Автореферат и диссертация по медицине (14.00.36) на тему:Оценка иммуномодулирующих свойств препарата миелопид у кардиохирургических и травматических больных

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РСФСР

ВТОРОЙ МОСКОВСКИЙ ОРДЕНА ЛЕНИНА ГОСУДАРСТВЕННЫЙ МЕДИЦИНСКИЙ ИНСТИТУТ имени Н. И. ПИРОГОВА

На правах рукописи

МОЛДОКУЛОВ ОСКОНБЕК АСПЕКОВИЧ

УДК 616.71-018.46

ОЦЕНКА ИММУНОМОДУЛИРУЮЩИХ СВОЙСТВ ПРЕПАРАТА МИЕЛОПИД У КАРДИОХИРУРГИЧЕСКИХ И ТРАВМАТИЧЕСКИХ

БОЛЬНЫХ

14.00.36 — Аллергология, иммунология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Москва 1990

Работа выполнена в Научно-исследовательском Институте физико-химической медицины МЗ РСШСР

Научный руководитель: 1 доктор медицинских наук, профессор Петрова И.В.

Официальные оппоненты: доктор медицинских наук С.С.Василейокий доктор медицинских наук Н.М.Мазина

Ведущая организация - Институт иммунологии МЗ СССР

Защита состоится "_"_ 1990 года

в _ часов на заседании специализированного ученого

совета 2-го Московского ордена Бенина государственного медицинского института им. Н.И.Еирогова (К. 084-1406) по адресу : .117437, г. Москва, ул. Островитянова, I.

С диссерта ,ией можно ознакомиться в библиотеке 2-го МОЛГШ

с

им. Н.И.Пирогова

Автореферат разослан "__ 1990 г.

• Ученый секретарь специализированного совета доцент

Т. Й. Кузнецова

ij'ibi' . ь T{ 'V ' iîoH'iг .biioîi :>""■ ,>лемой с-'П'-^' ; .ioî; медииичг 1

vv "ног.о'1':'- является "о..... сре,г.''"': г cnocooot направленно?! koj•••

" '-и m-i/^юлеСипшт- ■•■•romwt4 Наиболее перспективном пип-:-'" ' fo..... исистьзоЕанж- л1уткспригирующи:с препаратов, созгпш-

•...... 'оиз к;«:-yiKj'jsi"'-м орны; вэиеств эндогенного прсистог^о-

йзк^стно, что яти г' '!'?ства обладают широкие спектром им?!.--''ологгческих свойств "гвечао? за созрояакке и 3«<^epsHu»w,v ï • ¡-чмунокомпетентикх клеток, участвуют в рр-гулящи межклеточг'Ь": г'.-оимодействнй, регулируют процессы развития иммунного ответ:: ;Лрион В.Я. и др., ГС87, Петров P.D. и др., 1988, Therra Я., 1У89). Включение иммунокорригирующих препаратов в курс терапевтических мзролрияти?) больным с приобретенными иммунодефицитннми состояниями вызывает нормализацию функционирования иммунной сис-15®, повышает эффективность лечения, улучшает клиническое ' состояния больных (Лопухин Ю.'Л. и да., 1987, Trainin IT. et ,1983).

Одним из таких препаратов является ШЕЛОШЩ, созданный на основе миелопептидов, стнмулируюирк антителогенез в продуктивнув ¡'«азу иммунного ответа. Приоритет открытия миелопептидов принад-лекит группе отечественных исследователей под руководством ака-грчика Петрова Р.З. В ш ■ т>ящзе время хорошо изучены основные "кмунобиологические и фг -^ко-химяческие свойства шелопептидов, ;- :зряботпна концепция механизма действия этих веществ (Иихайло-- Л,А.. :£83, 1935, Пет;:-"в Р.В, и др., 1936,. Степаненко P.'î. и

Iе"' I9S3). Провог1'.:я исследования по изучению ш/муно-. г свойств миегслшда у больных с различными иммуноде-

■■■"лнкм состояниями. ûj--iaKo, до настоящего времени не изучат

п

--ч-.тви'!. ппепггата киелопид у кардиохирургнческих и трзгкатичес-¡'ардиохир^ргические больные относятся к груг.пэ тяжажнк

Ослиных,.у которых в ранние послосперациоипш сроки развивается острый иммунодефицит : резко снижается уровень лимфоцитов в периферической крови, снижается функциональная активность иымуно-хомпетентных клеток, нарушаются факторы неспецифической защити организма (Петрова И.В., 1984). Эти нарушения происходят в результате комплекса повреждающих факторов : использования аппарата искусственного кровообращения во время операции, наркоза, профилактической антибиотикотсрапии.

