Автореферат и диссертация по медицине (14.00.36) на тему:Миелопид: иммунофармакологическая активность при иммунодефицитных состояниях

13 'ОТ о", с'

/ЛИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ Институт иммунологии

На правах рукописи УДК 616.017.1:612.112. В4

СТЕПАНЕНКО Родион Николаевич

МИЕЛОПИД: ИММУНОФАРМАКОЛОГИЧЕСКАЯ АКТИВНОСТЬ ПРИ ИММУНОДЕФИЦ.ИТНЫХ состояниях

14.00.36 — Аллергология и иммунология

Диссертация «а соискание ученой степени доктора медицинских наук

/Москве — 1992 г.

' < ' / / (

Работа выполнена в Институте иммунологии Российской федерации

Официальные оппоненты:

члеи-корреспондент РАЕН, профессор Н. Г. Арцимович доктор медицинских наук В. Я. Армой доктор медицинских наук В. Г. Нестеренко

Ведущая организация:

2-й Московский срдена Ленина государственный медицинский институт имени Н. И. ПИРОГОВА

Защита состоится <¿5 » 1992 г. '

в / ^ час. на заседании специализированного Совета Д 074.09.0! по защите диссертаций на соискание ученой степени доктора наук при Институте иммунологии Российской федерации (115478 Москва, Каширское шоссе, дои 24, корп. 2)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Института имму-

нологии.

Автореферат разослан

Ученый секретарь специализированного Совета доктор биологических нзук

А. В. Колобов

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РЛЮТН ДТрТДа"ЬНОСТЬ • кРУП!ГС!!ав" досггивениеч современной медиа и Ды мопно считать осознание того факта, что в патогенезе многих заболеваний оуществеину» роль играв? вротденнио и приобретении«; дефектн иямушюё система (ИДО. При этой, если врсядстшне (першгзнне) дефекты иму нагота пстречаотся достаточно редт.о (таи, наиболее чдето встречающиеся врояденние селективные дефицита кшуноглобулинов составляют 0,03-0,2)8 случаев всей популяции (Петров, 1997}, то приобретен!»;« (вторичные). НДС, по мере развития методов пя диагноечкрования, взявлявтеп со все большем числе случаев, что в значительной степени обусловлено внеокой чувствительность!) икмунпой сястсм2. к различным неблагоприятном факторам внеиней среди, таиек« вак стресск, воздействие различиях токсических веществ естеегвенного или искусственного прясхоядения, рязяичшгх видов излучений и т.д. Часто угнетающее действие на иммунную систему оказывает разаятке какого-либо патологического процесса, и в результате, раээшзасцийся иммунодефицит значительно отягощает течение основного заболевания. Во многих случаях саин истода лечения основного заболевания, такие казг антибиотики, ккыиотерапевтические и гормональные препарат», хирургические операции, радкотерапия и др. оказывают (Гнетащее действие на гашу ни ус систему, что приводит к шогочисгенннм инфекционном осложнениям, которые ухудшают юстоянве больного, увеличивает лродоягитеяьноегь его фебавания в вгиняке к усложняют хечение.

Широкое распространение ИДС и во ыногих случаях четко ирасвазва&быая взаимосвязь ыезду степеньо порааения имушюй системы и тяжестью протекания заболеваний потребовало, поиска цедикаиентоэиых средств, ' ввссг&наваиващкя нормальное ее функционирование.

К ишуножорригирувщим средства!!, получивший сегодня наибольшее распространение в клинике, следует отнести препараты, основная действующи;,! компонентой которых дезиятся как еыдвиеннне па тканей тимуса горыоноподобные вецестра, или их синтетические аналоге. В клинической практике уге используется такие препараты как тиыозкн, талтизин, тшепоэтчш, тшулин, ткаоген и ряд другик (БоЫагеш, 1979; Арион, 1989; Ыорозов, Хазинсон, 1389).

В настоящее время является общепризнанным, что наряду с тодусом, обеспечнв&вщш воспроизводство клеток Т систеыы иммунитета, у шшдопитащих вторим центральным органом шмунном системы является костный ыозг, где происходит ' созревание клеток В системы. При этом клетками костного мозга, так не хак и клетками тимуса, продуцируется целий спектр медиаторов, оказывающих различное влияние на функционирование имиунной систеыы. К таким медиаторам относятся и выделенная Р.В.Петровы«,А.А:Михайловой и соавторами группа потвдоподобных веществ, под влиянием которая увеличивается в продуктивную фазу количество клеток сантезирущих антитела. Эти вещества получили название ииегопептвдов (МП).

В результате проведенная исследований было установлено, что ЫП оказывают внрауенный иыиуностимулирущий аффект при экспериментальных ВДС с преимущественным угнетением

гуморального звена иккукитета. »кдоисспоцм$№ши и HOTOKcireiiK при введении п организм (Hilthailova, Petrov, 1S87) . Эти свойства Î.ÎTI позволили разработать на яя основа лекарственное средство, подучтепес название мислоппд.

В экспериментах на еивотхшх бнто установлено, что мнелопнд обладает такой гте тгаунобкояогнчесжон активности, что МП » не оказквает неблагоприятная воздействий на организм. Васокая ммунойармакологичегагая активность препарата к его безвредность квипось основание« дяя р<?як?ш>я ■Фарикоинтста СССР о проведешзн кяиннчеекгог испытаний ниелопвда как нммунокоррегирущего средства.

Пельа данного исследование яннлось изучение влияния • Ековопида на югмунную систему чоюоожа и оценка его ш:иуноз:орригкругщой активности при НДС различной зтио-вогш! для определения области возможного применения препарата в клинической практике.

Для осуществления сформулированная цевой вссаедооянпг, били поставлена следующие задачи-

[. Изучить способность клеток костного мозга человека v, норне и при различиях заболеваниях продуцировать пг-.осгр х, »налогичнне Ш1.

