Автореферат и диссертация по медицине (14.00.25) на тему:Лекарственная регуляция агрегации тромбоцитов

? Г 5 ОД

На правах рукописи

2 п 0!'.т :."

МУЛЯР АЛЕКСАНДР ГЕОРГИЕВИЧ

УДК 616.12-009.72-005.6/8:615.22

ЛЕКАРСТВЕННАЯ РЕГУЛЯЦИЯ АГРЕГАЦИИ ТРОМБОЦИТОВ Специальность - 14.00.25. Фармакология

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени доктора медицинских наук

Москва -1995

Работа выполнена на кафедре фармакологии Московского медицинского стоматологического института

Научные консультанты: академик МАИ, доктор медицинских наук, профессор Ю. Ф. Крылов

доктор биологических наук Е. И. Асташкин

Официальные оппонентьс член-корр. РАМН, профессор

К К. Лепахин

член-корр. РАМН, профессор Б. И. ЛюбимоЕ

член-корр. РАМН, профессор В. С. Шашков

Ведущая организация: Гематологический научный

центр РАМН

Защита диссертации состоится ". в 'Л на заседании Диссертационного соЕета при Московском медицинском стоматологическом институте (Москва,103473, ул. Долгоруковская, 4).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке института (Москва, ул. Вучетича, д. 10 А).

Автореферат разослан " " г.

Ученый секретарь Диссертационного совета доктор медицинских наук,профессор

Л. Л КИРИЧЕНКО

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ.

АКТУАЛЬНОСТЬ ТЕМЫ.

Система гемостаза - совокупность реакций, позволяющая поддер-швать нормальное функционирование организма С одной стороны, она сохраняет кровь в жидком состоянии и предупреждает возникновение тромбозов и эмболий, с другой, вызывая стаз, способствует остановке сровотечений ( КМ. Лакин, 1985; 3.С. Баркаган, 1988; Д. М. Зубаиров I соавт. , 1991; Е. К Аббакумов и соавт., 1992 и др.).

Все это возможно только при наличие тесной взаимосвязи между :вертывающей, противосвертывающей, нервной, эндокринной и иммунной :истемами.

Лекарственная регуляция гемостаза может осуществляться путем грямого или косвенного воздействия: а) на сосудистую стенку, б) [лазменный гемостаз, в) тромбоциты. При этом, наиболее значимым для аинической практики является возможность подавлять его активность [.тем самым,предотвращать и лечить такие тяжелые и широко распрост-1анекные заболевания, как инфаркт миокарда, нарушение мозгового :ровообращения, отторжение пересаженных органов и тканей и т. д.

Из лекарстве!;ных средств, влияющих на сосудистую стенку, ис-ользуются клофи^рат, цетамефин.полиглюкин, колестинол, пробукол и Р.

Свертываемость плазмы понижают гепарин, анкрод, антикоагулянты епрямого действия ( фепромарон, нитрофарин, варфарин, фенилин и р.), активаторы фибринолиза (стрептокиназа, урокиназа, стрептоде-аза и др.).

Угнетение функции тромбоцитов достигается ацетилсалициловой ислотой, тренталом, дипиридомолом, тиклидом и, может быть, пираце-

тамом. Естественно, практическую медицину вышеуказанный перечень препаратов и, в первую очередь, действующих на тромбоцитарное звено гемостаза, не удовлетворяет.

В связи с изложенным,дальнейший поиск высокоэффективных и малотоксичных веществ, способных подавлять агрегационную способность кровяных пластинок, является актуальным.

Настоящая работа выполнена в соответствии с планом научноисс-ледовательских работ Московского медицинского стоматологического института по проблеме: " Лекарственная регуляция гемостаза " N Гос. регистрации 01900061170 .

ЦЕЛЬ И ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ.

Целью настоящих исследований является поиск и создание новых высокоэффективных антиагрегационных средств.

Для осуществления намеченной цели нами были поставлены следующие задачи:

1) В сравнительном аспекте изучить влияние^ индукторов агрегации- аденозиндифосфорной кислоты(АДФ).коллагена, адреналина, серото-нина, арахидоновой кислоты(АА),фактора, активирующего тромбоцить (ФАТ) на функцию кровяных пластинок, и,в дальнейшем - выбрать соединения для создания оптимальных моделей гиперагрегации.

2) Исследовать влияние новых веществ из разных химические групп и лекарственных средств, взятых в качестве препаратов сравнения, на агрегацию тромбоцитов в условиях in vitro.

3) Отобрать наиболее активные антиагреганты и изучить их способность подавлять функции тромбоцитов в условиях живого организма.

4) Определить способность высокоэффективных веществ влиять н< уровень свободного кальция в цитоп..^зме форменных элементах крови ( целью уточнения их возможного механизма действия.

5) Изучить острую токсичность наиболее активных соединений.

НАУЧНАЯ НОВИЗНА.

Впервые изучена антиагрегационная активность 61 нового химического соединения.

Выявлены вещества, обладающие выраженной способностью подавлять функцию тромбоцитов.

Установлено, что ингибировать агрегацию тромбоцитов способны новые производные имидазола, ксангина, пантотеновой кислоты, прос-тагландиноподобные соединения и др. фи сравнительной оценке действия новых химических веществ установлено, что наиболее выраженное антиагрегационное действие присуще синтезированному по оригинальной технологи» отечественному дисульфиду коензиму ацетилирования (КоА) и комплексу полиненасыщенных жирных кислот с условным названием "Эпаден".

Впервые показано, что дисульфид КоА и "Эпаден" восстанавливают сниженный кальциевый ответ в клеточных элементах крови больных сердечно-сосудистой патологией.

Установлена низкая острая токсичность перспективного ¿шгиагре-ганта - дисульфида КоА.

ПРАКТИЧЕСКАЯ ПЕННОСТЬ ИССЛЕДОВАНИЯ.

Учитывая ограниченное число лекарственных препаратов,угнетаю-щих функцию крорлных пластинок, нами было проведено фармакологическое исследование более 60 новых химических вещэств в сравнении с известными лекарственными препаратами.

Результаты нашей работы позволили выявить вещества с антиагре-гационным эффектом среди производных малоновой кислоты, ксанти-на.бензимидазола, доноров К+ и и др. Анализ этих данных и соответствующие рекомендации химикам-синтетикам позволят продолжить синтез новых химических соединений с заданными фармакологическими эффектами.

Важным для практической медицины является способность дисульфида КоА и эпадена эффективно угнетать агрегацию тромбоцитов, сочетающуюся с их низкой токсичностью. Кроме того, эпаден улучшает микроциркуляцию, повышает физическую работоспособность и уменьшает перекисное окисление липидов (ПОЛ).

Итоги наших исследований легли в основу пакета документов, предоставленного в Минздравмедпром Российской Федерации с целью получения разрешения на клинические испытания эпадена в качестве средства, улучшающего микроциркуляцию.

