лимфоцитов.

В процессе старения состав и структура соединений анеше-го слоя меибраш эритроцитов изменяется. Отражением этого ло-внди.-.'о? у является 'выстесоя чувствительность к действии созбр-знешкх для эритроцитов.--агентов. Наиболее ве-

роятное объяснение полачени» однотипных иммуностимулирующих свойств у тяжелых эритроцитов при действии различных по природе факторов (ферменты, сывороточные фактора, физические агенты) сводится к тому, что тешодиншпческоо состояние мембраны "старых" эритроцитов неустойчиво и в силу этого структуры мембраны под влиянием многих внешшх и внутренних воздействий приобретают конформацшо, ицдуцнрумцум выделение макрофагами иммуномодулирущих соединений.

Шкрофага не лвяяатся однородной популяцией клеток, среди них есть клетки, поглощающие к разрушающие чугеродтй материал, другая субполуляция участвует преимущественно в презентации фрагментов антигена лимфоцитам, третья специализирована на образовании и секретированни медиаторов ишунного ответа (Ыанько В.М., Хаитов Р. И., 1987). Активаторами фушсций последней субпопулящш,по-видимому, являются эритроциту, модифицированные ферментами, сывороточными факторами или физическими агентами.

Введение экстракорпорально ксщяфпцвроштш: эритроцитов запускает меньшее число реакций и поэтому вызываемый ими эффект балее целенаправлен и легчо контролируется. Особенно перспективно использование в качестве иммуномодуляторов отдельных экстракорпорально модифицированных аутологичшх фракцш эритроцитов, так как при их введении число побочных реакций организма сводится до минимума.

Совокупность данных литературы и результатов проведенных исследований позволяют сфор;.-;улировать концепцию эритроцптарно-го механизма регуляции иммунного ответа при состояниям напряжения. Регуляция иммунного ответа на Т-зависимие аитигеш в

состоянии покоя осуществ7шется трещ группами биоорганическпх соединений - пейромедиаторами, гормонами эндокринных органов, гормонами и медиаторами жгмузшой системы. В ситуациях напряжения к этим группам эндогенных иммуноиодуляторов присоединяются нормальные, но образующиеся в избыточном количестве, или аномальные продукты метаболизма клеток различных органов. Другими словами, при состоя1шях напряжения,наряду с ненроэзиокрин-1шм и иммунологическим, начинает функционировать метаболический механизм регуляции иммунологических функций. В состоявши покоя действззе последнего, вероятно, реализуется на подпорогоаом уровне, а при действии на организм стрессоров и патогенов удельный вес этого механизма в.общем балансе иммунорегулягор-ных связей существенно повышается.

Приведенные в работе сведения показывают, что одзшм иэ важных звеньев метаболической регуляции, имыунологпчеезеих реакций являются различные по плотности, а, следовательно по'возрасту, структура и фермента книгой активности мембран эритроциты. Тл&елио эритроциты включены в цепь роакций, опоорадующих прямые лолозлиольше, а легкие эритроциты - в посяедоватедь-ностЗ' лроцвосоо, с помощью которых реализуются обратные отри-цгге'лышо связи метаболической аистами регуляции иммунного ответа. Применение различных лммуномодуляторов, озщзывающих влнлнпо за метаболизм кдбток и состояш1е пх мембран,.может существенно лов шят:.- шг на подоителыше; так И на отрзща-тои.ше связи этой система.

'!а сснсшзпш анализа данных датерагурн и результатов про-вецкгнз; последовать! могло сформулировать некоторые паправле-п'.;ч .-лльЕс.Ьгл ;гссдодова1шй рочк модаОпцировашшх эритроцитов

в рохуляции иммунологической реактивности организма и их эффективности как к.а!уно1.1одуляторов.

1. Выявление особенностей молекулярных структур мембраны эритроцитов, модификация которых под влиянием различных агентов, обусловливает появление у них иммунолюдулирующих свойств.

2. Выяснение механизма модификаций структур мембраны эритроцитов, приводящих к появлению у них илчунолюдулирующих свойств.

3. Выяснение молекулярных механизмов индукции выделения клетками селезенки ишуног-юдулирующих Докторов под влиянием модифицированных эритроцитов.

. 4. Изучение химической природы и механизма имцуномодули-рующего действия факторов, выделяемых клетками седезешси под влиянием модифицированных эритроцитов..

5.. Изучение закономерностей функционирования системы аритроцитарной регуляции иммунного ответа при различных формах стресса и патологии, выявление взаимосвязи этой системы с нейроэццокринныш механизмами регуляции иммунологических функций.

6.. Изучение эффективности ингракорпоралыюго иымуномоду-лирущего действия биоорганических соединений, модифицирующих эритроциты и экстракорпорально модифицированных эритроцитов при стрессе и в условиях патологии, характеризующихся различными нарушениями метаболических процессов.