2. Исследовать влияние препарата в сисягеа® in vitro на ¡гункциональную активность клеток юшунной система человека. î норме и при гм м у I i од cS и ц 1 ггп к ;? состояниях.

3. Провести изучение клинической тя^егтипиости и шмунокорригиругщей активности препарата:

• при заболеваниям, сопрововдаюцихся нарушениями [редукции клетками костного воога Ш;

- при транэиторных вторив них ЩС;

. 6

- пр»'-хронических вторичных НДС.

'4-Провести анализ результатов оценки ммнунокоррегируицей активности, препарата при различных патологических процесс«, развивающихся на фоне приобретенных и вровденнак

НДС.

• Научнзд новиэца. Проведены клинические испытания нового 1 шш^нокоррегирушцег© препарата ииелопид, изучено его илкяиис на параметра иммунной системы при различная патоаогнческих процессах и показана его клиническая а^евтивность при транэиториах и хронических вторичных ВДС.

Разработаны о&цие принципы инмунокоррегирушцей терапии препзрзтои хиеюпид.

■Осиооние положения ваносиине-на эадиту:

- применение шололнда у пациентов с траэиторныы рторичкыы ¡ГДС приводи к восстановление показателей-вимунной системы и наест выра&етшй клинический эффезгг, аакжтющився в уменьшении количества инфекционных редогненин;

- применение препарата у пациентов с хроническими инфекционными заболеваниями, протекающими на фоне НДС, приводит х увеличении продолжительности периодов ремиссии;

- результаты проведенная клинических испытаний ыиедопид; у больных с острым миелобластньш и лиыфобластними вариантами лейкоза свидетельствуит о той, что применение препарата до курса химиотерапии приводит к кратковременному снижению баасгоза в костном иоаго. Уменьшение количества бластов в хостнои иозге облегчает выход больных в ремиссию в процессе курса гхоследувщей химиотерапии;

J3

Результат», полученные при изучении биологической активности миелопида показали, что он полноегья сохранна иммуностимулирующую активность НП.

Z. Z. Оценхя эндогенной продукции 1'Л я чувствнтеяыгсспг клеток тшунной система человека к обработке ыкевопщсек in vi tro.

Существенна! элементом в обосновании целесообразности применения любого иимуномодулятора в качестве имиунокоррегирующего средства в комплексной терапии конкретной патологии является с одной сторонн оценка уровня эго эндогенной продукции, а с другой стороны -1увствительность клеток иммунной системы х иену: Аналогичная задача встала и при подготовке клинических, (спитаний миелопида. Необходимо было установить, :иитезирувт ли !Я1 клетки костного мозга чеяовека и, еслй :интеэирут\ какова их биологическая активность при. |аэличних заболеваниях, а такзе чувствительны ли клетки ымунной системы человека с различными видай я ЩС к ействгаз миелопида-.

Для изучения эндогенной продуции МП прн различных атологичесяих состояниях использовали клетки костного оэга, полученняе от клинически здоровых доноров (6 гбюлпдений), больнах миелобластннн (8) и лкнфобластннм ' О) вариантами острого лейкоза, лимфосаркоион (11 >, ^еломной болезнью (14) и агаммаглобудянеипей (Ш).

Полученнме результата свидетельствуют о том, что МП, н-ггезяруенне клетками костного мозга кяинически эдорових >дей, обладают гахой se способность!) увеличивать 1ЛИчество антитолопродуцентоп в продуктивную фазу

ишукноро ответа, аак и аналогичное вещества, выделенные кэ супернатантов культур клеток других в вдов ылехошггазднх. При тестировании биологической активности Ш, выделенные супернатантов культур клеток костного ыозга лвдей, обезьян, мнаей,, телят и свиней количество антнтелопродуцентое увеличивалось в среднем в 2,! раза. В то и& вреан Ш, ридежжкцо из суперпатанта культур клеток костного ыозга большк ыиегсыпои боаеэньв, увеличивали количество зслето:;, сшгтеэирушцих антитела а 2,а раза (Рис. 3).

Рисунас 3. Биологическая екгквяость МП в норме и при различных заболеваниях.

. Кизф. стшгупяцш

з- 7'

1 2 3 4 5 5

1 - клинически здоровые доноры,- 2 - острый миелобластный лейкоз; 3 - острый лимфсбластный лейкоз; 4 - лимфосаркома; 5 -ннеломная болезнь; 6 -1 вгвммаглобулннемия.

Алалогичньш способом полученные ЦП из супернатантов культур клеток костного мозга больных с агамыаглобудинеыией в остри межобластным лейкозом практически не оказывали стимулирующего влияния на количество антителопродуцентов. ЫП, полученные из супернатантов культур клеток костного ыоэга больных острил лиифобластнвы лейкозом.и

j ь

гкмфосзряомой, били более актнвнтан, чем ЦП, получении«» из сулернатантоп культур костного ноэга болышх острим штелобласгнкм лейкозон, но нечес астионини, чел № из костного мозга клинически здоропмх доноров (Рис. 3).

TaitiM образом, установлено, что клетки костного »/.озга человека, так яе как н клетки костного мозга других видов млекопитающих синтезирует вещества, оказзвагядне стимулирующее влияние на знтитезообразование в продуктивную базу ишунного ответа. При это» активность их при различная заболеваниях нохет значительно различаться, что, по-видиноиу, связано с изменениями в клеточном составе костного мозга, которне характерны для этих заболеваний.

В серии эксперииентов по оценке чувствителыюсгя клеток иммунной системы человека к обработке ииелопвдо« in vitro изучали его действие на спонтаннуо и индуцированную мнтогеиом лаконоса (1JJ1) продукции иммуноглобулинов трех классов Н, G и А мононуклеарали периферической кроан клинически здоровых донороп и пациентов с вторячнныи КДС. Известно, что одним из факторов, прияодедгг к развитию вторичного НДС, являются хурургнгческие операции (Соловьев ¡> соавт., 1987) поэтому для этих экспериментов использовали иононукяеари, выделенные из периферической лрови больная на 7-8 сутки после хирургической коррекции пороков сердца в условиях искусственного кровообращения.

