Автореферат и диссертация по медицине (14.00.25) на тему:Механизмы кардиопротекторного действия и параметры фармакокинетики n-тирозола

На правах рукописи

ГОЛУБЕВА ИРИНА ВЛАДИМИРОВНА

МЕХАНИЗМЫ КАРДИОПРОТЕКТОРНОГО ДЕЙСТВИЯ И ПАРАМЕТРЫ ФАРМАКОКИНЕТИКИ л-ТИРОЗОЛА

14.00.25 - фармакология, клиническая фармакология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Томск-2007

003068562

Работа выполнена в ГУ научно-исследовательском институте фармакологии Томского научного центра СО РАМН

Научный руководитель:

доктор биологических наук, профессор Плотников Марк Борисович Научный консультант:

доктор медицинских наук Чернышева Галина Анатольевна Официальные оппоненты:

доктор биологических наук Боровская Татьяна Геннадьевна

доктор биологических наук Ласукова Татьяна Викторовна

Ведущее учрввдоше: ГОУ 6ПО «Новосибирский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию»

Защита состоится "_"_2007 г. в "_" часов на заседании

диссертационного совета Д.001.031.01 при ГУ НИИ фармакологии Томского научного центра СО РАМН (634028, Томск, пр. Ленина, 3)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГУ НИИ фармакологии Томского научного центра СО РАМН

Автореферат разослан "_"_2007 г.

Ученый секретарь диссертационного совета,

кандидат биологических наук

Амосова Е.Н.

3

Введение

Актуальность проблемы. Проблема совершенствования фармакотерапии ишемической болезни сердца и особенно такого ее опасного проявления, как инфаркт миокарда, является одной из наиболее актуальных в современной фармакологии и кардиологии [Панкин В.З. и др., 2000; Зенков Н.К. и др., 2001; Голиков А.П. др., 2005]. За последние годы накоплен значительный материал, указывающий на то, что важным звеном в цепи нарушений, развивающихся при сердечно-сосудистой патологии и значительно осложняющих ее течение, является синдром повышенной вязкости крови, который выявляется в острый период инфаркта миокарда и сохраняется после тромболитиче-ской терапии [Turczynski В. et al., 2002; Canni G., 2003]. Связано это с тем, что даже после успешного тромболизиса окклюзированного сосуда возникающая вслед за ишемией реперфузия вызывает окислительный стресс [Hoch et. al., 1997; Becker et. al., 1999; Bolli, 1999; Levraut et. al., 2003], в условиях которого нарушаются реологические свойства крови, возникают расстройства микроциркуляции [Мчедлишвюш Г.И., 1989; Staitz J.E., 1991; Durussel JJ. et al., 1998]. Однако в настоящее время отсутствуют препараты для внутривенного введения при остром коронарном синдроме, обладающие антиоксидант-ными и гемореологическими свойствами [Машковский М.Д., 2007]. Существующий аналог для парентерального введения пентоксифиллин обладает гемореологическими свойствами и улучшает деформируемость эритроцитов, однако инфаркт миокарда является противопоказанием к его применению [Дроздов С.А., 1997; Машковский М.Д., 2007]. Другие препараты, обладающие антиоксидантной и гемореологической активностью (танакан, асковер-тин), также не имеют показаний к применению при инфаркте миокарда.

В результате целенаправленного скрининга перспективных гемореоло-гических средств среди веществ, обладающих антиоксидантной активностью, было выявлено соединение л-тирозол (4-(2-гидроксиэтил) фенол), являю-

щийся агликоном гликозида салидрозида - одного из действующих начал ро-диолы розовой.

В эксперименте на модеш «гипервязкости» крови in vitro л-тирозол при пероральном введении проявлял гемореологические свойства, что выражалось в ограничении возрастания вязкости крови в широком диапазоне скоростей сдвига, а также в снижении агрегационной способности эритроцитов. На модели АДФ-индуцированной агрегации тромбоцитов и-тирозол проявил выраженный антиагрегантный эффект [Плотников М.Б. и др, 2004]. Введение п-тирозола крысам с моделью адреналовых аритмий сопровождалось умеренным антиаритмическим эффектом [Маймескулова Л.А., Маслов Л.Н., 1998].

Цель исследования: исследование механизмов кардиопротекторного действия и-тирозола и параметров его фармакокинетики.

Задачи исследования:

1. На модели острой ишемии миокарда с репефузией у крыс изучить влияние и-тирозола:

- на показатели системной гемодинамики;

- на параметры электрической нестабильности миокарда;

- на показатели перекисного окисления липидов.

2. Исследовать механизмы антиоксидантной, гемореологической, анти-тромбоцитарной и аититромботической активности и-тирозола.

3. Исследовать основные фармакокинетические параметры n-тирозола после внутривенного введения.

Научная новизна.

Впервые установлено, что применение и-тирозола в условиях острой ишемии миокарда с реперфузией улучшает сократительную функцию сердца и стабилизирует показатели центральной гемодинамики.

Впервые показано, что на модели ишемии миокарда с реперфузией и-тирозол проявляет отчетливую антиаритаическую активность, которая выражается в снижении числа животных с тяжелыми формами аритмий, возраста-

нии числа животных без аритмий, а также защите от гибели вследствие возникновения аритмий.

На модели тромбоза сонной артерии впервые выявлена антитромботи-ческая активность и-тирозола. В условиях острой ишемии миокарда с ре-перфузией получены новые данные об антитромбоцитарной и гемореологи-ческой активности и-тирозола.

Проведенные исследования фармакокинетических характеристик п-■гирозола при внутривенном способе введения позволили установить, что препарат быстро проникает в ткани хорошо перфузируемых органов: мозг, сердце, почки. Период полувыведения л-тирозола составляет в среднем около 70 мин.

Научно-практическая значимость. Результаты исследования обосновывают целесообразность проведения клинических испытаний п-тирозола у больных с острым коронарным синдромом.

Публикации. По материалам проведенных исследований опубликовано 9 работ, из них 3 в изданиях, рекомендованных ВАК.

Структура и объем диссертации. Работа изложена на 124 страницах машинописного текста. Состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, результатов собственных исследований, заключения, выводов и списка литературы, включающего 200 источников, из них 72 на иностранных языках. Диссертация содержит 16 таблиц и 16 рисунков.

Апробация работы. Материалы диссертации представлены на Российском национальном конгрессе кардиологов (Томск, 2004), конференции молодых ученых НИИ фармакологии ТНЦ СО РАМН (Томск, 2005), IV Всероссийской научной конференция (Сыктывкар, 2006), межрегиональной научной конференции «Экспериментальные и клинические исследования новых лекарственных средств» (Томск, 2006).

Материалы и методы исследования

Эксперимента проведены на 220 наркотизированных крысах-самцах Вистар массой 200-350 г. Животные получены из отдела экспериментальных биологических моделей НИИ фармакологии ТНЦ СО РАМН. Животных содержали на стандартном пищевом рационе вивария со свободным доступом к воде и пшце. При проведении экспериментов мы руководствовались рекомендациями, изложенными в Приказе МЗ СССР за № 755 от 12 августа 1977 г. Все болезненные процедуры проводили на наркотизированных животных. Эвтаназию выполняли в соответствии с «Правилами проведения работ с использованием экспериментальных животных» передозировкой эфирного наркоза.

В работе использовали субстанцию и-тирозола, изготовленную в соответствии с опытно-промышленным регламентом на опытном производстве Новосибирского института органической химии им. Н.Н. Ворожцова СО РАН. Субстанция w-тирозола представляет собой белый мелюифисталличе-ский порошок со специфическим запахом. Растворителем для и-тирозола служил 0,9% раствор натрия хлорида. В качестве препаратов сравнения применяли эмоксипин (Московский эндокринный завод) и пентоксифиллин (ОАО Новосибирскхимфарм). В работе использовали альбумин (НПО «Вири-он», Томск), метогекситал натрия («Бриетал», Эли Лилли, Германия), ионол (2,6-ди-трет-бутил-4-метилфенол, «Sigma»).