Позитивные результаты при изучении специфической активности и острой токсичности дисульфида КоА свидетельствуют о целесообразности продолжения исследований его по параметрам безвредности с перспективой выхода на клинику.

АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ.

Результаты работы -были доложены и обсуждены на совместном заседании кафедр фармакологии и патофизиологии ММСИ лаборатории спектрофлюометрии НПО "Биотехнология".

ПУБЛИКАЦИИ.

Материалы проведенных исследований по теме диссертации опубликованы в 58 статьях и тезисах.

ОБЪЕМ И СТРУКТУРА ДИССЕРТАЦИИ.

Работа изложена на 2-7 ^ страницах машинописного текста, содержит Р, 1 таблиц, 88 рисунков, состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследований, глав собственных исследований, заключения, выводов, списка литературы, включающего Щ отечественных и 1*1% зарубежных источников.

ОСНОВНЫЕ ПОЛОЖЕНИЯ, ВЫШСИШЕ иА ЗАЩИТУ.

- Изучена антиагрегационная активность новых производных бен-зимидазола, ксантина, пиразолидона, малоната и др.

- Исследованы некоторые аспекты механизма действия перспективных антиагрегационных соединений

- Установлена выраженная способность дисульфида КоА и эпадена угнетать агрегацию тромбоцитов

- Определены специфическая активность и некоторые параметры безвредности дисульфида КоА

- Выявлены свойства эпадена улучшать микроциркуляцию, уменьшать перекисное окисление липидов и повышать физическую работоспособность

- Изучена специфическая активность и параметры безвредности эпадена в соответствии с требованиями Министерства здравоохранения и медицинской промышленности Российской Федерации; материалы переданы в Экспертные комитеты МЗ МП РФ для получения разрешения на клинические испытания.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЕ

Эксперименты по изучению новых химических соединений и лекаре-гвенных веществ были проведены на 1185 кроликах породы "Шиншилла" массой 2,5-3,5 кг , 150 крысах массой 150-180 г и 250 белых беспородных мышах массой 20-22 г.

1. Определение агрегационной способности тромбоцитов по Born ;i962) проводили на агрегометре фирмы Chrono-log (США). Регистрацию степени изменения оптической плотности плазмы, богатой тромбоцитами, при добавлении к ней индуктора агрегации (АДФ, коллаген, АА) трзводили с нативной плазмой (контроль) и после введения исследуемых веществ через определенные промежутки времени (опыт).

При графической регистрации процесса агрегации тромбоцитов по-1учали кривые, отражавшие изменение оптической плотности плазмы, Зогатой тромбоцитами, (100 Z) по сравнению с оптической плотностью ¡естромбоцитарной плазмой (0 %).

2. Изучение тканевой микроциркуляции. Интенсивность микроцир-куляторного кровотока измеряли с помощью лазерного доплера Periflux Qd, оснащенного регистрирующим устройством. Лазерный датчик фиксировали на депилированном участке кожи передней брюшной стенки крысь и регистрировали изменения частоты отраженного от движущихся форменных элементов крови лазерного сигнала прибора Значения эффективности кровотока выражались в вольтах.

3. Изучение интенсивности перекисного окисления липидов (ЮЛ) проводили в экспериментах in vitro, используя микросомальную фракцию гомогената печени крыс. Концентрацию малонового диадьдегвдг (МДА) определяли с помощью реакции с тиобарбитуровой кислой спектрофотометрически на аппарате СФ-16.

4. Определение степени физической работоспособности определяла по тесту вынужденного плавания крыс с дополнительным грузом (10 % i массе тела) до полной невозможности удерживаться на поверхности воды и регистрацией времени плавания. Исследования проводили до начала введения вещества (контроль) и через 3 и 6 месяцев введения крысам изучаемого соединения.

5. Определение свободного кальцияС Са++]i в цитоплазме лимфоци тов человека проводили с использованием флуоресцентного зонда ФУРА 2AM. Проникновение ФУРА-2АМ в клетки и степень гидролиза до кислот контролировали по увеличению интенсивности флуоресценции эфира помощью спектрофлюориметра Hitachi F-4000 (Япония).

6. Острую токсичность определяли при внутрибрюшияном введени исследуемых веществ интактным мышам массой 20-22 грамма. Результат учитывали спустя сутки. Расчет средней смертельной дозы (LD50) про водили по методу Litchfield, Wilcoxon (1949).

Статистическую обработку всех данных осуществляли по Стьюдент с использованием ' машинной обработки данных по программе "Window

3.1".

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ Повышение свертываемости крови нередко приводит к развитию тяжелых заболеваний - инфаркты миокарда, нарушения мозгового кровообращения, тромбофлебиты и т.д., и может быть причиной высокой смертности населения. Одним из перспективных путей борьбы с этими заболеваниями является использование антиагрегантов. В настоящее время с этой целью применяются ацетилсалициловая кислота, трентал, дипиридамол, тиклопидин. Однако, лечение этими препаратами, с одной стороны, не всегда достаточно эффективно, с другой - может вызвать различные побочные эффекты. Все вышеизложенное послужило стимулом для проведения наших исследований, посвященных поиску и созданию новых высокоэффективных антиагрегационных лекарственных средств, а также изучения некоторых аспектов механизма их действия.

В работе было изучено 61 новое химическое соединение и ряд эталонных препаратов.

Как уже было сказано выше, различные процессы, происходящие в тромбоцитах и приводящие к активации последних, во многом зависят от перераспределения ионов Са++ между внеклеточным пространством и внутриклеточной средой. Особая роль этих катионов в функционировании кровяных пластинок проявляется в изменении поверхностного заряда плазматической мембраны, конформации ее и появлению псевдоподий, возникновении реакции высвобождения, запуске каскада арахидоновой кислоты, активации кальмодулина и образовании плотных агрегатов.

Все соединения, взятые нами для исследования, были представлены несколькими группами, объединенными способностью прямо или косвенно регулировать уровень Са++ в тромбоцитах: 1) производные диоксипиразолидона;

- 9 -

2) производные малоновой кислоты;

3) производные имидазола;

4) производные ксантина;

5) гомологи фактора активации тромбоцитов (ФАТ); * 6) гомологи пантотеновой кислоты;

7) комплекс полиненасыщэнных жирных кислот;

8) доноры К+ и М&++ ;

. 8) разные (таурин, кратал и др.).

В первом разделе работы мы провели сравнительную оценку действия наиболее известных индукторов агрегации: АДФ, коллагена, адреналина, фактора активации тромбоцитов (ФАТ), серотонина и арахидо-

-з ~ *

новой кислоты (АА) в диапазоне концентрации от 10 Ы до 10 Ы.

В указанных концентрациях серотонин и адреналин давали нестабильную реакцию, что позволило в наших исследованиях пренебреч! этими индукторами при создании моделей гиперагрегации. ФАТ вызывaJ слишком мощную агрегацию, сопровождающуюся падением оптическо; плотности плазмы до 80-90%.