Аналогичные, по менее выраженные нарушения иммунитета наблюдаются у болыиых с нессложпенньши и осложненными переломами нижней челюсти. Существует предположение о роли нарушений иммунитета в развитии хронического остеомиелита и нагноения косиной раны в посттравматическом периоде (Зуев Е.П., 1983, 1986).

Лечение этих групп больных традиционными терапевтическими и хирургическими методами не всегда аффективно, и в ряде случаев не устраняет развития воспалительных осложнений. В связи с этим, возникает необходимость применения иммуностимулирующих препаратов для восстановления функций имь-унной системы.

Анализ иммунобиологических свойств препарата миелопид позволяет использовать его в качестве иммупотерапевтического средства у кардиохирургических и травматических больных. Однако, до настоящего времени не имеется сведений об иммуномодулирующих свойствах препарата миелопид у этих групп больных, не определена клинико-иммунологическая эффективность действия препарата.

ЦКДЬ И ЗАДАЧ!: ШИЩОШШ. Целью настоящей работы явилось изучение иммунного статуса кардиохирургических и травматических больных в ранние послеоперационные и посттравматические сроки, оценка иммуномодулирующих свойств нового препарата миелопид определение клинико-иммунологической эффективности препарата

у этих групп больных.

В работе были поставлены следующие задачи:

1. Оценить иммунным статус у кардиохирургических больных к больных с пеосложнонными. и осложненными переломами нижней челости в послеоперационный и посттравматический периоды, до и после восстановительного лечения.

2. Оценить действие препарата на Т-клеточное звено иммунитета, на пролиферативную активность лимфоцитов периферической крови в реакции бласттрансфэрмации на ФГА, на активность ростовых Г-ьлеточных факторов.

3. Определить клишшо-нммунологическую эффективность действия препарата миелопид у кардиохирургических и травматических больных.

НАУЧНАЯ НОВИЗНА. Впервые использован новый иммунологический препарат миелопид у кардиохирургических больных и у больных с неосложнешм'и и осложненными переломами нижней челюсти.

Установлено, что миелопид стимулирует нак В-, так и Т-клеточные звенья иммунной системы больных, повышает уровень Т- и В-лимфоцитов в периферической крови, нормализует субпо-пуляционный состав лимфоцитов, чувствительных и резистентных к теофиллину, экспрессирущих 0НТ4 и ОШВ маркеры. Новыми являются данные о способности шелопида повышать активность ростовых Т-клеточных факторов у кардиохирургических больнгч в послеоперационном периоде.

Обнаружены некоторые клинические положительные эффекты, обусловленные действием миелопида.

Полученные, данные расширяют наши представления сб ямцуно-модулирующих свойствах миелопида у больных со втс-яячгаши иыму-

. ui-ЛМ ИММуШГ-- i:!i ЛИМ-ГЛЦИТЫ Пбьжузричео .• крови проявлю,L,T

•.оаипзнную 4j .ул'вительноигь к препарат • тесте активного ;:озеткоибразс-:а>мя.

ПРАЮШйСКЙЯ ЗЕ1ЧИЮСТЬ. Ъыяаяеш-. ■ наруиапк: т э заслич-;¿bc звеньях и ¡лунной системы больнчх - ,;анше послеоперационные ¡i посттравматические сроки создают предпосылки для отбора 'ч'ольшх с целью проведения иь'^'нотерапин миелопидом.

Разработанный набор тестов оценки иммунного статуса боль-аьк, а также подход в определении кяинико-ишунслогической еффективности действия ый- лопида могу-? быть нспользоаднй е аналогичных исследованиях с применением препарата миелопид в качестве иымунокоррмгирующего средства.

Результаты исследования свидетельствуют о возможности использования нового иммунологического препарата миелогшд у зардиохирургических большх и у больных с иеосложпеншш: и осложненными переломами шалей челюсти для коррекции наруше-:üíü в шлиуншй. системе.

В целом, лолученше результаты настоящего исследования иызст практическое значение для клинической и зкеперим-знталь-BOii иммунологии.

ВНЦЦРиШ В ПРАКТИКУ. Препарат киеяовид используется при лечении больных с травмами шишей чаллсти в отделении челвстно-лицевой хирургии I городской клинической больницы (г. Москва), при лечении кардиохирургических больних в отделении кардиохирургии Всесоюзного научного центра хирургии (г. Москва).

Изходы, использованные в работе, применяются в лабора-

г ори и иммунопатологии НИИ фюико-химгческой медицины МЗ РСйСР, в эк-.периментальио-технологичсской лаборатории Института иммунологии МЗ СССР.

