Автореферат и диссертация по медицине (14.00.16) на тему:Лимфоцитарно-тромбоцитарная адгезия при ишемической болезни сердца

На правах рукописи

Жеребцова Светлана Владимировна

ЛИМФОЦИТАРНО-ТРОМБОЦИТАРНАЯ АДГЕЗИЯ ПРИ ИШЕМИЧЕСКОЙ БОЛЕЗНИ

СЕРДЦА

14 00 16 -патологическая физиология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Чита-2008 ~

003172668

Работа выполнена в ГОУ ВПО "Читинская государственная медицинская академия Росздрава"

Научный руководитель:

доктор медицинских наук,

профессор Витковскнй Юрий Антонович

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук Горбунов Владимир Владимирович

кандидат медицинских наук Ключерсва Наталья Николаевна

Ведущая организация ГОУ ВПО "Саратовский государственный медицинский университет Росздрава", г Саратов

Защита диссертации состоится " Ji " U^O^P 2008 г в ¿^"^ча-сов на заседании диссертационного совета Д 208 118 01 при ГОУ ВПО "Читинская государственная медицинская академия Росздрава" (672090, г Чига, ул Горького, 39-А)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГОУ BITO "Читинская государственная медицинская академия Росздрава"

Автореферат разослан " ЛЯ2Л 2008 г

Ученый секретарь диссертационного совета, кандидат медицинских наук, доцент

О.В. Кузьмина

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность работы. Ишемическая болезнь сердца (ИБС) - группа заболеваний, обусловленных абсолютной или относительной недостаточностью коронарного обращения Она выделена как самостоятельное заболевание Всемирной организацией здравоохранения в 1965 г в связи с большой социальной значимостью В настоящее время в мире, особенно в экономически развитых странах, отмечается неуклонный рост заболеваемости ИБС (WHO, 2001)

Главной, по сути, единственной причиной ИБС явчяется атеросклероз венечных артерий, выявляемый у 90-97% больных (Новиков В П, 2000) Формирование атеросклеротической бляшки имеет много сходства с реакцией развития иммунно! о воспаления образование неоантигена, очаговое скопление не зернистых лейкоцитов, разрастание соединительной ткани При этом усиливается миграция макрофагов и Т- клеток в артериальной стенке Активированные лейкоциты выделяют протеазы, пептидные ростковые факторы и цитокины, которые разрушают белки матрикса и стимулирую i гладкомышеч-ные клетки, эндотелиоциты и другие клетки (Пальцев М А , 2005, Fuster V, 2005) Поскольку в атеросклеротической бляшке одновременно присутствует большое количество Т-лимфоцитов и макрофагов мопоцитарного происхождения, повышена продукция ИЛ-2 и экспрессия эндо!елием HLA-II класса подтверждает то, что атерогенез является результатом развития иммунного ответа (Мазуров В И , 2005)

В настоящее время широко изучаются межклеточные взаимодействия, в основе когорых лежат механизмы сигнализации, опосредуемые цитокина-ми Установлено, что адгезивные взаимодействия между тромбоцитами и лейкоцитами являются важными звеньями механизмов, обеспечивающих миграцию лейкоцитов в зону повреждения, а следовательно воспаления и развития там иммунных и репаративных реакций (Витковский Ю А и соавт, 1999-2008, СолповАВ исоавг 2001-2008) Тромбоциты способны вступать в контакт с нейтрофилами и моноцитами в процессе остановки кровотечения и развития воспалительной реакции Выявлена взаимосвязь между гемостатическими и воспалительными реакциями при повреждении тканей, в которых ключевым звеном выступает взаимодействие лейкоцитов, тромбоцитов и эндотелиаль-ных клеток (Кузник Б И и соавт, 1988-2008)

Предыдущими работами изучены механизмы лимфоцитарно-тромбоци-тарной адгезии в условиях нормы Выявлено, что феномен лимфоцитарно-тромбоцитарной адгезии представляет собой одну из физиологических функций, присущую различным субпопуляциям лимфоцитов, и реализуемую посредством адгезивных молекул Лимфоцитарно-тромбоцнтарная адгезия ре-

гулируется цитокинами и индукторами агрегации тромбоцитов (Витковский Ю А , Кузник Б И , Солнов А В , 1999) Сами тромбоциты стимулируют адгезию лимфоцитов к экстрацеллюлярному матриксу в условиях тока жидкости, чго позволяет им противостоять силе сдвига, способствуют миграции лимфоцитов (Солпов А В , 2005, 2006)

Данный феномен может иметь определенное патофизиологическое значение, так как активация тромбоцитов на поврежденной поверхности сосудистой стенки может служить важным фактором в миграции лейкоцитов в толщу сосуда и дальнейшему формированию тромба Известно, чю одним из патогенетических звеньев начальной стадии развития атеросклероза является скопление и последующая миграция моноцитов, нейтрофилов, лимфоцитов и тромбоцитов в область повреждения сосудистого эндотелия Установлено, что взаимодействие моноцитов и лимфоцитов имеет первостепенное значение в инициации процессов повреждения и последующего тромбообразова-ния на поверхности атеросклеротичсской бляшки (Климов А Н , 1995, Пальцев М А , 2005, КЦуапапс! Б , 1995) Учитывая, что лимфоцитарно-тромбоци-тарные взаимодействия практически не изучались при ишемической болезни сердца, исследования в этом направлении могут оказаться перспективными для более глубокого понимания патогенеза и терапии этих заболеваний Цель и задачи исследования.

Целью исследования явилось изучить лимфоцитарно-тромбоцитарнуго адгезию при ИБС и ее взаимосвязи с агрегационной активностью тромбоцитов и продукцией цитокинов

Для достижения поставленной цели решались следующие задачи:

1 Изучить у больных со стабильной и прогрессирующей стенокардией (принимающих и не принимающих аспирин) и крупноочаговым инфарктом миокарда функцию лимфоцитарно-тромбоцитарной ад1 езии

2 Исследовать у пациентов ИБС спонтанную и индуцированную агрегацию тромбоцитов и оценить корреляционные взаимосвязи с функцией лимфоцитарно-тромбоцитарной адгезии

3 Определить у больных со стабильной и прогрессирующей стенокардией, принимающих и не принимающих аспирин, и крупноочаговым инфарктом миокарда концентрацию ИЛ-1РА, ИЛ-4, ИЛ-8, ИЛ-18, растворимого Р-селектина и оценить характер корреляционных связей с лимфоцитарно-тромбоцитарной адгезией

Научная новизна. Впервые установлено, что у больных со стабильной и прогрессирующей стенокардии, не принимающих аспирин, снижается количество лимфоцитарно-тромбоцитарных агрегатов по сравнению со здоровыми При этом уменьшается абсолютное число лимфоцитов, участвующих в

клсточно-пластиночной адгезии Использование аспирина при лечении пациентов со стабильной и професснрующей стенокардией восстанавливает у них функцию л!шфоцитарно-тромбоцитарной адгезии

Впервые выявлено, что после развития инфаркта миокарда у больных функция лимфоцитарно-тромбоцитарной адгезии неоднозначна у одннх - она находится ниже, у других - выше уровня здоровых, у третьих - соответствует норме К 20-22 суткам у больных с исходно низкими значениями увеличивается, а с высокими - снижается процент лимфоцитов, способных адгезнро-вать на своей поверхности громбоциты приближаясь к уровню здоровых У таких пациентов в первые 12 суток после развития инфаркта уменьшается абсолютное число лимфоцитов, присоединяющих к себе кровяные пластики

