Автореферат и диссертация по фармакологии (15.00.02) на тему:Обоснование состава и стандартизация лекарственного препарата, содержащего изониазид и этамбутола гидрохлорид

На правах рукописи

УШАКОВА ВЕРА АЛЕКСЕВНА

ОБОСНОВАНИЕ СОСТАВА И СТАНДАРТИЗАЦИЯ ЛЕКАРСТВЕННОГО ПРЕПАРАТА, СОДЕРЖАЩЕГО ИЗОНИАЗИД И ЭТАМБУТОЛА

ГИДРОХЛОРИД

15.00.02 - ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ ХИМИЯ, ФАРМАКОГНОЗИЯ

АВТОРЕФЕРАТ ДИССЕРТАЦИИ НА СОИСКАНИЕ УЧЕНОЙ СТЕПЕНИ КАНДИДАТА ФАРМАЦЕВТИЧЕСКИХ НАУК

Работа выполнена в Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Пятигорская государственная фармацевтическая академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитою»

Научный руководитель: доктор фармацевтических наук, профессор

Компанцева Евгения Владимировна

Официальные оппоненты: доктор фармацевтических наук, профессор

Муравьева Дарья Алексеевна ГОУ ВПО Пятигорская ГФА Росздрава

Защита состоится 19 СЕНТЯБРЯ 2007 г в 9°°часов на заседании Диссертационного совета Д.208.069.01 при ГОУ ВПО Пятигорской ГФА Росздрава (357532, Ставропольский край, г Пятигорск, пр Калинина, 11)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГОУ ВПО Пятигорской ГФА Росздрава

Автореферат разослан « 2007 г

кандидат фармацевтических наук, доцент Кичев Дмитрий Геннадьевич

Северо-Кавказский, государственный технический университет

Ведущая организация:

Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Самарский государственный медининский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию»

Ученый секретарь диссертационного совета доктор фармацевтических наук, профессор

Э Ф. Степанова

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Согласно рекомевдациям Всемирной организации здравоохранения (ВОЗ) для лечения полирезистентных форм туберкулеза применяются комбинированные лекарственные препараты, содержащие два и более лекарственных веществ. За рубежом выпускаются многокомпонентные лекарственные препараты в таблетках, в состав которых входит гидразид гооникотиновой кислота (изониазид) и другие туберкулостатические лекарственные вещества. Отечественные фтизиатры применяют только зарубежные дорогостоящие лекарственные средства, что снижает их доступность для больных. В схемы профилактики и лечения туберкулеза, наряду с изониазидом включают этамбутола гидрохлорид. Это сочетание позволяет замедлить развитие устойчивых микобактерий туберкулеза Длительное и многократное применение некомбинированных лекарственных препаратов неудобно для больного, поэтому актуальной оказывается разработка отечественного лекарственного препарата с противотуберкулезной активностью, содержащего изониазид в сочетании с этамбутола гидрохлоридом.

Цель и задачи исследования

Целью настоящего исследования явилось обоснование состава и стандартизация комбинированного лекарственного препарата, включающего два лекарственных вещества, обладающих туберкулостатической активностью, с различными механизмами действия.

Для реализации постановленной цели необходимо было решить следующие задачи.

- изучить возможность использования химических и физико-химических методов анализа для идентификации изониазида и этамбутола гидрохлорида при совместном присутствии,

- исследовать возможность использования хроматографических, оптических и химических методов для количественного определения изониазида в присутствии этамбутола гидрохлорида,

- обосновать возможность создания комбинированного твердого

лекарственного препарата, содержащего изониазид и этамбутола гидрохлорид;

И

- изучить стабильность изониазида и этамбутола гидрохлорвда при совместном присутствии и установить сроки годности предлагаемого лекарственного препарата;

- подготовить проект ФСП на предлагаемый лекарственный препарат и апробировать в условиях фармацевтического производства;

— установить специфическую активность предлагаемого лекарственного препарата по отношению к изониазид-устойчивым микобактериям туберкулеза;

— определить острую и хроническую токсичность и провести сравнительную оценку некоторых фармакокинетических характеристик изониазида и этамбутола гидрохлорида в предлагаемом лекарственном препарате и таблеток изониазида и этамбутола гидрохлорида

Научная новизна

На основании изучения взаимного влияния высокомолекулярных соединений и изониазида с этамбутола гидрохлоридом обоснован выбор вспомогательных веществ для создания лекарственного препарата в форме гранул для внутреннего применения. В качестве вспомогательного вещества выбран пектин, позволяющий уменьшить высвобождение изониазида и этамбутола гидрохлорида