Наиболее стабильный гиперагрегационный эффект создавали АДФ, за которой признана роль экзогенного и эндогенного факторов стимуляции тромбоцитов. Как эндогенный фактор АДФ может ингибировать аде-нилатциклазу, понижая уровень цАМР и стимулировать высвобождение А] с последующим образованием тромбоксана А, Кроме того, АДФ являете:

* Данные гомологи пантотеновой кислоты были изучены при лю

}

безном содействии ТО "ПАНТ" (ЕИ. Гунар, Г. С. Козлова, 0. И. Семи на), являющегося владельцем иссльм/емых веществ и представившего их в наше распоряжение.

одним из интеграторов различных путей увеличения способности тромбоцитов к агрегации (фосфоино-зитольный путь, освобождение Са++ из депо, активация кальмодулина и т.д.). Поэтому для первичных скрини-нговых исследований антиагрегационного действия новых химических соединений нами была выбрана модель АДФ-индуцированной агрегации.

Падение оптической плотности плазмы, богатой тромбоцитами, при использовании коллагена колебалось в пределах 31 - 44 X, что позволило в ряде случаев использовать его дополнительно для получения более обширной информации о действии новых химических веществ.

Арахидоновая кислота (АА) вызывала падение оптической плотнос-

-3

ти плазмы на 57-57% в концентрации 2,5x10 М. Считаясь индуктором агрегации с более специфичным (узким) спектром действия, АА принимает участие в запуске кальциевых механизмов регуляции и является субстратом для ферментов цикла арахидоновой кислоты. Учитывая это, использование в экспериментах АА было целесообразно лишь в тех случаях, когда изучались вещества с возможным действием на метаболизм АА.

Общеизвестно, что многие нестероидные противовоспалительные средства обладают способностью угнетать агрегацию тромбоцитов посредством блокады простагландинсинтетазы и нарушать баланс между уровнем тромбоксана А^и простациклина.

Следующая серия опытов была посвящена изучению влияния новых производных 3,5-диоксипирадолидона на АДФ-индуцированную агрегацию в сравнении с амидопирином в условиях in vitro.

Наиболее выраженным антиагрегационным эффектом обладало ве-щэство, имеющее шифр МЯК-38( натриевая соль 1,2-дифенил-4-(п-сульфо-фенилгидразоно)-3,5-диоксипиразолидина). В концентрации 40мкг/мл это соединение снижало величину агрзгации на 33,8% от контроля (табл. i). Этот эффект был в 4 раза выше такового у амидопирина(8,7%)

Влияние амидопирина и производных пирозалидона на АДФ-индуцированную агрегацию тромбоцитов кроликов (М+т).

Таблица N 1

ы/ы Вещества Конечная концентрация веществ в мкг/мл.

40 80 160

Процент изменения оптической плотности плазмы, обогащенной тромбоцитами, по отношению к контролю.

1 амидопирин 91.3+2.8 84. 7+1.3 76. 4+1. 3

2 А-2 81.4+1.5 111.1+6.0 106. 8+2. 3

3 А-10 88.5+4. 9 80. 2+3. 3 96.6+4. 6

4 А-11 103.1+2. 5 92. 5+2. 6 109. 8+4. 7

5 А-12 99.9+2.1 99. 4+5. 6 98.1+8. 8

6 А-13 88.4+2. 2 88. 3+2.7 69. 5+3. 7

7 А-14 88.7+1.6 83. 2+1.9 86.2+1.3

8 А-15 98. 5+4. 4 125. 4+10.2 101.6+4.2

9 А-16 88. 4+1.0 85. 7+2. 4 75. 9+3. 2

10 А-17 88.7+1.9 84.9+3. 7 108. 3+3. 8

И А-31 101.1+2.7 92. 7+5.3 94. 7+2. 5

12 МЯК-38 66. 2+3. 4 80. 5+2. 8 89. 3+3. 8

13 М-1 100.1+1.8 97.8+1. 2 94. 6+2. 7

14 М-2 99.7+1.8 98.5+1.7 92. 4+1. 3

15 ДСБ 89. 6+1.4 84.1+1. 9 89.1+1.7

Повышение концентрации вещества до 80 и 160 мкг/мл сопровождалось угнетением функции агрегации тромбоцитов соответственно на 20% и 10% (ряс. 1).

Как антиагрегант действовало вещество А-13 (натриевая соль енола 1,2,4-три(п-сульфофенил)-3,5-диокстшргзолидина). В концентрации 160 мкг/мл оно препятствовало падению оптической плотности плазмы, вызываемому АДФ, на 30,5%. Это превосходило эффект той хе конентрации амидопирина в 1,3 раза. В концентрациях 40 и 80 мкг/мг антиагрегационное действие А-13 не превышало 12% по отношению к контролю {табл.1).

Ингибируюцим эффектом обладало вецество с шифром А-2 (натриевая соль енола 1,2 -ди-(п-сульфофенил)-3,5-диоксипиразолидина). В дозе 40 мкг/мл этот эффект относительно степени агрегации составлял 19%. Однако дальнейшее увеличение концентрации А2 в кювете с плазмой, обогащаемой тромбоцитами, до 80 и 160 мкг /мл сопровождалось усилением агрегационного действия.

Исследование вещества А-10(натриевая соль енола 1,2- дифенил-4 -этил-4-сульфо-З,5-диоксипиразолидина) показало его способность уменьшать склеивание тромбоцитов во всех изученных концентрациях (40, 80, 160 мкг/мл) с наибольшим эффектом при концентрации 80 мкг/ мл (19,8%). Отклонение от максимума антиагрегационного действия в сторону уменьшенля (40 мкг/мл) или увеличения (160 мкг/мл) концентрации А-10 приводило к ослаблению данного действия (соответственно на 11,5 и 3,4%).

Вещество с шифром А-16 (натриевая соль енола 1,2- ди(п-сульфо-

фенил)-3,5-диоксипиразолидина) действовало подобно амидопирину и А/

13 (натриевая соль енола 1,2,4-три(псульфофенил)-3, 5-диоксипиразо-лидина) во всех используемых концентрациях. Так, в концентрации 160 мкг/мл А-16 проявляло свою наибольшую активность (24,1%). В кон-

Влияние МЯК—38 на АДФ-

индуцированную агрегацию тромбоцитов кролика.

in vitro

Падение оптической плотности плазмы ( ) 100-

40 80 160

Концентрация МЯК-38 мг/'мл

Рис.1.

центрации 80 мкг/мл процесс склеивания тромбоцитов был более интенсивным (14,3%) по отношению к контролю), а в концентрации 40 мкг/мл антиагрегационный эффект был минимальным (11,6%).

