Конденсированные производные бензимидазола - новый класс антитромбогенных средств

Кучерявенко, Аида Фатиховна

Диссертации по медицине → Фармакология, клиническая фармакология

Автореферат и диссертация по медицине (14.03.06) на тему:Конденсированные производные бензимидазола - новый класс антитромбогенных средств

ДИССЕРТАЦИЯ

АВТОРЕФЕРАТ

Кучерявенко, Аида Фатиховна Волгоград 2012 г.

Ученая степень: доктора медицинских наук

ВАК РФ: 14.03.06

Автореферат диссертации по медицине на тему Конденсированные производные бензимидазола - новый класс антитромбогенных средств

На правах рукописи

КУЧЕРЯВЕНКО Аида Фатиховна

КОНДЕНСИРОВАННЫЕ ПРОИЗВОДНЫЕ БЕНЗИМИДАЗОЛА -НОВЫЙ КЛАСС АНТИТРОМБОГЕННЫХ СРЕДСТВ

14.03.06.- фармакология, клиническая фармакология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени доктора медицинских наук

1 2 ЯНВ 2012

Волгоград, 2011

005007267

Работа выполнена в ГБОУ ВПО «Волгоградский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации.

Научный консультант:

Академик РАМН, Заслуженный деятель наук РФ, доктор медицинских наук, профессор

СПАСОВ Александр Алексеевич

Официальные оппоненты:

Член-корр. РАМН, Заслуженный работник ВШ РФ, доктор медицинских наук, профессор

Заслуженный деятель науки РФ доктор медицинских наук, профессор

ТЮРЕНКОВ Иван Николаевич

РЕЗНИКОВ Константин Михайлович

доктор медицинских наук, профессор

МАКЛЯКОВ Юрий Степанович

Ведущая организация - НИИ Фармакологии им. В.В.Закусова РАМН, г. Москва

Защита состоится «■? ^ » 2012 г. в у / ч. на заседании

Диссертационного Совета ^ Д /08.008.02 при ГБОУ ВПО «Волгоградский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации по адресу: 400131, г. Волгоград, пл. Павших борцов, 1

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГБОУ ВПО «Волгоградский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации

Автореферат разослан

2011 г.

Ученый секретарь совета доктор медицинских наук

профессор А.Р.Бабаева

Список сокращений

АДФ - аденозиндифосфорная кислота

АСК - ацетилсалициловая кислота

КЭД - коэффициент эндотелиальной дисфункции

МДА - малоновый диальдегид

ППг - простациклин

РУ - лабораторный шифр соединения

СД - сахарный диабет

ТБК - тиобарбитуровая кислота ТХАг - тромбоксан А2

цАМФ - циклический аденозинмонофосфат

цГМФ - циклический гуанозинмонофосфат

ФДЭ - фосфодиэстераза

ЭГТА - этиленгликольтетраацетат натрия

А 23187 - кальциевый ионофор

ЕС50 - эффективная концентрация, в которой вещество ингибирует

процессы агрегации тромбоцитов на 50% Е05о эффективная доза, в которой вещество ингибирует процессы агрега-

ции тромбоцитов на 50%

т бШсо - в кремнии, общее название компьютерных методов поиска лекарственных веществ

N0 - оксид азота

1146619 - агонист тромбоксановых рецепторов

С^АЯ - количественные соотношения «структура-активность»

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Актуальность исследования. Ключевая роль в патогенезе ишемических нарушений в различных органах и системах человеческого организма отводится тромбообразованию [Суслина, 2006; Чазов, 2008; Мирзоян, 2009; Сушкевич,2009; Князева, 2009;]. Известные к настоящему времени данные позволяют, без сомнения, утверждать, что, используя антиагрегантные и другие средства при различных проявлениях активации тромбоцитарного звена гемостаза, можно существенно уменьшить риск развития сердечно-сосудистых осложнений [Макаров, 2006; Воронина, 2006; Maree, 2007; Andiolillo, 2010; Петров, 2010; Тюренков, 2011; Недогода, 2011]. Поэтому антиагрегантная терапия является краеугольной проблемой современной кардиологии. Данная терапия включает препараты с доказанным высоким уровнем активности, которые убедительно продемонстрировали в многоцентровых исследованиях способность снижать риск развития острого коронарного синдрома и острую коронарную смерть [Терещенко, 2008; Geraldo, 2010; Flieri, 2010]. Основу современной антитромбоцитарной терапии составляют ацетилсалициловая кислота-ингибитор циклооксигеназы тромбоцитов, тиенопиридины-блокаторы P2Yi2 рецепторов (клопидогрел, тиклопидин) и блокаторы гликопротеиновых рецепторов ИЬЯПа тромбоцитов для внутривенного применения (абциксимаб, эпти-фибатид, тирофибан), а также комбинация ацетилсалициловой кислоты с клопи-догрелем [Чарная, 2009]. В настоящее время расширяются показания для применения антитромбоцитарных препаратов, уточняются сведения о специфичности их воздействия на отдельные стороны функции тромбоцитов. Однако необходимо отметить, что современные антиагрегантные средства не всегда отвечают требованиям, предъявляемым к ним, так как проявляют недостаточную эффективность и имеют большое количество побочных эффектов. Среди побочных эффектов особенно следует отметить способность антиагрегантов вызывать гастропатии, кровотечения, тромбоцитопеническую пурпуру [De Luca, 2009; Morini, 2010]. Другим фактором, ограничивающим применение антиагрегантных средств, является наличие у части больных резистентности к препаратам, характеризующейся отсутствием депрессии функции тромбоцитов и снижением антитромботического эффекта [Santilli, 2009; Postula, 2010; Cattaneo 2011]. Поэтому поиск, изучение и создание

