Автореферат и диссертация по медицине (14.00.16) на тему:Метаболический гомеостаз и иммунная реактивность организма в динамике воспаления в тканях пародонта

На правах рукописи

ООЗ166740

Моисеева Елена Геннадьевна

МЕТАБОЛИЧЕСКИЙ ГОМЕОСТАЗ И ИММУННАЯ РЕАКТИВНОСТЬ ОРГАНИЗМА В ДИНАМИКЕ ВОСПАЛЕНИЯ В ТКАНЯХ ПАРОДОНТА (ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ)

14.00.16 - патологическая физиология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени доктора медицинских наук

1 О ДПР 2008

Москва 2008

003166740

Работа выполнена на кафедре общей патологии и патологической физиологии медицинского факультета Российского Университета дружбы народов

Научный консультант- Заел деятель науки РФ

доктор медицинских наук профессор ФРОЛОВ Виктор Алексеевич

Официальные оппоненты Зав кафедрой патофизиологии МГМСУ Заел деятель наук РФ

доктор медицинских наук профессор ВОЛОЖИН Александр Ильич

Зав кафедрой патофизиологии РГМУ чл-корр РАМН доктор

медицинских наук профессор

ПОРЯДИН Геннадий Васильевич

Директор Института клинической патологии РАЕН

доктор медицинских наук профессор

ЯКОВЛЕВ Михаил Юрьевич

Ведущая организация Московская медицинская академия имени И М Сеченова

Защита диссертации состоится «_7_» мая 2008 года в «_13_» часов на заседании специализированного диссертационного совета Д 212 203 06 в Российском Университете дружбы народов по адресу 117198 Москва, ул Миклухо-Маклая, д. 8, медицинский факультет

С диссертацией можно ознакомиться в Научной библиотеке Российского Университета дружбы народов по адресу 117198 Москва, ул Миклухо-Маклая, д 6

Автореферат разослан «¿^» 2008 года.

Ученый секретарь диссертационного совета

доктор медицинских наук, профессор Г.А Дроздова

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность проблемы По данным эпидемиологических исследований в последние годы появилась явная тенденция роста заболеваний пародонта среди населения различных регионов нашей страны и мира [Алимский А В , 2005, Соловьев A M и соавт, 2005, Цепов JIM, 2007, Ebisu S, Nom Y, 2007] Так, по данным ВОЗ, основанным на стоматологическом обследовании населения 53 стран, заболевания пародонта встречаются в 65 - 98% случаев Наибочьшая частота развития патологии пародонта приходится на средний возраст 35 - 45 лет и достигает 65 - 98% Но даже среди молодежи 15-19 лет заболеваемость пародонта встречается у 55 - 99% подростков [Логинова H К, Воложин А И , 1994]

Актуальность проблемы обусловлена также тем обстоятельством, что состояние тканей пародонта является одним из основных факторов, оказывающих влияние на качество и долговечность результатов стоматологического лечения [Kimmel К , 2003]

Воспалительные заболевания в пародонте являются начальным этапом деструктивного процесса, приводящего к потере зубов и нарушению здорового образа жизни, что определяет социальную значимость проблемы [Лемецкэя Т И, 1972, 1998, Грудянов А И 1997, Воложин А И, 1998, Грудянов А И и соавт 2002, 2004, Безрукова И В , 2001, 2002, Цепов Л M, 2007, Weiger R , 1997]

Распространению заболеваний пародонта способствуют многочисленные факторы как местного, так и общего характера, вызывающие воспалительные процессы в мягких тканях десны и снижение иммунной реактивности организма Важным фактором является рост общесоматических заболеваний, таких как диабет, атеросклероз и др , изменяющих метаболические процессы в организме и снижающих кровоснабжение тканей пародонта, что в конечном итоге поиводот к их деструкции [Иванов В С, 1998]

Среди заболеваний пародонта первое место принадлежит хроническому генерализованному пародонтиту Пародонтит в настоящее время понимается как хроническое деструктивное воспалительное заболевание пародонтальных тканей, которое является реакцией на длительное присутствие инфекции, преимущественно анаэробной грамотрицательной микрофлоры Грампегативные анаэробы и их вирулентные факторы вызывают хроническое перманентное воспалительное заболевание с выраженным воспалительно - иммунным компонентом, в значительной степени определяемым индивидуальными и генетическими факторами Это воспалительный деструктивный процесс, захватывающий все ткани пародонта и приводящий в конечном итоге к резорбции костной ткани [Лемецкая Т И, 1996, Грудянов А И 1997, 1998, Иванов В С, 1998, Гаскин Д В, 2006, Straka M , 2002]

Несмотря на отсутствие единой точки зрения на этиологию и патогенез поражений пародонта, общепризнанным является мнение о значении микробного фактора в развитии па-родонтита В подавляющем большинстве случаев хроническому генерализованному паро-донтиту предшествует гингивит различной степени тяжести, охватывающий с возрастом все большее число людей [Балин В Н, 1995, Грудянов А И , 1996, 1998]

Наиболее важным этиологическим фактором при гингивите и пародонтите большинство авторов считают микрофлору зубной бляшки [Цепов Л М , 2000, 2001] Патогенная и условно-патогенная микрофлора полости рта признается одним из ведущих факторов в этиологии воспалительных заболеваний пародонта [Желудева И В , Попова В М , Максимовская Л Н с соавт, 2002, Есаян 3 В , 2005, Дмитриева Л А, 2007] Результаты бактериологических исследований и изучение поддесневого зубного налета свидетельствуют о комплексном составе микрофлоры при заболеваниях пародонта Среди микроорганизмов встречаются различные виды стрептококков, гемолитический стафилококк, трихомонады, фузобактерии, ак-тиномицеты, простейшие и др Кроме того, в пародонтальных карманах обнаруживаются специфические грамотрицательные бактерии, такие как Porphyromonas gingivalis, Prevotella intermedia, Actinobacillus actinomycetemcomitans, Capnocytophags, Bactenodis forsythus, Treponema dentiicola, Veilonella recta [Иванов В С, 1998, Царев В Н с соавт, 2005] До 85% всех микробов являются анаэробами, из которых от 10 до 15 бактерий обладают патогенными свойствами Эти микробы, образующие группу «пародонтопатогенных видов», обладают высокоадгезивными, инвазивными и токсическими свойствами и, продвигаясь под десневой край, повреждают эпителий зубодесневой бороздки [Григорьян А С , 1999, Григорьян А С с соавт, 2002] Важными факторами вирулентности этих микробов являются эндотоксины, являющиеся по своему химическому составу липополисахаридами, которые взаимодействуют с иммуноглобулинами A, G и М и различными компонентами комплемента [Иванов В С, 1998] Экзо - и эндотоксины нарушают клеточный обмен, вызывают альтерацию тканей пародонта, что способствует развитию воспалительной реакции

Развитие и течение воспалительного процесса в пародонте, его генерализация и хро-низация определяются не только и не столько видовым и количественным составом микрофлоры полости рта, сколько состоянием защитных сил самого организма и ответной реакцией иммунной системы

Иммунная реактивность организма играет важную, если не определяющую роль в развитии воспалительных заболеваний пародонта [Herminajeng Е et al, 2001 Hofbauer L С , Heufelder, 2001] Значение системы защиты (врожденного и приобретенного иммунитета)

связано с индукцией провоспалительной экспрессии тканевых цитокинов, активацией хемо-атрактантов и привтечением провоспалительных клеток, с нарушениями локального и системного метаболизма, гемодинамики, иммунологическими и нейрорегуляторными нарушениями и сдвигами микробиоценоза [Yonemura Т 1989, Watanabe К, et al, 1991, Firatn Е . et ai, 1996, Siqueira J F et al, 2001]

Распространенность пародонтта в популяции, сложности при осуществлении профилактики и лечения заболевания, неоднозначность в трактовках основных патогенетических механизмов (взаимозависимых воспалительных, иммунных и метаболических) делает эту проблему чрезвычайно актуальной в медицине

Известно, что среди больных с метаболическими нарушениями (метаболический синдром, диабет, системная красная волчанка) большое распространение имеют воспалительные заболевания пародонталыюго комплекса Пародонт, его структуры являются чувствительными к нропатогенному действию факторов, формирующих проатерогеный спеетр метаболических нарушений Этот аспект отражает взаимозависимое влияние двух важнейших патогенетических механизмов - воспалительного и метаболического [Sasaki Н et al, 2004, Bakhshandeh S et al, 2007, Borges P К et al, 2007]

Патология пзродонта носит, в основном, воспалительный характер и может развиваться под влиянием как местных причин, так и сочетанного действия общих (эндогенных) и местных факторов на фоне изменения реактивности организма, организации иммунного ответа Иммунная система, призванная обеспечивать генетическое постоянство внутренней среды организма, защиту макроорганизма от всевозможных экзогенных и эндогенных патогенов. вследствие разнообразных причин может быть основой формирования хронического воспалительного процесса и метаболических нарушений

Характер изменений иммунной реактивности при различных стадиях пародонтита был изучен многими авторами [Воложин А И , 1994, Воложин А И, Порядин Г В , 2006] Речь при этом шла о нарушении факторов иммунной защиты и изменении иммунной регуляции при развитом пародонтите, который характеризуется не столько воспалительной реакцией, сколько изменениями остеобластов и остеокластов и резорбцией костной ткани [Carayol N et al, 2006, Chappie I L, Milward M R, Dietrich T , 2007] В литературе практически отсутствуют данные о характере воспалительной реакции и иммунной регуляции метаболических изменений на начальном этапе развития пародоксига, когда процесс о!раничен воспалительной реакцией десны и носит местный, локальный характер

Роль системы защиты связана с индукцией провоспалительной экспрессии тканевых цитокинов, активацией хемоатрактантов и привлечением провоспалительных клеток, с нарушениями метаболизма, гемодинамики, иммуночогическими и нейрорегуляторными нарушениями и сдвигами микробиоценоза [Лемецкая ТИ с соавт, 1979, 1983, 1985, 1993, Сал-дусова И В 1997, Кречина Е К, 2000, 2002, Максимовский с соавт, 2003, Уопетига Т 1989, \Vatanabe К,« а1,1991, Инаш Е, й а1,1996, Эциета 1 Б ег а1,2001]

При рассмотрении патогенеза пародонтита ощущается существенный дефицит знаний о генезе и механизмах развития тканевых поражений Лечение и реабилитация больных па-родонтитом представляют значительную трудность

При возникновении гингивита, который является начальным этапом развития пародонтита, ряд авторов обнаружили выраженное ослабление специфических факторов местных защитных реакций полости рта [Максимовский Ю М с соавт, 2003] Тем не менее, местные лечебные воздействия на пораженный пародонгг у таких больных часто малоэффективны [Минкин Л Н, Евглевская Ю П , 1997, Цепов Л М , Николаев А И , 2002]

При стимуляции лимфоцитов бактериями типа V а1са1с5сспсс, полученными от больных с гингивитом или пародонтитом, происходит выделение фактора, ингибирующего миграцию макрофагов (МИФ) Зубная бляшка и отдельные виды бактерий - V акакэсепсе, А у^совиБ, Р пискаШтп, В мЫалтс^ешсиз - способны индуцировать выработку МИФ лимфоцитами лиц с экспериментально вызванным гингивитом и таким образом тормозить или полностью подавлять фагоцитоз [РпаШ Е , е1 а!, 1996, $1чие1га I Р е1 а1, 2001]

На кафедре патологической физиологии РУДН длительное время разрабатывается концепция, согласно которой воспаление, вообще, и субклиническое воспаление, в частности, рассматриваются как общая патофизиологическая основа современной патологии, замыкающая «патогенетические круги» нозологических форм болезней цивилизации

Общность воспаления и проатерогенных нарушений метаболизма с патофизиологической точки зрения вполне естественна, поскольку оба синдрома формируют одни и те же клетки эндотелиальные и гладко-мышечные, фибробласты, моноциты и макрофаги, нейтро-филы, тромбоциты и, в меньшей степени, Т- и В- лимфоциты При воспалении и атеросклерозе адгезию (фиксацию) моноцитов и нейтрофилов на поверхности эндотелия активируют одни и те же белки клеточных взаимодействий интегрины на мембране нейтрофилов и моноцитов, Е-селектин на мембране эндотелия и Р-селектин тромбоцитов При обоих патологических процессах происходит активная инфильтрация (хемотаксис) тканей циркулирующими в крови моноцитами и нейтрофилами В обеих ситуациях активированные нейтрофи-

лы и ткаьевые макрофаги в реакции «респираторного взрыва» усиливают образование су-пероксидрадикалов и активируют перекисше окисление белков и липидов, вызывая альтерацию нормальных тканей [Ilguy М, Ilguy D , Bayirli G , 2007]

Начиная с 1999 г, после публикации ставшей уже хрестоматийной работы R Ross, воспалительная природа атеросктероза признается большинством ученых С тех пор во всех проведенных исследованиях и опубликованных статьях идея о воспалении как суги атеро-склеротического процесса является доминирующей, и она оттеснила на второй план значимость гиперхолестеринемии как фактора атерогенеза. Однако в большинстве опубликованных в последнее время работ тезис о значимости воспаления в патогенезе проатерогенных нарушений метаболизма приобрел декларативный характер, так как каждый автор вкладывает в это понятие свое значение

В течение двух десятилетий исследований периодически появляются сообщения об обнаружении ассоциации между воспалением в тканях пародонта и сердечно-сосудистой патологией Но каков характер и значение этой ассоциации'' Все еще дискутабельным является вопрос об этиологической зависимости воспаления пародонта и ишечнческой болезни сердца (проатерогенный спектр метаболических нарушений) или мозгового инсульта - это причина или стучайное совпадете? Этот же аспект рассматривается и в актуальной современной проблеме - пародоитит (воспаление) и метаболический синдром, пародонтит и величина инфарктной зоны миокарда, субклиническое воспаление и патология печени

В ряде современных эпидемиологических, клинических и экспериментальных исследований получены противоречивые результаты в отношении пародонтита и ишемической болезни сердца (ИБС), что связано с общими дополнительными факторами риска, характерными для этих нозологических форм (старение, мужской пол, социально-экономический статус, курение) Тем не менее, исследования отношений между уровнями антител сыворотки к пародонтопатогенам (Porphyromonas gingivalis, Actinobacillus actinomycetemcomitans) и факторами риска ИБС (проатерогенный липидный профиль) подтверждают эту зависимость [Pussinen Р J et al, 2004, 2005, Carayol N et al, 2006, Chappie IL, Milward M R, Dietrich T, 2007]

По мнению Borges P К et al (2007), хронические инфекции с субклиническим течением (например, пародонтит), могут играть большую роль в развитии атеросклероза, чем считается в настояшее время Снижение частоты сердечно-сосудистых заболеваний на фоне приема статинов обусловлено не только гиполипидемическим, но и противовоспалительным действием этих препаратов

В любом случае речь должна идти об источнике флогогенного (воспалительного) казуального фактора

Микрофлора кишечника, а также «сброс» в кровоток печени липидов при абдоминальном ожирении и метаболических нарушениях, рассматриваются как возможные факторы инициации и прогрессирования провоспалительного статуса организма

Но есть еще одна система Микрофлора полости рта является неотъемлемой частью нашего организма. Количество бактерий в полости рта по числу видов и по содержанию в единице материала конкурирует с желудочно-кишечным трактом, а провоспалительный ци-токиновый спектр при любом типе воспаления может стать инициатором системных нарушений Не вызывает сомнения, что при воспалении пародонта иммунные и метаболические процессы протекают параллельно, и в их основе лежат общие механизмы, связанные с дисбалансом (врожденным и/или приобретенным) между продукцией «провоспалительных» («проостеопоретических») и «антивоспалительных» («антиостеопоретических») цитокинов, а также с соответствующими изменениями активности нейтрофилов и макрофагов как клеток-эффекторов