Сходным действием обладало вещество А-14 (натриевая соль енола 1,2 дифенил-4-сульфо-3,5-диоксипиразолидина). В концентрациях 40 и 80 мкг/мл степень антиагрегационного проявления не отличалась от такового у амидопирина, веществ А-10(натриевая соль 1,2-дифе-нил-4-этил-4-сульфо-3,5 -диоксипиразолидина), А-16 (натриевая соль енола 1,2- ди(п-сульфофенил)-3,5-диоксипиразолидина), А-17 (кальциевая соль лактима 4,4-диэтил-1-п-сульфофенил-3,5-диоксипиразолиди-на) и ДСБ (натриевая coji¿ 3,5-диоксиш:разолидина-1,2- ди(п-сульфа-мидофенил) 4-бутил-З,5-диоксипиразолидина). Однако увеличение концентрации А-14 до 160 мкг/мл не вызывало дальнейшего усиления эффета, снижение оптической плотности плазмы по сравнению с исходным уровнем колебалось в пределах 14% (табл. Л.

У веществ А-11 (натриевая соль 1,2-дифенил-4-бутинол -4- суль-фо -3,5-диоксипиразолидина), М-1 (натриевая соль -4 дизтил амино-4 зтил-1,2 ди(п-сульфофенил)-3,5 диоксипиразолидона), М-2 (натриевая соль сульфофенилгидразоно-4 -(амидо)-бензилиден -1,2 дифенил-3,5 диоксипиразолидина) угнетение действия АДФ не превышало 10%, вещество А-12 (1.;:-дифенил-4-этил-4-бутил-З,5-диоксипиразолидина) во всех концентрациях проявляло полную индифферентность по отношению к агрегации тромбоцитов, а вещество А-15 (натриевая соль енола 1-п-сульфофенил-3,5- диоксипиразолидина) в концентрации 80 мкг/мл усиливало последнюю на 25%.

Учитывая, что вещество МЯК-38 оказалось эффективнее амидопирина и других производных пиразолидина в условиях in vitro, его действие на АДФ-индуцированную агрегацию было изучено in vivo. Однако в используемых дозах (5,10 и 20 мкг/кг) МЯК-38 на агрегацию тромбоци-

тов не влиял.

В следующей серии экспериментов нами была изучена антиагрега-ционная активнрсть новых производных малоновой кислоты - веществ, также обладающих противовоспалительным действием. Соединения вводили внутривенно в дозах 2,5; 5; 10 мг/кг и через 1, 2, 3, 4 часа исследовали на модели агрегации,индуцированной арахидоновой кислотой.

Вещество М-1 (В-(М-ацетилсалицилоил) гидразид бензатиазолил 2-амидов малоновой кислоты) только в дозе 10 мг/кг угнетало падение оптической плотности плазмы через 2 и 3 часа от начала эксперимента на 10%. В более ранние(1 час) и поздние (4 часа) сроки экспериментов данный показатель степени агрегации был близок к контролю. Вещество М-2 (бензоилгидразидокарбоксиметилкарбамидобензоил-3-орто малоновой кислоты) в той же дозе (10 мг/кг) угнетало агрегацию тромбоцитов через 1 час и 2 часа после внутривенного введения соответственно на 8 и 18%. Однако в более поздние сроки исследования агрегация тромбоцитов резко усиливалась (на 36% ) по сравнению с исходным уровнем.

Четыре производных малоновой кислоты: М-3 (1-додецилкарбонила-мид-3-орто-гидроксианилид малоновой кислоты),М-4 (1-гептилкарбонил-гидразид-3-орто-гидроксианилид малоновой кислоты), М-5 (1-ацетил-гидразид-3-орто-гидроксианилид малоновой кислоты) и М-7 (1(п-ацетилбензоил)гидразид -3-орто-гидроксианилид малоновой кислоты) в разной степени усиливали агрегацию, индуцированную АА, в течение всего опыта Вещество М-6 (1-октилкарбонилгидразид-З-орто -гидроксианилид малоновой кислоты) не вызывало статистически значимых изменений в цифрах падения оптической плотности плазмы.

Следующие опыты были посвящены ..¿учению влиянию 15 производных имидазола и ксантина на АДФ-индуцированную агрегацию тромбоцитов. Лишь у двух соединений был выявлен искомый эффект. Вещество с шиф-

ром СУМ-35 (б,8-диметил-2-(Н-метилморфолино-метил)-2,3-дигидротиа-золо (3,2-f) ксантина иодид) в различных концентрациях дало следующие результаты: усиление эффекта с повышением концентраций 10 \ 10 Г ,10 М) с максимумом действия при 10 М(на 24%). В более низких концентрациях агрегация, вызванная АДФ, угнеталась слабее. Антиагрега-

-5 -S

ционный эффект состав-лял при 10 М - 12%, а при 10 М - 8%.

Вещество СУМ-42 (3-(бутиламинометил)-тиазоло(3,2-а) бензимида-зола гидрохлорид) менее выраженно угнетало образование агрегатов. Антиагрегационное действие начинало проявляться в концентрации 10

-JT

Ук величина агрегации падала на 15%. В концентрации 10 M она уменьшалась на 11%, а в 10 (М падение оптической плотности плазмы, вызванное АДФ, не претерпевало изменений.

Новые производные бензимидазола, синтезированные в институте органической химии РАМН, и любезно предоставленные нам для исследования антиагрегационной активности, изучались на модели АДФ-индуци-рованной агрегации. Все вещества использовались в конечных концентрациях 75; l5t>; 300 мкг/мл. Соединения растворяли в этиловом спирте,поэтому мы предварительно изучили влияние данного растворителя на функцию тромбоцитов (табл. 2).

Было установлено, что 5 мкл 96% спирта, добавленное в 0,5 мл плазмы, угнетаем агрегацию тромбоцитов на 18% по отношению к контролю, а 10 мкл Ь6% спирта - на 30%.

С учетом этих данных лишь 3 производных бензимидазола во всех используемых концентрациях блокировали образование агрегатов, вызываемое АДФ (табл. 2). Пик эффекта ДБК-3 (1-фенил-4(^морфо-Лин)-5-хлоримидазол) приходился на концентрацию в 150 мкг/мл (агрегация ослабевала на 41%). Двухкратное уменьшение и увеличение концентрации вызывало менее выраженное действие (соответственно 14% и 7%).

Влияние производных имидаэола на- АДФ-индуцированную агрегацию тромбоцитов кроликов (М+т).

Таблица N 2

N/¡1 Вещества Процент падения оптической плотности плазмы,обогащенной тромбоцитами.