На основании изучения спектральных характеристик лекарственных и вспомогательных веществ, входящих в состав лекарственного препарата, предложено использование непосредственной спектрофотометрии для качественного и количественного определения изониазида в присутствии этамбутола гидрохлорида Для количественного определения этамбутола гидрохлорида обосновано использование метода экстракционной фотометрии В результате вапидационной оценки показано, что выбранные методики количественного определения изониазида и этамбутола гидрохлорида в гранулах позволят определять их при совместном присутствии

Методом ТСХ изучена хроматографическая подвижность этамбутола гидрохлорида и изониазида в растворителях различной полярности, на основании проведенных исследований обоснован выбор системы растворителей, позволяющий

разделить как ингредиенты лекарственного препарата, так и возможные продукты деструкции

Изучение скорости деструкции изониазида и этамбутола гидрохлорида показало, что этамбутола гидрохлорид подвергается деструкции раньше, чем изониазид. В связи с этим, изучение сроков годности предлагаемого лекарственного препарата проведено по продуктам деструкции этамбутола гидрохлорида Кроме того, установлены константы скорости разложения этамбутола гидрохлорида при температуре 40° и 60°С в субстанциях и предлагаемых гранулах Установлено, что на стабильность этамбутола гидрохлорида в предлагаемом лекарственном препарате оказывают влияние изониазид и вспомогательные вещества

Выбраны оптимальные условия и разработана методика определения этамбутола гидрохлорида в биологических жидкостях На основании изучения фармакокинетических параметров изониазида и этамбутола гидрохлорида в гранулах в сравнении с таблетками изониазида и этамбутола гидрохлорида, показано, что предлагаемые гранулы значительно увеличивают время нахождения лекарственных веществ в системном кровотоке

Практическая значимость результатов исследования В результате исследования разработаны и валидированы методики идентификации, определения посторонних примесей и количественного определения изониазида и этамбутола гидрохлорида физико-химическими методами Методики характеризуются простотой выполнения, высокой чувствительностью и позволяют достоверно оценивать качество изониазида и этамбутола гидрохлорида при совместном присутствии

Разработаны состав, технология и нормы качества гранул изониазида с этамбутола гидрохлоридом Результаты экспериментальных исследований использованы в подготовке нормативной документации на данный лекарственный препарат.

Установлено снижение токсичности и пролонгирование действия гранул за счет введения этамбутола гидрохлорида и пектина

Внедрение результатов исследования в практику

По результатам исследований разработаны проект фармакопейной статьи предприятия и пояснительная записка на «Изокиазид с зтамбутола гидрохлоридом, гранулы», получены акты апробации от ОАО «Тюменский химфармзавод» и ЗАО «Макго-Фарма»

Положения, выносимые на защиту

1 Результаты изучения взаимного влияния высокомолекулярных соединений и лекарственных веществ (изониазвд и зтамбутола гидрохлорид) в растворе и в твердом состоянии Итоги исследований по обоснованию состава гранул.

2 Выбор методов количественного анализа изониазида и зтамбутола гидрохлорида и результаты их применения при совместном присутствии

3 Результаты использования тонкослойной хроматографии для определения изониазида, зтамбутола гидрохлорида и продуктов деструкции при совместном присутствии

4. Результаты доклинических исследований гранул, содержащих изониазвд и зтамбутола гидрохлорид

Апробация и публикация результатов исследования

Основные положения диссертационной работы доложены на региональных научных конференциях (г. Пятигорск, 2006 и 2007 гг ) По материалам диссертации опубликовано 11 научных работ

Связь задач исследования с проблемным планом фармацевтических наук

Диссертационная работа выполнена в соответствии с планом научно-исследовательских работ ГОУ ВПО Пятигорская государственная фармацевтическая академия (номер государственной регистрации 01 2 00101060)

Объем и структура диссертации

Работа изложена на 142 страницах машинописного текста, содержит 45 таблиц, 17 рисунков, состоит из "Введения", "Обзора литературы", 4 глав собственных исследований, общих выводов, списка литературы, включающего 136

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Изучение взаимного влияния высокомолекулярных соединений и лекарственных веществ (изониазид и этамбутола гидрохлорид) в растворе и в твердом состоянии. Исследования по обоснованию состава гранул.