Впервые обнаружено, что изменения лимфоцитарно-тромбоцитарной адгезии у больных с различными проявлениями ИКС связаны с агрегационной функцией тромбоцитов и содержанием ИЛ-4, ИЛ-8, ИЛ-18, ИЛ-1РЛ и йР-селекшна

Теоретическая и практическая значимость работы. В результате исследования получены новые сведения о роли лимфоцитарно-тромбоцитар-нои адгезии в иато1енезе шпем и ческой болезни сердца и установлены ее взаимосвязи с агрегационпои функцией тромбоцитов, продукцией ИЛ-4, ИЛ-8, ИЛ-18, ИЛ-1РА и БР-селектина, также выявлены новые факты о влиянии аспирина на клеточно-пластиночные взаимодействия при стабильной и прогрессирующей стенокардии

Ссылаясь на материалы исследований, использование теста лимфоцитарно-тромбоцитарной адгезии у пациентов с ИБС позволяет косвенно судить об агрегационных свойствах тромбоцитов и применять для оценки влияния аспирина на межклеточные взаимодействия

Внедрение в практику. Результаты исследований внедрены учебный процесс кафедр нормальной физиологии, патологической физиологии, факультетской терапии, в работу диагностической поликлиники ЧГМА, НИИ медицинской экологии ЧГМА и юродской больницы Л'° 1 г Читы

Апробация основных положений работы. Основные результаты работы были представлены на Российском национальном конгрессе кардиологов (Москва, 2006, 2007), XX съезде Физиологического общества им И И Павлова (Москва, 2007), Конгрессе "Дни иммунологии в Санкт-Петербурге" (2007), XXI Конгрессе международного общества по тромбозу и гемостазу ([8 ГН) (Женева, Швейцария, 2007), международном симпозиуме по тромбоцитам (Израиль, 2006), заседании Читинского отделения Физиологического общества им И П Павлова (2007)

Положения, выносимые на защиту:

1 У больных со стабильной и прогрессирующей стенокардией, не принимающих аспирин, снижается количество лимфоцитарно-тромбоцитарных агрегатов и абсолютное число лимфоцитов, участвующих в клеточно-иласти-ночной ад! езии по сравнению со здоровыми Использование аспирина при лечении восстанавливает у них функцию лимфоцигарно- громбоцитарной адгезии

2 У пациентов, перенесших инфаркт миокарда, количество ЛТА в первые сутки наблюдения варьирует не зависимо от объема некроза и предпринимаемого лечения у одних больных этот показатель находится ниже, у других -выше уровня здоровых, у третьих - соответствует норме К 20-22 суткам у больных с исходно низкими значениями увеличивается, а с высокими - снижается процент лимфоцитов, способных адгезировать на своей поверхности тромбоциты приближаясь к уровню здоровых У таких пациентов в первые 12 суток после развития инфаркта уменьшае1ся абсолютное число лимфоцитов, присоединяющих к себе кровяные пластинки Лимфоцитар-но-тромбоцитарная адгезия у пациентов с ИБС обратно коррелирует с изменением агрегационной функции тромбоцит ов и приемом аспирина

3 У больных со стабильной и прогрессирующей стенокардией концентрация ИЛ1-РА повышена и не зависит от приема аспирина У эгих пациентов содержание ИЛ-4 выше, чем у здоровых лиц, однако применение аспирина снижает его уровень только при прогрессирующей стенокардии Концентрация ИЛ-8 увеличена у больных со стабильной и прогрессирующей стенокардией и прием аспирина не сказывается на ее изменении У пациентов с ИМ содержание ИЛ-4, ИЛ-8, ИЛ-1РА повышается в первые сутки после развития болезни и снижается к 22 суткам наблюдения, не достигая значений здоровых лиц Концентрация ИЛ-18 во всех клинических группах не отличается от нормы Концентрация Р-селектина увеличивается только в первые 12 суток после развития инфаркта миокарда и снижается к 22-сут-кам

Публикации. По теме диссертации опубликовано 9 работ, в т ч в рецензируемых изданиях, определенных ВАК для публикации результатов диссертационных работ - 4

Структура и объем диссертации Диссертация изложена на 132 страницах машинописного текста и состоит из введения, главы обзора литературы, материалов и методов исследования, главы собственных исследований, обсуждения, выводов и указателя литературы, включающего 207 источников, из них - 57 отечественных и 150 зарубежных авторов, иллюстрирована 15 таблицами и 10 рисунками

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ Клиническая характеристика больных. В работе с обследуемыми лицами соблюдались этические принципы, предъявляемые сг 24 Конституции РФ и Хельсинкской Декларацией Всемирной Медицинской Ассоциации (World Médical Association Déclaration of Helsinki (1964)

Исследования проводились y 115 больных ишемической болезнью сердца в возрасте 40-60 лег, находившихся на стационарном лечении в кардиологическом отделении! ородской клинической больницы № 1 г Читы за период 2005-2007 г г Все больные разделены на 3 ipynribi 40 мужчин с диагнозом ИБС Стабильная стенокардия, П-Ш функциональный класса, 46 - с диагнозом ИБС Прогрессирующая стенокардия, U-III функциональный класс, и 29 -1- диагнозом ИБС Крупноочаювый инфаркт миокарда переднебоковой области Контролем служили здоровые мужчины, не страдающие ИБС, той же возрастной группы в котичестве 25 человек Больные со стенокардией раз-детены на две подгруппы 1-я - не принимавшие и 2-я - принимавшие аспирин (125 мг/cyi) Пациенты с крупноочаговым инфарктом наблюдались на 1-2-е, 10-12-е и 20-22-е сутки с момента поступления Все они получали дезагре-гантную (500мг аспирина в 1 сутки, затем по 125 мг на ночь) и антикоа1улян-тную (10000 ЕД в/в струйно в 1 сутки, затем 10000 ЕД подкожно 2 раза в день) терапию В исследование ье включались болыгые с сахарным диабетом I типа, 1яжелы\ш нар>шениями ритма и выраженной сердечной недостаточностью

Определение количества лейкоцитов. Подсчет общего числа лейкоцитов проводили стандартным методом в камере Горяева Мазки крови фиксировали метанолом в i счете 10 мин и окрашивали по Романовскому-Гим-за Подсчет клеток крови осуществляли под иммерсионным объект ивом 90 окуляр 15

Оценка лимфоцитарно-тромбоцитарной адгезии. Определение показателя лимфоцитарно-тромбоцитарной адгезии, относящегося к функциональным тестам оценки иммунокомпетентных клеток, проводили по методу, предложенному 10 А Витковским и соавт (1999) Подсчитывали число лимфоцн-тарно-тромбоцитарных коагрегагов на 100 клеток

Определение агрегационных свойств тромбоцитов. Исследование аг-регащгонной способности тромбоцитов проводилось турбидиметрнческим методом по G Вот (1962) с использованием двухканального лазерного анализатора агрегации тромбоцитов "Биола" (модель LA230) В качестве индуктора агрегации тромбоцитов использовали растворы в конечной концентрации АДФ (5 и 2 5 мкг), коллагена (1 мг/мл) и адреналина (1,25 мкг/'мл) ООО "Тех-ноло1 ия-стандарт" (Баранул)

