Автореферат и диссертация по медицине (14.00.11) на тему:Микробиологическая и генетическая характеристика основных возбудителей гнойничковых заболеваний кожи в Таджикистане

На правах рукописи

р Г Б ОД. САИДОВ 1 1 Я Н В 2007

ХУРШЕД МИРЗОКАРИМОВИЧ

МИКРОБИОЛОГИЧЕСКАЯ И ГЕНЕТИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ОСНОВНЫХ ВОЗБУДИТЕЛЕЙ ГНОЙНИЧКОВЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ КОЖИ В ТАДЖИКИСТАНЕ

14.00.11 - кожные и венерические болезни 03.00.07 - микробиология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Душанбе - 2006

Работа выполнена на кафедрах кожных и венерических болезней и микробиологии Таджикского государственного медицинского университета им. Абуали ибни Сино и отдела молекулярной микробиологии НИИ экспериментальной медицины РАМН.

Научные руководители:

член-корр. АН РТ, доктор медицинских наук, профессор Зоиров Подабон Тошматович,

доктор медицинских наук, профессор Саторов Саидбег

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор Умарова Зарифа Касымовна

кандидат медицинских наук, доцент Болтаева Мария Расуловна

Ведущая организация:

Таджикский институт последипломной подготовки медицинских кадров Министерства здравоохранения Республики Таджикистан

Защита диссертации состоится " 29 ." декабря 2006 года в ¿г .часов на заседании диссертационного совета Д 737.005.02 при Таджикском государственном медицинском университете им. Абуали ибни Сино по адресу: 734003, Республика Таджикистан, г.Душанбе, пр.Рудаки, 139.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Таджикского государственного медицинского университета им. Абуали ибни Сино.

Автореферат разослан

Ученый секретарь диссертационного совета, кандидат медицинских наук, доцент

Л.А.Бабаева

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность исследования. Гнойничковые заболевания кожи или пиодермиты являются актуальной проблемой для здравоохранения всех стран. Пиодермиты в структуре дерматозов занимают 1-ое место и 3-4-ое место в общей структуре заболеваемости человека после гриппа, респираторных и сердечно-сосудистых заболеваний (Stevens DL et al., 1989; Zeng X et al., 2006). Это обусловлено тем, что пиодермиты нередко принимают хроническое, рецидивирующее течение, требуют упорной, продолжительной терапии, которая не всегда приводит к желаемому результату (Pennington TL. et al., 1987; Manchester L. et al., 1990). Данная проблема является актуальной и для органов здравоохранения нашей страны. Достаточно отметить, что только за последние 15 лет срок пребывания больных на больничной койке увеличился в среднем с 6,8 до 9,4 дня (Зоиров П.Т., 2006).

В последние годы в результате широкого и бесконтрольного применения различных антибактериальных препаратов, под влиянием неспецифических и специфических факторов защиты организма произошло изменение ряда биологических свойств возбудителей пиодермитов. Всё чаще появляются сообщения об увеличении числа полирезистентных штаммов основных возбудителей данной патологии - стафилококков и стрептококков, расширении спектра их устойчивости к противомикробным препаратам, возникновении трансформированных и Ь-лактамазопродуцирующих мутантов (Martinez М.А. et al., 2004; Campo-Esquisabel А.В., 2005). Поэтому вопросы микробиологии и генетики возбудителя, эпидемиологии, диагностики и профилактики гнойничковых заболеваний кожи остаются в центре внимания дерматовенерологов, микробиологов и эпидемиологов.

В структуре гнойничковых заболеваний кожи ведущее место занимают стафилодермия, стрептодермия и микробная экзема. Роль стафилококков и стрептококков человеческого происхождения в этиологии этих инфекций не вызывает сомнения. В тоже время в литературе данные об этиологической значимости микроорганизмов, принадлежащих к животным экологическим вариантам, отсутствуют. Исследователи ограничивались в основном изучением стафилококков й стрептококков без их внутриви-

допой и серотиповой дифференцировки. Нет данных о широте распространения и частоте встречаемости генов, кодирующих основные факторы патогенности у стафилококков и стрептококков, возбудителей гнойничковых заболеваний кожи.

Цель исследования - изучить распространение гнойничковых заболеваний кожи и установить клиническую значимость стафилококков и стрептококков различного происхождения при данной патологии кожи в Таджикистане.

Задачи исследования:

1. Изучить распространенность гнойничковых заболеваний кожи по обращаемости больных к врачам дерматовенерологам.

2. Изучить этиологическую структуру и определить удельный вес стафилококков и стрептококков животного происхождения в возникновении гнойничковых заболеваний кожи в Таджикистане.

3. Изучить биологические особенности стафилококков и стрептококков, выделенных у больных с пиодермией и микробной экземой.

4. Провести сравнительный анализ хромосомной ДНК стафилококков и стрептококков при стрепто-стафилодермии и микробной экземе.

Научная новизна:

1. Впервые в Республике Таджикистан проведено комплексное исследование этиологической структуры гнойничковой патологии кожи.

2. Впервые установлена возможность возникновения гнойничковых заболеваний кожи, обусловленных золотистыми стафилококками животных эковаров (bovis и ovis) и стрептококками rp.D.

3. Представлена антибиотикограмма и фагопейзаж стафилококков и стрептококков различных эковаров и серотипов, возбудителей стафилодермии, стрептодермии и микробной экземы в Таджикистане.

4. Изучено наличие генов, кодирующих факторы патогенности и IS-элементы в хромосомной ДНК стафилококков и стрептококков, этиологических агентов гнойничковых заболеваний кожи в Таджикистане.

Практическая значимость.

Данные о заболеваемости пиодермитами позволяют разрабатывать эффективные способы профилактики гнойничковой

патологии кожи в каждом конкретном регионе Республики Таджикистан.

Установление этиологической роли штаммов, принадлежащих к животным эковарам золотистого стафилококка и серо-группам стрептококка, констатирует необходимость проведения внутривидового и серотипового типирования этих микроорганизмов в условиях диагностических лабораторий.

Для эффективного лечения кожных заболеваний стафилококковой и стрептококковой природы необходимо учитывать особенности антибиотикограмм этих микроорганизмов в зависимости от их экологической принадлежности.

Проведен ПЦР-анализ хромосомной ДНК и показано идентифицирующее значение генов, кодирующих факторы патоген-ности и IS-элементы для внутривидовой и серотиповой диффе-ренцировки стафилококков и стрептококков.

Основные положения, выносимые на защиту.

1. Показатели заболеваемости пиодермитами в Таджикистане коррелируют с факторами окружающей среды и особенностями макроорганизма, в частности, пола и возраста больных.

2. Стафилодермия и стрептодермия вызываются соответствующими возбудителями, в основном, в виде монокультуры. Ведущими возбудителями микробной экземы являются штаммы золотистого стафилококка.

3. Стафилококки и стрептококки животного происхождения способны вызывать у человека гнойничковую патологию кожи.

4. Фагопейзаж золотистых стафилококков характеризуется высокой вариабельностью.

5. Золотистые стафилококки эковара hominis, изолированные из патологического материала при гнойничковых заболеваниях кожи, по спектру резистентности отличаются от штаммов эковара bovis.

6. Штаммы стафилококков и стрептококков различаются по наличию генов, кодирующих факторы патогенности микроорганизма и встречаемости IS-элементов.

Внедрение результатов исследования в практику.

1. По материалам диссертации составлены методическйе рекомендации для преподавателей, студентов и практических врачей "Микробиологическая диагностика и лечение заболеваний стафилококковой и стрептококковой природы".

2. Результаты проведенных исследований внедрены в практику работы Городской клинической больницы №1, Городского кожно-венерологичсского диспансера, Республиканского Клинического центра кожных и венерических болезней (Душанбе).

3. Идентификация, внутривидовая дифференцировка стафилококков и стрептококков, а также диагностика пиодермитов внедрены в учебный процесс на кафедрах микробиологии, кожных и венерических болезней Таджикского государственного медицинского университета им. Абуали ибни Сино.

Публикация результатов исследований. По материалам диссертации опубликовано 7 научных работ.

Апробация работы.