Объектами исследования были избраны изониазид (НД 42-11319-00) и этамбутола гидрохлорид (НД 42-8636-98) Хорошая растворимость изониазида и этамбутола гидрохлорида в воде позволяет при приеме внутрь быстро всасываться и выводиться, что делает необходимым их многократное применение Для выбора вспомогательного вещества, обеспечивающего постепенное высвобождение этих лекарственных веществ, были изучены наиболее часто применяемые высокомолекулярные соединения (ВМС), такие как поливиниловый спирт (ЛВС), поливинилпирролидон (ПВП), метилцеллюлоза (МЦ), натриевая соль карбоксиметилделлюлозы (МаКМЦ), комплексный полимерный носитель (КПН-1), jj-циклодекстрин (БЗДД), крахмал и пектин Изучали взаимное влияние вспомогательных и лекарственных веществ методом диализа через полупроницаемую мембрану и методом вискозиметрии Для этого были приготовлены композиции, содержащие лекарственные вещества ВМС в массовых соотношениях 1 0,2; 1 0,5, 11; 1*2 Широкий диапазон концентраций обусловлен возможностью использования ВМС как в больших, так и малых количествах в лекарственных препаратах Изониазид и этамбутола гидрохлорид высвобождаются из субстанций на 80% за первые 30-40 мин эксперимента, а полное их высвобождение в диализат наблюдается в течение 1ч.

При исследовании модельных смесей с БЦД, крахмалом, КПН через 120 мин наблюдалось высвобождение изониазида и этамбутола гидрохлорида в среднем на 90% Следовательно, можно предположить, что эти ВМС не будут обеспечивать постепенное высвобождение как изониазида, так и этамбутола гидрохлорида (рисунок 1)

1А 2А ЗА 4А 5А 6А

1Б 2Б ЗБ -4Б 5Б 6Б

Рисунок I — Результаты изучения степени высвобождения (%) изонназида( 1 А) и этамбутола гидрохлорида (1Ц) из комбинаций с БЦД (2А; 2Б), крахмалом (ЗА, ЗБ), 1 Ю7Н-1 (4А. 4Б), пектином (5А, 5Б), ТМаКМЦ (6А, 6Б) в соотношениях

Ц !:0,2 1 1:0,5 □ 1:1 Ц 1:2

В смеси с ЫаКМЦ и пектином в соотношениях 1:0,5 и 1:1 высвобождение изониазида за 120 мин составляет до 40% и 60% (соответственно), в го время как высвобождение этамбутола гидрохлорида составляет ДО 20% и 60%. соответствен«. Таким образом, использование пектина и МаКМЦ в качестве вспомогательного

вещества в соотношениях 1:0,5 и 1.1 в лекарственном препарате, содержащем изониазид и этамбутола гидрохлорид, может обеспечить постепенное высвобождение лекарственных веществ (рисунок 1).

Для проверки объективности наших выводов изучили влияние изониазида и этамбутола гидрохлорида на вязкость растворов ВМС, для чего в качестве критерия, выбрали степень изменения вязкости (Дц) растворов ВМС в присутствии лекарственных веществ Полученные результаты приведены в таблицах 1 и 2

Таблица 1 - Изменение вязкости Дт]-10 растворов ВМС в присутствии этамбутола гидрохлорида