Таким образом, воспаление как одна из древнейших проблем медицины, а также связанные с ней вопросы реактивности и изменения различных компонентов гомеостаза, включающие и комплекс метаболических изменений, не только не утратила своего значения, но, как показывает изменившаяся структура заболеваемости, приобретает сегодня еще большую актуальность

Цель работы - исследовать в эксперименте общие закономерности метаболических изменений и параметры иммунной реактивности (врожденного и приобретенного иммунитета) при развитии липополисахаридного н иммунокомплексного воспаления в тканях пародонта, определить патофизиологические основания формирования компонентов метаболического синдрома и выявить общие закономерности развития локального воспалительного процесса, формирующие проатерогенный спектр нарушений

Основные задачи исследования

1 Изучить изменения основных метаболических показателей крови (белковый спектр, углеводы, липиды, электролиты) при развитии липополисахаридного и иммунокомплексного (феномен Артюса) воспаления в тканях пародонта

2 Изучить функциональную активность нейтрофилов (провоспалительная и проокси-дантная активация и интенсивность апоптоза) в динамике развития воспаления пародонта различного генеза (липополисахарндная и иммунокомплексная модели)

3 Изучить функциональную активность перитонеальных макрофагов (интенсивность процессов фагоцитоза, хемотаксиса и продукцию активных форм кислорода) в динамике развития воспаления пародонта различного генеза

4 Изучить некоторые параметры функциональной активности Т- хелперов-1 и Т- хел-перов-2 (определение интерферона -у и интерлейкина-4) в динамике развития воспаления пародонта ЛПС и иммунокомплексного генеза

5 Дать сравнительный патофизиологический анализ метаболических к иммунологических изменений в организме при развитии воспаления в тканях пародонта различного генеза

Научная новизна работы заключается в том, что впервые проведено комплексное сравнительное исследование метаболических показателей крови и параметров врожденного и приобретенного иммунитета при двух вилах воспалительной реакции пародонта различного генеза - липополисахаридного и иммунокомплексного (феномен Артюса) Впервые показано, что при обеих моделях патологического процесса развивается воспалительная реакция, характеризующаяся стадийностью, нарушениями липидного метаболизма, проатероген-ным спектром липидного профиля (повышение холестерина, ЛПОНП, триглицеридов) Впервые показано, что развитие ЛПС - зависимого воспаления характеризуется гипоальбу-минемией и гипогликемией на всех исследуемых этапах, а также достоверным повышением ЛДГ и КФК Эта же тенденция воспроизводится в течение развития иммунокомплексного воспаления, что в соединении с вышеотмеченными изменениями липидного спектра может рассматриваться как комштексный метаболический ответ организма на воспалительный процесс

В работе впервые изучено в сравнительном аспекте состояние иммунной реактивности при локальном воспалении пародонта ЛПС и аплершческого генеза. Исследованы функциональные свойства и апоптоз нейтрофилов и показано, что в динамике развития обоих типов воспаления наблюдаются однонаправленные изменения функциональной активности по-линуклеаров — прогрессивное снижение интенсивности апоптоза и повышение генерации активных форм кислорода на протяжении первых 4-х недель воспаления с дальнейшей динамикой к нормализации функциональных характеристик нейтрофилов

Интенсивность фагоцитоза и хемотаксиса макрофагов, их способность к генерации активных форм кислорода также возрастает на протяжении первых 4-х недель воспалительного процесса На 5-й неделе между показателями микробного и аллергического воспаления наблюдаются некоторые различия - при аллергическом воспалении показатели фагоцитоза (кроме «кислородного взрыва») продолжают возрастать, еще более увеличиваясь к 5-й недели

Впервые в динамике воспалительных реакций пародонта различного генеза исследован цитокиновый спектр в аспекте иммунного ответа, зависимого от типа Т- хелперного ответа, который характеризуется повышением содержания у - интерферона и интерлекина -4 на протяжении первых 4-х недель воспаления В последующем показатели гуморального и клеточного иммунитета снижаются при микробном воспалении и продолжают повышаться при феномене Артюса.

Корреляционный анализ показал наличие сильной положительной связи интенсивности фагоцитоза и факторами, обуславливающими эту интенсивность с процессами хемотаксиса и накоплением в макрофагах свободных радикалов кислорода, а также с факторами клеточного и гуморального иммунитета (у - итерфероном и интерлейкином 4), что свидетельствует о единой направленности функциональных изменений иммунной системы при обоих типах воспаления пародонта

Корреляционноый анализа между содержанием у-интерферона и интенсивностью апоптоза показывает наличие сильной достоверной отрицательной связи между данными показателями, что позволяет высказать предположение о том, что у-интерферон и зависимые от него механизмы могут играть роль регулятора апоптоза и дают возможность наметить пути воздействия на эти регуляторные процессы с целью управления активностью апоптоза

Теоретическая и практическая значимость работы. Сформулирована концепция о метаболическом варианте течения воспалительной реакции в тканях пародонта, сопровождаемом проатерогенными нарушениями Совокупность полученных данных и их анализ дают представление о системном характере метаболических и иммунологических изменений в организме при развитии локального воспаления пародонта Полученные результаты показывают, что локальное воспаление пародонта как пипополисах аридного, так и иммуноком-плексного генеза вызывает значительную перестройку иммунной системы организма, что выражается в повышении фагоцитарной активности, увеличении прооксидантной активности и понижении интенсивности апоптоза полинуклеаров Ослабление программируемой клеточной гибели в острый период воспаления пародонта, независимо от его генеза, можно рас-

сматривать как адаптивную и компенсаторную реакцию направленную на поддержание потенциала фагоцитарно-активных клеток Наличие сильной достоверной отрицательной связи между содержанием у - интерферона и интенсивностью апоптоза позволяет высказать предположение о том, что у - интерферон и зависимые от него механизмы могут играть роль регулятора апоптоза и дают возможность наметить пути воздействия на эти регуляторные процессы с целью управления при воспалении активностью процесса программируемой клеточной гибели

Положения, выносимые на защиту.

- Локальное воспаление пародонта липополисахаридного и иммунокомплексного ге-нсза оказывают существенное влияние на метаболический гочеостаз организма, формируя его проатсрогенный спектр

- Локальное воспаление пародонта как липополисахаридного, так и иммунокомплексного генеза вызывает значительную перестройку иммунной системы организма, что выражается в повышении функциональных параметров нейтрофилов и макрофагов, увеличении генерации активных форм ккспорода и хемотаксической активности и понижении интенсивности апоптоза полинуклеаров на протяжении первых 4-х недель воспаления

- Ослабление программируемой клеточной гибели в острый период воспаления пародонта, независимо от генеза воспалительной реакции, можно рассматривать как адаптивную и компенсаторпую реакцию, направленную на реализацию потенциала фагоцитарно-активных клеток

- Уровень концентрации цитокинов у -интерферона и ИЛ-4 при локальном воспалении пародонта увеличивается на протяжении первых 4-х недель процесса, что говорит об однонаправленности изменений параметров клеточного и гуморального иммунитета при воспалительной реакции пародонта различного генеза

- Сильная отрицательная корреляционная связь между содержанием у - интерферона и интенсивностью апоптоза нейтрофилов при обоих типах воспаления свидетельствует об участии клеточных факторов иммунитета в регуляции апоптоза полинуклеаров

- Исследование метаболических показателей крови и функциональной активности нейтрофилов и макрофагов, а также функции Т-хелперов 1-го и 2-го типа (уровень у -интерферона и ИЛ-4 при двух типах воспаления - микробном и иммунокомплексном) свиде-

тельствует о типовых закономерностях изменения гочеостаза и иммунной реактивности организма, независимо от генеза воспалительной реакции

Апробация работы и публикации по теме.

Работа апробирована на Всероссийской научно-практической конференции «Артериальная гипертония в ряду других сердечно - сосудистых факторов риска», Москва, 2002, на Всероссийской научно-практической конференции «Актуальные вопросы артериальной гипертонии», Москва, 2003, на Втором международном симпозиуме «Проблемы ритмов в естествознании», Москва, 2004, на 3 Международной конференции «Болезни цивилизации в аспекте учения В И Вернадского», Москва, 2005, на б Международной научно - практической конференции «Здоровье и образование в 21 веке» Москва, 2005, на 7 Международной научно - практической конференции «Здоровье и образование в 21 веке» Москва, 2006, на 8 Международном Конгрессе «Здоровье и образование в 21 веке концепция болезней цивилизации» Москва 2007, на совместном заседании кафедр общей патологии и патофизиологии и патологической анатомии РУДН, Москва, 2007 год

Публикации По материалам диссертации опубликовано 30 работ, в том числе 10 в рецензируемой печати

Структура диссертации Диссертация состоит из введения, обзора литературы, методической главы, 8-ми глав, в которых изложены результаты собственных исследований, главы обсуждения, выводов и списка литературы Диссертация изложена на 277 страницах машинописного текста, содержит 33 таблицы и 18 рисунков, библиография состоит из 627 источников отечественной и зарубежной литературы

МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Эксперименты были поставлены на 80 самцах кроликов породы «шиншилла», массой 2 5 - 3 кг, из них на 70 животных (по 35 в каждой группе) моделировалось воспаление мягких тканей пародонта липополисахаридного (1-ая группа) и иммунокомплексного или аллергического генеза (2-ая группа, феномен Артюса) Контрольную группу составили 10 кроликов, животным которой вводили в ту же анатомическую область физиологический раствор

Все перечисленные ниже исследования проводились до моделирования воспалительной реакции (норма), затем через 1, 2, 3,4 и 5 недель после развития воспаления Все животные находились в стандартных условиях вивария

Методика моделирования патологического процесса

Группа 1 (ЛПС - воспаление) ЛПС воспаление пародонта моделировали на кроликах путем локального введения ЛПС в ткани десны и зубо-десневого соединения по 50 мкрл ЛПС Escherichia coll, 1 мг/мл каждые 48 часов в течение двух недель После 3-его введения появились признаки воспалительной реакции Исследования проводили еженедельно в периоды 1-5 недель после начала воспаления

Группа 2 (иммунокомплексное воспаление) Состояние аллергического воспаления вызывалось путем моделирования в верхнечелюстной области (десна в области верхних резцов) феномена Артюса - Сахарова, который широко используется для изучения иммунных сдвигов при развитии аллергического воспаления [U Baumann et al, 1999, R Samadfam et al, 2000]

Выбор анатомической области для моделирования воспаления различного генеза быч связан с профессиональными интересами врача - стоматолога, поскольку именно пародонт является областью, подверженной воспалению при пародонтите

Для моделирования феномена Артюса - Сахарова в ткань десны вводилась нормальная пошадиная сыворотка в дозе 0 1 мл/кг через 72 часа в течение двух недель При такой методике после 3-ей инъекции развивалась воспалительная реакция в месте введения сыворотки

Поскольку вирулентность грамотрицательных микробов, составляющих большинство патогенной флоры ротовой почости, связана преимущественно с их липополисахаридами, то мы позволили себе здесь и далее применять термины микробный и липополисахаридный как синонимы и называть данную модель воспаления пародонта ЛПС модель или микробная модель Также как синонимы употреблять термин иммунокомплексный и аллергический, поскольку для воспроизведения данной модели воспаления была использована модификация феномена Артюса

Для выполнения поставленных в работе задач проводилось исспедование клинической картины крови, основных метаболических показателей крови, активности фагоцитоза и интенсивности хемотаксиса пери гениальных макрофагов, интенсивности апоптоза нейтро-филов крови, содержания активных форм кислорода в макрофагах и нейтрофильных лейкоцитах, определяли некоторые иммунные факторы крови (у- интерферон и интерлейкин - 4)

В опытных группах показатели, полученные до начала моделирования воспаления, принимали за контрольные данные, с которыми сравнивались все последующие

Учитывая продолжительность эксперимента, для исключения специфического влияния условий вивария 10 кроликов составили контрольную группу В контрольной группе животным вместо микробных ЛПС и антигена в те же временные периоды и в ту же анатомическую область вводился физиологический раствор (50 мл) с последующим исследованием всех изучаемых показателей Результаты, полученные в контрольной группе, показали, что на протяжении исследования изучаемые показатели не менялись

Методы исследования биохимических показателей

Кровь для исследования биохимических показателей собирали в пробирки с добавлением ЭДТА (1 мг на 1 мл крови) для предотвращения свертывания Плазму отделяли путем центрифугирования цельной крови при температуре +5"С и ускорении до 2500 G

Определение общих липидов проводили спектрофотометрическим методом на спектрофотометре СФ-46 с использованием реактивов фирмы "Laxema"

Количественный анализ содержания в сыворотке крови триглицеридов, холестерина, общего белка, креатинина, мочевины, мочевой кислоты, глюкозы, АЛТ, ACT, КФК, ЛДГ, щелочной и кислой фосфатазы, у-глутаматранспептидазы, амилазы, холинэстеразы, липазы осуществлялся на анализаторе FP-900 фирмы "Labsystems" (Финляндия) с использованием реактивов фирмы "Laxema"

Определение белковых фракций, ЛПВП, ЛПОНП и ЛПНП проводились электрофоре-тическим методом на ацетат-целюлозных пленках Количественную оценку электрофоре-грамм осуществляли на денситометре фирмы "Helena" (Франция)

Электролитный состав сыворотки крови (калий, кальций, натрий, хлор, фтор, магний) оценивали на приборе "Microlte" фирмы 'Копе" (Франция)

Методы исследования апоптоза и респираторного взрыва нейтрофилов и функциональных параметров макрофагов

С целью исследования апоптоза проводили выделение лейкоцитов с последующим их культивированием в среде RPMI-1640 Далее определяли концентрацию клеток и их жизнеспособность Методом проточной цитометрии определяли долю клеток, проницаемых для суправитального красителя пропидиума иодида (процент погибших клеток) После экстракции ДНК и специфичного к ДНК флуоресцентного окрашивания идентифицировали апоптозные клетки как клетки с деградированным хроматином, расположенные в

«субдиплоидном» пике ДНК-гистограммы

Респираторный взрыв нейтрофилов иссчедовали методом хемилюминесценции (Luminometer, 1250, LKB, Швеция) после предварительной активации взрыва с применением формилметионил-лейцил-фенилаланнна

Фагоцитарную активность макрофагов оценивали по их способности к захвату и выведению меченной С14-брюшноткфозной вакцины Исследования проводили в суспензии культуры жизнеспособных псрнтонеальных макрофагов, полученных путем промывания брюшной полости Уровень радиоактивности измеряли на спектрометре (Beckman, США) Результаты выражали в импульсах/ мин / мг белка

Активность хемотаксиса исследовали в суспензии макрофагов в изотоническом растворе хлорида натрия с измерением оптической плотности на фотоэлектрокалориметре (?»=670 нм) Рассчитывали кочичество клеток в брюшной почости (по белку) на каждый данный момент иссчедования Содержание белка выражали в мг в 1 мл клеточной суспензии Определение интенсивности продукции активных форм кислорода в макрофагах проводили методом, основанным на способности нитросинего тетразолия восстанавчиваться кислородными радикалами до диформазана. Окислительную активность макрофагов выражали в единицах оптической плотности на мг белка

Для оценки состояния иммунного статуса проводили исследование содержания интер-лейкина-4 и у - интерферона в сыворотке крови Методом иммуноферментного анализа с использованием коммерческого набора реактивов для иммуноферментного анализа ИЛ-4 и набора реактивов для иммуноферментно1 о анализа у - интерферона («ЦИТОКИН», С -Петербург) были исследованы сыворотки крови контрольных и экспериментальных животных

Статистическая обработка результатов исследования проводилась с помощью статистических программ, разработанных на кафедре патологической физиотогии РУДН За достоверную принималась разность средних при р < 0 05 По специальной программе, также разработанной на кафедре патологической физиологии РУДН, проводился корреляционный анализ Связь считалась сильной при абсолютном значении коэффициента корреляции (г) > 0 7, средней силы - при г = 0 69 - 0 30, слабой - при г < 0 29

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ Клиническое исследование крови кроликов показало увеличение содержания гемоглобина и сегментоядерных нейтрофилов и уменьшение количества лимфоцитов при обоих типах воспаления.