АДФ 10-5М 5мкл С2Н50Н 96О+АДФ10-5М 10МКЛ С2Н50Н 96О+АДФ10-5М Конечная концентрация веществ в плазме4

75 150 300

1 ДБК-1 62.14+2.12 51.16+2.01 43.3+1.78 * 63.08+1.83 54.18+1.65 42.77+1.02

2 ДБК-2 62.14+2.12 51.16+2.01 43. 3+1.78 64.15+1.54 53. 04+1.37 41.43+1.64

3 ДБК-3 62.14+2.12 51.16+2.01 43. 3+1.78 53.41+1.42 30.14+1.38 37.11+1. 21

4 ДБК-4 62.14+2.12 51.16+2.01 43.3+1.78 62.41+1.64 51.13+1.71 40. 20+1.73

5 ДБК-5 62.14+2.12 51.16+2.01 43. 3+1.78 62.81+1. 48 53.31+1.68 49. 41+1.54

6 ДБК-6 62.14+2.12 51.16+2.01 43. 3+1.78 61.87+174 58.62+2.04 49. 54+1.13

7 ДБК-7 62.14+2.12 51.16+2.01 '43.3+1. 78 65.17+1.90 50.34+1.56 42.78+2.11

8 ДБК-8 54; 42+0.41 45.4+0.14 37.8+1.7 38.2+0.19 41.2+0. 32 27. 4+0.34

9 ДБК-9 61.64+0.60 51.7+0.54 42. 2+0.33 46.6+0. 26 35. 4+0.14 23. 2+0.53

10 ЛБК-10 61.41+0.22 53.2+0.34 44.2+0. 42 53.8+0.37 52. 4+0. 26 42.2+0. 93

Примечание:Концентрации веществ ДБК-1,2,3,4,7,8,9,10 получены растворением в 5 мкл с спирта (1ьи~мкг/мл);в 10 мкл (300 мкг/мл);ДБК-5,6 - в 5мкл спирта (300 мкг/мл),число исследований

_ К. * _ пгЛ ГК пп рпэтшоншп г> ипитппттрм

При исследовании ДБК-8 (1-фенил-4-изопропилсульфамидо-5 хлор имидазол) получены следующие результаты: во всех используемых концентрациях происходило ослабление эффекта АДФ (при 75 мкг/мл - на 30%; при 150 мкг/мл - на 24%, при 300 мкг/мл - на 50%).

Соединение ДБК-9 (1-фенил-4-диэтилсульфамидо-5 хлор имидазол) характеризуется в наших опытах активным угнетением агрегации с максимумом действия в концентрации 300 мкг/мл (на 45% снизилась величина агрегации). С использованием меньших концентраций (150 мкг/мл и 75 мкг/мл) эффект ослабевал (соответственно на 31% и 25%).

Сульфтроксан, который считается антагонистом тромбоксановых рецепторов, изучался на двух моделях агрегации (АДФ и АА).

Было установлено, что слабо эффективной концентрацией на моде-

-s

ли агрегации,индуцированной АА,оказалось 10 М. Угнетение агрегации снижалось на 11%, АДФ-индуцированная агрегация не изменялась.

Среди 7 производных фактора активации тромбоцитов (ФАТ), исследованных нами, потенциальных антиагрегантов найдено не было. Наоборот, одно из веществ: l-S-октадезилБи-глицеро-З-фосфохолин (вещество 1-S), подобно ФАТ, индуцировал агрегацию тромбоцитов, хотя и

менее выраженную, чем у ФАТ (рис. 2). Пик агрегации у этого соеди-

-з

нения приходился на концентрацию 10 М (33%) с последующим ослаблением эффекта при 10 4/(26%) и 105"м(20%). Минимальная агрегация (12

%) наступала при введении в кюветку с плазмой изученного вещества в -s

концентрации Ю М.

* 3 экспериментах с гомологами пантотеновой кислоты было установлено, что наиболее выраженным антиагрегационным эффектом в усло-

* Данный фрагмент работы был выполнен совместно со старшим преподавателем кафедры фармакологии ММСИ Е. А. Филиной

Влияние ФАТ и вещества 1~5на агрегацию тромбоцитов кролика

in vitro

%

-FAT -+— 1-S

Рис.2.

-e -t

виях in vitro обладал дисульфид КоА. В концентрациях 10 М и 10 М он подавлял АДФ-индуцированную агрегацию на 25% по сравнению с контролем.

-г

Дальнейшее снижение концентрации до 10 М и 10 М сопровождалось отсутствием антиагрегационного действия (.рис. 3).

В более выраженной степени эффект дисульфида КоА проявлялся на

-s

коллаген-индуцированной агрегации. В концентрациях 10 М и 10 М

склеивание тромбоцитов угнеталось соответственно на 50% и 60% от

исходного (рис. 4).

Одно из двух производных пантотеновой кислоты на используемых

моделях агрегации эффекта не проявляло. Другое в концентрациях 10 4

М, 10 М на 12% усиливало агрегацию, индуцированную АДФ, а в кон--У

центрации 10 М на столько же угнетало.

В опытах с коллагеном это вещество уменьшало способность тромбоцитов к агрегации но 20% только в концентрации 10 М.

В условиях живого организма действие производных пантотеновой кислоты как на моделях АДФ, так и коллаген-индуцированной агрегации не проявлялось.

В опытах с агрегацией, индуцированной АДФ в условиях in vivo, дисульфид КоА в дозе 40 мкг/кг усиливал склеивание тромбоцитов на 21% через 1 час г.осле внутривенного введения. Однако при увеличении дозы в 2 раза (£0 мкг/кг) происходило угнетение агрегации на 50% через 30 минут и на 35% через 60 минут от начала опыта (рис. 5).

В дозе 160 мкг/кг дисульфид КоА подавлял функцию тромбоцитов только в первые 30 минут исследований на 59% от контроля (рис. 5).

На коллаген-индуцированной агрегации эффект дисульфида КоА был более значительным. Антиагрегационное действие проявлялось в дозе 80 мкг/кг(42%).усиливалось к 30-й минуте исследований (48%) и в два

Влияние дисульфида КоА на АДФ-инду-• цированную агрегацию тромбоцитов

кроликов in vitro

% Падение оптической плотности плазмы

70

10 М10 и.10 М 10 М 10 м

■а Контроль ' Ш Опыт

* — стати"""ичестси достоверное рис.з. изменение

Влияние различных концентраций дисульфида КоА на коллаген-индуциро ванную

агрегацию тромбоцитов кролика

т уИго.

% падения оптической плотности плагшьт

10 ~М10

М10

^В Контроль ЕЗЗ Опыт — статистически достоверные изменения

Влияние дисульфида КоА при в/в введении на АДФ-индуцированную

агрегацию тромбоцитов кролика. %

—-— 160 мг/кг I 80 мг/кг -К 40 мг/кг

раза ослабевало по сравнению с предыдущими исследованиями (25%) к концу опыта (60 минут).

Таким образом, наиболее выраженным антиагрегационным эффектом на двух моделях агрегации (коллаген и АДФ) в условиях in vitro и in vivo обладал дисульфид Ко А.