Основные положения диссертационной работы доложены и обсуждены на: 51-й годичной научно-практической конференции с международным участием "Вода и здоровье человека" (Душанбе, 2003); 52-й годичной научно-практической конференции с международным участием "Актуальные вопросы стоматологии" (Душанбе, 2004); 53-й годичной научно-практической конференции с международным участием "Лекарства и здоровье" (Душанбе, 2005); на 1-ом Съезде (конгрессе) стоматологов Таджикистана (2006); на заседании экспертной проблемной комиссий по теоретическим медицинским дисциплинам Таджикского государственного медицинского университета имени Абуали ибни Сино (Душанбе, 2004).

•' Объем и структура диссертации.

Диссертация изложена на 106 страницах компьютерного текста, включает 7 таблиц и 21 рисунок и состоит из 5 глав: одной главы обзора литературы, 4-х глав собственных исследований, заключения, выводов, практических рекомендаций и списка литературы (71 источник стран СНГ и 123 дальнего зарубежья).

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Проведено обследование 136 больных с пиодермитами, из них: 53 со стафилодермией, 45 со стрептодермией, 38 больных с диагнозом микробная экзема и 70 здоровых лиц (без патологии кожного покрова).

Анализ заболеваемости пиодермитами проводился на основании обращаемости больных к врачам кожно-венерологичес-ких учреждений.

Материалом для исследования служили содержимое ран (гной, экссудат), слизь из носа и зева, смывы с кожи.

Забор материала производили стерильным тампоном. Исследуемый материал засевали сразу после взятия на чашки с кровяным и с желточно-солевым агаром, а также на среду Эндо.

Идентификация выделенных стафилококков проводилась по классификации Bard - Parker (1974) и А.К.Акатова (1980).

Окончательная идентификация стафилококков и серотииовая дифференцировка стрептококков проводилась в реакции ориентировочной агглютинации с использованием диагностикумов для серологической идентификации этих микроорганизмов.

Чувствительность изолированных культур стафилококков и стрептококков к антибиотикам определялась с помощью стандартных дисков согласно "Методическим указаниям по определению чувствительности микроорганизмов к антибактериальным препаратам" (2004).

Фаготипирование коагулазоположительных стафилококков проводили двумя наборами фагов: Международным набором бактериофагов для типирования стафилококков, выделенных от людей (набор "Ч") и набором фагов для типирования стафилококков, выделенных от крупного рогатого скота (набор "КРС"), по методике, рекомендуемой инструкцией, прилагаемой к набору фагов (Акатов А.К., Зуева B.C., 1983; Davidson I.A., 1972).

Для генетического анализа хромосомной ДНК была использована полимеразная цепная реакция (Суворов А.Н., 1988).

Метод ПЦР основан на принципе естественной репликации ДНК и комплементарного дополнения обеих цепей ДНК. Репликация ДНК может начаться не в любой точке, а только в определенных стартовых блоках - коротких двунитевых участках. Суть метода заключается в том, что, маркировав такими блоками специфический только для данного вида участок ДНК, можно многократно воспроизвести (амплифицировать) именно этот участок.

Материалом для проведения ПЦР служили выделенные чистые культуры стафилококков и стрептококков.

Статистическая обработка результатов исследований прово-

дилась по И.П.Ашмарину и А.А.Воробьеву (1962). Оценку относительных величин производили путем парного сравнения и определения доверительного коэффициента Стьюдента.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Для решения поставленных в работе задач было проведено бактериологическое исследование выделенных от больных с кожной патологией штаммов стафилококков и стрептококков. Генетический анализ хромосомной ДНК осуществляли методом ПЦР.

На первом этапе исследования нами была изучена распространенность пиодермитов в различных регионах Таджикистана по материалам обращаемости (форма 25-в) в кожно-венерологичес-кие учреждения различных областных центров и районов Республики Таджикистан, включая столицу республики - г.Душанбе.

Исследованием установлено, что гнойничковые заболевания кожи, в частности, стафилодермия, стрептодермия, чаще всего регистрировались в южных зонах Таджикистана - Курган-Тю-бинской и Кулябской зонах Хатлонской области. Показатели заболеваемости пиодермитами в Согдийской области и г.Душанбе. (включая районы республиканского подчинения) были примерно одинаковыми. Как и следовало ожидать, показатели заболеваемости в г.Хороге были значительно ниже, чем в других регионах. Интересные данные получены в результате анализа заболеваемости среди населения Мургабского района Горно-ба-дахшанской автономной области. В этом самом высокогорном регионе республики заболеваемость пиодермитами не регистрировалась.

В целом по республике в структуре дерматозов пиодермиты составляли 49,2%.

При анализе заболеваемости пиодермитами в центральном регионе Таджикистана установлено, что в г.Душанбе и районах республиканского подчинения Таджикистана в структуре пиодермитов первое место занимает стрептодермия, второе место - стафилодермия и на последнем месте - стафило-стрептодермия.

В Курган-Тюбинской и Кулябской зонах Хатлонской области анализ заболеваемости пиодермитами был проведен по данным обращаемости в Курган-Тюбинский и Кулябский кожно-ве-

нерологические диспансеры. Установлено, что как в центральном регионе Таджикистана, так и южных зонах первое.место занимала стрептодермия, затем стафилодермия и смешанная форма пиодермитов, причем последняя регистрировалась значительно реже. В связи с тем, что показатели заболеваемости в Хатлон-ской области, в частности, в Курган-Тгобинской зоне, были несколько выше, чем в других регионах, нами был проведен анализ заболеваемости пиодермитами в зависимости от месяца года среди взрослого населения и детей до 14 лет. Анализ показал, что в Хатлонской области относительно высокий удельный вес обращаемости наблюдался с апреля по сентябрь. С октября по март уровень обращаемости был примерно одинаковым и по сравнению с другими месяцами несколько ниже. Аналогичная картина наблюдалась и среди детей. В целом, заболеваемость была высокой в те месяцы года, когда наблюдалась высокая температура атмосферного воздуха, низкая влажность и минимальное количество выпадающих осадков. В тс месяцы, которые характе-ризировались низкой температурой атмосферного воздуха, повышенной влажностью и увеличением выпадающих осадков, уровень заболеваемости был значительно ниже.

Наблюдения показали, что, несмотря на схожие природно-климатические характеристики и социально-бытовые условия жизни, различные формы гнойничковых заболеваний койки в Кулябской зоне регистрируются несколько реже, чем в Курган-Тюбинской зоне этой же области.

Исследования проводились также в северной зоне республики г. Худжанде, центре Согдийской области, на основании обращаемости в Согдийский кожно-венерологический диспансер.

При анализе структуры заболеваемости населения пиодермитами в этом регионе обращает на себя внимание более частая регистрация стафилодермии, чем среди населения Кулябской зоны Хатлонской области и близкие показатели с данными по заболеваемости в центральной части и Курган-Тюбинской зоне Хатлонской области. Смешанная форма пиодермитов - стафило-стреп-тодермия регистрировалась в Согдийской области примерно одинаково с таковыми в Курган-Тюбинской зоне, в 2 раза чаще, чем в центральной зоне Таджикистана и в 2 раза реже, чем в Кулябской зоне Хатлонской области.

Анализ удельного веса обращаемости населения по месяцам года позволяет заключить, что уровень обращаемости к врачам дерматовенерологам повышается, начиная с мая, и достигает максимума в период с июля по октябрь. Следовательно, можно резюмировать, что уровень заболеваемости повышается в те месяцы, когда температура воздуха достигает максимальных величин при низкой влажности.

Таким образом, ретроспективный анализ заболеваемости по данным обращаемости в кожно-венерологические диспансеры больных пиодермитами показывает, что заболеваемость пиодер-митами в различных регионах республики варьирует в больших диапазонах.

Исходя из второй задачи настоящей диссертационной работы, на следующем этапе нами была изучена этиологическая структура и определен удельный вес стафилококков и стрептококков животного происхождения в возникновении гнойничковых заболеваний кожи в Таджикистане. Так, при распределении больных на профессиональные группы установили, что гнойничковыми заболеваниями кожи чаще поражаются сельскохозяйственные рабочие, чем лица других профессий. Среди сельхозра-ботников частота заболеваемости стафилодермией и стрептодер-мией была в 2 раза выше, чем среди лиц, занятых другими видами трудовой деятельности. Однако частота заболеваемости микробной экземой была примерно одинакова, как среди сельхозра-ботнйков, так и среди лиц других профессий (47,4%).