Изучение влияния и-тирозола на вязкость крови проводили на модели «гипервязкости» крови in vitro {Плотников М.Б. и др., 1996]. Вязкость крови определяли на ротационном вискозиметре АКР-2 в диапазоне скоростей сдвига 3-300 с"1. Спонтанную агрегацию эритроцитов исследовали силлекто-метрическим методом [Левтов В.А. и др., 1982]. Получение богатой и бедной тромбоцитами плазмы и подсчет числа тромбоцитов проводили в соответствии с методом, предложенным З.С. Баркаганом и соавторами (Балуда В.П., Барка-ганЗ.С., 1980].

Амплитуду агрегации тромбоцитов оценивали в стандартизованной плазме (400±30 тыс. в 1 мм3 пробы) на приборе АТ-02 по методу, предложенному Born [Born G.V.R., 1962]. Агрегатограммы регистрировали с помощью самописца Recorder 2210.

Модель артериального тромбоза воспроизводили по методу A.B. Мак-сименко и Е.Г. Тшценко [1999], который заключается в аппликации на сонную артерию 10% раствора хлорида железа (П).

Эксперименты по моделированию постишемической дисфункции миокарда проводили путем лигирования левой коронарной артерии на уровне нижнего края левого ушка по методу А.Х. Когана [1979].

В экспериментах по оценке действия и-тирозола на показатели системной гемодинамики измеряли центральное венозное давление (ЦВД) и системное артериальное давление (САД) прямым методом, а так же минутный объем кровообращения (МОК). Для регистрации кривых термодшпоции при оценке МОК в аорту через общую сонную артерию вводили термисторный зонд, а в правое сердце через правую яремную вену имплантировали катетер для введения физиологического раствора с температурой 6,0±2,5 °С (Рогацкий Г.Г. и др., 1975]. Ударный объем, общее периферическое сопротивление рассчитывали по формулам [Селезнев С.А. и др., 1976].

Влияние и-тирозола на процессы перекисного окисления липидов в миокарде проводили в условиях 45-минутной ишемии миокарда и 15-минутной рециркуляции. л-Тирозол вводили на 15 мин ишемии.

Содержание диеновых и триеновых коягьюгатов оценивали по характерным для сопряжённых двойных связей пику поглощения при 232 нм и 270280 нм соответственно [Plazor Z., Kussela L., 1968]. Измерение проводили на спектрофотометре Hitachi модель 557. Основания Шиффа определяли по методу A. Tappel [1978] на спектрофлюориметре Hitachi модель 850 при возбуждении на длине волны 360 нм и эмиссии 460 нм с фильтром 390 нм. Антирадикальные свойства и-тирозола in vitro оценивали экспресс-методом опреде-

ления антирадикальной активности лекарственных веществ [Nishizawa М. et al., 2005]. Антиоксидантную активность л-тирозола in vitro определяли по степени ингибирования препаратом Fe/аскорбат-индуцированного окисления ТВИН-80 [Толмачева Н.В., 2000].

Эксперименты по оценке антиаритмического эффекта и-тирозола при профилактическом введении проводили на модели ишемии миокарда (10 мин) и реперфузии (10 мин), n-тирозол вводили профилактически за 10 мин до ишемии. Эксперименты по оценке влияния лечебного введения и-тирозола на электрическую нестабильность миокарда проводили на модели 45-минутной ишемии миокарда. и-Тирозол вводили на 10 мин ишемии. Оценку тяжести аритмий проводили с учетом критериев, приведенных в Методических указаниях по изучению антиаритмической активности фармакологических веществ [Каверина Н.В. и др., 2000] и других критериев [Соленкова Н.В. и др., 2005; Johnston K.M. et al., 1980].

Для изучения фармакокинетических показателей применяли методы количественного определения и-тирозола в крови и моче [Великанова В.И. и др., 1993]. Фармакокинетические показатели рассчитывали по бескамерной модели В.К. Пиотровского [1986].

Оценку связывания и-тирозола с белками плазмы проводили в условиях равновесного диализа с использованием полупроницаемой мембраны VISKING TYP 20/32 (FEINBIOCHEMICA, New York).

Полученные результаты статистически обрабатывали с использованием пакета статистических программ "Statistica for Windows 5.0". В таблицах представлены средние значения показателей и стандартные ошибки среднего значения. Нормальность распределения оценивали с помощью показателей асимметрии и эксцесса; достоверность различий (р<0,05) между сериями определяли с помощью Mann-Whitney U test, t-критерия Стьюдента и критерия

Результаты исследований Для оценки влияния и-тирозола на показатели системной гемодинамики моделировали 60-минутную окклюзию левой коронарной артерии в верхней ее трети на уровне нижнего края ушка левого предсердия с последующей реперфузией в течение 60 мин [Ольбинская Л.И., Литвицкий П.Ф., 1986]. В группе ложнооперированных животных в ходе эксперимента отмечалось умеренно выраженное снижение системного артериального давления (САД) на 24-33%, минутного объема кровообращения (МОК) на 7-16%, ударного объема (УО) на 21-28%, общего периферического сопротивления (ОПС) на 15-30% и компенсаторное повышение частоты сердечных сокращений (ЧСС) с последующей тенденцией к восстановлению показателей (рис. 1). Эти изменения, очевидно, были обусловлены торакотомией и манипуляциями на сердце, а также условиями, возникающими в процессе искусственной вентиляции легких. Показатели ЭКГ у ложнооперированных крыс в течение 2 ч эксперимента сохранялись на близких к исходному значениях.

6 контрольной группе животных выявлено развитие резко выраженной сократительной дисфункции сердца. УО неуклонно снижался, составляя в конце периода ишемии 52%, а через 1 ч рециркуляции лишь 37% от исходного значения на фоне роста цеэтрального венозного давления (ЦВД) в 3 раза. Падение УО (на 49-63%) приводило к соответствующему снижению показателей МОК (на 50-62%), поскольку компенсаторная тахикардия не развивалась, что в совокупности со снижением ОПС на 7-27% вызывало развитие резкой гипотензии: САД составляло только 36% от исходного значения (рис. 1).

В группе животных, получавших и-тирозол, показатели, характеризующие насосную функцию сердца, существенно превышали уровень контрольной группы как в период ишемии, так и в реперфузионном периоде. После введения и-тирозола МОК и УО поддерживались на уровнях, в 1,6-2,0 и 1,4-1,9 раз превосходящих соответствующие значения у крыс контрольной группы.

А

ММ рт. ст.

Ш Исходное значение © Ишемия 60 мин Ш Реперфузия 60 мни

Л О Контроль Эмоксипин п-Тирозол

Б

140 120 100 80 60 40 20 0

3 Исходное значение В Ишемия 60 мига Щ: Реперфузия 60 мин__

Контроль

Эмокйигаи

и-Тнрозол

Рис. I. Влияние внутривенного введении л-тирозола (20 мг/кг) и эмоксипинй (10 мг/кг) на системное артериальное давление (А) и минутный объем кровообращения (Б).

ЛО - ложнооперированные животные; + - р<0,05 по сравнению со значениями контрольной группы;

* - р<0,05 по сравнению с исходными значениями;

# - р<0,05 по сравнению с группой ЛО животных.

Возрастанию МОК в определенной степени способствовал умеренно выраженный (6%) положительный хронотропный эффект препарата. Увеличение ЧСС на 8-15% после введения л-тирозола соответствовало динамике показателя в ложнооперированной группе и имело, по-видимому, компенсаторный характер. Улучшение амфатительной функции сердца ограничивало рост ЦВД, а поддержание ОПС на близком к исходному уровне способствовало сохранению более высоких значений САД (на 34-39% выше по отношению к группе контрольных животных) (рис. 1).