Метаболические изменения в процессе развития воспаления в тканях пародонта

Исследование биохимических показателей крови в динамике липополисахаридного и иммунокомплексного воспаления показало, что достоверные и наиболее регулярные изменения регистрируются в липидном, протеиновом и углеводных спектрах метаболизма

Изучение параметров липидного обмена при воспалитечьной реакции представляет большой научный интерес, обусловленный исследованиями, демонстрирующими участие компонентов воспалительной реакции в патогенетических механизмах развития проатеро-генного статуса плазмы крови Исследованиями последних лет показано, что «патологический» спектр липидного метаболизма связан с развитием в организме воспалительной реакции, и вовлечение в данный процесс сосудистой стенки (атеросклероз, пародонтит или тканевые структуры, вовлеченные в метаболический синдром) является лишь локальным, хотя и манифестирующим патогенетическим механизмом патологического процесса.

В модели ЛПС-зависимого воспаления и иммунокомплексного типа воспалительной реакции развивается воспалительный процесс, характеризующийся стадийностью, нарушениями липидного метаболизма, проатерогенным спектром липидного профиля во все периоды развития ЛПС-зависимого патологического процесса характерно развитие гиперхо-лестеринемии, на 1-й и 3-й неделях повышено содержание ЛПОНП и триглицеридов (таблица 1)

Таблица 1

Метаболический спектр крови при ЛПС-зависимом воспалении

Показатели Сооки исстелова] гая

Контроль 1 неделя 3 недели 5 недель

Холестерин (мМ/л) 0 33 ± 0 06 1 08±02 0.94 ±0 19 102 ±0.2

ЛПВП (мМУл) 0 47 + 0 Об 0 46 ± 0 05 0 36 ± 0 04 0 48 ± 0 06

ЛПНП (мМ/л) 0 33 ±0 08 0 29 ± 0 1 0 22 ± 0 11 0 24 ± 0 08

ЛПОНП (мМ/л) 0 33 ± 0 09 0 62 ±0 09 0.69 ± 0.11 0 46 ± 0 12

Триглицериды (мМ/л 0 67 + 0 18 1.36 ±02 1.51 ±0 25 0 9 ± 0 21

Липаза (УЕ/л) 266 27 + 27 24 183.82 + 11 68 181 09 ± 16 03 168 36 ± 21 43

Альбумины (г/л) 59 04 ±0 8 52 7 ± 0.95 50 9 ± 0 66 56 7 ±0 6

Мочевая кислота (мкМ/л) 1036 + 1 2 5 27 ± 0 56 13 55 ±0 89 13 ±0 77

Примечание здесь и далее жирным шрифтом выделены данные, достоверно отличающиеся от контроля.

Экспериментальное воспроизведение III типа иммунопатологических процессов по Кумбсу и Джелпу (феномен Артюса) также сопровождается гиперхочестеринемией, но менее выраженной (таблица 2)

Таблица 2

Метаболический спектр крови при иммунокомплсксном воспалепин

Показатечи Сроки исследования

Контроль 1 неделя 3 недели 5 недель

Холестерин (мМ/ч) 0 55 ± 0 22 102 ±0.14 0 8 ± 0 12 0 84 ± 0 17

ЛПВП (мМ/л) 0 52 ± 0 06 0 4 ± 0 08 041 ±005 0 43 ± 0 07

ЛПНП (мМ/л) 0 23 ± 0 06 0 15+007 014 ±0 06 0 23 ± 0 1

ЛПОНП (мМ/л) 0 32 ± 0 08 0 87 ± 0 19 0 58 ±0 11 0 4 + 0 05

Триглицериды (мМ/ч) 0 70±0 18 1.9 ±0.41 1 28 ± 0 25 0 89 ± 0 11

Липаза (УЕ ! л) 248 17 ±25 62 156 5 ± 20 96 145.33 ± 17.16 126 67 ±9.93

Альбумины (%) 66 77 + I 08 64 85 ± 1 27 66 25 ± 1 55 67 02+1 18

Мочевая кислота (мкМ 11 17 ± 2 63 4.33 + 0.76 12 5 ± 0 62 12 17 ±0 79

Глюкоза (мМ/л) 7 47 ± 0 47 633 ± 0 J1 5 71 ± 0.3 4 18 ± 0 4

. Холестерин, ЛПОНП и триглицериды достоверно повышены на 1-й недели процесса В остальные сроки проатерогенный профиль липидного спектра достоверно от контроля не отличается

Таким образом, изменения липидного метаболизма при развитии воспалительного процесса в пародоите создают условия для развития проатерогенного статуса

Разчичные воспалительные стимулы, такие, как бактериальные липополисахариды (ЛПС) и провоспалитечьные цитокины, включая и иммуные комплексы, вызывают универсальную индукцию синтеза жирных кислот (ЖК) в печени и развитие триглицеридемии 1 аким образом, развитие ЛПС - воспаления и иммунокомплсксного воспаления характеризуются ростом уровня трнглицерндов (ТГ), липопротеинов очень низкой плотности (ЛПОНП) и тенденцией к снижению уровня липопротеинов высокой плотности (ЛПВП) крови Физиологический смысл роста ЛПОНП, вероятно, заключается в создании первого барьера защиты от бактериальной и вирусной инвазии Это утверждение основано на способности ЛПОНП эффективно связывать и инактивировать бактерии и вирусы [ВеИЬачакю ОК е! а1, 2005] Считается, что катаболизм белков и жиров обеспечивает энергию, поддерживающую острофазовый ответ в печени, дчя более эффективной детокснкации организма Однако существует и другой аспект этого стожного процесса В крови обнаруживается высокий уровень триг-

лицеридов вследствие повышенной секреции печенью липопротеинов, обогащенных тригли-церидами, и ингибирования активности липопротеинлипазы, расщепляющей жиры

Развитие ЛПС- зависимого воспаления характеризуется гипоальбуминемией на всех исследуемых этапах Эта же тенденция воспроизводится в течение развития иммуноком-плексного воспаленя

Представляется важным отметить однотипный характер изменений альбумина, что в соединении с вышеотмеченными изменениями липидного спектра может рассматриваться как комплексный метаболический ответ организма на воспалительный процесс

Роль липидов в возникновении метаболического синдрома, атеросклероза и последующих сердечно-сосудистых заболеваний общеизвестна Напротив, в настоящее время считается, что эти процессы не связаны с какими-либо существенными изменениями в обмене и концентрации альбумина Вместе с тем альбумин играет принципиальную роль в транспорте жирных кислот, а также множества жирорастворимых метаболитов Это позволяет поставить вопрос о возможной связи между обменом альбумина, обменом липидов и развитием метаболических нарушений Существует несколько фактов, которые свидетельствуют в пользу существования такой связи

Альбумин мог бы влиять на обмен липидов как минимум двумя путями Во-пЬрвых, -через перенос жирных кислот Во-вторых, существуют данные о возможности прямого связывания альбумина с липопротеинами и о связывании аполипопротеинов (апо-А, апо-С и апо-Е) с альбумином в крови, то есть о конкуренции между альбумином и липопротеинами за аполипопротеины [ЬаНа Е е1 а1, 2007] В недавно опубликованных работах продемонстрированы железосвязывающие антиоксидантные свойства альбумина (Авакалуа Л « а1,2003) и альбумин - как модулятор клеточного глугатиона, одного из главных антиоксидантов (ХаИа Е е1а1,2007)

Зачимым в этом комплексном метаболическом ответе организма на провоспалитель-ные изменения, вызванные разными патогенетически значимыми для развития пародонтитов механизмами, является и гиперурикемия (рис 1) или повышение уровня мочевой кислоты (более выраженное при ЛПС- зависимом воспалении)

В последнее время накапливается все больше данных о роли мочевой кислоты в развитии сердечно-сосудистых заболеваний, сопоставимой с другими метаболическими факторами риска Обнаружено, что у пациентов с артериальной гипертонией, ИБС, застойной сердечной недостаточностью и/или нарушением почечной функции наблюдается более высокий уровень мочевой кислоты, чем в здоровой популяции Большинство современных исследова-

ний подтверждает роль мочевой кислоты, как фактора риска сердечно-сосудистых заболеваний В нескольких эпидемиологических исследованиях была установлена зависимость между плазменными уровнями мочевой кислоты и сердечно-сосудистой и церебрально-васкулярной патологией, болезнями печени, опухолями и общей смертностью в популяции

группа 1

5 недель

Рис I Динамика содержания мочевой кислоты в сыворотке крови 1 - воспаление, вызванное ЛПС, 2 - феномен Артюса

В динамике процесса (кросскорреляционный анализ всех исследуемых показателей средних значений по срокам процесса и в динамике развития воспаления) наблюдается увеличение абсолютных значений коэффициента корреляции по основным видам обмена, что говорит об усилении «степени жесткости» метаболических систем и снижении их адаптационных возможностей Таким образом, сопоставляя наши данные с клиническими наблюдениями, мы можем сказать, что воспаление в пародонтальных тканях - это местный (локальный) процесс, который оказывает влияние на организм в целом либо при генерализации, либо при хронизации, то есть в том случае, когда первичные саногенетические механизмы истощены, а вторичные, как известно, не всегда могут полноценно обеспечить защиту или компенсацию, поскольку возникают на основе возникших в организме «поломов» [Фролов В А 1966]

Таким образом, когда процесс ещё не генерализовался или не хронизировался, в метаболических процессах могут наблюдаться изменения, которые, хотя и не выходят за рамки нормы или быстро нормализуются, но в то же время свидетельствуют об активном функционировании первичных саногенетических механизмов или их перенапряжении Возможность возникновения таких ситуаций показал проведенный нами кросскорреляционный анализ

При кросскорреляционном анализе показателей липидного обмена по вариантам каждого срока были получены следующие результаты изменений абсолютного значения коэффициента корреляции (таблица 3)

Таблица 3

Динамика абсолютных значений коэффициента корреляции (р) для показателей липидного обмена по срокам исследования

Група/срок Контроль 1 неделя 3 недели 5 недель

ЛПС-воспаление 0 25 ± 0 06 0.45 + 0 09 0.52 ±0.08 0.71 ±0.07

Феномен Артюса 0 43 ± 0 08 0 5 ± 0 08 0 49 ± 0 06 0 45 ± 0 07

Примечание: жирным шрифтом даются коэффициенты, достоверно отличающиеся от контроля

При ЛПС- зависимом воспалении уже через неделю после моделирования наблюдается прогрессивно нарастающее по следующим срокам усиление «степени жёсткости» системы липидных компонентов, то есть адаптационные возможности этой системы в данном случае снижаются Во второй группе (феномен Артюса) наблюдается лишь тенденция к повышению абсолютного значения коэффициента корреляции, то есть система липидных компонентов в данном случае является более адаптируемой, чем в первом случае (по конкретному сроку исследования)

В организме существует сложная констелляция систем срочной и долговременной адаптации, цель которой в условиях патологического процесса «удержать» систему в определенных границах Эта цель при различных вариациях патологического процесса одна (она является неспецифической, «типовой»), а способы ее достижения могут быть различными, связанными с качественными особенностями патологического процесса. Именно этим можно объяснить тот факт, что динамика изменений основных показателей метаболизма (в данном случае - липидного) при двух воспалительных процессах различной этиологии является

сходной (имеются только количественные различия) Это означает, что в обоих случаях происходит восстановление необходимых адаптивных границ, а достигается это восстановление за счёт включения на каждом этапе «своих» механизмов, приводящих в конечном итоге к одному и тому же необходимому для организма эффекту

Апоптоз неГпрофилов и продукция активных форм кислорода в динамике ЛПС и иммунокомнлексного воспаления

Результаты исследования апоптоза нейтрофилов и интенсивности «кислородного взрыва» в динамике воспаления, вызванного микробными липополисахаридами, представленные в таблице 4, показывают, что в течение всего периода наблюдения за кроликами отмечалось достоверное снижение интенсивности генетически детерминированной гибели по-лиморфонуклеаров, причем на протяжении первых 4-х недель воспаления это снижение носило прогрессирующий характер

Таблица 4

Интенсивность апоптоза и «кислородного взрыва» нейтрофиюв в динамике

ЛПС воспаления

Показатели / срок Контроль 1 неделя 2 недели 3 недели 4 недечи 5 недель

Апоптоз нейтрофилов (%) 50 9±0 81 41.1±0.87 37.2±1.3 31.6x0 6 29 7±0,63 35.3±1 49

«Кислородный взрыв» нейтрофилов (усл.ед) 210±10 06 588±20 4 634±19.0 б-'б-ЫЗ 5 726±12 6 642*12.9

В дальнейшем типовое течение патологическою процесса качественно модифицировалось, обеспечивая механизмы обратного развития (ограничения) воспалительной реакции В группах экспериментальных животных с воспалением в период 4 недели наблюдалось статистически достоверное (Р< 0,05), по сравнению с предыдущим сроком, усиление аноптиче-ской активности Средний уровень апоптоза в этой группе (4-х недельное воспаление) равнялся фактически интенсивности апоптоза, характерного для 2-х недельного воспаления

Результаты изучения интенсивности «кислородною взрыва» показали, что при развитии воспалительного процесса, вызванного ЛПС, прогрессивно возрастает образование активных форм кислорода, причем данные каждого последующего измерения достоверно (Р< 0,05) отличались от результатов предыдущего срока, достигая максимального уровня на 4-й недели моделирования процесса (рис 2)

Активный КИСЛОРОД

контроль 1 неделя 2 недели 3 недели 4 недели 5 недель

Рис 2 Динамика показателей «кислородного взрыва» (в уел ед ) в нейтрофилах в динамике ЛПС воспаления пародонта

Итак, при развитии воспалительной реакции в пародонте, вызванной микробными ли-пополисахаридами, активно участвуют гранулоциты, или полиморфноядерные лейкоциты Эти клетки составляют первую линию неспецифической противомикробной защиты Они первыми мобилизуются и направляются в очаг воспаления или инфекции и от возрастания их фагоцитарной активности зависит элиминация возбудителей

Известно, что при оценке роли ПМК в развитии заболеваний пародонта необходимо учитывать факторы, связанные с тем типом воспаления, которое зависит от иммунных комплексов, характерных для воспалительных реакций различного генеза В связи с этим для оценки роли ПМК в патогенетических механизмах развития воспаления пародонта мы также исследовали апоптоз нейтрофилов и интенсивность в них «кислородного взрыва» в динамике иммунокомплексного воспаления (феномен Артюса) Результаты этого исследования представлены в таблице 5

Таблица 5

Интенсивность апоптоза и «кислородного взрыва» нейтрофилов в динамике им-мунокомплексного воспаления пародоита (феномен Артюса)

Показатели / срок Контроль 1 неделя 2 недели 3 недели 4 недели 5 недель

Апоптоз нейтрофилов (%) 52 1±1 70 47 1+0.62 38 8±0.73 33.61±0.84 37.4±1 75 41.74*2 5

«Кислородный взрыв» нейтрофи-лов (уел сд) 202*10 00 588±19 8 632±29.2 668±23 3 582±248 536±15 25

Представленные данные показывают, что в течение первых недель эксперимента отмечалось прогрессирующее снижение интенсивности генетически детерминированной гибели полиморфонуклеаров

Начиная с 4-й недели интенсивность апоптоза начинает повышаться, оставаясь, однако, значительно ниже контрольного Эта динамика сохраняется и на 5-й недели процесса, когда интенсивность апоптоза достоверно продолжает возрастать То есть, в 5-ти недельный период жизнеспособность полиморфонуклеаров достоверно уменьшается, характеризуя меньшие провоспалительные свойства этой популяции фагоцитарных клеток

Образование активных форм кислорода в нейтрофилах при феномене Артюса резко возрастало на 1-й неделе, что было практически идентично таковому при микробном воспалении Затем наблюдается дальнейшее увеличение этого показателя который и на 2-3 неделях достоверно выше данных предыдущих сроков исследования

В дальнейшем данное течение патологического процесса (временные параметры инициации и завершения) качественно изменялись в сроки, одинаковые с качественным изменением интенсивности апоптоза нейтрофилов Как при микробном, так и при иммунокомплексном воспалении на 4-й - 5-й неделях, когда интенсивность апоптоза начинала возрастать, накопление активных форм кислорода в нейтрофилах статистически достоверно уменьшалось

Таким образом, на 4-5-й неделях моделируемых форм воспаления пародонта происходит качествешюс изменение динамики показателей апоптоза и образования активных форм кислорода в нейтрофилах угнегение интенсивности апоптоза сменяется его

усилением, а снижение образования активных форм кислорода - повышением Этот процесс - снижение интенсивности кислородного взрыва, наряду с повышением интенсивности апоптоза, обеспечивает механизмы обратного развития (ограничения) активности воспалительной реакции Счедует отметить, что процесс ограничения воспаления начинается в одни и те же временные сроки, независимо от генеза воспалительной реакции пародонта

Функциональная активность макрофагов в динамике Л ПС и иммунокомплекс-ного воспаления.