Определение концентрации цитокинов. Для определения концентрации цитокинов (ИЛ-1РА, ИЛ-4, ИЛ-8, ИЛ-18) использовали наборы реагентов ТОО "Вектор-Бест" (г Новосибирск) Содержание растворимого Р-се-лектина изучали наборами реактивов (Bender MedSystems GmbH, Австрия) Измерение уровня цитокинов проводили методом твердофазного ИФА

Статистическая обработка материала. Полученные данные обработаны методом вариационной статистики для связанных и несвязанных между собой наблюдений и вычислен показатель достоверности различий Коореля-циощ1ый анализ данных проводили с применением коэффициента ранговой кор-рреляции Спирмена (R) Статистическая обработка осуществлена при помощи электронной программы (Windows ХР Excel 2001)

РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ Число лейкоцитов и лимфоцитов у больных ИБС

Нами изучено содержание лейкоцитов, лимфоцитов в периферической крови у пациентов с ишемической болезнью сердца и здоровых лиц Выявлено, что количество лейкоцитов в контрольной группе составило 6,8 ± 0,3 х 109/л, ю(да как у больных со стабильной стенокардией в первой подгруппе (не принимающие аспирин) - 7,3 ± 0,5 х Ю'/л (р > 0,05), во второй (принимающие аспирин) - 7,0 ± 0,8 х Ю'/л (р > 0,05) У пациентов первой подгруппы с прогрессирующей стенокардией этот показатель составил 8,3 ± 0,7 х 109/л (р < 0,01), а во второй - 8,1 Ю,4 х 10" (р < 0,05) При инфаркте миокарда в 1-2 сутки количество лейкоцитов повышалось до 9,5 ± 0,6 х Ю'/л (р<0,001), после этою к 10-12 суткам снижалось до 6,0 ± 0,4 х Ю'/л (р > 0,05), а к 20-22 суткам незначительно повышалось - 8,3 ± 1,3 х Ю'/л (р<0,05) (табл 1 )

Относительное число лимфоцитов в контрольной группе находилось в пределах 34,1 ± 2,0% При стабильной стенокардии этот показатель равен в первой подгруппе - 30,0 ± 4,5% (р > 0,05), во второй - 26,4 ± 2,5% (р<0,01) При про1рессирующей С1енокардии у больных первой подгруппы он снизился до 26,7 ± 2,3% (р<0,01), во второй - 29,8 ± 1,3% (о<0,05) При инфаркте миокарда в 1-2 сутки заболевания, этот показатель находился на минимальном уровне - 19,6 ± 2,0% (р<0,001), после чего к 10-12 суткам наблюдения возрос до 26,4 ± 2,6% (р<0,01), а к 20-22 суткам число лимфоцитов приблизилось к значению контрольной группы - 31,3 i 2% (р > 0,05) (табл 1 )

Вместе с тем, у больных со стабильной стенокардией во второй подгруппе и при инфаркте на 1-2 и 10-12 сутки наблюдалось снижение абсолютного числа лимфоцитов

Лимфоцитарно-тромбоцитарная адгезия у больных ИБС

Установлено, что в общем пуле лимфоцитов, выделенных у пациентов со стабильной стенокардией, не принимавших аспирин, снижается количество лимфоци I арно-тромбоцитарных агрегатов (ЛТА) в сравнении с контрольной группой (р<0,01) Выявлено, что в группе больных принимавших аспирин, число ЛТА соответствовало контролю (габл 1) Абсолютное число лимфоцитов, участвующих в адгезии, снижалось у пациентов с прогрессирующей стенокардией, не принимающих аспирин

Таблица 1

Лимфоцитарно-тромбоцитарная адгезия у больных со стенокардией, (М±т)

Клиническая форма ЛТА ЛТИ

отп % абс VI 07л

Контрочь (п=32) 14,3±0,9 0,36+0,05 3 9+0,3

Стабильная стенокардия (¡1=40) без аспирина 8,0+1,4 (р <0,01) 0,24А0,04 (р, < 0,05) 3 0+0,2 (р, > 0,05)

аспирин 13,8+0,9 (Р, > 0,05) 0,28+0,03 (Р, > 0,05) 3,4+0,3 (Р, > 0,05)

Прогрессирующая стенокардия (п=46) без аспирина 7,8+0,8 (р,<0,01) 0,21+0,03 (Р<0,01) 3,2+0,2 (Р, > 0,05)

аспирин 13,9+1,2 (Р, > 0,05) 0,32+0,02 (Р2 > 0,05) 3,1+0,5 (Р, > 0 05)

Примечание: р,- достоверность различий относительных показателей ЛТА у больных со стенокардией и контролем, р - достоверность различий абсолютных показат елей ЛТА у больных со стенокардией и контролем, р3-достоверность различий ЛТИ с контролем

У пациентов, перенесших инфаркт миокарда, количество ЛТА значительно варьировало Поэтому мы разделили этих пациентов на подгруппы в зависимости от количества ЛТК В первую подгруппу вошли пациенты с количеством ЛТА <12 %, во вторую от 12 до 16%, в третью > 16% После развития инфаркта миокарда у больных функция лимфоцитарно-тромбоцитарноп адгезии неоднозначно у одних - она находится ниже, у дру] их - выше уровня здоровых, у фетьих - соответствует норме К 20-22 суткам у больных с исходно низкими значениями увеличивается, а с высокими - снижается процент лимфоцитов, способных адгезировагь на своей поверхности тромбоциты, приближаясь к уровню здоровых (рис 1)

Однако, у всех наблюдаемых больных абсолютное число лимфоцитов, участвующих в адгезии, снижалось на 1 -2 и 10-12 сутки после инфаркта (табл 1) Лимфоцитарно-тромбоцитарный индекс у этих больных соответствовал показателю контрольной группы (р > 0,05)

30 25 20

< 15 h

e;

10 5

0 4

A 25,1

¿22,2^______

Ьз.з

SfH3,4

н 12,8

1 -2 сутки

10-12 сутки

20-22 сутки

<12 -В-норма -*->16 |

Рис.1. Динамика изменения уровня лимфоцитарно-тромбодитарной адгезии при инфаркте миокарда

Агрегация тромбоцитов при стабильной и прогрессирующей стенокардии

У больных с ИБС изучена спонтанная и индуцированная агрегация кровяных пластинок При этом не выявлены изменения спонгашгой агрегации тромбоцитов у больных со стабильной стенокардией первой подгруппы (лица, не принимающие аспирин) Однако установлено, что у них максимальная амплитуда кривой степени АДФ-индуцированной arpei ации кровяных пластинок снижалась до 4,8 ± 0,2 отн ед, тоща как в контроле она составляла 7,7 i 0,6 огн ед (р<0,05) Показатели агрегации, индуцированнои другими агонистами, не отличалась от таковой контрольной группы В то же время, у пациентов второй подгруппы обнаружено увеличение спонтанной arpei ации и снижение индуцированной агрегации в сравнении с контролем (рис 2,3)

При изучении показателей агрегации по кривой степени светопроиуска-ши в первой подгруппе отмечалось увеличение спонтанной агрегации и снижение АДФ- (2,5 мкг) и адреналин-индуцированной агрегации в сравнении с контрольной группой Во второй подгруппе агрегационные свойства кровяных плас гинок не отличались от показателей контрольной группы

У пациентов с прогрессирующей стенокардией, первой подгруппы, наблюдалось только лишь снижение кривой степени колла1 ен-индуцированной агрегации (3,9 ± 0,7отн ед) в сравнении с контролем (5,8 ± 0,5отн ед, р<0,05) У больных второй подгруппы проявлялись такие же изменения кривой степени агрегации, как и при стабильнои стенокардии

Параметры агрегации по кривой степени светопропускаиня были схожи-

прогресс, ст

:: спонтанная ДДФ5 мкг и АДФ 2,5мкг ь адреналин к коллаген

Рас. 2. Изменение спонтанной и индуцированной агрегации по кривой среднего размера агрегатов у больных не принимающих аспирин. *- р<0,05, # - достоверность различий между клиническими группами.

