Медико-биологические аспекты конструирования биокератопротезного комплекса с использованием культивированных фибробластов

Шипунова, Анна Владимировна

Диссертации по медицине → Глазные болезни

Автореферат и диссертация по медицине (14.01.07) на тему:Медико-биологические аспекты конструирования биокератопротезного комплекса с использованием культивированных фибробластов

ДИССЕРТАЦИЯ

Медико-биологические аспекты конструирования биокератопротезного комплекса с использованием культивированных фибробластов - диссертация, тема по медицине

АВТОРЕФЕРАТ

Медико-биологические аспекты конструирования биокератопротезного комплекса с использованием культивированных фибробластов - тема автореферата по медицине

Шипунова, Анна Владимировна Москва 2012 г.

Ученая степень: кандидата медицинских наук

ВАК РФ: 14.01.07

Автореферат диссертации по медицине на тему Медико-биологические аспекты конструирования биокератопротезного комплекса с использованием культивированных фибробластов

005054771

На правах рукописи

ШИПУНОВА АННА ВЛАДИМИРОВНА

МЕДИКО-БИОЛОГИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ КОНСТРУИРОВАНИЯ БИОКЕРАТОПРОТЕЗНОГО КОМПЛЕКСА С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ КУЛЬТИВИРОВАННЫХ ФИБРОБЛАСТОВ

14.01.07 - глазные болезни

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

1 5 НОЯ 2012

Москва-2012

005054771

Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном учреждении «Межотраслевой научно-технический комплекс «Микрохирургия глаза» им. акад. С.Н. Федорова» Министерства Здравоохранения России

Научные руководители: Борзенок Сергей Анатольевич доктор медицинских наук Васильев Андрей Валентинович доктор биологических наук

Официальные оппоненты: Зуев Виктор Константинович доктор медицинских наук, профессор, заведующий отделом хирургии хрусталика и интраокулярной коррекции ФГБУ «МНТК «Микрохирургия глаза» им. акад. С.Н.Федорова» Минздрава России Калинников Юрий Юрьевич доктор медицинских наук, врач-офтальмолог ФГБУ Клинической больницы Управления делами Президента РФ

Ведущая организация: ФГБУ «МНИИ Глазных болезней им. Гельмгольца» Министерства Здравоохранения России

Защита состоится «3» декабря 2012 г. в 14 часов на заседании диссертационного совета Д.208.014.01 при ФГБУ «МНТК «Микрохирургия глаза» им. акад. С.Н. Федорова» Минздрава России по адресу: 127486, г. Москва, Бескудниковский бульвар, д. 59А.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГБУ «МНТК «Микрохирургия глаза» им. акад. С.Н. Федорова» Минздрава России

Автореферат разослан «2» ноября 2012 г.

Ученый секретарь диссертационного совета, доктор медицинских наук

В.В. Агафонова

Список сокращений

БКГТК Биокератопротезный комплекс

СЭМ

Сканирующая электронная микроскопия

ВКМ Внеклеточный матрикс

ФБ Фибробласты

МФБ Миофибробласты

КПК Кератопротезная конструкция

DMEM

ЭТС

Эмбриональная телячья сыворотка

Среда Игла в модификации Дульбекко

ОПК Опорная пластинка кератопротеза

UVA Ультрафиолет - А

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы

По данным Всемирной организации здравоохранения в 2010 году заболевания роговицы явились причиной слепоты 8-ми млн человек (World Health Organization, 2011). Пересадка роговицы при бельмах IV-V категории (по классификации В.П. Филатова и Д.Г. Бушмич, 1947) является неэффективной вследствие развития различного рода осложнений иммунного генеза, приводящих к помутнению трансплантата. Единственным способом восстановления зрения пациентам с такими бельмами остается протезирование роговицы (Филатов В.П.,1934; Гундорова P.A., 1969; Федоров С.Н., 1969; Зуев В.К., 1974; Якименко С.А. и др., 1981, 1983, 1985; Мороз З.И., 1987; Калинников Ю.Ю., 2000, 2005; Cardona Н„ 1964, 1977; Barraquer J.,1965; Choyce D., 1965, 1966, 1968, 1973, 1980; Dohlman С., 1967, 1999; Hicks С., 1998). При этом существенной проблемой кератопротезирования остается сохранение имплантированного протеза в тканях бельма из-за отсутствия его истинного приживления в тканях (Гундорова P.A., 1969; Федоров С.Н., 1969, 1982; Якименко С.А. и др., 1985; Калинников Ю.Ю., 2004; Мороз З.И., 2007; Cardona Н., 1964, 1977; Barraquer J.,1965; Choyce D., 1980; Dohlman С., 1999; Hicks С., 1998). В этой связи актуальным вопросом остается создание "идеального" кератопротеза, обладающего высокими оптическими характеристиками и способного надежно интегрироваться в ткани роговицы.

Эволюция кератопротезирования шла по пути совершенствования формы, размеров кератопротезов и материалов для их изготовления. Постепенно на смену ригидных гидрофобных материалов (пластик, резина) для конструирования кератопротезов пришли гидрофильные гидрогели, обладающие повышенными интегративными свойствами, способностью пропускать кислород и глюкозу, а также стимулировать эпителизацию поверхности материала после имплантации (Федоров С.Н., 1982, 1995; Калинников Ю.Ю., 2005; Dohlman С., 1999; Legeais J., 2001; Alio J., 2004; Hicks С. et al., 2006; Myung D. et al., 2008). Но, несмотря на достоинства кератопротезов таких моделей, их использование не гарантирует отсутствия таких специфических осложнений, как кератомаляция и отторжение кератопротеза (Калинников Ю.Ю., 2005; Legeais J. et al., 1991; Chirila Т. et al.,1993; Hicks C.et al., 1998).

Согласно ранее проводимым патогистологическим исследованиям (Федоров С.Н. и др., 1970; Панормова Н.В., Малов В.М., 1977; Пучковская Н.А.,1979; Шехтер А.Б., Розанова И.Б., 1999) имплантация в организм любого чужеродного материала, в том числе биологических тканей, вызывает стереотипную воспалительно-репаративную реакцию, приводящую к пролиферации фибробластов (ФБ), образованию коллагеновых волокон и других компонентов внеклеточного матрикса (ВКМ), формирующих соединительнотканную капсулу вокруг инородного тела. При развитии различных осложнений происходит срыв адаптивной воспалительно-репаративной реакции, связанный с нарушением межклеточных взаимодействий, способствующих нарушению нейтрофильного и макрофагального звеньев процесса, снижению количества макрофагально-фибробластических и других межклеточных контактов, что приводит к выраженному торможению пролиферативной фазы процесса (Шехтер А.Б., Серов В.В., 1991).

Применение клеточных технологий сегодня позволяет замещать и восстанавливать ткани организма. Культивированные ФБ кожи человека

в виде клеточных линий и в составе тканеинженерных конструкций широко используются в комбустиолоии, урологии, стоматологии и других клинических областях медицины, во многом решив проблему недостатка донорского материала (Терских В.В., Васильев А.В., 1995).

Многими исследователями ведутся активные разработки по созданию "искусственной роговицы" (Griffith M.et al., 2008; Myung D.et al., 2008; Sheardown H.et al., 2008) и оптимальных способов доставки культивированных клеток в зону дефекта роговицы с целью стимуляции репаративных процессов (Васильев А.В. и др., 2000,2005; Макаров П.В., 2003; Ходжабекян Г.В., 2003; Беляев Д.С., 2009).

При этом большое внимание при конструировании искусственных роговиц уделяется повышению прочностных свойств матрикса. С этой целью в конструкцию включают синтетические полимеры (Li F.et al., 2003), а также проводят рибофлавин - Ultraviolet A (UVA) - индуцированную фотохимическую сшивку коллагена (McLaughlin C.et al., 2009).

Учитывая успешные результаты создания и применения тканеинженерных конструкций для замещения роговицы и восстановления ее поверхностных дефектов, стал актуальным вопрос использования достижений регенеративной медицины для создания кератопротезов нового поколения с повышенными прочностными и интегративными свойствами за счет использования прочного биополимерного каркаса и клеточных элементов, что послужило основанием к выбору цели исследования.

Цель

Повысить надежность приживления кератопротеза путем создания биокератопротезного комплекса, включающего кросслинкинг-модифицированную донорскую роговицу и культивированные фибробласты кожи человека

Для реализации указанной цели были поставлены следующие задачи:

1. Разработать конструкцию биокератопротезного комплекса на основе кросслинкинг-модифицированной донорской роговицы и фибробластов кожи человека.

2. Изучить морфологические особенности сочетанного применения кросслинкинг-модифицированных донорских роговиц и фибробластов кожи человека в составе конструкции биокератопротезного комплекса в эксперименте in vitro.

3. Разработать на кроликах экспериментальную модель для изучения биокератопротезного комплекса.

4. Изучить медико-биологические и экспериментально-клинические закономерности приживления разработанной модели биокератопротезного комплекса в эксперименте на кроликах.

Научная новизна результатов исследования

1. Впервые разработанная модель кератопротеза, названная биокератопротезным комплексом, включающая кросслинкинг-модифицированную роговицу, культивированные фибробласты кожи человека и кератопротез модели Федорова-Зуева, позволила в эксперименте избежать развития специфических осложнений при имплантации в глаза лабораторных животных (кроликов).

2. Впервые в эксперименте in vivo показано, что применение аутологичных фибробластов кожи человека в составе биокератопротезного комплекса приводит к более выраженному формированию соединительной ткани вокруг опорной пластинки кератопротеза и неоваскуляризации, чем при использовании аллогенных фибробластов.

интрастромального кармана роговицы, их трансформации в миофибробласты, и тем самым, надежно повышают приживление конструкции биокератопротеза.

Практическая значимость результатов работы

1. Впервые разработаны подходы к поэтапному конструированию биокератопротезного комплекса на основе кросслинкинг-модифицированной роговицы и культуры аутологичных фибробластов кожи, состоящие в формировании кармана в строме донорской роговицы, проведении кросслинкинг-модификации коллагенового матрикса стромы, введении в полость интрастромального кармана опорной пластинки кератопротеза Федорова-Зуева и культивированных фибробластов кожи на желатиновых микроносителях с последующим инкубированием конструкции в течение 7-ми суток перед имплантацией.

2. Впервые показано, что кросслинкинг-обработка донорских роговиц, невостребованных для кератопластики, повышает плотность упаковки коллагеновых пластин стромы, способствует повышению устойчивости ткани к протеолитическим ферментам слезы, водянистой влаги и интервенции активных макрофагов, что позволяет использовать их в качестве матрицы биокератопротезной конструкции.

3. Впервые показано, что изучение особенностей приживления биокератопротезного комплекса возможно в эксперименте in vivo на глазах лабораторных животных (кроликов) в виде имплантации в интрастромальный карман роговицы в четвертой части биокератопротезной конструкции.

Основные положения, выносимые на защиту

1. Новое поколение клеточно-тканевой биоинженерной конструкции кератопротезов - биокератопротезный комплекс, обладает повышенными прочностными свойствами, устойчивостью к протеолитическим ферментам

слезы, водянистой влаги и интервенции активных макрофагов за счет использования в качестве биополимерного каркаса кросслинкинг-модифицированной аллогенной донорской роговицы, культивированных фибробластов кожи на желатиновых микроносителях, способствующих развитию репаративных процессов в строме и полости интрастромального кармана.

2. В эксперименте in vivo показано, что имплантация биокератопротезного комплекса повышает надежность его биологического приживления в глазах экспериментальных животных (кроликов) и обеспечивает профилактику специфических осложнений за счет активного формирования соединительнотканной капсулы вокруг опорной пластинки кератопротеза, интенсивной неоваскуляризации и пролиферации аутологичных фибробластов в полости интрастромального кармана.

Апробация работы

Основные положения диссертации доложены и обсуждены на научно-практических конференциях ФГБУ МНТК «МГ» им. акад. С.Н.Федорова (Москва, 2010, 2012), V Всероссийской научной конференции молодых ученых «Актуальные проблемы офтальмологии» (Москва, 2010), V Всероссийском съезде трансплантологов (Москва, 2010), Всероссийской научной школе-конференции «Стволовые клетки и регенеративная медицина» (Москва, 2010), IX Всероссийской научной конференции с международным участием «Федоровские чтения» (Москва, 2011) и X Всероссийской научной конференции с международным участием «Федоровские чтения» (Москва, 2012), VI Всероссийском съезде трансплантологов (Москва, 2012).

На V Всероссийской научной конференции молодых ученых доклад на тему: «Биоинженерная конструкция кератопротезного комплекса с использованием культивированных фибробластов реципиента» был удостоен 1-й премии.

На Всероссийской научной школе-конференции «Стволовые клетки и регенеративная медицина» (2010) доклад на тему: «Предварительные результаты конструирования биокератопротезного комплекс с использованием аутофибробластов кожи реципиента» был удостоен 3-го места.

Публикации

По теме диссертации опубликованы 16 печатных работ, в том числе 3 - в журналах, рецензируемых ВАК РФ. Имеется 1 патент РФ на изобретение.

Структура и объем работы

Работа изложена на 135-ти страницах машинописного текста, иллюстрирована 9-ью таблицами, 38-ью рисунками. Список используемой литературы включает 272 источника, из них 82 - отечественных и 190 -иностранных. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, 4-х глав, содержащих данные обзора литературы, экспериментальных исследований in vitro и in vivo, заключения, выводов, практических рекомендаций и списка используемой литературы.