Исследование антиаритмической активности л-тирозола при профилактическом введении показало, что острая окклюзия коронарной артерии в контрольной группе приводила к возникновению нарушения ритма желудочков у 84% животных, а последующая реперфузия -у 89% особей, что согласуется с данными других авторов [Соленкова ШЗ. и др., 2005].

Предварительное введение крысам я-тирозола существенно изменяло структуру нарушений ритма сердца ишемического генеза в сторону увеличения количества животных без аритмий и снижения доли крыс с множественными желудочковыми экстрасистолами и тахиаритмиями, при этом также отмечена тенденция к снижению числа животных с желудочковыми фибрилляциями, что согласуется с данными Л.А. Маймескуловой [1998], полученными на модели адреналовых аритмий. Распределение животных по спектру наблюдающихся аритмий существенно отличалось от контрольного (р<0,03).

При сопоставлении распределения животных по степени тяжести ише-мических аритмий в контрольной группе и группе с предварительным введением л-тирозола было показано, что л-тирозол предупреждал появление в период ишемии наиболее тяжелой формы аритмий (4 балла) и увеличивал долю животных с тяжестью аритмий 0 баллов. и-Тирозол достоверно снижал средний уровень тяжести желудочковых аритмий с 2,5±0,3 балла (контроль) до 1,1±0,3 балла (рис. 2).

И Контроль □ п-Тнрозол

При исследовании воздействия м-тирозола на структуру реперфузионных аритмий было обнаружено снижение процента животных с фибрилляцией и множественной экстрасистолией. Наблюдалась тенденция к увеличению числа животных без желудочковых аритмий. Распределение животных по спектру наблюдающихся аритмий достоверно отличалось от контрольного.

При сравнении распределения животных но степени тяжести реперфу-зионных аритмий в контрольной группе и в группе с введением л-тирозола были отмечены тенденции к увеличению доли животных с минимальной тяжестью аритмий и снижению количества животных с максимальной тяжестью нарушений ритма сердца (рис. 2).

ИШЕМИЯ

%

О баллов 1 балл 2 балла 3 балла 4 балла

РЕПЕРФУЗИЯ

О баллов 1 балл 1 балла 3 балла 4 балла

Рис. 2. Влияние предварительного внутривенного введения в-тирозола (20 мг/кг) на распределение животных по тяжести аритмий. * - р<0,05 по сравнению со значениями в контрольной группе.

В группе контрольных животных в течение 20 мин эксперимента в фазу реперфузии погибло 4 животных, из которых 3 - по причине развития атрио-вентрикулярной блокады и тяжелых гемодинамических расстройств. Одно животное погибло вследствие некупируемого приступа фибрилляции желудочков. В группе животных, получавших л-тирозол, гибели животных не отмечалось.

Введение л-тирозола крысам на 10 мин ишемии изменяло спектр наблюдающихся аритмий шпемического генеза. В группе животных, получавших и-тирозол, число животных без желудочковых аритмий было достоверно выше по сравнению с группой контрольных животных на 36%. Единичных желудочковых экстрасистол не было отмечено ни в контрольной, ни в опытной группах. Множественные желудочковые экстрасистолы в контрольной группе возникали на 30% чаще, чем в труппе животных, получавших я-тирозол, однако отличие не носило характера статистической значимости. Желудочковые тахикардии и фибрилляции в опытной группе не были зафиксированы, а в контрольной 1руппе возникали в 22% и 6% случаев соответственно, и хотя отмеченные различия не являлись достоверными, наблюдалась отчетливая тенденция (р<0,1) к уменьшению в опытной труппе количества животных с желудочковыми тахикардиями.

Введение л-тирозола на 10 мин ишемии достоверно увеличивало количество животных с аритмиями тяжестью 0 баллов и снижало средний уровень тяжести желудочковых аритмий (рис. 3).

В группе контрольных животных в течение 1 сут после реперфузии погибло 7 животных из 18 (39%). В группе животных, получавших и-тирозол, погибло 1 животное из 13 (8%), что достоверно ниже показателя контрольной группы.

Для исследования антирадикальной активности л-тирозола нами была изучена кинетика взаимодействия препарата со стабильным радикалом дифе-нилпикрилгидразилом (ДФПГ). В качестве препарата сравнения был выбран

ионол. При ис поль-; о ванн и в качестве растворителя хлороформа л-тирозол показал антирадикальную активность (41%), сопоставимую с таковой у ионола (51%),

ИШЕМИЯ 10-45 МИН

® Контроль □ п-Тирозол

О баллов

i балл

2 балла

3 балла

4 балла

Рис. 3. Влияние внутривенного введения и-тирозола на 10 мин ишемии на распределение животных по тяжести аритмий, * - р0,05 по сравнению со значениями в контрольной группе.

Исследование антиокислительной активности н-тирозола в водной среде проводили in vitro на модели Fe-аскорбэт-индуциро ванного окисления моно-олеата сорбитана (ТВИН-80). Об антиокислительной активности судили по торможению накопления в среде инкубации ТЕК-активных продуктов- В концентрации 2,5ТО"1 М «-тирозол достоверно ограничивал окисление моноолеата сорбитана и накопление ТБК-активных продуктов на 19%, а в концентрации 5*10"4 М ингибирование составило 23%.

Эксперименты по исследованию влияния я-тирозол а на процессы ПОЛ в миокарде проводили на модели острой ишемии миокарда с ре перфузией. Введение и-тирозол а ограничивало липопероксидацию: к 15 мин ре перфузии уровень диеновых конъюгатов и тр неновых конъюгатов был достоверно ниже в сравнении с контролем на 17% и 20% соответственно - Повышение индекса окислегаюсги липидов в группе крыс, получавших «-тирозол, относительно

значений интактных животных не достигало уровня статистической значимости.

В экспериментах по исследованию гемореологической активности в группе контрольных животных инкубирование крови в течение 60 мин при температуре 20,0±0,4 °С приводило к достоверному повышению вязкости крови в диапазоне скоростей сдвига от 5 с'1 до 300 с"1 на 14-45%.

У крыс, получавших пентоксифиллин внутривенно в дозе 100 мг/кг, вязкость крови до инкубации была ниже, чем в контроле, в диапазоне скоростей сдвига от 3 с"1 до 10 с'1 на 14-20% Инкубирование крови крыс этой группы приводило к повышению вязкости крови во всем диапазоне скоростей сдвига на 10-24%, при этом значения вязкости крови были ниже по сравнению с контролем в диапазоне скоростей сдвига от 3 до 7 с"1 и на 300 с"1 на 27-31 % и на 8% соответственно. Таким образом, на модели гипервязкости крови in vitro пентоксифиллин ограничивает возрастание вязкости крови.

При исследовании гемореологической активности у крыс, получавших и-тарозол, измерение вязкости крови до инкубации продемонстрировало более низкие значения по отношению к контролю на 8-13% в диапазоне скоростей сдвига 3-10 с*1. Инкубирование крови крыс этой группы также приводило к повышению вязкости крови на 4-14% во всем диапазоне скоростей сдвига, однако возрастание этого показателя было ниже по отношению к контролю на 6-29% (рис. 4).

Исходные значения полупериода агрегации эритроцитов в группах с введением как пентоксифиллина, так и и-тирозола статистически значимо не изменялись по сравнению с контролем. После инкубации наблюдалось значительное усилении агрегационной активности эритроцитов в контрольной группе: полупериод агрегации эритроцитов снизился на 35%, что свидетельствует о повышении агрегационной способности эритроцитов.

Б

Рис. 4. Влияние однократного внутривенного введения п-тирозола в дозе 20 мг/кг и пенгоксифиллина в дозе 100 мг/кг на вязкость крови до (А) и после (Б) инкубации в течение 1 часа при температуре 20±0,4 °С. Черные значки - р<0,05 по сравнению со значениями до инкубации; + - р<0,05 по сравнению со значениями в контрольной группе.