АПРОБАЦИЯ МАТЕРИАЛОВ ДОСС НОТАЦИИ. Материалы диссертации доложены и обсукдеиы на Всесоюзной конференции "Актуальные вопроса иммунологии : Иммунодефициту и иммунокоррекция" (1987 г., г. Владивосток), 8 ¿вропейском совещании иммунологов (1987 г., г. Загреб, СШРЮ), конференции молодых ученых НИИ Ш МЗ РСЗСР (1987 г., г. Москва), конференции молодых ученых Института физиологии и экспериментальной патологии высокогорья АН Киргизской ССР (1989 г., г. £рунзе), конференции молодых ученых 2-го МОЛГМИ им. Н.И.Иирогова (1989 г., г. Москва).

ПУБЛИКАЦИИ. По результатам диссертации опубликовано 4 печатные работы, их них 2 статьи в сборниках и трудах научных конференций.

ОБЪЕМ И СТРУКТУРА ДЩЩРТАЦИИ. Диссертационная работа изложена на стр. машинописного текста, состоит из введения, 3 глав : "Обзор литературы", "Материалы и методы", "Результаты исследований", обсуждения полученных результатов и выводов. Диссертация иллюстрирована рисункаш и таблицами, содержит источников литературы, из которых отечественных и

иностранных.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

I. .Материалы и методы исследования.

Объектом исследования служили мононуклеарные клетки 0ЕЕ) периферической крови, полученной из локтевой вены большое а здоровых доноров. Всего обследовано 184 человека» из яте 56

бодошх с переломай! нижней челюсти, 4? больных с травматический остеомиелитом, 61 кардиохирургическнх большх, 20 здоровых допоров.

Выделение 1.ШК из езшзной крови производили фракционированием на одноступенчатом градиенте Фикод-верографшш по методу Б О Y и II (1968 г.).

Определение количества Т- и В-лиыфоцнт "jb проводили согласно методическим рекомендациям "Оценка субпопуляции Т-лиыфоцитов : Т-супрессоры и Т-помо^шки", разработанные кафедрой и отделом иммунологии 2-го UOJiFlvHi им. Н.И.Пирогова (1935 г.).

Определение количества субпопудяций 'Г-лиыфсцптов проводили в лаборатории клинической иммунологии ЫЗ СССР с использованием ыоноклональных антител, субиопуляцин лпыфоц.гов, чувствительные и резистентные к теофиялину определяли по методу Liwatibul 3 .

Для оценки чувствительности лимфоцитов больных к миелопи» ду испольоовали реакцию активного розеткообразования с предварительной инкубацией лимфоцитов в точение■20-24 часов в присутствии миелопида в стерильных условиях при 37°С в лунках 96-ячеистого »шакшета. После окончания срока инкубации О, I ыл суспензии лимфоцитов с концентрацией 2 млн.кл/мл смешивали с 0,1 мл 1% суспензии эритроцитов барана, центрифугировали в течение 5 мин. при 150 g и подсчитывали количество рооеткообразушдох клеток во влажном мазке.

Концентрацию иммуноглобулинов (класса А, М, G) в сыворотке крови определяли лазерном нефелометре ( Behxing , itpr) с использованием стандартных антисывороток. Для этого, тестируемые сыворотки обследуемых больных разводили в 100 раз физиологическим раствором и 0,1 ыл разведенной сыворотки сыешивалг с 0,2 ыл разведении амсисыворотки. Через час инкубации при ком-

нагнои температуре определяли величину поглощения на нефело-нет^е и полученные данные обсччтывали с помощьо оЧ'авдартной программы на компьютере Хыолетт-Наккард (Великобритания).

Реакцию бласттрансформации проводили следующим образом: выделенные и отмытые MIIK культивировали в среде EPMI 1610, еодер,тощую 10$ эмбриональной телячьей сыворотки, 100. Е^з/мл пенициллина, 100 мкр/мл стрептомицина, 2 мМ Ь-глютамина (ilow ЬаЪ. , Великобритания), в 96-луночных планшетах. Концентрация МШ - I млн/мл. В опытные лунки добавляли 10 мкл разведения 2ГА { Sigisa , ИГЛ), в контрольные лунки добавляли чистую сре,цу. Планшеты помещали в термостат и культивировали при в течение 72 часов. За б часов до окончания срока культивирова-

3

ния в лунки добавляли fr-тншдин, IСлетки осалдали на стекло-волоконныэ фильтры с помощью автоматического сборщика клеток (Plow ЬаЪ. , Великобритания). Посла высушивания, фильтры помещали во флаконы с сцинтилляционной жидкостью и считали удельную радиоактивность на счетчике lntertecbnik-4 (Франция). В работе пользовались гриплетной системой постановки реакции. Все работы, требующие стерильности проводили в стериль-. нон боксе.

Пролиферативный ответ ШК на разные дозы ЗГА оценивали по индексу стимуляции пролиферации в опытных культурах по сравнению с контрольными, а также в абсолютных единицах.