Экспериментальные исследования проводились на базе Центра фундаментальных и прикладных медико-биологических проблем ФГБУ «МНТК «Микрохирургия глаза» им. акад. С.Н. Федорова» Минздрава России (руководитель - д.м.н. С.А. Борзенок) и Лаборатории проблем клеточной пролиферации ФГБУН Института биологии развития им. Н.К. Кольцова Российской академии наук (руководитель - д.б.н., проф. В.В.Терских) совместно с к.б.н., н.с. Э.Б. Дашинимаевым. Гистологические исследования выполнены на базе лаборатории патологической анатомии и гистологии глаза ФГБУ «МНТК «Микрохирургия глаза» им. акад. С.Н. Федорова» Минздрава России (зав. Лабораторией - к.м.н. Шацких A.B.). Иммуногистохимические и цитохимические исследования осуществлялись в Лаборатории проблем клеточной пролиферации ФГБУН Института биологии развития им. Н.К. Кольцова Российской академии наук. Сканирующая электронная микроскопия выполнялась на базе лаборатории анатомии микроорганизмов ГУ НИИ

эпидемиологии и микробиологии имени Н.Ф. Гамалеи РАМН (руководитель д.м.н. Л.В. Диденко) совместно с к.м.н. Н.В. Шевлягиной.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Материал и методы

В основу диссертационной работы положен комплекс экспериментальных исследований in vitro и in vivo.

Материалом для исследования in vitro послужили трупные донорские роговицы, невостребованные для кератопластики (п=36) с низкими морфофункциональными показателями - 1 А-0 (классификация С.А.Борзенка, 2008), выделенные из глаз доноров-трупов на базе Глазного тканевого банка Центра фундаментальных и прикладных медико-биологических проблем ФГБУ «МНТК «Микрохирургия глаза» им. акад. С.Н. Федорова» Минздрава России.

В исследовании использовались культивированные аллогенные ФБ кожи, предоставленные Лабораторией проблем клеточной пролиферации ФГБУН Института биологии развития им. Н.К. Кольцова Российской академии наук.

В качестве трехмерного матрикса для культивированных ФБ применялись желатиновые микроносители CultiSpher-S (Percell, HyClone, США).

Конструкция биокератопротезного комплекса (БКПК) разрабатывалась на основе кератопротеза модели Федорова-Зуева (п=36).

Исследование in vivo проведено на 30-ти кроликах-самцах (30 глаз) породы шиншилла, весом 2,0-2,5 кг в возрасте 6-ти месяцев. Для конструирования БКПК были использованы трупные аллогенные кроличьи роговицы (п=8) и кератопротезы Федорова-Зуева (п=8). Общий расход кроликов составил 38 животных. Источником первичной культуры кроличьих ФБ служила кожа внутренней поверхности уха животных. Выделение ФБ осуществлялось с помощью механической дезагрегации и ферментативной обработки 0,1% коллагеназой I типа (Worthington, США) с последующей отмывкой и центрифугированием.

Исследование клеточных культур и инкубированных конструкций осуществлялась на инвертированном микроскопе «Leica DM IL» (Leica,

Германия) и инвертированном флуоресцентном микроскопе Olympus 1X51 (Olympus, Япония).

В связи с необходимостью прижизненной визуализации введенных ФБ внутри инкубируемой биокератопротезной конструкции в них предварительно путем трансфекции был введен ген усиленного зеленого флуоресцирующего белка - EGFP (Евроген, Россия).

Для морфологических и иммуногистохимических исследований проинкубированные КПК на основе аллогенных роговиц человека, а также полученные биоптаты (глазные яблоки кроликов) с имплантированными в строму роговицы КПК, доставляли в лабораторию в 4% растворе параформальдегида в течение 3 часов с момента изъятия. Затем из трупных глаз кроликов вырезали корнеосклеральные диски. Перед приготовлением всех препаратов из роговиц извлекали ОПК. После этого по стандартной методике заливали кусочки в парафиновые блоки, из которых делали полутонкие срезы по 5 микрон. Срезы из биоптатов глаз кроликов окрашивали гематоксилин-эозином. Для проведения иммуногистохимии срезы депарафинизировали непосредственно перед окрашиванием антителами. С целью определения экспрессии маркерных белков ФБ использовали следующие первичные и вторичные антитела:

-для выявления маркера миофибробластов и гладкомышечных клеток:

• Мышиные моноклональные антитела к a-SMA (Abeam, США);

Козлиные поликлональные вторичные антитела к мышиному IgG

(Abeam, США);

-для идентификации трансфицированных клеточных элементов

• Антитела против зеленого флуоресцирующего белка EGFP

(Abeam, США);

• Козлиные вторичные антитела к мышиному IgG H&L

(Chromeo™ 488) (Abeam, США);

С помощью сканирующей электронной микроскопии (Quanta 200 3D, FEI, США) исследовались архитектоника роговицы до и после проведения процедуры кросслинкинга, а также содержимое интрастромального кармана инкубированного БКПК.

Для выявления живых клеток в культуре использовался витальный краситель Calcein AM (Biotium, США), а также флуоресцентный краситель

DAPI (Invitrogen, США), окрашивающий A-T регионы ДНК клеточных элементов. Для определения мертвых клеток использовался бромистый этидий (Biotium, США).

Моделирование кератопротезных конструкции in vitro

С целью создания оптимальной модели БКПК было исследовано in vitro 3 типа конструкций.

Контролем (п=12) являлась конструкция, состоящая из нативной донорской аллогенной роговицы человека, в интрастромальный карман которой была имплантирована опорная пластинка кератопротеза (ОПК) модели Федорова-Зуева (рис.1 А).

В опытной группе № 1 (п=12) использовалась конструкция, состоящая из кросслинкинг-модифицированной аллогенной донорской роговицы человека с имплантированной ОПК (рис.1 В). Кератопротезная конструкция (КПК) опытной группы № 2 (п=12) на основе кросслинкинг-модифицированной аллогенной донорской роговицы (рис. 1С) была дополнена введением внутрь интрастромального кармана 200 мкл суспензии трансфицированных ФБ кожи человека, культивированных на желатиновых микроносителях (2x106 кл/мл.). В связи с тем, что в КПК были использованы биологические компоненты (донорская роговица, культивированные ФБ) и металлическое изделие, она была названа «биокератопротезным комплексом».

Далее полученные КПК контрольной и опытных групп помещались в полную ростовую среду Игла в модификации Дульбекко (DMEM), содержащую 10% раствор эмбриональной телячьей сыворотки (ЭТС), гентамицин -10 мкг\мл и амфотерицин В - 50 ед/мл, и инкубировались в стандартных условиях(5% С02, 100% влажность, 37 ОС) в течение 7-и, 14-и, 21-их, 28-ми и 35-ти суток.

Результаты лабораторных исследований конструирования биокератопротезного комплекса

В результате проведенного эксперимента in vitro было обнаружено, что ФБ активно адгезировались на поверхности ОПК и росли на ней до состояния монослоя. На всех сроках наблюдения (1-7 сутки) окраска клеточных элементов

Нал шипя атюгснная Опорная пластика

лопорская рогог.цна ксрагопрогсла mo.io.ik

Федорова-'Кова

Кроссчпнкиш -модифицированная Опорная пластинка аплогснная донорская роговина керагопроте ¡а модели Федорова-Зуева

Кросс тникпнг-модпфшшрованпая Опорная пластинка алюгеииая донорская роговина кераюпрою:а мо.1елп Федорова- Зуева

Г**

Фпброб.члс| м кожи, культпкирипаннмс на желатшкшмх микрпшжтелях

Рис. 1. Схематическое изображение кератопротезных конструкций на основе: А - нативной аллогенной донорской роговицы человека и опорной пластинки кератопротеза модели Федорова-Зуева; В - кросслинкинг-модифицированной аллогенной донорской роговицы человека и опорной пластинки кератопротеза модели Федорова-Зуева; С - кросслинкинг-модифицированной аллогенной донорской роговицы человека, опорной пластинки кератопротеза модели Федорова-Зуева, трансплантированных культивированных фибробластов кожи на желатиновых микроносителях

бромистым этидием была негативной, что указывало на отсутствие клеточной гибели. Безопасность инъекционного введения клеточных элементов на желатиновых микроносителях была подтверждена положительной иммуногистохимической окраской на наличие EGFP. Наблюдалась постепенная миграция введенных ФБ с поверхности желатиновых микроносителей в ткани роговицы. При этом трансфицированные клеточные элементы определялись, как внутри интрастромального кармана, так и в строме роговицы, что могло свидетельствовать о способности фибробластоподобных клеточных элементов перемещаться по межпластинчатым пространствам стромы.

В результате иммуногистохимического окрашивания полученных срезов на маркер МФБ и гладкомышечных клеток было отмечено флуоресцентное свечение трансплантированных клеток, свидетельствующее о трансформации введенных ФБ в МФБ.

На электронограммах образцов с кросслинкинг-модифицированной стромой (опытные группы №1, №2) была выявлена более выраженная упаковка коллагеновых пластин по сравнению с электронномикроскопической картиной образцов контрольной группы, что согласуется с данными ряда авторов (Wollensak G. et al., 2003), и является признаком повышения прочностных свойств коллагенового каркаса роговицы.

Образование фибриллярного синцития вокруг опорной пластинки протеза наблюдалось, начиная с 7-х суток инкубирования конструкции, и продолжалось до конца эксперимента (35 суток).

Таким образом, было подтверждено, что оптимальная конструкция БКПК должна состоять из кератопротеза, изготовленного из инертного и биосовместимого материала (такого как титан), кросслинкинг-модифицированной роговицы с повышенными прочностными свойствами и культивированных ФБ на желатиновых микроносителях, способствующих образованию соединительной ткани вокруг ОПК.

Для доказательства состоятельности разработанной конструкции БКПК были проведены эксперименты in vivo на лабораторных животных.

Подготовка и имплантация кератопротезных конструкций в экспериментах на кроликах Для экспериментов использовались глаза кроликов с неизмененной прозрачной роговицей, подходящей для визуального наблюдения за состоянием имплантата и ответной реакцией на него со стороны окружающей ткани в раннем и позднем послеоперационном периодах. Имплантация конструкции в неизменённую роговицу была также обусловлена ожиданием более выраженной реакции отторжения имплантата в здоровой роговице по сравнению с бельмом (Пучковская H.A. с соавт., 1970; Фёдоров С.Н., Мороз З.И., Зуев В.К, 1982).

При моделировании эксперимента на животных учитывался факт наличия у кроликов тонких (400 мкм) и больших в диаметре (15 мм) роговиц (Gwon А., 2007) , что существенно затрудняет расслаивание донорской роговицы кролика, введение опорной пластинки в интрастромальный карман и проведение хирургических манипуляций. В связи с этим была предложена имплантация КПК путем введения в строму роговиц животных имплантата, представляющего собой четвертую часть кератопротезной конструкции.

Животные-реципиенты (п=30) были разделены на 5 групп (по 6 в каждой), которым в строму роговиц которых вводились различные варианты КПК. В контрольной группе в строму роговицы кроликов вводили имплантат на основе нативной донорской роговицы, содержащий четвертую часть дужки ОПК. В опытной группе №1 конструкция отличалась использованием кросслинкинг-модифицированной стромы донорской роговицы. В опытной группе №2 в конструкцию на основе кросслинкинг-модифицированной стромы дополнительно вводились желатиновые микроносители, а в опытные группы №3 и №4 вводились, соответственно, аутологичные и аллогенные ФБ кожи кролика, культивированные на желатиновых микроносителях.

Клиническую оценку состояния глаз животных проводили по степени воспалительной реакции, васкуляризации роговицы (Ченцова Е.В., 1996), интенсивности помутнения роговицы (Войно-Ясенецкий В.В., 1953). Животные выводились из эксперимента на 7-е сутки и через 3 месяца после имплантации конструкций.

Результаты экспериментально-клинических исследований имплантации биокератопротезного комплекса

Анализ результатов клинических исследований показал наличие незначительной воспалительной реакции на введение имплантатов в роговицах животных всех исследуемых групп, купирующейся самопроизвольно к 14-м суткам.

Помутнение на 7-е сутки наблюдалось в опытных группах №2-4. При этом в опытной группе № 3 (на основе кросслинкинг-модифицированной роговицы, аутологичных ФБ и желатиновых микроносителей) интенсивность помутнения была максимальной. Наименее выраженное помутнение на всех сроках наблюдения было выявлено в опытной группе № 1, где в роговицу вводился имплантат на основе кросслинкинг-модифицированной стромы.

Степень интенсивности новообразования сосудов в первые 7 суток во всех группах была на одном уровне, но, начиная с 21-х суток, на фоне увеличения новообразования сосудов во всех группах, в опытной группе № 1 (на основе кросслинкинг-модифицированной роговицы) этот показатель оставался стабильным до окончания эксперимента.

На сроке 3-й месяца в опытной группе № 3 (на основе кросслинкинг-модифицированной роговицы, аутологичных ФБ и желатиновых микроносителей) степень интенсивности роста новых сосудов была наивысшей.

Отличия опытной группы № 1, состоящие в меньшей степени интенсивности помутнения и новообразования сосудов в роговице, могут быть связаны с изменением физико-химических свойств коллагена за счет проведенного фотохимического воздействия, приводящего к уменьшению количества жизнеспособных клеточных элементов в строме, образованию дополнительных сшивок и снижению уровня связывания воды (Paul R., Bailey А., 1996; Wollensak G„ 2004).