Инкубирование крови 1фыс, получавших пентоксифиллин и и-тирозол, не проводило к достоверному снижению полупериода агрегации эритроци-

тов; при этом значения этого показателя в обеих группах было на 47-50% выше по сравнению с контролем.

При оценке влияния и-тирозола на агрегационную способность тромбоцитов было установлено, что у крыс, получавших как пенгоксифиллин в дозе 100 мг/кг, так и л-тирозол в дозе 20 мг/кг, амплитуда АДФ-индуцированной агрегации тромбоцитов была на 36% ниже, чем в контроле (р<0,05). Таким образом, и-тирозол в дозе 20 мг/кг внутривенно однократно обладает антиаг-регантным эффектом на тромбоциты, сравнимым по выраженности с пенток-сифиллином в дозе 100 мг/кг.

Проведенное исследование показало, что л-тирозол при внутривенном введении обладает выраженной гемореалогической и антиагрегантной активностью, сопоставимой с таковой у пентоксифиллина.

Введение и-тирозола в период ишемии миокарда предупреждало развитие реологических нарушений крови: показатель вязкости крови во всем исследованном диапазоне скоростей сдвига не отличался от значений группы ложнооперированных животных и был достоверно ниже контрольных значений (рис. 5).

Рис. 5. Влияние однократного внутривенного введения и-тирозола (20 мг/кг) на вязкость крови при острой ишемии миокарда. + - р<0,05 по сравнению со значениями в контрольной группе.

Выявлялась отчетливая тенденция (р<0,1) к увеличению полупериода агрегации эритроцитов относительно контрольной группы.

При исследовании влияния и-тирозола на тромбообразование было установлено, что в группе крыс, получавших и-тирозол, у большинства животных (4 из 6) в течение всего периода наблюдения (90 мин) реакция в ответ на аппликацию хлорида железа (П) ограничилась снижением кровотока до 6274% от исходного уровня, то есть окклюзии сосуда не было выявлено. Полная окклюзия сонной артерии и падение кровотока до нуля выявлено у двух животных из шести; среднее время образования тромбов у этих крыс составило 22 мин. В контрольной группе у всех животных происходила полная остановка кровотока в течение 17±2 мин вследствие образования тромба. Таким образом, и-тирозол обладает выраженной антитромботической активностью.

Проведенное исследование фармакокинетики и-тирозола при внутривенном введении показало, что и-тирозол быстро проникает через гистогема-тические барьеры, включая гематоэнцефапический, и быстро поступает в органы с высоким уровнем перфузии (мозг, сердце, почки). Максимальная концентрация препарата в мозге, сердце, почках определялась уже на 1-й мин после введения. Стационарный объем распределения препарата значителен (табл. 1), что указывает на хорошее проникновение вещества не только в органы с высокой васкуляризацией, но и в ткани периферической камеры.

Препарат в средней степени связывается с белками плазмы: фракция связанного препарата составляет 0,26-0,30.

л-Тирозол довольно быстро элиминируется из организма: период его полувыведения составляет в среднем около 70 мин, а клиренс -19,8 мл мин ^кг"1.

Сравнение фармакокинетических параметров и-тирозола при его введении в дозах 50,100 и 200 мг/кг позволяет сделать вывод о линейности фармакокинетики препарата в исследуемом диапазоне доз (рис. 6,7, табл. 1).

Под влиянием многократного введения и-тирозола происходит ускорение метаболической элиминации, то есть наблюдается явление индукции (табл. 1).

С, м кг/мл

% мин

Рис. 6. Фармакокинетические кривые и-тирозола после внутривенного введения в дозах 50, 100 и 200 мг/кг.

1§с/о

Рис. 7. Динамика значений концентраций и-тирозола в плазме, нормированных по дозе.

Таблица 1

Параметры фармакокинетики и-тирозола после однократного внутривенного введения в дозах 50, 100 и 200 мг/кг и многократного внутривенного введения в дозе 100 мг/кг.

Параметры Однократное введение Многократное введение

Доза, мг/кг Доза, мг/кг

50 100 200 100

Со, мкг/мл 188,6±8,3 432,2±69,2 747,3±42,5 464,9±38,8

С1, л/мин 0,0094±0,0005 0,0079±0,0008 0,0080±0,0006 0,0110±0,0007*

Ке1, 1/мИН 0,0103±0,0010 0,0111±0,0014 0,0091±0,0004 0,0145±0,0004*

Т]/2, МИН 67,69±2,65 69,91±12,75 77,28±3,81 48,13±1,54

MRT, мин 74,61±3,19 80,71±17,62 77,02±3,84 42,52±2,12

MRTo, мин 11,406±0,256 13,85±2,52 13,64±0,37 8,45±1,19

MRTp, мин 63,21±2,99 66,85±15,70 63,38±4,08 34,07±1,04

Vss, л 0,698±0,030 0,592±0,080 0,620±0,058 0,4б1±0,017

Уо,л 0Д07±0,005 0,105±0,015 0,109±0,007 0,090±0,010

VP) л 0,591±0,026 0,488±0,072 0,511 ±0,005 0,371±0,015

AUC, мкг-мин мл"1 2156,7±125,3 5287,7±4б7,7 10230,9±748,9 3716,2±217,4

AUC/D, г-мин-мл"1 43,1±2,5 52,9±4,7 51,2±3,7 —

Примечание: * - изменения достоверны (р < 0,05) по отношению к соответствующим параметрам при однократном

внутривенном введении в дозе 100 мг/кг.

Исследование кинетики экскреции и-тирозола с мочой показало, что почечная экскреция не является основным путем выведения препарата из организма. За 24 часа после введения кумулятивная экскреция препарата почками составила лишь 1,6% от введенной дозы. По-видимому, основным путем элиминации и-тирозола из организма является его метаболизм в печени.

ВЫВОДЫ

1. Внутривенное введение и-тирозола крысам в период ишемии миокарда ослабляет проявления постишемической дисфункции миокарда: наблюдается повышение ударного объема сердца и минутного объема кровообращения, поддерживается более высокий уровень системного артериального давления и уменьшается рост центрального венозного давления в сравнении с контрольной группой. Эмоксипин в этих условиях менее эффективен вследствие сохранения гипотензивной реакции.

2. Внутривенное введение и-тарозола крысам в период острой ишемии миокарда ограничивает активацию перекисного окисления лшгадов в миокарде в реперфуз ионном периоде, что проявляется в уменьшении содержания первичных продуктов лшшдной пероксидации. Судя по снижению накопления ТБК-акгавных продуктов и взаимодействию с дифенилпикрилгидразилом в экспериментах in vitro, п-тирозол проявляет антиоксидантную активность как в липофильной, так и в гидрофильной средах.

3. Профилактическое внутривенное введение и-тирозола крысам увеличивает количество животных без желудочковых аритмий и снижает доли животных с множественными желудочковыми экстрасистолами и желудочковой тахикардией в период 10-минутной окклюзии левой коронарной артерии; в период реперфузии наблюдается снижение процента животных с фибрилляцией желудочков и множественной экстрасистолией.

4. Внутривенное введение и-тирозола крысам в период ишемии миокарда увеличивает количество животных без желудочковых аритмий и повышает выживаемость в течение 1 сут после реперфузии.

5. На модели гипервязкости крови in vitro и-тирозол проявляет геморео-логическую активность, сопоставимую с эффектом пентоксифиллина, за счет ослабления агрегационной активности эритроцитов и снижения вязкости цельной крови в широком диапазоне скоростей сдвига. Внутривенное введение п-тирозола крысам с ишемией миокарда ограничивает развитие синдрома повышенной вязкости крови.

6. и-Тирозол при однократном внутривенном введении крысам обладает антиагрегантным эффектом в отношении тромбоцитов, сопоставимым по выраженности с пентоксифиллином. На модели артериального тромбоза у крыс препарат снижает число животных с внутрисосудистым тромбозом и увеличивает среднее время образования тромба.