Били подобраны две дозы иитогена (0,05 и 0,125 мкг/нл), которые при стимуляции ими клетоя периферической крови клинически здоровых лвдей индуцировали среднюю и более вчеокуо продукцию иммуноглобулинов, соответственно.-

Ыоноиукдеарй, выделенные из периферической кровп клинически здоровы доноров и пациентов с вторичным НДС, индуцировании» хирургической операцией, стимулировали нитогенсм лаконоса в указанных выше дозах в присутствии иля отсутствии миелопида (Таблице 1).

Таблица 1. Влияние миеаопида на синтез иммуноглобулинов, индуцированный мнтагеном лаконоса.

Условия эксперимента

Здоровые (доноры)

после хирургическое операции

Синтез К) о культурах, о кспорыо не добавляли мивлопнд

ШяАЩМЖЛЯ (0.(13 мкг/мл) (6,125 мкг/мл)

СЙЛЬ мкг/мл) С0.125 мкг/мл)

Пролщиця

<й,05 икг/мл) (0,125 м<г/мл)

1223+/—13Я

97В+/-1Ш 1228+/-171

Шй-»/-175 Н97+-/-175

2Э2+/-87

1216 (-/-256 1245+/-263

249Э+/-601 1433+/-135

Синтез 1д в культурах, в которые добавляли шепота

(0705 мкг/мл) 1257+/-169 2В2+/-9В

(0,125 мкг/мл) 1&7Ч+/-19В 3189У-517

№ватш-М

(В,85 мкг/мл) (0,125 мкг/мл)

ЩВШ2Ш-Ш (И,85 мкг/мл) (0,125 мкг/мл)

Ю99+/-2Е0 1172+/-15В

1547*/-155 1766+/-211

1337+/-279 1570+/-331

2783+/-035 2491+/-£01

Полученные результаты свидетельствует о том, что добаыаенне ыиелопида к стимулированным ыитогеноы лаконоса клеткам клинически здоровых доноров приводит к увеличению продукции только иануноглобудинов класса А. Продукция

иммуноглобулинов двух другие классов но изменяется. При ■чем, этот эффект наблюдался только при использовании субоптимальной концентрации шггогена. Добавление Ийелоявда к клеткам больных, внделенннх на 7-8 сутки после хирургической операции, приводило к увеличению продукция двух классов иммуноглобулинов ?,! и А, но в культурах, стимулированных оптимальной дозой шггогена.

Та к км образом, н клетки клинически здоровых доноров и пациентов с ИДС оказались чувегвйтельню,ш к обработке препаратом in vitro. При пен, если рассматривать индукциэ синтеза иммуноглобулинов митогеном лаконоса у иононуквеароэ периферической крови как модель гуморального нмнунИого ответа, то моино говорить о существовании достаточно большого сходства в действии миелопида на активированное антигеном клетки иммунной системы животных й активированные митогеном - у человека. II в том, и в другой случае действий препарата проявляется в увеличение количества продуцируемых иммуноглобулинов.

В результате проведенных исследований стало, ясно, тго клетки костного ыоэга человека продуцируют вецесТва, сходные по своим свойствам с НП, вня&ленннйи у другие видои млекопитасщих, и, что клетки иммунной система человека чувствительны к обработке in vitro препаратом, основным денствусщиы компонентом которого являются МП, сгаггезируеше клетками костного ыоэга свиней.

2 .?. Результат первой фазы клинических испытаний препарата шелопхд,

В период проведения первой фазы клинических испытаний 5ы.па оценена дамунофармакогогическая активность препарата

при транэоторнах и хронических иныунодефицитнцх заболеваниях к при острых икелобластных н лимфобластных ' вараантак лейкозов.

При ■транэиторнцх НДС препарат применяли в качестве профилактического средства для предупреждения инфекционных осаожцсшш. Для проведения этих исследований была выбрана группа больных, жоторш проводилась хирургическая коррекция сердечной -недостаточности в усювнях искусственного кровообращения. Известно, что цеднкааентозная подготовка таккя нациештоа * операции, а такие прииененке аппарата £?гхуссгаш»юго кровообращения к нарьоза в период ее проь-адешш оказывают угне-тажицао действие на ¡аа:уннус ссстсиу и. в результате, ¡шфе;сцшшше ослогнеиия -оотречгавтся при этих операциях в 5-10 раз чаще, чем при другая случаях {Соловьев и еоавт., 1987).- Развитие вторичного НДС и ввсовая частота ослогненнй в период после оп-г.-рацкц ссидотезьсгвует о необходимости включения в гоыпхелснуг> торапиа огня больных ншуиокорригкруюцих срздсгр. ' -

Препарат №>шегшви у 75 бодыых после различных операций на сердца в условиях искусственного кровообращения (протезирование аортального хх&пана, протезирование митрального клапана, вальвуло и акнулонластика митрального клапана, двойное протезирование, репротеэироаание кктрааьшго ц аортального клапана).

В связи с тел., что посЕСопорациотшо ослогнсния кн'-*в1-ционной природа развдо&отсн, глатши образом, ца 4-12 сутки после операции курс ипелопщл начинали на следующие суп:;; поссэ ¡ме.

И)

Препарат применяли в комплексной терапии совместно с ' антибиотиками по следувпей схеме: по 5 нг (Я ампулк), внутривенно или подкожно, на 1-е, 3-й, 4-о н 5-е сутки после операции.

Чтобм оценить лечебный зфйегг циелопида, сравнмнигп группу больных, которим вводился препарат, с группой сравнения (59 пациентов), в которуя вопля бодышо с аналогичной патологией и полузавяиэ теку» ле терапии, ййл пациенты опытной гругата, но без икцунокоррекцни.

Оценку иммунного статуса проводили дс операций■и на 1-Я и 7-8 сутки после операции, т.е. до курса препарата я носзе него.