Наибольший интерес представляет внутривидовая дифферен-цировка стафилококков и стрептококков. При распределении штаммов стафилококков, выделенных из патологического материала больных стафилодермией, по эковарам установлено, что основным возбудителем стафилодермии являются штаммы человеческого экологического варианта S. aureus эковар hominis. Характерные для человека штаммы стрептококков Streptococcus группы А были ведущими возбудителями при стрептодермии. Дальнейшее исследование показало, что этиологическими агентами стафилодермии и стрептодермии, наряду с характерным для человека эковаром золотистого стафилококка или серогрупп стрептококка, могут являться штаммы животного происхождения.

Привлекает внимание этиологическая структура микробной

экземы. При данной гнойной форме кожной патологии стафилококки высевались в 3 раза чаще, чем штаммы стрептококка.

Выделение стафилококков и стрептококков животных экологических вариантов позволяет полагать, что между людьми и животными происходит перекрестное инфицирование. Для подтверждения этого факта, выделенные коагулазоположительные штаммы стафилококков были подвергнуты фаготипированию. Исследованием установлено, что фагопейзаж культур стафилококков, выделенных из патологического материала больных с гнойничковыми заболеваниями кожи, характеризуется большим разнообразием. Выделенные штаммы наиболее часто лизирова-лись фагами, относящимися к первой фагогруппе, несколько реже были чувствительны к бактериофагам из второй и смешанной группы.

Выраженной фагогиповой вариабельностью характеризовались штаммы эковара hominis, изолированные от больных со стрептодермией. Так, наибольшее количество этих штаммов проявляло чувствительность к фагам из различных фагогрупп, т.е. к смешанным фагам. Привлекает внимание лизабельность бактериофагами штаммов, относящихся к эковару S.bovis, изолированных из патологического материала обследованных больных. Как мы и ожидали, эти штаммы лизировались только бактериофагами из набора "КРС". Наиболее часто стафилококки, принадлежащие этому эковару, лизировались 102 и 107 фагами, реже 116-119. Все штаммы варианта S.ovis лизировались только 78 фагом, что является идентифицирующим признаком для штаммов этого эковара.

Таким образом, фагопейзаж культур, выделенных из патологического материала больных с различными формами пиодермии, резко отличается. Если стафилококки - этиологические агенты стафилодермии чаще были чувствительны к фагам из первой фагогруппы, то возбудители стрептодермии чаще лизировались • фагами из смешанной группы; Штаммы эковара S.bovis, выделенные из патологического материала, характеризуются фаго-мозаикой 102/107 из набора "КРС".

Количество антибиотиков различных групп, применяемых для терапевтических целей, постоянно увеличивается. Изменяется и. чувствительность к ним микроорганизмов, в том числе

стафилококков, в зависимости от частоты и условий применения этих препаратов. Учитывая это, определение чувствительности возбудителей гнойных инфекций к широкому набору современных антибактериальных средств имеет первостепенное значение при выборе наиболее эффективной схемы лечения кожной патологии бактериальной природы.

Поэтому следующим этапом нашего исследования являлось изучение антибиотикочувствительности штаммов стафилококков и стрептококков, полученных у больных, с гнойной кожной патологией.

Показано, что штаммы золотистого стафилококка человеческого экологического варианта в основном проявляют устойчивость к тетрациклину (62,2%) и стрептомицину (53,3%). Примерно в 2 раза реже встречались ампициллин- и левомицетинустойчивые культуры этого экологического варианта стафилококка. Одинаковым было количество оксациллин- (17,7%) и рифампицин-(17,7%) резистентных штаммов. Близкими были показатели устойчивости к неомицину (13,3%) и мономицину (11,1%). Обращает также на себя внимание незначительное количество штаммов, устойчивых к доксациклину, гентамицину, канамицину, кяиндоми-цину (8,8%). Еще реже встречались штаммы, резистентные к це-фотаксиму (6,7%>), эритромицину (6,7%о) и ванкомицину (6,7%). В наименьшем проценте случаев высевались штаммы, устойчивые к ципрофлоксацину, азигромицину (всего по 2 штамма).

Из патологического материала больных с диагнозом "стафи-лодермия" было выделено 6 штаммов золотистого стафилококка эковара bovis. Эти штаммы не проявляли устойчивости к таким антибиотикам как клиндомицин, цефотаксим, ванкомицин, цип-рофлоксацин, азитромицин. При данной патологии нам удалось выделить из патологического материала только 2 штамма золотистого стафилококка, характеризующихся как эковар S.ovis, что не позволило нам провести детальный анализ их антибиоти-кограмм.

При сравнительном анализе антибиотикограмм штаммов стафилококков, полученных от больных с микробной экземой, с результатами изучения антибиотикочувствительности штаммов, полученных от больных со стафилодермией, вьфаженного различия не обнаружено.

При рассмотрении лекарственной устойчивости культур стрептококков привлекают внимание штаммы, изолированные от больных с микробной экземой. Из изученных культур 24% были чувствительны ко всем использованным в работе антибиотикам. Здесь показатель устойчивости по отношению ко всем антибиотикам был ниже средних показателей для штаммов, полученных у больных со стрептодермией. Наиболее часто выявлялась устойчивость к тетрациклину. Удельный вес стрептококков животного происхождения в этиологической структуре данной патологии был незначительным. Поэтому статистическая обработка показателей антибиотикоустойчивости для них не проводилась.

Молекулярно-генетический анализ хромосомной ДНК и ге-нотипирование стафилококков и стрептококков имеют как теоретическое, так и практическое значение. Важность представлений о распределении генотипов стафилококков и стрептококков при различных заболеваниях обусловлена тем, что установление генотиповой принадлежности штамма позволяет провести качественную диагностику, эффективный мониторинг и лечение заболеваний, вызванных этими бактериями.

Учитывая факт, что стафилококки и стрептококки, циркулирующие в Таджикистане, до начала настоящей работы оставались не изученными в генетическом плане и недостаточно информации о генетическом контроле факторов патогенности и вирулентности стафилококков и стрептококков, следующей задачей нашего исследования являлся генетический анализ и изучение распространенности IS-элементов в хромосомной ДНК стафилококков и стрептококков, полученных от больных с гнойничковой патологией кожи. Хромосомная ДНК была проанализирована на наличие генов - scpB, cfb, cyl, scaB, lmb, hylB, bac, bca и IS элементов (IS861, IS 1548, ISSa4, IS1381).

Генетический анализ хромосомной ДНК проводили методом полимеразной цепной реакции (ПЦР). Использованные в работе праймеры были сконструированы с помощью компьютерных программ OLIGO и BLAST на основании нуклеотидных последовательностей генов, доступных в базе данных GenBank.

Табл. 1.

Распространенность генов вирулентности среди штаммов стафилококков и стрептококков человеческого и животного происхождения

Вид бактерий Экологический вариант или серотип Хромосомные гены

bac bca scpB cfb cyl scaB lmb hylB pic

S.aureus hominis - +

S.aureus bovis +

S.aureus ovis - - - - - - - - +

Streptoc. Л - + + + + + + + -

Streptoc. D - - + + + + + +

При ПЦР-анализе хромосомной ДНК (табл.1) в зависимости от видовой принадлежности микроорганизма обнаружено, что штаммы стафилококков и стрептококков отличаются между собой по наличию в хромосоме проанализированных генов. Так, в хромосомной ДНК штаммов стафилококков был обнаружен только один ген (ген pic). В то же время, хромосомная ДНК штаммов стрептококков характеризовалась значительно большим количеством проанализированных генов - от 6 до 8 генов.

Интересные данные получены при анализе хромосомной ДНК стафилококков и стрептококков в зависимости от их экологической принадлежности. В хромосомной ДНК стрептококков группы А были обнаружены 7 генов (bca, scpB, scab, hylB, cfb, cyl, lmb), а у штаммов стрептококков группы D встречались 6 (scpB, scab, hylB, cfb, cyl, lmb) из 9 проанализированных хромосомных генов.