выводи,

I. Введение крысам Еиетар террилииша, лизоцвт и гналу-рошздази стимулирует развита ШО и ГЗТ на .Т-эависише антигены, но не влияет на иммунный ответ, индуци! тайный Т-леза-

висимнм антигеном. Инъекции папаина не влияют на иммунологическую реактивность организма в отношении Т-зависиыых и Т-неза-висимых антигенов.

2. Введение крысам терриддтина, лизоцима и гиалуронадазы приводит к появлению в сосудистом русле ;ашотных эритроцитов, обладающих свойством стимулировать развитие ШО и ГЗТ на Т-зависшые антигены при адлогенном переносе. Появление адыо-

4 вантных свойств у эритроцитов обусловлено действием на них сывороточных факторов.

3. Экстракорпоральная обработка эритроцитов интактных крыо панаином индуцирует появление у них ишукосунрессирующих свойств, а инкубация с гсррилитином, лизоцимом - появление иммуностимулирующей активности. {1ммукосупресепрующие свойства приобретают легкие, а иммуностимулирующие - тяжелые эритроциты.

• 4. Эритроциты интактных животных, подвергнутые действию _ ультрафиолетового облучения или экспонированные в магнитном поле, стимулируют развитие ГШ и ГЗТ на Т-завиоиыые антигены, по по влияют на интенсивность иммунного ответа, шщуцирован-ного Т-завасимым антигеном у интактных животных. Иммуностимулирующие свойства приобретают тяжелые эритроциты.

• 5. Эритроциты, подвергнутые действию лизоцима или ультра-фколотового облучения, индуцируют выделение макрофагами селе-иси±;и фактора, стулирувдего развитие ГНО и ГЗТ на Т-зависи-ыие антигены, а также зависимое от макрофагов ввделение лимфоцитами фактора, суаресм;рувцого развитие 1И0 и ГБТ на Т—за-шопше и Т-нззавкснмые антигены. Действие силулпрушего ' Фактора .макрофагов о<5уолсшег:о его влиянием на коопэраЦав''Т- -

н В<з«4*идатов, -о«к1гокг суиЧ.ессоргюго фактоххгддмфоцптсв -реал:«- •

зуется за счет усиления антигенспоцпфической иммуносупрессии.

6. Иммуностимулирующий фактор, выделяемый макрофагами, под влиянием модифицированных УФ-обдучением эритроцитов не диализуется, относительно термостабилен, инактпвируется па-паином, трипсином и проназой, но устойчив к действию нейра-минздазы. Фактор активен при межвидовом переносе, обладает пирогенными свойствами, вызывает лейкоцитоз, повышает концентрацию АПИ и А1-5Г в крови.

7. В крови животных, подвергнутых действию вибрации или длительно получавших с пищей холестерин, появляются легкие эритроциты, обладающие иимуносупреосирующил: свойствами. Обработка лизоцнмом или облучение УФ-лучами эритроцитов этих животных ке влияет на вммукосулресспрущие свойства легких эритроцитов, но индуцирует появление ииг-стюстимулирующих свойств у тяжелых эритроцитов. Введение модифицированных эритроцитов яивотным, подвергнутым действию вибрации или получавыих холестерин, нормализует у них развитие ШО и ГЗТ на Т-зависамые антигены.

8. Инфицирование животных стафилококком не приводит

к появлению в их крови эритроцитов, обладающих иммуномоду-лирующими свойствами, Облучение эритроцитов инфицированных мышей Уй-лучами индуцирует появление у тянелых эритроцитов итуностимулирующих свойств. Введение модифицированных эритроцитов инфицированным мышам стимулирует развитие иммунного ответа на Т-зависимый антиген, подавляет активность антигеннеспецифических супрессоров селезенки и клеток киллеров лимфатических узлов.

9. Тяжелые эритроциты животных с острым панкреатитом не обладают аыглуносупресснруищящ свойствами. Ультрафиолетовое облучение тяжелых эритроцитов не индуцирует появления у них шдлуностшлудирующих свойств. Резистентность эритроцитов к действию ультрафиолетового облучешш обусловлена связыванием с их мембраной альфа-2-макроглобулинов. Тяжелые эритроциты крыс с острым панкреатитом становятся чув с тви тельными к действию ультрафиолетового облучения после инкубации.ихс меибран-ннми белками эритроцитов.

10. Тяжелые эритроциты лшвотных с токсическим поражением печени при введении интактным аллогенншл ;дшоткыы стимулируют развитие иммунного ответа, на Т-зависяыыЙ антиген. Экстракорпоральная обработка эритроцитов отравленных нивотных лизоцимоы или ультрафиолетовыми лучами повышает их иммуностимулирующие свойства, выявляемые при введении интактным животным. Модифицированные эритроциты отравленных крыо супресси.руют развитие иммуннох'о ответа на Т-эавиозшый антиген при введении животным с токсической генатопагией.