При оценке активности ростовых Т-клеточкых факторов пользовались методикой, разработанной на кафедре иммунологии МВФ 2-го МОЛГШ им. Н.И.Пирогова, используемой в лаборатории аяи-нической иммунологии Института иммунологии МЗ СССР.

Продукцию ро'бтовых факторов определяли следувгрш образом: I мл МНК с концентрацией 2 млн/мл культивировали в стерильна* пробирках в течение 3 часов при 37°С в присутствии £ГА в дозе

¿0 гчкг/нл. Через 3 часа клетки осгоро/кла ссавдали центрифугированием, дважды отмывали от избытка несвязавшегося 'ITA, добавляли I мл подпой среды EPiJI 1640 и культивировали в стерильной пробирке в течение 20 часов при 37°С. По истечении срока культивирования, клетки осаждали, собирали супернатант культуры и хранили при - 2э°С.

Приготовление таст-мшиеней: аналогично стимулировали МШ здоровых доноров, и посла удаления избытка ÜTA, культивировали 20-24 часа в с. зрильных условиях в среде JPM1 1640. После окончания срока культивирования, ШК отмывали, доводили концентрацию до I ылн/ыл, определяли процент жизнеспособных клеток.

Оценка активности ростовых факторов : £ГД.-ак?ивироеанн_е

тест-мишени ШНК) разливали в объеме 100 ык.т по лункам 95-ячеис-

того планшета, добавляли по 50 мкл супернатанта культуры ИНК

больных, и'культивировали в течение 48 часов при 3'?°С. За о часов

ч.

до окончания срока культивирования в лунки добавляли Чьтиыидин, из расчета I шК /лунку. После этого, клетки осаждали на фильтры, с последующим определением удельной радиоактивности.

Актив. )оть ростовых факторов представляли в виде индекса :

кол.имл/г'Ш з "опытн."

ИНДЕКС -----

кол.иь-л/шш в "контроле"

Где "опытн," - опытная культура с супернатантом

"контроль"- культура со средой, вместо супернатанта

Препарат МИШиПИД. Миелопид получали в стандартных запаянных ампулах с указанием N° серии, срока изготовления и концентрации активного вещества по содерасанию белка. Препарат любезно предоставлялся экспериментально-технологической лабораторией:

Институту иммунологии МЗ СССР (зав. лабораторией, к.б.н. Степана г;;о P.II. ).

Мпелопид хранили в ампулах при 4°С.

2. Результаты исследований и обсуждение.

2.1. Иммуномода'лируьщие свойства препарата миелопид у кардиохирургических больных.

В эту группу вошли больные с приобретенными нарушениями клапанного аппарата сердца, прошедаие плановую операцию по протезированию. Известно, что в результате воздесгвия целого комплекса повреждающих факторов, в ранние послеоперационные сроки у них развивается острый иммунодефицит по клеточному типу (Петрова И.В., 1984, Соловьев Г.М. и др., ISU7,Cascorbi н.Р., 1981)..

Группу сравнения составили 32 пациента (I группа), 29 больных прошли курс иммунотерапии шелопидом (2 группа). Курс мие-лопида состоял из 4 инъекций препарата в разовой дозе 6 мг.

Оценка иммунного статуса больных на I и 8 сутки после операции показала снижение количества Т- и &-лимфоцитов (р < 0,05), снижение величины индекса 01СГ4/01СКЗ (р < 0,05) за счет уменьшения количества 0КТ4+ еубпопуляции лимфоцитов. При этом, практически не меняется концентрация иммуноглобулинов классов А,Ь1,8 (табл.1).

Кромз того, мы обнаружили, что на 3 сутки после операций резко снижается функциональная активность лимфоцитов, оцениваемая по пролиферативноыу ответу на ЗГА и по продукций ростовых Т-клеточных факторов (р<0,05), (рисунок I). Пр.; наличии Грубых дефектов функциональной активности лимфоцитов выраяркгз пролиферагивной активности в виде индекса стимуляции пролиферации Представляется неверным, т.к. в результате знезягеяьясо

Таблица I.

Показатели иммунной системы кардиохирургических больных до и после операции.

Показатель До операции После операции

иммунной системы --

I сутки 7 сутки

В лимфоциты ДО 18,43 £ 4,81 12,84 + 2,63й 14,85 + 3,48

Т лимфоциты ,56) 72,6 £ 11,8 58,Сж + 10,7К 56,8 + 12,3

0КТ4+ а) 40,3 + 9,3 31,82 + 5,9* 33,87 + 7,57

окга* №) 23,5 + 6,29 22,98 + 5,13 21,84 + 4,98

0К-4/0КШ 1,75 -г 0,08 1,45 + 0,56* 1,63 т 0,13

А г/л 2,85 + 1,47 2,46 1,1 3,87 + 1,7

Те М г/л ?,46 + 1.7 2,06 + 1,1 3,09 + 1,4

1Е е г/л 14,8 ± 3,1 14,9 + 3,6 14,8 + 3,68

& - достоверность различия показателей до и после операции (р с 0,05)

ИНД. СТИМ. 2

I -

Рисунок I.