Одну из главных ролей в процессе фагоцитоза играют моноциты, которые, придя в очаг воспаления, превращаются в макрофаги, тканевые фагоцитирующие клетки Фагоциты, взаимодействуя с комплексами антиген-антитело, бактериями, активируются, их мембрана становится "липкой", в цитоплазме накапливаются гранучы, наполненные мощными протеазами Возрастают поглощение кислорода и генерация активных форм кислорода (кислородный взрыв), включая перекись водорода и гипохлорит, а также окись азота В дополнение к перечисленным признакам активации, макрофаги начинают выделять в среду мощные медиаторы воспаления (Роккеша 51 е1 а!, 2002, 5те1[г ЯВ а1,2002)

Поэтому одной из задач настоящего исследования было изучение параметров фагоцитарной функции макрофагов при моделировании 2-х типов воспалительной реакции пародонта Результаты исследования параметров фагоцитоза у животных с экспериментальным микробным воспалением при захвате перитонеальными клетками бактериального антигена представлены в таблице 6

Представленные данные показывают, что, начиная с 1-й недели эксперимента, отмечалась нарастающая активация фагоцитоза макрофагами Эта динамика - повышения интенсивности фагоцитоза продолжала сохраняться и в последующие сроки наблюдения у животных с липополисахаридным воспалением пародонта в период 3 и 4 недели показатели интенсивности фагоцитоза статистически достоверно (Р< 0,05) отличались от предыдущих сроков исследования

Таблица б

Интенсивность фагоцитоза, хемотаксиса и «кислородного взрыва» макрофагов в динамике воспаления пародонта, вызванного микробными липополисахаридами

Показатели / срок Контроль 1 неделя 2 недели 3 недели 4 недели 5 недель

Интенсивность фагоцитоза макрофагов (имп/мин/ мг белка) 9424±156 10475*172 11520*203 12084±201 13892±231 12506±209

Интенсивность хемотаксиса макрофагов (мг белка/мл) 0 05±0 001 0 05±0 001 0 06±0.001 0 07±0 001 0 08±0.001 0 07±0 001

«Кислородный взрыв» макрофагов (отн.ед ) 1 4±0 02 1.54±0.02 1.7±0.01 2 04±0 025 2.38±0.05 192±0 05

В дальнейшем указанное течение патологического процесса качественно модифицировалось аналогично описанной выше динамики изменении апогггоза нейтрофилов и активации выработки ими активных кислородных радикалов Прогрессирующее повышение интенсивности фагоцитоза макрофагов, наблюдаемое в течение первых 4-х недель воспаления, сменялось его достоверным снижением (Р< 0,05) (по сравнению с предыдущим сроком) на 5-й недели процесса Подобное изменение динамики фагоцитоза обеспечивает механизмы обратного развития (ограничения) воспалительной реакции

Одним из важных показателей течения воспалительного процесса является интенсивность подвижности фагоцитов (хемотаксис) Именно подвижность макрофагов является одним из механизмов, обуславливающих количество клеток - фагоцитов в очаге воспаления и определяющее в конечном итоге эффективность фагоцитарного процесса

Исследованиями, проведенными на человеке и собаках, показано, что число фагоцитирующих клеток, поступающих в ткани десны, увеличивается при развитии воспалительного процесса (Herold К С , 2004, Pussinen Р J et а!, 2004, 2005, Carayol N et al, 2006) Механизмы этого явления представляют для нас существенный интерес, поскольку, как показали наши исследования (см ниже), при развитии микробного, а также иммунокомплексного воспаления в тканях пародонта наблюдается значительное усиление интенсивности хемотаксиса фагоцитирующих клеток

Данные, представленные в таблице 6, показывают, что при развитии микробного воспаления в пародонте наблюдается возрастание интенсивности хемотаксиса макрофагов Однако изменения хемотаксиса по быстроте развития несколько отстают от усиления фагоци-

тарного ответа макрофагов Так, если на 1-й недели воспалительной реакции интенсивность фагоцитоза достоверно возрастает, то в этот же срок подвижность макрофагов не отличается от контрольных данных и начинает нарастать лишь на 2-й недели процесса.

Это повышение интенсивности хемотаксиса прогрессивно и равномерно (в среднем на 20%) продолжается до 4-й педели включительно, а затем, как и показатели кислородною взрыва нейтрофилов и интенсивности фагоцитоза, начинает снижаться Полученные данные, характеризуя объединенную функцию воспалительных клеток при развитии липополисаха-ридного воспаления пародонта, можно рассматривать как ограничение избыточного скопления лейкоцитов в очаге воспаления

Подобная динамика отмечается не только при исследовании интенсивности хемотаксиса, но и при исследовании образования активных форм кислорода (АФК) макрофагами Представленные данные показывают, что, начиная с 1-й недели микробного воспаления, отмечается увеличение интенсивности «кислородного взрыва» макрофагов, которое сохраняется на протяжении всего периода наблюдения за кроликами с моделированием воспаления липополисахаридного генеза При этом в период 1 - 4 недели отмечалась прогрессирующая активация Окислитечьного метаболизма в макрофагах

В дальнейшем типовое течение воспалительного процесса качественно модифицируется и на 5-й недели воспаления наблюдается достоверное (Р< 0,05) ), по сравнению с предыдущим 4-х недельным сроком, уменьшение синтеза кислородных радикалов

Результаты исследования фагоцитоза перитонеальных клеток в динамике имчуно-комплексного воспаления (феномен Артюса) пародоита представлены в таблице 7

Таблица 7

Интенсивность фагоцитоза, хемотаксиса и «кислородного взрыва» макрофагов в динамике иммунокомплексного воспаления пародонта (феномен Артюса)

Показатели / срок Контроль 1 неделя 2 недели 3 недели 4 недели 5 недель

Интенсивность фаго цитоза макрофагов (имп/мин/ VI белка) 9541*265 10360*259 11680*220 12840*265 13870*3191 14530*482

Интенсивность хемотаксиса макрофа гов (мг белка/мл) 0 046*0 003 0 059*0 003 0 068*0.003 0 076±0 002 0 082*0 004 0 082*0.006

«Кислородный взрыв» макрофагов (отн.ед ) 1 4±0 04 1.49*0.08 1.72*0.026 1.98*0.09 1 93*0 07 1.85*0 03

Представленные данные показывают, что в течение всего периода наблюдения за животными с иммунокомплексной моделью воспаления в тканях пародонта отмечается прогрессирующая активация макрофагального фагоцитоза

Интенсивность фагоцитоза, начиная с 1-й недели воспаления, и далее во все последующие сроки наблюдения была достоверно выше контроля Причем данные каждой последующей недели, за исключением 5-й, достоверно отличались от предыдущего срока На 5-й недели процесса интенсивность фагоцитоза также была выше таковой при наблюдении в срок 4 недели, однако это повышение носило характер тенденции

Динамика интенсивности хемотаксиса макрофагов при аллергическом воспалении имела аналогичную тенденцию на протяжении процесса 1-4 недели наблюдалось прогрессивное повышение этого показателя, несколько более выраженное, чем при воспалении, вызванном микробными липополисахаридами Лишь на 5-й недели после начала воспаления показатели интенсивности хемотаксиса не отличались от предыдущего срока.

Образование активных форм кислорода в макрофагах при развитии воспалительной реакции иммунокомплексного типа возрастало в 1-ю неделю развития воспалительного процесса Затем наблюдалось дальнейшее прогрессивное увеличение этого показателя, который в периоды 2- 3 недели оставался достоверно повышенным как по сравнению с контрольными данными, так и результатами, полученными в острый период (1 неделя)

Так, показатели образования кислородных радикалов для перитонеальных макрофагов экспериментальных животных с иммунокомплексным воспалением (2-х недельный период воспаления) были достоверно выше, чем в группе животных с однонедельным сроком исследования В группе экспериментальных животных с пародонтитом сроком 3 недели наблюдалось статистически достоверное (Р< 0,05) по сравнению с предыдущим сроком дальнейшее увеличение интенсивности кислородного взрыва макрофагов, характеризующий уровень оксидантной активности

Однако на 4-й недели аллергического воспаления, когда другие показатели функциональной активности сохраняются на повышенном уровне, отмечалось достоверное снижение оксидантной активности макрофагов, которая продолжала снижаться и на 5-й недели процесса

Таким образом, интенсивность кислородного взрыва (образование активных форм кислорода) в макрофагах при развитии иммунокомплексной воспалительной реакции пародонта (феномен Артюса) возрастает в первые 3 недели исследования Затем наблюдается сниже-

ние этого показателя, который в период 5 недель достоверно ниже по сравнению с периодом три недепи

Таким образом, исследование фагоцитарной функции макрофагов при двух типах воспаления пародонта - липополисахаридном и иммунокомплексном, выявило общие закономерности изменения фагоцитарной активности, независимо от генеза воспалительной реакции В обоих случаях наблюдается повышение интенсивности фагоцитоза, усиление хемотаксиса и возрастание продукции макрофагами активных форм кислорода При микробном воспалении эти реакции, и, в первую очередь, усиление хемотаксиса, ведущее к значительному повышению эффективности фагоцитоза, обусловлено, как показывают литературные данные, микробными липополисахаридами, которые нами были использованы для моделирования воспалительной реамщи Результаты исследования хемотаксиса во многом подтверждают данные, полученные при анализе интенсивности фагоцитоза, характеризуя объединенную функцию воспалительных клеток и определяя таким образом возможность бочее длительное время сохранять фагоцитарную активность

Усиление фагоцитарной функции макрофагов сохраняется до конца периода наблюдения (5 недель) и этим отличается от реакции полинуклеарных клеток, функциональная активность которых к 5-и недели процесса начинает снижаться, предохраняя, по-видимому, чрезмерную интенсификацию воспалительной реакции и ограничивая вовлечение тканей в апьтеративный процесс

Полученные данные демонстрируют, что фагоцитоз и хемотаксис макрофагов при иммунокомплексном воспалении поддерживаются на всем протяжении исследования (1-5 недель), а прооксидантная активость макрофагов снижается в периоды 4 и 5 недель

Одна из возможных интерпретаций этого феномена заключается в том, что мы имели дело с длительной сенсибилизацией при моделировании патологического процесса на основе феномена Артюса-Сахарова, что могло обеспечить понижающую регуляцию прооксидант-ной активности, зависимой от «паттерна» цитокинов, изменения которых будут рассмотрены ниже

При повторном введении антигена (моделирование иммунокомгшексного типа воспалительной реакции) и в модели ЛПС-зависимого воспаления развивается воспалительный процесс, характеризующийся стадийностью, активацией кислородного метаболизма нейтро-филов и макрофагов, усилением хемотаксической функции и фагоцитарной активности макрофагов, достоверным снижением апоптоза полиморфонуклеаров

При моделировании липополисахаридного воспалениия кистородзависимые механизмы биоцидности нейтрофилов находятся в состоянии гипереактивности в течение более длительного периода (1-4 недели), что может способствовать реализации механизмов тканевой альтерации кислородных радикалов Эта же закономерность сохраняется и для алоптоза по-лиморфонуклеаров (замедленный апоптоз в период 1-4 недели)

Моделирование аллергического воспаления сопровождается статистически достоверной активацией прооксидантной активности полиморфонуклеарных лейкоцитов и достоверным снижением генетически детерминированной (апоптоз) гибели нейтрофилов в периоды 1-3 недели В период 4-5 недель происходит статистически достоверная нормализация параметров провоспалительной активности полиморфноядерных нейтрофилов (образование кислородных радикалов) и уменьшение «выживаемости» нейтрофилов (ускоренный апоптоз), обеспечивая таким образом «терминацию» или завершение воспаления

В различные сроки (в динамике 1-5 недель) развития иммунокомплексной воспалительной реакции происходит достоверное нарастание фагоцитарной функции макрофагов (захват тестирующего бактериального антигена) При моделировании липополисахаридного воспаления активация фагоцитарной активности перитонеальных макрофагов в периоды 1-4 недели сменяется статистически достоверным снижением фагоцитоза в более отдаленный период (5 недель), что может привести к замедленному клиренсу апоптозных клеток Эти данные представляют большой интерес, так как протеазы важного пародонтопатогена (РогрЬуготопаз §т§1Уа11з) модифицируют рецепторную сеть апоптозных нейтрофилов, необходимую для фагоцитоза апоптозных лейкоцитов и ограничения способности к хрониза-ции воспаления

Характер изменений хемотаксической и прооксидантной активности макрофагов в динамике воспаления (1-5 недель) отражает закономерности изменения прооксидантного статуса полиморфонуклеров с некоторыми различиями между исследуемыми моделями воспаления

Содержание у-иптерферона и интерлейкина-4 в динамике воспаления пародонта, вызванного микробными липополисахаридами.

Результаты исследования у- интерферона и интерлейкина-4 в сыворотке кроликов, которым моделировалось воспаление пародонта введением микробных липополисахаридов, представлено в таблице 8

Таблица 8

Содержание у- интерферона (ИФ -у) и интерлейкина-4 (ИЛ-4) у кроликов при пародонтите, вызванным липополисахаридами.