контроль стабильная стенокардия прогрессирующая стенокардия

{Ъ спонтанная у' 5 мкг а 2.5 мкг Р адреналин Э коллаген

Рис. 3. Агрегация тромбоцитов по кривой среднего размера агрегатов у больных принимающих аспирин. * - р<0,05; **-р<0,01, ***- р<0.001.

ми в обеих подгруппах - отмечалось увеличение спонтанной и снижение индуцированной агрегации в сравнении с контролем.

11ри сравнении этих клинических групп между собой в первой подгруппе выявлена разница показателей кривой светопропускания коллаген-индуциро-ванной агрегацией у больных со стабильной (79,9 ± 8,5%) и прогрессирующей стенокардией (29,1 ± 12,4%, р<0,01). Во второй подгруппе отмечено увеличение параметров спонтанной агрегации по кривой светопропускания при

прогрессирующей стенокардии (3,3 ± 0,5%) в сравнении со стабильной (2,0 ± 0,4 %, р<0,05)

При стабильной стенокардии по кривой среднего размера агрегатов отмечена разница спонтанной агрегации между первой (1,1 ±0,12 отн ед) и вто-рои(1,6±0,16 отн ед, р<0,05) подгруппами Среди пациентов этих групп выявлены отличия агрегационной кривой степени свстопропускапия При использовании АДФ в качестве индуктора агрегации тромбоцитов в дозе 2,5 мы максимальная ответная реакция составила 68,7 ± 7,3 %мии у больных первой подгруппы и 33,6 ± 3,3 %/мин - у второй (р<0,05), адреналина - 47,9 ^ 11,6 %/ мин и 29,3 ± 3,7% (р<0,05), и коллагена - 90,5 ± 13,8 %/мин и 42,0 ± 7,5%/мин (р<0,01) соответственно

У пациентов с прогрессирующей стенокардией первой подгруппы показатели агрегации при использовании АДФ 5 мкг в качестве индуктора снижались до 5,0 ± 0,4 отн ед, второй подгруппы - 6,8 ± 0,7 отн сд (р<0,05), а при добавлении АДФ 2,5 мкг - 4,9 ± 1,2 ош ед и6,8± 1,1 отн ед (р<0,05) соответственно

Таким образом, у пациенюв со стенокардией не принимающих аспирин, агрегационные свойства тромбоцитов незначительно изменялись в сравнении с контролем, а у пациентов, принимающих аспирин, ошечалось снижение аг-рет ационпой функции кровяных пластинок

Агрегация тромбоцитов при инфаркте миокарда

При оценке среднего размера агрегатов установлено, что в 1-2-е сутки развития инфаркта миокарда снижалась иидуцировшщая агрегация на фоне всех используемых индукторов агрегации Так при внесении АДФ в дозе 5 мкг размер агрегатов кровяных пластинок уменьшался до 5,5 ± 0,5 отн ед (в контроле - 8,5 ± 0,7 отн ед, р < 0,05), АДФ 2,5 мкг - до 5,0 ± 0,5 отн ед (в контроле - 7,7 ± 0,6 отн ед, р <■ 0,05) У пациентов с инфарктом миокарда выявлено снижение размера агрегатов тромбоцитов в тест-системе с адреналином до 4,6 ± 0,4 отн ед, против 6,8 ± 0,5 отн ед в контроле (р < 0,05), с коллагеном - до 3,4 ± 0,4 отн ед против 5,8 ± 0,5 отн ед в контроле (р < 0,05) (рис 4)

У больных с инфарктом миокарда на 10-12-е сутки несколько уменьшалась гипоагретация тромбоцитов, однако при этом параметры индуцированной агрегации не достигли значений здоровых людей При добавлении в качестве индуктора АДФ 5 мкг средний размер агрегатов составил 6,7 ± 0,4 отн ед (р < 0,05), АДФ 2,5 мкг - 6,0 ± 0,4 отн ед (р < 0,05), адреналина - 4,5 ± 0,4 отн ед (р < 0,01), коллагена - 3,5 ± 0,4 отн ед (р < 0,05) (рис 4)

На 20-22-е сутки отмечалась нормализация показателей агрегационных

контроль 1-2 сутки 10-12 сутки 20-22 сутки

[щ спонтанная И АДФ 5 мкг LU АДФ 2.5 мкг г адреналин 3 коллаген j

Рис. 4. Динамика изменения агрегационных свойств тромбоцитов I -20 сутки (кривая степени агрегации) (М±т) *- р<0,05; **- р<0,01, # - достоверность различий между 1-2 и 20-22 сутками, между 10-12 и 20-22 сутками, (р <0,05).

свойств тромбоцитов. Так средний размер агрегатов кровяных пластинок по кривой АДФ (5 мкг) достиг 8,3 ± 0,6 отн. ед. (р>0,05), АДФ (2,5 мкг) - 8,7 ± 0,4 отн. ед. (р>0,05), адреналина - 7,2 ± 0,6 отн. ед. (р>0,05), коллагена - 6,0 ± 0,5 отн. ед. (р>0,05) (рис. 4.).

Изменение показателей агрегации по кривой светопропускапия имела схожую картину. В первые сутки после развития инфаркта наблюдалось увеличение максимального значения и скорости спонтанной агрегации кровяных пластинок в сравнении с контрольной группой. При добавлении же индукторов агрегации выявлено значительное снижение агрегационных свойств тромбоцитов.

Таким образом, у пациентов с инфарктом миокарда наблюдалась выраженная гипоагрегация тромбоцитов в 1-2 сутки, которая уменьшалась к 1012 суткам. На 20-22 сутки афегационные показатели кровяных пластинок соответствовали показателям контрольной группы.

Корреляционные связи между числом JJTA и агрегацией тромбоцитов

при ИБС

При стабильной стенокардии в первой подгруппе (пациенты, не принимающие аспирин) выявлена обратная корреляционная связь средней силы, которая обусловлена снижением как числа ЛТА (8,0 ± 1,4%), так и агрегационной способности тромбоцитов при АДФ (2,5 мкг) - (г - -0,47, -0,37) и коллаген-

индуцированной агрегации (г = -0,54, -0,32) Во второй подгруппе количество ЛТА соответствовало норме (13,8 ± 0,9%), но показатели активности кровяных пластин отличались При спонтанной агрегации г = 0,33 и АДФ (5мкг)-индуццрованнои агрегации г = 0,40,0,49 наблюдалась прямая корреляциошгая связь средней силы, и обратная средней силы связь между ЛТА и АДФ (2,5мкг)-и коллаген- индуцированном агрегацией

При прогрессирующей стенокардии наблюдалась схожая картина, присутствовала корреляционная связь средней силы

Нами обнаружено, что количес гво ЛТК у пациентов после инфаркта миокарда значительно варьировало Поэтому мы разделили этих пациентов па подгруппы в зависимости от количества ЛТК В первую подгруппу (п = 10) вошли пациенты с количеством ЛТК <12 %, во вторую от 12 до 16% (п = 10), в третью > 16% (п ~ 9)