7. Исследование фармакокинетики и-тирозола показало, что препарат быстро проникает в органы с высоким уровнем перфузии и имеет значительный стационарный объем распределения. Препарат в средней степени связывается с белками плазмы и достаточно быстро элиминируется из организма: период полувыведения находится в пределах 68-77 мин. Под влиянием многократного введения и-тарозола происходит ускорение его элиминации. За 24 часа кумулятивная экскреция препарата почками составляет 1,6% от введенной дозы.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Кардиотропный эффект и-тирозола при экспериментальном инфаркте / В со-авт. с Чернышевой Г.А., Смольяковой В.И., Алиевым О.И., Толстиковой Т.Г., Крысиным А.П., Сорокиной И.В., Плотниковым М.Б. // Российский национальный конгресс кардиологов: Тезисы докладов. - Томск, 2004. - С. 523.

2. Влияние внутривенной инфузии и-тирозола на показатели системной и церебральной гемодинамики / В соавт. со Смольяковой В.И., Чернышевой Г.А., Плотниковым М.Б. // Естествознание и гуманизм: сборник научных работ. - Томск, 2004. - Т. 1. - С. 69.

3. Влияние л-тирозола на течение постишемической дисфункции миокарда у крыс / в соавт. с Чернышевой Г.А., Плотниковым М.Б., Смольяковой В.И., Толстиковой Т.Г., Крысиным А.П., Сорокиной И.В. // Бюл. эксперим. биол. и мед. - 2005, Приложение 1. - С. 73-75.

4. Фармакокинетика л-тирозола / В соавт. с Чернышевой Г.А., Смольяковой В.И., Плотниковым М.Б. // Актуальные проблемы экспериментальной и клинической фармакологии: Материалы конф. - Томск, 2005. - С. 612.

5. Оценка основных фармакокинетических параметров л-тирозола у крыс при внутривенном введении / В соавт. с Чернышевой Г.А., Смольяковой В.И., Плотниковым М.Б., Толстиковой Т.Г., Крысиным А.П., Сорокиной И.В. // Экспериментальная и клиническая фармакология. - 2005. - № 6. - С. 43-44.

6. Влияние л-тирозола на тромбообразование у крыс с моделью артериального тромбоза / В соавт. со Смольяковой В.И., Чернышевой ГА., Плотниковым М.Б. // Химия и технология растительных веществ: Тез. докл. IV Всеросий-ской научной конференции. - Сыктывкар, 2006. - с. 295.

7. Оценка основных фармакокинетических параметров л-тирозсша. Проверка гипотезы линейности и кумуляции / В соавт. с Чернышевой Г.А., Плотниковым М.Б., Смольяковой В.И. // Экспериментальная и клиническая фармакология. - 2006. - № 4. - С. 57-66.

8. Гемореологическая и антитромбоцитарная активность л-тирозола / В соавт. с Плотниковым М.Б., Чернышевой Г.А., Алиевым О.И., Смольяковой В.И., Красновым Е.А. // Бюл. эксперим. биол. и мед. - 2006, Приложение 2. - С. 30-31.

9. Влияние л-тирозола на вязкость крови и агрегацию тромбоцитов / В соавт. с Плотниковым М.Б., Чернышевой Г.А., Смольяковой В.Й., Масловым М.Ю., Крысиным А.П., Сорокиной И.В., Толстиковой Т.Г. // Бюл. эксперим. биол. и мед. - 2007. - № 1. - С. 67-69.

Отпечатано в ООО «Графика» 634050, г.Томск, ул.Беленца, 17 тел 52-65-15 Заказ № 1806 от 05 04.2007 Тираж 100 экз

Актуальность проблемы. Проблема совершенствования фармакотерапии ишемической болезни сердца и особенно такого ее опасного проявления, как инфаркт миокарда, является одной из наиболее актуальных в современной кардиологии [Ланкин В.ЗТ и др., 2000, Зенков Н.К. и др., 2001, Голиков А.П. др., 2005]. За последние годы накоплен значительный материал, указывающий на то, что важным звеном в цепи нарушений, развивающихся при сердечно-сосудистой патологии и значительно осложняющих ее течение, является синдром повышенной вязкости крови, который выявляется в острый период инфаркта миокарда и сохраняется после тромболитической терапии [Turczynski В. et al., 2002, Carmi G., 2003,]. Связано это с тем, что даже после успешнрго тромболизиса окклюзированного сосуда возникающая вслед за ишемией реперфузия вызывает окислительный стресс [Hoch et. al., 1997; Becker et. al., 1999; Bolli, 1999; Levraut et. al., 2003], в условиях которого нарушаются реологические свойства крови, возникают расстройства микроциркуляции [Мчед-лишвили Г.И., 1989; Stoltz J.E., 1991; Durussel J.J. et al., 1998], и, как следствие, возникает гипоксия тканей. Однако в настоящее время отсутствуют препараты, обладающие антиокси-дантными и гемореологическими свойствами и применяемые для внутривенного введения при остром коронарном синдроме [Маш-ковский М.Д., 2002]. Существующий аналог для парентерального введения пентоксифиллин обладает гемореологическими свойствами и улучшает деформируемость эритроцитов, однако инфаркт миокарда является противопоказанием к его применению [Дроздов С.А., 1997; Машковский М.Д., 2002]. Другие препараты, обладающие гемореологической активностью (танакан, асковертин), также не имеют показаний к применению при инфаркте миокарда.

В результате целенаправленного скрининга перспективных гемореологических средств среди веществ, обладающих антиокси-дантной активностью, было выявлено соединение, л-тирозол -(4-(2-гидроксиэтил) фенол), являющийся агликоном гликозида салидрозида - одного из действующих начал родиолы розоврй.

В эксперименте на модели «гипервязкости» крови in vitro л-тирозол при пероральном введении проявлял гемореологические свойства, что выражалось в ограничении возрастания вязкости крови в широком диапазоне скоростей сдвига, а также в снижении агрегационной способности эритроцитов. На модели АДФ-индуцированной агрегации тромбоцитов л-тирозол проявил выраженный антиагрегантный эффект [Плотников М.Б., Маслов М.Ю., Чернышева Г.А. и др., 2004]. На модели адреналовых аритмий л-тирозол проявил умеренный антиаритмический эффект [Маймеску-лова Л.А., Маслов Л.Н., 1998].

Цель исследования: исследование механизмов кардиопротек-торного действия л-тирозола и параметров его фармакокинетики.

Задачи исследования:

1. На модели острой ишемии миокарда с репефузией у крыс изучить влияние л-тирозола:

- на показатели системной гемодинамики;

- на параметры электрической нестабильности миокарда;

- на показатели перекисного окисления липидов.

2. Исследовать механизмы антиоксидантной, гемореологической, антитромбоцитарной и антитромботической активности л-тирозола.

3. Исследовать основные фармакокинетические параметры л-тирозола после внутривенного введения.

Научная новизна.

Впервые установлено, что применение л-тирозола в условиях острой ишемии миокарда с реперфузией улучшает сократительную функцию сердца и стабилизирует показатели центральной гемодинамики.

Впервые показано, что на модели ишемии с реперфузией л-тирозол проявляет отчетливую антиаритмическую активность, которая проявляется в снижении числа животных с тяжелыми формами аритмий, возрастанием числа животных без аритмий, а также защите от гибели вследствие возникновения аритмий.

На модели тромбоза сонной артерии впервые выявлена анти-тромботическая активность. В условиях острой ишемии миокарда с реперфузией получены новые данные об антитромбоцитарной и гемореологической активности л-тирозола.

Проведенные исследования фармакокинетических характеристик л-тирозола при внутривенном способе введения позволили установить, что препарат быстро проникает в ткани хорошо перфузируемых органов: мозг, сердце, почки. Период полувыведения л-тирозола составляет в среднем около 7 0 мин.