Относительное количество различных типов осложнений в группе больных, получавших препарат, п группы сравнения представлено п Таблице

Таблица 2. Относительное количество резлич»ых типов осложнений в рзнннй послеоперационный период

Тип осложнения ' Группэ больных. Группа Р получавших миелпляд сравнения

Пневмонии <1,7 %

Нагноения послеоперационной раны В,!

Асептический

меднвстенит К?,5? %

Гнойный

медиастенит -1,6 %

Обострение

ревматизма 19,? %

М,7 Я >0,В5

11,6 % <0,35

1,7 % >0,05

0,1 % >0,05

17,5 Я <3,85

Сравнительный анализ инфекционных осложнений в юс.лсоперациошшй период показал, что общее количество

ккфакцвдшшк осложнений после применения препарата уменьшилась с 34,6 % до 17,4 %. При этом количество пневмоний снизилось в три раэа, а гнойних ыедиастоннтов в 5,3 раэа. В.то ье аремя, у больных, воторие получали авелопкд возросло относительное количество асептических коднасх-онитоз. По-видтгоыу, в результате применения препарата, сшкается вероятность развития гнойного нодвзстевкта и он приобретает аселт.'лескяи характер.

Заушение 'клинического состояния болъних в результате пропедонкя 1«куно;;оррекцш1 сопровс.здадесь значьтельнш» уекорашен процессов восстановлении показателей пиуунитета. Посие прякеноиия препарата у пациентов набзшдаии на 7-8 сускв восстановление относительного количества т- л В-гяыфоцитоз в периферической крови, увеличение количества клеток, эгелрессирущия иаркери 0КТ4, и, в результате, увеличение регуляторного индекса, а такхе увеличение способности икифоцптов продуцировать ИЛ 2, после стимуляции 4ТА, При этом, у больных, получавших препарат, уменьшалось спонтанное вкяпчение цЗ-тимндина в ыононуклеары периферической хрозн и способность давать пролитеративную реакции на 4>Гк. Статистически различавшиеся (Р<6.65) параметра иммунного статуса больных, получавших ииелолид, и группа сравнения представлен на Рис.4.

Таким ебраэоа, ьведеиие ыиелопида в комплексную терапии пациентов после операций на сердце в условиях искусственного -кровообращения приводило к коррекции вторичного послеоперационного юшунодефнцитного состояния и имело вирахеннай клинический эффект, заключавшийся в

уноньгаешш случаев развития в ранний послеоперационный период пневмоний и медиостенитоэ.

Рисунок 4. Влияние миелопнда на показатели иммунного ствтуса в ранний послеоперационным период. т-кпв-?кп я— клетки ОКТ4 +

га »а аз

10 15

®га.

<2

Индуцированный ИП

сивтеэ Iд 15 19й я д е

29 43 ел срп (х1в03)

1 2

1 - больные, получавиие препарат;

2 - группа сравнении.

о X.

Клинические испытания миелопнда при хронических пневмониях, протекавщих на фоне вторичной иммунологической недостаточности проводили на базе Отделения хронических патологических процессов, обусловленных нарушением иммунитета, Института иммунологии Минздрава СССР (зав.отделением - профессор А.М.Борисова, лечащий врач -А.В.Глазко).

Препарат был применен у 74 больнах. Нэ ник у 10 человек заболевание протекало на фоне агаинаглсбудннемии, у 5 -селективного дефицита 1дА„ а у остаяышх 'лжзлпсь частаз обострении бронхо-легочного процесса, зготорно

сопрововдалмсь вторичными нарушениями иммунитета, Возраст больных был от 15 до 58 лет.

Все больные, получавшие ниелопид, обследованы клинически и иммунодогически.

Значительной непосредственной динамики клинических симптомов на фоне приема ыиелопида отмечено не было. Однако при анализе продолжительности ремиссий в группах болышх, получавших препарат, и в группе сравнения било отмечено увеличение периодов реииссип у пациентов, получаваих препарат (Рис.5). При этом, наиболее вираненний эффект наблюдали у больных, получавших препарат б период обострения.

Рисунок 5. Продолжительность ремисий у больных хроничаской пневмонией до и после курсе миелопидо.

78 68 5в 40

зе-20 10-

( ..... I до курса мяелоипяа

СшИЗ нослг курса мяелохщда

продоезогггльпос i ь рекою сея: 1-1 месяц; 2 - 2-3 мег.пцг; 3-5-6 месяпев-. 4 - 7 и более месяцев.

Изменение клинического состояния больннх после применение ииелопида сопровоададось определенной динамикой некоторых показателей иммунного сгатуса (Таблица 3}. При чем, изменения параметров иммунного статуса бкли наиболее

(

выр^ены спустя 10 суток после окончания хурса препарата.

Так, отмечено увеличение почти в 2.5 раза абсодвтного

мличества В-лимфоцитов в периферической крови, некоторое .

увеличение процентного содергання клеток, экспрессирувщик

СКТЗ н 0КТ4 детерминанты. Других изменений в показателях

гччунного статуса зарегистрировано но било.

Теблица 3. Динамика показателей иммунного статуса больных урпничзскои пневмонией после курса миелопнда.

Показатели Период, в который проводилось обследование

иммунного ----------------------------------------------

статуса До курса Сразу после Через !П дней

окончания курса после окончания курса

е-рск 0.91 +/ -ЯВ9 а.31-/-а.12 0.(36+/-0.1

н-ро;с Э.11+/- -ав1 0.19+/-В.03 0.27+/-О.1

октз 58.6+/- -2А 56.3+/-2.8 В5.6+/-2.9

ОКТ-1 Зб.З!-/- 1.В 34.7+/-2.В 11+/-2.2

октв 25.5+/- 2.1 13.9+/-1.6 24.5+/-1.9

пкв? 9А*/- -1.8 11.1+/-1.0 11.2+/-3 А

сктч/октв 1.5+ / -0.13 1.9+/-0.16 Ш+/-В.2

1дА 34?+/- 28ЕЗ+/-20 342+/-19

|!]М 22В+/- -31 255+/-36 /-¿.а

!03 122В+/ -ВО 1204+/-ВО 1324+/-75

В то де время .анализ корреляционных связен цезду параметр-Анн крупного статуса боаьних показал, что под действием препарата меняется количество связей п их структура. Так, у больных, получавпих препарат, восстанавливались корреляционные связи неггду количеством лейкоцитов и относительной содержанием Т-хлетох н количеством лейкоцитов и уровнем фагоцитарной активности . нейтро-филов. Обе эти связи яарактернц для параметров клинически здоровых индивидуумов. Кроме этого, под дойствм-м препарата разрушались корреляционное связи.