Показатели / срок Контроль 1 неделя 2 недели 3 недели 4 недели 5 недель

ИФ- у (пг/мл) 4 87±0 1 5.93±0 1 2147±1.75 29.07±0.91 39 28±1 52 20.34±1.08

ИЛ-4 (пг/мл) 1 39±0 02 1.48±0.03 1.51±0 03 1.58±0 04 2.93±0 1 1.74±0.11

Представленные данные показывают, что в течение первых 4-х недель воспаления пародонта липополисахаридного генеза отмечалась индукция синтеза интерферона. После незначительного, но достоверного подъема уровня ИФ-у на 1-й недели воспаления величина его возрастает в несколько раз на 2-й - 3-й неделях процесса, достигая своего максимума через 4 недели после начала воспаления

В дальнейшем течение патологического процесса, как показали результаты исследования ранее изученных параметров иммунитета, качественно изменялось, обеспечивая механизмы обратного развития (ограничения) воспалительной реакции В группе животных с воспалением сроком 5 недель наблюдалось снижение синтеза ИФ-у, уровень которого был почти в 2 раза ниже по сравнению с 4-х недельным сроком, равняясь фактически уровню интерферона при воспалением 2 недели

Показатели синтеза интерлейкина-4 при воспалении продолжительностью 1 неделя был достоверно выше контрольного значения Синтез интерлейкина-4 в следующий период (2-х недельное воспаление) демонстрирует дальнейшее, хотя и достоверное, но незначительное повышение, которое продолжается и в последующем В группах 3 и 4 недели наблюдалось статистически достоверное (Р< 0,05) лальнейшее повышение синтеза ингерлей-кина-4, который достигал максимума, как и содержание интерферона, на 4-й недели процесса В срок 5 недель наблюдалось статистически достоверное (Р< 0,05) понижение синтеза ин-терлейкина- 4, по сравнению с 4-х недельными показателями

Анализируя динамику изменения содержания интерферона и интерлейкина- 4 в плазме крови, можно видеть, что при одинаковой направленности этих изменений повышение уровня интерлейкина происходит очень медленно по сравнению со скоростью возрастания интерферона, зависимого от активности ТЫ

В последние годы было показано, что «схема» развития воспаления, накопление различных популяций клеток, выделение гидролитических ферментов из ПМК в ответ на местные факторы клеточного окружения, такие, как бактериальная бляшка, иммунные комплексы и комплемент, может зависеть от типа иммунореактивности (Rollins SM et al, 2005)

Таким образом, при оценке роли интерлейкииов в заболевании пародонта необходимо учитывать факторы, связанные с тем типом воспаления, которое зависит от иммунных комплексов Данное положение явилось основанием для исследования цитокинов в динамике воспалительного процесса пародонта, обусловленного ичмунокомплексными реакциями (феномен Артюса) Результаты этого исследования представлены в таблице 9

Таблица 9.

Содержание у интерферона (ИФ -7) и интерлейкина-4 (ИЛ-4) у кроликов при иммунокомплексном воспалении пародонта (феномен Артюса)

Показатели / сро Контроль 1 неделя 2 недели 3 недели 4 недели 5 недель

ИФ- у (пг/мл) 4 74±02 518*0 32 20 56±1.35 26 95*2 90 32 6*1.98 35.04*2.0

ИЛ-4 (пг/мл) 1 53*0 15 1 35*0 06 1 86*0 16 1.92*0 16 2 64*0 18 311*0 2

Как видно из данных, приведенных в таблице, динамика изменения у - интерферона в первые 4 недели иммунокомплексного воспаления практически повторяет таковую при микробном воспалении Достоверно повышаясь уже на 1-й неделе процесса, содержание интерферона резко возрастает ко 2-й недели воспаления и увеличивается более чем в 5 раз, на 4-й недели наблюдения Далее, в отличие от микробного воспаления, направленность изменения содержания интерферона не изменяется если при воспалении, вызванном введением ЛПС, на 5-й недели происходит изменение направленности патологического процесса и содержание интерферона уменьшается, то при иммунокомплексном воспалении пародонта уровень у - интерферона продолжает нарастать до конца периода наблюдения (5-ти недельный период)

Анализ изменений содержания интерлейкина-4 в динамике иммунокомплексного воспаления также показывает некоторые отличия от воспаления, вызванного микробными ЛПС При моделировании иммунокомплексного воспаления (феномен Артюса) отмечается достоверное снижение интерлейкина на 1-й недели после начала процесса Затем уровень интер-лейкина возрастает и содержание его в каждый последующий срок достоверно выше его уровня в срок предыдущий Это увеличение, в отличие от микробного воспаления, продолжается и на 5-й недели после начала воспаления, когда величина интерлейкина достоверно выше его уровня на 4-й недели

Таким образом, анализ изменения активности Т1 и Т2 хелперов в динамике развития патологического процесса различного генеза, проведенный на основании данных исследования у-интеферона и интерлейкина-4, показывает, что при развитии воспаления, вызванного микробными ЛПС, на 5-й недели наблюдения отмечается качественное изменение течения патологического процесса. Это заключается в снижении продукции лимфоцитами интерферона и интерлсйкина, что обеспечивает механизмы обратного развития (ограничения) воспалительной реакции, зависимого от Т- лимфоцитов (хелперов) В модели феномена Артюса такой модификации не наблюдается В группе животных с иммунокомплексным воспалением пародонта в период 5 недель наблюдается статистически достоверное (Р< 0,05) повышение синтеза у-шггеферона и интерлейкина -4 на протяжении всего периода наблюдения

Системную и локальную воспалительную активацию, проявляющуюся гиперпродукцией цитокинов, рассматривают как важный фактор дестабилизации течения воспаления в тканях пародонта В связи с этим особый интерес представляет вопрос о соотношении воспалительной активации и тяжести процесса, а также в какой степени повышение продукции воспалительных медиаторов обусловлено патологическим процессом в тканях пародонта

Временная динамика изменения активности полиморфонуклеаров (апоптоз и «оксида-тивный стресс») поддерживается более длительное время при ЛПС модели воспаления, зависимой от Т-хечперов 1типа

Что касается макрофагалыюй функции, то активность фагоцитоза в модели с иммунокомплексным воспалением сохраняется на более высоком уровне до конца опыта Именно увеличивающийся синтез ИЛ-4 в период 5 недель в этой модели, характеризуя активность Т-хелперов 2 типа, позволяет поддерживать фагоцитарную функцию макрофагальных. клеток

Активация макрофагов под влиянием у-интерферона проявляется повышением мик-робицидности, продукции супероксидных и нитроксидных радикалов, продукции ряда цитокинов и хемокинов В процессах активации макрофагов у-интерферон является синергистом бактериальных ЛПС

Выявленная нами определенная специфичность «паттерна» индукции определяемых иммунорегуляторных цитокинов определяет специфичность типовых характеристик развития воспалительного процесса во времени Важным является также то. что, как вы-явтено в настоящем исследовании, спектр интерлейкинов зависит от типа иммуновоспа-лительной реакции, моделируемых в настоящем исследовании

Патофизиологическая характеристика иммунных изменений при воспалении пародонта Некоторые механизмы регуляции апоптоза нейтрофилов при воспалении

Болезни пародонта непосредственно связаны с персистирующим воспалительным процессом, в механизмах развития которого ведущее значение имеют иммунные нарушения Патогененез иммунных нарушений при данной патологии достаточно сложен Он парадоксально сочетает в себе разноуровневые изменения клеточного иммунитета и активацию антитело-опосредованной реактивности Воспаление в тканях пародонта осуществляется в результате согласованного взаимодействия различных элементов иммунного реагирования, причем эффективность в значительной степени определяется гибкой динамической реакцией макрофагальной системы, полиморфонуклеаров и лимфоцитов Исследования последних лет показали, что Т-клеточнаая и макрофагальная регуляторная-нестабильность, существующая на системном уровне, а также нарушения в процессах апоптоза иммунокомпетентных клеток и эффекторов воспалительной реакции, может проявляться локальными нарушениями в тканях пародонта (в виде воспалительной реакции), независимо от качественной специфики «инициатора» патологического процесса (микробный компонент или комплексы антиген-антитело) В последние годы показано существование функциональной дихотомии хелпер-ной активности Т-лимфоцитов, что проявляется наличием двух рестриктированных клонов, продуцирующих различные интерлейкины, которые активно модифицируют течение патологического процесса Каждый цитокин (или группа цитокинов) обладают перекрещивающейся, синергической или ингибирующей активностью по отношению к другим цитокинам

Предполагается, что ТЬ2 цитокины обеспечивают в первую очередь хелперный сигнал в отношении синтеза антител и принимают участие в развитии аллергических реакций, а также выполняют иммунорегуляторную функцию, в то время как ТЫ цитокины вовлечены в реакции клеточного иммунитета, а именно, в гиперчувствительность замедленного типа, в клеточную цитотоксичность Действительно, в модели с ЛПС наблюдается более значимая активация цитокиновой продукции, зависимой от Т-хелперов 1типа по сравнению с иммуно-комплексным воспалением, индуцированным в модели феномена Артюса (по соотношению у - ИФ / ИЛ-4) Временная динамика активности полиморфонуклеаров (апоптоз и «оксидатив-ный стресс») поддерживается более длительное время при ЛПС модели воспаления, зависимой от Т-хелперов 1типа Что касается макрофагальной функции, то активность фагоцитоза именно в моде 1и с иммунокомплексным воспалением сохраняется на более высоком уровне до конца опыта Именно увеличивающийся синтез ИЛ-4 в период 5 недель в этой модели,

характеризуя активность Т-хелперов 2 типа, позволяет поддерживать фагоцитарную функцию макрофагальных клеток

Особое место в ряду клеточных механизмов иммунопатологического процесса при пародонтитах принадлежит гранулоцитам крови как популяции клеток с весьма большим спектром функциональных возможностей, позволяющим им инициировать значительную часть нормальных иммунологических, а также иммунопатологических реакций В частности, они признаны первыми обнаружить внедрившихся в организм патогенов и, включившись в межклеточную кооперацию, оказать регуляторное воздействие на функции многих других клеток, обеспечивающих последовательность иммунных процессов [Hcrmmajeng Е et al, 2001 Hofbauer LC, Heufelder, 2001, Herold КС, 2004]

Известно, что параметры функции ПМЛ в процессе воспаления значительно модифицируются, и, как показали наши исследования, апоптоз или запрограммированная клеточная гибель этих клеток в процессе развития воспалительной реакции прогрессивно снижается При этом происходит динамическое изменение различных показателей иммунной реактивности, так или иначе связанной с выполнением ПМЛ своих функций, включая фагоцитарную

В связи с этим специального внимания заслуживают вопросы, касающиеся взаимосвязей изменений различных показателей иммунитета в процессе развития воспаления, что позволит оценить их биологическую значимость и наметить пути коррекции Кроме того, одним из ключевых вопросов современной медицины является познание механизмов регуляции апоптоза, что особенно важно в условиях патологии, поскольку угнетение или стимуляция программируемой клеточной гибели играют важную роль в патогенезе заболеваний

При корреляционном анализе мы исследовали связи показателей активности клеточного (ИФ-у) и гуморального (ИЛ-4) иммунитета между собой, с показателями фагоцитоза и апопгозом нейтрофилов В динамике процесса определяется сильная положительная корреляционная связь между этими факторами, характеризующими клеточный и гуморальный иммунитет

Связи между данными факторами иммунитета и показателями, характеризующими фагоцитоз, приведены в таблице 10

Таблица 10

Корреляции показателей фагоцитарной активности с ИФ-у и с ИЛ-4 в динамике процесса

Показатель Корреляция ИФ-у Корреляция с ИЛ-4

Интенсивность фагоцитоза + 0 94 + 0.82

Интенсивность хемотаксиса + 0.96 + 0 79

«Кислородный взрыв» + 0 96 + 0.85

Апоптоз нейтрофилов -0.9 -0 63

Примечание жирным шрифтом отмечены достоверные связи (р < 0 05)

Из результатов, приведенных в таблице 10, следует, что факторы и клеточного и гуморального иммунитета имеют сильные, положительные и, как правило, достоверные связи (кроме связи ИЛ-4 с интенсивностью хемотаксиса, где эта связь также положительная, но не достоверная) с интенсивностью фагоцитоза и механизмами, эту интенсивность обеспечивающими В этом аспекте важно попытаться выяснить механизмы регуляции апоптоза ней-трофилов Характер связи содержания у-ИФ в плазме крови и интенсивности апоптоза становится ясным после анализа данных таблицы 10 и кривых на рис 3, где сравнивается динамика этих двух показателей в процессе развития воспалительной реакции (Для удобства сравнения величина обоих показателей выражена в процентах, причём за 100% принята максимальная величина каждого из этих показателей, коэффициент корреляции между ними рассчитывался по абсолютным величинам) Исследуемые показатели обладают выраженной дискордантностью (при коэффициенте корреляции между у-ИФ и интенсивностью апоптоза равном - 0 9, что говорит о сильной достоверной отрицательной связи) Это означает, что у-ИФ ослабляет апоптоз нейтрофилов

р = - О 9

апоптоз

контроль 1 неделя 2 недели 3 недели 4 недели 5 недель

Рис 3 Сопоставление динамики интенсивности апоптоза нейтрофилов и содержания у-ИФ в плазме крови

Таким образом, полученные нами данные позволяют высказать предположение о том, что у-ИФ и зависимые от него механизмы могут играть роль регулятора апоптоза и дают возможность далее наметить пути воздействия на эти регуляторные процессы с целью управления активностью апоптоза Апоптоз нейтрофилов является важным регулятором ней-трофилзависимых реакций, устанавливая баланс между эффективным функционированием этих клеток и их безопасным удалением Интерфероновый каскад играет центральную рочь в событиях, регулирующих дифференцировку и клеточную смерть [Azuma Y et al, 2000, Bartova J et al, 2000] Специфика по^иморфонуклеаров, особенности их митохондриального компартмента модифицируют их апоптозный ответ на типовые индукторы Идентификация зависимости апоптоза нейтрофилов от интерферона-у должна в перспективе способствовать более глубокому пониманию механизмов патогенеза воспалительных заболеваний, улучшению дифференциальной диагностики и созданию принципиально новых направлений терапии (фармакологически индуцированный апоптоз)

Патофизиологический анализ выявленной «организации» параметров врожденного и приобретенного иммунитета в динамике воспаления, исследуемого на двух моделях (фагоцитоз тестируемого антигена макрофагами и хемотаксис, продукция активных форм кислорода макрофагами и нейтрофилами, а также интерлейкинов, характеризующих «дихотомию»

клеточного и гуморального иммунитета), позволяют охарактеризовать механизмы развития воспалительной реакции ЛПС- зависимого и иммунокомплексного генеза, что является основой для уточнения элементов патогенеза и терапевтических подходов с учетом выявленных изменений параметров врожденной и приобретенной резистентности

О возможных связях между воспалительным процессом и изменением липидного спектра крови.

