Автореферат и диссертация по медицине (14.00.27) на тему:Коррекция острой печеночной недостаточности аллотрансплантацией гепатоцитов в эксперименте
- Ученая степень
- кандидата медицинских наук
- ВАК РФ
- 14.00.27
Оглавление диссертации Сапин, Кирилл Анатольевич :: 2005 :: Воронеж
ВВЕДЕНИЕ.
ГЛАВА I ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.
1.1 История исследования гепатоцитов.
1.2 Методы замещения функций печени.
1.3 Методы получения изолированных гепатоцитов.
1.4 Условия инкубирования изолированных гепатоцитов.
1.5 Морфологические критерии жизнеспособности изолированных гепатоцитов.
1.6 Биохимические критерии жизнеспособности изолированных гепатоцитов.
1.7 Механизм действия изолированных гепатоцитов.
1.8 Методы использования изолированных гепатоцитов.
ГЛАВА II МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.
2.1 Методика выделения клеток.
2.2 Методика культивирования.
2.3 Методика определения функции клеток.
2.3.1 Методика определения глюкозы.
2.3.2 Методика определения мочевины.
2.3.3 Методика определения креатинина.
2.4 Методика гистологического исследования.
2.5 Методика затравки животных CCU.
2.6 Методика трансплантации изолированных гепатоцитов.
2.7 Методика исследования места трансплантации.
2.8 Статистическая обработка полученных данных.
ГЛАВА III РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.
3.1 Морфологические критерии жизнеспособности изолированных гепатоцитов.
3.2 Биохимические критерии жизнеспособности изолированных гепатоцитов.
3.2.1 Глюкозоутилизирующая функция.
3.2.2 Дезинтоксикационная функция.
3.3 Динамика биохимических изменений трансаминаз крови крыс в процессе наблюдения.
3.4 Динамика морфологических изменений в процессе наблюдения.
3.4.1 Динамика гистологических изменений печени крыс в процессе наблюдения.
3.4.2 Динамика цитологических изменений места пересадки изолированных гепатоцитов.
ГЛАВА IY ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ.
ВЫВОДЫ.
Введение диссертации по теме "Хирургия", Сапин, Кирилл Анатольевич, автореферат
Актуальность проблемы.
Отравления грибами или химическими соединениями, хирургический сепсис (полиорганная недостаточность), разлитые перитониты или обширные ожоги несмотря на множество этиологических факторов и разные пусковые механизмы, большинство из этих патологий ведут к нарушению функции печени, вплоть до развития острой печеночной недостаточности^ Чудных С.М., Соловьев Н.А., Иванов Ю.В.; 2000; Бельков А.В., 2000; Блюгер А.Ф., Новицкий И.Н., 1984). Коррекция печеночной недостаточности осуществляется применением экстракорпоральной детоксикации (лимфодренаж, лимфосорбция, плазмаферез), гипербарической оксигенации, ультрафиолетового облучения крови(Парфенов И.П.,2000).
Однако эффективность предложенных методов консервативного и оперативного лечения ОПН невелика и поэтому летальность при возникновении тяжелых форм достигает 70-90% .( Habibullah С.М .,1992; Шерлок Ш., Дули Дж.,2002).
Применение изолированных гепатоцитов ГЦ в коррекции печеночной недостаточности еще недостаточно изучено(Рябинин В.Е.,2002). Первые исследования по эффективности подключения цельной печени к животным и больным, страдающим печеночной недостаточностью различного генеза и степени выраженности, показали, что несмотря на обнадеживающие результаты, в донорской печени сложно обеспечить циркуляцию крови в течение необходимого периода. Это связано с быстро наступающей блокадой оттока, обусловленной гипоксическим отеком паренхимы (Шумаков В. И., и соавт., 1995) В дальнейшем были предприняты попытки использования фрагментов и тонких срезов печени с определенной долей успеха( Писаревский А. А. с соавт., 1980 ; Цыпин А.Б. с соавт., 1984 , 1986 , Маргулис М.С. с соавт., 1990 ; Шумаков В.И. с соавт., 1990; Eiseman В. et al., 1976; Brems S. et al., 1990; Hase Т., 1990;
Flendring L. M. et al., 1995 ; KoiKe M. et al., 1995; Miwa J. et al ., 1995 ; Myret Elcin J., 1995).
Оценка функциональных свойств фрагментов печени (в инкубационной системе) отчетливо показала их высокую метаболическую способность к синтезу мочевины, аминокислот, катехоламинов и детоксикации; это определило дальнейший путь развития проблемы.
Примечательно, что в печени огромное количество функций выполняется только одним типом - паренхиматозными клетками или гепатоцитами. Они составляют подавляющее большинство в весовом отношении ( 90 - 95 % от веса всех клеток печени ) и 2 / 3 общего объема всей клеточной популяции. (Арзуманов В.С с соавт., 1988; Маргулис М.С с соавт., 1990; Шумаков В.И., Арзуманов B.C., 1990; Пашков А.Н., 2003; Malscheslcy P. S et al., 1988).Эта относительная морфологическая гомогенность печени, так же как и связь гепатоцитов с органоспецифической ее функцией, делает очень выгодным использование паренхиматозных клеток в качестве модельной системы для исследования самых различных вопросов биохимического, биофизического, фармакологичекого и физиологического профиля (Арзуманов В.С с соавт., 1988; Маргулис М.С. с соавт., 1990; Шумаков В.И., Арзуманов B.C., Онищенко Н.А. и др., 1990; Malschesky P. S et al., 1988).
Функциональная поддержка печени с использованием аллогенных изолированных гепатоцитов, вводимых в организм различными способами, в настоящее время начинает использоваться в некоторых клиниках при коррекции острой печеночной недостаточности, спровоцированной различными заболеваниями (Тимербулатов В.М., 2005; Писаревский А.А.,1985; Гальперин Э.И.,2003; Шиманко И. И., 1989., Шумаков В. И. с соавт., 1985; Nose Y.,1989).