характерные для больных пневмонией и отсутствующие у здоровых людей. В -частности, у больных пневмонией выявлена отрицательная корреляционная связь мезаду относительный содержанием Т-лимфоцитов, несущих рецепторы для Гс-фрагыентов 1дС {субпопуляция Т-лимфоцитов, обогащенная клетками обладающими супрессорной активностью) и концентрацией 1дА в сыворотке крови. Разрушение этой связи после терапии миелопидом говорит о том, что, воэионно, действие препарата сводится к подавлению активности Т клеток-супрессоров и увеличению, тем самым, количества иммуноглобулинов класса А в сыворотке крови. Нозно предположить, что при хронической пневмонии терапевтический эффект препарата связан не только с увеличением абсолютного количества В-лимфоцитов в периферической крови и некоторым увеличением процентного содержания клеток, экспрессирующих ОКТЗ и ОКТ4 детерминанты, но и с подавлением активности Т клеток-супрессоров. Способность миелопида оказывать такое действие была неоднократно продемонстрирована на различных экспериментальных системах (Михайлова и соавт., 1976; Петров, Михайлова, 1987; Сорокин, 1986).

В третью группу больных, у которых было проведено клиническое изучение иммунокоррегируюцей активности миелопида в период проведения Первой фазы клинических исрпвгтаний вошли пациенты с миело- и лимфоблаепшми вариантами острого лейкоза.

Известно, что острые ииело- и лиыфобластные лейкоза относятся к геиобластоэлм - группе опухолей, при которой «остный мозг повсеместно заселен опухолевыми клетками. Появление лейкоэных клеток в костном ыо.'зге приводит к

угнетении нормального кроветворения, в том числе подавляется и воспроизводство клеток, обеспечивающих функционирование системы иммунитета. С другой стороны, основнки видом терапии при острых лейкозах является использование цитостатических препаратов, которые такяс •ларпду с опухолевыни клетками подавляет пролиферации иориалышх клеток, в то числе и иимунокоипетентных, что тоне приводит к значительному ослаблению способности системы иммунитета противостоять патогенным и условно-патогенннм возбудителям бактериальной и вирусной природы.

Наличие 'шмунодефицитпого состояния, а также, как ysee отмечалось ранее, дефицита по продукции МП явилось основанием для проведения клинического изучения ыиелопида при циелобластнои и лимфобластном вариантах лейкоза.

Клинические испытания препарата на базе отделения детской гематологии (зав. отделение профессор Л.А.Махонова, лечащий врач D.A.Балакирев).

Всего препарат бил применен у 55 детей в возрасте от 1,5 до 13 лет. Из них 39 больных с острым лимфобластныц дейкозон и 16 больных с острым миелобластныы лейкозом. Зв детей били в остром периоде заболевания, 17 - в периоде ремиссии.

В ходе клинических испытаний препарата проводилась оценка клинического состояния больных, а также морфологическое исследование и количественная оценка клеток костного мозга н периферической крови и их чувствительности in vitro к препарату. Оценка ншунного статуса вхыэчала: определение процентного содержания Т и В лимфоцитов, Т теофиллнн-чувсгвктельннх клеток, концентраций

иниуноглобулннов классов А, И и G в сыворотке крови i¡ процента фагоцитирующих клеток.

Установлено, что однократное внутрикостное и внутримкиечиое введение препарата приводит к гематологическому эффекту, который заключается в уменьшении процента бластов d костном ыоэге (Рис.6)

Рисунок 6. Влияние миелопидв на процент бластов в костном нчзге бальных острым миелоблвстньм лейкозом.

ог /о

1 - до курса ьжекопзда

2 - после курса мкелошэдо

12

Этот эффект сохранялся в течение 2-4 суток, после чего бластоэ в костном мозге возвращался к исходному уровни. Повторное введение препарата не усиливало достигнутого эффекта, состояние больного стабилизировалось, что являлось основание« для начала специфической противоопухолевой терапии. Положительный терапевтический эффект в данном случае заключался в том, что больные начинали полутать курс х1миотсрапии при более низком уровне бластоэа в костном ыозге и, в результате, легче внходили в ремиссию.

После окончания курса химиотерапии препарат вводился повторно. Аналогичная схема била использована при применении препарата о рсииссин ниелопид вводился детям и

.гостний ноэг двухкратно в период ремиссии до начала и после окончания курса реиндукции.

П процессе клинического изучения препарата било замечено, что у детей, получавших препарат отсутствуют нн^екцпеннш осложнения в периоде ремиссии. Это наблюдение поилось основанием применения препарата у болышх детей с острим лейкозом, у которых в 1 острой периоде присоединялась пневмония (8 больных) и сепсис (3 больных). Поиченение препарата у данной группы болышх способствовало о'оиее бистро'ну вцздоравлешго при данных заболеваниях, что отражено в соответствующих историях болезней. Было такзе отмечено, что при внутримыиечном введении препарата в дозе 8 СС03 г на кг.массы тела при лейкопении периферической крови 1шеет иесто более быстрое восстановление числа лейкоцитов в периферической крови, чем в группе сравнения и отсутствие у этой группы больных присоединения шггеркуррешчшх инфекций в период индукции ремиссии.