Установлено, что в группе больных с минимальным содержанием тром-боцитарно-лейкоцитарных агрегагов, признаки гипоафегации тромбоцитов были наиболее выражены Так но результатам кривой среднего размера агрегагов выявлено наличие корреляционной связи средней силы между числом ЛТК и афегацией фомбоцигов в первые сутки после инфаркта (г- 0,48 - 0,89) По мере формирования рубца сила корреляции снижалась, а также изменялся ее характер за счет уменьшения признаков гипоафегации (1 = 0,32 - 0,52 на 10-12 сутки) и на 20-22 сути корреляционная связь оставалась слабой

В подгруппе с нормальными показателями ЛТА показатель корреляционной связи на 1-2 сутки находился от -0,52 до -0,84, к 10-12 суткам он уменьшался, а к 20-22 суткам приобретал прежний характер (г = -0,40 - -0,98)

В подгруппе с увеличенным количеством ЛТК связь имела отрицательный характер, и была меньшей силы в сравнении с подгруппой с низким содержанием лейкоцитарно-громбоцшарных агрегатов (г = -0,38 - -0,48) На 10-12 сутки сила связи снижалась до -0,32 - -0,37 По мере выздоровления ее сила становилась слабой

Таким образом, снижение количества лимфоцитарно-тромбоцитарных афегагов в циркуляции указывает на хорошую восприимчивость к антиагре-гационным препаратам, причем, чем ниже степень лимфоцитарно-тромбоци-тарной адгезии, тем выраженнее гипоагрегация кровяных пластинок

Продукция провоспалительных и противовоспалительных цитокинов

при ИБС

Содержание ИЛ-1РА. Установлено, что концентрация ИЛ1-РА многократно увеличивалась во всех клинических группах в сравнении со здоровыми лицами Так, уровень ИЛ1-РА у больных при стабильной стенокардии в

первой подгруппе составил 647,2 ± 278 пг/мл, во второй - 717,1 ± 246 пкг/мл, при профессирующей в первой - 587,5 ± 142 пкг/мл, во второй - 700,9 ± 123,9 пкг/мл, тогда как в контроле - 32,7 ± 5,3 пкг/мл (pi<0,001).

У пациентов с инфарктом миокарда на 1 -2 сутки этот показатель составлял 846,0 ± 107,5 пкг/мл, на 10-12 сутки - 657,6 ± 68,8 пкг/мл и снижался к 20-22 суткам до 498,3 ± 58,3 пкг/мл (р < 0,001). Уровень цитокина уменьшался к 20-22 сутками в сравнении с 1-2 сутками развития ИМ (р < 0,05) (рис. 5).

1-2 сутки 10-12 сутки 20-22 сутки

[В контроль Ш Инфаркт миокарда 1

Рис. 5. Динамика снижения концентрации 1Ь1 -РА при инфаркте миокарда; * - р <0,001 при сравнении с контролем, # - достоверность различий между 1-2 и 20-22 сутками, (р <0,05).

Содержание ИЛ-4. Установлено, что у пациентов со стабильной стенокардией в первой подгруппе концентрация ИЛ-4 составила 67,2 ± 12,3 пкг/мл, во второй 46,1 ± 10,5 пкг/мл; при прогрессирующей в первой подгруппе -57,7 ± 10,9 пкг/мл и во второй - 33,5 ± 5,6 пкг/мл, в то время как в контроле на находилась на уровне 7,1 ± 1,0 пкг/мл (р <0,001). При прогрессирующей стенокардии отмечалось снижение концентрации ИЛ-4 у больных, принимающих аспирин, в сравнении с первой подгруппой (р <0,05).

Содержание ИЛ-4 у пациентов с ИМ в первые сутки после начала развития заболевания находилось на уровне - 37 ± 5,9 пкг/мл на 1-2 сутки, на 10-12 сутки - 34,1 ± 7,6 пкг/мл и 20-22 сутки - 23,0 ± 3,9 пкг/мл на 20-22 сутки (р <0,05), тогда как в контроле - 7,1 ± 1,0 пкг/мл (р <0,001).

Содержание ИЛ-8. Установлено, что при ишемической болезни сердца в клинических группах концентрация ИЛ-8 отличалась от таковой у здоровых лиц. Так при стабильной стенокардии у пациентов первой подгруппы содержа-

ние ИЛ-8 находилось в пределах 11,3 ± 2,3 пкг/мл, во второй -12,4 ±2,6 лкг/ мл, тогда как в контроле - 4,2 ± 1,0 пкг/мл (р<0,01) При прогрессирующей стенокардии в первой подгруппе этот показатель составлял 11,7 ± 2,0 пкг/мл (р<0,05), а во второй - 5,5±2,3 пкг/мл (р > 0,05) При инфаркте миокарда его концентрация изменялась следующим образом 10,7 ± 1,7 пкг/мл - на 1-2 сутки (р <0,05), 7,2 ± 1,5 пкг/мл - на 10-12 сутки (р > 0,05) и 7,0 1 1,6 пкг/мл - на 20-22 сутки (р > 0,05)

Содержание ИЛ-18. Отмечено, что концентрация ИЛ-18 во всех клинических фуппах практически находилась на одинаковом уровне и не отличалась от нормы (р > 0,05 ) Только на 10-12 сутки после развития инфаркча миокарда его концетгтрация снижалась до 232,6 ± 13,0 пи/мл в сравнении с контролем - 307,6 ± 33,4 пкт/мл (р < 0,05 )

Таким образом, у больных с ишемической болезнью сердца наблюдалось повышение продукции ИЛ-1РА, ИЛ-8 и ИЛ-4 и отсутствие динамики уровня ИЛ-18

Содержание вР-селектина. У больных со стабильной стенокардией Р-селект ин в крови не обнаруживался При прогрессирующей стенокардии! олько во второй подгруппе выявлен Р-селектин на уровне 5,2 -I- 2,9 ш/мл (р> 0,05) При инфаркю миокарда он составлял 12,8 ± 4,0 нг/мл - в 1 -2 сутки (р < 0,05), 12,9 ±36 нг/мл - на 10-12 сутки (р < 0,05) и 3,3 ± 1,2 нг/мл (р > 0,05), - на20-22 сутки В контрольной группе его уровень соответствовал 4,4 ± 1,6 нг/мл Таким образом, концентрация Р-селектина максимально повышалась у пациентов при инфаркте миокарда в первые 12 суток с последующим снижением к 20-22 суткам

Корреляционные связи между числом ЛТА и концентрацией цитокинов

У больных с прогрессирующей стенокардией в обеих подгруппах выявлена обратная связь, между содержанием ИЛ-1РА и числом Л1А, средней силы (г = - 0,62 и г =-0,56), а при инфаркте миокарда на 10-12 сутки прямая связь той же силы (г = 0,32)

Положительная корреляция средней силы, между уровнем ИЛ-4 и числом ЛТА, наблюдалась только на 10-12 сутки инфаркта миокарда (г 0,33) и отсутствовала в других клинических группах Сильная прямая связь обнаружена на 1-2 сутки ИМ (г = 0,73) и отрицательные значения коэффициента корреляции на 20-22 сутки с ИЛ-8 (г = -0,32)

Таким образом, корреляционные взаимосвязи у больных с ИБС между отдельными показателями отличаются от таковых в контрольной группе

Резюмируя вышеизложенное, можно заключить, что полученные сведения о лимфоцитарно-тромбоцитарной адгезии при ишемической болезни сер-