Как показали наши исследования показателей метаболизма, при развитии локального воспаления в пародонте обменные процессы в организме существенно не изменяются Исключение составляют липопротеиды, количество которых в крови увеличивается при обоих типах воспалительной реакции пародонта. Анализируя полученные результаты и основываясь на литературных данных (Asakawa R et al, 2003, Behbasakis GN et al, 2005, Lalla E et al, 2007)), мы позволили себе высказать ряд предположений, объясняющих взаимосвязь между развитием воспалительной реакции и изменением липидного метаболизма, а также попытаться дать патогенетическую оценку этим связям

Полученные нами данные подтвердили положение о влиянии воспаления на метаболизм ЛП плазмы с развитием проатерогенных нарушений его профиля, определяемых параметрами триглицеридов и ЛПОНП

Эти изменения определялись наличием, по меньшей мере, трех путей влияния медиаторов воспаления на метаболизм липидов и ЛП Прежде всего, это увеличение синтеза ЛПОНП в печени Важнейшими его механизмами являются прямое активирующее действие медиаторов воспаления на синтез холестерола и апо-В в гепатоцитах [Gibson FC et al, 2004, Nukaga J et al, 2004], а также увеличение притока к ним свободных жировых клеток (СЖК) из жировой ткани, связанное с развитием инсулинорезистентности адипоцитов под действием медиаторов воспаления (ФНО, ИЛ-6) и последующей активацией в них липолиза [Gibson FC et al, 2004] Помимо этого, цитокины оказывают угнетающее влияние на липопротеинли-пазу (ЛПЛ), резко замедляют гидролиз триглицеридов в ЛПОНП и их элиминацию, что сопровождается увеличением содержания в крови ЛП и концентрации в них ТГ [Bakhshandeh S et al, 2007] Третий фактор определяется ускоренным клиренсом отдельных классов ЛП из крови, так как изменения обмена ЛП при воспалении являются не только его следствием, но и имеют определенную защитную физиологическую направленность Прежде всего, циркулирующие ЛП, главным образом - ЛПВП и значительно меньше - ЛПНП, имеют большое значение в детоксикации эндотоксина ЛПС, которые связывают его на своей поверхности и захватываются затем макрофагами через рецептор ЛПС Уменьшение содержания холесте-

рина в крови играет в этих условиях отрицательную роль, так как делает организм более уязвимым по отношению к действию микробных ЛПС Однако ЛПВП в большей степени элиминируются из крови, чем ЛПНП и особенно ЛПОНП, что влияет на появление проатеро-генного профиля ЛП крови [Nukaga Д ег а!, 2004]

Связывание ЛПС с отдельными классами ЛП зависит от их фосфолипидного состава Наиболее интенсивно ЛПС связывается с ЛПВП, и потому их уровень в крови быстро снижается Менее интенсивно ЛПС связываются с фракциями ЛПНП и ЛПОНП, образовавшийся комплекс удаляется го крови гепатоцитами и экскретируется в желчь Поэтому наблюдаемая при тяжелых инфекциях гипохолестеринемия является отражением интенсивного удаления ЛПВП и ЛПНП из крови Так как фракции ЛПОНП и хиломикроны (ХМ) меньше связывают ЛПС, то уровень триглицеридов при этом остается высоким [ВакЬзЬапдеЬ 8 е1 а!, 2007]

Наличие этих разнонаправленных путей влияния и объясняет достаточно пеструю картину изменений содержания в крови общего холестерина и ЛПНП, которая может определяться динамикой воспаления, фазой его развития Поэтому в одних исследованиях, в частности, установлено наличие гиперхолестеринемии при воспалении, тогда как в других отмечено уменьшенное содержание холестерина в крови, хотя повышение уровня триглицеридов и апо-В - содержащих липопротеиды (ЛП), а также снижение ЛПВП практически во многих исследованиях было закономерным

В то же время, только количественные изменения содержания отдельных классов ЛП крови еще не являются фактором атерогенеза В соответствии с современными представлениями, определяющим моментом в инициации и прогрессировании атеросклероза является пероксидация ЛПНП и появление их модифицированных форм Эта гипотеза сформулирована более 20 лет назад, когда было показано, что инкубация макрофагов только с окисленными, но не с нативными ЛПНП приводит к образованию пенистых клеток, а ЛП, экстрагированные из атеросклеротических поражений, имеют все признаки окисленных ЛПНП В то же время, образование окисленных ЛП и их появление в циркуляции может быть одним из следствий активации воспаления Одним из механизмов, посредством которого воспаление оказывает проатерогенное действие, является снижение чувствительности адипоцитов к инсулину при действии медиаторов воспаления В результате активируется липолиз в жировой ткани, возрастает концентрация свободных жирных кислот в крови, приводя к развитию как периферической инсулинорезистентности, так и дислипидемии Этот процесс потенцируется прямым угнетающим действием медиаторов воспаления на ферменты, принимающие уча-

стие в обмене липидов и ЛП, липопротеиновую липазу, ацилхолинацилтрансферазу и потенцирующим - на печеночную липазу Важнейшей особенностью нарушений метаболизма ЛП в этих условиях является возрастание содержания в плазме крови ЛПОНП, ЛПНП и мелких плотных частиц ЛПНП, снижения ЛПВП при отсутствии изменений уровня общего холестерина и ЛПНП

Усиление продукции нейтрофилами активных радикалов при воспалении является их функцией, оно происходит в ответ на действие гуморальных факторов (интерлейкины), которые синтезируют пораженные клетки Поэтому активность перекисного окисления in vivo определяет функциональное состояние нейтрофилов [Carayol N et al, 2006], количество образованных ими активных радикалов, но не количество в ЛПНП эссенциальных жирных кислот Функциональная активность нейтрофилов, перекисное окиспение и активность формирования ими м-ЛПНП определяют и последующее поглощения м-ЛПНП макрофагами [Fokkema SJ et al, 2002]

Патофизиологический анализ выявленной «организации» параметров врожденного и приобретенного иммунитета в динамике воспаления, исследуемого на двух моделях (фагоцитоз тестируемого антигена макрофагами и хемотаксис, продукция активных форм кислорода макрофагами и нейтрофилами, а также интерлейкинов, характеризующих «дихотомию» клеточного и гуморального иммунитета), позволяют охарактеризовать механизмы развития воспалительной реакции иммунокомплексного генеза и ЛПС - зависимого характера, что является основой для уточнения элементов патогенеза и терапевтических подходов с учётом выявленных изменений параметров врожденной и приобретенной резистентности

Нарушение взаимодействия воспаления, иммунной системы и липидного метаболизма - важный механизм развития современной патологии Иммунные и воспалительные факторы модулируют липидный спектр (Gibson FC et al, 2004) Липопротеиды оказывают регулятор-ные эффекты на иммунный ответ, метаболизм клеток системы иммунитета и неспецифическую устойчивость к патогенам (Pussinen PJ et al, 2005, Bakhshandeh S et al, 2007) Взаимосвязь иммунной и «липидной» систем обычно анализируется при обсуждении нескольких проблем По отношению к пародонтопатологии вопросы взаимодействия воспалительного процесса и нарушений жирового обмена и их патофизиологический анализ практически не разрабатывались Этот аспект видится вполне патогенетически оправданным (взаимозависимые влияния воспалительных и метаболических компонентов) с позиций как патофизиологии, так и стоматологии, что важно для разработки новых (патогенетически значимых) терапевтических подходов

ВЫВОДЫ

1 При развитии локального воспаления пародонта как липополисахаридной, так и им-мунокомплексной природы (феномен Артюса) изменения метаболизма лияидов, белков и углеводов носят однотипный характер При липополисахаридном воспалении отмечается гипоальбуминемия и гипогликемия, повышение уровня мочевины и креа-тинина, повышение креатининфосфокиназы При моделировании феномена Артюса степень выраженности этих изменений значительно меньше

2 При липополисахаридном воспалении пародонта изменения метаболизма выражены в большей степени, что касается, прежде всего, показателей липидного обмена, заключающихся в повышении хочестерина, ЛПОНП и триглицерндов и в тенденции к снижению ЛПВП, что характеризует развитие проатерогеиного спектра липидных нарушений

3 При длительном и повторном локальном введении антигена в ткани пародонта (моделирование иммунокомплексного типа воспалительной реакции и в моде™ ЛПС-зависимого воспаления) развивается воспалительный процесс, характеризующийся стадийностью активацией кислородного метаболизма нейтрофилов и макрофагов, усилением хемотаксической функции и фагоцитарной активности макрофагов, достоверным снижением апоптоза полиморфонуклеаров

4 При моделировании воспаления микробными липополисахаридами кислородозависи-мые механизмы биоцидности нейтрофилов находятся в состоянии гиперреактивности в течение 1 - 4-х недель, что может способствовать реализации механизмов тканевой альтерации кислороиными радикалами Этот же период характеризуется и снижением интенсивности апоптоза полиморфонуклеаров (замедленный апоптоз в периоды 1-4 недели)

5 Моделирование иммунокомплексного воспаления пародонта (феномен Артюса) сопровождается активацией прооксидантной активности поличорфонуклеарных лейкоцитов и снижением генетически детерминированной (апоптоз) гибели нейтрофилов в периоды 1-3 недели В периоды 4-5 недель происходит статистически достоверная нормализация параметров провоспалительной активации полиморфпоядерных клеток (образование кислородных радикалов) и ускорение апоптоза нейтрофилов, обеспечивая таким образом «терминацию» воспаления

6 При моделировании липополисахарвдного воспаления активация фагоцитарной активности перитониальных макрофагов в периоды 1-4 недели сменяется статистически достоверным снижением фагоцитоза (захват тестирующего бактериального антигена) в отдаленный период (5 недель), что может привести к замедленному поглощению апоптозных клеток

7 Динамика изменений хемотаксической и прооксидантной активности макрофагов в динамике воспаления (1-5 недель) отражает закономерности изменения прооксидант-

ного статуса полиморфочуклеаров с характерной спецификой различий между исследуемыми моделями воспаления

8 В динамике развития экспериментального воспаления в тканях пародонта липополи-сахаридного и иммунокомплексного генеза (воспроизведение III типа иммунопатологических процессов по Кумбсу и Джеллу) отмечается нарастание образования у-интерферона и интерлейкина-4, что свидетельствует о стимуляции процессов клеточного и гуморального иммунитета во все исследуемые периоды

9 Патофизиологический анализ параметров иммунитета в динамике воспаления, исследуемого на двух моделях, (фагоцитоз тестируемого антигена макрофагами и хемотаксис, продукция активных форм кислорода макрофагами и нейтрофилами, а также ин-терлейкинов, характеризующих «дихотомию» клеточного и гуморального иммунитета), позволяют охарактеризовать механизмы развития воспалительной реакции липо-полисахаридного и иммунокомплексного генеза, что является основой для определения ключевых элементов патогенеза и терапевтических подходов с учетом выявленных изменений параметров врожденной и приобретенной резистентности

10 Кросскорреляционный анализ всех исследуемых показателей средних значений по срокам процесса и в диьамике развития воспаления подтвердил отсутствие принципиальных отличий в изменениях метаболизма, который вытекает из анализа изменений абсолютных значений изучаемых показателей метаболизма при двух различных по генезу (микробном и аллергическом) воспалительных процессах, поскольку подавляющее большинство корреляционных связей являются однонаправленными В динамике процесса наблюдается увеличение значений коэффициента корреляции по основным видам обмена, что говорит об усилении «степени жесткости» метаболических систем и снижении их адаптационных возможностей

Список научных работ, опубликованных по теме диссертации

1 Пасечник А В, Моисеева Е Г, Фролов В А, Дроздова Г А Патофизиологические аспекты регуляции воспалительного процесса аддитивные эффекты (5-агонистов и кортикостероидов // International Journal оп Immunoreabihtation -2001 -№l,pU4

2 Пасечник А В, Мангасаров А Г, Моисеева Е Г, Дроздова Г А Генез ультраструктурных и микроциркуляторных нарушений при воспалении // International Journal on Immunoreabihtation -2001 -№l,p 164

3 Пасечник А В , Моисеева E Г, Мангасаров А Г Стрессорные гормоны в регуляции воспалительного процесса // X Международный симпозиум «Эколого-физиологические проблемы адаптации» Тез докл -Москва, 2001 - с 403-404

4 Пасечник А В , Моисеева Е Г Адаптационный компонент хронического воспалительного процесса. // X Международный симпозиум «Эколого-физиологические проблемы адаптации» Тез докл - Москва,2001 -с405-406

5 Пасечник А В, Моисеева Е Г , Мангасаров А Г Компенсаторно- приспособительные процессы в микроциркуляторном русле при воспалении // X Международный симпозиум «Эко-лого-физисшогические проблемы адаптации» Тез докл - Москва, 2001 - с 404-405

6 Пасечник А В , Моисеева Е Г, Хоменко А А Общепатологические аспекты модучяции воспалительного процесса // Материалы Всероссийской научной конференции по пат анатомии Тез докл - Москва, 2001 ~ с 103-104

7 Пасечник А В , Фролов В А, Моисеева Е Г Анализ воспалительного процесса в параметрах функции нейтрофилов // Вестник РУДН - 2001 - №3, с 33-37

8 Моисеева Е Г, Пасечник А В, Мирзоян Ж А Анализ воспалительного процесса в параметрах апоптоза и функциональной активности макрофагов и эндотелия // Материалы 1 Всероссийской научной конференции «Развитие научных исследований на медицинских факультетах Университетах России» 23-25 января 2001 Москва С 204-205

9 Моисеева Е Г Медикаментозный подход к регуляции апоптоза нейтрофилов при воспалении И Материалы 1 Всероссийской научной конференции «Развитие научных исследований на медицинских факультетах Университетах России» 23-25 января 2001 Москва С 233-234

10 Мангасаров А Г, Моисеева Е Г, Вартанян И Р, Хоменко А А Изменения в микроциркуляторном русле при воспалении // Материалы 1 Всероссийской научной конференции «Развитие научных исследований на медицинских факультетах Университетах России» 23-25 января 2001 Москва С 198-200

11 Пасечник А В , Демуров Е А, Моисеева Ь Г, Иллариоиова Т С Патогенетические механизмы хронизации воспалительного процесса. // Материалы 1 Всероссийской научной конференции «Развитие научных исследований на медицинских факультетах Университетах России» 23-25 января 2001 Москва С 206-207

12 Пасечник А В , Фролов В А, Кузовников А Е, Моисеева Е Г, Хоменко А А, Гвоздь Н Г Анализ воспаления как причины развития метаболических нарушений и инсулинорезистент-ности//Вестник РУДН -Сер Медицина -2002 -№3 - С 6-10

13 Пасечник А В, Гвоздь Н Г, Лингтхеп М, Льянова Д К, Даурова Ф Ю, Пасечник А А, Моисеева Е Г Сравнительный анализ эффектов макролидов, статинов и нестероидных противовоспалительных препаратов при гипертензии, воспалении и холодовом стрессе // Материалы Всероссийской научно-практической конференции «Современные проблемы артериальной гипертонии» -Москва,2003 -с 156-158

14 Пасечник А В, Льянова Д К, Даурова Ф Ю, Пасечник А А, Моисеева Е Г Апоптоз нейтрофилов при патологии различного кнеза Аллергология и иммунология 2003 т4 №2 с 74-75

15 Пасечник А В, Гвоздь Н Г, Илларионова Т С , Мадхав Л, Льянова Д К, Моисеева Е Г Патофизиологический анализ эффектов модуляторов воспаления (катехоламинов, статинов и НПВПС) при моделировании современной патологии // Материалы 3 Международной кон-

ференции «Болезни цивилизации в аспекте учения В И Вернадского» - Москва, 2005 -с 276-278

16 Пасечник А А, Моисеева Е Г, Брагина А Д, Бакулин А А , Гвоздь Н Г, Льянова Д К, Даурова Ф Ю Исследование действия дексаметазона и рокапьтрола на функциональные свойства нейтрофилов человека и экспериментальных животных // Материалы 3 Международной конференции «Болезни цивилизации в аспекте учения В И Вернадского» - Москва, 2005 - с 280-282

17 Пасечник А А , Моисеева Е Г, Карева М А , Иванова А В , Бакулин А А, Гвоздь Н Г, Льянова Д К Окислительный стресс и воспаление // Научные труды 6 Международной научно-практической конференции «Здоровье и образование в 21 веке» - Москва, 2005 -с 273-274

18 Моисеева Е Г Анализ действия ИЛ-4 на функциональные свойства нейтрофилов при моделировании пародонтита. // Научные труды 7 Международной научно-практической конференции «Здоровье и образование в 21 веке» - Москва, 2006 - с 347

19Моисеева ЕГ, Пасечник АВ, Фролов ВА,Ашижева АМ, Романенко НС, Брагина А Д, Иванова А В , Карева М А Параметры реактивности нейтрофилов при моделировании хронической патологии // Научные труды 7 Международной научно-практической конференции «Здоровье и образование в 21 веке» - Москва, 2006 - с 348

20 Фролов В А, Моисеева Е Г, Пасечник А В Патофизиологические аспекты модулирования функциональных свойств нейтрофилов пропранололом Бюллетень экспериментальной биологии и медицины 2006г том 141 №6 с 622-625

21 Пасечник А А , Моисеева Е Г , Дроздова Г А , Льянова Д К , Даурова Ф Ю , Романенко Н С ,Ашижева А М , Пасечник А А Регуляция провоспалительной активности лейкоцитов натрия салицилат, витамин Д и пентоксифиллин Аллергология и иммунология 2006 т7 №3 с 261-262

22 Моисеева Е Г, Пасечник А В , Юдочкин А В , Фролов В А, Дроздова Г А, Гвоздь Н Г, Романенко Н С ,Ашижева А М , Пасечник А А Парадоксы влияния ингибиторов циклоокси-геназы-2 на параметры воспалительного ответа Аллергология и иммунологи? 2006 т 7 №3 с 262-263

23 Моисеева Е Г, Пасечник А В , Дроздова Г А Льянова Д К , Даурова Ф Ю , Романенко Н С Ашижева А М , Пасечник А А Пато1енетически значимые компоненты взаимодействия С-реактивного белка и лейкоцитов Аллергология и иммунология 2006 т 7 №3 с 264