Таким образом, результаты динамического изучения трансплантации различных вариантов КПК показали формирование более выраженного бельма с образованием умеренно выраженной васкуляризации в опытных группах, где использовались желатиновые микроносители и культивированные клеточные элементы. При этом максимальная интенсивность бельма наблюдалось в опытной группе, где применялись аутологичные ФБ кожи.

Проведенные морфологические исследования показали, что на раннем сроке наблюдения в строме имплантатов контрольной группы определялись фибробластоподобные клетки, вероятнее всего, являющиеся донорскими клетками роговицы, так как в образцах КПК, где предварительно проводилась процедура кросслинкинга, клеточные элементы отсутствовали (опытные группы № 1 и 2), что может быть связано с их гибелью во время UVA -воздействия. Однако в опытных образцах, предварительно инкубированных с использованием культуры клеток (опытные группы № 3 и 4), в кросслинкинг-модифицированной строме КПК визуализировались фибробластоподобные клетки, что может быть связано с их миграцией из интрастромального кармана в строму в процессе культивирования.

Через 3 месяца в контрольной группе наблюдалась инфильтрация стромы имплантата фибробластоподобными клетками и единичными макрофагами. Но при этом вокруг ОПК признаков созревания соединительной ткани не отмечалось. В опытной группе №1 (на основе кросслинкинг-модифицированной роговицы) наблюдалась минимальная клеточная инфильтрация стромы. Признаков образования соединительной ткани вокруг ОПК также не было.

На позднем сроке в опытной группе, где использовали желатиновые микроносители без клеточной культуры (опытная группа № 2), в кросслинкинг-модифицированной строме имплантата отмечали появление фибробластоподобных клеток. В полости интрастромального кармана наблюдались биодеградирующие желатиновые микроносители, интегрирующиеся в строму. Кроме того, визуализировалась неполноценная нежная соединительнотканная капсула.

В образце роговицы из группы № 3 (на основе кросслинкинг-модифицированной роговицы, аутологичных ФБ и желатиновых микроносителей) вокруг ОПК визуализировались биодеградирующие желатиновые микроносители, а также выраженная и полноценная фиброзная капсула, которая по своим признакам (наличие активных форм ФБ) имела тенденцию к дальнейшему созреванию. Отличия этой группы также состояли в более выраженной васкуляризации в области имплантации ОПК по сравнению со всеми остальными группами.

В группе, где использовались аллогенные клетки (опытная группа № 4), полость интрастромального кармана была заполнена биодеградирующими желатиновыми микроносителями, интегрирующимися в строму. В составе соединительнотканной капсулы преобладали зрелые формы ФБ, что свидетельствовало о снижении активности процесса формирования соединительнотканной капсулы.

Проведенные гистологические исследования позволили прийти к выводу, что применение в составе БКПК кросслинкинг-модифицированной стромы в качестве биополимерного каркаса способствует повышению прочностных характеристик конструкции за счет экранирования коллагена от миграции клеточных элементов, что является хорошим прогностическим признаком надежного приживления трансплантата.

При использовании аутологичных ФБ на желатиновых микроносителях процессы неоваскуляризации и формирования соединительной ткани вокруг ОПК происходили более интенсивно в сравнении с аллогенными клетками и продолжались более 3 месяцев после имплантации конструкции в строму роговиц кроликов.

Полученные результаты иммуногистохимического исследования препаратов роговиц с имплантированными БКПК свидетельствовали о значительной роли культивированных ФБ и желатиновых микроносителей в развитии заместительной регенерации. Желатиновые микроносители способствовали малотравматичному введению клеток в интрастромальный карман роговицы, создавали трехмерные условия для трансформации ФБ в МФБ, являлись дополнительным субстратом для синтеза межклеточного вещества и способствовали неспецифической стимуляции миграции клеточных элементов реципиента. Пролиферация фибробластоподобных клеточных элементов и их миграция в строму свидетельствовали об активных пролиферативных процессах, как в коллагеновом каркасе, так и в полости интрастромального кармана.

Было установлено, что через 3 месяца после имплантации КПК в строму кроликов, определялись только аутологичные клети, в то время как аллогенные ФБ отсутствовали. Отсутствие аллогенных клеточных элементов в имплантатах может быть связано с их лизисом, произошедшим на сроке менее 3-х месяцев после введения КПК в строму роговиц кроликов. Аутологичные клетки на

данном сроке оставались in situ, способствуя более выраженному фиброзу и образованию сосудов в участках стромы, прилегающих к ОГЖ, что подтверждается в ранее проводимых работах другими исследователями (Швецова Е.В.. 2009; Aubock J., 1988; Gielen V., Faure M. et.al., 1987; Hancock К., Hackett M., 1989; van der Merwe A et.al., 1990).

Выводы

1. Повышение надежности приживления кератопротеза может быть достигнуто созданием биоинженерной конструкции, названной «биокератопротезный комплекс», представляющей собой аллогенную кросслинкинг-модифицированную донорскую роговицу в интрастромальный карман которой имплантированы опорная пластинка кератопротеза модели Федорова-Зуева и культивированные фибробласты кожи на желатиновых микроносителях.

2. Сочетанное использование роговиц с кросслинкинг-модифицированной стромой и фибробластов кожи на желатиновых микроносителях способствует усилению прочностных свойств биокератопротезного комплекса за счет повышения плотности упаковки коллагеновых пластин стромы роговицы, их экранирования от миграции активных макрофагов, образования миофибробластов с последующим формированием соединительнотканной капсулы вокруг опорной пластинки кератопротеза.

3. Изучение приживления и прочностных характеристик биокератопротезного комплекса в глазах экспериментальных животных (кроликов) возможно путем имплантации в строму роговиц четвертой части конструкции.

формированию соединительной ткани вокруг опорной пластинки кератопротеза, пролиферации фибробластов в строме имплантата за счет более длительной продолжительности жизни вводимых клеточных элементов (более 3-х месяцев в эксперименте) и неоваскуляризации, что обеспечивает надежность приживления биокератопротезной конструкции у реципиента.

5. Выявленное интенсивное формирование бельма и новообразованных сосудов в группе кроликов с имплантированным в строму биокератопротезным комплексом на основе аутологичных фибробластов кожи свидетельствует о выраженных репаративных процессах в зоне введения имплантата, способствующих надежному приживлению кератопротезной конструкции и профилактики развития специфических осложнений.

Практические рекомендации

Для конструирования биокератопротезного комплекса рекомендуется использовать: 1) консервированные кросслинкинг-модифицированные аллогенные донорские роговицы с низкими морфофункциональными показателями - 1 А-0 (классификация С.А., Борзенка 2008), представляющие собой каркас с повышенными биомеханическими свойствами; 2) культивированные аутологичные ФБ кожи, способствующие более выраженному развитию соединительной ткани и васкуляризации вокруг опорной пластинки кератопротеза; 3) желатиновые микроносители в качестве инертного и невидоспецифического трехмерного матрикса для культивированных клеточных элементов; 4) кератопротез, изготовленный из прочного, инертного и биосовместимого материала (н/р: титан).

Кератопротезирование с использованием биокератопротезного комплекса может быть показано пациентам с осложненными и истонченными бельмами 1У-У категории при функциональной сохранности сетчатки и зрительного нерва.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1 .Шипунова A.B., Борзенок С.А., Онищенко H.A., Крашенинников М.Е., Комах Ю.А., Мороз З.И., Ковшун Е.В., Волкова О.С., Тонаева Х.Д., Ролик О.И. Технология конструирования биокератопротезного комплекса с использованием культивированных фибробластов кожи реципиента // Актуальные вопросы тканевой и клеточной трансплантологии: Сб. тез.-СПб, 2010.-С.143.

2. Шипунова A.B., Борзенок С.А, Онищенко H.A., Крашенинников М.Е, Комах Ю.А, Мороз З.И, Ковшун Е.В, Волкова О.С., Тонаева Х.Д, Ролик О.И. Биоинженерная конструкция кератопротезного комплекса с использованием культивированных фибробластов реципиента // Актуальные проблемы офтальмологии Всерос. науч. конф. молодых ученых, 5-я: Сб. науч. ст. - М, 2010.-С.236.

3. Борзенок С.А., Васильев A.B., Шипунова A.B., Дашинимаев Э.Б, Комах Ю.А, Ковшун Е.В. Результаты конструирования биокератопротезного комплекса с использованием аутофибробластов кожи реципиента // Клеточная трансплантология и тканевая инженерия.- 2010.-Т.5, № 3. - С.17.

4. Шипунова A.B., Борзенок С.А, Комах Ю.А, Мороз З.И, Ковшун Е.В, Онищенко H.A., Васильев A.B., Дашинимаев Э.Б. Экспериментальные результаты конструирования биокератопротезного комплекса с использованием культивированных фибробластов кожи // Материалы 5-го Всероссийского съезда трансплантологов. - опуб. в журнале Вестник трансплантологии и искусственных органов. - Приложение.-2010. - Т. XII. - С. 239.

5. Шипунова A.B., Борзенок С.А, Васильев A.B., Дашинимаев Э.Б, Комах Ю.А, Ковшун Е.В, Волкова О.С. Предварительные результаты конструирования биокератопротезного комплекса с использованием аутофибробластов кожи реципиента // Всерос. науч. школа-конф. «Стволовые клетки и регенеративная медицина: Сб. тез.- М, 2010. - С.88-89.

6. Borzenok S., Shipunova A., Komakh Y., Moroz Z., Kovshun E., Volkova O., Vasilyev A., Dashinlmaev E. Bioengineering of biokeratoprosthesis complex//Annual Meeting of the EEBA-23-th. Abstracts.-Freiburg.-2011.-P. 88.

7. Борзенок C.A., Васильев A.B., Шипунова A.B., Дашинимаев Э.Б., Мороз З.И., Комах Ю.А., Ковшун Е.В. Новый тип тканеинженерной конструкции кератопротеза на основе аллогенной модифицированной донорской роговицы и культивированных фибробластов кожи человека // Вестник трансплантологии и искусственных органов. — 2011. - №3. -С.67-72.

8. Борзенок С.А., Васильев A.B., Шипунова A.B., Дашинимаев Э.Б., Мороз З.И., Комах Ю.А., Ковшун Е.В. Тканеинженерная конструкция биокератопротезного комплекса // Вестник Оренбургского государственного университета.- 2011. - №14 (133) - ноябрь,- С. 75-78.

9. Шипунова A.B., Борзенок С.А., Тахчиди Х.П., Комах Ю.А., Васильев A.B., Дашинимаев Э.Б. Биоинжиниринг кератопротезных систем // Филатовские чтения: Материалы научно-практ. конф. - Одесса, 2011.-С.193-194.

10. Борзенок С.А., Васильев A.B., Мороз З.И., Шипунова A.B., Дашинимаев Э.Б., Комах Ю.А., Ковшун Е.В. Биокератопротезирование как проблема клеточной биологии и регенеративной медицины // Федоровские чтения: Всерос. науч. конф. с межд. уч., 9-я: Сб. науч. работ - М., 2011.- С. 251252.

11. Shipunova А., Borzenok S., Komakh Y., Moroz Z., Kovshun E., Vasilyev A., Dashinimaev E. New biokeratoprosthetic complex // EuCornea Congress - 2nd: http://www.eucornea.org/Viennal l/posters-details.asp?id=12431 [Электронный ресурс].

12. Шипунова A.B., Борзенок C.A., Васильев A.B., Дашинимаев Э.Б. Клеточно-биоматриксная конструкция биокератопротезного комплекса // Актуальные вопросы офтальмологии: Сб. науч. тезисов. -Краснодар, 2011. - С. 62.

13. Шипунова A.B., Борзенок С.А., Васильев A.B., Дашинимаев Э.Б., Мороз -З.И., Ковшун Е.В., Комах Ю.А., Шацких A.B. Моделирование на экспериментальных животных имплантации конструкции биокератопротезного комплекса с использованием культивированных фибробластов кожи // Филатовские чтения: Материалы научно-практ. конф. -Одесса, 2012,-С.187-188.

14. Борзенок С.А., Шипунова A.B., Комах Ю.А., Мороз З.И., Васильев A.B., Дашинимаев Э.Б., Шацких A.B., Ковшун Е.В., Моделирование имплантации конструкции биокератопротезного комплекса с использованием культивированных фибробластов кожи. Исследование in vivo // Федоровские чтения: Всерос. науч. конф. с межд. уч. 10-я: Сб. науч. работ - М., 2012. -С. 134-135.

15. Борзенок С.А., Шипунова A.B., Васильев A.B., Дашинимаев Э.Б., Шацких A.B., Мороз З.И., Ковшун Е.В., Комах Ю.А. Конструирование биокератопротезного комплекса с использованием культивированных фибробластов кожи И Офтальмохирургия. - 2012. - №2. - С. 72-77.

16. Борзенок С.А., Шипунова A.B., Васильев A.B., Дашинимаев Э.Б. Результаты моделирования имплантации биокератопротезного комплекса в эксперименте // Материалы 6-го Всероссийского съезда трансплантологов. -опуб. в журнале Вестник трансплантологии и искусственных органов. -Приложение. - 2012,- T.XIV., С. 306.