дда, раскрывают новые возможности для изучения патогенеза заболевания, в основе которого лежит атеросклероз, воспаление, тромбообразование и др При этом установлены взаимосвязи Л ГА с агрегационнои функцией тромбоцитов, продукцией ИЛ-4, ИЛ-8, ИЛ-18, также выявлены новые факш о влиянии аспирина на клеточно-пластиночные взаимодействия при стабильной и прогрессирующей стенокардии

Наши исследования убеждают нас в том, что тест лимфоцитарно-тром-боцитарной адгезии у больных стенокардией позволяет выяснить эффективность применения аспирина, а у пациентов с инфарктом миокарда он позволяет косвенно оценить агрегационные свойства тромбоцитов

ВЫВОДЫ

1 У болыплх со сшбильной и прогрессирующей стенокардией, не принимающих аспирин, снижается количество лимфоцитарно-тромбоцитарных агрегатов по сравнению со здоровыми При этом уменьшается абсолютное число лимфоцитов, участвующих в клегочно-пластиночной адгезии Использование аспирина при лечении пациентов со стабильной и прогрессирующей стенокардией восстанавливает у них функцию лимфоцигарно-тромбо-цитарной адгезии

2 У пациентов, перенесших крупноочаговый инфаркт миокарда, относительное число Л ГА в первые сутки наблюдения варьирует независимо от объема некроза и предпринимаемого лечения у одних больных этот показатель находится ниже, у других - выше уровня здоровых, у треп.их - соответствует норме К 20-22 суткам у больных с исходно низкими значениями увеличивается, а с высокими - снижается процент лимфоцитов, способных адгезировать на своей поверхности тромбоциты приближаясь к уровню здоровых У таких пациентов в первые 12 суток после развития инфаркта уменьшается абсолютное число лимфоцитов, присоединяющих к себе кровяные пластинки

3 У пациентов со стабильной и прогрессирующей стенокардией, не принимающих аспирин, агрегационные свойства тромбоцитов не отличаются от здоровых, а у получающих аспирин - они снижаются При этом агрегацион-ная функция кровяных пластинок формирует разнонаправленные корреляционные связи с лимфоцитарио-тромбоцитарной адгезией и у болыплх, не использующих аспирин, принимает обратные, а включающих его в лечение - прямые значения

4 У пациентов с крупноочаговым инфарктом миокарда в 1-2 сутки развивается выраженная гипоагрегация тромбоцитов, с последующим повышением агрегационных свойств тромбоцшов на 10-12 сутки и их полным восста-

новлением на 20-22 сутки У больных с минимальным содержанием тром-боцитарно-лейкоцитарных агрегатов, агрегационная функция тромбоцитов сильно коррелирует с показателями J1TA в первые сутки после развития ИМ и по мере формирования рубца стгжется и принимаег обратные значения на 20-22 сутки Среди пациентов с увеличенным количеством JITA в первые сутки корреляционная связь носит обратный, а в 20-22 сутки - приобретает прямой характер У больных с исходно нормальными показателями ЛТА корреляционные взаимоотношения между клеточно-пласти-ночной адгезией и агрегационной функцией тромбоцитов формируют постоянные отрицательные связи на протяжении всего периода наблюдения

5 У больных со стабильной и прогрессирующей стенокардией концентрация ИЛ 1 -РА повышена и не зависит от приема аспирина У этих пациентов содержание ИЛ-4 выше, чем у здоровых лиц, однако применение аспирина снижает его уровень только при прогрессирующей стенокардии Концентрация ИЛ-8 увеличена у больных со стабильной и прогрессирующей стенокардией и прием аспирина не сказывается на ее изменении У пациентов с ИМ содержание ИЛ-4, ИЛ-8, ИЛ-1РА повышается в первые сутки после развития болезни и снижается к 22 суткам наблюдения, не достигая значений здоровых лиц Концентрация IL-18 во всех клинических группах не отличается от нормы Концентрация Р-селектина увеличивается только в первые 12 суток после развития инфаркта миокарда и снижается к 22-суткам

6 У больных с прогрессирующей стенокардией, не зависимо от приема аспирина, число ЛТА обратно коррелирует с ИЛ-1РА, а при инфаркте миокарда на 12 сутки болезни - формирует прямую связь ЛТА образует положительные взаимосвязи с уровнем ИЛ-4 только на 10-12 сутки инфаркта миокарда Между ЛТА и ИЛ-8 сильная прямая связь проявляется на 1-2 сутки ИМ и отрицательная - на 20-22 сутки

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

Изучение лимфоцитарно-тромбоцитарной ад1 езии у больных стенокардией позволяет выяснить эффективность применения аспирина Так, подъем показателя ЛТА до уровня здоровых людей позволяет утверждать о хорошей чувствительное га к действию препарата При отсутствии реакции со стороны лимфоцитарно-пластиночной адгезии следует заподозрить аспиринорсзистен-тность у больных и рекомендовать более глубокое изучение феномена

СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1 Л и м ф о ц н тар н о -тр ом бо i и ггар пая адгезия у больных ишемичеекой болезнью сердца / С В Жеребцова, А В Говорил, А В Солиов, Ю А Витковский // Кардиоваскулярная терапия и профилактика -2006 -Тб, №5 - С 144

2 Clinical significance of lymphocyte-platelet interaction / Yu A Vitkovsky, A.V Solpov, S V Zherebcova, ID Lykhanov, V Yu Pogrebnyacov, A V Govorm, В Z. Shenkman, В I Kuznik//Platelets2006 Symposium May, 11-14 2006 -Ma'le Hachamisha, Israel -P 172

3 Лимфоцитарно-тромбоцигарная адгезия у больных стенокардией / С В Жеребцова и др //Медицинская иммунология -2007 -Т9, -№2-3 -С 330 - 331

4 Changes m platelet haemostasis in acute acetic acid poisoning / E A Rutskina, A V Govorm, Yu A Vitkovsky, A V Solpov, N A Sokolova, E V Boiko, S V. Zherebtsova, ID Khludneva// Journal of Thrombosis and Haemostasis, 5 Suppl - 2007 - P-W-302

5 Lymphocyte-platelet adhesion in patients with angina pectoris / A V Solpov, S V Zherebtsova, A V Govorm, E A Rutskma, IA Suvorova, Yu A Vitkovsky/ / Lymphocyte-platelet adhesion in patients with angina pectoris // J Thrombosis and Haemostasis - 2007 - Г 5 - S 2 - P299

6 Влияние аспирина на лимфоцитарно-тромбоцитарную адгезию у ботьпых стенокардией / С В Жеребцова, А В Говорин,АВ Сотпов, 10 А Витковский // Материалы международной научно-практической конференции Роль физиологии в современном естествознании Чита - 2007 - С 31

7 Лимфоцитарно-тромбоцитарная адгезия как объекетивный показатель состояния иммунитета и гемостаза / Ю А В1ггковский, А В Солиов, Б И Куз-ник, С В Жеребцова, и др // Вестник гематологии - 2007 - № 2 - С 70

8 Некоторые показатели состояния иммунитета у больных с острым коронарным синдромом / С В Жеребцова, А В Говорин, А В Солпов, 10 А Витковский // Кардиоваскулярная терапия и профилактика - 2007 - Т6, № 5 - С 103

9 Сосудисто-тромбоцитарный гемостаз и лимфоцитарно-тромбонитарная адгезия в различных отделах сосудистого русла у больных с ишемичеекой болезнью сердца/Е Б Порушничак, Ю А Витковский, А В Говорин, СВ. Жеребцова, и др // Аллергология и иммунология -2008 - Т 9 - С 87-88