новых антиагрегангных средств является актуальной задачей в решении проблемы предотвращения тромботических состояний.

Известно, что химический класс производных бензимидазола проявляет различные виды биологической активности и считается перспективным для разработки эффективных ингибиторов агрегации тромбоцитов [Спасов, 1997; Bandarage, 2009; Муляр, 2009; Анисимова, 2010]. В исследованиях, проведенных ранее в Волгоградском государственном медицинском университете, установлена способность замещенных гетероциклических азотосодержащих систем подавлять агрегацию тромбоцитов, и накоплен опыт изучения соединений с антиагрегантной активностью [Спасов, 2006, 2009, 2010; Дудченко, 1997; Островский, 1999; Анисимова, 2009; Кучерявенко, 2005, 2010;]. Поэтому поиск потенциальных антитромбоген-ных средств среди производных бензимидазола является достаточно обоснованным.

Целью исследования явилось проведение направленного поиска, изучение эффективности и механизма антиагрегантного действия конденсированных производных бензимидазола, как нового класса антитромбогенных веществ.

Задачи исследования:

1. Разработать систему направленного поиска новых антиагрегантных соединений с использованием методов компьютерного прогноза.

2. Провести многоэтапный направленный поиск антиагрегантных веществ, среди замещенных производных гетероциклических азотсодержащих систем.

3. Провести анализ влияния типа ядра и заместителей, а также частотный анализ влияния физико-химических параметров на уровень антиагрегантной активности в перспективных классах конденсированных бензимидазолов.

4. Изучить влияние производных бензимидазола на тромбогенный потенциал крови крыс в норме и в условиях экспериментального сахарного диабета.

5. Провести углубленное изучение влияния активных соединений на рецеп-торные и пострецепторные механизмы регуляции активности тромбоцитов.

связывания биомишеней, отвечающих за антиагрегантную активность - кальмоду-лина, фосфодиэстеразы III типа, аденилатциклазы I типа и ТХА2-синтетазы.

7. Изучить фармакокинетику соединения РУ-254 при внутривенном введении.

8. Исследовать общетоксические свойства (острую и хроническую токсичность) соединения РУ-254 при внутривенном введении.

Научная новизна исследования. Впервые показано, что антиагрегантная активность производных бензимидазола зависит от их физико-химических свойств (стерических, липофильных и электронных параметров изучаемых соединений). Найдены значимые признаки высокого уровня антиагрегантной активности для класса новых замещенных гетероциклических азотосодержащих систем с использованием методов in silico.

Впервые показана способность соединения РУ-891 эффективно снижать тромбогенный потенциал крови на интактных животных и при экспериментальном диабете. Установлено, что основой антиагрегантной активности вещества РУ-891 является блокирование P2YI2 рецепторов тромбоцитов и снижение уровня ТХА2.

Для соединений РУ-254 и РУ-185 впервые выявлено влияние на тромбогенный потенциал крови, связанное с ингибирующим влиянием на уровень образования ТХА2, в условиях целого организма.

Впервые с использованием Зй-молекулярного моделирования методом сходства к препаратам-эталонам, а также с использованием докинга проведен анализ особенностей взаимодействия соединений-лидеров с наиболее вероятными белками-мишенями, отвечающими за антиагрегантную активность - кальмодулином, фосфодиэстеразой III типа, аденилатциклазой I типа и ТХАг-синтетазой.

Научно-практическая значимость. В результате экспериментального поиска новых веществ, ингибирующих процесс агрегации тромбоцитов, среди азотосодержащих гетероциклических соединений была сформирована база данных соединений, изученных на предмет данного вида активности. Созданная система комбинированного поиска in silico новых антиагрегантных соединений позволила осуществить выявление веществ с антиагрегантной активностью с последующей перепроверкой наличия данного вида активности в эксперименте in vitro и in vivo. В результате использования данной программы удалось существенно снизить ма-

териальные, временные и финансовые затраты, необходимые для проведения экспериментальных исследований по поиску новых потенциальных антиагрегантных средств.

Выявлено новое оригинальное вещество РУ-891, проявляющее выраженные антиагрегантные свойства, связанные с поливалентным механизмом действия. Данные об антитромбогенных свойствах соединения РУ-254, выявленные в настоящей работе, явились основанием для включения в протокол клинических исследований данного вида активности, что получило дальнейшее подтверждение в рамках III фазы клинических испытаний данного соединения у больных сахарным диабетом II типа.