Цель исследования- оценить эффективность коррекции острого токсического повреждения печени путем аллотрансплантации выделенных и изолированных гепатоцитов (ИГ)
Задачи исследования.
1. Разработать методику получения изолированных гепатоцитов из печени крыс.
2. Основываясь на морфологических и биохимических тестах доказать жизнеспособность выделенных и изолированных гепатоцитов.
3. Разработать метод аллотрансплантации ИГ в брюшную полость.
4. Сравнить и оценить биохимические изменения в организме затравленного животного при острой печеночной недостаточности под влиянием аллотрансплантации культуры изолированных гепатоцитов и без нее.
5. Выяснить закономерности изменения морфологической картины печени при остром токсическом повреждении в условиях аллотрансплантации культуры изолированных гепатоцитов и без нее.
Научная новизна.
1. Обоснованы оптимальные режимы выделения изолированных гепатоцитов. Подвергая печень трехэтапной перфузии раствором фосфатного буфера с лидазой, гепарином, хлоридом кальция, получаем ИГ общим количеством 500-800 млн. (количество клеток зависит от размеров перфузируемой печени).
2. Доказана жизнеспособность выделенных и изолированных гепатоцитов на основании биохимических и морфологических тестов. Морфологический контроль, включая первый и второй морфологические тесты, показал, что изолированные интактные гепатоциты имели ту же ультраструктуру, что и паренхиматозные клетки печени в организованной ткани. Они имели округлую форму, с центральным ядром; четко ограниченную плазматическую мембрану с микроворсинками, играющими существенную роль в гормональном ответе клетки; большое количество цитоплазмы, насыщенной хорошо сохраненными органеллами. Второй морфологический тест показал способность клеток взаимодействовать с гранулами сефадекса, образуя комплексы клеток. Доказано, что до 72 часов гепатоциты способны осуществлять глюкозоутилизирующую и дезинтоксикационную функции.
3. Впервые разработанная нами техника аллотрансплантации изолированных гепатоцитов в брюшную полость позволила сохранить жизнеспособность гепатоцитов в течении 24 суток . Трансплантация выполнялась в искусственно созданную полость между брыжейкой тонкой кишки и сальником.
4. На основании морфо-функциональной оценки установлена эффективность аллотрансплантации выделенных и изолированных гепатоцитов для коррекции острой печеночной недостаточности в начальный период. Это доказано морфологическими исследованиями -печени в разные сроки от момента операции (количество поврежденных клеток в группе прооперированных было значительно меньше, чем в контрольной группе), биохимическими исследованиями — исследовался уровень трансаминаз в разные сроки от момента затравки и операции.
5. Высказаны новые предположения о влиянии аллотрансплантированных изолированных гепатоциов на дезинтоксикационные и пролиферативные процессы в печени при ее остром токсическом повреждении. Влияние на пролиферативные процессы в печени рассматривались через влияние гепатоцитов на систему кейлон-антикейлон и стимуляции баллотирующего пула.
Практическое значение работы.
Усовершенствована методика выделения культуры изолированных гепатоцитов, позволяющая получать материал с жизнеспособностью до 72 часов.
Предложен новый способ аллотрансплантации изолированных гепатоцитов в брюшную полость (подана заявка на изобретение). Разработана техника аллотрансплантации ИГ в брюшную полость. Установлено положительное влияние аллотрансплантированных гепатоцитов на начальный период острого поражения печени.
Апробация работы.
Материалы диссертации доложены на заседании общества хирургов (г.Воронеж 2005 г.), на Международной конференции хирургов гепатологов (г. Москва 2003 г.) Публикации.
По теме диссертации опубликовано 5 печатных работ. Подана заявка на изобретение.
Положения выносимые на защиту.
1. Усовершенствование способа выделения изолированных гепатоцитов позволяет получить культуру клеток функционирующих до 72 часов.
2. Аллотрансплантация выделенных и изолированных гепатоцитов в брюшную полость является способом коррекции острой печеночной недостаточности на ранних этапах заболевания.
3. Введение культуры изолированных гепатоцитов способствуют «разгрузке печени», влияет на регенерацию поврежденного органа, ускоряя пролиферацию клеток и стимулируя митоз клеток в пораженной печени. Структура и объем работы.
Диссертация состоит из введения, обзора литературы, главы о материалах и методах исследования, главы собственных результатов, заключения, выводов, практических рекомендаций, указателя литературы. Работа изложена на 115 страницах машинописного текста, иллюстрирована 4 таблицами и 50 рисунками. Библиография включает 183 источника, из них 66 отечественных и 117 иностранных.
Заключение диссертационного исследования на тему "Коррекция острой печеночной недостаточности аллотрансплантацией гепатоцитов в эксперименте"
6 Результаты исследования позволяют рекомендовать применение культуры выделенных и изолированных гепатоцитов для коррекции острой печеночной недостаточности в клинических условиях.
ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ
1 Для получения культуры изолированных гепатоцитов целесообразно применять комбинированный метод перфузии с введением раствора лидазы, хлористого кальция, гепарина в фосфатном буфере в v.portae и с последующим механическим измельчением материала вручную под контролем зрения.
2 Конечным этапом выделения клеток для последующей трансплантации является получение изолированных гепатоцитов общим количеством 300500 млн. Количество полученных клеток зависит от размеров печени.
3 Оптимальным для перфузии клеток печени является среда с рН 7,4.
4 Трансплантация выделенных гепатоцитов осуществляется в изолированную полость, между прядью большого сальника и кишечной аркадой(тонкая кишка с брыжейкой тонкой кишки) .При формировании полости для имплантации гепатоцитов использовалась нить 4-0 TI-CRON.
5 В сформированную полость имплантируется изолированные гепатоциты в среде Игла из расчета 2,5-3 млн. в 1 кубическом миллилитре. Общее количество имплантированных гепатоцитов составляет 7,5-8 млн. клеток.