Научно-практическая значимость. Результаты исследования обосновывают целесообразность проведения клинических испытаний л-тирозола у больных с острым коронарным синдромом.

Публикации. По материалам проведенных исследований опубликовано 9 работ, из них 3 в изданиях, рекомендованных ВАК.

Структура и объем диссертации. Работа изложена на 125 страницах машинописного текста. Состоит из введения, обзсра литературы, описания материалов и методов исследования, результатов собственных исследований и их обсуждения, заключения, выводов и списка литературы, включающего 201 источник, из них 72 на иностранных языках. Диссертация содержит 16 таблиц и 16 рисунков.

102 ВЫВОДЫ

Г. Внутривенное введение л-тирозола крысам в период ишемии миокарда ослабляет проявления постишемической дисфункции миокарда: наблюдается повышение ударного объема сердца и минутного объема кровообращения, поддерживается более высокий уровень системного артериального давления и уменьшается рост центрального венозного давления в сравнении с контрольной группой. Эмоксипин в этих условиях менее эффективен вследствие сохранения гипотензивной реакции.

2. Внутривенное введение л-тирозола крысам в период острой ишемией миокарда ограничивает активацию перекисного окисления липидов в миокарде в реперфузионном периоде, что проявляется в уменьшении содержания первичных продуктов ли-пидной пероксидации. Судя по снижению накопления ТБК-активных продуктов и взаимодействию с дифенилпикрилгидрази-лом в экспериментах in vitro л-тирозол проявляет антиокси-дантную активность как в липофильной, так и в гидрофильной средах.

3. Профилактическое внутривенное введение л-тирозола крысам увеличивает количество животных без желудочковых аритмий и снижает доли животных с множественными желудочковыми экстрасистолами и желудочковой тахикардией в период 10-минутной окклюзии левой коронарной артерии; в период ре-перфузии наблюдается снижение процента животных с фибрилляцией желудочков и множественной экстрасистолией.

4. Внутривенное введение л-тирозола в период ишемии увеличивает количество животных без желудочковых аритмий и повышает выживаемость животных в течение 1 сут после реперфу-зии.

5. На модели гипервязкости крови in vitro л-тирозол проявляет гемореологическую активность, сопоставимую с эффектом пентоксифиллина, за счет ослабления агрегационной акхоз тивности эритроцитов и снижения вязкости цельной крови в широком диапазоне скоростей сдвига. Внутривенное введение л-тирозола крысам с ишемией миокарда ограничивает развитие синдрома повышенной вязкости крови.

6. л-Тирозол при однократном внутривенном введении крысам обладает антиагрегантным эффектом в отношении тромбоцитов, сопоставимым по выраженности с пентоксифиллином. На модели артериального тромбоза у крыс препарат снижает число животных с внутрисосудистым тромбозом и увеличивает среднее время образования тромба.

7. Исследование фармакокинетики л-тирозола показало, что препарат быстро проникает в органы с высоким уровнем перфузии и имеет значительный стационарный объем распределения. Препарат в средней степени связывается с белками плазмы и достаточно быстро элиминируется из организма: период полувыведения находится в пределах 68-77 мин. Под влиянием многократного введения л-тирозола происходит ускорение его элиминации. За 24 часа кумулятивная экскреция препарата почками составляет 1,6% от введенной дозы.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ л-Тирозол (п-гидроксифенил-£-этанол) является агликоном гликозида салидрозида - одного из действующих начал родиолы розовой. Соединение обладает широким спектром фармакологической активности. Показаны его антигипоксические свойства [Михалева Л. К., 1991], актопротекторная активность [Марина Т.Ф. и др., 1983], антистрессорный эффект [Зимина Т. А., 1989; Маслова Л.В., 1989; Поветьева Т.Н., 2002], положительное влияние на когнитивную, нейродинамическую и психомоторную функцию головного мозга у человека и животных [Марина Т.Ф., Михалева Л.К., 1986; Михалева Л.К., Марина Т.Ф., 1987; Михалева Л.К., 1991; Саратиков A.C. и др., 1991], способность нормализовать энергетический метаболизм мозга при стрессе [Зимина Т.А., Хазанов В.А., 1984; Зимина Т.А., Хазанов В.А., 1987; Зимина Т.А., 1989], защитное действие на слизистую оболочку желудочно-кишечного тракта в условиях химиотерапии [Боровская Т.Г., 1988; Боровская Т.Г. и др., 1996], возможность повышать резистентность к инфекциям за счет индукции интерферона [Саратиков A.C., Краснов Е.А., 2004; Евстропов A.C. и соавт., 198^5] •

Фундаментальным свойством л-тирозола является его антиокислительная активность. Доказан химический характер взаимодействия л-тирозола с пероксильными радикалами [Сторожок Н.М. и др., 2002]. Показано, что л-тирозол замедляет образование и накопление пероксидов в тканях и уменьшает расход эндогенного антиоксиданта а-токоферола [Вайнштейн С.Г., Звершхановский Ф.А., 1985; Гройсман С.Д. и др., 1985].

Наличие у л-тирозола антиоксидантной активности, а также сведения о кардиопротекторных свойствах при стрессорном повреждении миокарда [Лишманов Ю.Б., Маслов Л.Н., 1988] и антиаритмической активности на модели адреналовых аритмий [Маймескулова Л.А., 1998] обусловили перспективность углубленного исследования соединения в условиях острого коронарного синдрома.

В последние десятилетия прочно сформировалась концепция о важной роли окислительного стресса в патогенезе острых форм ишемической болезни сердца [Меерсон Ф.З., 1984; Коган А. X. и др., 1992; Ланкин В.З. и др., 2000; Зенков Н.К., 2001; Coetzee W.A. et. al., 1990; Becker L.В. et. al, 1999; Levraut J. et. al., 2003]. При развитии этого патологического процесса наблюдаются значительные изменения функционирования как отдельных клеток ишемизированного миокарда, так и всей ткани: происходит снижение притока крови к тканям, уменьшается поступление в клетки кислорода и энергетических субстратов и нарушаются процессы элиминации из тканей продуктов метаболизма [Литвицкий, 1994, 2002; Bolli M., 1999; Asano et. al., 2003.]. Результатом этого является интенсификация процессов перекисного окисления липидов, что, в конечном итоге, затрагивает не только миокард, но и весь организм в целом.

Стратегия лечения инфаркта миокарда заключается в своевременном предупреждении распространения ишемического повреждения миокарда, что достигается в первые 1-6 часов заболевания [Сыркин А.Л., 1998, 2003; Чазов Е.И., 1990]. Для этого в клинической практике используют препараты с различным механизмом действия: антагонисты кальция, бета-адреноблокаторы, нитраты" и нитриты, ингибиторы H+/Na+ обмена, аденозин [Лакомкин и др., 2002; Писаренко и др., 2003; Grover G.J. et al., 1995; Tsuchida et. al., 2002; Moukarbel et al., 2004]. В последнее время значительно возрос интерес к антиоксидантам, как к препаратам, способным предупреждать распространение ишемии миокарда [Голиков А.П., 2005; Рара-dopulus C.L. et al., 1996; Langsjoen P.N., Langsjoen P.N., 1999; Di Pasquale P. et al., 1999; Benzie I.F., 2000; Hal-liwell В., Gutteridge J.M.C., 2001; Wassmann S., 2002].

Для расширения представлений о механизмах антиоксидант-ного действия л-тирозола нами была изучена антирадикальная активность л-тирозола в реакции со стабильным радикалом ДФПГ. При использовании в качестве растворителя хлороформа антирадикальная активность л-тирозола была сопоставима с таковой препарата сравнения ионола.

Необходимо отметить, что л-тирозол проявляет антиокислительную активность как в неполярных растворителях [Сторожок Н.М. и др., 2002], так и в полярном окружении. Проведенное нами изучение антиокислительной активности л-тирозола на модели Fe-аскорбат-индуцированного окисления моноолеата сорбитана показало, что препарат в концентрации 2,5-5*10~5 М тормозит накопление ТБК-активных пррдуктов в водной среде на 19-23%.