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ЛТА - лимфоцитарно-тромбоцитарная адгезия

ЛТИ - лимфоцитарно-тромбо ци гарный индекс

ИЛ - интерлеикин

ИЛ1-РА - рецепгорный антагонист ИЛ-1

ИМ - инфаркт м иокарда

вР-селектин - растворимый Р-селектин

Лицензия ИД №03077 от 23 10 00 Подписано в печать 10 04 08 Бумага офсетная Формат 60 х 84 '/16 Уел печ л-1,0 Тираж 100 Заказ № 722008

Отпечатано в информационно-издательском центре ЧГМА 672090, Чита, ул Горького, 39а

Ишемическая болезнь сердца (ИБС) - группа заболеваний, обусловленных абсолютной или относительной недостаточностью коронарного обращения. Она выделена как самостоятельное заболевание Всемирной организацией здравоохранения в 1965 г. в связи с большой социальной значимостью. В настоящее время в мире, особенно в экономически развитых странах, отмечается неуклонный рост заболеваемости ИБС [WHO, 2001].

Главной, по сути, единственной причиной ИБС является атеросклероз венечных артерий, выявляемый у 90-97% больных [Новиков В.П., 2000]. Формирование атеросклеротической бляшки имеет много сходства с реакцией развития иммунного воспаления: образование неоантигена, очаговое скопление незернистых лейкоцитов, разрастание соединительной ткани. При этом усиливается миграция макрофагов и Т-клеток в артериальной стенке. Активированные лейкоциты выделяют протеазы, пептидные ростковые факторы и цитокины, которые разрушают белки матрикса и стимулируют гладкомышечные клетки, эндотелиоциты и другие клетки [Пальцев М.А., 2005; Fuster V., 2005]. Поскольку в атеросклеротической бляшке одновременно присутствует большое количество Т-лимфоцитов и макрофагов моноцитарного происхождения, повышена продукция ИЛ-2 и экспрессия эндотелием HLA-II класса подтверждает то, что атерогенез является результатом развития иммунного ответа [Мазуров В.И., 2005].

В настоящее время широко изучаются межклеточные взаимодействия, в основе которых лежат механизмы сигнализации, опосредуемые цитокинами. Установлено, что адгезивные взаимодействия между тромбоцитами и лейкоцитами являются важными звеньями механизмов, обеспечивающих миграцию лейкоцитов в зону повреждения, а следовательно воспаления и развития там иммунных и репаративных реакций [Витковский Ю.А. и соавт., 1999-2008; Солпов А.В. и соавт. 2001-2008]. Тромбоциты способны вступать в контакт с нейтрофилами и моноцитами в процессе остановки кровотечения и развития воспалительной реакции. Установлена взаимосвязь между гемостатическими и воспалительными реакциями при повреждении тканей, в которой ключевым звеном выступает взаимодействие лейкоцитов, тромбоцитов и эндотелиальных клеток [Кузник Б.И. и соавт., 1988-2008].

Предыдущими работами изучены механизмы лимфоцитарно-тромбоцитарной адгезии в условиях нормы. Выявлено, что феномен лимфоцитарно-тромбоцитарной адгезии представляет собой одну из физиологических функций, присущую различным субпопуляциям лимфоцитов, и реализуемую посредством адгезивных молекул. Лимфоцитарно-тромбоцитарная адгезия регулируется цитокинами и индукторами агрегации тромбоцитов [Витковский Ю.А., Кузник Б.И., Солпов А.В., 1999]. Сами тромбоциты стимулируют адгезию лимфоцитов к экстрацеллюлярному матриксу в условиях тока жидкости, что позволяет им противостоять силе сдвига, способствуют миграции лимфоцитов [Солпов А.В., 2005, 2006].

Данный феномен может иметь определенное патофизиологическое значение, так как активация тромбоцитов на поврежденной поверхности сосудистой стенки может служить важным фактором в миграции лейкоцитов в толщу сосуда и дальнейшему формированию тромба. Известно, что одним из патогенетических звеньев начальной стадии развития атеросклероза является скопление и последующая миграция моноцитов, нейтрофилов, лимфоцитов и тромбоцитов в область повреждения сосудистого эндотелия. Установлено, что взаимодействие моноцитов и лимфоцитов имеет первостепенное значение в инициации процессов повреждения и последующего тромбообразования на поверхности атеросклеротической бляшки [Климов А.Н., 1995; Пальцев М.А., 2005; Nityanand S., 1995].Учитывая, что лимфоцитарно-тромбоцитарные взаимодействия практически не изучались при ишемической болезни сердца, исследования в этом направлении могут оказаться перспективными для более глубокого понимания патогенеза и терапии этих заболеваний.

Цель и задачи исследования

Целью исследования явилось изучить лимфоцитарно-тромбоцитарную адгезию при ИБС и ее взаимосвязи с агрегационной активностью тромбоцитов и продукцией цитокинов.

Для достижения поставленной цели решались следующие задачи.

1. Изучить у больных со стабильной и прогрессирующей стенокардией принимающих и не принимающих аспирин и инфарктом миокарда функцию лимфоцитарно-тромбоцитарной адгезии.

2. Исследовать у пациентов ИБС спонтанную и индуцированную агрегацию тромбоцитов и оценить корреляционные взаимосвязи с функцией лимфоцитарно-тромбоцитарной адгезии.

3. Определить у больных со стабильной и прогрессирующей стенокардией принимающих и не принимающих аспирин и инфарктом миокарда концентрацию ИЛ-1РА, ИЛ-4, ИЛ-8, ИЛ-18, растворимого Р-селектина и оценить характер корреляционных связей с лимфоцитарно-тромбоцитарной адгезией.

Научная новизна

Впервые установлено, что у больных со стабильной и прогрессирующей стенокардии, не принимающих аспирин, снижается количество лимфоцитарно-тромбоцитарных агрегатов по сравнению со здоровыми. При этом уменьшается абсолютное число лимфоцитов, участвующих в клеточно-пластиночной адгезии. Использование аспирина при лечении пациентов со стабильной и прогрессирующей стенокардией восстанавливает у них функцию лимфоцитарно-тромбоцитарной адгезии.

Впервые выявлено, что после развития инфаркта миокарда у больных функция лимфоцитарно-тромбоцитарной адгезии неоднозначна: у одних - она находится ниже, у других - выше уровня здоровых, у третьих -соответствует норме. К 20-22 суткам у больных с исходно низкими значениями увеличивается, а с высокими - снижается процент лимфоцитов, способных адгезировать на своей поверхности тромбоциты приближаясь к уровню здоровых. У таких пациентов в первые 12 суток после развития инфаркта уменьшается абсолютное число лимфоцитов, присоединяющих к себе кровяные пластинки.

Впервые обнаружено, что изменения лимфоцитарно-тромбоцитарной адгезии у больных с различными проявлениями ИБС связаны с агрегационной функцией тромбоцитов и содержанием ИЛ-4, ИЛ-8, ИЛ-1РА.

Теоретическая и практическая значимость работы

В результате исследования получены новые сведения о роли лимфоцитарно-тромбоцитарной адгезии в патогенезе ишемической болезни сердца и установлены ее взаимосвязи с агрегационной функцией тромбоцитов, продукцией ИЛ-4, ИЛ-8, ИЛ-18, ИЛ-1РА и sP-селектина, также выявлены новые факты о влиянии аспирина на клеточно-пластиночные взаимодействия при стабильной и прогрессирующей стенокардии.