Обращает на себя внимание широта распространенности этих генов в хромосомной ДНК стафилококков различной экологической принадлежности. Так, штаммы всех эковаров этого вида бактерий в хромосомах содержали только один ген. Причем у всех был обнаружен один и тот же plc-ген.

Показано, что штаммы различных видов стафилококков и стрептококков отличаются между собой по характеру электрофо-ретической подвижности паттернов (рис.1). Наблюдается разница в электрофоретической подвижности паттернов у штаммов стрептококков, принадлежащих различным серотипам.

Исследованием установлено, что штаммы стрептококков по наличию 1Б- элементов в хромосоме являются более гетерогенными, чем по наличию генов вирулентности. Штаммы различного происхождения отличались по наличию 18-элементов в хромосомной ДНК. Хромосомная ДНК стрептококков, полученных от больных с кожной патологией, содержала только один 18-эле-мент - 181381, который также оказался общим для стрептококков, изолированных от больных с патологией других органов.

1 2 3 4 5

Рис. 1. ПЦР-анализ хромосомной ДНК стафилококков и стрептококков, выделенных у больных с гнойничковыми заболеваниями кожи.

Линии: 1 - Staphylococcus aureus;

2 - 100 bp ladder;

3 - стрептококк гр. А (контр.)

4 - стрептококк гр. А

5 - стрептококк гр. D

В хромосомной ДНК штаммов стрептококков, полученных от травматологических и гинекологических больных, были обнаружены по 3 разных 18-элемента. У штаммов травматологических больных - 15861, 188а4 и 181381, а у гинекологических -18861, 81548 и 181381.

Таким образом, резюмируя результаты проведенных исследований необходимо отметить, что в Таджикистане в структуре пиодермии'ведущее место занимает стрептодермия, несколько реже стафилодермйя и последнее место занимает смешанная форма данной кожной патологии - стафило-стрептодермия. В условиях сред-негорья эти заболевания встречаются примерно одинаково. Однако в некоторых регионах эти показатели резко отличаются. В частности, низкий уровень обращаемости по поводу стафилодермии и более частая регистрация больных с диагнозом стафило-стрепто-дермии по сравнению с другими регионами наблюдается в Куляб-ской зоне. По-видимому, такое состояние обусловлено климатическими факторами, уровнем медицинской и санитарной культуры населения, дефектами в организации рационального питания, характером производственной деятельности населения и др.

Следует отметить, что стафилококки, выделенные у больных со стафилодермией и микробной экземой, характеризуются частой резистентностью к тетрациклину и стрептомицину, проявляя чувствительность ко многим антибиотикам последнего поколения, которые можно рекомендовать как антибиотики выбора при лечении этих заболеваний. Стрептококки - этиологические агенты стрептодермии и в некоторых случаях возбудители микробной экземы, оказались наиболее чувствительными ко многим использованным в работе антибиотикам, однако проявляя устойчивость к тетрациклину и стрептомицину.

ПЦР-анализом установлено, что бактерии, относящиеся к разным видам, штаммы разного эковара, серотипа и происхождения, отличаются по наличию генов вирулентности и распространенности К-элементов в хромосомной ДНК.

Полученные результаты позволяют усовершенствовать диагностику и лечение патологии, вызванной этими микроорганизмами и разработать более качественные профилактические мероприятия с учетом генетических особенностей этих микроорганизмов.

ВЫВОДЫ

1. Пиодермиты в структуре дерматозов в Республике Таджикистан занимали первое место. Удельный вес обращаемости по их поводу во всех регионах был выше летом. Высокий уровень заболеваемости наблюдался в долинных районах: Хатлонской, Согдийской областях, в городе Душанбе и районах республиканского подчинения. Заболевание чаще регистрировалось среди сельхозработников, преимущественно у мужчин. Стрептодермии чаще встречались среди детей, стафилодермии - среди взрослых. Независимо от профессии и места жительства микробная экзема чаще отмечалась среди женщин.

2. При гнойничковых заболеваниях кожи из очагов поражения золотистые стафилококки и стрептококки в основном высевались в виде монокультуры. Ведущим этиологическим агентом микробной экземы являются золотистые стафилококки (78,9%±6,6), реже стрептококки (21,1%±6,6). Золотистые стафилококки животного происхождения (эковары bovis и ovis) и стрептококки группы D могут быть причиной пиодермии у человека.

3. Фагопейзаж золотистых стафилококков характеризуется высокой вариабельностью. При стафилодермии и микробной экземе штаммы в основном принадлежат к стафилококковым бактериофагам из первой и третьей фагогруппы. Золотистые стафилококки, изолированные при стрептодермии (как ассоцианты), чаще лизируются смешанным стафилококковым бактериофагом. Штаммы S.aureus эковаров bovis и ovis проявляют чувствительность только к фагам 102, 107 и 78 из набора КРС.

4. Золотистые стафилококки эковара hominis, изолированные из очагов пиодермии, по спектру резистентности отличаются от штаммов эковара bovis. Представители обоих эковаров сохраняют чувствительность ко многим часто применяемым антибиотикам.

5. Штаммы стафилококков и стрептококков, относящиеся к разным видам, экологическим вариантам и серогруппам отличаются по наличию генов вирулентности и IS-элементов в хромосомной ДНК.

6. Продукты ПЦР-анализа хромосомной ДНК стафилококков и стрептококков, относящиеся к разным видам, экологическим вариантам и серогруппам четко отличаются между собой по электрофореграммам, что можно использовать в диагностических целях.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ ДЛЯ ВНЕДРЕНИЯ В

ПРАКТИКУ

1. Банк данных о заболеваемости пиодермитами в Р'Г и её регионах с учетом высоты расположения над уровнем моря учитывать при подготовке специалистов, профилактике и лечении гнойничковых заболеваний кожи.

2. Бактериологическое исследование биоптатов при гнойничковых заболеваниях кожи является наиболее высокоинформативным методом диагностики, который позволяет определить чувствительность к определенным антибиотикам и препаратам. Данный метод необходимо использовать во всех практических лабораториях нашей республики.

3. ПЦР является высокоспецифичным и высокочувствительным методом, позволяющим определить возбудитель при единичных копиях ДНК. Данный метод можно использовать во всех городских и областных бактериологических лабораториях Таджикистана.

СПИСОК НАУЧНЫХ РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Саидов Х.М., Исаева М.С., Курбонбекова П.К., Хусейнов А. Микрофлора и бактерицидная активность кожи больных пиодермией. // Сборник научных статей 51-ой годичной научно-практической конференции "Вода и здоровье человека". - Душанбе. -2003. - С.181

2. Саидов Х.М., Саторов С.С., Зойров П.Т., Хусейнов A.A. Этиологическая структура стафилодермии, стрептодермий и микробной экземы в Таджикистане. // Сборник научных статей 52-ой годичной научно-практической конференции "Актуальные вопросы стоматологии". - Душанбе. - 2004. - С.298-299.

3. Саидов Х.М. Заболеваемость и внутривидовая характеристика возбудителей пиодермитов. // Материалы 53-ой годичной научно-практической конференции ТГМУ "Лекарство и здоровье". - Душанбе. - 2005. - С. 186-187.

4. Саидов Х.М., Хусейнов A.A., Курбонбекова П.К., Берды-алиев А. Сравнительный анализ стафилококков человеческого и животного экологических вариантов, выделенных у больных с гнойничковыми заболеваниями кожи. // Материалы 53-ой годичной научно-практической конференции ТГМУ "Лекарство и здоровье". - Душанбе. - 2005. - С. 185.

5. Саидов Х.М., Курбонбекова П.К., Бердыалиев А., Хусейнов A.A. Фагочувствительность и антибиотикограмма стафилококков различных экологических вариантов, выделенных у больных с гнойничковыми заболеваниями кожи. // Журнал Паеми Сино, приложение к № 1-2. - 2006. - С.710-714.

6. Саидов Х.М. Пиодермиты в Таджикистане. // Журнал Паеми Сино, приложение к № 1-2. - 2006. - С.714-718.