* В опытах по изучению специфического действия эпадена было установлено, что пик антиагрегационного эффекта приходился на период двухмесячного его скармливания кроликам в дозе 509,6 мг/кг ежедневно. АДФ-индуцированная агрегация ослабевала на 27% (рис. 6),а коллаген-индуцированная - на 32% от исходного (рис. 7), в то время как s первому месяцу исследований в этой дозе действие препарата было /енее выраженным (АДФ - 16%, коллаген - 20% от контроля).

В дозе 124,4 мг/кг через 1 месяц после введения эпадена инду-дированная АДФ агрегация снижалась на 8%, а через 2 месяца на 15% ю сравнению с исходными значениями.

На модели агрегации, вызываемой коллагеном, в той же дозе 127,4 мг/кг) эпаден снижал падение оптической плотности плазмы по ¡равнению с контролем через месяц - на 9%, а через два - на 19%.

Кроме того, дополнительные эксперименты позволили установить, по эпаден улучшает микроциркуляцию (рис. 8), повышает физическую »аботоспособность и угнетает перекисное окисление липиодов. Следует юдчеркнуть, что вышеперечисленные свойства изученного вещества тем .ыраженнее, чем выше его доза.

Данный раздел исследований был проведен совместно со старшим реподавателем кафедры фармакологии ММСИ И. Б. Любимовым.

Влияние эпадена на АДФ-индуцированную агрегацию тромбоцитов кролика при

приеме рег оэ.

/' падения оптической плотности плазмы

509.6 мг/кг

127.4 мг/кг

Дозы вводного вещества ЙЙЗ Контроль Г."1 через 1 м-ц 1:1 через 2 м—ц

слияние эпадена на коллаген- индуцированную агрегацию тромбоцитов

при приеме рег оэ

% падения оптической плотности плазмы

127.4 509.6

Дозы вводимого вещества

Контроль

через 1 м-ц

через 2 м—ца

Рис.7.

Влияние эпадена на интенсивность кровотока сосудов кролика при

приеме рег оз.

Вольты

1274мг/кг 509-6мг/кг

Дозы вводимого вещества

£3 Контроль

ишемия

1м—ц+ишемия

* При исследовании антиагрегационной активности новых донороЕ К+, , аспаркама и панангина, было установлено, что наиболее

высокой способностью угнетать склеивание тромбоцитов обладает вещество 0-3 (кальциевая, магниевая, калиевая соль глицерофосфата и глютаминовой кислоты) : агрегация, вызываемая АДФ, подавлялась на 50% к первому часу исследований (рис. 9).

Изменение агрегации тромбоцитов в опытах с веществом 0-1 (калиевая, кальциевая, магниевая соль Шиффова основания пиридоксаль-£осфата и глютаминовой кислоты) и панангином были сходны и имели цвухфазный характер: в первые 15 минут исследований активность тромбоцитов возрастала соответственно на 7% и 20%, затем ослабевала, достигая контрольных значений к третьему часу исследований, а к танцу опыта (24 часа) резко возрастала. Наиболее выраженный эффект аспаркама проявился к третьему часу исследований: АДФ-индуцированная агрегация угнеталась на 32 Менее значимые цифры падения оптической плотности плазмы были получены через 15 минут и 60 минут тосле начала исследований (23%).

Вещества 0-2 (смешанная соль гидроглутаминатов калия и магния !соотн. К:М^=39:24) и 0-4 (смешанная соль гидроглутаминатоз калия и магния (соотн. К: М?=39:12) функциональную активность тромбоцитов не меняли.

В следующей серии опытов были изучены таурин и кратал. На способность тромбоцитов к образованию агрегатов таурин не влиял. Одна-га кратал через 4 часа после внутривенного введения в дозе 100

^ Данный раздел исследований проведен с доцентом кафедры военной I экстремальной медицины ММСИ И. Н. Мутиным.

Влияние панангина.аспаркама и вещества 3 на АДФ-индуцированную агрегацию тромбоцитов кролика.

% падения оптической плотности плазмы 60 -:-

контроль 15 мин. 60 мин. 180 мин, 24 час.

ki аспаркам и1 панангин си вещество д-3

- 30 -

/г/кг подавлял АДФ-индуцированную агрегацию на 22%.

Таким образом, в результате проведенных скринингоЕЫХ исследо-заний антиагрегационной активности свыше 70 соединений и лекарственных препаратов удалось выявить два вещества, способные в условиях in vitro и in vivo подавлять повышенную активность тромбоцитов. Учитывая это, мы посчитали целесообразным исследовать злияние данных перспективных антиагрегантов на изменение уровня банального кальция, которому отводится первостепенное значение при жтивации кровяных пластинок.

Опыты с дисульфидом КоА показали, что он непосредственно не злияет на базальный уровень кальция в лимфоцитах как доноров, так и 1ациентов с сердечной недостаточностью II стадии. Однако предварительная обработка таких лимфоцитов данным гомологом пантотеновой сислоты восстанавливает их сниженную способность к кальциевому от-эету на АА.

В то же время перераспределение кальция в лимфоцитах больных год влиянием одной АА по сравнению с лимфоцитами здоровых людей на-эушается. Снижение кальциевого ответа клеток при сердечно-сосудистых и других заболеваниях объясняется низким содержанием в них КоА 1ли же изменением проницаемости плазматических мембран для веществ, соторые в норме через них не проходят (Е. И. Асташкин и соавт. , .994; Ю. Ф. Крылов и соавт. , 1995 и др.).

В норме эндогенный КоА и его производные не проникают в цитоп-1азму меток. Можно предположить, что при патологии проницаемость неточных мембран для этих веществ увеличивается. КоА, попав в ци-юплазму, будет взаимодействовать с АА, образовавшийся эфир арахи-Юнил-КоА влияет на перераспределение ионов Са++ - депо и цитоплаз-юй, нормализуя функциональный ответ клеток и угнетает вторичные (еханизмы агрегации.

Возможен и другой путь угнетения агрегации тромбоцитов, при котором КоА, обладая гиполиподемическим действием (И. В. Клементьева и соавт. ,1991; НА. Феоктистов и соавт. , 1991; М.В. Пых и со-авт. ,1995 и др.), понижает уровень липопротеидов низкой плотности, обладающих проагрегатным действием. Нормализация баланса между последними и липопротеидами высокой плотности, которые способны угнетать функцию тромбоцитов, и приводит к искомому эффекту (уменьшению склеивания кровяных пластинок).

Как известно, АА является общепризнанным либератором кальция из кальцисом. Однако до недавнего времени не было ясно , что яеля-ется е этом случае действующим началом - сама кислота или же продукты ее метаболизма (простатландины или лейкотриены). Опыты, проведенные с применением ингибиторов циклооксигеназы у. липооксигеназы, показали, что последние не подавляют выброс кальция в лимфоцитах при последующей их инкубации с АА. Полученные результаты свидетельствовали о прямом эффекте данной жирной кислоты не высвобождение кальция.