Патенты РФ на изобретения по теме диссертации

1. Тахчиди Х.П., Борзенок С.А., Малюгин Б.Э., Васильев A.B., Шипунова A.B., Дашинимаев Э. Б., Мороз З.И., Ковшун Е. В., Комах Ю.А., Волкова О.С. «Способ кератопротезирования сосудистых осложненных бельм с помощью биокератопротезного комплекса». Патент РФ на изобретение № 2010138160 от 06.10.2011

Биографические данные Шипунова Анна Владимировна, 1984 года рождения, в 2007 году с отличием окончила Владивостокский Государственный Медицинский Университет по специальности «Лечебное дело».

С 2007 по 2009 год проходила обучение в клинической ординатуре по специальности «офтальмология» на базе ФГБУ «МНТК «Микрохирургия глаза» им. акад. С.Н. Федорова» Минздрава России. С 2009 по 2012 год обучалась в очной аспирантуре на базе ФГБУ «МНТК «Микрохирургия глаза» им. акад. С.Н. Федорова» Минздрава России. Является автором 21-й печатной работы, 1-го патента на изобретение.

Подписано в печать: 02.11.2012 Тираж 150 экз. Заказ №1020 Отпечатано в типографии «Реглет» г. Москва, Ленинградский пр-т д.74 (495)790-74-77 www.reglet.ru

Оглавление диссертации Шипунова, Анна Владимировна :: 2012 :: Москва

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. СОВРЕМЕННЫЕ МЕДИКО-БИОЛОГИЧЕСКИЕ 15 ПОДХОДЫ К РЕШЕНИЮ ПРОБЛЕМ УСПЕШНОГО КЕРАТОПРОТЕЗИРОВАНИЯ ОСЛОЖНЕННЫХ БЕЛЬМ (ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ)

1.1. Медико-биологические аспекты эволюции 14 конструирования кератопротезов

1.2. Современные представления о роли 21 макрофагально-фибропластического взаимодействия для формирования тканевой реакции на имплантат в роговице реципиента

1.3. Клиническое применение культивированных 31 фибробластов кожи для индукции процессов регенерации в восстановительной медицине и офтальмологии

1.4. Кросслинкинг роговичного коллагена 37 как важный этап подготовки конструкции кератопротеза к имплантации

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. Материал экспериментальных исследований

2.2. Техника моделирования in vitro 46 кератопротезных конструкции

2.2.1. Подготовка кератопротезных конструкций

2.2.2. Подготовка фибробластов кожи

2.2.3. Конструирование биокератопротезной 53 конструкции

2.3. Техника подготовки и имплантации 55 кератопротезных конструкций в экспериментах на кроликах

2.4. Клинические и лабораторные методы исследований.

ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ЛАБОРАТОРНЫХ

ИССЛЕДОВАНИЙ КОНСТРУИРОВАНИЯ БИОКЕРАТОПРОТЕЗНОГО КОМПЛЕКСА

ГЛАВА 4. РЕЗУЛЬТАТЫ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНО

КЛИНИЧЕСКИХ ИССЛЕДОВАНИЙ ИМПЛАНТИАЦИИ БИОКЕРАТОПРОТЕЗНОГО КОМПЛЕКСА

4.1. Клинические результаты имплантации кератопротезных конструкций 4.2. Морфологические результаты

Введение диссертации по теме "Глазные болезни", Шипунова, Анна Владимировна, автореферат

По данным Всемирной организации здравоохранения в 2010 году заболевания роговицы явились причиной слепоты 8 миллионов человек во всем мире (World Health Organization, 2011). В РФ в структуре слепоты и инвалидности по зрению последствия глазного травматизма занимают II место. Из этого числа 30 % составляют помутнения роговицы (Либман Е.С., 2005).

Пересадка роговицы в бельма IV-V категории по классификации В.П. Филатова и Д.Г. Бушмич (1947) является неэффективной вследствие развития различного рода осложнений иммунного генеза, приводящих к помутнению трансплантата. Единственным способом восстановления зрения пациентам с такими бельмами остается протезирование роговицы (Филатов В.П. ,1934; Гундорова P.A., 1969; Федоров С.Н., 1969; Якименко С.А. и др., 1981, 1983, 1985; Мороз З.И., 1987; Калинников Ю.Ю., 2000, 2005; Cardona Н., 1964, 1977; Barraquer J.,1965; Choyce D., 1965, 1966, 1968, 1973, 1980; Dohlman С., 1967, 1999; Hicks С., 1998).

Однако основной проблемой кератопротезирования остается отсутствие истинного приживления протеза в тканях бельма и его отторжение (Гундорова P.A., 1969; Федоров С.Н., 1969; Якименко С.А. и др., 1985; Калинников Ю.Ю., 2005; Мороз З.И., 2007; Cardona Н.5 1964, 1977; Barraquer J.,1965; Choyce D., 1980; Dohlman С., 1999; Hicks С., 1998). В этой связи актуальным вопросом на сегодня остается создание "идеального" кератопротеза, обладающего высокими оптическими характеристиками и способного надежно интегрироваться в ткани роговицы.

Эволюция кератопротезирования шла по пути совершенствования формы, размеров кератопротезов и материалов для их изготовления. Внедрение в производство синтетических полимеров в середине прошлого века стало ключевым моментом в развитии кератопротезирования, обусловив появление большого количества новаторских работ по конструированию кератопротезных конструкций на основе полиметилметакрилата, политетрафторэтилена, полиуретана, нейлона, дакрона, и др. (Гундорова P.A., 1969; Федоров С.Н., 1969; Пучковская H.A., 1975; Бедило В.Я., 1985; Якименко С.А. и др., 1985; Cardona Н., 1962; Barraquer J.,1965; Choyce D., 1980; Dohlman С., 1967, 1999). Большое распространение получили кератопротезные конструкции «core and skirt», включающие центральную оптическую часть, окруженную перфорированной «юбкой» из различных материалов. Ряд авторов с целью повышения надежности приживления конструкции показали целесообразность использования биологических тканей в составе кератопротезов (Strampeiii V., 1963; Temprano J., 1993). Данное направление получило название биокератопротезирования. Для конструирования таких моделей кератопротезов использовались аллогенные и аутологичные ткани организма -аутотрансплантат большеберцовой кости (Temprano J., 1993), альвеолярного отростка зуба (Strampeiii V., 1993), нативная донорская роговица (Dohlman С.Н., 1999) и др. С целью повышения надежности приживления кератопротезной конструкции путем повышения ее устойчивости к действию протеолитических ферментов слезы и влаги передней камеры учеными ФГБУ МНТК «МГ» им. акад. С.Н. Федорова (Федоров С.Н. и др. 1995) использовалась аллогенная донорская роговица, обработанная дубящими составами альдегидных соединений.

Однако отсутствие истинного взаимопроникновения разнородных жестких материалов, входящих в состав подобных протезов, часто способствовало несостоятельности конструкций и их распаду (Федоров С.Н., 1999; Temprano J., 1993; Strampeiii V., 1993; Dohlman C.H., 1999; Falcinelli G., 1999).

Проведенный анализ многочисленных исследований свидетельствовал о том, что использование в составе периферической части кератопротеза ригидных гидрофобных материалов менее предпочтительно в сравнении с гидрофильными пористыми синтетическими и биологическими полимерами, схожих по своим физическим характеристикам с роговицей и способных надежно интегрироваться в ткани организма. На сегодня создаются полимерные композиции, синтезированные по технологии взаимопроникающих сеток, при которой соединение материалов происходит без образования химических связей (Липатов Ю.С., 1979; Sperling L., 1977). На базе данной технологии разработаны кератопротезы из полигидроксиэтилметакрилата разной степени гидрофильности (Chirila Т., 2001; Hiks С., 2003), полиакриловой кислоты и полиэтиленгликоля (Myung D. et al., 2008), политетрафторэтилена и полидиметилсилоксана (Legeais J., 2001) и т.д. Некоторые исследовательские группы показали эффективность предварительного введения в материалы периферической части культивированных фибробластов и компонентов внеклеточного матрикса (Trinkhaus-Randall V. et al., 1990, 1991; Wu X., Trinkaus-Randall V., Tsuk A., 2001). Для стимуляции эпителизации поверхности оптической части протеза, ее покрывают коллагеном I типа, фибронектином, ламинином и т.д. (Myung D. et al., 2005; Jacob J.et al, 2005; Bakri A.et al., 2006; Kakhaneh А и др., 2011). Однако, несмотря на ряд неоспоримых достоинств пористых синтетических полимеров, их использование не всегда обеспечивало длительное приживления протеза в бельме (Legeais J.et al., 1991; Chirila T.et al.,1993; Hicks C.et al., 1998).

С целью интимного соединения гидрогелевого материала с тканью посредством биологической структуры учеными ФГБУ «МНТК «МГ» им. акад. С.Н. Федорова» был разработан биокератопротез, синтезированный путем соединения полимерной матрицы из полигидроксиэтилметакрилата и ксеноперикарда крупного рогатого скота (Федоров С.Н. и др. 2000; Калинников Ю.Ю., 2005). Применение данной технологии способствовало прорастанию ткани хозяина, как в периферическую часть протеза, выполненную из ксеноперикарда, так и в область перехода биологического материала в синтетический полимер, что повышало надежность приживления конструкции.

Однако первые клинические результаты применения данного биокератопротеза показали неизбежность появления таких осложнений, как асептический некроз (10,3%) и отторжение кератопротеза в 3,4% случаев (Калинников Ю.Ю., 2005).

На сегодня применение клеточных технологий позволяет замещать и восстанавливать ткани организма. Культивированные фибробласты кожи человека в виде клеточных линий и в составе тканеинженерных конструкций широко используются в комбустиолоии, урологии, стоматологии и других клинических областях медицины, во многом разрешив проблему недостатка донорского материала (Терских В.В., Васильев А.В., 1995).

При этом большое внимание при конструировании искусственных роговиц уделяется повышению прочностных свойств матрикса. С этой целью в конструкцию включают синтетические полимеры (Li F.et al., 2003), а также проводят рибофлавин-ЦУА-индуцированную фотохимическую сшивку коллагена (McLaughlin C.et al., 2009).

Учитывая успешные результаты создания и применения тканеинженерных конструкций для замещения роговицы и восстановления ее поверхностных дефектов, мы считаем целесообразным использование достижений регенеративной медицины для создания кератопротезов нового поколения, представляющих собой биоинженерные конструкции с повышенными прочностными и интегративными свойствами за счет использования прочного биополимерного каркаса и клеточных элементов, что послужило основанием к выбору цели наших исследований.

Цель исследования

Задачи исследования

3. Разработать на кроликах экспериментальную модель для изучения биокератопротезного комплекса.

Научная новизна

3. Впервые установлено, что биодеградирующие желатиновые микроносители при имплантации в составе биокератопротезного комплекса, способствуют активной миграции фибробластов реципиента в полость интрастромального кармана роговицы, их трансформации в миофибробласты, и тем самым, надежно повышают приживление конструкции биокератопротеза.

Практическая значимость

3. Впервые показано, что изучение особенностей приживления биокератопротезного комплекса возможно в эксперименте in vivo на глазах лабораторных животных (кроликов) в виде имплантации в интрастромальный карман роговицы четвертой части биокератопротезной конструкции.

Основные положения, выносимые на защиту

1. Новое поколение кпеточно-тканевой биоинженерной конструкции кератопротезов - биокератопротезный комплекс, обладает повышенными прочностными свойствами, устойчивостью к протеолитическим ферментам слезы, водянистой влаги и интервенции активных макрофагов за счет использования в качестве биополимерного каркаса кросслинкинг-модифицированной аллогенной донорской роговицы, культивированных фибробластов кожи на желатиновых микроносителях, способствующих развитию репаративных процессов в строме и полости интрастромального кармана.

Апробация работы

Внедрение в практику

По теме диссертации получен Патент РФ на изобретение № 2010138160 от 06.10.2011 «Способ кератопротезирования сосудистых осложненных бельм с помощью биокератопротезного комплекса» (Тахчиди Х.П., Борзенок С.А.,

Малюгин Б.Э., Васильев A.B., Шипунова A.B., Дашинимаев Э. Б., Мороз З.И., Ковшун Е. В., Комах Ю.А., Волкова О.С.).

Результаты диссертационной работы используются в лекционных курсах для клинических ординаторов, аспирантов и курсантов Научно-педагогического центра ФГБУ МНТК «МГ» им. акад. С.Н.Федорова, а также ординаторов и аспирантов кафедры глазных болезней МГМСУ им. А.И. Евдокимова.

Публикации

По теме диссертации опубликованы 16 печатных работ, в том числе 3 - в журналах, рецензируемых ВАК РФ.

Объем и структура диссертации

Работа изложена на 135-ти страницах машинописного текста, иллюстрирована 9-ью таблицами, 38-ью рисунками. Список используемой литературы включает 272 источника, из них 81 - отечественный и 191 - иностранный. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, 4-х глав, содержащих данные обзора литературы, экспериментальных исследований in vitro и in vivo, заключения, выводов, практических рекомендаций и списка используемой литературы.

Заключение диссертационного исследования на тему "Медико-биологические аспекты конструирования биокератопротезного комплекса с использованием культивированных фибробластов"

ВЫВОДЫ

4. Использование аутологичных фибробластов кожи кроликов по сравнению с аллогенными донорскими фибробластами в составе биокератопротезного комплекса на основе кросслинкинг-модифицированной донорской кроличьей роговицы способствует более выраженному формированию соединительной ткани вокруг опорной пластинки кератопротеза, пролиферации фибробластов в строме имплантата за счет более длительной продолжительности жизни вводимых клеточных элементов (более 3-х месяцев в эксперименте) и неоваскуляризации, что обеспечивает надежность приживления биокератопротезной конструкции у реципиента.