Список использованной литературы по медицине, диссертация 2005 года, Сапин, Кирилл Анатольевич
1. Автандилов Г.Г., Невзоров В.П., Невзоров О.Ф. Системный стереометрический анализ ультраструктур клеток.- М.:Медицина, 1984.-168 с.
2. Алиев М.А., Островерхов Т.Е., Бруслик В.Г. и др. Способ трансплантации изолированных клеток печени при печеночной недостаточности // Здравоохр. Казахстана.- 1984.- № 12.- С.15-19.
3. Апарцин К.А., Гольдберг О.А. Структурные аспекты регенерации ткани селезенки при аутотрансплантации у человека в условиях хирургической инфекции // Проблемы экспериментальной и клинической лимфологии: Материалы науч. конф. Новосибирск, 1994. - С.
4. Бельков А.В. Острая печеночная недостаточность. М.-2003
5. Бекаури М.А., Чумбуридзе Р.А., Кипиани Л.Г. и др. Криоконсервирование гепатоцитов щенков и собак // Успехи современной криобиологии.- Харьков, 1992.-С. 16-17.
6. Берелавичус В.Ю., Бруслик В.Г., Малюгин Э.Ф. и др. Перитонеальный диализ взвесью печеночных клеток в лечении гепатоцеллюлярной недостаточности // Экспериментальные основы лечения печеночной недостаточности.- М.,1975. С.134-139.
7. Блюгер А.Ф., Крупникова Э.З. Принципы лечения болезней печени // Основы гепатологии.- Рига, 1975.- С. 191-224.
8. Блюгер А.Ф., Новицкий И.Н. Практическая гепатология.- Рига, 1984.452 с.
9. Бондаренко В. А., Бондаренко Т.П., Руденко С.В. Развитие и предупреждение температурного шока клеток //Успехи современной криобиологии.- Харьков, 1992.- С.21-22.
10. Боровиков В.П.,Боровиков И.П. STATISTICA Статистический анализ и обработка данных в среде Windows .-М.:Информационно-издательский дом "Филинъ", 1997.- 608 с.
11. Бояджиян X., Бакалова Р.С. Микрометод количественного определения фибриногена// Лабор. дело.-1982.-№5.-С. 192-197.
12. Бродский И.Я. Трофика клетки.- М.:Наука, 1966,- 355 с.
13. Бруслик В.Г., Логинов А.С., Сперанский М.Д. и др. Способы применения изолированных гепатоцитов для лечения острой печеночной недостаточности//Вестн. РАМН. -1994.-N5. С. 8-14.
14. Вишневская Е.К. Клетки синусоидных сосудов печени//Морфология. 1993. - Т. 104, №3-4. - С. 135-147.
15. Вредные вещества в промышленности / Под ред. Н.В. Лазарева , Н.Э. Левиной. Л .: Химия, 1976. - Ч. I. - 456 с.
16. Гальперин Э.И., Семендяева М.И.,Неклюдова Е.А. Недостаточность печени.-М.Д 970.- 241с.
17. Гальперин Э.И., Карагюлян С.Р. Методы лечения острой печеночной недостаточности // Трансплантация органов и тканей: Сб. обзоров.- М.Д 984.Т. 11.-С.5-70.(Итоги науки и техники. Сер. Морфология человека и животных, антропология).
18. Гичев Ю.П., Григорьев Ю.А. Метод органной культуры печени в комплексной диагностике хронических гепатитов и циррозов печени // Сов. мед.- 1982.-N2.- С.67-72.
19. Говалло В.Н. Трансплантация тканей в клинике. -М.,1979.- 288 с.
20. Голубев Д.Б., Соминина А.А., Медведева М.Н. Руководство по применению клеточных культур в вирусологии.- Л.: Медицина, 1976. 224 с.
21. Давидик Г.С., Дзизинский А.А. Экстракты эмбриональной печени в комплексной терапии хронических гепатитов и циррозов печени //Вопросы патогенеза и терапии органосклерозов.- Новосибирск, 1967.- С.373-378.
22. Давидик Г.С.,Проскурякова И.С., Якобсон Г.С. О влиянии экстракта эмбриональной гомологичной ткани печени на течение экспериментального цирроза печени // Вопросы патогенеза и терапии органосклерозов.-Новосибирск, 1967.- С.379-382.
23. Дузу П. Криобиохимия.-М.:Наука, 1980.-176 с.
24. Иммунологические методы исследований.: Пер. с англ. / Под ред. И. Лефковитса. М.: Мир, 1988.- Вып.3.-123 с.
25. Искусственные органы / Под ред. В.И. Шумакова.- М.: Медицина, 1990.- 272 с.
26. Катинас Г.С., Полонский Ю.З. К методике анализа количественных показателей в цитологии //Цитология.- 1970.- №.3.- С. 399-403.
27. Климанский В.А., Рудаев Я.А. Трансфузионная терапия при хирургических заболеваниях.- М.: Медицина, 1984.- 256 с.
28. Криоконсервирование клеточных суспензий / Под ред. А.А. Цуцаевой.- Киев, 1983.- 65 с.
29. Кулаков В.И., Сухих Г.Т., Молнар Е.М. Трансплантация фетальных тканей человека: анализ состояния проблемы и перспективы развития // Трансплантация фетальных тканей и клеток человека.- М., 1996.- С.5-9.
30. Культура животных клеток. Методы: Пер. с англ./ Под ред. Р.Фрешни.-М.:Мир, 1989.- 333 с.
31. Лаврик С.С., Когут Г.И. Криоконсервирование суспензии клеток фетальной печени для клинического применения // Врач, дело.- 1990.- №1.-С. 90-92.
32. Леонов В.П., Ижевский' П.В. Об использовании прикладной статистики при подготовке диссертационных работ по медицинским и биологическим специальностям. // Бюлл. ВАК . 1997.- Вып.З.- С. 56-61.