Из 25 больных с острым линфобластныи лейкозом, получавших ииелопид в 1 остром периоде, рениссия била достигнута у 23 больных и продоляается у 20 больных, сроки наблюдения от 8 месяцев до 4 лет. Из 12 больных с острим миелобластньш лейкозом, получавших препарат в 1 остром периоде, реаиссия была достигнута только у 5 больных, 3 из которых находятся в ремиссии до настоящего времени и продолжают получать миелопид. Сроки наблпдения от 1 года до 3 лет.

Оценку иммунного статуса пациентов проводили до и сразу зе после применения препарата. Необходимо отметить, что полученные результаты свидетельствуют о наличие у больных

острый лейкозом в первом острой периоде и в ремиссии ймыунодефнцитного состояния. При чем в первом остром периоде он, по-видимому, носит более глубокий характер, чек в периоде ремиссии. Так, впервнй острый период по сравнению с нормой значительно снижено количество Т- и Б-клеток, а такяе Т теофиллин резистентных лимфоцитов и, в меньшей степени, концетрация В то время как в период ремиссии,

снияено количество В-клеток и в большей степени, чеы в первом остром периоде, концентрация 1дЗ.

Таблица 6.1. Показатели иммунного статусе у больных острыми миелоблэстньм и лимфобластным варивнтвми лейкоза в различные периоды заболевения.

Ремиссия

Показатели иммунного статуса

Первый острый период

Т-клетки В-клетки Т-теоф.рсз. 1дА, мгЖ 1дМ, мг% (дО, мг£ Фогоцитоз

41.7+/-6 7.3+/-0.9 34,5 (-/-5,1 109+/-23.4 И6.9+/-13.6 1027,3+/-94,4 42,1+/-11,1

61.2+/-3.2

10.3+/-1.5

50,<1+/-3,1

70.9+/-П?

65;3+/-16.3

725.7+/-В6.3

23.6+/-7.3

При оценке показателей иммунитета после применения препарата в первый острый период было зарегистрировано только статистически достоверное увеличение процента В-клеток в периферической крови {12,6+/-1,2), другие показатели остались без изменений.

В то не время, суммируя результаты исследования костного мозга и периферической кропи у детей, страдающих острым хешгоэои, ^огно сделать заключение, что послр применения

препарата о костном мозге уменьшается количество .'.келоаариоцитов в 2-1Э раз; снижается абсолютное и относительное количество бластних клеток; увеличивает ¡от.пество лимфоцитов на фоне развития нейтропенни в периферической крови при внутрикостном введении я -:зеличиваегся :содичество нейтрофилов при внутримышечном ведении.

Ташы образом, результаты, клинических испытаний препарата инедопид при острой ииелобластном н лиыфобдастном лейкозе, свидетельствуют о той, что применение его перед :;урсои хкииотерапилв виде одной внутрикостной и одной внутримниечной инъекции приводит к снижению бластоэа в постном ыозге, что облегчает выход пациентов в ремиссию в результате применения хиинотерапевтнческих препаратов. Кроне этого, включение ниелопида в комплексную терапию этих вариантов острах лейкозов предотвращало развитие у пациентов инфекционных ослсзнений.

2.3. Результата клинических испытаний ииелопада при НДС различной этиологии.

При проведении второй расширенной фазы клинических испытаний препарат применялся хак профилактическое и лечебное средство у больных, оперированных по поводу ииомы матки, у пациентов с переломами лицевых костей, черепно-мозговой травмой и ожогами. Кроме этого, препарат был испытан как лечебное средство при НДС, сопровождающих такие инфекционные заболевания как дизентерия, туберкулез, бруцелеэ, брюшной тиф, офгадьыогерпес и хронический вирусный гепатит Наряду с этиы препарат применяли при заболеваниях центральной нервной системы, протекающих с

наруиениями в функционировании иммунной системы и при врожденных ИДС.

В результате применения препарата как профилактического средства у больных, оперированных по поводу ыиомы натки, количество послеоперациоинных ослогнений таких как, культит, абцесс дугласова пространства, подапоневротическнй абсцесс и др.,уменьшилось приблизительно в 2,2 раза. Уменьшение количества воспалительных осложнений было тагсзе зарегистрировано у пациентов с переломами лицевых костей к черепно-мозговой травмой. Так, в контрольной группе больных с переломами лицевых костей количество воспалительных осложнений составило 27,5%, а в группе больных, которые получали миелопид - 6,ОХ, т.е. количество ослогнений уменьшилось почти в 4 раза. Особенно выраженный клинический эффект от применения ыиелопида бал выявлен у виц с сопутствующими заболеваниями. Так, в контрольной группе из 14 больных с сопутствупщиыи заболеваниями воспалительные осложнения были отмечены у 11 пациентов (78,6%), а в группе больных, получавших миелопид из 36 человек осложнения били отмечены лишь в б случаях (16,7%).

Полученные результаты подтвердили заключение о целесообразности применения препарата миелопид в качестве профилактического средства пр(( транэиторных иммунодефицитах для предупреждения развития различных инфекционных и воспалительных осложнений в период временного снижения эффективности функционирования иммунной системы, вызванного различными видами неблагоприятных воздействуй.на организм.

Во время проведения второй фазы клинических испытаний болмзую группу составили пациента с различными

заболеваниями бактериальной и вирусной природа. Включение препарата в комплексную терапию таких заболеваний как дизентерия, туберкуаез, бруцеллез, брюшной тиф, позволяло чаще добиваться полной клинической ремиссии. Так, например, применение препарата у больных брешним тифом и паратифами предотвращало развитие осложнений и обострений, снимало симптоматику обцей интоксикации и в среднем уменьшало длительность пребывания больного на койке на 15 дней. В то

время, применение препарата у больных с инфекционными заболеваниями вирусной природа (офтальмогерпес, гепатит) не оказнвало существенного влияния на клиническое состояние пациентов.