24 Моисеева Е Г Исследование действия ИЛ-4 на функциональные свойства нейтрофилов // Вестник РУДН - 2006 - №3 (35), с 65-68

25 Моисеева Е Г, Пасечник А В , Фролов В А , Гвоздь Н Г, Ашижева А М, Романенко Н С , Пасечник А А , Брагина А Д, Иванова А В , Карева М А Регуляция апогггоза нейтрофилов как параметра патологии различного генеза // Вестник РУДН - 2006 - №3 (35), с 111-113

26 Мустяца В Ф, Кузовников А Е , Пасечник А В , Моисеева Е Г, Дроздова Г А , Арутюнов Л Р, Романенко Н С, Ганич Т В, Гвоздь Н Г, Лингтхеп Мадхав Функциональные параметры лейкоцитов в условиях измененного углеводного метаболизма // Научные труды 8 Меж-

дународного конгресса «Здоровье и образование в 21 веке, концепции болезней цивилизации» -Москва,2007 - с444

27 Пасечник А В, Моисеева Б Г, Фролов В А, Мустяца В Ф, Дроздова ГА, Арутюнов Л Р, Белова А А, Романенко Н С, Ганич Т В Патогенетический анализ эффектов модуляторов воспаления при моделировании патологических процессов Н Научные труды 8 Международного конгресса «Здоровье и образование в 21 веке, концепции болезней цивилизации» -Москва, 2007 - с 480-481

28 Пасечник А В , Моисеева Е Г, Фролов В А, Дроздова Г А, Гвоздь Н Г , Ашижева Н Г, Романенко Н С , Ганич Т В , Белова А А, Брагина А Д, Иванова А В Нейроэндокринная модуляция функциональных характеристик лейкоцитов // Вестник РУДН - 2007 - №2, с 8990

29 Пасечник А В, Моисеева Е Г, Фролов В А, Мустяца В Ф, Дроздова Г А, Арутюнов Л Р , Кузовников А Е, Белова А А Влияние адреноблокаторов и глюкокортикоидов на продукцию цигокинов // Вестник РУДН -2007 - №4, с 87-89

30 Моисеева Е Г, Пасечник А В , Дроздова Г А, Фролов В А Возможные механизмы регуляции апоптоза нейтрофилов при аллергическом воспалении Бюллетень экспериментальной биологии и медицины 2007 г том 141 №3 с 273-275

Метаболический гомеостаз и иммунная реактивность организма в динамике воспаления в тканях пародонта (экспериментальное исследование)

Е Г Моисеева

В экспериментах на кроликах моделировалось воспаление пародонта липополисаха-ридного (микробного) и иммунокомплексного (феномен Артюса) воспаления Изучались метаболические показатели крови и состояние иммунной реактивности на протяжении 5-ти недель с начала воспаления Было показано, что при воспалении пародонта различного гене-за развиваются однотипные изменения метаболических показателей крови Эти изменения включают в себя, прежде всего, увеличение количества холестерина, ЛПОНП и триглицери-дов, что может говорить о развитии атерогенного профиля крови При исследовании иммунных показателей изменения при обоих типах воспаления также однотипны и касаются угнетения в первые 4 недели апоптоза нейтрофилов и усиление фагоцитарной активности поли-нуклеаров и макрофагов Увеличивается также содержание у - интерферона и интерлейкина - 4 Корреляционный анализ показал наличие отрицательной связи между апоптозом нейтрофилов и у - интерфероном, что дает основание говорить об участии последнего в регуляции механизмов апоптоза

Metabolic homeostasis and immune reaction of the body in the inflammation dynamic of paradont (experimental study)

E G Moiseeva

The inflammation of paradont LPS (microbes) and allergic nature were modeled m the experiments on rabbits The blood metabolic and immune indices were studied for 5 weeks It was shown, that m the different types of inflammation there are the some changes of the blood metabolic indices First of all it is the cholesterol increase, and also LPVLD and triglycerides It speaks about the development atherogenic changes in the blood The immune indices showed the some changes in the two types of inflammation There was the increase the phagocytes activity of neutrophyls and macrophages and the depression of apoptosis The y - interferon and interleukin -4 increased The correlation analysis showed the significant negative correlation between y -interferon and apoptosis of neutrophils, what is the base to speak about the participation of y -interferon in the regulation of apoptosis

Подписало в печать 31.03 2008 Печать трафаретная

Заказ № 223 Тираж 100 экз

Типография «11-й ФОРМАТ» ИНН 7726330900 115230, Москва, Варшавское ш, 36 (495) 975-78-56, (499) 788-78-56 www autoreferat ru

Актуальность проблемы. По данным эпидемиологических исследований в последние годы появилась явная тенденция роста заболеваний пародонта среди населения различных регионов нашей страны и мира [Алимский А.В., 2005; Соловьев A.M. и соавт., 2005; Цепов JI.M., 2007; Ebisu S, Noiri Y., 2007]. Так, по данным ВОЗ, основанным на стоматологическом обследовании населения 53 стран, заболевания пародонта встречаются в 65 - 98% случаев. Наибольшая частота развития патологии пародонта приходится на средний возраст 35-45 лет и достигает 65 — 98%. Но даже среди молодежи 15-19 лет заболеваемость пародонта встречается у 55 - 99% подростков [Логинова Н.К., Воложин А.И., 1994].

Актуальность проблемы обусловлена также тем обстоятельством, что состояние тканей пародонта является одним из основных факторов, оказывающих влияние на качество и долговечность результатов стоматологического лечения [Kimmel К., 2003].

Воспалительные заболевания в пародонте являются начальным этапом деструктивного процесса, приводящего к потере зубов и нарушению здорового образа жизни, что определяет социальную значимость проблемы [Немецкая Т.И., 1972, 1998; Грудянов А.И. 1997; Воложин А.И., 1998; Грудянов А.И. и соавт. 2002,2004; Безрукова И.В., 2001,2002; Цепов Л.М., 2007; Weiger R., 1997].

Распространению заболеваний пародонта способствуют многочисленные факторы как местного, так и общего характера, вызывающие воспалительные процессы в мягких тканях десны и снижение иммунной реактивности организма. Важным фактором является рост общесоматических заболеваний, таких как диабет, атеросклероз и др., изменяющих метаболические процессы в организме и снижающих кровоснабжение тканей пародонта, что в конечном итоге приводит к их деструкции [Иванов B.C., 1998].

Среди заболеваний пародонта первое место принадлежит хроническому генерализованному пародонтиту. Пародонтит в настоящее время понимается как хроническое деструктивное воспалительное заболевание пародонтальных тканей, которое является реакцией на длительное присутствие инфекции, преимущественно анаэробной грамотрицательной микрофлоры. Грамнегативные анаэробы и их вирулентные факторы вызывают хроническое перманентное воспалительное заболевание с выраженным воспалительно — иммунным компонентом, в значительной степени определяемым индивидуальными и генетическими факторами; Это воспалительный деструктивный процесс, захватывающий все ткани пародонта и приводящий' в конечном итоге к резорбции костной ткани [Немецкая 'Г.И:, 1996; Грудянов А.И. 1997, 1998; Иванов B.C., 1998; Гаскин Д.В., 2006; Straka М., 2002].

Несмотря на отсутствие единой точки зрения на этиологию и патогенез поражений порадонта, общепризнанным является мнение о значении микробного фактора в развитии пародонтита. В подавляющем большинстве случаев хроническому генерализованному пародонтиту предшествует гингивит различной степени тяжести, охватывающий с возрастом все большее число людей [Балин В.Н., 1995; Грудянов А.И., 1996; 1998].

Наиболее важным этиологическим фактором при гингивите и пародонтите большинство авторов считают микрофлору зубной бляшки [Цепов Л.М., 2000; 2001]. Патогенная и условно-патогенная микрофлора полости рта признается одним из ведущих факторов в этиологии, воспалительных заболеваний пародонта. [Желудева И.В., Попова В.М., Максимовская Л.Н. с соавт., 2002; Есаян З.В., 2005; Дмитриева Л.А., 2007]. Результаты бактериологических исследований и изучение поддесневого зубного камня свидетельствуют о комплексном составе микрофлоры при заболеваниях пародонта. Среди микроорганизмов встречаются различные виды стрептококков, гемолитический стафилококк, трихомонады, фузобактерии, актиномицеты, простейшие и др. Кроме того, в пародонтальных карманах обнаруживаются специфические грамотрицательные бактерии, такие как Porphyromonas girigivalis, Prevotella iiitemiedia, Actinobacillus actinomycetemcomi-tans, Capnocytophags, Bacteriodis forsythus, Treponema dentiicola, Veilonella recta [Иванов B.C., 1998; Царев B.H. с соавт., 2005]. До 85% всех микробов являются анаэробами, из которых от 10 до 15 бактерий обладают патогенными свойствами. Эти микробы, образующие группу «пародонтопатогенных видов», обладают высокоадгезивными, инвазивными и токсическими свойствами и, продвигаясь под десневой край, повреждают эпителий зубодесневой бороздки [Григорьян А.С., 1999; Григорьян А.С. с соавт., 2002]. Важными факторами вирулентности этих микробов являются эндотоксины, являющиеся по своему химическому составу липополисахаридами, которые взаимодействуют с иммуноглобулинами A, G и М и различными компонентами комплемента [Иванов B.C., 1998]. Экзо - и эндотоксины нарушают клеточный обмен, вызывают альтерацию тканей пародонта, что способствует развитию воспалительной реакции.

Развитие и течение воспалительного процесса в пародонте, его генерализация и хронизация определяются не только и не столько видовым и количественным составом микрофлоры полости рта, сколько состоянием защитных сил самого организма и ответной реакцией иммунной системы.

Иммунная реактивность организма играет важную, если не определяющую роль в развитии воспалительных заболеваний пародонта [Herminajeng Е. et al., 2001 Hofbauer L.C., Heufelder, 2001]. Значение системы защиты (врожденного и приобретенного иммунитета) связано с индукцией провоспалительной экспрессии тканевых цитокинов, активацией хемоатрактантов и привлечением провоспа-лительных клеток, с нарушениями локального и системного метаболизма, гемодинамики, иммунологическими и нейрорегуляторными нарушениями и сдвигами микробиоценоза [Yonemura Т. 1989; Watanabe К., et al., 1991; Firatii Е., et al., 1996; Siqueira J.F. et al., 2001]

Распространенность пародонтита в популяции, сложности при осуществлении профилактики и лечения заболевания, неоднозначность в трактовках основных патогенетических механизмов (взаимозависимых воспалительных, иммунных и метаболических) делает эту проблему чрезвычайно актуальной в медицине.

Известно, что среди больных с метаболическими нарушениями (метаболический синдром, диабет, системная красная волчанка) большое распространение имеют воспалительные заболевания пародонтального комплекса. Пародонт, его структуры являются чувствительными к пропатогенному действию факторов, формирующих проатерогенный спектр метаболических нарушений. Этот аспект отражает взаимозависимое влияние двух важнейших патогенетических механизмов - воспалительного и метаболического [Sasaki Н. et al., 2004; Bakhshandeh S. et al., 2007; Borges P.K. et al., 2007].

Патология пародонта носит, в основном, воспалительный характер и может развиваться под влиянием как местных причин, так и сочетанного действия общих (эндогенных) и местных факторов на фоне изменения реактивности организма, организации иммунного ответа. Иммунная система, призванная обеспечивать генетическое постоянство внутренней среды организма, защиту макроорганизма от всевозможных экзогенных и эндогенных патогенов, вследствие разнообразных причин может быть основой формирования хронического воспалительного процесса и метаболических нарушений.

Характер изменений иммунной реактивности при различных стадиях пародонтита был изучен многими авторами [Воложин А.И., 1994; Воложин А.И., Порядин Г.В., 2006]. Речь при этом шла о нарушении факторов иммунной защиты и изменении иммунной регуляции при развитом пародонтите, который характеризуется не столько воспалительной реакцией, сколько изменениями остеобластов и остеокластов и резорбцией костной ткани [Carayol N. et al., 2006; Chappie I.L., Mil ward M.R., Dietrich Т., 2007]. В литературе практически отсутствуют данные о характере воспалительной реакции и иммунной регуляции метаболических изменений на начальном этапе развития пародонтита, когда процесс ограничен воспалительной реакцией десны и носит местный, локальный характер.

Роль системы защиты связана с индукцией провоспалительной экспрессии тканевых цитокинов, активацией хемоатрактантов и привлечением провоспали-тельных клеток, с нарушениями метаболизма, гемодинамики, иммунологическими и нейрорегуляторными нарушениями и сдвигами микробиоценоза [Лемецкая Т.И. с соавт., 1979; 1983; 1985; 1993; Салдусова И.В. 1997; Кречина Е.К., 2000, 2002; Максимовский с соавт., 2003; Yonemura Т. 1989; Watanabe К., et al., 1991; Firatii Е., et al., 1996; Siqueira J.F. et al., 2001].

При рассмотрении патогенеза пародонтита ощущается существенный дефицит знаний о генезе и механизмах развития тканевых поражений. Лечение и реабилитация больных пародонтитом представляют значительную трудность.

При возникновении гингивита, который является начальным этапом развития пародонтита, ряд авторов обнаружили выраженное ослабление специфических факторов местных защитных реакций полости рта [Максимовский Ю.М. с соавт., 2003]. Тем не менее, местные лечебные воздействия на пораженный паро-донт у таких больных часто малоэффективны [Минкин Л.Н., Евглевская Ю.П., 1997; Цепов Л.М., Николаев А.Й., 2002].

При стимуляции лимфоцитов бактериями типа V. alcalescence, полученными от больных с гингивитом или пародонтитом, происходит выделение фактора, ингибирующего миграцию макрофагов (МИФ). Зубная бляшка и отдельные виды бактерий - V. alcalescence, A. viscosus, F. nucleatumn, В. Mclaninogenicus - способны индуцировать выработку МИФ лимфоцитами лиц с экспериментально вызванным гингивитом и таким образом тормозить или полностью подавлять фагоцитоз [Firatii Е., et al„ 1996; Siqueira J.F. et al., 2001].

На кафедре патологической физиологии РУДН длительное время разрабатывается концепция, согласно которой воспаление, вообще, и субклиническое воспаление, в частности, рассматриваются как общая патофизиологическая основа современной патологии, замыкающая «патогенетические круги» нозологических форм болезней цивилизации.

Общность воспаления и проатерогенных нарушений метаболизма с патофизиологической точки зрения вполне естественна, поскольку оба синдрома формируют одни и те же клетки: эндотелиальные и гладко-мышечные, фибробласты, моноциты и макрофаги, нейтрофилы, тромбоциты и, в меньшей степени, Т- и В-лимфоциты. При воспалении и атеросклерозе адгезию (фиксацию) моноцитов и нейтрофилов на поверхности эндотелия активируют одни и те же белки клеточных взаимодействий: интегрины на мембране нейтрофилов и моноцитов, Е-селектин на мембране эндотелия и Р-селектин тромбоцитов. При обоих патологических процессах происходит активная инфильтрация (хемотаксис) тканей циркулирующими в крови моноцитами и нейтрофилами. В обеих ситуациях активированные нейтрофилы и тканевые макрофаги в реакции «респираторного взрыва» усиливают образование супероксидрадикалов и активируют перекисное окисление белков и липидов, вызывая альтерацию нормальных тканей [Ilguy М., Ilguy D., Bayirli G., 2007].

Начиная с 1999 г., после публикации ставшей уже хрестоматийной работы R. Ross, воспалительная природа атеросклероза признается большинством ученых. С тех пор во всех проведенных исследованиях и опубликованных статьях идея о воспалении как сути атеросклеротического процесса является доминирующей, и она оттеснила на второй план значимость гиперхолестеринемии как фактора атерогенеза. Однако в большинстве опубликованных в последнее время работ тезис о значимости воспаления в патогенезе проатерогенных нарушений метаболизма приобрел декларативный характер, так как каждый автор вкладывает в это понятие свое значение.