33. Лечение печеночной недостаточности методами трансплантации и экстракорпорального подключения печени и других тканей: (биологические и клинические аспекты ). / Под общ. ред. В.И. Шумакова, Н.А. Онищенко.-М., 1994.-142 с.
34. Лимфоциты. Методы: Пер. с англ./ Под ред. Дж. Клауса.- М.: Мир, 1990.- 250 с.
35. Лиознер Л.Д. Новое в учении о регенерации.- М.:Медицина, 1971.- 358 с.
36. Лобынцева Г.С., Вотякова И.А. Особенности процесса криоконсервирования эмбриональных гемопоэтических клеток человека //
37. Успехи современной криобиологии.-Харьков,1992.-С. 101-102.t
38. Лурия Е.А. Кроветворная и лимфоидная ткань в культурах.- М.: Медицина, 1972.- 176 с/
39. Мазур С.П., Росляков А.Д., Грищук В.П. и др. Функция гепатоцитов после быстрого двухэтапного замораживания и отогрева под защитой ДМСО //Успехи современной криобиологии.- Харьков, 1992.- С. 108-144.
40. Малюгин Э.Ф., Бруслик В.Г. Способ детоксикации организма в эксперименте // Острая печеночная недостаточность в клинике и эксперименте.- Рига, 1977.-С. 94-101.
41. Маргулис М.С., Ерухимов Е.А., Андрейман Л.А. и др. Применение гемоперфузии через взвесь криоконсервированных гепатоцитов при острой печеночной недостаточности //Вестн. хир.- 1992.- №1.- С. 83-88.
42. Мур Ф. История пересадки органов /Пер. с англ.- М.,1973.- 263 с.
43. Мусселиус С.Г., Васина Н.В., Гладких Л.В. Применение ксеногенных лиофилизированных гепатиоцитов в лечении острых и хронических заболеваний печени // Анестезиология и реаниматология 1998. - №6. — С. 49-53.
44. Основы гепатологии /Под ред. А.Ф.Блюгера Рига: Звайгзне, 1975.470 с.
45. Островерхов Г.Е., Бруслик В.Г., Малюгин Э.Ф. Использование перитонеального диализа в лечении печеночной недостаточности // Бюлл. экспер. биол. И мед.- 1978.- N3.-C.281-283.
46. Островерхов Г.Е., Берелавичус В.Ю., Бруслик В.Г. и др. Перитонеальный диализ взвесью аллогенных клеток печени в лечении печеночной недостаточности // Хирургия.- 1979.-N3.- С. 41-46.
47. Пашков А.Н., Кошелев П.И., Сапин К.А. Культивирование гепатоцитов на твердом носителе //Материалы международной конференции хирургов гепатологов.-М.,2003 .с.65
48. Подымова С.Д. Болезни печени.-М.Медицина, 1993.- 480 с.
49. Парфенов И.П. Автореферат диссертации.-Воронеж , 2000.
50. Пашков А.Н.,//Журнал теоретической и практической медицины.-2005.-Т.З,№4.-С.417-425
51. Пашков А.Н. Способ выделения изолированных гепатоцитов/А.Н.Пашков, П.И.Кошелев, //Журнал теоретической и практической медицины.- 2005.-Т.З,№4.- С.-426-432.
52. Рябинин В.Е. Использование методов клеточной терапии при лечении печеночной недостаточности М.-2002г
53. Сапин К.А. Методика культивирования клеток печени на искусственной среде / К.А.Сапин // Материалы межрегиональной студенческой конференции .-Воронеж, 2003.-С 253-254.
54. Томази Г. Гистохимия: Пер. с англ.- М.: Колос, 1964.-245 с.
55. Темербулатов В.М. Материалы международной конференции хирургов гепатологов.-Ташкент, 2005.
56. Ультраструктурная патология печени: Электронно- микроскопический атлас / Под ред. А.Ф.Блюгер, В.К. Залцмане, О.Я.Карташовой Рига: Зинатне, 1989.-315 с.
57. Уманский B.C., Зимина J1.H. Перспективы применения клеточного гемодиализа в клинике // Трансплантация органов и тканей. -Тбилиси, 1982.-С.204-206.
58. Федорова З.Д., Котовщикова М.А. О роли эритроцитов в гемокоагуляции и тромбообразовании // Успехи совр. биол.-1982.-Т.94, Вып.З, №6.- С.393-404.
59. Федорова З.Д., Котовщикова М.А., Бессмельцев С.С. Экспресс-метод определения вязкости эритроцитов // Лабор.дело.- 1988.- №2.- С. 29
60. Фишер А. Физиология и экспериментальная патология печени. -Будапешт, 1961.- 230 с.
61. Хлыстова З.С. Закономерности превращения тканей в условиях их трансплантации //Бюлл. экспер. биол. и мед.- 1994.-N.4.- С. 341-348.
62. Чудных С.М., Соловьев В.А., Иванов Ю.В. Лечение и профилактика печеночной недостаточности.-М.,2000.
63. Шерлок IIL, Дули Дж. Заболевания печени и желчных путей. М.-2002. с.864
64. Шумаков В.И., Гальперин Э.И., Неклюдова Е.А. Трансплантация печени.- М.Медицина, 1981.- 196 с.
65. Экспериментальная патология печени . / Под ред. И.Д. Мансуровой . -Душанбе, 1973.- Вып.1.- 228 с.
66. Эрайзер Т.Л.,Гринберг К.Н.,Ворсанова С.Г. Характеристика эмбриональных гепатоцитов человека, культивируемых in vitro // Бюлл. экспер. биол. и мед.- 1975.-N 5.- С.123-125.
67. Andreoletti М., Pages J.C., Mahieu D. et al. Preclinical studies for cell transplantation: isolation of primate fetal hepatocytes, their cryopreservation, and efficient retroviral transduction // Hum. Gene Ther. 1997. - Vol. 8, №3. - P. 267-274.
68. Arkadopoulos N., Lilja H., Suh K.S. et al. Intrasplenic transplantation of allogeneic hepatocytes prolongs survival in anhepatic rats // Hepatology. 1998. -Vol. 28, №5. - P.1365-1370.