Ссылаясь на материалы исследований, использование теста лимфоцитарно-тромбоцитарной адгезии у пациентов с ИБС позволяет косвенно судить об агрегационных свойствах тромбоцитов и применять для оценки влияния аспирина на межклеточные взаимодействия.

Внедрение в практику

Результаты исследований внедрены учебный процесс кафедр нормальной физиологии, патологической физиологии, факультетской терапии, в работу диагностической поликлиники ЧГМА, НИИ медицинской экологии ЧГМА и городской больницы № 1 г. Читы.

Апробация основных положений работы

Основные результаты работы были представлены на Российском национальном конгрессе кардиологов (Москва, 2006, 2007), XX съезде Физиологического общества им. И.П.Павлова (Москва, 2007), Конгрессе «Дни иммунологии в Санкт-Петербурге» (2007), XXI Конгрессе международного общества по тромбозу и гемостазу (ISTH) (Женева, Швейцария, 2007), международном симпозиуме по тромбоцитам (Израиль, 2006), заседании Читинского отделения Физиологического общества им. И.П. Павлова (2007).

Положения, выносимые на защиту

1. У больных со стабильной и прогрессирующей стенокардией, не принимающих аспирин, снижается количество лимфоцитарнотромбоцитарных агрегатов по сравнению со здоровыми. При этом уменьшается абсолютное число лимфоцитов, участвующих в клеточно-пластиночной адгезии. Использование аспирина при лечении пациентов со стабильной и прогрессирующей стенокардией восстанавливает у них функцию лимфоцитарно-тромбоцитарной адгезии.

2. У пациентов, перенесших инфаркт миокарда, количество ЛТА в первые сутки наблюдения варьирует независимо от объема некроза и предпринимаемого лечения: у одних больных этот показатель находится ниже, у других - выше уровня здоровых, у третьих - соответствует норме. К 20-22 суткам у больных с исходно низкими значениями увеличивается, а с высокими - снижается процент лимфоцитов, способных адгезировать на своей поверхности тромбоциты приближаясь к уровню здоровых. У таких пациентов в первые 12 суток после развития инфаркта уменьшается абсолютное число лимфоцитов, присоединяющих к себе кровяные пластинки.

3. Лимфоцитарно-тромбоцитарная адгезия у пациентов с ИБС коррелирует с изменением агрегационной функции тромбоцитов и приемом аспирина.

4. У больных со стабильной и прогрессирующей стенокардией концентрация ИЛ1-РА повышена и не зависит от приема аспирина. У этих пациентов содержание ИЛ-4 выше, чем у здоровых лиц, однако применение аспирина снижает его уровень только при прогрессирующей стенокардии. Концентрация ИЛ-8 увеличена у больных со стабильной и прогрессирующей стенокардией и прием аспирина не сказывается на ее изменении. У пациентов с ИМ содержание ИЛ-4, ИЛ-8, ИЛ-1РА повышается в первые сутки после развития болезни и снижается к 22 суткам наблюдения, не достигая значений здоровых лиц. Концентрация ИЛ-18 во всех клинических группах не отличается от нормы.

Концентрация Р-селектина увеличивается только в первые 12 суток после развития инфаркта миокарда и снижается к 22-суткам.

ВЫВОДЫ

1. У больных со стабильной и прогрессирующей стенокардией, не принимающих аспирин, снижается количество лимфоцитарно-тромбоцитарных агрегатов по сравнению со здоровыми. При этом уменьшается абсолютное число лимфоцитов, участвующих в клеточно-пластиночной адгезии. Использование аспирина при лечении пациентов со стабильной и прогрессирующей стенокардией восстанавливает у них функцию лимфоцитарно-тромбоцитарной адгезии.

2. У пациентов, перенесших инфаркт миокарда, относительное число ЛТА в первые сутки наблюдения варьирует независимо от объема некроза и предпринимаемого лечения: у одних больных этот показатель находится ниже, у других - выше уровня здоровых, у третьих -соответствует норме. К 20-22 суткам у больных с исходно низкими значениями увеличивается, а с высокими - снижается процент лимфоцитов, способных адгезировать на своей поверхности тромбоциты приближаясь к уровню здоровых. У таких пациентов в первые 12 суток после развития инфаркта уменьшается абсолютное число лимфоцитов, присоединяющих к себе кровяные пластинки.

3. У пациентов со стабильной и прогрессирующей стенокардией, не принимающих аспирин, агрегационные свойства тромбоцитов не отличаются от здоровых, а у получающих аспирин - они снижаются. При этом агрегационная функция кровяных пластинок формирует разнонаправленные корреляционные связи с лимфоцитарно-тромбоцитарной адгезией и у больных, не использующих аспирин, принимает обратные, а включающих его в лечение - прямые значения.

4. У пациентов с инфарктом миокарда в 1-2 сутки развивается выраженная гипоагрегация тромбоцитов, с последующим повышением агрегационных свойств тромбоцитов на 10-12 сутки и их полным восстановлением на 20-22 сутки. У больных с минимальным содержанием тромбоцитарно-лейкоцитарных агрегатов, агрегационная функция тромбоцитов сильно коррелирует с показателями ЛТА в первые сутки после развития ИМ и по мере формирования рубца снижется и принимает обратные значения на 20-22 сутки. Среди пациентов с увеличенным количеством ЛТА в первые сутки корреляционная связь носит обратный, а в 20-22 сутки - приобретает прямой характер. У больных с исходно нормальными показателями ЛТА корреляционные взаимоотношения между клеточно-пластиночной адгезией и агрегационной функцией тромбоцитов формируют постоянные отрицательные связи на протяжении всего периода наблюдения.

5. У больных со стабильной и прогрессирующей стенокардией концентрация ИЛ1-РА повышена и не зависит от приема аспирина. У этих пациентов содержание ИЛ-4 выше, чем у здоровых лиц, однако применение аспирина снижает его уровень только при прогрессирующей стенокардии. Концентрация ИЛ-8 увеличена у больных со стабильной и прогрессирующей стенокардией и прием аспирина не сказывается на ее изменении. У пациентов с ИМ содержание ИЛ-4, ИЛ-8, ИЛ-1РА повышается в первые сутки после развития болезни и снижается к 22 суткам наблюдения, не достигая значений здоровых лиц. Концентрация IL-18 во всех клинических группах не отличается от нормы. Концентрация Р-селектина увеличивается только в первые 12 суток после развития инфаркта миокарда и снижается к 22-суткам.

6. У больных с прогрессирующей стенокардией, не зависимо от приема аспирина, число ЛТА обратно коррелирует с ИЛ-1РА, а при инфаркте миокарда на 12 сутки болезни - формирует прямую связь. ЛТА образует положительные взаимосвязи с уровнем ИЛ-4 только на 10-12 сутки инфаркта миокарда. Между ЛТА и ИЛ-8 сильная прямая связь проявляется на 1-2 сутки ИМ и отрицательная - на 20-22 сутки.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Изучение лимфоцитарно-тромбоцитарной адгезии у больных стенокардией позволяет выяснить эффективность применения аспирина. Так, подъем показателя ЛТА до уровня здоровых людей позволяет утверждать о хорошей чувствительности к действию препарата. При отсутствии реакции со стороны лимфоцитарно-пластиночной адгезии следует заподозрить аспиринорезистентность у больных и рекомендовать более глубокое изучение феномена.