7. Саидов Х.М., Саторов С.С., Хусейнов A.A., Курбонбекова П.К. Генетический анализ хромосомной ДНК выделенных стафилококков и стрептококков у больных с гнойничковыми заболеваниями кожи. // Материалы 1-го Съезда (конгресса) стоматологов Таджикистана. Душанбе. - 2006. - С.417-419.

ХУЛОСЛ

Саидов Х.М. Тасиифи микробиологи ва гснетикии барангезанда-гони асосии беморихои фасодии пуст дар Тоникистон.

Рис. номз. 14.00.11 - касалихои пуст ва венерики, 03.00.07 -микробшиносй.

Дар натичаи тахлили маълумотх,ои беморони пиодермит ба беморхонахои пуст-венерикй мурочиат намуда, тахдики эпидемиологии беморихс^и пиодермит гузаронида шуд.

Аз ин хусус 136 нафар беморони гирифтори пиодермит таш-хис карда шуд, ки аз онхо 53 нафар - бемории стафилодермия, 45 нафар бо бемории стрептодермия ва 38 нафар бо экземаи бакте-риявй гирифторанд. Дар гурухи озмоишй (контрол) 70 нафар шахсони солим ташхис карда шудаанд. 88 штамми стафилокок-кхо ва 48 штамми стрептококкхои руёнидашуда аз ташхиси микробиологи ва генетики (пайвастагии пайдархами полимеразй) гузаронида шудаанд.

Дар натичаи ташхисхо (тадкикотхо) муайян карда шуд, иио-дермитхо дар байни сохтори дерматозхо (беморих,ои гуногуни пуст) дар микёси Ч,умхурии Точикистон чои аввалро ишгол мекунанд. Дар сохтори этиологии беморихои фасодии пуст гайр аз стафило-коккхо ва стрептококкх,ои аз одамон чудо кардашуда, бактерияхои аз хайвонот руёнидашуда низ ахамияги калон доранд.

Штаммх,ои стафилококкх.о ва сгрептококкхо аз хамдигар бо генх,ое фарк. мекунанд, ки омилхои касалиовари ин микроорга-низмх,оро назорат мекунанд.

Пайвастагии пайдарпаи полимеразиро барои муайян наму-дани фаркияти стафилококкхо ва стрептококкхо истифода меба-ранд, ки сифати ташхиси микробиологи ва эпидемиологии беморихои фасодиро баланд мебардорад.

Сахифа -106, раем - 21, чадвал - 7, руйхати адабиётхо - 194, аз он чумла адабиетхои хоричй - 123.

SUMMARY

Saidov KhJYI. "The microbiological and genetic characteristic of the main infection agents of purulent diseases of a skin in Tajikistan".

Candi. diss. 14.00.11 - skin and veneral diseases; 03.00.07 -microbiology.

We lead the epidemiological analysis of desease of pyodermia on the data of appeals (the form 25-b) to skin-venereologic hospitals of Tajikistan.

Inspection of 136 patients with pyodermia is lead, from them: 53 - with staphylodermia, 45 - with streptodermia, 38 - with the diagnosis of microbic eczema. As control group 70 healthy persons (without a pathology of an integument) have been surveyed. There are 88 strains of staphylococci and 48 strains streptococci to the microbiological and genetic analysis (by PCR) have been subjected.

It is established that pyodermia in structure of dermatosis in Republic of Tajikistan occupy first place. In etiological structure of purulent diseases of skin along with staphylococci and streptococci of a human origin strains of these bacteria of an animal origin participate. These microorganisms differ among themselves on sensitivity antibiotics.

Strains of staphylococci and streptococci differ on frequency of occurrence of the genes coding factors, of pathogenicity of microorganisms.

PCR-method can be used for a differentiation of staphylococci and streptococci that will raise quality of microbiological and epidemiological diagnostics of the given nature diseases.

. Pages -106, figures - 21, tables - 7, the bibl. - 194 (foreign - 123).

Подписано в печать 26.11.06г. Тираж - 100 экз.

Отпечатано в типографии «Конуният»

Актуальность работы. Гнойничковые заболевания кожи или пиодермнты являются актуальной проблемой для здравоохранения всех стран. Пиодермнты в структуре дерматозов занимаю! первое место и 3-4 место к общей структуре заболеваемости человека после гриппа, респираторных и сердечно-сосудистых заболеваний (175), Актуальность данной проблему обусловлена тем» что пиодермнты нередко принимают хроническое, рецидивирующее течение, требуют упорной, продолжительной терапии, которая не всегда приводит к желаемому результату (146, 159, 193). Данная проблема является актуальной и для органов здравоохранения нашей страны. Достаточно отметить, что только за последние 15 лет пребывание больных на больничном листе увеличилось в среднем с 6,8 до 9,4 дня, а общие трудовые потери в целом по стране при временной нетрудоспособности только по заболеваемости пиодермнтами составляют в год около 93-14 млн. рабочих дней (24).

В последние голы в результате широкого и бесконтрольного применения различных антибактериальных препаратов, под влиянием неспецнфнческия и специфических факторов защиты организма произошло изменение ряда биологических свойств возбудителей пнодермитов. Вей чаще появляются сообщения об увеличении числа полнрезнстентных штаммов основных возбудителей данной патологии - стафилококков и стрептококков, расширении спектра их устойчивосги к прогнвомикробным препаратам, возникновении трансформированных и Ь-лактамаэол роду пирующих мутантов (46, 91, 147). Поэтому вопросы микробиологии и генетики возбудителя, эпидемиологии, диагностики и профилактики гнойничковых заболеваний кожи остаются в центре внимания микробиологов, дерматовенерологов н эпидемиологов.

В структуре гнойничковых заболеваний кожи воду шее место занимают стафнлодермня, стрелтодермня и микробная экзема. Роль стафилококков и стрептококков человеческого происхождения в этнологии этих инфекций не вызывает сомнения. В тоже время н литераторе данные об этнологической значимости микроорганизмов, принадлежащих к животным экологическим вариантам, отсутствуют. Исследователи ограничивались в основном изучен и ем стафилококков и стрептококков без их внутривидовой серотиповой днфферсникровки. Нет данных о широте распространения и частоте встречаемости генов, кодирующих основные факгоры патогснностн у стафилококков и стрептококков* возбудителей гнойничковых заболеваний кожи.

Исходи hj вышеизложенного, перед нами была постай.ipiu цель изучить распространение гнойничковых заболеваний кожи и установление клинической значимости стафилококков и стрептококков различною происхождения при данной патологии кожи в Таджикистане. Задачи работы:

1. Изучить распространенность гнойничковых заболеваний кожи по обращаемости больных к врачам кож-венерологам.

2. Изучить этиологическую структуру и определить удельный вес стафилококков и стрептококков животного происхождения в возникновении гнойничковых заболеваний кожи в Таджикистане.

3. Изучить биологические особенности стафилококков и стрспотококков, выделенных у больных с пиодермией и микробной экземой.

4. Провести сравнительный анализ хромосомной ДНК, выделенных штаммов стафилококков и стрептококков при стрепго-стафилодермии и микробной экземы.

Паучник ни him на:

- Впервые в Республике Таджикистан установлено роль и удельный вес стафилококков, стрептококков человеческого и животного происхождения в возникновении стрсггто-стафнлодермнн и микробной экземы:

Впераые представлена антнбиотнкограмма и фотопейзаж стафилококков и стрептококков различных эковаров н ссротипов, возбудителей стафклодермин, стрептодсрми* и микробной экземы,

- Впервые усыновлена возможность возникновения гнойничковых заболеваний кожи, обусловленных стафилококкам и и стрептококками животных эковаров bo%'is и ovis.

- Изучена частота встречаемости генов хромосомной ДНК стафилококков н стрептококков, кодирующих основные факторы патогенности.

Практическая значимость работы.

Данные о заболеваемости ниодермнтамн позволяю! разрабатывать эффективные способы профилактики гнойничковой патологии кожн и каждом конкретном регионе Республики Таджикистан,

Установление этиологической роли штаммов, принадлежащих к животным эковарам золотистого стафилококка и серогипу стрептококка, констатирует необходимость проведения внутривидового и серотипового гнлирования этих микроорганизмов в условиях диагностических лабораторий

Для эффективного лечения кожных заболеваний стафилококковой и стрептококковой природы необходимо учитывать особенности антибнотикограмм этих микроорганизмов в зависимости от нх экологической принадлежности.