69. Baffy G., Yang L., Michalopoulos G.K., Williamson J.R. Hepatocyte growth factor induces calcium mobilization and inositol phosphate production in rat hepatocytes // J. Cell Physiol. 2000. - Vol. 153, №2. - P. 332-339.
70. Bauer G., Lengyel G., Thung S.N. et al. Human fetal hepatocytes respond to inflammatory mediators and excrete bile // Hepatology.- 1991.- Vol.13.- P. 1131-1141.
71. Berry M.N., Friend D.S. High-yeld preparation of isolated rat liver parenchimal cells: a biochemical and fine structural study // J. Cell Biol.-1969.-Vol.43.-P. 506-520
72. Birraux J., Genin В., Sinigaglia C. et al. Does hepatocyte transplantation in a chemically induced acute hepatic failure make sense? // Europ. J. Pediatr. Surg.- 2002. Vol. 8, №4. - P. 224-229
73. Boks A.L., Brommer E.J., Schalm S.W., Van Vliet H.H. Hemostasis and fibrinolysis in severe liver failure and their relation to hemorrhage // Hepatology.- 1986: Vol. 6, №1. - P. 79-86.
74. Bonney R.J., Becher J.E., Walker P.R., Potter V.R. Prymary monolayer cultures of adult rat liver parenchymal cells suitable for study of the regulation of enzyme synthesis // In Vitro.- 1974.- № 9.- P. 399-413.
75. Bosman D.K.,de Haan J.G.,Smit J. et al. Metabolic activity of microcarrier attached liver cells after intraperitoneal transplantation during severe liver insufficiency in the rat // J. Hepatol.- 1989.- Vol.9.- P.49-58.
76. Butler W.H. Experimental liver injury // Pathology of the liver .- New York., 1979,- P. 55-67.
77. Cai Z.,Shi Z., Sherman M.,Sun A.M. Development and evaluation of a system of microencapsulation of primary rat hepatocytes // Hepatology.- 1989.-Vol.10.-P. 855-860.
78. Clement В., Fremond В., Joli A. et al. A step towards a bioartificial liver: temporary extracorporeal replacement using isolated hepatocytes // Bull.Acad.nat. Med.-1996.- Vol.180, №7.- P.1753-63.
79. Dabeva M.D., Hwang S.G., Vasa S.R. et al. Differentiation of pancreatic epithelial progenitor cells into hepatocytes following transplantation into rat liver // Proc. Natl .Acad. Sci. USA.- 1997. Vol. 94, №14. - P. 7356-7361.
80. Dalen H., Todd P. Surface morphology of trypsinized human cells in vitro // Exp. Cell Res.- 1971.- Vol.66.- P. 353-362.
81. Darby H.,Gupta S., Johnstone R. et al. Observation on rat spleen reticulum during the development of syngeneic hepatocellular implants // Brit.J. exp. Pathol.- 1986.-Vol. 67.-P.329-339.
82. Demetriou A.A., Levenson S.M., Novikoff P.M. et al. Survival, organization and function of microcarrier-attached hepatocytes transplanted in rats // Proc. nat. Acad. Sci. USA.- 1986.- Vol.83.- P. 7475-7479.
83. Demetriou A.A., Whiting J.F.,Feldman D. et al. Replacement of livertfunction in rat by transplantation of microcarrier-attached hepatocytes //Science.-1986.-Vol. 233.-P. 1190-1192.
84. Demetriou A.A.,Whiting J., Levenson S.M. et al. Alternatives to liver transplantation // Gastroenterology.- 1987.- Vol. 92, N 2. P. 548-553.
85. Demetriou A., Reisher A., Sanchez J. et al. Transplantation of microcarrier-attached hepatocytes into 90% partially hepatectomized rats // Hepatology 1988.-Vol.8.- P. 1006-1009.
86. Derby H., Selden C., Hodgson H.G. Prolonged survival of cyclosporine-treated allogeneic hepatocellular implants // Transplantation.- 1986.- Vol.42. P. 325- 326.
87. Dixit V., Arthur M., Gitnich G. Repeated transplantation of microencapsulated hepatocytes for sustained correction of hyperbilirubinemia in Gunn rats //Cell Transplant.- 1992.- Vol.1.- P.275-279.
88. Dixit V., Piskin V., Arthur M. et al. Hepatocyte immobilization on PHEMA microcarriers and its biologically modified forms // Cell Transplant.-1992.-Vol. 1.- P. 391-399.
89. Dixit V., Darvasi R., Arthuer M. et al. Cryopreserved microencapsulated hepatocytes transplantation studies in Gunn rats // Transplantation.- 1993.-Vol.554- P.616-622.
90. Fausto N., Webber E.M. Liver regeneration. //The Liver : Biology and Pathobiology.- 3rd ed. / Ed. I.M. Arias, J.L. Boyer, N. Fausto, W.B. et al. -3rd ed .New York: Raven Press, Ltd, 1994. P. 1059-1084.
91. Fontaine M., Schloo В., Jenkins R. et al. Human hepatocyte isolation and transplantation into an athymic rat, using prevascularized cell polymer constructs // J. pediatr. Surg.- 1995- Vol.30,№1.- P. 56-60.
92. Freise C.E., Liu Т., Ascher N.L. et al. Hepatotoxins and liver transplantation decrease pulmonary metastases in rats with hepatoma // J. surg. Res.- 2002.- Vol.64, №2.- P. 198-202.
93. Fremond В., Joly A., Desille M. et al. Cell-based therapy of acute liver failure: the extracorporeal bioartiflcial liver // Cell Biol. Toxicol. 1996. — Vol. 12, №4-6.-P. 325-329.
94. Gandhi C.R., Kuddus R., Subbotin V.M. et al. A fresh look at augmenter of liver regeneration in rats // Hepatology. 2000. - Vol. 29, №5. - P. 1435-1445.