Активность ростовых фактороь (а) и пролиферативный ответ лимфоцитов на Ад'А в дозе 5 мкг/мл (б) до и после операции

о

расп./мин*10

б

60

30

12 3 12 3

I- Дрноры 2- До операции 3- I сутки посла операции

снижения уровня фонового включения Н гикидина в контрольных

о

культурах увеличивается величина индекса стимуляции. Г.оэтому, мы пользовались абсолютными единицами измерения - кол.гмп./нин.

К 7-8 суткам после операции указанные показатели иммунного статуса практически не меняются (табл.1).

Представленные результаты иммунологического обследования кардиохирургических "больных, особенно в ранние послеоперационные сроки, позволяют относить птих больных к груше с острым имцунодефицитным состоянием. Возникает опасность развития таких воспалительных осложнений, как пневмония, медиастенит, нагние-ние раны. Традиционные профилактические мероприятия предполагают использование антибиотиков. Однако, у ряда больных этой группы имеется повышенная чувствительность ко многим лекарственным препаратам, антибиотикам, кроме того, некоторые антибиотики могут вызывать подавление иммунитета. В связи с этим, необходимо проводить иммунотерапевтичеекие мероприятия с приме-неием иммуностимулирующих препаратов. В нашем исследовании больные группы 2 прошли курс иммунотерапии миелопидом.

После курса иммунотерапии у больных увеличивается количество В- и Т-лимфоцитов (20,82 + 3,9 и 73,41 4 6,9 %, соответственно, р < 0,05). Кроме того, нормализуется соотношение 0КТ4/ 0КТ8 субпопуляций лимфоцитов, индекс увеличивается до 2,1 +0,2. Количественный анализ этих субпопуляций показывает, что происходит увеличение 0КТ4+ - субпопуляции лимфоцитов (41,68 + 6,1 по сравнению с уровнем 01СГ4+-лимфоцитов у больных группы I.

Наряду с этим, у больных группы 2 повышается фуннционаяь-ная активность лимфоцитов периферической крови. Это проявляется в повышении активности ростовых факторов (рисунок 2), йндекс

стьлуяяции составляет 2,27 + 0,16, что статистически достоверно больше величины этого показателя у больше I группы, на получавши* шелопид - 1,6 + 0,СЬ (р*с0,0о). '¿то свидетельствует о достаточно низкой функциональной активности лимфоцитов, ответственных за продукцию ростовых Т-клетсчних факторов, у больных I группы.

Оценка пролифератипной активности ЫНК з реакции бласттранс-фюрмации на ¿ГА. в дозе 5 мкг/мл, показала отсутствие разницы у больных I и ^ групп (рисунок 2, б}.

ИНД. С' 2

гам.

Рисунок 2

Влияние миелопида на продукции ростовых факторов (а) и пролиферации ий ответ МНК на £ГА в дозе 5 мкг/мл (б).

о

расп/иин*Х0

50

I 2

1 - Сильные I группы

2 - больные, получившие шелопид

Кроме того, определение концентрации сывороточных иммуноглобулинов классов А, и, иву больных 2 группы, показало отсут-

стние достоверных различий по сравнению р. --еличинами этих показателей у больных I группы (4,72 + 1,5 ; 2,02 + 0,0 ; 16,14 + 4,2 г/л, соответственно).

Таким образом, вк^чение киелопнда в курс традиционных лечебных мероприятий больным после операции кардиопластики вызывает стимуляции различных звеньев иммунной системы. Происходит увеличение количества Т- и В-лимфоцитов, нормализуется соотношение субпопуляцн;. Т-лкыфоцитов, ьес.уцих клеточные маркеры, выявляемые ыоноклональшни антителами 01СГ4 и 0^8. Поражается активность ростовых (факторов Т-лимфоцитов. Отсутствие разницы в уровне сывороточных иммуноглобулинов основных классов ( А, М и С ) у больных I и 2 групп, вероятно, обусловлено использованием кровезаменителей в послеоперационный период.

Полученные результаты свидетельствуют о возможность использования препарата миелопид у кардиохирургических больных в качестве иммунокорригирукцего средства.