При составлении протоколов клинических исследований антиоксидангного соединения РУ-185 необходимо изучать показатели тромбогенного потенциала крови.

Проведены фармакокинетические и токсикологические исследования соединения РУ-254 при внутривенном введении.

Реализация результатов исследования. Данные об антиагрегантной активности соединений, анализ влияния типа ядра, заместителей и физико-химических параметров на уровень антиагрегантной активности в перспективных классах конденсированных бензимидазолов используется при синтезе новых соединений в НИИ Физической и Органической Химии Южного Федерального Университета (г. Ростов). В работе НИИ фармакологии ВолгГМУ, кафедры фармакологии ВолгГМУ используется новый комплексный подход к изучению антиагрегантной активности веществ. Результаты работы включены в лекционные курсы на кафедрах фармакологии и биофармации ФУВ ВолгГМУ, на кафедрах фармакологии Саратовского, Ставропольского и Ростовского медицинских университетов.

Положения, выносимые на защиту

1.Среди изученных 14 классов конденсированных и неконденсированных производных бензимидазола наиболее активные антиагрегантные соединения встречаются в рядах производных 1Я',М3-имидазола, и №-2,3-дигидро-имидазо[ 1,2-а]-бензимидазола.

2.Соединения РУ-891, РУ-254 и РУ-185 по выраженности антиагрегантного действия in vitro превосходят препарат сравнения ацетилсалициловую кислоту

(АСК) в 5,5, 2,7 и 2 раза соответственно, а в опытах in vivo в 8, 7,5 и 4,6 раза соответственно.

3.Антитромботическая активность соединения РУ-891, проявленная на экспериментальных моделях артериальных тромбозов, выше активности ацетилсалициловой кислоты (АСК) в 3 раза. Антидиабетическое соединение РУ-254 по способности предотвращать образование тромбов превосходит препарат сравнения гликлазид в 2,4 раза, а антиоксидантное соединение РУ-185 - препарат мексидол в 3,1 раза.

4. Механизм антитромбогенного действия соединения РУ-891 определяется блокирующим влиянием на P2YI2 рецепторы тромбоцитов, снижением синтеза тромбоксана А2 (ТХА2) и уровня внутриклеточного кальция. Соединения РУ-254 и РУ-185 по механизму действия являются ингибиторами синтеза ТХА2.

5.Методический подход in silico, включающий информационные технологии компьютерного прогноза биологической активности химических соединений «PASS» и «Микрокосм», анализ сходства структур и докинг с целью поиска и изучения механизма действия новых антиагрегантных веществ, значительно оптимизирует проводимые исследования по выявлению новых потенциальных антитром-ботических средств в ряду конденсированных производных бензимидазола.

Апробация работы. Основные результаты диссертационной работы докладывались и обсуждались на научно-практической конференции по созданию и апробации новых лекарственных средств: «Лекарства-человеку» Харьков, 2000, на I межрегиональной научно-практической конференции с международным участием, Санкт-Петербург, 2001, на III съезде фармакологов России «Фармакология - практическому здравоохранению» Санкт-Петербург, 2007, на VII конференции «Гемо-реология и микроциркуляция (от функциональных механизмов в клинику) Ярославль, 2009, на VII всероссийской конференции с молодежной научной школой, Уфа, 2009, на 56-й региональной научно-практической конференции «Инновационные достижения фундаментальных и прикладных медицинских исследований в развитии здравоохранения Волгоградской области», Волгоград, 2010, на V диабе-тологическом конгрессе, Москва, 2010 , на II Международном Конгресс-Партнеринге и Выставке по биотехнологии и биоэнергетике «ЕвразияБио-2010»,

Москва, 2010, на XIV, XV, XVI, XVII, XVIII Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство», Москва, 2007,2008,2009, 2010, 2011.

Публикации. По теме диссертации опубликовано 57 печатных работ, в том числе 20 статей, из которых 18 - статьи в ведущих рецензируемых научных журналах, рекомендованных ВАК Минобрнауки РФ, получено 3 положительных решения на патенты на изобретения.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 305 страницах машинописного текста, иллюстрирована 53 таблицами, 42 рисунками, состоит из введения, обзора литературы (глава I), экспериментальной части (главы II-VII), обсуждения результатов, выводов и приложения. Список литературы включает 109 отечественных и 343 иностранных источника.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

В качестве объектов исследования использованы новые химические соединения, которые были синтезированы в НИИ физической и органической химии Южного федерального университета (Ростов-на-Дону) ведущим н.с., к. х. н. В. А. Анисимовой .