В связи с этим представляет несомненный интерес изучение влияния других жирных кислот на изменение базального уровня кальция. I качестве таковой была взята эйкоаопентаеновая кислота (ЭПЮ, которая является действующим началом эпадена и скорость метаболически) превращений которой значительно медленнее, чем у АА.

В результате проведенных исследований было установлено, чтс ЗПК повышает базальный уровень кальция в цитоплазме лимфоцитов доноров и слабо влияет на таковой в опытах с лимфоцитами больных < сердечной недостаточностью II стадии. Однако предварительная обработка ЭПК лимфоцитов этих больных восстанавливает их сниженную способность к кальциевому ответу на АА, причем этот ответ, в отличи; от опытов с дисульфидом КоА, можно расценивать как потенциирующий.

В заключительной серии исследований была изучена острая токсичность дисульфида КоА. Ц^дисульфида КоА составляла 3334 мг/кг. Таким образом, острая токсичность дисульфида КоА оказалась незначительной, что свидетельствует о целесообразности дальнейшего изучения производного пантотеновой кислоты по параметрам безвредности с [герспективой Еыхода на клинические испытания.

Результаты, полученные при изучении зпадена, явились составной тастью документации, представленной в 1995 году в соответствующие :труктуры МЗ МП РФ для получения разрешения на клинические испыта-тя в качестве антиагреганта и средства, улучшающего микроциркуля-дию.

ВЫВОДЫ:

1.В эксперименте на животных изучена антиагрегационная актив-гость Gl-го нового соединения из различных химических классов.

Рзл новых произЕодных кс: л.чтипа, яиразолидона, имидазола,

(алоната, пантотената, глютамага, ненасыщенных .жирных кислот угне-■ает агрегации, вызываемую АДФ, арахидоновой кислотой, коллагеном.

3. Вырн»:ннши свойствами ингибитора индуцированной агрегации рсмбоцитоЕ in vitro и in vivo обладает дисульфид КоА.

4. Комплекс ойкозапентаеновой и докозагексаеновой кислот (зпа-ен) подавляет индуцированную агрегацию тромбоцитов.

5. Зпаден в эксперименте дозо-зависимо увеличивает интенсив-

ность кровотока, повышает физическую работоспособность (при длительном применении) и обладает антиоксидантным действием.

6. Дисульфид КоА практически не токсичен.

7. Дисульфид КоА и эпаден восстанавливают в лимфоцитах кальциевый отЕет, сниженный при сердечной недостаточности.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ.

1. Ультраструктура и функции кровяных пластинок. - В кн.: Ак туальные проблемы сердечно-сосудистой патологии. М., 1975, с. 51-5 (в соавт.).

2. Влияние производных пиразолона на агрегацию тромбоцитов. В кн.: Результаты клинических и экспериментальных исследований. М. 1973, с. 152 (в соавт.).

3. Использование различных препаратов коллагена для гемоста за. - В кн.: Труды ВНИИМПа. Выпуск XXXIY. М. 1976, с. 87-91 (в со авт.).

4. Фармакологическое воздействие на образование эксперимек тальных тромбов микроваскулярной системы брыхейки. - В га.: О проС лемах микроциркуляции. М. , 1977, с. 222-223 (е соавт.).

5. Поиск фармакологически активных ведеств для пдофилактики лечения тромбозов. - В кн.: Фармакология физиологически активнь веществ. Фрунзе, 1978, с. 33-35 (в соавт.).

6. Der Einflub einiger Induktoren und Inhibitoren de

Aggregation suf die functionellen Eigenschaften und die Ultrastruktur der Blutplättchen. - В кн. : Folin Haematol. Leipzig, 1979, c. 849-852 (в соавт. ).

7. Проблемы клинической и экспериментальной фармакотерапии и лекарственные осложнения. - В кн. : Экспериментальная фармакотерапия тромботических состояний. Тбилиси, 1979, с. 41 (в соавт.).

8. The modification of electronic microscopic structure of the dynamics of induced aggregation. - В кн. : Third Congress of the Hungarian pharmacological society. Budapepst, 1979, c. 52.

9. Фармакологические основы противотромботической терапии. -В кн. : Противотромботическая терапия в клинической практике. М. , 1979, с. 46-47 (в соавт.).

10. Лекарственное управление плазменным и клеточным гемостазом. - В кн. : Тезисы докл. I Всесоюзн. съезда гематологов и трансфу-зиологов. Баку, 1979, с. 222-223 (в соавт.).

11. Влияние индукторов и ингибиторов агрегации на некоторые показатели функционального состояния и морфологии тромбоцитов. - В кн. : Нейромедиаторы и механизм действия нейротропных и сердечно-сосудистых веществ. М. , 1979, с. 31-32 (в соавт.).

12. Изменение ультраструктуры тромбоцтиов и их способности к склеиванию под влиянием индукторов и ингибиторов агрегации. - В кн.: Физиология и патология системы гемостаза Чита, 1980, с. 41.

13. Пути фармакологического воздействия на агрегационную способность тромбоцитов. - В кн. : Система регуляции агрегационного состояния крови в норме и патологии. Барнаул, 1982, с. 60-64 (в соавт. ).

14. Фармакологическая регуляция агрегационной способности тромбоцитов. - В кн. : Физиологически активные вещества в медицине. Ереван, 1982, с. 181 (в соавт.).

15. Фармакологическое воздействие на агрегацию тромбоцитов с помощью простагландинов и их производных. - В кн.: Противотромбом-ботическая терапия а клинической практике. Новое в терапии, ди-агн. .лечении. М. , 1982, с. 77 -78 (в соавт.).

16. Физиологические основы лекарственной регуляции агрегацион-ной способности тромбоцитов. - В кн.: Х1У съезд Всесоюзн. физиоло-гич. общества И. П. Павлова. Л. "Наука", 1983, с. 318- 320 (в соавт. ).

17. Влияние фторированных производных простагландинов на агрегацию тромбоцитов. - В кн.: Поратения сосудистой стенки и гемостаз. М. , 1983, с. 294-295 (в соавт.).

18. Влияние лекарственных регуляторов тканевого обмена и из производных на агрегацию тромбоцитов и антиагрегационную активност] сосудистой стенки. - В кн.: Проблемы клинической и экспериментальной фармакологии и побочных действий лекарственных средств. Тбилиси, 1983, с. 48-49 (в соавт.).

19. Механизм действия различных ингибиторов агрегации тромбоцитов. - В ж.: Вестник АМН СССР. М. , 1984, с. 54-62 (в соавт.).

20. Перспективы регуляции функции гемостаза в трансплантологии. - В кн.: Трансплантация органов и тканей. Киев, 1985, с. 61-61 (в соавт.).

21. Ингибиторы агрегации тромбоцитов в ряду веществ, влияющи: на баланс тромбоксана А2 и простациклина. - В кн.: Противоромботи ческая терапия в клинической практике. Новое в теории, диагностик и лечении. М., 1985, с. 31-32 (в соавт).