Действие, шелолида па иммунную систему сопровождались некоторыми полоилтельшии клиническими аффектами. 3 группа больных, не получавших курс ьиелопида, воспалительные осложнения, такие как пневмония, ыедиастенит и нагноение раны, разви-ись в 10 случаях (31,25 %), а во 2 группе больше только н 4 случаях (13,79 %). Гои этом количество обострений ревматического процесса в обеих группах составили 27,57 и 25 %, соответственно. При этом, среди болчшк, получивших курс иммунотерапии ыиело-пидом не зарегистрировало ни одного случая сочеташшх осложнений.

2.2 Имцуномодулирующие свойства препарата миелопид у больных с переломами нижней челюсти.

Обследовано 56 больных с переломами нишей челюсти. 40 больных, не получавших курса иммунотерапии' миелопидом, составили группу 3. 16 больным 4 группы, наряду с традиционными хирургическими и медикаментозными методами лечения, проводили курс иммунотерапии препаратом миелопид. Курс состоял из 3 инъекций ышлопида в разовой дозе 3 мг активного вещества (по белку), инъекции проводились подкожно.

Иммунологическое обследование включало определение Т- и В-лимфоцитов с помощью Е- и ЕАС-роэеткообраэовашя, определения концентрации сыворото«ных иммуноглобулинов основных классов (А, М и 8) и субпопуляций лимфоцитов, резистентных н чувствительных к теофиллину.

В ранние посттравматические сроки (1,2 сутки) у больных обнаруживается снижение уровня Е-РОК (45,1 + 1,1 %), ¿АС-РОК (8,0+ 0,7 %), нарушение соотношения теофиллин-резистентных/ теофиллин-чувствительных лимфоцитов (индекс соотношения 1,1+0,1). У больных 3 группы эти изменения сохранялись вплоть до 7-14 суток наблюдения.

Уровень иммуноглобулинов А, М и 6 сохранялся в пределах нормы и составлял 2,02 + 0,3; 1,18 + 0,16 и 10,7+ 1,72 г/л соответственно.

Полученные данные подтверздают результаты предыдущих исследований, в которых показано, что в ранние доеттравмати- .

ь

ческие сроки у больных с переломами нижней челюсти развивается транэиторный иммунодефицит по клеточному типу (Зуев В.П. и до*, 1981,1986 г.)

- 15 -

По ъшзнию этих авторов, наличие иммунодефицитного состояния у .больны:; с переломами нижней челюсти может способствовать развитию таких воспалительных осложнений, как остеомиелит нижней челюсти и нагноение костной раны.

После курса иммунотерапии у больных 4 групш наблюдали следующие изменения в иммунном статусе : увеличение уровня 3-и ЕГС-РОК (53,1 + 0,97 и 12,3 + 1,5 %, соответственно, р с 0,05), нормализацию соотношени: субпопуляций лимфоцитов, резистентных и чувствительных к теофиллину за счет увеличения уровня т^офил-лин-резистентных Е-РОК (индекс соотношения 1,55 + 0,24, р<0,05), увеличение концентрации иммуноглобулинов класса 8 в сыворотке крови больных (14,75 + 1,1 г/л, р < Ц05). При этом, уровень иммуноглобулинов классов А и У остается практически неизменным (2,19 + 0,21 и 1,5 + 0,24 г/л, соответственно).

Эти изменения в 'и.шунлоы статусе больных сопровождались сокращением количества воспалительных осложнений в посттравматическом периоде. У больных 3 группы такие воспалительные осложнения, как травматический остеомиелит нижней челюсти и нагноение костной раны, встречаются в 19 случаях (47,5 %), а в группе больных, получивших курс миелопида - в 2 случаях (12,5 %).

Таким образом, включение миелопид? в курс традиционных лечебных мероприятий больным с переломами низшей челюсти вызывает нормализацию некоторых показателей иммунной системы, что сопровождается определенными клиническими эффектами - сокращением количества воспалительных осложнений в посттравматический период.

2.3 Иицуномодулиругащие свойства препарата ыиелопид у больных с травматические остеомиелитом.

В эту группу больных вошли лица с диагнозом "травматический остеомиелит", давность которого составляла от 14 дней до I года. Всего на обследовании находилось 47 больных, из них 30 больных составили грушу сравнения (группа 5), 17 больных б группы получили наряду с-традиционными хирургическими и медикаментозными методами лечения курс миелопида. Курс сос- ■ тоял из 5 инъекций препарата, подкожно, в разовой дозе 3 мг активного вещества (по белку).