5. Выявленное интенсивное формирование бельма и новообразованных сосудов в группе кроликов с имплантированным в строму биокератопротезным комплексом на основе аутологичных фибробластов кожи свидетельствует о выраженных репаративных процессах в зоне введения имплантата, способствующих надежному приживлению кератопротезной конструкции и профилактике развития специфических осложнений.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

Кератопротезирование с использованием биокератопротезного комплекса может быть показано пациентам с осложненными и истонченными бельмами IV-V категории при функциональной сохранности сетчатки и зрительного нерва.

Список использованной литературы по медицине, диссертация 2012 года, Шипунова, Анна Владимировна

1. Аветисов С. Э., Мамиконян В. Р., Завалишин H. Н. и др. Экспериментальное исследование механических характеристик роговицы и прилегающих участков склеры // Офтальмол. журн. — 1988. — №4. —С. 233—237.

2. Алексеев A.A., Попов C.B. Современные методы трансплантации культивированных клеток кожи и ее эквивалентов при лечении ожогов // Комбустиология (электронный журнал) 1999; 1.

3. Астахов Ю.С., Хапчаев Р.Т. Биоинтегрируемый опорный элемент кератопротеза из отечественного политетрафторэтилена // Офтальмология. 2005. -№2. - С. 38-42.

4. Багров С.Н. Реактивные изменения роговицы после имплантации аллопластических протезов: Автореферат дис. . канд. мед. наук. М., 1975.-26 с.

5. Багров С.Н., Ронкина Т.Н., Мороз З.И. и др. Структурно-функциональные изменения в роговице при несквозном кератопротезировании // Актуальные вопросы офтальмохирургии. Куйбышев, 1973. - С. 124-128.

6. Бедило В.Я., Бедило A.B. Отдаленные результаты переднего сквозного протезирования бельм после химических ожогов // Офтальмол. журн. -1985.-3.-С.138-139.

7. Бедило В.Я., Тарабукин В.И. Значение трансплантации тканей, профилактики разрушений при ее протезировании // Офтальм. журн.-1979. №7. - С. 394-396.

8. Беккер Г.О. Введение в фотохимию органических соединений. М.: Химия, 1976. - 379с.

9. П.Берк Г.С., Блюмин Дж.Х., Себастиан Дж.Л. Восполнение голосовых связок культивированными фибробластами // Бюлл. экспер. Биол. Мед. -2000. Т. 130, № 8. - С. 207-209.

10. Борзенок С.А., Мороз З.И., Калинников Ю.Ю. и др. Средство для консервации донорской роговицы с опорным элементом кератопротеза / Патент РФ № патент № 2204247 от 27.11.2003.

11. Борзенок С.А. Медико-технологические и методологические основы эффективной деятельности глазных тканевых банков России в обеспечении операций по сквозной трансплантации роговицы: дис. . д-ра мед. наук. М., 2008. - 306 с.

12. Н.Васильев A.B. Клеточные механизмы репарации тканевых повреждений: дис. д-ра биол. наук. М., 2003.- 302с.

13. Васильев A.B. Макаров П.В., Роговая О.С. и др. Восстановление дефектов роговицы с помощью тканевой инженерии // Известия РАН. Серия биол. 2005. - Т.32. - С. 5-8.

14. Васильев A.B., Смирнов C.B., Малахов C.B. и др. Восстановление поражений кожи путем трансплантации кератиноцитов, культивированных на микроносителях // Междунар. хирургический конгр. 4-й «Раны, ожоги, повязки»: Тез. докл. Тель-Авив, 1996. - С.148.

15. Василец В.Н., Казбанов И.В., Недосеев С.Л. и др. Физические методы создания и модифицирования биополимерных матриксов // Вестник трансплантологии и искусственных органов. 2009. - №2. -С. 43-46.

16. Верзин A.A. Интраламеллярная кератопластика биополимерной линзой для лечения буллезной кератопатии и коррекции афакии (клинико-экспериментальное исследование): автореф. дис. . канд. мед. наук. М.,2002.-25с.

17. Вит В.В. Строение зрительной системы человека.- Одесса: Астропринт,2003.-С. 176-186.

18. Волков В.В., Ушаков H.A. О выборе рационального способа укрепления бельма в интересах сквозного кератопротезирования // Труды БМОЛА: «Вопросы восстановительной офтальмологии».- JL, 1972. С. 37-39.

19. Волкова О.С. Новая модель кератопротеза в лечении бельм различной этиологии: автореф. дис. . канд. мед. наук. -М., 1992. 15с.

20. Глазко В.И. Профилактика и лечение осложнений сквозного кератопротезирования: автореф. дис. . канд. мед. наук.- Москва, 1982.21 с.

21. Гундорова P.A., Малаева JI.B., Удинцов Б.Е. Кератопротезирование //

22. Методическое письмо. М., 1977.

23. Гундорова P.A., Малаева JI.B. Отдаленные результаты оптического кератопротезирования // Офтальм. журн. 1979. - №7. - С. 396-399.

24. Данилов H.A., Игнатьева Н.Ю., Иомдина E.H. и др. Увеличение стабильности склерального коллагена в ходе гликозилирования треозой // Журнал физической химии. 2010. -Т 84, №1.- с. 131-137.

25. Джавришвили Г.В. Современные аспекты хирургического лечения ожоговых бельм: дис. . д-ра мед. наук. М., 2004. - 296 с.

26. Джавришвили Г.В. Несквозное кератопротезирование в хирургическом лечении дистрофических бельм: автореф. дис. . канд. мед. наук. М., 1991.-26 с.1.l

27. Животовский Д.С. Применение внутрироговичных пластмассовых линз в эксперименте // Вестник офтальмологии. 1970. - № 2. - С. 34-37.

28. ЗО.Зуев В.К. Кератопротезирование тяжелых бельм. Результаты клинических и экспериментальных исследований // Труды московского медицинского стоматологического института.- М., 1973.- С. 87-89.

29. Зуев В.К. Сквозное кератопротезирование роговой оболочки при ожоговых бельмах: автореф. дис. канд. мед. наук. М., 1974. - 16с.

30. Игнатьева Н.Ю. Коллаген основной белок соединительной ткани (обзор) // Эстетическая медицина. - 2005. T.VI, №3. С. 247-256.

31. Калинников Ю.Ю. Оптическое биокератопротезирование ожоговых бельм: дис. . д-ра мед. наук. М., 2004. - 303 с.

32. Калинников Ю.Ю., Мороз З.И., Леонтьева Г.Д. и др. Искусственная роговица на основе донорских тканей и полимера // Съезд офтальмологов России, 7-й: Тез. докл. М., 2000. - Ч 2. - С. 18-19.

33. Калинников Ю.Ю., Мороз З.И., Леонтьева Г.Д. и др. Первый клинический опыт биокератопротезирования тяжелых ожоговых бельм // Федоровские чтения. М., 2004. С. 182-184.

34. Келлер Г., Себастиан Д., Ревазова Е. Сохранность инъецируемых аутологичных человеческих фибробластов // Бюллютень экспериментальной биологии и медицины. 2000. - Т. 130. - № 8. - С. 203-206.

35. Колокольчикова Е.Г., Будкевич Л.И., Бобровников А.Э. и др. Морфологические изменения ожоговых ран после пересадки аллогенных фибробластов // Бюлл. экспер. биол. 2001. - №1. - С. 107-111.

36. Краснов М.М., Орлова Е.М. Первый опыт имплантации и искусственной роговицы (аллопластическое кератопротезирование) // Вестник офтальмологии. 1967. - №6. - С. 11-16.

37. Краснов М.М., Зиангирова Г.Г., Удинцов Б.Е. Эспериментально-морфологическая оценка возможности использования эктопическогохрящеобразования в реконструктивной офтальмологии // Вестник офтальмологии. 1977. - №6. - С. 3-8.

38. Кузин М.И., Туманов В.П. Басагина JI.C. Лечение ожоговых ран при использовании выращенного in vitro аутоэпителия: Обзор литературы // Хирургия. 1985.-N11.-С. 147-151.

39. Леонов C.B. Применение модифицированного дермального эквивалента для лечения гранулирующих ран: дис. кан. мед. наук. М., 2000. 102 с.

40. Либман Е.С. Слепота и инвалидность вследствие патологии органа зрения в России // Вестник офтальмологии. 2006. - №1 .- С. 35-37.

41. Липатов Ю.С., Сергеева Л.М. Взаимопроникающие полимерные сетки. -Киев: Наук. Думка, 1979. 159 с.

42. Макаров П.В. Осложнения тяжелой ожоговой травмы глаз: патогенез, анализ причин, профилактика и возможные пути оптимизации результатов лечения: дис. . д-ра мед. наук. М., 2003. - 335 с.

43. Малахов С.Ф., Терских В.В., Баутин Е.А. и др. Аутотрансплантация выращенных вне организма кератиноцитов с целью лечения обширных ожогов // Вест, хирургии. 1993. - N 3. - С. 59-61.

44. Мороз З.И. Медикотехнологическая система оптического кератопротезирования: дис. докт. мед. наук. М., 1987. - 312 с.

45. Мороз З.И., Борзенок С.А., Ковшун Е.В. и др. Кератопластика с использованием модифицированного донорского материала при фистуле роговицы // Съезд офтальмологов России, 9-й: Тез. Докл. М., 2010. -С. 313.

46. Мороз З.И., Борзенок С.А., Калинников Ю.Ю. и др. Способ обработки трупной роговицы человека перед кератопластикой. Патент РФ № 2381649 от 02.12.2008.

47. Мороз З.И., Зуев В.К. Осложнения при сквозном кератопротезировании // Всесоюзный съезд офтальмологов, 4-й.- Киев, 1973. С. 630-633.

48. Мороз З.И., Ковшун Е.В., Калинников Ю.Ю. и др. Способ имплантации опорного элемента при проведении первого этапа кератопротезирования. Патент РФ № 2079295 от 20.05.1997.

49. Мороз З.И., Ковшун Е.В., Калинников Ю.Ю. и др. Способ кератопротезирования сосудистых истонченных бельм. Патент РФ № 2080846 от 10.06.1997.

50. Панормова Н.В., Малов В.М. Морфологический аспект сквозного кератопротезирования грибовидным имплантатом // Офтальм. журн.-1977.-№5.-С. 373-375.

51. Пальцев М.А. Иванов A.A. Межклеточные взаимодействия. М.: Медицина, 1995. -224 с.

52. Пальцев М.А. Биология стволовых клеток и клеточные технологии: в 2 т. М.: Медицина. Шико, 2009. - Т.2. - 272 с.

53. Пучковская H.A., Якименко С.А., Голубенко Г.А. Аллопластика роговой оболочки при осложненных бельмах с применением усовершенствованной модели кератопротеза // Всероссийский съезд офтальмологов, 3-й: Тез. докл. М., 1975. - Т.1. - С. 189-200.

54. Пучковская H.A., Якименко С.А. Оптическое кератопротезирование. -Киев, 1986.-120 с.

55. Рахаев A.M. Лечение пограничных ожогов и донорских ран с применением культивированных аллофибробластов: автореф. дис. канд. мед. наук. -М., 2000. 18 с.

56. Роговая О.С., Васильев A.B., Киселев И.В. и др. Использование фибробластов человека, выращенных на микроносителях, для формирования эквивалента соединительной ткани // Онтогенез. 2004. -Т.35. -№2. - С. 105-109.

57. Саркисов Д.С., Алексеев A.A., Туманов В.П. Трансплантация культивированных фибробластов: пятилетний опыт лечения обожженных // Международная конференция "Пластическая хирургия ожоговых ран. Матер, конф. 1994. - С. 57-58.

58. Серов В.В., Шехтер А.Б. Соединительная ткань. М.: Медицина, 1981. -312 с.

59. Сысоева В.Ю., Рубина К.А., Калинина Н.И. и др. Аутологичные фибробласты дермы: перспективы применения в медицине // Аутологичные стволовые клетки: экспериментальные исследования и перспективы клинического применения. М. - 2009. - 448 с.

60. Терских В.В., Васильев А.В., Воротеляк Е.А. Структурно-функциональные единицы эпидермиса // Известия РАН. Серия биол. -2003. -№6. С.645-649.

61. Туманов В.П. Способ получения трансплантата из культивированных фибробластов человека для лечения обожженных // Международный симпозиум "Новые методы лечения ожогов с использованием культивированных клеток кожи": Тез. докл. Тула, 1996. - С. 11.

62. Ушаков Н.А. Кератопротезирование в эксперименте и клинике // Вопросы восстановительной офтальмохирургии: Труды БМОЛА.-Л., 1972. Т.191. - С. 127-132.

63. Федоров С.Н. Кератопротезирование как метод лечения иноперабельных и эндотелиальной дистрофии // Республиканская научная конференция по применению полимеров в хирургии, 2-я. Киев, 1969. - С. 34-35.

64. Федоров С.Н., Мороз З.И., Зуев В.К. Сквозное кератопротезирование при ожоговых и дистрофических бельмах роговой оболочки // Офтальм. Журн. 1976. - №8. - С. 573-580.

65. Федоров С.Н., Мороз З.И., Зуев В.К. Кератопротезирование. М.: Медицина, 1982. -144 с.