В течение двух десятилетий исследований периодически появляются сообщения об обнаружении ассоциации между воспалением в тканях пародонта и сердечно-сосудистой патологией. Но каков характер и значение этой ассоциации? Все еще дискутабельным является вопрос об этиологической зависимости воспаления пародонта и ишемической болезни сердца (проатерогенный спектр метаболических нарушений) или мозгового инсульта - это причина или случайное совпадение? Этот же аспект рассматривается и в актуальной современной проблеме -пародонтит (воспаление) и метаболический синдром, пародонтит и величина инфарктной зоны миокарда, субклиническое воспаление и патология печени.

В ряде современных эпидемиологических, клинических и экспериментальных исследований получены противоречивые результаты в отношении пародон-тита и ишемической болезни сердца (ИБС), что связано с общими дополнительными факторами риска, характерными для этих нозологических форм (старение, мужской пол, социально-экономический статус, курение). Тем не менее, исследования отношений между уровнями антител сыворотки к пародонтопатогенам (Porphyromonas gingivalis, Actinobacillus actinomycetemcomitans) и факторами риска ИБС (проатерогенный липидный профиль) подтверждают эту зависимость [Pussinen P.J. et al., 2004, 2005; Carayol N. et al., 2006; Chappie I.L., Milward M.R., Dietrich Т., 2007].

По мнению Borges Р.К. et al. (2007), хронические инфекции с субклиническим течением (например, пародонтит), могут играть большую роль в развитии атеросклероза, чем считается в настоящее время. Снижение частоты сердечнососудистых заболеваний на фоне приема статинов обусловлено не только гиполи-пидемическим, но и противовоспалительным действием этих препаратов.

В любом случае речь должна идти об источнике флогогенного (воспалительного) казуального фактора.

Микрофлора кишечника, а также «сброс» в кровоток печени липидов при абдоминальном ожирении и метаболических нарушениях, рассматриваются как возможные факторы инициации и прогрессирования провоспалительного статуса организма.

Но есть еще одна система. Микрофлора полости рта является неотъемлемой частью нашего организма. Количество бактерий в полости рта по числу видов и по содержанию в единице материала конкурирует с желудочно-кишечным трактом, а провоспалительные цитокиновый спектр при любом типе воспаления может стать инициатором системных нарушений. Не вызывает сомнения, что при воспалении пародонта иммунные и метаболические процессы протекают параллельно, и в их основе лежат общие механизмы, связанные с дисбалансом (врожденным и/или приобретенным) между продукцией «провоспалительных» («про-остеопоретических») и «антивоспалительных» («антиостеопоретических») цито-кинов, а также с соответствующими изменениями активности нейтрофилов и макрофагов как клеток-эффекторов.

Таким образом, воспаление как одна из древнейших проблем медицины, а также связанные с ней вопросы реактивности и изменения различных компонентов гомеостаза, включающие и комплекс метаболических изменений, не только не утратила своего значения, но, как показывает изменившаяся структура заболеваемости, приобретает сегодня еще большую актуальность.

Цель работы - исследовать в эксперименте общие закономерности метаболических изменений и параметры иммунной реактивности (врожденного и приобретенного иммунитета) при развитии липополисахаридного и иммуноком-плексного воспаления в ткани пародонта; определить патофизиологические основания формирования компонентов метаболического синдрома и выявить общие закономерности развития локального воспалительного процесса, формирующие проатерогенный спектр нарушений.

Основные задачи исследования.

1. Изучить изменения основных метаболических показателей крови (белковый спектр, углеводы, липиды, электролиты) при развитии липополисахаридного и иммунокомплексного (феномен Артюса) воспаления пародонта.

2. Изучить функциональную активность нейтрофилов (провоспалительная и прооксидантная активация и интенсивность апоптоза) в динамике развития воспаления пародонта различного генеза (липополисахаридная и иммунокомплекс-ная модели).

3. Изучить функциональную активность перитонеальных макрофагов (интенсивность процессов фагоцитоза, хемотаксиса и продукцию активных форм кислорода) в динамике развития воспаления пародонта различного генеза.

4. Изучить некоторые параметры функциональной активности Т- хелперов-1 и Т- хелперов-2 (определение интерферона -у и интерлейкина-4) в динамике развития воспаления пародонта ЛПС и иммунокомплексного генеза.

5. Дать сравнительный патофизиологический анализ метаболических и иммунологических изменений в организме при развитии воспаления пародонта различного генеза.

Научная новизна работы заключается в том, что впервые проведено комплексное сравнительное исследование метаболических показателей крови и параметров врожденного и приобретенного иммунитета при двух видах воспалительной реакции пародонта различного генеза - липополисахаридного и иммуноком-плексного (феномен Артюса). Впервые показано, что при обеих моделях патологического процесса развивается воспалительная реакция, характеризующаяся стадийностью, нарушениями липидного метаболизма, проатерогенным спектром липидного профиля (повышение холестерина, ЛПОНП, триглицеридов). Впервые показано, что развитие ЛПС - зависимого воспаления характеризуется гипоальбу-минемией и гипогликемией на всех исследуемых этапах, а также достоверным повышением ЛДГ и КФК. Эта же тенденция воспроизводится в течение развития иммунокомплексного воспаления, что в соединении с вышеотмеченными изменениями липидного спектра может рассматриваться как комплексный метаболический ответ организма на воспалительный процесс.

В работе впервые изучено в сравнительном аспекте состояние иммунной реактивности при локальном воспалении пародонта ЛПС и аллергического генеза. Исследованы функциональные свойства и апоптоз нейтрофилов и показано, что в динамике развития обоих типов воспаления наблюдаются однонаправленные изменения функциональной активности полинуклеаров - прогрессивное снижение интенсивности апоптоза и повышение генерации активных форм кислорода на протяжении первых 4-х недель воспаления с дальнейшей динамикой к нормализации функциональных характеристик нейтрофилов.

Интенсивность фагоцитоза и хемотаксиса макрофагов, их способность к генерации активных форм кислорода также возрастает на протяжении первых 4-х недель воспалительного процесса. На 5-й неделе между показателями микробного и аллергического воспаления наблюдаются некоторые различия — при аллергическом воспалении показатели фагоцитоза (кроме «кислородного взрыва») продолжают возрастать, еще более увеличиваясь к 5-й недели.

Впервые в динамике воспалительных реакций пародонта различного ге-неза исследован цитокиновый спектр в аспекте иммунного ответа, зависимого от типа Т- хелперного ответа, который характеризуется повышением содержания у -интерферона и интерлекина -4 на протяжении первых 4-х недель воспаления. В последующем показатели гуморального и клеточного иммунитета снижаются при микробном воспалении и продолжают повышаться при феномене Артюса.

Корреляционный анализ показал наличие сильной положительной связи интенсивности фагоцитоза и факторами, обуславливающими эту интенсивность: с процессами хемотаксиса и накоплением в макрофагах свободных радикалов кислорода, а также с факторами клеточного и гуморального иммунитета (у - итерфе-роном и интерлейкином 4), что свидетельствует о единой направленности функциональных изменений иммунной системы при обоих типах воспаления пародонта.

Корреляционноый анализа между содержанием у - интерферона и интенсивностью апоптоза показывает наличие сильной достоверной отрицательной связи между данными показателями, что позволяет высказать предположение о том, что у - интерферон и зависимые от него механизмы могут играть роль регулятора апоптоза и дают возможность наметить пути воздействия на эти регуля-торные процессы с целью управления активностью апоптоза.

Теоретическая и практическая значимость работы. Сформулирована концепция о метаболическом варианте течения воспалительной реакции в ткани пародонта, сопровождаемом проатерогенными нарушениями. Совокупность полученных данных и их анализ дают представление о системном характере метаболических и иммунологических изменений в организме при развитии локального воспаления пародонта. Полученные результаты показывают, что локальное воспаление пародонта как липополисахаридного, так и иммунокомплексного генеза вызывает значительную перестройку иммунной системы организма, что выражается в повышении фагоцитарной активности, увеличении прооксидантной активности и понижении интенсивности апоптоза полинуклеаров, Ослабление программируемой клеточной гибели в острый период воспаления пародонта, независимо от его генеза, можно рассматривать как адаптивную и компенсаторную реакцию, направленную на поддержание потенциала фагоцитарно-активных клеток. Наличие сильной достоверной отрицательной связи между содержанием у — интерферона и интенсивностью апоптоза позволяет высказать предположение о том, что у -интерферон и зависимые от него механизмы могут играть роль регулятора апоптоза и дают возможность наметить пути воздействия на эти регулятор-ные процессы с целью управления при воспалении активностью процесса программируемой клеточной гибели.

Положения, выносимые на защиту:

- Локальное воспаление пародонта липополисахаридного и иммунокомплексного генеза оказывают существенное влияние на метаболический гомеостаз организма, формируя его проатерогенный спектр.

- Локальное воспаление пародонта как липополисахаридного, так и иммунокомплексного генеза вызывает значительную перестройку иммунной системы организма, что выражается в повышении функциональных параметров нейтрофи-лов и макрофагов, увеличении генерации активных форм кислорода и хемотакси-ческой активности и понижении интенсивности апоптоза полинуклеаров на протяжении первых 4-х недель воспаления.

- Ослабление программируемой клеточной гибели в острый период воспаления пародонта, независимо от генеза воспалительной реакции, можно рассматривать как адаптивную и компенсаторную реакцию, направленную на реализацию потенциала фагоцитарно-активных клеток.

- Уровень концентрации цитокинов у - интерферона и ИЛ-4 при локальном воспалении пародонта увеличивается на протяжении первых 4-х недель процесса, что говорит об однонаправленности изменений параметров клеточного и гуморального иммунитета при воспалительной реакции пародонта различного генеза.

- Сильная отрицательная корреляционная связь между содержанием у - интерферона и интенсивностью апоптоза нейтрофилов при обоих типах воспаления свидетельствует об участии клеточных факторов иммунитета в регуляции апоптоза полинуклеаров.

- Исследование метаболических показателей крови и функциональной активности нейтрофилов и макрофагов, а также функции Т-хелперов первого и второго типа (уровень у - интерферона и ИЛ-4 при двух типах воспаления — микробном и иммунокомплексном) свидетельствует о типовых закономерностях изменения гомеостаза и иммунной реактивности организма, независимо от генеза воспалительной реакции.

Апробация работы и публикации по теме.

Работа апробирована на Всероссийской научно-практической конференции «Артериальная гипертония в ряду других сердечно — сосудистых факторов риска», Москва, 2002; на Всероссийской научно-практической конференции «Актуальные вопросы артериальной гипертонии», Москва, 2003; на Втором международном симпозиуме «Проблемы ритмов в естествознании», Москва, 2004; на 3 Международной конференции «Болезни цивилизации в аспекте учения В.И.Вернадского», Москва, 2005; на 6 Международной научно - практической конференции «Здоровье и образование в 21 веке» Москва, 2005; на 7 Международной научно — практической конференции «Здоровье и образование в 21 веке» Москва, 2006; на 8 Международном Конгрессе «Здоровье и образование в 21 веке: концепция болезней цивилизации» Москва 2007; на совместном заседании кафедр общей патологии и патофизиологии и патологической анатомии РУДН, Москва, 2007 год.

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 30 работ, в том числе 10 в рецензируемой печати.

Структура диссертации. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, методической главы, 8-ми глав, в которых изложены результаты собственных исследований, главы обсуждения, выводов и списка литературы. Диссертация изложена на 277 страницах машинописного текста, содержит 33 таблицы и 18 рисунков, библиография состоит из 627 источников отечественной и зарубежной литературы.

выводы

1. При развитии локального воспаления пародонта как липополисахаридной, так и иммунокомплексной природы (феномен Артюса) изменения метаболизма липидов, белков и углеводов носят однотипный характер. При липополисахаридном воспалении отмечается гипоальбуминемия и гипогликемия, повышение уровня мочевины и креатинина, повышение креатининфосфокиназы. При моделировании феномена Артюса степень выраженности этих изменений значительно меньше.

2. При липополисахаридном воспалении пародонта изменения метаболизма выражены в большей степени, что касается, прежде всего, показателей липидного обмена, заключающихся в повышении холестерина, ЛПОНП и триглицеридов и в тенденции к снижению ЛПВП, что характеризует развитие проатерогенного спектра лип и дных нарушений.

3. При длительном и повторном локальном введении антигена в пародонт (моделирование иммунокомплексного типа воспалительной реакции и в модели ЛПС-зависимого воспаления) развивается воспалительный процесс, характеризующийся стадийностью, активацией кислородного метаболизма нейтрофилов и макрофагов, усилением хемотаксической функции и фагоцитарной активности макрофагов, достоверным снижением апоптоза полиморфонуклсаров.

4. При моделировании воспаления микробными липополисахаридами кислородозависимые механизмы биоцидности нейтрофилов находятся в состоянии гиперреакгивности в течение 1 — 4-х недель, что может способствовать реализации механизмов тканевой альтерации кислородными радикалами. Этот же период характеризуется и снижением интенсивности апоптоза полиморфонуклеаров (замедленный апоптоз в периоды 1-4 недели).

5. Моделирование иммунокомплексного воспаления пародонта (феномен Артюса) сопровождается активацией прооксидантной активности полиморфонуклеарных лейкоцитов и снижением генетически детерминированной (апоптоз) гибели нейтрофилов в периоды 1-3 недели. В периоды 4-5 недель происходит статистически достоверная нормализация параметров провоспалительной активации полиморфноядерных клеток (образование кислородных радикалов) и ускорение апоптоза нейтрофилов, обеспечивая таким образом «терминацию» воспаления.

6. При моделировании липополисахаридного воспаления активация фагоцитарной активности перитониальных макрофагов в периоды 1-4 недели сменяется статистически достоверным снижением фагоцитоза (захват тестирующего бактериального антигена) в отдаленный период (5 недель), что может привести к замедленному поглощению апоптозных клеток.

7. Динамика изменений хемотаксической и прооксидантной активности макрофагов в динамике воспаления (1-5 недель) отражает закономерности изменения прооксидантного статуса полиморфонуклеаров с характерной спецификой различий между исследуемыми моделями воспаления.

8. В динамике развития экспериментального воспаления пародонта липополисахаридного и иммунокомплексного генеза (воспроизведение III типа иммунопатологических процессов по Кумбсу и Джеллу) отмечается нарастание образования у-интерферона и интерлейкина-4, что свидетельствует о стимуляции процессов клеточного и гуморального иммунитета во все исследуемые периоды.

9. Патофизиологический анализ параметров иммунитета в динамике воспаления, исследуемого на двух моделях, (фагоцитоз тестируемого антигена макрофагами и хемотаксис, продукция активных форм кислорода макрофагами и нейтрофилами, а также интерлейкинов, характеризующих «дихотомию» клеточного и гуморального иммунитета), позволяют охарактеризовать механизмы развития воспалительной реакции липополисахаридного и иммунокомплексного генеза, что является основой для определения ключевых элементов патогенеза и терапевтических подходов с учетом выявленных изменений параметров врожденной и приобретенной резистентности.

10. Кросскорреляционный анализ всех исследуемых показателей средних значений по срокам процесса и в динамике развития воспаления подтвердил отсутствие принципиальных отличий в изменениях метаболизма, который вытекает из анализа изменений абсолютных значений изучаемых показателей метаболизма при двух различных по генезу (микробном и аллергическом) воспалительных процессах, поскольку подавляющее большинство корреляционных связей являются однонаправленными. В динамике процесса наблюдается увеличение значений коэффициента корреляции по основным видам обмена, что говорит об усилении «степени жёсткости» метаболических систем и снижении их адаптационных возможностей.