Таким образом, л-тирозол, по-видимому, может оказывать антиоксидантный эффект как в водной среде организма, так и в липидной фазе. Кроме того, существуют данные о том, что в организме л-тирозол способен окисляться по мета-положению фенольного кольца [Сторожок Н.М. и др., 2002]. В результате этой реакции образуется крайне реакционноспособное по отношению к радикалам соединение [Меньшикова Е.В. и др., 2006], антиоксидантная активность которого может в несколько раз превысить эффект самого л-тирозола.

Известно, что такие патологические состояния, как сердечная недостаточность, нестабильная стенокардия, инфаркт миокарда протекают на фоне ярко выраженного оксидантного стресса [Ferrari R., 1993; Ambrosio G., Tritto I., 1998; Зенков и др., 2001; Голиков А.П., 2005; Меньшикова и др., 2006]. В связи с этим представляло интерес провести исследование влияния л-тирозола на процессы липидной пероксида-ции на крысах в условиях 45-минутной ишемии миокарда и последующей реперфузии.

В условиях использованной модели инициация процессов ПОЛ происходит уже на начальном этапе ишемии миокарда, при этом создаются условия интенсификации липопероксидации не только в зоне ишемии, но и в отдаленных от нее участках сердца [Ольбинская Л.И., Литвицкий П.Ф., 1986]. Существенный рост активности хемилюминесценции и повышение содержания оснований Шиффа выявляются через 10-4 0 мин после коро-нароокклюзии, а второй пик усиления процессов ПОЛ наблюдается в раннем реперфузионном периоде [Ольбинская Л.И., Литвицкий П.Ф., 1986; Биленко М.В., 1989]. Проведенные эксперименты показали, что л-тирозол, введенный на 15 мин ишемии, существенно снижает интенсивность липидной пероксида-ции, вызванной ишемическим и реоксигенационным повреждением миокарда левого желудочка.

Другим важным звеном нарушений, развивающихся при сердечно-сосудистой патологии и тесно связанным с активацией процессов ПОЛ, является синдром повышенной вязкости крови. Имеются многочисленные доказательства связи расстройства морфофункциональных свойств эритроцитов с активацией процессов липидной пероксидации [Watanabe Н. et. al., 1990; Chang T.W., Но С.P., 1999; Baskurt O.K., Meisselman H.J., 1999]. Увеличение вязкости крови, агрегации эритроцитов и снижение их деформируемости, наблюдающиеся при остром коронарном синдроме, приводят к расстройству микроциркуляции и усугубляют гипоксию тканей [Катюхин Л.Н. и др., 1999; Фир-сов Н.Н., 2002; Алиев О.И., 2003; Константинова Е.Э., 2004; Mares М. et al., 1991]. Активация процессов липидной пероксидации является фактором, участвующим в поражении клеточного звена реологии крови.

Ранее на модели гипервязкости крови in vitro, вызванной термическим воздействием, было показано, что при введении внутрь в течение 3-х дней л-тирозол обладает выраженной ге-мореологической и антитромбоцитарной активностью [Плотников

М.Б., Маслов М.Ю., Чернышева Г.А. и др., 2004]. Для нас представляло интерес исследовать влияние однократного внутривенного введения л-тирозола на вязкость крови и агрегацию эритроцитов in vitro на модели гипервязкости крови и in vivo в условиях ишемии миокарда с последующей реперфузией. Однократное внутривенное введение крысам л-тирозола ограничивало нарастание вязкости крови в период инкубации и предупреждало нарушение агрегационной функции эритроцитов. ЗФ~ фект л-тирозола был сопоставим по выраженности с эффектом препарата сравнения пентоксифиллина, являющегося одним из наиболее эффективных гемореологических средств [Дроздов С.А.,1997; Машковский М.Д., 2002].

Быстро развивающийся и выраженный гемореологический эффект л-тирозола обусловлен, по-видимому, мембраностабилизи-рующим действием препарата, благодаря его способности распределяться не только в водной, но и в липидной фазе за счет амфифильных свойств.

Высокая гемореологическая активность л-тирозола была подтверждена и в условиях in vivo. У крыс с инфарктом миокарда, получавших л-тирозол, наблюдалось существенное ослабление основных показателей, характеризующих синдром повышенной вязкости крови: уменьшалась вязкость цельной крови в широком диапазоне скоростей сдвига и снижалась агрегаци-онная активность эритроцитов.

Известно, что тромбозы являются ведущей причиной смерти при большинстве сердечно-сосудистых заболеваний, так как даже неполная окклюзия сосуда часто завершается стенозом вследствие мощного спазма сосудов, сопровождающего любое тромботическое осложнение [Gostman M.S. et al., 1998]. При этом анализ литературных источников подтверждает эффективность применения антитромбоцитарной терапии для снижения риска тяжелых сосудистых исходов (инфаркт миокарда, сосудистая смерть) [Белоусов Ю.Б., 2002, 2003; Ольбинская Л.И., и др., 2004; Моисеев B.C., 2004; Pitt В., 1995; Шалаев C.B., 2003]. Учитывая полученные нами данные о гемореологической и антитромбоцитарной активности л-тирозола, представляло особый интерес изучить его способность предупреждать формирование артериального тромба. На модели артериального тромбоза, вызванного локальной активацией перекисного окисления липидов в сосудистой стенке, нами было показано, что в группе животных, которым вводили л-тирозол, лишь у 33% животных образовались тромбы, в то время как в группе контрольных животных тромбоз сонной артерии был зафиксирован у 100% животных. Кроме того, при введении л-тирозола увеличивалось среднее время образования тромбов.

Таким образом, л-тирозол продемонстрировал отчетливый антитромботический эффект, обусловленный, по-видимому, его антиокислительными свойствами, предупреждающими накопление перекисей в сосудистой стенке. Кроме того, препарат уменьшает агрегационную активность тромбоцитов, что также способствует снижению риска образования артериального тромба.

В настоящее время установлено участие реологических механизмов в нарушении микроциркуляции в миокарде, спазме и тромбозе коронарных сосудов [Люсов В.А., Савенков М.П., 1988; Швилкин A.B. и др., 1991; Dintenfass L., 1976; Puni-yani R.R. et al., 1991; Koenig W., 1992]. Показана взаимосвязь между гемореологическими показателями, параметрами кардиогемодинамики и сократительной функцией сердца [Larcan F., Stoltz J.F., 1989; Langenfeld J.E. et al., 1994]. Следовательно, нарушение реологии крови затрагивает важные звенья патогенеза реперфузионной дисфункции миокарда, а фармакологическая коррекция реологических показателей способна существенно повысить эффективность терапевтических мероприятий. С этих позиций, применение при остром коронарном синдроме л-тирозола, сочетающего гемореологическую и антитромбоцитарную активность, является патогенетически обоснованным.

Исследование влияния л-тирозола на течение постишемиче-ской дисфункции миокарда было проведено на модели 60-минутной ишемии миокарда с последующей реперфузией в течение 1 часа с регистрацией параметров центральной гемодинамики.

В контрольной группе животных развивалось резко выраженное нарушение сократительной функции миокарда с тяжелыми гемодинамическими расстройствами: отмечалось падение ударного объема и минутного объема кровообращения в 2,3 раза в сравнении . с ложнооперированными животными, развивалась резкая гипотензия на фоне роста центрального венозного давления в 3 раза. Основными причинами развития нарушения сократительной функции миокарда в реперфузионном периоде являются нарушения структуры и функции кардиомиоцитов, обусловленные резкой активацией ПОЛ вследствие реоксигенации и нарушения трансмембранного электролитного обмена, прежде всего ионов Са++ [Ferrari Е. et al., 1993; Bers~ D., 2002].