Проведен ПЦР-аналнз хромосомной ДНК и показано идентифицирующее значение lS-элемеитов хромосомы для внутривидовой и ссротн новой днфферениировки стафилококков и стрептококков.

ЛII роба пня результатов исследован ни.

Основные положения диссертационной работы были доложены на 51-й годичной научно-практической конференции с международным участием «Вола и злоровыг человека» (2003г.). на 52-й годичной научно-практической конференции с международным участием «Актуальные вопросы стоматологии» (2004г.), на 53-й годичной научно-практической конференции с международным участием «Лекарства и здоровье» (2005), Паем и Сино, приложение к № 1-2. 2006 г. „Съезда (конгресса) стоматологов Таджикистана. 2006 г,, материалы 1-ого апробированы на заседании кафедры микробиологии, вирусологии и иммунологии Таджикского государственного Медицинского университета имени. Абуаяи ибни Сино. а также на заседании экспертной проблемной комиссии ТГМУ (октябрь, 2004г.),

Структура днссергаини.

Диссертация написана на русском языке, в классическом стиле, ей текст размещён на 106 страницах, проиллюстрирован 7 таблицами и 21 рисунками.

Диссертация состоит из 5 глав. Обзор литературы - I глава н 4-х глав собственных исследований.

Диссертацию завершают заключение, общие выводы* рекомендации для внедрения в науку н практику, а также список литерату ры. Основные положения, выносимые на зяшнту,

1. Показатели заболеваемости пиодермитами в Таджикистане коррелируют с факторами окружающей среды и особенностями макроорган изма, в частности пола и возраста больных.

2- Стафнлодермня и стрсптодермия вызываются соответствующими возбудителями, в основном в виде монокультуры. Ведущим возбудителем микробной экземы являются штаммы золотистого стафилококка

3. Стафилококки и стрептококки животного происхождения способны вызывать у человека гнойничковую патологию кожи.

4. Фагопейзаж золотистых стафилококков характеризуется высокой вариабел ьностыо.

5. Золотистые стафилококки зковара hominis, изолированные из патологического материала при гнойничковых заболеваниях кожи по спектру резистентности отличаются от пгтаммов эковара bovis.

6. Штаммы стафилококков и стрептококков различаются по частоте встречаемости генов, кодирующих факторы патоген ности микроорганизма.

Вкелрсние результатов работы. По материалам диссертации составлены методические рекомендации для преподавателей, студентов и практических врачей «Микробиологическая диагностика и лечение заболеваний стафилококковой и стрептококковой природы».

Результаты исследования внедрены в учебный процесс кафедры микробиологии и кожных болезней Таджикского государственного медицинского универиентета им. Абуалн ибнн Снно,

Публикация результатов исследований. По материалам диссертации опубликовано 7 статей и 20 актов внедрения (5 актов внедрения в учебный процесс и 15' в практику здравоохранения).

Достоверность полученных результатов подтверждается следующим: L Высокой чувствительностью использованных бактериологических и генетических методов исследования. 2. Проведением статистической обработки полученных данных общепринятыми методами.

-83-ВЫВОДЫ

1. Пиодермиты в структуре дерматозов в Республике Таджикистан занимали первое место. Удельный вес обращаемости по их поводу во всех регионах был выше летом. Высокий уровень заболеваемости наблюдается в долинных районах: Хатлонской, Согдийской областях, в городе Душанбе и районах республиканского подчинения. Заболевание чаще регистрировалось среди сельхозработников, преимущественно у мужчин. Стрептодермии чаще встречались среди детей, стафилодермии - среди взрослых. Независимо от профессии и места жительства микробная экзема чаще отмечалась среди женщин(60,5%±8,0 и 30,5%±8,0 соответственно ).

2. При гнойничковых заболеваниях кожи из очагов поражения золотистые стафилококки и стрептококки в основном высевались в виде монокультуры. Ведущим этиологическим агентом микробной экземы являются золотистые стафилококки (78,9%±6,6), реже стрептококки (21,1%±6,6). Золотистые стафилококки животного происхождения (эковары bovis и ovis) и стрептококки группы D могут быть причиной пиодермии у человека.

3. Фагопейзаж золотистых стафилококков характеризуется высокой вариабельностью. При стафилодермии и микробной экземе штаммы в основном принадлежат к стафилококковым бактериофагам из первой и третьей фагогруппы. Золотистые стафилококки, изолированные при стрептодермии (как ассоцианты), чаще лизируются смешанным стафилококковым бактериофагом. Штаммы S.aureus эковаров bovis и ovis проявляют чувствительность только к фагам 102, 107 и 78 из набора КРС.

4. Золотистые стафилококки эковара hominis, изолированные из очагов пиодермии, по спектру резистентности отличаются от штаммов эковара bovis. Представители обоих эковаров сохраняют чувствительность ко многим часто применяемым антибиотикам.

-845. Штаммы стафилококков и стрептококков, относящиеся к разным видам, экологическим вариантам и серогруппам отличаются по наличию генов вирулентности и IS-элементов в хромосомной ДНК. 6. Продукты ПЦР-анализа хромосомной ДНК стафилококков и стрептококков, относящиеся к разным видам, экологическим вариантам и серогруппам четко отличаются между собой по электрофореграммам, что можно использовать в диагностических целях. рекомендации для внедрения в науку и практику

1. Банк данных о заболеваемости пнодсрмнтами в РТ н е£ регионах с учетом высоты расположения нал уровнем моря надо использовать при подготовке спсдналистов, профилактике и лечении гнойничковых заболеваниях кожи.

2. Бактериологическое исследование биогпатов при гнойничковых заболеваний кожи является наиболее высоконнформативным методом диагностики, который позволяет определить чувствительность к определенным антибиотикам н препаратам. Данный метод необходимо использовать во всех практических лабораториях нашей республнкн

3. ПНР является высокоепецнфичным н высокочувствительным методом, позволяющим определить возбудителя прн единичных копиях ДНК. Данный метол необходимо наладить во всех городских и областных бактериологических лабораториях Таджикистана.

ЗАКЛ ЮЧЕНИЕ

В настоящее время гнойничковые заболевания кожи представляют собой наиболее распространенные дерматозы. Основными возбудителями этих болезней являются стафилококки, стрептококки, различные виды грибов, грамотрицательные бациллы: псевдомонады, протеи, клебсиелы, актинобактерии и.другие микроорганизмы, которые выражено отличаются между собой по чувствительности к антибактериальным препаратам.

Известно, что этиологическая структура гнойно-воспалительных заболеваний кожи в разных странах и в различных регионах внутри одной страны не одинакова. Гнойничковые болезни кожи чаще встречаются в долинах, реже в высокогорье и среднегорье. Поэтому, периодический скрининг в этом направлении представляет большой научно-практический интерес.

Эффективная профилактика и терапия любого заболевания бактериальной природы зависит от специфичности применяемых методов диагностики. Исследователями или практическими врачами не всегда проводится внутривидовая или внутрисеротиповая дифференцировка возбудителей инфекции, что не позволяет установить источника инфекции и провести качественную микробиологическую и эпидемиологическую диагностику. Вместе с тем, на сегодня известно роль стафилококков и стрептококков животного происхождения при различных патологий человека. Однако, до сих пор нет данных о роли стафилококков и стрептококков животного происхождения в этиологии гнойничковых заболеваний кожи.

Исходя из вышеизложенного была сформулирована цель настоящей диссертационной работы - изучить клиническую значимость стафилококков и стрептококков различного происхождения при гнойничковых заболеваний кожи, определить биологические и генетические особенности этих микроорганизмов.

Для достижения поставленной в работе цели были разработаны следующие задачи:

• провести структурный анализ гнойничковых заболеваний кожи по обращаемости больных к врачам кожвенерологам

• изучить этиологическую структуру и определить удельный вес стафилококков и стрептококков животного происхождения в возникновении гнойничковых заболеваний кожи в Таджикистане.