22. Ингибиторы агрегации тромбоцитов в ряду антиангинальных ле карственных веществ. - В кн.: 1У Всесоюзный съезд кардиологов. М. 1986, с. 7 (в соавт.).

23. Исследование антагонистов Са на функцию тромбоцитов. -

ж.: Фармакология и токсикология, 1987, N 5, с. 15-18 (в соавт.).

24. Влияние аналогов и антагонистов фактора, активирующего тромбоциты, на агрегацию кровяных пластинок. - В ¡г.: Фармакология и токсикология. 1988, N 4, с. 113-123 (в соавт.).

25. Поиск новых фармакологических средств, влияющих на функциональное состояние тромбоцитов. - В кн.: Фармакология и научно-технический прогресс. Ташкент, 1988, с. 212 (в соавт.).

26. N-замещенные бензолсульфгидразиды карбоновой к-ты, проявляющие гемостатическую активность. Авторское свидетельство N 1351051, 1987 (в соавт.).

27. Поиск и изучение новых антиагрегационных веществ. - В кн.: Фарм. , токсик. природных и синтетических веществ. Минск, 1989, с. 6465 (в соавт.).

28. Поиск и экспериментальное изучение новых производных ксан-тина для лечения нарушений микроциркуляции. - В кн.: Фармакология: состояние и перспективы исследований. Харьков, 1990, с. 170 (в соавт. ).

29. Effect of novel 1,3,7-and substituted for xantines on the aggregation of platelet. - В кн.: Eur. J. Pharmacol. 1990, c. 183, 2, 337 (в соавт.).

30. Ацитиленовые соединения в качестве средств повышающих резистентность организма в эксперименте экстремальных условий. - В кн.: Факторы клеточного и гуморального иммунитета при различных физиологических и патологических состояний. Челябинск, 1990, с. 184 (в соавт.).

31. Новые аспекты фармакологического изучения кофермента А. -В кн.: Проблемы микробного синтеза витаминов и их производных. Ташкент, 1990, с. 20 ( в соавт.).

32. Исследование фармакологических свойств и некоторых пара-

метров безвредности новой комбинации эйкозаноидной природы. - В кн.: Роль эйкозаноидов в патогенезе и терапии сердечно-сосудистых заболеваний. Харьков, 1991, с. 5 (соавт.).

33. Перспективы и использование зйкозапентаеновой и докозагек-саеновой кислот как новых лекарственных средств (обзор). Хим. фарм. журнал. 1991, N 9, с. 36-42 (в соавт).

34. Фармакодинамика зйкозапентаеновой и докозапентаеновой кислот (обзор). - В кур. Фармакология и токсикология. 1991, N 3, с. 48 -54 (в соавт.).

35. Влияние ноеых производных диметилксантина и бензимидоцинэ на клеточный гемостаз. - В кн.: Физиология и патология гемостаза. Полтава, 1991, с. 83 (в соавт.).

36. Влияние новых производных ксантина на агрегацию тромбоцитов, (обзор). - В жур. Фармакология и токсикология. 1991, N 5, с. 7i -77 (в соавт.).

37. Синергизм взаимодействия эндогенных и синтетических анти-агрегационных Ееществ. - В кн.: Создание лекарственных средств. М. , 1992, с. 110.

38. Экспериментальное исследование противоаритмической активности новых соединений, регулирующих ионный об мен. - В кн.: Создание лекарственных средств. М. , 1992, с. 111-112 (в соавт.).

39. Перспективы использования полинен^сыщенных жирных кисло' для профилактики и лечения сердечно-сосудистых заболеваний. - ; кн.: Актуальные вопросы диагностики, лечения и профилактики внутренних болезней. М. , 1992, с. 225- 227 (в соавт.).

40. Фармакологические свойства КоА дисульфида. - В жур.: фармакология и токсикология. 1992,N 6, с. 45-49 (в соавт.).-""

41. Влияние КоА дисульфида на систему гемостаза. - В сб. НП "Витамины". М. , 1993, с. 93 (в соавт.).

42. Перспективы поиска новых противоаритмических средств среди соединений - доноров К - - В сб. Научная работа на кафедре как эснова творческого роста преподавателей. Волгоград, 1993, с. 40 (в :оавт.).

43. Влияние некоторых гомологов и производных пантотеновой отслоты на ацетилируюшую функцию организма и показатели клеточного ^емостаза. - Там же, с. 44 (в соавт.).

44. Фармакологическая активность эпадена - нового препарата из кира морских гидроблонтов с высоким содержанием ЭПА и ДГА. - Там ке, с. 44 (в соавт.).

45. Новые производные ксантина как антиагрегационные средства ■ В сб. докладов научной сессии, посвященной 50 РАМЕ М. , 1994, с. 59-60 (в соавт.).

46. Доклинические исследования фармакологической активности и ¡езвредности эпадена. - Там же, с. 60-61 (в соавт.).

47. Влияние новых доноров К - Мг комбинаций на сердечно-сосу-шстую систему. - Там же, с. 61 (в соавт.).

48. Влияние кофермента ацетилирования (КоА) и его предшествен-1иков на агрегацию тромбоцитов. - Там же, с. 62

49. Экспериментальное исследование антиагрегационной активнос-'и новых производных никотиновой кислоты. - Там же, с. 63 (в со-шт.) .

50. Кофермент А, его аналоги: влияние на процессы ацетилирова-глл в организме и функциональное состояние тромбоцитов. - В сб.: -временные аспекты создания, исследования и апробации лекарственных средств. - Харьков, 1995, с. 31 (в соавт.).

51. Изучение антиагрегационных эффектов новых проихводных ни-:отиновой кислоты. - Там же, с. 43-44 (в соавт.)

52. Коррекция собственной и простатландин-потенциирующей анти-

агрегационной активности производных ксантина - Там же, с. 21 ( соавт. ).

53. Доклиническая оценка фармакологической активности смешан ного глутамината калия и магния. - Ж. "Экспериментальная и клини ческая фармакология",1995, N 5 с. 17-19 (в соавт.).

54. Сравнительное исследование специфической активности и ан тиагрегационной способности новых производных пантотеновой кислоты В сб.: "Человек и лекарство". М. , 1995, с. 212 (в соавт.).

55. Влияние новых производных никотиновой кислоты на агрегаци тромбоцитов. - Там же, с. 214.

56. Влияние эпадена на плазменный и клеточный гемостаз. - Та же, с. 213 (в соавт. ).

57. Изменение функции тромбоцитов под влиянием дисульфида Кс и его интермедиантов. - В сб. 1-го Съезда фармакологов России. Boi гоград, 1995 (в печати).

58. Экспериментальное исследование влияния новых производив пантотеновой кислоты на ацетилируюиую способность организма крыс. В с£. 1-го Съезда фармакологов России, 1995 (в печати).