Было изучено 14 классов конденсированных и неконденсированных производных бензимидазола: Н%мидазо[1,2-а]бензимидазолы (230 соединений); N9-2,3-дигидро-имидазо[1,2-а]бензимидазолы (32соединения); пиримидо[1,2-а] бензи-мидазолы (47 соединений); 2,3,4,10-тетрагидро-пурины (20 соединений); N',N3-имидазолы (27 соединений); тиазоло[3,2-а]бензимидазолы (1 соединение); 1,2,3,4-тетрагидро-оксазоло[2,3-{]пурины (2 соединения); N'-бензимидазолы (40 соединений); Ы'-1,2,4-триазолы (8 соединений); М'-имидазо[1,2-а]бензимидазолы (60 соединений); Ы'-2,3-дигидро-имидазо[1,2-а] бензимидазолы (14 соединений); 1,2,4-триазоло[1,5-а]-бензимидазолы (3 соединения); пиразоло[1,5-а]бензимидазолы (8 соединений); пиролло [1,2-а]бензимидазолы (11 соединений).

Влияние веществ на агрегацию тромбоцитов плазмы кроликов in vitro изучали на двухканальном лазерном анализаторе агрегации (модель 220 LA) научно-производственной фирмы «Биола» (г. Москва), согласно методу Born G, в модифи-

Выражаем искреннюю признательность ведущему научному сотруднику, к.х.н. В.А.Анисимовой за предоставление субстанций веществ.

кации Габбасова В.А.(1989). Для активации агрегации тромбоцитов использовали АДФ в конечной концентрации 5мкМ. В качестве препарата сравнения использовали ацетилсалициловую кислоту (АСК).

Острая токсичность определялась на белых нелинейных мышах-самцах массой 20-22 грамма при внутрибрюшинном введении. Величину токсикологического показателя - LD50 рассчитывали по методу Личфилда-Вилкоксона. В качестве объективного показателя условной широты терапевтического действия использовался условный терапевтический индекс соединений, который определяли как отношение показателя LD50 к ЕС50.

Моделирование и степень внутрисосудистой агрегации тромбоцитов проводили и оценивали по методу, описанному J. F. Pinon (1984). Для оценки влияния соединений на внутрисосудистую агрегацию кровяных пластинок вещества вводили перорально в дозе 50 мг/кг за 1,5 часа до наркоза животных. Индуктор агрегации АДФ вводили внутривенно в дозе 1 мг/кг.

Исследования на моделях артериальных тромбозов, индуцированных аппликацией 50% раствора хлорида железа (III) и воздействием анодного электрического тока на сонную артерию крыс осуществляли на наркотизированных нембуталом (50 мг/кг) животных спустя 2 часа после перорального введения препаратов согласно методам Kurz K.D. (1990) и Guglielmi G. et al. (1991) соответственно. В качестве препаратов сравнения использовалась АСК, гликлазид и мексидол. Производные бензимидазола исследовались в изоэквимоляльных дозах АСК (20мг/кг). Для исследования влияния соединений на время образования тромба использовали ультразвуковой компьютеризированный аппарат «Минимакс-Доплер-К» (Санкт-Петербург) [Спасов, 2011].

Модель генерализованного адреналин-коллагенового тромбоза на мышах была воспроизведена в соответствии с методикой Di Minno (1983). В качестве тромботического агента использовали смесь растворов коллагена в дозе 0,5 мг/кг и адреналина в дозе 0,06 мг/кг. Вещества вводили перорально за 2 часа до моделирования тромбоза в изоэквимоляльных дозах АСК (20мг/кг). При морфологическом исследовании легких мышей оценивали наличие признаков тромбообразова-ния в стенке артериальных сосудов мышечного типа. Гистологические препараты

документировали цифровой камерой Olympus (Japan, 4.0 мегапикселей) на базе микроскопа Micros (Austria) с использованием объектива хЮ, х40 и окуляра хЮ*.

При изучении влияния веществ на тромбоцитарно-сосудистый гемостаз для определения времени свертывания крови была использована модель «время кровотечения на мышах» [Gratacap, 2009]. По действию на данный параметр соединения были изучены в дозах равных ED50, полученных на модели внутрисосудистой агрегации тромбоцитов

Для изучения влияния производных бензимидазола на тромбоцитарно-сосудистый гемостаз при экспериментальном патологии у крыс путем внутри-брюшинного введения аллоксана в дозе 150 мг/кг создавали экспериментальный сахарный диабет [Chougale, 2007]. Эксперименты проводили на животных с тяжелой формой сахарного диабета, у которых развивалась стойкая гипергликемия с содержанием глюкозы более 15 ммоль/л.

При изучении влияния соединений на агрегацию тромбоцитов и вязкость крови пероральное введение исследуемых соединений проводили ежедневно в течение недели до начала экспериментов в дозах, соответствующих ED5Q, полученных на модели внутрисосудистой агрегации тромбоцитов. Препарат сравнения гликлазид и пентоксифиллин были изучены в дозе 10 мг/кг и 4 мг/кг.

Влияние препаратов на агрегацию тромбоцитов крыс с аллоксановым диабетом «ex vivo» проводили по методу Born G.(1962) в модификации Габбасова З.А. и др (1989).