• изучить фагочувствительность и антибиотикочувствительность стафилококков и стрепотококков, выделенных у больных с стрептодермией, стафилодермией и микробной экземой.

• провести сравнительный анализ хромосомной ДНК, выделенных штаммов стафилококков и стрептококков.

Исходя из поставленных задач, были обследованы 136 больных, из них: 53 со стафилодермией, 45-стрептодермией и 38 - с диагнозом микробная экзема. Статистическому анализу были подвергнуты 56204 статистических талонов (форма 25-в).

Для решения поставленных в работе задач было проведено бактериологическое исследование выделенных от больных с кожной патологии штаммы стафилококков и стрептококков. Генетический анализ хромосомной ДНК осуществили методом ПЦР.

На первом этапе исследования нами была изучена распространенность пиодермитов в различных регионах Таджикистана по материалам обращаемости (форма 25-в) в кожно-венеролгические учреждения различных областных центров и районов Республики Таджикистан, включая столицу республики - г.Душанбе.

Исследованием установлено, что гнойничковые заболевания кожи, в частности стафилодермия, стрептодермия чаще всего регистрировались в южных зонах Таджикистана: Курган-Тюбинская и Кулябская зоны Хатлонской области. Показатели заболеваемости пиодермитами в Согдской области и г.Душанбе (включая РРП) были примерно одинаковыми. Как следовало, и ожидать показатели заболеваемости в г. Хороге были значительно ниже, чем в других регионах. Интересные данные получены в результате анализа заболеваемости среди населения поселки Мургаб Мургабского района ГБАО. Установлено, что в этом самом высокогорном регионе гнойничковые заболевания кожи не регистрировались.

В целом по республике в структуре дерматозов пиодермиты составляли 49,2%.

При анализе заболеваемости пиодермитамн в центральном регионе Таджикистана установлено, что в г.Душанбе и РРП Таджикистана в структуре пиодермитов первое место занимает стрептодермия, второе место -стафилодермия и на последнем месте - стафило-стрептодермия.

В Курган-Тюбинской и Кулябской зонах Хатлонской области анализ заболеваемости пиодермитамн был проведен по данным обращаемости в Курган-Тюбинский и Кулябский кожно-венерологические диспансеры. Установлено, что как и в центральном регионе Таджикистана в южных зонах первое место занимала стрептодермия, затем стафилодермия и смешанная форма пиодермита, последние регистрировались значительно реже. В связи с тем, что показатели заболеваемости в Хатлонской области в частности в Курган-Тюбинской зоне были несколько выше, чем в других регионах, нами было проведено анализ заболеваемости пиодермитами в зависимости от месяца года среди взрослого населения и детей до 14 лет. Анализ показал, что в Хатлонской области относительно высокий удельный вес обращаемости наблюдается с апреля по сентябрь месяцев. С октября по март месяцы уровень обращаемости был примерно одинаковым и по сравнению с другими месяцами несколько низким. Аналогичная картина наблюдается и среди детей. В целом, заболеваемость была высокой в тех месяцах года, когда наблюдается высокая температура атмосферного воздуха, низкая влажность и минимальное количество выпадающих осадков. В тех месяцах, для которых характерно низкая температура атмосферного воздуха, повышения ее влажное (и и увеличения выпадающих осадков уровень заболеваемости была значительно низким.

Анализом установлено, что, несмотря на схожей природно-климатической характеристики и социально-бытовых условиях жизни, различные формы пиодермии - стрептодермня. стафнлодермня в Кулябской зоне регистрируются несколько меньше, чем в Курган-Тюбинекой зоне этой же области ,

В семерной зоне республики исследования проводилось и г, Хулжанде, центре Согдской области, на основании обращаемости в Согдский КВД,

При анализе структуры заболеваемости населения пнодермнтамн в jтом регионе обращает на себя внимание несколько частое случаев регистрации стафилодермнн, чем среди населения Кулябе кой зоне Хатлонской области и близкие показатели с данными о заболеваемости в центральной части и Курган-Тюбинской зоне Хатлонской области. Смешанная форма пиодермнта - стафнло-стреггтодермия регистрировалась примерно одинакова с таковыми в Курган-Тюбннской зоне, в 2 раза больше, чем в центральной зоне Таджикистана и в 2 раза меньше, чем в Кулябской зоне Хатлонской области.

Таким образом, ретроспективный анализ заболеваемости по данным обращаемости в кожно-венсродогнчсскнс диспансеры к врачам кожно-венерологам показывает, что "заболеваемость пнодермнтамн в различных регионах республики варьирует в больших диапазонах.

Анализ удельного веса обращаемости населения по месяцам года позволяет заключить, что уровень обращаемости к врачам кожно-венерологам повышается, начиная с май месяца и достигает максимума в период с июля по октябрь месяцы. Следовательно, можно резюмировать, что уровень заболеваемости повышается в тс месяцы, когда температура воздуха достигает максимальных величин при низкой влажности.

Исходя нз второй залачи настоящей диссертационной работы на следующем этане нами был изучен состав (профессия, возраст, пол) больных. от которых были выделены культуры стафилококков и стрептококков для микробиологического и генетического анализа.

При распределении больных на профессиональные группы установили, что гнойничковыми заболеваниями кожи чаще поражаются сельскохозяйственные рабочие, чем лица других профессий. Среди сельхозработников частота заболеваемости стафилодермией и стрептодермией была в 2 раза больше, чем среди лиц занятых другими видами трудовой деятельности. Однако, частота заболеваемости микробной экземой была примерно одинакова как среди сельхозработников, так и среди лиц других профессий (47,4%).

Наибольший интерес представляет внутривидовая дифференцировка стафилококков и стрептококков. При распределении штаммов стафилококков, выделенных из патологического материала больных стафилодермией по эковарам установлено, что основным возбудителем стафилодермии являются штаммы человеческого экологического варианта- S. aureus эковар hominis. Характерные для человека штаммы стрептококков- streptococcus гр. А и гр. В были ведущими возбудителями при стрептодермии . Дальнейшее исследование показало, что этиологическими агентами стафилодермии и стрептодермии наряду с характерным для человека эковаром золотистого стафилококка или серогрупп стрептококка могут являться штаммы животного происхождения.

Привлекает внимание этиологическая структура микробной экземы. При данной гнойной формы кожной патологии стафилококки выесевались в 3 раза чаще, чем штаммы стрептококка.

Выделения стафилококков и стрептококков животных экологических вариантов позволили нам предполагать, что между людьми и животными, происходит перекрестное инфицирование. Для подтверждения этого факта, выделенные коагулазоположительные штаммы стафилококков были подвергнуты фаготипированию.

Исследованием установлено, что фагопейзаж культур стафилококков, выделенных из патологического материала больных с гнойничковыми заболеваниями кожи характеризуются большим разнообразием. Выделенные штаммы наиболее часто лизировались фагами относящимся к 1 фагогруппе и . несколько реже были чувствительны к бактериофагам из 2 и смешанной группы фагов.

Выраженной фаготиповой варибельностью характеризовались штаммы эковара hominis, изолированные от больных с стрептодермией. Так, наибольшее количество этих штаммов проявляли чувствительность к фагам из различных фагогрупп, т.е. к смешанным фагам. Привлекает внимание лизабельность бактериофагами штаммов относящихся к эковару S.bovis, изолированных из патологического материала обследованных больных. Как мы и ожидали, эти штаммы лизировались только бактериофагами из набора «КРС». Наиболее часто стафилококки, принадлежащие этому эковару лизировались 102 и 107 фагами, реже 116-119. Все штаммы варианта S.ovis, лизировались только 78 фагом, что является идентифицирующим признаком для штаммов этого экова.

Таким образом, фагопейзаж культур, выделенных из патологического материала больных с различными формами пиодермии резко отличается. Если стафилококки -этиологические агенты стафилодермии чаще были чувствительны к фагам из первой фагогруппы, то возбудители стрептодермии чаще лизировались фагами из смешанной группы. Штаммы эковара S.bovis выделенные из патологического материала характеризуются фагомазаикой 102/107 из набора «КРС»

Количество антибиотиков различных групп, применяемых для терапевтических целей постоянно увеличивается, Изменяется и чувствительность к ним микроорганизмов., в том, числе стафилококков, в зависимости от частоты и условий применнения этих препаратов. Учитывая это, определение чувствительности возбудителей гнойных инфекции к широкому набору современных антибактериальных средств имеет первостепенное значение при выборе наиболее эффективной схемы лечения кожной патологии бактериальной природы.