95. Gebhardt R., Jirtle R., Moorman A.F. et al. Induction of glutamine synthetase and transient coexpression with carbamylphosphate synthetase in hepatocytes transplanted into fat pads of syngeneic host // Histochemistry.- 1989.-Vol. 92,- P. 337-342.
96. Andereggen E., Rubbia Brandt L. et al. Improvement of the effect of hepatocyte isograft in the Gunn rat by cotransplantation of islets of Langerhans // J. pediatr. Surg.- 1999.- Vol. 34, №2.- P. 321-324
97. Gerschenson L.E., Casanello D. Metabolism of rat liver cells cultured in suspension, insulin and glucagon effects on glycogen liver // Biochem. Biophys. Res. Com.- 1968.- Vol.33.- P. 584-589.
98. Gertsch Ph. Transplantation hepatique: a I'Est du nouveau // Schweiz. med. Wschr.-1992.- Vol.29.- P.1067-1069.
99. Gibbons G.F., Pullinger C.R. Measurement of the absolute rates of cholesterol biosynthesis in isolated rat liver cells // Biochem. J.-1977.- Vol. 161.-P. 321-330.
100. Gizewski E.R., Rauen U., Kirsch M. et al. Rapid decrease in cellular sodium and chloride content during cold incubation of cultured liver endothelial cells and hepatocytes // Biochem. J. 1997. - Vol. 322, pt 3. - P. 693-699.
101. Groth C.G., Arborgjh В., Bjorken C. et al. Correction of hyperbilirubinemia in the glucuronyl-transferase-deficient rats by intraportal hepatocyte transplantation // Transplant. Proc.- 1977.- Vol. 9.- P.313-316.
102. Gunsalus J.R., Brady D.A., Coulter S.M. et al. Reduction of serum cholesterol in Wanatabe rabbits by xenogeneic hepatocellular transplantation // Nat.Med.-1997.- Vol.3,№1.- P.48-53.
103. Gupta S., Johnstone R., Selden A.C. et al. Retention and distribution of isolated hepatocytes following transplantation to lungs and spleen // IRCS Med. Sci. 1985.-Vol. 13.-P. 1056-1057.
104. Gupta S., Johnstone R., Darby H. et al. Transplanted isolating hepatocytes: effect of partial hepatectomy on proliferation of long-term syngeneic implants in rat spleen //Pathology.- 1987.- Vol. 19.- P. 28-30.
105. Gupta S., Roy Chowdhury R., Jagtiani R. et al. A novel system for transplantation of isolated hepatocytes utilizing HbsAg producing transgenic donor cells // Transplantation.- 1990.- Vol. 50.- P.472-475.
106. Gupta S. Hepatic growth factors: progress and perspectives. // Gitnick G.L., Current Hepatology.- Chicago: Year Book Medical Publishers, 1992.- P. 75-130.
107. Gupta S., Kim S., Yemuru R.P. et al. Hepatocyte transplantation: an alternative system for evaluating cell survival and immunoisolation // Int. J. artif. Organs.- 1993.- Vol.16.- P. 71-79.
108. Gupta S., Lee C.-D. Analysis of hepatic reconstitution with an hepatocyte transplantation system using dipeptidyl peptidase IV deficient (DPPIV) rats as recipients // Hepatology.- 1993.-Vol. 18.-P.167A.
109. Gupta S.,Yemeni P., Vemuru R.P. et al. Studies on the safety of intrasplenic hepatocyte transplantation: relevance to ex-vivo gene therapy and liver repopulation in acute hepatic failure // Hum. Gene. Ther.- 1993.- Vol. 4. P. 249-257.ъ
110. Gupta S., Rajvanshi P., Aragona E. et al. Transplanted hepatocytes proliferate differently after CC14 treatment and hepatocyte growth factor infusion // Amer. J. Physiol. 1999. - Vol.276, №3, pt. 1. - G. 629-638.
111. Gupta S., Rajvanshi P., Sokhi R. et al. Entry and integration of transplanted hepatocytes in rat liver plates occur by disruption of hepatic sinusoidal endothelium // Hepatology.- 1999.- Vol. 29, N2.- P. 509-519.
112. Habibullah C.M. Hepatocyte transplantation : need for liver cell bank // Trop.Gastroenterol.- 1992.-Vol.13.-P. 129-131.
113. Habibullah C.M., Ayesha Q., Khan A.A. et al. Xenotransplantation of UV-B-irradiated hepatocytes. Survival and immune response // Transplantation.-1995.- Vol. 59, №10,- P. 1495-1497.
114. Hagihara M., Shimura Т., Takebe К et al. Effects of iso and xeno fetal liver fragments transplantation on acute and chronic liver failure in rats // Cell Transplant. 1994. - Vol. 3, №4. - P. 283-290.
115. Harris C.C., Trump B.F., Stoner G.D. Normal human tissue and cell culture // Methods in Cell Biology.- 1980.- Vol.21.- P. 14-19.
116. Harrison R.G. Cell and tissue culture // Proc.Soc.expt. Biol. Med.-1927.-Vol.4.- P. 140
117. Hebert S.,Gervais P.,Ronx F. et al. Cultures de tissu hepatique en toxicologie Experimentale // Y.E.T. -1971.- Vol.3.- P.175-181.
118. Hue L., Bontemps F., Hers H.G. The effect of glucose and of potassion on the interconversion of the two forms of glycogen phosphorylase and of glycogen synthetase in isolated rat liver preparation//Biochem.J.- 1975.-Vol. 152.- P. 105114.
119. Imamura H., Brault A., Huet P.M. Effects of extended cold preservation and transplantation on the rat liver microcirculation // Hepatology. 2001. - Vol. 25, №3. - P. 664-671.
120. Jaffe V., Darby H., Hodgson H.J. The effect of portal perfusion on intrasplenic hepatocytes // Scand. J. Gastroenterol.- 1992.- Vol. 27.- P. 837-841.