Вязкость крови определялась при помощи вискозиметра ротационного типа-анализатора крови реологического (АКР-2) при шести скоростях сдвига (10е'1,20е" 50е'1,100с'1, 200е"1, 300е"1), моделирующих различную интенсивность кровотока в сосудах [Добровольский, 1998]. Влияние веществ на агрегацию эритроцитов оценивали по индексу агрегации эритроцитов (ИАЭ), рассчитываемому как

Выражаем глубокую признательность зав. кафедрой патологической анатомии, д.м.н. А.В.Смирнову за помощь в проведении морфологических исследований.

отношение вязкости крови (ВК) при скорости сдвига 10е"1 к ВК при 300е"1 [Парфенов, 1994]. Вязкость крови определялась при стандартизированном гематокрите -40%.

Модель артериального тромбоза у крыс с экспериментальным диабетом, индуцированного электрическим током, была поставлена согласно методу Guglielmi G. et al. (1991). Производные бензимидазола были изучены в дозах ED50, полученных при исследовании веществ на данной модели у интактных животных.

Влияние производных бензимидазола на агрегацию тромбоцитов in vitro, изучали согласно методу Born G, в модификации Габбасова В.А.(1989). В качестве индукторов агрегации тромбоцитов использовали АДФ и адреналин в конечной концентрации 5мкМ, коллаген - 4 мкг/мл, тромбин - 0,5 ед/мл, агонист тромбок-сановых рецепторов - U46619 - 3 мкМ, арахидоновую кислоту - 50 мкМ, кальциевый ионофор - A-23I87 - ЗмкМ.

Влияние соединений в концентрации 1мкМ на пуриновые P2Y] и P2Yi2-рецепторы тромбоцитов изучали в безкальциевой и кальциевой среде, методом малоуглового светорассеяния [Сакаев, 2000]. Регистрацию проводили на приборе «Лайт-Скан» (НПФ «Люмекс», Россия). В качестве веществ сравнения использовали Reactive blue 2 (Basilen blue) и PPADS.

При изучении влияния производных бензимидазола на баланс «простацик-лин-ТХА2» в организме крыс, соединения вводились перорально за 2 часа до исследования в дозах, соответствующих ED5o, полученных на модели внутрисосуди-стой агрегации тромбоцитов. Антиагрегационную активность сосудистой стенки крыс ex vivo оценивали по методу D. Е. Maclntyre (1978), в модификации В.П. Ба-луды (1980). Исследования по изучению воздействия соединений на синтез ТХА2 ex vivo проводили по методу J.B. Smith (1976). Измерения проводили на спектрофотометре APEL PD-303 UV (Япония), при длине волны, равной 532 нм.

Определение изменений уровня внутриклеточного кальция проводили согласно методу, описанному Cho et al. (2006), в отмытых тромбоцитах кролика с использованием флуоресцентного зонда Fura-2/AM на спектрофлуориметре Hitchi MPF - 400 (Япония) при длине волны возбуждения 340 nm и 380 пш и длине волны испускания 510 nm. В качестве препаратов сравнения были выбраны АСК и анта-

гонист ионов кальция верапамил. В качестве стимулятора выхода инграцеллюляр-ного кальция из внутриклеточных депо был использован тромбин в концентрации 0,5 ед/мл. Расчет концентрации катионов кальция проводился с помощью уравнения Schaeffer and Blaustein (1989).

Уровень мембракосвязанного кальция в тромбоцитах измеряли с использованием кальций-чувствительного флуоресцентного зонда хлортетрациклина в концентрации 20 мкМ по методу, описанному Gasvell и Hutchison (1971). Действие соединений на потенциал-зависимые кальциевые каналы изучали на изолированных портальных венах крыс, используя метод гиперкалиевой контрактуры [Golenhofen, 1973].

Эксперименты по изучению влияния производных бензимидазола на коэффициент эндотелиальной дисфункции выполнены на интактных нелинейных крысах и крысах с аллоксановым диабетом по методу Покровского (2006 г.) в дозах, соответствующих ED5o, полученных на модели внутрисосудистой агрегации тромбоцитов. Для изучения основных параметров сердечно-сосудистой системы использовалась универсальная компьютерная многоканальная система обработки сигналов в реальном масштабе времени BEAT (РКНПК РАМН, Москва, 2000).

Влияние производных бензимидазола на показатели коагулограммы крови крыс изучалось хронометрически, с помощью турбидиметрического гемокоагуло-метра «SOLAR» (модель CGL 2110, Белоруссия).

Изучение фармакокинетики* проводили на белых нелинейных крысах самцах массой 200-250 г., которым в хвостовую вену вводили вещество РУ-254, растворенное в физиологическом растворе в дозе 25 мг/кг. Содержание вещества в биологических пробах определяли методом ВЭЖХ на жидкостном хроматографе «HEWLETT PACKARD» серии 1050. Для определения в пробах вещества использовали колонку Separon SGX С18 5 мкм (4x100) фирмы «Элсико». Детектирование проводили на УФ-детекторе при длине волны 280 nm. Полученные экспериментальные данные анализировались модельно-независимым методом [Gibaldi, 1982].