Так зе препарат оказался мало эффективным при врожденных ЗДС обусловленных проявлением грубых генетических дефектов, таких как отсутствие В"клеток и иммуноглобулинов. В то хе время, у 14 из 32 детей с многолетней отягощенностьо инфекционного анамнеза в значительной части на фоне стойких генетических нарушений Т-снстемы иммунитета било зарегистрировано снижение частоты и тяжести инфекционных заболеваний.

Особую группу пациентов при проведении второй фазы клинических испытаний составили больные с патологическими процессами в центральной нервной системе, сопровождающиеся нарушениями функционирования иммунной системы (рассеянный склероз, отдаленные последствия ненингоэнцефалита). Положительный клинический эффект от применения ииелопида у пациентов с рассеянным склерозом наблюдали преимущественно у больных с доброкачественным течением, легкой и умеренной степенью тяяеети, без выраженных изменений в иммунном и

гормональном статусе до применения препарата в с положительной динамикой показателей иммунного и гормонального статуса во время и после курса миелопида. ПолоЕительннй клинический эффект заключался в уиеньЕенкп шаткости, парезов нижних конечностей, нарушений чувствительности и тазовых нарушений. Полученные результата позволяют сделать заключение о той, что ыиелопкд показан больным рассеянным склерозен при стабильном течение заболевания или в период его обострения, когда ок способствует поддерсанга равновесия иегду иммунопатологическим процессом в ЦКС и реакцией на. него периферического иммунитета. Иенее эффективен препарат у тяхелих больных, где крайне затруднены реабилитациониие возможности, котя в некоторых случаях н здесь наблвдадп пологительнын эффект. Не оправдано назначение препарать г период обострения заболевания, при явных признаках гиперактивации иммунной системы.

Таким образом, результаты проведенных клинических испытаний препарата ыиелопид позволяют сделать заключение, что препарат могет быть использован как профилактическое средство для предотвращения инфекционных и воспалительных осложнений при вторичная траэиторных НДС и как лече&ное средство при хронических ВДС и при ВДС, сопровождающих острые инфекционные эабопевания бактериальной природа.При иронических ВДС препарат целесооСорязно применять ь период обострения заболевания с целью увеличение периодов последующей ремиссии. Вхгвчение миелопида в комплексную терапию осгрцх инфекционных адболев.и'ий бакт<=ри иыч>л природ» позволяет снизить вероятность р»цил«пог' и ускорить

ггроцесс внэдоравления при наличии тенденции к затяжному характеру заболевания.

Анализ изменений параметров иммунной системы у больных, :/олучавяих ииелопид, свидетельствуют о том, что при малмчшлс заболеваниях он оказавает действие на различные .ягепья иммунитета, по-видимому, с одной стороны влияя на пооцесся воспроизводства клеток иммунной системы в костном •озге, что приводит к увеличению их количества в .:егшЭерЕгческоп крови, а с другой сторона стимулируя их /лнкционаяьиуо активность.

Таким образом, в процессе выполнения диссертационной ;абота бяли проведены клинические испытания нового атдунокоррегнрующего средства при НДС различной этиологии, заявлены показатели иммунитета, которые восстанавливаются после применения препарата и оценина его клиническая "тфектноность. Полученные результаты свидетельствуют о том, что ииелопид является высокоэффективным иммунокоррегирующим ; средством, которое мозет быть использовано в комплексной терапии различных заболеваний, протекающих на фоне вторичных ИДС.

Выводы .

1.В результате проведенных клинических испытаний препарата ииелопид установлено, что он является эффективным лекарственным средством, которое мояет быть использовано для коррекции вторичных НДС. Получено разрешение Фарыкоиитета СССР на клиническое применение препарата у взрослых и"детей в качестве профилактического средства при транзиторных иммунодефкцкт&х и в качестве лечебного средства при хронйческих инфекционных заболеваниях, гнойно-

септических процессах, а так ге в комплексной терапии острых лейкозов.

2.Установлено, что препарат обладает способностью у пациентов со вторичными ВДС восстанавливать относительное и абсолютное количество Т- и В-лимфоцитов и повышать их функциональную активность. При этой, реакция со стороны В-системн иммунитета носит отсроченный характер по сравнены) с Т-систеиой.

3.Показано, что включение препарата в комплексную терапию транэиторных ВДС, вызванных хирургической, механической, термической и другими видами травм, приводит к уменьшению в 2-2,5 раза количества инфекционных осложнений.

4.Применение препарата в период обострения хронических инфекционных заболеваний позволяет в несколько раз увеличить периоды последующей ремиссии.

5.При проведении клинических испытаний миелопида у пациентов с воспалительными и гнойно-септическими процессами, протекающими на фоне НДС,, было установлено, что он восстанавливает функциональную активность Т- и В-систем иммунитета, что приводит к уменьшению длительности пребывания пациентов в клинике.

©.Результаты, полученные в процессе изучения иммунофармакологической активности миелопида при острых инфекционных заболеваниях бактериальной природы свидетельствуют о том, что включение препарата в комплеснуо терапию таких заболеваний позволяет Снизить вероятность рецидивов и ускорить процесс выэдоравления.

7.Клинические испятания препарата пря первичных ИДС свидетельствуют о той, что он мало эффективен при врозденншс дефектах В-звена иммунитета, но возможно, монет быть использован при некоторых врояденных дефектах Т-эвена.

0.С помощью методов системного анализа доказана принципиальная возмозность отбора больных, на основание данных о состояние иммунной системы, для иммунокоррекции с ,помощью циелопида.

9.Результаты клинических испытаний позволяют . рекомендовать препарат для использования в клинике при различных видах вторичных НДС. При транзиторных ¡шмуиодефицитах его целесообразно использовать в качестве профилактического средства, при хронических - в период обострения инфекционного процесса. В период ремиссии применение препарата не целесообразно, так как это ыозет вызвать обострение заболевания.

Список основных научных работ, опубликованных по теме диссерт'апии.