XI. йнтраксрпоралыю модифицированные эритроциты участвуют в регуляции иммунного ответа на Т-завиоимые антигены при состояниях напряжения и в условиях патология, а экстракорпорально адпфицпровашще эритроциты являются эффективными биологическими шллуноиодулятораш. Экстракорпоральная модификавд эритроцитов представляет собой перспективный путь получения *:алореакт:1шцх эффективно действующие иммуномодуляторов.

(кжа: рашш, оиушпгоашщБ по ш дессшади

I, Пр;:;.;йношю ферментов для коррекшш • вдаунлого ответа ц;г воздействии // Гашека труда и профзабо-

левания. - 1904. - .-."> 10. - С. 43-45 (соавт. Прокопенко Л.Г., Чалый Г.А.).

2. Вторичный иммунодефицит, вызванный действием па организм вибрации. Тезксц Всесошн.симп. "¡1гу:юдефициты и аллор-гия", 1986 (соавт. Прокопенко Л.Г.).

3. Развитие иммунного ответа и его коррекция при зибра-цистшом поражении // Патат. физиология и эксперт.', терапия. -1986. - М 5. - С. 51-54 (соавт. Прокопенко Л. Г.).

4. Влияние факторов внешней среди на иммуномодулирукцле свойства эритроцитов. Сб.: "Биофизические и клинические аспекты экологических исследошпай", 2\Урск, 1989. - С. 76-77 ( соавт. Прокопенко Л.Г.).

5. Экстракорпоральный ишуномодулярующвй эффект террпли-тина и лиэоцима // Антибиотики. - 1990. - Й2. - С. 37-40 (соавт. Прокопенко Л.Г., Чалый Г.А.).

6. Пмиуноыодулирующие свойства эритроцитов, подвергнутых действию ультрафиолетового ойлучения и электромагнитного излучения при стафилококковой инфекции. - 12/1311, 15 9. - С. 81-СЗ (соавт. Прокопенко Л.Г.).

7. Влияние витаминов А и Е на иымуномодулирующие свойства эритроцитов при алиментарном атеросклерозе.- Курск, сб.научн. трудов ин-та, 1991. - С. 110-110.

8. йлмуномодулирую'дие свойства эритроцитов., обработанных террилитином и лизоцимом. Тез.докл. I Всесоюэн.съезда иммунологов. - 1390. - С. 373-373.

9. Влияние УФО и ЭШ на эритроциты ызвотных при алиментар ном атеросклерозе. Курск.гос.мед.пн-т, Курск, 1991. Деп. в ВИНИТИ 27.06.91 2743-13 91.

10. А.с. J5 1560076 (СССР) Способ стимуляции иммунного ответа, 1930 (соавт. Прокопенко Л.Г.).

11. Способ стимулянт иммунного ответа, лолсеттельноз решете от I0.I2.S0 по заявке ¡г 4750670.

12. Способ супрессии иммунного ответа, пологктелькое реш-шю от 14.03.91 по заявке 48477448 (соавт. Прокопенко Г.).

13. Взаимодействие гуморальных факторов сыаоротки крови и эритроцитов в регуляции иммуногенеза при вибрационном поражении // Патологическая физиология и экспериментальная терапия. -1991.- Л 4.- С.24-26 (соавт. Прокопенко л.Г.«Яковлева Е.П.).

14. Влияние ингибиторов протеаз ка ивдукцню ультрафиолетовы.! облучением и:л,1уностм.!улируйгдей активности аллогенных эрит-' роцитов. Тез.доад.научно-практич.конф. "Актуальные вопросы фар-мацевтич. науки". Jtypcic. - 1391. - С. 197-198.

15. Экстракорпоральный ншуносупреосоркый эффект папаина, я. Антибиотики и химиотерапия. - I9S2, - № 3. - С.

(соавт. Прокопенко Л.Г.).

16. Способ выявления шлиуностимулируюнщх свойств эритроцитов, полоса;тельное решит от 3.01.92 по заявке Л 4912192/14.

17. Способ стимуляции физической работоспособности, поло-глтекшое реио;ше от 16.03.92. по заявке Ji 4926866/14 ( соавт. Ласкола П.Л.).

16. Г^гмуномодулирукщпе свойства эритроцитов, пццуцирован-и;о физическим;; ггякгорами. - Тез.докл. I Всероссийского съезда и;/,;.уг.оаогов. - 1292.

19. Эрптрсжлы шк модуляторы ихтиологических реакций // Успсгг. "лзиопог:;*: нар;. - 1992. - ,'i

гогтЕпоп-аз.1£32, т.ICG, п/л