* Исследования выполнены совместно с зав. лаборатории фармакокинетики НИИ фармакологии ВолгГМУ, д.б.н. Л.А. Смирновой, за что выражаем искреннюю признательность.

Исследование острой и хронической токсичности* соединения РУ-254 при внутривенном введении проводилось в соответствии с руководством по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических средств [Арзамасцев, 2005].

Статистическая обработка данных, полученных при экспериментальных исследованиях, проводилась с помощью программы STATISTICA/w6.0 фирмы StatSoft, Inc. (США) с использованием критерия Манна-Уитни, в электронной таблице Excell 5.0, с использованием t-критерия Стьюдента при помощи пакета статистических программ программного обеспечения Microsoft Excell 2003, 2006. Обсчет результатов исследований по влиянию соединений на выживаемость мышей при моделировании генерализованного тромбоза проводился с помощью точного критерия Фишера. Статистическую обработку данных гистологических исследований проводили с использованием программы «Видео Тест Морфо-4. Площадь под фармакокинетической кривой (AUC) рассчитывали с помощью смешанного линейно-логарифмического метода статистических моментов [Пиотровский, 1986].

Анализ зависимости между биологической активностью и химической структурой производных бензимидазола проводился с применением методов теории распознавания образов [Горелик, 1984]. Для выявления QSAR-закономерностей использовались два метода: подструктурный анализ и частотный анализ физико-химических параметров соединений. Кластеризация осуществлялась двумя методами: вероятностным методом гистограмм и геометрическим методом расстояний [Мандель, 1988]. Показатели липофильности вычислялись с применением различных схем фрагментного приближения [Broto, 1984; Ghose, 1987; Viswanadhan, 1989]. Стерические параметры рассчитывались с использованием классической аддитивной схемы в различных модификациях [Иоффе, 1983; Ghose, 1987; Viswanadhan, 1989].

Вычисление электронных характеристик проводили согласно методу AMI [Dewar, 1985; Минкин, 1997], с предварительной оптимизацией конформации методом молекулярной механики ММ2 [Буркерт, 1986; Кларк, 1990].

* Исследования выполнялись совместно с коллективом лаборатории лекарственной безопасности НИИ фармакологии ВолгГМУ (зав. лабораторией с.н.с. д.б.н. Л.И.Бугаева), за что выражаем искреннюю признательность.

Компьютерный прогноз биологической активности новых производных бен-зимидазола осуществляли с использованием системы PASS [Филимонов, 2006] и информационной технологии «Микрокосм» [Васильев, 2005]. Расчеты были выполнены с помощью программы Pro 2006 (версия SAR-базы 2009 г.), разработанной в НИИ БМХ РАМН (Москва) и с помощью разработанного в ВолгГМУ оригинального программного комплекса ИТ «Микрокосм» (версия 5.1,2009г.)*.

Прогноз биологической активности методом сходства к эталонам проведен на основе вычисления средних коэффициентов 2D- и ЗО-сходства структуры изучаемого соединения к структурам специально выбранных препаратов сравнения с известным механизмом действия [Molecular Similarity ..., 1995]. В качестве препаратов-стандартов были выбраны ингибиторы кальмодулина (хлорпромазин гидрохлорид, кальмидазолиум хлорид, феноксибензамина гидрохлорид), ингибиторы ФДЭ цАМФ III типа (цилостазол, трапидил, пептоксифшшш, дипиридамол), ингибиторы ТХАг-синтетазы (дазоксибена гидрохлорид, ридогрел, мидазогрел) и стимуляторы аденилатциклазы (букладесин натрия, форскалин и вещество NKH 477 гидрохлорид). Расчеты выполнены с помощью программы HyperChem 7 (Evaluation Copy).

Докинг производных бензимидазола в сайты связывания различных белков -мишеней: кальмодулина, фосфодиэстеразы III типа, тромбоксансинтетазы А2 и аденилатциклазы выполнялся с использованием программного пакета AutoDock Vina 1.1.1 [AutoDock Vina, 2010] в комплекте с дополнительными инструментами AutoDock Tools и PyMoI [Trott О, 2010] на имеющемся в ВолгГМУ 24-х ядерном вычислительном кластере общей производительностью 190 Гфлопс.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Экспериментальный поиск веществ с антиагрегантной активностью in vitro был проведен среди конденсированных и неконденсированных производных бензимидазола, представленных 14 классами. На основании величины рассчитанного условного терапевтического индекса из данной группы веществ было выбрано 11 наиболее активных соединений, превосходящих препарат сравнения АСК (табл. 1). В результате этого выявлено вещество под шифром РУ-891, проявляющее высокую

Исследования были проведены совместно с д.б.н. П.М. Васильевым, за что выражаем благодарность и глубокую признательность.

антиагрегантную активность. По ЕС50 данное соединение превосходит АСК 5,5 раза, а по терапевтическому индексу в 10 раз.

Таблица 1. Влияние производных бензимидазола и АСК на АДФ-индуцированиую (5мкМ) агрегацию тромбоцитов кролика in vitro - ЕС5о, острая токсичность-ЬВ5о (в/бр, мг/кг) и условный терапевтический индекс(УТИ)

исследуемых веществ.