66. Федоров С.Н., Мороз З.И., Ковшун Е.В. и др. Новый способ кератопротезирования истонченных сосудистых бельм // Офтальмохирургия. 1995. - №2. - С. 50-53.

67. Федоров С.Н., Мороз 3.И.,Калинников Ю.Ю. и др. Сквозная кератопластика роговично-кератопротезного комплекса // Anales del instituto Barraquen Barselona, 1999. - Vol.28. - P. 63-64.

68. Федоров С.Н., Багров С.Н., Новиков C.B. и др. Кератопротез. Патент РФ №2124331 от 24.03.1997.

69. Федоров С.Н., Мороз З.И., Багров С.Н. и др. Искусственная роговица на основе донорских тканей и полимера // Офтальмохирургия. 2000. - №2. -С. 3-10.

70. Филатов В.П. Руководство глазной хирургии. М. - Л., 1934, Т.П. - С. 574-597.

71. Филатов В.П., Бушмич Д.Г. Выработка категорий бельм для пересадки роговой оболочки // Офтальмол. журн. 1947. - № 2. - С. 9-14.

72. Хилькин A.M., Шехтер А.Б., Истранов Л.П. и др. Коллаген и его применение в медицине. М.: Медицина, 1976. - 256с.

73. Ходжабекян Г.В. Трансплантация аллогенных культивированных клеток в лечении ожоговых дефектов роговицы в эксперименте: дис. . канд. мед. наук.- М., 2003. 192 с.

74. Хрущов Н.Г. Современные проблемы регенерации // Материал 2-й Всероссийской школы молодых ученых и специалистов по современной проблеме регенерации. Йошкар-Ола, 1982. - С. 159.

75. Ченцова Е.В. Система патогенетически обоснованного лечения ожоговой травмы глаз: дис. . д-ра мед. наук. М, 1996. - 304 с.

76. Шехтер А.Б., Берченко Г.Н. Фибробласты и развитие соединительной ткани: ультраструктурные аспекты биосинтеза, фибриллогенеза и катаболизма коллагена // Архив патологии 1978. Вып. 8. - С.70.

77. Шехтер А.Б., Розанова И.Б. Тканевая реакция на имплантат. // Биосовместимость. М., 1999. - С. 174-211.

78. Шехтер А.Б., Серов В.В. Воспаление, адаптивная регенерация и дисрегенерация (анализ межклеточных взаимодействий) // Арх. пат.-1991.-№7.-с. 7-14.

79. Якименко С.А. Методы оптического кератопротезирования, показания возможности и результаты применения // Офтальм. журн. 1985. - №3 -С. 134-137.

80. Ahn J.I., Lee D.H., Ryu Y.H. et.al. Reconstruction of rabbit corneal epithelium on lyophilized amniotic membrane using the tilting dynamic culture method //Artif. Organs. 2007. - Vol.31. - №9. -P.711-732.

81. Alaminos M., Del Carmen Sánchez-Quevedo M., Muñoz-Avila J.I. et al. Construction of a complete rabbit cornea substitute using a fibrin-agarose scaffold // Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 2006. - Aug;47(8):3311-7.

82. Alió J.L., Mulet M.E., Haroun H. et al. Five year follow up of biocolonisable microporous fluorocarbon haptic (BIOKOP) keratoprosthesis implantation in patients with high risk of corneal graft failure // Br. J. Ophthalmol. 2004. -Dec; 88(12):1585-9.

83. Altman A.M., Yan Y., Matthias N. et al. Human adipose-derived stem cells seeded on a silk fibroin-chitosan scaffold enhance wound repair in a murine soft tissue injury model // Stem Cells. 2009. - Jan; 27(l):250-8.

84. Alvarez de Toledo J., Barraquer R.I., Temprano J. Osteo-odonto-keratoprosthesis: a 30 years retrospective study // Anales del Instituto Barraquer. 1999. - 28(S):95-100

85. Arámbula H., Sierra-Martínez E., González-Aguirre N.E. et al. Frozen human epidermal allogeneic cultures promote rapid healing of facial dermabrasion wounds // Dermatol. Surg. 1999. - Vol.25. - №9. - P.708-712.

86. Ashkenas J., Muschler J., Bissel M.J. The extracellular matrix in epithelial biology: shared molecules and common themes in distant phyla // Dev. Biol. 1997.-V. 180.-P. 433-444.

87. Asselineau D., Bernard B.A., Bailly C. et al. Human epidermis reconstructed by culture: is it "normal"? // J. Invest Dermatol. 1986. -Vol.86. - №2. - P. 181-186.

88. AubDck J., Irscick E., Romani N. et al. Rejection after a slightly prolonged survival time of Langerhans cell-free allogeneic cultured epidermis used for wound coverage in humans // Transplantation. 1988. - Apr;45(4):730-7

89. Auger F.A., Rouabhia M., Goulet F. et al. Tissue engineered human skin substitutes developed from collagen populated hydrated gels: clinical andfundamental applications // Med. Biol. Eng. Comput. 1998. V.36. - P.801-812. 271.

90. Bakri A., Farooqui N., Myung D. et al. Biocompatibility of a Hydrogel Corneal inlay in vivo // Invest. Ophthalmol. Vis. Sei. (Arvo Annual Meeting) 2006.

91. Barraquer J. Surgical treatment of cornel disease // Amer. J. Ophthalmol. -1965. Vol.56., №2. - P. 213-222.

92. Bell E., Ehrlich H.P., Buttle D. et al. Living tissue formed in vitro and accepted as a skin-equivalent tissue of full thickness // Science 1981. -V. 211. -P. 1052-1054.

93. Bell E., Sher S., Hull B. et al. The reconstitution of a living skin // J. Investig. Dermatol. 1983. Vol. 81. -P.25-105.

94. Bellini A., Mattoli S. The role of the fibrocyte, a bone marrow-derived mesenchymal progenitor, in reactive and reparative fibroses // Lab. Invest. -2007. Vol.87- №9. - P.858-870.

95. Braun E., Kanellopoulos J., Pe L., Jankov M. Riboflavin/Ultraviolet-A-Induced Collagen Crosslinking in the Management of Keratoconus // ARVO 2005; 4964/B167.

96. Bray L.J., George K.A., Ainscough S.L. et al. Human corneal epithelial equivalents constructed on Bombyx mori silk fibroinmembranes // Biomaterials. 2011 Aug;32(22):5086-91. Epub 2011 Apr 17.

97. Brown S.A., Lemons J.E. Medical Applications of Titanium and Its Alloys: The Material and Biological Issues. P. 415.

98. Builles N., Janin-Manificat H., Malbouyres M. et al. Use of magnetically oriented orthogonal collagen scaffolds for hemi-corneal reconstruction andregeneration // Biomaterials. 2010. - Nov;31(32):8313-22. Epub 2010 Aug 13.

99. Caniggia I., Tseu I., Rolland G., et al. Inhibition of fibroblast growth by epithelial cells in fetal rat lung //Am. J. Respir. Cell Mol. Biol. 1995. - V. 13. - P.91-98.

100. Cardona H. Keratoprosthesis: Acrylic optical Cylinder with supporting intralamellar plate//Amer. J. Ophthal. 1962; 54(2): 284-294.

101. Cardona H. Plastic keratoprosthesis. A description of the plastic material and comprative hystologic study of recipient corneas // Amer. J. Ophthal. 1964; 58(2): 247-252.

102. Cardona H. Nut and bolt mushroom transcorneal kerato-prosthesis. Amer. J. Ophthal. 1969; 68(4): 604-612.

103. Cardona H., De Voe A.G. Prosthokeratoplasty // Trans.Amer.Acad. Ophthalmol. Otoringol. M.A.-1977.-Vol.83.-N2.-P.271-280.

104. Carpenter G., Cohen S. Epidermal growth factor // Ann. Rev. Biochem. -1976.-Vol. 48-P. 193-216.

105. Carrier P., Deschambeault A., Talbot M. et al. Characterization of wound reepithelialization using a new human tissue-engineered corneal wound-healing model.Invest Ophthalmol Vis Sei 2008;49: 1376-1385.

106. Castroviejo R., Cardona H., De Voe A.G. Present status of prosthokeratoplasty//Amer. J. Ophthal. 1969; 68(4): 613-625.

107. Chan C.C., Sharma M., Wachler B.S. Effect of inferior-segment Intacs with and without C3-R on keratoconus // J. Cataract. Refract. Surg. 2007 -Jan; 33(l):75-80.

108. Chan K.Y., Hascke R.H. Epithelial-stromal interactions: specific stimulation of corneal epithelial cell growth in vitro by a factor(s) from cultured stromal fibroblasts //Exp. Eye Res. 1983. -V.36. P. 231-246.

109. Chirilia T.V., Chen Y.C., Griffin B.J. et al. Hydrophilic sponges based on 2-hydroxyeethyl metacrylate. I. Effect of monomer mixture composition on the pore size // Polym.International.-1993.-Vol.32, N. 3. P. 331-332.

110. Choyce D.P. Results of keratoprosthesis in Britian // Ophthalmol.Surg.-1973.-N4.-P. 23-32.

111. Choyce D.P. Keratoprosthesis // Amer. J. Ophthal. 1980; 89(1): 152-153.

112. Cogan D.G. The Transparency of the cornea. Oxford: Blackwells, 1960.

113. Corazza E., Petitti V., D'alberto A. et al. Complications of falcinelli's osteo-odonto-keratoprosthesis // Anales del Institute Barraquer. 1999.-Vol. 31.-N2.

114. Cordeiro Barbosa M.M., Barbosa J.B., Hirai F.E. et al. Effect of cross-linking on corneal thickness in patients with corneal edema // Cornea. 2010. -Jun; 29(6):613-7.

115. Crabb R.A., Chau E.P., Evans M.C. et al. Biomechanical and microstructural characteristics of a collagen film-based corneal stroma equivalent // Tissue Eng. 2006. - V. 12 - P 1565-1575.

116. Cruise G.M., Scharp D.S., Hubbell J.A. Characterization of permeability and network structure of interfacially photopolymerized poly(ethylene glycol) diacrylate hydrogels // Biomaterials. 1998;19(14):1287-94.

117. Day R. Artificial corneal implants (Implantation of plastic discs in cats and rabbits) // Trans. Amer. Ophthalmol. Soc. 1957. - Vol.55. - P.455-475.

118. De Voe A.G. A review of the teqhnique of keratoprosthesis // Serv. Ophthalmol. 1971. - Vol.16, N3. - P.170-174.

119. Doane K.J., Yang G., Birk D.E. Corneal cell-matrix interactions: type VI collagen promotes adhesion and spreading of corneal fibroblasts // Exp. Cell Res. 1992. - V. 200. - P. 490-499.

120. Docherty R., Forrester J.V., Lackie J.M. et al. Glycosaminoglycan's facilitate the movement of fibroblasts through three-dimensional collagen matrices // J. Cell Sci. 1989. V.92. - P.263-270.

121. Dohlman C.N., Refojo M.F., Rose J. Synthetic polymers in corneal surgery // Arch. Ophthalmol. 1967. - Vol.77. - P. 252.

122. Dohlman C.N. Postoperative regimen and repair of complications after keratoprosthesis surgery // Refract. Corneal Surg. 1993. - N 9. - P. 198-199.

123. Dohlman C.N., Netland P.A., Fung W.C. Experience with a keratoprosthesis // Anales del Instituto Barraquer. 1999. - Vol.31. - N2.

124. Doillon C.J., Watsky M.A., Hakim M. et al. A collagen-based scaffold for a tissue engineered human cornea: physical and physiological properties // Int. J. Artif. Organs. 2003.- Aug;26(8):764-73.

125. Dorin R.P., Pohl H.G., De Filippo R.E. et al. Tubularized urethral replacement with unseeded matrices: what is the maximum distance for normal tissue regeneration // World J. Urol. 2008. - Vol.26. - №4. - P.323-329.

126. Doxer A., Misof K., Grabner B. et al. Collagen Fibrils in the Human Corneal Stroma: Structure and Aging // Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 1998; Vol. 39; 644-648.

127. Du Y., Funderburgh M.L., Mann M.M. et al. Multipotent stem cells in human corneal stroma // Stem Cells. 2005; 23(9): 1266-1275.

128. Emerman J.T., Pitelka D.R. Maintenance and induction of morphological differentiation in dissociated mammary epithelium on floating collagen membranes // In Vitro. 1977. - Vol.13. - №5. -P.316-328.

129. Fagerholm P., Lagali N.S, Merrett K. et al. A biosynthetic alternative to human donor tissue for inducing corneal regeneration: 24-month follow-up of phase 1 clinical study // Sci. Trans. Med. 2010 Aug 25; 2(46):ra61.

130. Faizulin A.K., Prokop'ev V.M., Fedorova E.V. et al. Treatment of urethral fistulas in children with application of allogenic fibroblasts // Urologiia 2008. - Mar-Apr;(2):53-6.

131. Falcinelli G.C., Barogi G., Caselli M. et all. Personal changes and innovations in strampelli's osteo-odonto-keratoprosthesis // Anales del Instituto Barraquer. 1999. - Vol.31. - N2.

132. Fini M.E., Stramer B.M. How the cornea heals: cornea-specific repair mechanisms affecting surgical outcomes // Cornea. 2005;24(8) 1 :S2—SI 1

133. Fujimori E. Cross-linking and Fluorescence Changes of Collagen by Glycation and Oxidation // Biochimica et Biophisica Acta. 998 (1989); 105110.