Выбор этой группы больных обусловлен наличием у них иг<щуяодефицитного состояния, со снижением количества иммуноком-петентных клеток, нарушением продукции иммуноглобулинов основных классов, снижением функциональной активности лимфоцитов, повышенной чувствительностью к антибактериальным препаратам, снижением активности неспецифических факторов защиты (Зуев В.П.» 2982, 1983). Кроме того, при травматическом остеомиелите наблюдается разрушение костного мозга в воспалительном очаге. ; Иммунологическое обследование больных до начала лечения показало снижение уровня Е-РОК и ЕАС-РОН, нарушение соотношения субпопуляций лимфоцитов, резистентных и чувствительных к теофиллину, при нормальном уровне иммуноглобулинов основных классов в сыворотке крови (табл.2).

Необходимо отметить, что сниженные показатели у больных сохраняются на 7 и 14 сутки наблюдения. Традиционные лечебные мероприятия на способствуют восстановлению нарушенных звеньев иммунной системы.

" 1(5 лица 2

Показатели иммунной системы у Зольных с травматическим остеомиелитом в зависимости от сроков лечения.

Показатели До лечения После лечения

иммунного ''' т/тки 14 сутки

статуса

¿-РОК (.%) ¿4С-Р0К {%) Теофиллин резист. ¿-РОК, I т Теофиллин чувст. ¿-РОК, II Ш Индекс 1/11 1в Л г/ч 16 М г/л 6 г/л

48,3 + 2,ГС

8,5 + 1,1х

26,1 + 0,21х

22,1 + 1,14

1,19 + 0,14х'

1,98 + 0,7

1,02 + 0,1 10,08 ± 0,4

45,3 + 3,4 9,4 + 1,4

23.3 £ 1,2

21.4 + 1,12 1,21 + 0,2 1,85 + 0,3 0,84 + 0,4 9,2 + 0,3

35,2 + 2,6 •9,61 + 2,3

22,8 + 1,9

19,1 + 1,6 1,18 + 0,17

I,9 ± 0,1 1,1 + 0,2

II,5 + 0,4

х - достоверность различия показателей, р С 0,05

После курса иммунотерапии у больных 6 группы происходит увеличение следующих показателей иммунитета : увеличивается количество ¿-РОК 164,3 + 1,7, р<0,05), ¿/1С-Р0К (18,0 + 2,2, р<0,05), количество теофшшш-резистентных З-РОК (40,1 + 0,3, р с 0,05), что приводит к нормализации соотношения субпопуляций лимфоцитов, резистентных и чувствительных к теофиллину (индекс соотношения 1,9 + 0,37'. Кроме того, оть^чартся-нако-

торая стимуляция продукции иммуноглобулинов класса 9 (13,23 + 0,52 г/л).

Получешше результаты аналогичны с иымуноыодудирующим действием препарата миелопид у больных с переломами нижней челке™ . ти. В целом, действие миелопида у больных с травматическим остеомиелитом заключается в увеличении уровня Е- и ЕАС-РОК в периферической крови, нормализации клеточных субпопуляций, резистентных и чувствительных к теофиллину, за счет увеличения количества теофиллин-резистентных лимфоцитов. Отмечается стимуляция продукции иммуноглобулинов класса 6.

При оценке клинической эффективности препарата миелопид у травматических больных, пользовались такими критериями, как сроки выздоровления больных, оценка консолидации костных отломков.

Оказалось, что количество рецидивов (развития остеомиелита) в 5 и 6 группах практически одинаково и составляет 4-7 %. Однако, больные этих групп отличаются по срокам временной нетрудоспособности. При наличии консолидации костных отломков, количество дней, проведенных на лечении у больных 5 группы составило 78,3 + 0,95 дней, а у больных 6 группы - 52,8 +.3,0. При отсутствии консолидации костных отломков, эти значения равнялись для больных не прошедших и прошедших курс иммунотерапии, 85,1 + 2,3 и 65,1 + 2,45 дней. Т.е., сроки нетрудоспособности у больных после курса миелопида сокращаются на 20-25.дней. Кроме того, применение миелопида позволило избежать в некоторых слу-

J

чаях специальных хирургичёских вмешательств, связанных с удалением секвестров.

2.4 Оценка'чувствительности МШ травматических больных к миелопиду.

Для оценки чувствительности I.íKíC больных к миелопиду мы использовали метод определения активных розеткообразующих клеток (¿--РОК) по l'/ybran J. (1979). Предварительно MHIÍ культивировали и среде RPiál 1640 и присутствии шолопида. В превари-тельшх экспериментах были определены доза препарата и время совместной инкубации. Оказалось, что при дозе 20 мкг/мл и времени инкубпцни 20-24 часа происходит увеличение количества активных РОК.

При обследовании больных с переломами нижней челюсти и травматическим остеомиелитом было обнаружено, что ыиелопид способен увеличивать количество активных P0IC . Посла проведенного курса иммунотерапии миелопндом у больных ошибается чувствительность к миелопиду и добавление препарата в культуру практически не влияет на уровень активных РОК, (рисунок 3). У больных с переломами шшвй челюсти действие ыизлопида на уровень акти_ного розеткообразованля менее выражено.