ВМС+этамбутола гидрохлорид Концентрация ВМС, г/л

0,02 0,04 0,1 0,2 0,4 1,0 2,0

Крахмал 4,1 1,1 1Д 11,5 10,6 11,9 0,3

ПВП 0,6 Л <г и.о 2,0 2,0 6,-1 7.1 0,7

ПВС 0,9 6,5 279,3 280,0 284,9 285,1 291,3

КЕШ 312,4 312,6 312,9 313,5 316,8 319,9 323,8

вид 0,8 ОД 3,2 300,9 306,6 306,9 591,4

Пектин 1,9 3,4 4,1 4,3 878,4 880,4 882,2

МЦ 11,7 603,6 604,3 604,0 604,7 912,0 932,4

ИаКМЦ 604,2 610,4 612,0 708,9 883,4 889,0 907,0

Таблица 2 - Изменение вязкости Ат] 104 растворов ВМС в присутствии изониазида

ВМС+изониазид Концентрация ВМС, г/л

0,02 ' 0,04 ОД оа 0,4 1,0 2,0

ПВП 0 0 9,7 14,0 16,4 18,6 20,2

ПВС 0 0 14,8 14,1 13,2 7,4 6,1

Крахмал 0 0 4,1 17,2 237,5 291,4 325,5

БЦЦ 97,5 129,8 161,0 238,0 441,4 758,7 -

Пектин 294,5 296,3 297,7 886,7 777,2 299,3 181,2

ЫаКМЦ 13,6 16,8 324,5 602,9 1534,1 730,7 268,0

МЦ 220,1 464,8 1205,2 2610,0 1760,6 911,3 831,8

кпн 15,9 319,6 610,^ 1513,0 2397,/ 3937,0 4896,3

В эксперименте установлено, что относительная вязкость растворов ВМС во всех случаях увеличивается пропорционально росту их концентрации в растворе. Наибольшее изменение вязкости растворов ВМС в присутствии лекарственных веществ наблюдается для растворов, в которых содержание ВМС составляет 0,02 -0,2 г/л Присутствие изониазида увеличивает вязкость растворов БЦД, пектина, МЦ, NaKMH КПН в 2, 3; 11; 44, 95 раз соответственно. Этамбутола гидрохлорид увеличивает вязкость при концентрации полимера более 0,2 г/л в случае с растворами NaKMIJ, МЦ, БЦД, пектина в 1,3; 1,5, 2; 205 раз Таким образом, изониазид влияет на увеличение вязкости растворов МаКМЦ и КПН, а этамбутола гидрохлорид влияет на увеличение вязкости только растворов пектина Наблюдаемые явления, вероятно, можно связать с образованием продуктов взаимодействия «ВМС - лекарственные вещества» различного состава Проведенные исследования, как методом диализа, так и вискозиметрии, свидетельствуют о взаимном влиянии ВМС и лекарственных веществ, что необходимо учитывать при создании лекарственного препарата. В качестве вспомогательного вещества рекомендуется использовать пектин. В связи с тем, что оптимальным соотношением, позволяющим наблюдать постепенное высвобождение, является соотношение изониазид' этамбутола гидрохлорид. ВМС 1:1 1, доза на один прием будет составлять 0,45 Однако высокое содержание пектина не позволяет предлагать для такого состава таблетированную лекарственную форму. Известно, что оптимальной лекарственной формой для смесей, содержащих пектин, являются гранулы, т е твердая дозированная лекарственная форма, удобная для хранения и употребления

На основании проведённых исследований был предложен состав гранул с этамбутола гидрохлоридом и изониазидом (изониазида 0,15, этамбутола гидрохлорида 0,15, пектина 0,15). Дозировка изониазида и этамбутола гидрохлорида обсуждена с ведущими специалистами НИИ фтизиопульмонологии при 1-й ММА им М И Сеченова проф Г Б Соколовой При консультативной помощи доц JIС Кузнецовой была предложена технологическая схема, по которой получены

гранулы. Гранулы по своим технологическим характеристикам (средние результаты 6 параллельных определений) соответствовали НД (таблица 3).

Таблица 3 - Результаты определения технологических характеристик гранул

Критерии Состав

1-1:1 1 1:2

сыпучесть г/сек 10,72 7,51

угол естественного откоса, ° 33 27

прочность на истирание, % 99,1 95,2

насыпная плотность, г/см3 0,52 0,62

фракционный состав 2,0-1,0мм, % 90,5 70

распадаемость, мин 14 15

Из данных, представленных в таблице 3, следует, что гранулы с пектином в соотношении 1 1.1 обладали отлетной сыпучестью, истираемость не превышала 1,5%, насыпная плотность 0,51-0,53 г/см", фракция с размером частиц 2,0-1,0 составляла 90,0-91,0%, что дает возможность предположить достаточную точность дозирования

Количественный анализ изониазида и этамбутола гидрохлорида при совместном присутствии Следующим этапом исследований стало установление норм качества на гранулы, включающее в себя разработку методик идентификации и количественного определения входящих компонентов при совместном присутствии Для количественного определения изониазида в гранулах использовали методы УФ-спектрофотометрии и броматометрии Сравнительную валидапнонную оценку разработанных методик проводили по критериям, представленным в таблице 4

Сравниваемые методики оказались хорошо воспроизводимыми и правильными, тк рассчитанный критерий Фишера меньше табличного Однако, чувствительность спектрофотометрического метода значительно выше Методики специфичны, так как этамбутола гидрохлорид не мешает определению Д ля анализа

изониазида выбран метод спектрофото-метрического определения, как более простой в исполнении и не требующий дополнительных реактивов

Таблица 4 - Валидационная оценка методов количественного определения изониазида

Критерии Результаты

спектрофотометрия броматометрш

специфичность методика специфична методика специфична

линейность 0,0135-0,0165 мг/мл 0,06-0,08 г/в пробе

чувствительность 0,01мг/мл 0,0034 г/в пробе

прецизиозность 8=0,0030, £=±2,09% 8=0,0021; е=±1,44%

Р(РАА)табпР95%=10,97, Бвы, =1,99

точность 1>га5Р 95%=2,57 ^=¡,67,-5=0,37% 1(Р,*)таб Р95%=2„57, 1 ак„ =1,64, 6=0,34%

Количественное определение этамбутола гидрохлорида проводили по реакции взаимодействия лекарственного вещества с бромкрезоловым зеленым методом экстракционной фотометрии и тетраметрическими методами по связанной хлористоводородной кислоте Нами была проведена сравнительная валидационная оценка трех методов, использованных для анализа этамбутола гидрохлорида' аргентометрии, меркуриметрии и экстракционной фотометрии (таблица 5)

Во всех случаях рассчитанный коэффициент Стьюдента меньше табличного значения, что свидетельствует об отсутствии систематической ошибки методик анализа Рассчитанный критерий Фшжра меньше табличного, что свидетельствует о сходимости результатов Чувствительность методики, основанной на использовании экстракционной фотометрии значительно выше Несмотря на более высокую относительную погрешность и длительность выполнения анализа, данная методика была использована нами для анализа этамбутола гидрохлорида в гранулах, т к. она позволяет определять лекарственное вещество по фармакологически активной часги

молекулы. Титриметрические методы были использованы нами для определения концентрации этамбутола гидрохлорида в методе диализа.