134. Gabbiani G. The myofibroblast in wound healing and fibrocontractive diseases // J. Pathol. 2003. - Vol.200. - P.500-503.

135. Gaudreault M., Carrier P., Larouche K. et al. Influence of spl/sp3 expression on corneal epithelial cells proliferation and differentiation properties in reconstructed tissues // Invest. Ophthalmol. Vis. Sei. 2003; 44: 1447-1457.

136. Gielen V., Faure M., Mauduit G. et al. Progressive replacement of human cultured epithelial allografts by recipient cells as evidenced by HLA class I antigens expression//Dermatológica. 1987; 175(4):166-70.

137. Girard L.J., Hawkins R., Nieves R. et al. Keratoprosthesis: A 12-year follow up // Trans. Amer. Acad. Ophthalmol. Otolaringol. 1977. - Vol.83, N2. - P. 252-267.

138. Griffith M. et al. Survival of Apligraf in acute human wounds // Tissue Eng 2004; 10; 7-8: 1180-1195.

139. Griffith M, Fagerholm P, Liu W. et al. Corneal regenerative medicine: corneal substitutes for transplantation // Cornea and External Eye Disease, Essentials in Ophthalmology. Heidelberg, 2008, P. 37-53.

140. Griffith M., Osborne R., Munger R. et al. Functional human corneal equivalents from cell lines // Science. 1999. - Vol.286. - P. 2169-2172.

141. Griffith M. et al. Artificial corneas: a regenerative medicine approach // Eye. 2009. - Vol. 23. - P. 1985-1989.

142. Grinnell F. Fibroblast-collagen-matrix contraction: growth-factor signaling and mechanical loading // Cell Biolog. 2000. - Vol. 10. - P.363-365.

143. Gonzalez-Andrades M., de la Cruz Cardona J., Ionescu A.M. et al. Generation of bioengineered corneas with decellularized xenografts andhuman keratocytes // Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 2011.- Jan 5;52(1):215-22.

144. Goto Y., Noguchi Y., Nomura A. et al. In vitro reconstitution of the tracheal epithelium. // Am. J. Respir. Cell Mol. Biol. 1999. - Vol.20, №2. -P. 312-318.

145. Guo X., Hutcheon A.E., Melotti S.A. et al. Morphologic characterization of organized extracellular matrix deposition by ascorbic acid-stimulated human corneal fibroblasts // Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 2007. - Vol. 48. -P. 4050-4060.

146. Gwon A. Animal Models in Eye Research // Academic Press. 2007. -P. 184-187.

147. Hafezi F., Kanellopoulos J., Wiltfang R. et al. Corneal collagen crosslinking with riboflavin and ultraviolet A to treat induced keratectasia after laser in situ keratomileusis // J. Cataract Refract. Surg. 2007. -Dec;33(12):2035-40.

148. Halfter W., Liverani D., Vigny M. et al. Deposition of extracellular matrix along the pathways of migrating fibroblasts // Cell. Tissue. Res. 1990. - Vol.262, №3.-P. 467-481.

149. Hancock K., Hackett M.E. Skin equivalents // Lancet. 1989. - Aug 19; 2(8660):440.

150. Hansbrough J.F. Dermagraft-TC for partial-thickness burns: A clinical evaluation // J. Burn Care Rehabil. 1997; 18: S25-S28.

151. Harkin D.G., George K.A., Madden P.W. et al. Silk fibroin in ocular tissue reconstruction // Biomaterials. 2011. - Apr;32(10):2445-58. Epub 2011 Jan 19. Review.

152. Hay E.D. Extracellular matrix alters epithelial differentiation // Curr. Opin. Cell Biol. 1993. - V.5. - P. 1029-1035.

153. Hench L.L., Jones J.R. Biomaterials, artificial organs and tissue engineering. 2007, P. 123-133.

154. Hennessy B., Korbling M., Estrov Z. Circulating stem cells and tissue repair // Panminerva Med. 2004; 46(1): 1-11.

155. Herrman H. Direct metabolic interactions between animal cells // Science. 1960. - Vol. 132. - P.529-531.

156. Hicks C.R., Chirilia T.V., Clayton A.B. et al. Clinical results of implantation of the Chirilia keratoprosthesis in rabbits // Br.J.Ophthalmol.-1998.-Vol.82.-P. 18-25.

157. Hirai Y., Lochter A., Galosy S. et al. Epimorphin functions as a key morphoregulator for mammary epithelial cells // J. Cell Biol. 1998. -Vol.140, №1.-P.159-169.

158. Iannetti F. Twenty years follow up of osteo-odonto-keratoprosthesis // Acta XXV Concilium Ophthalmologicum, Roma.-Amsterdam: Kugler & Chendi. 1988. - Vol. - P. 1165-1168.

159. Iseli H.P., Thiel M.A., Hafezi F. et al. Ultraviolet A/riboflavin corneal cross-linking for infectious keratitis associated with corneal melts // Cornea. -2008. Jun; 27(5):590-4.

160. Jacob J.T., Rochefort J.R., Bi J. et al. Corneal epithelial cell growth over tethered-protein/peptide surface-modified hydrogels // J. Biomed. Mater Res. B Appl. Biomater. 2005. - Vol. 72. - P. 198-205.

161. Jester J.V., Rodrigues M.M., Herman I.M. Characterization of avascular corneal wound healing fibroblasts. New insights into the myofibroblasts // Am. J. Pathol. -1987. V.127. - P.140-148.

162. Jester J. V., Petroll W., Cavanagh H. Corneal stromal wound healing in refractory surgery: the role of myofibroblasts // Prog. Retinal Eye Res. 1999. -Vol. 18.-P.311-356.

163. Kakhaneh A., Mizadeh H., Ghaffariyeeh A.et al. Novel materials to enhance corneal epithelial cell migration on keratoprosthesis // Br. J. Ophtalmol. 2011. - Vol.95. - P.405-409.

164. Kain H. The development of the silicon-carbon keratoprosthesis // Refract. Corneal Surg. 1993. - N9. - P. 209-210.

165. Kanellopoulos A.J., Binder P.S. Management of corneal ectasia after LASIK with combined, same-day, topography-guided partial transepithelial PRK and collagen cross-linking: the Athens protocol // J. Refract. Surg. -2011. May.-27(5):323-31.

166. Kaufman H.E. Strengthening the Cornea // Cornea. Jul.2004. - Vol. 23; N.5.-P. 432.

167. Knowles W.F. Effect of intralamellar plastic membranes of corneal physiology //Amer. J. Ophthalmol. 1961. - Vol. 51. - N 2. - P. 274-284.

168. Kohlhaas M., Spoerl E., Speck A. et al. A New Treatment of Keratectasia after LASIK by Using Collagen with Riboflavin/UVA Light Crosslinking // Klin. Monatsbl. Augenheilkd. 2005. - May; 222(5); 430-436.

169. Koizumi N., Fullwood N.J., Bairaktaris G. et al. Cultivation of corneal epithelial cells on intact and denuded human amniotic membrane // Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. -2000. Aug; 41(9):2506-13.

170. Kozobolis V., Labiris G., Gkika M. et al. UV-A Collagen Cross-Linking Treatment of Bullous Keratopathy Combined With Corneal Ulcer // Cornea. -2010 Feb; 29(2):235-8.

171. Krueger R.R., Ramos-Esteban J.C., Kanellopoulos A.J. Staged intrastromal delivery of riboflavin with UVA cross-linking in advanced bullous keratopathy: laboratory investigation and first clinical case // J. Refract. Surg. 2008 Sep; 24(7):S730-6.

172. Lai J., Chen K., Hsiue G. Tissue-engineered human corneal endothelial cell sheet transplantation in a rabbit model using functional biomaterials // Transplantation. 2007. - Nov 27;84(10): 1222-32.

173. Lai J., Hsiue G. Functional biomedical polymers for corneal regenerative medicine // Reactive and Functional Polymers. 2007. - Vol.67. - P. 12841291.

174. Langham M. Corneal metabolism and its influence on corneal hydration in the living animal // The transparency of the cornea. Illinois: Springfield. -1960. -P.87-95.

175. Legeais J.M. et al. A new fluorocarbon for keratoprosthesis // Cornea. -1992. Vol.11. - N6. - P. 538-545.

176. Legeais J.M., Drubaix I., Mayer F. et al. A second generation of biointegrable keratoprosthesis. First human cases // Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 1997. - Vol.38, N4. - P. 131.

177. Legeais J.M., Renard G., Rossi C. et al. Keratoprosthesis: A comparative study of three different microporus polymer and first application in human eyes // Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. -1991. Vol.32., N4. - P.778.

178. Legeais J.M., Renard G., Pouliquen Y. A second generation of biointegrable keratoprosthesis // Anales del Instituto Barraquer. 1999. -28(S):57-8

179. Levine L.A., Strom K.H., Lux M.M. Buccal mucosa graft urethroplasty for anterior urethral stricture repair: evaluation of the impact of stricture location and lichen sclerosis on surgical outcome // J. Urol. 2007. - Vol.178, №5. -P.2011-2016.

180. Li F., Carlsson D., Lohmann C. et al. Cellular and nerve regeneration within a biosynthetic extracellular matrix for corneal transplantation // Proc. Natl. Acad. Sci.-USA, 2003;100: 15346-15351.

181. Liang Y., Liu W., Han B. et al. Fabrication and characters of a corneal endothelial cells scaffold based onchitosan // J. Mater Sci. Mater Med. 2011 Jan;22(l): 175-83. Epub 2010 Nov 25.

182. Limat A., French L.E., Blal L. et al. Organotypic cultures of autologous hair follicle keratinocytes for the treatment of recurrent leg ulcers // J. Am. Acad. Dermatol. 2003. - Vol.48, №2. - P.207-214.

183. Liu C., Hille K., Tan D. et al. Keratoprosthesis surgery // Dev. Ophthalmol. 2008; 41:171-186.

184. Lopes E.S., Foster B.A., Doniacour A.A. et al. Initiation of secretory activity of rat prostatic epithelium in organ culture // Endocrinology. 1996 -Vol.137, №10.-P.4225-4234.

185. Lu S.H., Sacks M.S., Chung S.Y. et al. Biaxial mechanical properties of muscle-derived cell seeded small intestinal submucosa for bladder wall reconstitution // Biomaterials. 2005. - Vol.26, №4 - P.443-452.

186. Malakhov S.F., Paramonov B.A., Vasiliev A.V. Preliminary report of clinical use of cultured allogenic keratinocyte // Burns. -1994. -V.20. P. 463466.

187. Matouskova E., Broz L., Stolbova V. et al. Human allogeneic keratinocytes cultured on acellular xenodermis: the use in healing of burns and other skin defects // Biomed. Mater. Eng. 2006. - Vol.16, №4. - P.63-71.

188. Matsuura H., Greene T., Hakomori S. An alpha-N-acetylgalactosaminylation at the threonine residue of a defined peptide sequence creates the oncofetal peptide epitope in human fibronectin // J. Biol. Chem. 1989. - Vol.264, №18. - 10472-10476.

189. McLaughlin C.R., Tsai R.J.-F., Latorre M.A. et al. Bioengineered corneas for transplantation and in vitro toxicology // Front. Biosci. 2009 Jan l;14:3326-37.

190. Meana A., Iglesias J., Del Rio M. et al. Large surface of cultured human epithelium obtained on a dermal matrix based on live fibroblast-containing fibrin gels // Burns. 1998. - V. 24. - P. 621-630.

191. Medawar P.B. The cultivation of adult mammalian skin epithelium in vitro // Quard. J. Microsc. Sei. 1948. V. 89. - P. 187-196.

192. Metz C.N. Fibrocytes: a unique cell population implicated in wound healing // Cell. Mol. Life Sei. 2003. - Vol.60. - P. 1342-1350.

193. Moria L., Bellinia A., Staceya M.A. et al. Fibrocytes contribute to the myofibroblast population in wounded skin and originate from the bone marrow // Experimental Cell Research. 2005. - Vol.304. - P.81-90

194. Myung D., Koh W., Ko J. et al. Characterization of poly(ethylene glycol)-poly(acrylic acid) (PEG-PAA) double networks designed for corneal implant applications // Invest. Ophthalmol. Vis. Sei. 2005;46: E-Abstract 5003.

195. Myung D., Duhamel P.E., Cochran J.R. et al. Development of hydrogel-based keratoprostheses: a materials perspective // Biotechnol. Prog. 2008;24: 735-741.

196. Mourra N., Borderie V., Laroche L. Ultrastructural and immunohistochemical study of 3-dimensional cultures of human keratinocytes on a collagen gel // J. Fr. Ophtalmol. 1998. - Vol.21, №4. - P.287-294.

197. Müller L., Thiel M.A., Kipfer-Kauer A.I. et al. Corneal cross-linking as supplementary treatment option in melting keratitis: a case series // Klin. Monbl. Augenheilkd. 2012 Apr; 229(4):411-5. Epub 2012 Apr 11.

198. Nakamura K., Kurosaka D., Bissen-Miyajima H. et al. Intact corneal epithelium is essential for the prevention of stromal haze after laser assisted in situ keratomileusis // Br. J. Ophthalmol. 2001; 85(2):209-213.

199. Nakamura Y., Tate R.F., Adachi Y. et al. Bronchial epithelial cells regulate fibroblast proliferation //Am. J. Physiol. 1995. V. 269. - P.L377-L387.

200. Nie X., Zhang J.Y., Cai K.J. et al. Cosmetic improvement in various acute skin defects treated with tissue-engineered skin // Artif. Organs. 2007 -Vol.31.,№9.-P.703-713.