121. Jauregui H.O., Mullon C.J., Trenkler D. et al. In vivo evaluation of a hollow fiber liver assist device // Hepatology.- 1995.- Vol.21, №2.- P. 460-469.
122. Jirtle R.L.,Biles C., Michalopoulos G. Morphologic and histochemical analysis of hepatocytes transplanted into syngeneic hosts // Amer.J. Pathol.- 1980 .-Vol.101.- P. 115-126
123. Jirtle R.L.,Michalopoulos G. Effect of partial hepatectomy on transplanted hepatocytes // Cancer Res.- 1982.- Vol. 42.- P. 3000-3004.
124. Kaido Т., Yamaoka S., Seto S. et al. Continuous hepatocyte growth factor supply prevents lipopolysaccharide-induced liver injury in rats // FEBS Lett. -1997. Vol. 411, №2-3. - P. 378-382.
125. Kasai S. Hepatocyte transplantation // Hokkaido Igaku Zasshi.- 2002.- Vol. 70,№2.- P.227-232.
126. Kato К., Kasai S., Onodera K. et al. Effect of hepatocyte growth factor on the proliferation of transplanted hepatocytes in the spleen // Transplant. Proc.-1997.- Vol.29, №4.-P. 2029-2031.
127. Kawahara Т., Yagita H., Kasai S. et al. Allogeneic hepatocyte transplantation: contribution of Fas-Fas ligand interaction to allogeneic hepatocyte rejection // J. Gastroenterol. Hepatol. 1998. - Suppl. - S. 119-123.
128. Koch K.S., Leffert H.L. Increased sodium ion influx in necessary to initiate rat hepatocyte proliferation // Cell.-1979.- Vol. 12, N12,- P. 821-832.
129. Koebe H.G., Pahernik S.A., Sproede M. et al. Porcine hepatocytes from slaughterhouse organs. An unlimited resource for bioartificial liver devices // ASAIO J.- 1995.- Vol.41, №2.- P.189-193.
130. Kohli V., Selzner M., Madden J.F. et al. Endothelial cell and hepatocyte deaths occur by apoptosis after ischemia-reperfusion injury in the rat liver // Transplantation. 1999. - Vol.67, №8. - P. 1099-1105
131. Kokudo N., Horimoto H., Ishida K. et al. Allogeneic hepatocyte and fetal liver transpantation and xenogeneic hepatocyte transplantation for Nagase's analbuminemic rats// Cell Transplant. 1996. - Vol. 5 (Suppl 1). - P. S21-22.
132. Kupcsulik P. Alternatives to liver transplantation // Orv.Hetil.-1996.-Vol.137, №42.- P. 2381-2387.
133. Kusano M.,Mito M. Observations on the fine structure of long survived isolated hepatocytes inoculated into rat spleen // Gastroenterology.- 1982.-Vol. 82.-P. 616-628.
134. Lawrence J.N., Benford D.J. Development of an optimal method for the cryopreservation of hepatocytes and their subsequent monolayer culture // Toxicol. In Vitro.- 1991.- Vol.5.-P. 39-51.
135. Lee G., Medline A., Finkelstein S. et al. Transplantation of hepatocytes from normal and preneoplastic livers into spleens of syngeneic host rats // Transplantation.- 1983.- Vol. 36. P. 218-221.
136. Lee G., Dennis J.A., Healy P.J. et al. Hepatocyte gene therapy in a large animal: a neonatal bovine model of citrullinemia // Proc. nat. Acad. Sci. USA. -1999. Vol. 96, №7. - P. 3981-3986.
137. Lemberg A., Bengochea L., Pierangeli N. Comparative study of hemostatic changes in acute viral hepatitis and terminal cirrhosis // Acta Gastroenterol. Latinoam. 1982. - Vol.12, №4. - P. 371-375.
138. Ljubimova J.Y., Petrovic L.M., Arkadopoulos N. et al. Lack of hepatocyte growth factor receptor (c-met) gene expression in fulminant hepatic failure livers before transplantation // Dig. Dis. Sci. 1997. - Vol. 42, №8. - P. 1675-1680.
139. Lorenzo M.,Angrisani L., Triassi M. et al. Monitoring of hepatocyte xenotransplantation. Usefulness of various laboratory parameters // Minerva Chir.- 1995.- Vol.50, №1-2.- P.69-73.
140. Loretz L.J., Li A.P., Flye M.W., Wilson A.G.E. Optimization of cryoprservation procedures for rat and human hepatocytes // Xenobiotica.- 1989.-Vol.19.- P.489-498.
141. Maganto P., Cienfiegos J.A., Santamaria L. et al. Effect of cyclosporine on allogeneic hepatocyte transplantation : a morphological study // Europ. surg. Res.- 1988.- Vol.20.- P. 248-253.
142. Makowka L.,Rotstein L.E., Falk R.E. et al. Reversal of toxic and anoxic induced hepatic failure by syneneic, allogeneic and xenogeneic hepatocyte transplantation // Surgery.- 1980.- Vol. 88.- P. 2243-2253.
143. Makowka L., Rotstein L.E., Falk R.E. et al. Studies into the mechanism of reversal of experimental acute hepatic failure by hepatocyte transplantation // Canad. J. Surg.- 1981.- Vol.24.- P.-39-43.
144. Makowka L.,Lee G.,Coboura C.S. et al. Allogeneic hepatocyte transplantation in the rat spleen under cyclosporine immunosuppresion // Transplantation.- 1986.- Vol. 42.- P. 537- 541.
145. Mammen E.F. Coagulation abnormalities in liver disease // Hematol. Oncol. Clin. N. Amer. 1992. - Vol. 6, №6. - P. 1247-1257.
146. Matas A.J., Sutherland D.E.R., Steffes M.W. et al. Hepatocellular transplantation for metabolic deficiencies: decrease of plasma bilirubin in Gunn rats // Science. 1976. - Vol. 192. - P. 892-894.