Таблица 5 - Валидационная оценка методов количественного определения этамбутола гидрохлорида

Критерии Результаты

экстракционная фотометрия меркуриметрия аргентометрия

специфичность методика специфична методика специфична методика специфична

линейность 4,5 - 5,5 мг/мл 0,13-0,16 г/ в пробе 0,13-0,16 г/ в пробе

чувствительность 4,0 мг/мл 0,0139 г/в пробе 0,0139 г/в пробе

прецизиозность 8=0,0028, £=±2,0% 8=0,0009,е=±0,6% 8=0,0010, е=±0,7%

Р(РАА)тблР95%=10,97; Рвыч. =1,11

точность 1(Р, «та5Р 95%=2,57, 5=0,39% <Р,9табР95%=2,57, ^ выч. 8=0,54% 1(Р,0ибР95%=2,57, ^ ВЫ1!. 6=0,35%

Использование тонкослойной хроматографии для определения изониазида, этамбутола гидрохлорида и продуктов деструкции при совместном присутствии

Для изучения стабильности и установления сроков годности предлагаемых гранул необходимо установить, какой из входящих компонентов подвергается процессу деструкции в первую очередь При выборе методов контроля посторонних примесей и стабильности лекарственных веществ мы остановили свой выбор на ТСХ, позволяющей разделять гоониазид, этамбутола гидрохлорид и продукты их деструкции Предварительными опытами было установлено, что оптимальные результаты получаются при использовании готовых пластинок "Сорбфил", имеющих флуоресцентный индикатор (УФ-254)

Для разделения изониазида, этамбутола гидрохлор яда н продуктов их деструкции экспериментально подбирали системы, сочетая растворители с различной диэлектрической проницаемостью. Путем сравнительного анализа определили, что наиболее селективной для разделения является система растворителей ледяная уксусная кислота — ацетон — этанол — бензол — вода (5:5:20:70:2) (рисунок 2).

о

о сзэ

------—-------—г-

1 2 3 4 5 6

Рисунок 2 - Хром ато грамм а в тонком слое сорбента

1-расшор СО изониазида (¡0 мкг)

2-раствор СО этамбутола гидрохлорида (10 мкг)

3-раствор гидразина(0,8 мкг)

4-раствор кислоты и зон и к оти нолой (5 мкг)

5-раствор 2-аминобутаноЛй(10 мкг)

6-раствор гранул, подвергнутых термической деструкции

Сочетание этих растворителей позволило разделить гоониазид, этамбутола гидрохлорид и продукты их деструкции, так как на хроматограмме обнаружены пятна изониазида с Лг=0,55±0,05, этамбутола гидрохлорида с 1*^=0,25±0,05, а также дополнительные пятна с 11г=0,70±0,05, Л{=0,45±0,05, Кг=0,13+0,05, которые соответствуют по положению пятен свидетелей гидразина, кислоты изоникотиновой, 2-аминобутанола, соответственно Для обнаружения минимальных количеств определяемых продуктов деструкции изониазида и этамбутола гидрохлорида установили пределы обнаружения исследуемых веществ В качестве проявителей использовали УФ-свет с длиной волны 254 нм для обнаружения изониазида и изоникотиновой кислоты, 1% спиртового раствора п-диметиламинобензаяьдегида для определения гидразина и 0,2% спиртового раствора нингидрина для обнаружения этамбутола гидрохлорида и 2-аминобутанола Разработанная методика применена и для идентификации изониазида и этамбутола гидрохлорида Для определения гидразина использована методика НИ на изониазид НД 42-11319-00

Таким образом, нами была разработана унифицированная методика хроматографического разделения изониазида, этамбутола гидрохлорида и продуктов деструкции в тонком слое сорбента, позволяющая идентифицировать и контролировать стабильность гранул изониазида с этамбутола гидрохлоридом

Одним из этапов нашего исследования было изучение кинетики деструкции изониазида и этамбутола гидрохлорида при совместном присутствии Нами установлено, что первоначально деструкции подвергается этамбутола гидрохлорид В связи с этим, изучали стабильность этамбутола гидрохлорида Исследования проводили в изотермических условиях при температурах 40 и 60°С По полученным данным строили графики зависимости логарифма содержания этамбутола гидрохлорида от времени термостатирования Зависимость эта после непродолжительного периода индукции оказалось линейна, что характерно для реакций первого порядка (рисунок 3)

^сутеи

Рисунок 3 - Зависимость логарифма содержания этамбутола гидрохлорида в грану лах(1) и в субеынции(2) ог времени.