1-Б-активин и имыунокоррекцня. // Хирургия, 1584, Н 11, -с.41 (Соавторы: Р.В.Петров, А.А.Михайлова),

2.Метод оценки связывания В-активина лимфоцитами периферической крови человека в норме и патологии. //В кн: Современные методы иммунотерапии. Тезисы докладов научной конференции, Ташкент, 1984, с.281 (Соавторы Л.А.Стрелков, Т.А.Луканидина).

3.Оценка биологической активности стимулятора антитедспродуцентов (В-активина) из'костного мозга человека при некоторых лимфопролиферативных заболеваниях. // В кн:

Роль иммунной системы в патогенезе лимфопролиферативных заболеваний. Тезисы докладов Всесоюзной конференции, Новосибирск, 1984).

4.Стимулятор антителопродуцентов, выделенный из сулернатантов культур клеток костного мозга человека в норме и при различных заболеваниях. //

Болл. экспериментальной биологии и медицины. 1984, II 8. с.213 (Соавторы: Р.В.Петров. Б.С.Саипбаев, А.К.Голенкоп).

5.Исследование иммунологических свойств стимулятора антителопродуцентов, выделенного из супернатантов культур клеток костного мозга человека. //В кн: Сорбционнпе погоди детоксикацш; н нм.мунокоррекции в хирургии, 1984, Ташкент, Медицина, с.232 (Соавтор б.С.Саипбасв).

6.The correction oi the immunodeficiency conditionc bu myelopeptydeo. // Abotracte VIII European immunology neeting, 1987. p.165 (Соавторы: О.А.Нолдогулов,

E К.Новикова).

7.Separation and purification of myelopeptideo by large ocale chromatography. //VI Dannie Symposium on chromatography, 1987, p.231 (Соавторы: D.О.Сергеев, С.В.Кибза).

О.К обоснованно применения миелопида при аппендикулярных перитонитах. // В кн: Актуальные вопроси иммунологии и иммунопатологии в медицине и курортологии. Теэион докладов конференции, 1987. Пятигорск, с.149 (Соавторы: В.К.Нефедов, А.И.Поляк, А.В Тумасов).

9.Изучение иммуиокоррегирующих свойств препарата !.>-активин при некоторых вторичных иммунодефицитнкх заболеваниях. // В мь Актуальные пробленн иммунологии

аыунодефицитн и мшунокоррекция, 1987, Владивосток, с.147 {Соавтора: О.А.Иолдогулов, В.П.Зуев, Н.К.Рязанов).

lO.Tonardo a general ianiunological severity Index [jatiento with chronic pneunonia. It В mi: Cellular .echanioaa in infection immunity, 1988, Eloinore, Denmark ¿Соавторн: О.И.Скадько, А.И.Борисова, А.В.Глаэко, 'К 11-Кузнецов).

11.Экспериментальное обоснование иммунокоррегирущей -"ерапии при острой дизетерни. // В кн: Актуальные вопроси .лучения кищечных инфекций. Сборник научных трудов, 1888, Нальчик, с.16 (Соавторы: А. Ы .Земскоэ, Г.Г.Солоыахин, ).Г. Прптулина).

12.Клиническое использование ииелопнда. П В кн: Итоги "!ауви и техники, сер.Иммунология, Структура и функция

::>.!),«унорегуляторнцх пептидов, 1908, т.26, стр.192.

13.Disturbances in imnurie status in patiento with chronic pneuoonia and ita treatment with myelopidum: using aetiiodB of the index of the severity of a disease. // International conference Quantitative methods in pneumology, Abstracts, 1989, p.112 (Соавторы: О.И.Скалысо, A.M.Борисова, А.В.Глаэко, В.й.Кузнецов).

14.Влияние миелопеггтидов на синтез ДКК и суммарного белка в клетках костного, ыоэга и периферической крови при зстроы лейкозе. // йыыунология, 1989, Н 1, стр.74 [Соавторы: Л.А.Стрелков, Е.Р.Нвануикин, А.А.Михайлова).

15.Исследование изменений иммунного статуса при фонической пневмонии н^ ее лечении миелопидом с шольэованием ыногоиерного корреляционного н регрессионного

анализа. Г! Иммунология, 1989, К 5, стр.45 (Соавтора: Й.М.Скалько, Л.М.Борисова, А.В.Глаэко, В.И.Кузнецов).

16.The иве of peptide imaune modulators for correction of radiation immune deficiencies. // International eympoeium problems of iBinunopharnacology, 1999, Тбилиси, стр.39 (Соавторы: И.В.Орадовская, В.С.Смирнова).

17.MijelopjdUB: the effect of immunostimulatuon in patients after surgical correction of acqured heart disease// International eympoeiun problens of

i mitiunopharmacology, 1990, Тбилиси, стр.61 (Соавторн: Р.Я.Власенко, А.Д.Потеяина).

18.Миелогшд: использование для коррекции вторкчних иммунодефицитнах состояний. Н В кн: Реабилитация иммуиноп система, 1990, Цхалтубо, стр.18 (Соавторы: Е.М.Новикова, С.В.Кибэа, С.В.Скопцова).

19.Клинико-иммунологическое иоследование и иммунотерапия при инфекционных заболеваниях. //В кн:Реабилитация иммунной системы, 199Q, Цхадтубо, стр.187'.

(Соавторы:Н.К.Ласрединов, Б.В.Пинегин, С.А.Ильинский, А.В.Симонова, В.В.Климов).

20.Миелопид: иммунокорректируицая активность при переломах лицевых костей и травматическом остеомиелите. // Иммунология, 5991, Н 1, стр.44 (Соавторы: 11.К.Рязанов,

О.А.Молдокулов, Р.Я.Власенхо).

21.Клинике-иммунологическая оценка эффективности применения миелопида при бруцеллезе. П Иммунология, 1991, К 1. стр.47 (Соавтора- Е.С.Белоэеров, Н.К.Шаймардаяов).

22.Нммунокоррегирувщее действие миелопида у больных после операций на сердце в условиях искусственного