147. McKenzie R., Fried M.W., Sallie R. et al. Hepatic failure and lactic acidosis due to fialuridine (FIAU), an investigational nucleoside analogue for chronic hepatitis В//N.Engl. J. Med. 1995.-Vol. 333, №17.-P. 1099-1105.
148. Michalopoulos G.K., Appasamy R. Metabolism of HGF-SF and its role in liver regeneration // Experientia. 1993. - Vol. 65 (suppl.). - P. 275-283.
149. Miki C., Mayer A.D., Buckels J.A. et al. Serum hepatocyte growth factor as an index of extensive catabolism of patients awaiting liver transplantation // Gut. 1999. -Vol. 44, №6. - P. 862-686.
150. Minato M., Houssin D., Denma I. et al. Transplantation of hepatocytes for treatment of surgically-induced acute hepatic failure in the rat // Europ. surg. Res. 1984.- Vol.16.- P. 162-169.
151. Mito M.,Kusano M., Onishi T et al. Hepatocellular transplantation // Gastroenterol. Jpn. 1978.- Vol. 13.- P. 480-490.
152. Miyazaki M., Makowka L., Falk R.E. et al. Reversal of lethal, hemotherapeutically imduced acute hepatic necrosis in rats by regenerating liver cytosol // Surgery.- 1983.- Vol.94.- P. 142-150.
153. Moshage H., Rijntjes P., Yap S. et al. Primary culture of cryopreserved human hepatocytes on homologous extracellular matrix and the influence of monocytic products on albumin secretion // J. Hepatol 1988. - Vol.7. - P. 3444.
154. Motokima K., Kanematsu T. Bile secretion and histology of liver autotransplanted into the pancreatic parenchyma // Transplantation.- 1992,- Vol. 54.- P. 784-789.
155. Naik S., Trenkler D., Santangini H. et.al. Isolation and culture of porcine hepatocytes for artificial liver support// Cell Transplant.-1996.-Vol.5, №1.-P. 1510
156. Nakamura J., Okamoto Т., Schumacher I.K. et al. Treatment of surgically induced acute liver failure by transplantation of conditionally immortalized hepatocytes // Transplantation. 1997. - Vol. 63, №11. - P. 15411547.
157. Nordlinger В., Bouma M.E., Wang S.R. et al. High-yeld preparation of porcine hepatocytes for long survival after transplantation of the spleen // Europ. surg. Res.- 1985,-Vol. 17.-P. 377-382.
158. Nyberg S.L., Misra S.P. Hepatocyte liver-assist systems—a clinical update // Mayo Clin. Proc. 1998. -Vol.73, №8. - P. 765-771.
159. Oettinger H.F., Rodrigue-Way A., Bousguet J.J. et al. Porcine repeat element DNA : in situ detection of xenotransplanted cells // Cell Transplant.-1995.-Vol.4, №2,- P. 253-256.
160. Oren R. Restoration of serum albumin levels in nagase analbuminemic rats by hepatocyte transplantation // Hepatology. 1999. -Vol. 29, №1. - P. 75-81.
161. Panis Y.,Putts J.P., Ballet F. et al. The isolated perfused spleen: an original method for studying the function of hepatocytes transplanted into the spleen // Transplantation.- 1990.- Vol. 49.- P. 756-759.
162. Patel A.,Hardy M., Roy Chowdhury N. et al. Long-term correction of genetic defect of liver function in rat by transplantation of liver cells after ultraviolet irradiation //Mol. Biol. Med.-1989.- Vol.6.- P. 187-196.
163. Raper S.E. Hepatocyte transplantation and gene therapy // Clin. Transplant.-1995.- Vol.9,№3,pt2.- P.249-254.
164. Recknagel R.O., Glende E.A., Dolak J.A., Waller R.L. Mechanisms of carbon tetrachloride toxity // Pharmac. Ther. 1989. - Vol. 43. - P. 139-154.
165. Rela M., Muiesan P., Vilca Melendez H. et al. Auxiliary partial orthotopic liver transplantation for Crigler-Najjar syndrome type I // Ann. Surg. 1999. -Vol. 229, №4. - P. 565-569.
166. Reuvers C.B., Terpstra O.T., Groenland T.H et al. Hemodynamics and coagulation in experimental auxiliary liver transplantation during fulminant hepatic failure // Ann. Surg. 1986. - Vol. 204, №5. - P. 552-558.
167. Schumacher I.K., Okamoto Т., Kim B.H. Transplantation of conditionally immortalized hepatocytes to treat hepatic encephalopathy // Hepatology.- 1996.-Vol. 24, №2. P. 337-343.
168. Todo S., Hamada N., Zhu Y. et al. Lazaroid U-74389 G for 48-hour canine liver preservation//Transplantation.- 1996.- Vol. 61, №2.- P. 189-194.
169. Vemuru R.P., Davidson A., Aragona E. et al. Immune tolerance to a defined heterologous antigen following intrasplenic hepatocyte transplantation : implications for human gene therapy // FASEB J.- 1992.- Vol. 6.-P. 2836-2842.
170. Vogels B.A., Maas M.A., Bosma A., Chamuleau R.A. Significant improvement of survival by intrasplenic hepatocyte transplantation in totally hepatectomized rats // Cell Transplant. 1996. - Vol. 5, №3. - P. 369-378.
171. Wen L., Calmus Y., Honiger J. et al. Encapsulated xenogeneic hepatocytes remain functional after peritoneal implantation despite immunization of the host // J. Hepatol. 1998. - Vol.29, №6. - P. 960-968.
172. Wiederckehr J.C., Kondos G.T., Pollak R. Hepatocyte transplantation for low-density lipoprotein receptor-deficient state. A study in the Watanabe rabbit // Transplantation.- 1990.- Vol.50.- P. 466-471.
173. Yazigi N.A., Carrick T.L., Bucuvalas J.C. et al. Expansion of transplanted hepatocytes during liver regeneration // Transplantation.-1997.- Vol. 64,№6.- P.816.820.