Поэтому, следующим этапом нашего исследования являлось изучения антибиотикочувствительности штаммов стафилококков и стрептококков, полученных у больных с гнойными кожными патологиями.

Показано, что штаммы золотистого стафилококка человеческого экологического варианта, в основном проявляют устойчивость к тетрациклину и стрептомицину. Примерно в 2 раза реже встречались ампициллин- и левомицетин -устойчивые культуры этого экологического варианта стафилококка. Одинаковыми были количество оксациллин и рифампицин резистентных штаммов. Близкими были показатели устойчивости к неомицину и мономицину. Обращает также на себя внимания незначительное количество штаммов устойчивых к доксациклину, гентамицину, канамицину, клиндомицину. Еже реже встречались штаммы резистентные к цефотоксиму, эритромицину и ванкомицину. В наименьшем проценте случаев высевались штаммы устойчивые к ципрофлоксацину, азитромицину - всего по 2 штамма.

Из патологического материала больных с диагнозом стафилодермией было выделено 6 штаммов золотистого стафилококка эковара bovis. и штаммы не проявляли устойчивость к таким антибиотикам как клиндомицин, цефотоксим, ванкомицин, цепрофлоксацин, азитромицин. При данной патологии из патологического материала нам удалось выделить только 2 штамма золотистого стафилококка характеризующихся как эковар ovis, что не позволило нам проводить детальный их антибиотикограмм.

При сравнительном анализе антибиотикограмм штаммов стафилококков, полученных от больных с микробной экземой с результатами изучения антибиотикочувствительности штаммов полученных от больных с стафилодермией выраженное различие не обнаружено.

При рассмотрении лекарственной устойчивости культур стрептококков привлекают внимание штаммы, изолированные от больных с микробной экземой. Среди изученных культур 24% были чувствительны ко всем использованном в работе антибиотикам. Здесь, показатель устойчивости по отношению ко всем антибиотикам был ниже средних показателей для штаммов, полученных у больных со стрептодермией. Наиболее часто выявлялась устойчивость к тетрациклину. Удельный вес стрептококков животного происхождения в этиологической структуре данных патологии были незначительными. Поэтому, для них статистическая обработка показателей антибиотикоустойчивости не проводились.

Учитывая факт, что стафилококки и стрептококки циркулирующих в Таджикистане до начало настоящей работы в генетическом плане оставались не изученными и недостаточной информации о генетическом контроле факторов патогенности и вирулентности у стафилококков и стрептококков другой задачей нашего исследования являлось генетический анализ и изучения частоты распространенности IS-элементов в хромосомной ДНК стафилококков и стрептококков, полученных от больных с гнойничковой патологии кожи.

Праймеры были сконструированы с использованием программ OLIGO и BLAST на основании нуклеотидных последовательностей генов, доступных в базе данных GenBank.

Для того чтобы иметь представления о генетике этих микроорганизмов, их хромосомная ДНК была проанализирована на наличие генов - scpB, cfb. cyl, scaB, lmb, hylB, bac, bca и IS элементов (IS861, IS 1548, ISSa4, IS 1381).

При ПЦР-анапизе хромосомной ДНК в зависимости от видовой принадлежности микроорганизма обнаружено, что штаммы стафилококков и стрептококков выражено, отличаются между собой по наличию в хромосоме проанализированных генов. Так, в хромосомной ДНК штаммов стафилококков был обнаружен только один ген (ген pic). В то же время, хромосомная ДНК штаммов стрептококков характеризовались значительно большим количеством проанализированных генов - от 6 до 8 генов.

Интересные данные получены при анализе хромосомной ДНК стафилококков и стрептококков в зависимости от их экологической принадлежности. Только хромосомная ДНК стрептококков гр.В. содержала все проанализированные (- scpB, cfb, cyl. scaB, lmb, hylB, bac, bca) гены. В хромосомной ДНК стрептококков гр.А были обнаружены 7 (bca, scpB, scab, hylB. cfb, cyl, lmb), а у штаммов стрептококков rp.D встречались 6 (scpB, scab, hylB, cfb, cyl, lmb) из 8 проанализированных хромосомных генов.

Обращает на себя внимание широта распространенности этих генов в хромосомной ДНК стафилококков различной экологической принадлежности. Так, штаммы всех эковаров этого вида бактерий в хромосомах содержали только один ген, При чем у всех был обнаружен один и тот же ген - pic.

Молекулярно-генетический анализ хромосомной ДНК и генотипирование стафилококков и стрептококков имеют как теоретическое, так и практическое значение. Важность представлений о распределении генотипов стафилококков и стрептококков при различных заболеваниях обусловлена тем, что установление генотиповой принадлежности штамма позволяет провести качественную диагностику и эффективный мониторинг и лечение заболеваний вызванный этими бактериями.

Исходя из выше изложенного, нами был проведен сравнительный анализ хромосомной ДНК исследуемых штаммов стафилококков и стрептококков посредством ПЦР. Результаты ПЦР-анализа были сопоставлены изучением характера электрофореграмм на геле. Показано, что штаммы различных видов стафилококков и стрептококков отличаются между собой по характеру электрофоретической подвижности паттернов. В тоже время наблюдается разница в электрофоретической подвижности паттернов у штаммов стрептококков принадлежащих различным серотипам.

Исследованием установлено, что штаммы стрептококков по наличию IS элементов в хромосоме являются более гетерогенными, чем по наличию генов вирулентности. Штаммы различного происхождения отличались по наличию IS элементов в хромосомной ДНК. Хромосомная ДНК стрептококков полученных от больных с кожной патологии содержали только один IS элемент - IS 1381, который также оказался общим для стрептококков, изолированных от больных с патологиями других органов.

По своей электрофоретической подвижности отличались между собой штаммы стрептококков, полученных от больных с различными нозологическими формами. Так, хромосомная ДНК штаммов стрептококков полученных от травматологических и гинекологических больных были обнаружены по 3 разных IS элементов. У штаммов травматологических больных - IS861, lSSa4 и IS1381, а у гинекологических - IS861, S1548 и IS1381.

Таким образом, резюмируя результаты проведенных исследований необходимо отметить, что в Таджикистане в структуре пиодермии ведущее место занимает стрептодермия, несколько реже стафилодермия и последнее место занимает смешанная форма данной кожной патологии - стафило-стрептодермия. Однако, в некоторых регионах эти показатели резко отличаются. В частности, низкий уровень обращаемости по поводу стафилодермии и несколько частая регистрация случаев больных с диагнозом стафило-стрептодермии по сравнению с другими регионами наблюдается в Кулябской зоне, а в условиях среднегорья одинаково, и пиодермии встречались в десятки раз реже в условиях высокогорья. По-видимому, такое состояние обусловлено климатическими факторами, уровнем медицинской и санитарной культуры населения, дефектами в организации рационального питания, характером производственной деятельности населения и др.

Следует отметить, что стафилококки, выделенные от больных с стафилодермией и микробной экземой, характеризуются частой резистентностью к тетрациклину и стрептомицину, проявляя чувствительность ко многим антибиотикам последнего поколения, которых можно рекомендовать как антибиотики выбора при лечении этих заболеваний. Стрептококки этиологические агенты стрептодермии и в некоторых случаях возбудители микробной экземы оказались наиболее чувствительными ко многим не пользованным в работе антибиотикам, также проявляя устойчивость к тетрациклину и стрептомицину.

ПЦР-аналнэом установлено, что бактерии, относящиеся к разным аилам, штаммы разного эковара, серо типа и происхождения отличаются по наличию генов вирулентности и распространенности IS элементов в хромосомной ДНК,

Полученные результаты позволяют усовершенствовать диагностику и лечение патологии, вызванные этими микроорганизмами и разработать более качественные профилактические мероприятия с учетом генетических особенностей этих микроорганизмов.