Существует предположение, что количество активных РОК коррелирует с количеством активированных Т-лиь;;)оц|.^ов (v/уЪгап J. et ,1903, Olí S.et , 1986). И рецептор к эритроцитам барана, выявляемый с помощью этого .метода, ыоиет быть использован в качестве маркера Т-клзтсч эй активации.

Возможно, что действие миелопида у больных и в системе "ин витро" заключается в стимуляции Т-клеточного звена иммун-пй системы. Эти данные коррелируют с результатам! оценки иммунного статуса больных после курса иммунотерапии миелопидоы.

Таким образом, при проведении иммунотерапевтических ыероп-

аРОК {%)

Рисунок 3

Влияние миелопида на уровень активных РОК у больных с переломами нилшей челюсти (а) и травматическим остеомиелитом (б).

40

20

Т;

; I ! I

12 .12 До лечения После лечения

40

20

1

I ' 2 До лечения

I - Контрольная культура лимфоцитов

I 2 После лечения

2 - Культура лимфоцитов с миэлопидоы в дозе 20 мкг/мл

7-ИД7ЧЙ миешшидоч МЖ пеоязл;-„,л слзличну "¿сгзлггзльнооть у. ггоапарату ыиелопид, "то \о>зт сыть испо льзовако той отборе «гольных о ;шмунодефицитьши .»стояниями - \ "«мунотерапию.

Т. 7 кардисхирургическлх дольних э ранни« .леог.зсационные л соки развивается зсгрсе >уиодефицк'; лод ссс-гояние, котелке проявляется в :<вс£енка количества • < иу/иокс:лггснтшх •слеток, нарушении соотеовошя зубпопуллций Лоцито^, лляпляемых а?Г4 и 0КГ8 моюклональныш а;п?лтеду;.л*, нару-аением пролиферативного отпета ЦНК на ГА, сшдамюи актив-чости ростовых Т-клеточшгх ¿акторов. ? .7 больных с неослояненними л ссложкенкдан ¡т-ерэлелаки нижней челюсти п ранние посттравматические сроил л до лечения наблюдается иммунодефицитнсе состояние, которсо проявляется • в снижении количества й- я -&С-Р0К, нарушении юотношения субпопуляций лимфоцитов, резнстентл: л чувствительных к

ТЛОфИЛЛИНу.

3. Поело курса иммунотерапия ииелегшдоы у хардпехкрургических больных происходит увеличение количества нммунс:сошетентных клеток, нормализация соотношения 01С1/ШХо •-•■е'пепуляций лимфоцитов, повышение функциональной актилне.-л : лимфоцитов.

4. У травматических болынк после курса иммунотерапии миелопн-дом наблюдается увеличение количества ,3- и ЛАС-РОК, нормализация соотношения субпопуляций лимфоцитов, резистентных

и чувствительных к действию теофшшша. о. Клиническая эффективность миелопида у кардиохнрургических больных заключается в снижении количества воспалительных

осложнений vnHeBMOHi-.ii, ыедиастенигоЕ, нагноений ран) до I3S79 %, е V травматических больных ~ в снижении количества воспалительных ослолиений (травматического остеомиелита и нагноений косгннх ран] до 12,5 % ¡; сокращении сроков временной нетрудоспособности больных с травматическим остеомиелитом.

СПИСОК РАБОТs О!ТУБjü 1К0ВАННЫ}. ПО МНЕ ДИССЕРТАЦИИ :

1. Степаненко Р.Ц., Колдокулов O.A., Зуев В.П., Рязанов U.K. Изучение иымунокорригирующих свойств препарата Б-активин при некоторых вторичных иммунодефицитных состояниях //В кн. Актуальные проблемы иммунологии. Иммунодефицита и иммунокор-рзкция. Владивосток, 1987,- С.147-148.

2. Stepanenko R., Moldokulov О., Horikova Е. The correction of tlis ImmunodericierLcy conditions by mye lop ер tides // In : Abstract book oi tlie eight European irairmology meeting. Zagreb, August 30 - September 5, 1987.- P. 1673. Ыолдокулов O.A. Опыт коррекции некоторых вторичных иммуноде-

фицитных состояний препаратом шелопид //ВИНИТИ. Дрпониро-ванные научные работы.-1988.-М.-198. 4. Молдокулов O.A., Потехина А.Д,, Арифулин А.Р., Балашов К.Е. Изучение, иммуностимулирующих свойств препарата миелопид у кардиохирургических больных //В кн. Интерлейкины и другие медиаторы в клинической иммунологии. М., 1989.- С.69-75.