Используя уравнение Аррениуса для реакций первого порядка, рассчитали константы скорости разложения (К) дня этамбутола гидрохлорида в субстанции и гранулах для всех экспериментальных температур (таблица 6).

Таблица 6 - Константы скорости разложения (К) и сроки годности

Температура экспериментального хранения, °С Средние значения К этамбутола гидрохлорида Срок годности при 20°С,сутки

Субстанция Гранулы

40 1,15-Ю"6 0,95- 10_б 1104

60 3,75 10"6 5,30 1<Г® 1088

Среднее значение 1096 (3 года)

Нами было отмечено, что константа скорости разложения этамбутола гидрохлорида во всех изучаемых образцах возрастала с увеличением температуры в 2 и 5 раз, соответственно, т.е изониазид и технологические факторы влияют на стабильность этамбутола гидрохлорида.

Для изучения срока годности гранулы были заложены на хранение, отбор проб проводился до появления продуктов разложения этамбутола гидрохлорида Срок годности гранул был рассчитан в соответствии с требованиями «Временной инструкции по проведению работ с целью определения сроков годности лекарственных средств на основе метода "ускоренного старения" при повышенной температуре И 42-2-82» и составляет 3 года

На основании проведенных исследований в соответствии с ОСТ 91500 05 00100 от 01 03 00 разработан проект ФСП, который апробирован и включен в план развития ЗАО «Макиз-Фарма»

СПЕЦИФИКАЦИЯ

ИЗОНИАЗИД С ЭТАМБУТОЛА ГИДРОХЛОРИДОМ, ГРАНУЛЫ

Показатели Методы Нормы

Описание Визуально Гранулы желтого цвета в виде крупинок цилиндрической или неправильной формы

Подлинность - Изониазид - Изониазид - Этамбутола гидрохлорид УФ-спектрофотометрия Метод ТСХ Раствор лекарственного препарата в области от 220 до 340 нм должен иметь максимум поглощения при длине волны 266+2 нм По соответствию пятен на хроматограмме испытуемого раствора СО изониазида и этамбутола гидрохлорида

Размеры гранул ГФ XI В соответствии с требованиями

Масса содержимого упаковки ОСТ 64-492-85 В соответствии с требованиями

Время растворения ГФ XI При растворении одного пакета гранул в 100 мл кипяченой воды в течение не более 15 минут получается прозрачный раствор, слепка желтоватого цвета

Потеря в массе при высушивании ГФХЗ Не более 2 %

Посторонние примеси Метод ТСХ Количество индивидуальных примесей не более 1% в препарате Количество посторонних пятен не более 2

Свободный гидразин Метод ТСХ Не более 0,02%. Количество посторонних пятен не более 1

Микробиологическая чистота ГФ XI Категория 3 А Изменения № 3

Количественное определение - Изониазид УФ-спекгрофотометрия В одном пакете гранул должно быть от 0,135 до 0,165 г

- Этамбутола гидрохлорид Экстракционная фотометрия от 0,135 до 0,165 г

Упаковка По 0,45 г в пакет из полимерных материалов или из бумаги с полимерным покрытием 30 пакетов вместе с инструкцией по применению помещают в пачку из картона

Маркировка В соответствии с ГОСТ 14192-96

Хранение Список Б В сухом, защищенном от света месте, при температуре не выше-20°С

Срок годности 3 года

Результаты доклинических исследований гранул

Заключительный этап исследований был посвящен изучению туберкулостатической активности по отношению к десяти резистентным штаммам микобактерий туберкулеза (МБТ) человеческого типа, выделенных от больных, два из которых чувствительны к изониазиду, а остальные устойчивы. Показано, что таблетки этамбутола гидрохлорида подавляют рост только четырех штаммов МБТ Предлагаемые гранулы, содержащие оба противотуберкулезных лекарственных вещества, подавляют рост 8 штаммов МБТ Таким образом, разрабатываемые гранулы обладают туберкулостатической активностью по отношении к изониазид-устойчивым штаммам М tuberculosis в дозе 1 мкг/мл изониазида