В группе животных, которым вводили л-тирозол, показатели, характеризующие насосную функцию сердца, существенно превышали уровень контрольной группы как в период ишемии, так и в реперфузионном периоде.

Мы полагаем, что в основе терапевтического эффекта л-тирозола, введенного в начальном периоде развития ишемии миокарда, лежит не только его антиоксидантная активность, определяющая мембраностабилизирующий эффект, но и прежде всего выявленная в наших экспериментах способность быстро воздействовать на гемореологические параметры и оказывать антитромбоцитарный эффект. Известно, что в зоне ишемии миокарда поддерживается определенный уровень кровоснабжения за счет коллатерального кровотока [Ольбинская Л.И., Литвицкий П.Ф., 1986]. Уменьшение агрегируемости эритроцитов и тромбоцитов, снижение вязкости крови может способствовать активизации коллатерального кровоснабжения в период ишемии и предупреждать феномен невосстановления микроциркуляции в период реперфузии.

В условиях кардиогенного шока л-тирозол оказался более эффективен, чем препарат сравнения эмоксипин. Низкая эффективность последнего была обусловлена выраженной гипотензи-ей, ограничивающей перфузионное давление в коронарных артериях, что, по-видимому, приводило к прогрессированию микро-циркуляторных нарушений в миокарде в период реперфузии. При введении л-тирозола возрастанию минутного объема кровообращения способствовал умеренный положительный хронотропный эффект, а поддержание общего периферического сопротивления на близком к исходному уровне способствовало сохранению более высоких значений системного артериального давления, и, следовательного, перфузионного давления в сосудах сердца.

Одной из ключевых проблем острого коронарного синдрома является нарушение ритма сердечных сокращений. Развитие та-хиаритмий ишемического и реперфузионного генеза не только вызывает гемодинамические расстройства, но и может привести к внезапной смерти [Ольбинская Л.И., Литвицкий П.Ф., 1986].

Возникновение ишемических и реперфузионных аритмий обусловлено различными механизмами. При непродолжительной ишемии миокарда на первый план выходит быстрое истощение мак-роэргических соединений вследствие нарушения процессов их синтеза, транспорта и утилизации, в результате чего нарушается метаболизм кардиомиоцитов, а также структура и функция мембран, включая поддержание трансмембранного ионного градиента [Hearse D.J., Tosaki А., 1988; Carmelit Е., 1999; Borchard U., Hafner D., 2000; Zucchi R. et al., 2001; Sperelaksis N., 2002]. Исследованиями D.C. Rüssel и соавторов [1984] установлено, что в течение 10 мин после корона-роокклюзии развивается 1а фаза ишемических аритмий, связанная с нарушениями проведения возбуждения в зоне ишемии, по механизму re-entry. При более длительной ишемии наступает деполяризация ишемизированных кардиомиоцитов и развивается следующая фаза аритмий (16), когда их источником становится уже периинфарктная зона. Предполагают, что вторая фаза аритмий обусловлена высвобождением катехоламинов и связана с усилением автоматизма латентных центров или триггерной активностью в глубоких слоях миокарда [Сапронов Н.С. и' др., 2005] .

Тяжесть реперфузионных нарушений миокарда зависит от времени коронароокклюзии, которая определяет выраженность морфологических изменений в миокарде [Iwai Т. Et al., 2 002 а,б]. Собственно реперфузия ранее ишемизированного миокарда может усугубить имеющиеся повреждения кардиомиоцитов вследствие мощного окислительного стресса, прогрессирования нарушений структуры и функции мембранного аппарата, ферментов, перегрузки внутриклеточным кальцием и гибели митохондрий [Hearse D.J., Tosaki А., 1988; Duchen M.R., 2000; Tononaka К., 2003]. Это проявляется возникновением аритмий и нарушением сократимости миокарда [Ольбинская Л.И., Лит-вицкий П.Ф., 1986].

Моделируя развитие 1а фазы ишемических аритмий в условиях 10-минутной ишемии миокарда и последующей 10-минутной реперфузии, проводили исследование антиаритмической активности л-тирозола при профилактическом введении.

Для моделирования 16 фазы ишемических аритмий воспроизводили 45-минутную ишемию, при этом препарат вводили на 10 мин ишемии миокарда. В этой серии экспериментов оценивали также выживаемость животных в течение 1 сут после реперфузии .

Профилактическое введение л-тирозола крысам перед 10-минутной окклюзией левой коронарной артерии достоверно увеличивало количество животных без аритмий и снижало долю животных с множественными желудочковыми экстрасистолами и та-хиаритмиями, наблюдалась тенденция к снижению числа животных с желудочковыми фибрилляциями. В период развития репер-фузионных аритмий под действием л-тирозола происходило снижение процента животных с фибрилляцией желудочков и множественной экстрасистолией, наблюдалась тенденция к увеличению числа животных без желудочковых аритмий.

Введение л-тирозола на 10 мин ишемии миокарда достоверно увеличивало число животных без желудочковых аритмий в 16 фазе ишемических аритмий. Наблюдалась также отчетливая тенденция к уменьшению количества животных с желудочковыми та-хиаритмиями. л-Тирозол существенно снижал средний уровень тяжести аритмий 1а фазы и средний балл тяжести желудочковых аритмий 16 фазы с.

Таким образом, у л-тирозола выявлено отчетливое антиаритмическое действие в отношении коронароокклюзионцых аритмий как при профилактическом, так и при лечебном применении. Активность препарата обусловлена, по-видимому, мем-браностабилизирующим эффектом, который может усиливаться наличием у л-тирозола выраженной гемореологической и анти-тромбоцитарной активности. Улучшение уровня коллатеральнрго кровотока за счет снижения явлений реологической окклюзии под влиянием л-тирозола может оказывать определенный защитный эффект на структуру и функцию кардиомиоцитов во время ишемии. Кроме того, с учетом известной роли агрегации тромбоцитов в генезе реперфузионных аритмий [Xiao Dong et al., 1993], можно предположить участие антиагрегантного эффекта препарата в отношении тромбоцитов в уменьшении выраженности реперфузионных нарушений ритма сердца.

Наличие у л-тирозола кардиопротекторного эффекта подтверждается достоверным увеличением выживаемости животных, перенесших 45-минутную окклюзию левой коронарной артерии. В течение 1 сут после возобновления перфузии в контрольной группе погибло 7 крыс из 18 на фоне явлений острой сердечной недостаточности; в группе животных, которым вводили п-тирозол, погибло 1 животное из 13.

Проведенное исследование фармакокинетики л-тирозола при внутривенном введении показало, что л-тирозол быстро проникает через гистогематические барьеры, включая гематоэнцефа-лический, и быстро поступает в органы с высоким уровнем перфузии (мозг, сердце, почки). Максимальная концентрация препарата в мозге, сердце, почках определялась уже на 1-й мин после введения. Стационарный объем распределения препарата значителен, что указывает на хорошее проникновение вещества не только в органы с высокой васкуляризацией, но и в ткани периферической камеры.

Препарат в средней степени связывается с белками плазмы: фракция связанного препарата составляет 0,26-0,30. л-Тирозол довольно быстро элиминируется из организма: период его полувыведения составляет в среднем около 7 0 мин, а клиренс - 19,8 мл-мин"1 -кг-1.

Сравнение фармакокинетических параметров л-тирозола при его введении в дозах 50, 100 и 200 мг/кг позволяют сделать вывод о линейности фармакокинетики препарата в исследуемом диапазоне доз.

Под влиянием многократного введения л-тирозола происходит ускорение метаболической элиминации, то есть наблюдается явление индукции.

Исследование кинетики экскреции л-тирозола с мочой показало, что почечная экскреция не является основным путем выведения препарата из организма. За 24 часа после введения кумулятивная экскреция препарата почками составила лишь 1,6% от введенной дозы. По-видимому, основным путем элиминации л-тирозола из организма является его метаболизм в печени.