201. Nilforoushzadeh M., Siadat A., Arianrad M. et al. Soft tissue augmentation by autologous cultured fibroblasts transplantation for treatment of wrinkles and scars: a case series of 20 patients // J. Res. Med. Sci. 2010 May; 15(3): 167-71.

202. Nomoto Y., Okano W., Imaizumi M.et al. Bioengineered prosthesis with allogenic heterotopic fibroblasts for cricoid regeneration // Laryngoscope. -2012 Apr; 122(4):805-9. doi: 10.1002/lary.22416. Epub 2012 Feb 16.

203. Pang K., Du L., Wu X. A rabbit anterior cornea replacement derived from acellular porcine cornea matrix, epithelial cells and keratocytes // Biomaterials. 2010 Oct;31(28):7257-65.

204. Parel J.M. 200 years of KPro: Pellier De Quengsy and the artificial cornea // An. Inst. Barraquer (Bars). 1999. - Vol.28(S). - P. 33-41.

205. Pathiraja A. et al. Biodegradable synthetic polymers for tissue engineering // European Cells and Materials. 2003. - Vol.5. - P.l-16.

206. Paul R.G., Bailey A. Glycation of collagen: the basis of its central role in the late complications of ageing and diabetes // Int. J. Biochem. Cell Bid. -1996; 28(12):1297-1310.

207. Pellegrini G., Ranno R., Stracuzzi G. et al. The control of epidermal stem cells (holoclones) in the treatment of massive full-thickness burns with autologous keratinocytes cultured on fibrin // Transplantation. 1999. -Vol.68. -P. 868-879.

208. Penttinen R.P., Kobayashi S., Bornstein P. Transforming growth factor beta increases mRNA for matrix proteins both in the presence and in the absence of changes in mRNA stability // Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 1988. -Vol.85.-№4 P. 1105-1108.

209. Pichler R., Klima G., Richter E.et al. Autologous fibroblast transplantation at the vesico-ureteral junction as potential reconstructive cell replacement in an animal model // World J Urol. 2012 Aug 4. Epub ahead of print.

210. Pineda R. II, Shiuey Y. The KeraKlear Artificial Cornea. A novel Keratoprosthesis // Techniques in Ophthalmology. 2009. - September. -Vol.7., N.3.-P. - 101-104.

211. Pinero L., Pinto D., De Pinho A. et al. In response to the letter to the editor regarding our recent article Autologous Fibroblast Culture in the Repair of Aging Skin // Dermatol. Surg. 2012; 38(2): 180-4.

212. Pintucci S., Pintucci F., Ceccom M.S.C. The Pintucci dacron tissue kp: long term results, postoperative care and revisions in dry eyes and eyes with tear secretion // Anales del Instituto Barraquer. 1999. - Vol.31. - N2.

213. Proulx S., d'Arc Uwamaliya J., Carrier P. Reconstruction of a human cornea by the self-assembly approach of tissue engineering using the three native cell types // Mol. Vis. 2010 Oct 29; 16:2192-201.

214. Rheinwald J., Green H. Serial cultivation of strains of human epidermal keratinocytes: the formation of keratinizing colonies from single cells // Cell -1975. -V.6. P. 331-344.

215. Rodriguez H., O'Connell C., Barker P.et al. Measurement of DNA biomarkers for the safety of tissue-engineered medical products, using artificial skin as a model // Tissue Eng. 2004 Sep-Oct;10(9-10):1332-45.

216. Ross R. The fibroblast and wound repair // Biol. Rev. Camb. Philos. Soc. 1968. - Vol.43., №1. - P.51-96.

217. Ruggierj F., Champliaud M.F., Garrone R. et al. Interactions between cells and collagen V molecules or single chains involve distinct mechanisms // Exp. Cell Res. 1994. - V. 210. - P. 215-223.

218. Schwab I., Reyes M., Rivkah-Isseroff R. Successful transplantation of bioengineered tissue replacements in patients with ocular surface disease // Cornea. 2000. -Vol. 19., N 4. - P. 421-426.

219. Sclafani A.P. et al. Evaluation of acellular dermal graft in sheet (AlloDerm) and injectable (micronized AlloDerm) forms for soft tissue augmentation. Clinical observations and histological analysis // Arch. Facial. Plast. Surg. 2000; 2; 2: 130-136.

220. Sheardown H., Griffith M. Regenerative medicine in the cornea // Principles of Regenerative Medicine. Elsevier: Boston, 2008, P. 1060-1071.

221. Smirnov S., Vasiliev A., Paramonov B.et al. Seven-year experience in the treatment of burn patients with allogenic cultured keratinocytes // Ann. of Burns and Fire Disasters. 1999. - Vol.12., N4. - P. 212-216.

222. Spear S., Seruya M., Rao S. Two-stage prosthetic breast reconstruction using AlloDerm including outcomes of different timings of radiotherapy // Plast. Reconstr. Surg. 2012 Jul; 130(1): 1-9.

223. Sperling, L.H., J. Polymer Sci // Macromolecular Reviews. Vol. 12, 141-180(1977)

224. Spoerl E., Schreiber J., Hellmund K. et al. Crosslinking Effects in the Cornea of Rabbits // Ophthalmologe 2000. - Vol. 97. - P. 203-206.

225. Spoerl E., Wollensak G., Dittert D. et al. Thermomechanical Behavior of Collagen-Cross-Linked Porcine Cornea // Ophthalmologica 2004. Vol. 218. -P. 136-140.

226. Spoerl E., Wollensak G., Seiler T. Increased Resistance of Crosslinked Cornea against Enzymatic Digestion // Current Eye Research. 2004. - Vol. 29., N.l.-P. 35-40.

227. Stone W.I., Herbert E. Experimental study of plastic material as replacement for the cornea. A preliminary report // Amer. J. Ophthalmol. -1953. Vol.36., N6. - P. 168-173.

228. Strampelli B. Osteo-odonto-keratoprosthesis // Amer. J. Ophthalmol. -1963.-Vol.89.-P.l 039-1044.

229. Strampelli B. Osteo-odonto-keratoprosthesis // Ann. oftalmol. 1970. -Vol. 96.-P.1-57.

230. Strampelli B. Keratoprosthesis with osteodental tissue // Amer. J. Ophthalmol. 1993. - Vol.89. - P. 1029-1039.

231. Tanaka Y., Shi D., Kubota A. et al. Irreversible optical clearing of rabbit dermis for autogenic corneal stroma transplantation // Biomaterials. 2011 Oct;32(28):6764-72.

232. Talbot M., Carrier P., Giasson C.J. et al. Autologous transplantation of rabbit limbal epithelia cultured on fibrin gels for ocular surface reconstruction //Mol. Vis.-2006 Feb 1; 12:65-75.

233. Temprano J. Keratoprosthesis with tibial autograft // Refract. Corneal Surg. -1991. Vol.9. - P. 192-193.

234. Temprano J. Keratoprosthesis with tibial autograft // Refract.Corneal Surg. 1993. - N9. - P. 192-193.

235. Terskikh V., Vasiliev A. Cultivation and transplantation of epidermal keratinocytes // Int. Rev. Cytol. 1999. - Vol.188. - P. 41-72

236. Trinkhaus-Randall V., Cappechi J., Banwatt R. et al. Development of biopolymer keratoprosthesis: epithelial adhesion in vitro and in vivo: ARVO Abstracts // Invest. Ophthalmol. Vis.Sci. 1987. - Vol.28 (suppl). - P.54.

237. Trinkhaus-Randall V., Banwatt R., Cappechi J.et al. In vitro fibroplasia in a porus polymer in the cornea // Invest. Ophthalmol. Vis.Sci. 1991. -Vol.32.-P.-3245-3251.

238. Tsai R.J., Ho Y.S., Chen J.K. The effects of fibroblasts on the growth and differentiation of human bulbarconjunctival epithelial cells in an in vitro conjunctival equivalent // Inxest Ophtalmol. Vis. Sci. 1994. - Vol.35., №6 -P. 2865-2875.

239. Van der Merwe A.E., Mattheyse F.J., Bedford M. et al. Allografted keratinocytes used to accelerate the treatment of burn wounds are replaced by recipient cells // Burns. 1990 Jun; 16(3): 193-7.

240. Vlodavsky I., Fucks Z., Ishai-Michaeli R. et al. Extracellular matrixresident basic fibroblast growth factor: Implication for the control of angiogenesis // J. Cell Biochem. 1991. - Vol.45. - P. 167-176.

241. Vrana N.E., Builles N., Justin V. et al. Development of a reconstructed cornea from collagen-chondroitin sulfate foams and human cell cultures // Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 2008. - Vol.49. - P. 5325-5331.

242. Wasserman D., Schlotterer M., Toulon A. Preliminary clinical studies of biological skin equivalent in burned patients // Burns. 1988. - Vol.14., №4. -P. 326-330.

243. Wendt J.R., Ulich T., Rao P.N. Long-term survival of human skin allografts in patients with immunosuppression // Plast. Reconstr. Surg. 2004. -Vol.113., №5.-P. 1347-1401.

244. West-Mays J.A., Dwivedi D. J. The keratocyte: Corneal stromal cell with variable repair phenotypes // Int. J. Biochem. Cell Biol. 2006. - Vol 38(10).-P. 1625-1631.

245. Wilson S.E., He Y.G., Lioyd S.A. EGF, EGF receptor, basic FGF, TGF-pi, and IL-la mRNA in human corneal epithelial cells and stromal fibroblasts // Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 1992. - V. 33. - P. 1756-1765.

246. Wollensak G., Spoerl E., Seiler Th. Riboflavin/Ultraviolet-A Induced Collagen Crosslinking for the Treatment of Keratoconus // Am. J. Ophthalmol. -2003.-Vol.135.-P. 620-627.

247. Wollensak G., Spoerl E., Seiler Th. Stress Strain Measurements of Human and Porcine Corneas after Riboflavin/Ultraviolet-A Induced Crosslinking // J. Cataract Refract. Surg. Sep. 2003. - Vol. 29. - P. 17801785.

248. Wollensak G., Spoerl E., Wilsh M. et al. Endothelial Cell Damage after Riboflavin-Ultraviolet-A Treatment in the Rabbit // J. Cataract Refract. Surg. Sep. 2003. - Vol. 29. - P. - 1786-1790.

249. Wollensak G., Spoerl E., Wilsch M. et al. Keratocyte Apoptosis after Corneal Collagen Crosslinking Using Riboflavin/UVA Treatment // Cornea. -2004. Vol. 23. P. 43-49.

250. Wollensak G., Wilsch M., Spoerl E. et al. Collagen Fiber Diameter in the Rabbit Cornea after Collagen Crosslinking by Riboflavin/UVA // Cornea. Jul 2004. - Vol. 23., N.5. - P. 503-507.

251. Wollensak G., Iomdina E., Dittert D.D. et al. Wound healing in the rabbit cornea after corneal collagen cross-linking with riboflavin and UVA // Cornea. 2007 Jun. - Vol. 26(5). - P. 600-605.

252. Wollensak G., Hammer T., Herrmann C.I. Haze or calcific band keratopathy after crosslinking treatment? // Ophthalmology. 2008 Sep. - Vol.- 105(9).-P. 864-865

253. Wollensak G., Aurich H., Wirbelauer C. et al. Potential use of riboflavin/UVA cross-linking in bullous keratopathy // Ophthalmic. Res. -2009. Vol.41(2). - P. 114-117. Epub 2008 Dec 20.

254. World Health Organization. Global data on visual impairments 2010 // WHO/NMH/PBD/12.01.

255. Worst J.G.F. 23 years of keratoprosthesis research: present state of art // Refract. Corneal Surg. 1993. - N 9. - P. 188-189.

256. Wu X., Trinkaus-Randall V., Tsuk A. Keratoprosthesis design and biological response to a synthetic cornea // Zhonghua Yan Ke Za Zhi. 2001. -Nov; 37(6):462-4.

257. Yamaguchi T., Shin T., Sugihara H. Reconstruction of laryngeal mucosa: a three-dimentional collagen gel matrix culture //Arch. Otolaryngol. Head Neck Surg. 1996. V. 122. - P. 649-654.

258. Yannas I.V., Burke J.F. Design of an artificial skin. I. Basic design principles // J. Biomed. Mater. Res. 1980. - Jan.- Vol.14, N.l. - P. 65 - 81.

259. Yannas I.V., Compton C.C., Butler C.E. et al. Organized skin structure is regenerated in vivo from collagen GAG matrices seeded with autologous keratinocytes // J. Invest. Dermatol. 1998. - V. 110. - P. 908-916.

260. Yonezawa M., Tanizaki H., Inoguchi N. et al. Clinical study with allogeneic cultured dermal substitutes for chronic leg ulcers // Int. J. Dermatol.- 2007. Vol.46., №1. - P.36-42.

261. Zajicova A., Pokorna K., Lencova A. et al. Treatment of ocular surface injuries by limbal and mesenchymal stem cells growing on nanofiber scaffolds // Cell Transplant. 2010. - Vol. 19(10). - P. 1281-1290. Epub 2010 Jun 23.

Оглавление диссертации Шипунова, Анна Владимировна :: 2012 :: Москва

Введение диссертации по теме "Глазные болезни", Шипунова, Анна Владимировна, автореферат

Список использованной литературы по медицине, диссертация 2012 года, Шипунова, Анна Владимировна

Похожие научные работы

Каталог диссертаций