Изучены острая и хроническая токсичность гранул Сравнительное исследование острой токсичности предлагаемых гранул и разрешенных к применению таблеток изониазида и таблеток этамбутола гидрохлорида проводили на беспородных белых мышах обоего пола массой тела 18 - 20 г Были сформированы 15 групп по 10 мышей в каждой Острую токсичность определяли по методу Беренса. Хроническую токсичность гранул определяли на беспородных белых крысах с массой тела 200-250г Хроническую токсичность гранул и лекарственных препаратов сравнения, а также фармакокинетические параметры определяли на четырех группах животных по 10 крыс в каждой. Показано, что острая токсичность гранул изониазида с этамбутола гидрохлоридом на 10% меньше токсичности изониазида. В тоже время сочетание изониазида с этамбутола гидрохлоридом и пектином способствует понижению хронической токсичности как этамбутола гидрохлорида, так и изониазида

Для определения содержания этамбутола гидрохлорида в биологических жидкостях была разработана методика с использованием метода экстракционной фотометрии по реакции образования ионного ассоциата лекарственного вещества с бромкрезоловым зеленым

Для разработанных гранул и разрешенных к применению изониазида и этамбутола гидрохлорида в таблетках были рассчитаны следующие фармакокинетические параметры кажущийся объем распределения 00» константа

элиминации (Ке1), значение общего клиренса (С1), площадь под фармакокинетической кривой (АиСоо), относительная биологическая доступность (Б), период полувыведения (1%) (таблица 7).

Таблица 7 — Фармакокинетические параметры лекарственных веществ после однократного перорального введения

Лекарственное вещество Фармакокинетические параметры

V, мл Ке1, ч-1 С1, мл/ч МЯТ, ч АиСоо, мг ч/мл Б, %

Изониазид в таблетках 637,5 0,95 605,6 0,73 0,033 38,86 100,0

Изониазид в гранулах 628,4 0,20 125,7 3,47 0,066 206,1 105,0

Этамбутола гидрохлорид в таблетках 254,0 0,13 <-> л^» 5,33 0,036 91,12 1 ЛЛ л 1 ии,и

Этамбутола гидрохлорид в гранулах 402.4 0.05 18.27 20.12 0.062 146,45 104.6

Константа элиминации изониазида и этамбутола гидрохлорида из гранул в 4,75 и 2,6 раза меньше, чем у лекарственных веществ из таблеток Период полувыведения изониазида и этамбутола гидрохлорида из гранул в 4,6 и 3,8 раза больше, чем изониазида и этамбутола из таблеток Это свидетельствует о более длительном нахождении в крови действующих веществ, высвободившихся из , гранул Площадь под фармакокинетической кривой возрастает в 5,3 и 1,6 раз для изониазида и этамбутола гидрохлорида, соответственно, что свидетельствует о том, что изониазид и этамбутола гидрохлорид в гранулах обладают пролонгированным действием

Общие выводы

1. Сравнительное изучение степени высвобождения изониазида и этамбутола гидрохлорида в сочетании с ВМС (пектин, крахмал, КПН-1, ИаКМЦ, БЦД ) методом диализа in vitro, показало, что пектин и ИаКМЦ могут обеспечить постепенное высвобождение как изониазида, так и этамбутола гидрохлорида. Обоснован состав гранул изониазид: этамбутола гидрохлорид пектин 1.1.1 и изучены их технологические характеристики

2. В результате сравнительного анализа двумя методами количественного определения для определения изониазида в сочетании с этамбутола гидрохлоридом предложен способ спектрофотометрического определения с относительной погрешностью ±2,09 % Методика специфична и не отягощена систематической ошибкой

3. Разработан способ экстракционно-фотометрического определения этамбутола гидрохлорида в присутствии изониазида б гранулах с относительной погрешностью :е2,0 % Методика специфична и не отягощена систематической ошибкой.

4. Предложена методика хроматографического разделения изониазида, этамбутола гидрохлорида и продуктов их деструкции в тонком слое сорбента, которая позволяет идентифицировать и контролировать стабильность изониазида и этамбутола гидрохлорида в гранулах

5. Рассчитаны константы скорости реакций разложения этамбутола гидрохлорида при 40°С и 60°С в гранулах, показано, что изониазид и пектин увеличивают скорость разложения этамбутола гидрохлорида. Методом «ускоренного хранения» установлен срок годности 3 года для гранул изониазида с этамбутола гидрохлоридом

6. На 10 штаммах изониазид-устойчивых МБТ показано, что гранулы обладают туберкулостатической активностью по отношении к изониазид-устойчивым штаммам М tuberculosis в дозе 1 мкг/мл в пересчете на изониазид.