№ Название со- ЕС50, М ЕС5о, мг/л LD50, мг/кг УТИ

п/п единения (в/бр) (LDso/EC5o)

1. РУ-891 0,000133 51,87 1260,0 24,27

2. РУ-451 0,000259 127,03 1000,0 7,87

3. РУ-295 0,000240 104,47 598,0 5,72

4. РУ-502 0,000183 85,16 400,0 4,69

5. РУ-487 0,000133 67,05 263,0 3,92

6. РУ-1202 0,000139 58,83 205,3 3,48

7. РУ-659 0,000151 47,36 153,0 3,22

8. РУ-254 0,000269 89,11 275,0 3,0

9. РУ-670 0,000230 83,32 236,0 2,83

10. РУ-17 0,000154 64,26 164,0 2,55

П. РУ-185 0,000331 174,1 218,0 1,25

12. АСК 0,00071 128,5 310 2,41

Зависимость антиагрегантной активности производных бензимидазола от их струткгуры и физико-химических свойств. С использованием подструктурного анализа среди экспериментально изученных веществ 14 различных классов азото-содержащих гетероциклических соединений были выявлены наиболее перспективные классы производных №-2,3-дигидро-имидазо[1,2-а]бензимидазола и Ы',!4}3-имидазола с высокими индексами значимости для поиска новых веществ с высокой антиагрегантой активностью (рис.1).

Анализ зависимости данного вида активности от характера заместителей, физико-химических свойств соединений этих двух классов позволил выявить радикалы, которые могут вносить значимый вклад в антиагрегантную активность. Так, в группе производных Ы9-2,3-дигидро-имидазо[1,2-а]бензимидазола вклад в наличие антиагрегантной активности могут вносить диаминоэтильный заместитель в положении а также солевой остаток виде гидрохлорида. Антиагрегантная активность производных Ы',Ы3-имидазола будет определяться наличием в положении К, заместителей (4-хлорфенил)карбонилметил и (3,4-дихлорфенил)карбонилметил. Также необходимо отметить существенное влияние на наличие высокой антиагрегантной активности электронных характеристик конденсированной гетероцикли-

ческой системы, которая, возможно является одним из основных «фрагментов взаимодействия», что подтверждает перспективность классов Ы9-2,3-дигидро замещенных имидазо[1,2-а]бензимидазола и 1Ч'М3-замещенных имидазолов.

Рис.1. Влияние типа ядра производных бензимидазола на высокий уровень антиаг-регантной активности.

Примечание: 1.К9-имидазо[1,2-а]бензимидазолы; 2.№-2,3-дигидро-

имидазо[ 1,2-а]бензимидазолы; 3. Пиримидо[1,2-а]бензимидазолы; 4.2,3,4,10-тетрашдро-пурины 5. И'^-имидазолы; 6. Тиазоло[3,2-а]бензимидазолы; 7. 1,2,3,4-тетрагидро-оксазоло[2,3-1]пурины; 8. Ы'-бензимидазолы; 9. М'-1,2,4-триазолы; 10. М'-имидазо[ 1,2-а]бензимидазолы; 11.N1 -2,3-дигидро-имидазо[ 1,2-а] бензимидазо-лы; 12.1,2,4-триазоло[1,5-а]-бензимидазолы; 13. Пиразоло[1,5-а]бензимидазолы; 14. Пиролло [1,2-а]бензимидазолы.

По оси у - уровень коэффициента значимости антиагрегантной активности.

Высокий уровень антиагрегантной активности Слабое воздействие на активность Отсутствие антиагрегантной активности

Антиагрегантная активность производных бензимидазола in vivo. По способности блокировать внутрисосудистую агрегацию тромбоцитов in vivo выбранные соединения располагались в следующем порядке: РУ-891> РУ-670 > РУ-659 > РУ-254 > РУ-17 > РУ-1202 > РУ-487 > РУ-451 > РУ-295> РУ-502 > РУ-185 > ACIC (табл.2). Наибольшую способность предотвращать внутрисосудистую агрегацию тромбоцитов в дозе 50 мг/кг проявило соединение РУ-891, что подтверждает высокий антиагрегантный эффект данного вещества, полученный в опытах in vitro. Это позволило нам выбрать соединение РУ-891 для дальнейшего более углубленного изучения его антиагрегантной активности на различных моделях эксперименталь-

ной патологии и механизма действия, с учетом влияния на основные звенья патогенеза агрегации тромбоцитов.

Таблица 2. Влияние производных бензимидазола (50 мг/кг) и ацетилсалициловой кислоты (125 мг/кг) на внутрисосудистую агрегацию тромбоцитов, индуцированную внутривенным введением АДФ (1 мг/кг), (М±т, п=5).