7. В опытах на животных определена острая токсичность гранул изониазида и этамбутола гидрохлорида, LD50 составила 409,5 мг/кг, что в 1,1 раза ниже LD50 изониазида Показано, что сочетание изониазида с этамбутола гидрохлоридом и пектином способствует понижению хронической токсичности как этамбутола гидрохлорида, так и изониазида

8. Сравнительное изучение фармакокинетических параметров изониазида в таблетках и этамбутола гидрохлорида в таблетках и предложенных гранулах показало, что предлагаемый состав гранул увеличивает нахождение лекарственных веществ в системном кровотоке

СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ ПО ДИССЕРТАЦИИ

1 Перспективы использования полимеров при создании новых

т/л» f^HTi uii/\Ti<a 1» il1» rv лат/опл<гпоттт тлг пи аттлопт/чп глгттчоттттч ттолггтт'лтиттл'плй

лишуишпридап пшл jivAupv iovuhoia ируиирихид i дц^и^пди ыоигшли ниаиоиы

кислоты // Химия в интересах устойчивого развития. (Новосибирск, СО РАН) -2006 -Т.14 - №3 -С. 271-276 (Соавт Овчаренко Л П, Компанцева Б В )

2 Обоснование состава и антимикробная активность гранул, содержащих изониазид и этамбутола гидрохлорид // Вестник Волгоградского государственного медицинского университета - 2006. - №1(17). - С. 55 - 59 (Соавт. Овчаренко Л.П., Компанцева Е В., Кузнецова ЛС ).

3 Изучение взаимодействия этамбутола гидрохлорида с различными высокомолекулярными соединениями // Пути и формы совершенствования фармацевтического образования материалы Всерос науч -метод конф. «Фармобразование - 2005» (2; 20-22 алр 2005; Воронеж) - Воронеж, 2005 - С 342-343 (Соавт Компанцева Е В., Овчаренко Л.П.)

4 Изучение взаимодействия изониазида с различными высокомолекулярными соединениями // Современные проблемы фармакологии и фармации материалы Всерос науч-практ конф (18-19 мая 2005, Новосибирск)-Новосибирск, 2005 - С 326-328. (Соавт Овчаренко Л П., Израилова Г Г, Компанцева Е В , Соловей H В )

. 22

5. Изучение влияния полимеров на степень фармацевтической доступности изониазида и этамбутола гидрохлорида. Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции: сб. науч тр.// ПятГФА Вып.61. -Пятигорск, 2006. - С. 265-267. (Соавт. Овчаренко JI П., Компанцева Е.В.)

6. Разработка методик количественного определения изониазида и этамбутола гидрохлорида при совместном присутствии Там же. - 2006. - С. 267-269 (Соавт Овчаренко Л.П.).

7. Разработка методик контроля чистоты и стабильности этамбутола гидрохлорида и изониазида в гранулах // От производителя до аптеки и потребителя- материалы Аптечного форума - М, 2007. - С. 79-80. (Соавт Компанцева Е.В., Овчаренко Л.П.).

8. Разработка состава гранул, содержащих изониазид и этамбутола гидрохлорид Там же. - 2007. - С. 117-118

9. Использование тонкослойной хроматографии для анализа этамбутола гидрохлорида и изониазида в гранулах. Разработка, исследование и маркетинг новой фармапевтической продукции: сб науч тр// ПятГФА. Вып.62. -Пятигорск, 2007. - С. 338-340. (Соавт. Овчаренко JIП, Компанцева Е.В.).

10 Изучение стабильности этамбутола гидрохлорида и изониазида в гранулах // Пути и формы совершенствования фармацевтического образования. Создание новых физиологически активных веществ: материалы Всерос науч.-метод. конф. (3; 22-24 март. 2007, Воронеж). - Воронеж, 2007. - С 253-255. (Соавт. Овчаренко Л.П, Компанцева Е.В.).

11 .Обоснование состава гранул, содержащих изониазид и этамбутола гидрохлорид // Человек и лекарство- тез докл. 13 Рос. нац. конгресса 3-7 апр. 2006 г. - М., 2006- С 567. (Соавт. Овчаренко Л.П, Компанцева Е.В, Кузнецова Л С.).

УШАКОВА ВЕРА АЛЕКСЕЕВНА

ОБОСНОВАНИЕ СОСТАВА И СТАНДАРТИЗАЦИЯ ЛЕКАРСТВЕННОГО ПРЕПАРАТА, СОДЕРЖАЩЕГО ИЗОНИАЗИД И ЭТАМБУТОЛА

ГИДРОХЛОРИД 15.00.02 - ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ ХИМИЯ, ФАРМАКОГНОЗИЯ

АВТОРЕФЕРАТ ДИССЕРТАЦИИ НА СОИСКАНИЕ УЧЕНОЙ СТЕПЕНИ . КАНДИДАТА ФАРМАЦЕВТИЧЕСКИХ НАУК

Подписано к печати - .2007 Формат бумаги 60x84 1/16

Бумага книжно-журнальная. Печать -ротопринтная. Усл. печ. л. 1,0 Тираж 100 экз Заказ № /055

Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Пятигорская государственная фармацевтическая академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию» (357532, Ставропольский край, г. Пятигорск, пр Калинина, 11)