N п/п Название вещества Уровень агрегации (отн.ед.) Д% ингибирования агрегации тромбоцитов

1. Контроль 20,3±0,89 -

2. РУ-891 5,15±0,92* 74,59±4,53*

3. РУ-451 7,39±1,38* 63,6±6,84*

4. РУ-295 7,89±1,02* 61,1б±5,07*

5. РУ-502 8,39±1,16* 58,63±5,74*

6. РУ-487 7,12±1,19* 64,91±5,87*

7. РУ-1202 7,04±1,26* 65,28±6,23*

8. РУ-670 4,87±0,53* 74,49±3,56*

9. РУ-17 6,77±1,25* 66,89±6,06*

10. РУ-659 5,81±0,81* 71,34±4,0*

11. РУ-254 6,03±0,91* 70,26±4,51*

12. РУ-185 8,73±0,92* 56,99±4,55*

13. АСК 14,49±0,7** 28,65±3,47**

*- (р<0,001); **-(р<0,05) -данные статистически значимы по отношению к контролю, критерий Манна-Уитни; n-число тестируемых животных.

Также для углубленного изучения антиагрегантной активности были выбраны два соединения, проявляющие антитромбоцитарное действие in vitro и in vivo, однако, обладающие еще и другими видами активности, которые могут представлять практический интерес. Соединение РУ-254, с изученными в эксперименте и в клинике антидиабетогенными свойствами, по антиагрегантному действию in vitro превосходит препарат сравнения АСК в 2,7 раза, а по условному терапевтическому индексу в 2,6 раза. Соединение РУ-185 с исследованными антиоксидантными и ишемическими свойствами [Косолапое, 2005] по способности ингибировать процессы агрегации тромбоцитов in vitro превышает препарат сравнения в 2,2 раза, а по условному терапевтическому индексу в 2,1 раза.

На рисунке 2 приведены данные дозозависимой антиагрегантной активности соединений и препарата сравнения in vivo. При этом ED50 для соединения РУ-891

составила 24 мг/кг, что в 8 раз меньше ED50 АСК, которая была равна 192 мг/кг. ED50 вещества РУ-254 была сравнима с ED50 соединения РУ-891, а значение ED50 вещества РУ-185 было в 4 раза меньше, чем у препарата сравнения.

Таким образом, в результате изучения влияния веществ на процессы агрегации тромбоцитов in vitro и in vivo по выраженности антиагрегантного действия три выбранных соединения и препарат сравнения можно расположить в следующем порядке: РУ-891>РУ-254>РУ-185>АСК.

Рис. 2. Влияние соединений РУ-254, РУ-185, РУ-891 и ацетилсалициловой кислоты на внутрисосудистую агрегацию тромбоцитов крыс, индуцированную АДФ (1 мг/кг).

Изучение антитромбогенных свойств производных бензимидазола. Проведенный сравнительный анализ антитромбогенной активности выявил преимущество антитромботического действия соединения РУ-891 перед другими соединениями и АСК (рис.3).

ЕБ5о данного вещества было в 4,9 раза меньше Е05о АСК. Оценка антитромботического действия соединения РУ-254 выявила его преимущество перед глиета-зидом и преимущество двух последних перед АСК. Соединение РУ-185 способное ингибировать перекисное окисление липидов также показало высокую антитром-ботическую активность, превосходящую препарат сравнения мексидол.

Рис.3. Влияние соединений: А - РУ-891 и ацетилсалициловой кислоты, ,Б-РУ-254, гликлазида и ацетилсалициловой кислоты, в - РУ-185, мексидола и ацетилсалициловой кислоты на время полной окклюзии сонной артерии на модели артериального тромбоза, индуцированного аппликацией хлоридом железа.

По оси абсцисс - доза препаратов (мг/кг), по оси ординат - время наступления полной окклюзии сонной артерии (мин)

В результате изучения антитромботического действия соединений РУ-891, РУ-254, РУ-185 и препаратов сравнения на модели артериального тромбоза, индуцированного анодным током, было показано, что все изученные вещества проявили высокую активность (табл.3). По выраженности данного вида действия соединение РУ-891 превосходило АСК в 3,1 раза, РУ-254 превышало действие гликлазида в 2,5 раза, а вещество РУ-185 - действие мексидола в 3,1 раза.

Таблица 3. Антитромботическая активность соединений РУ-891, РУ-254, РУ-185 (EDjo) и препаратов сравнения на модели тромбоза сонной артерии крыс, индуцированного электрическим током, (М±т).

N Название Доза, % увеличения времени окклюзии по EDso,

п/п Вещества мг/кг отношению к контролю мг/кг

43 72,9±5,84***

1. РУ-891 21,5 57,53±4,84*** 19,7

10,75 28,4±3,27**

36 90±8,98***

. 2. РУ-254 18 62,6±3,2*** 16,8

9 9,5±2,79

58 64,3±4,84***

3. РУ-185 29 43,7±6,26** 37,7

14,5 12,3±6,36

125 95,0±4,32***

4. АСК 60 20,3±2,83* 61,9

20 8.0±5,25

71 78,0±4,84**

5. Гликлазид 35,5 42,1±1,71*** 41,5

17,8 5,4±2,41

28 18,1±5,84

6. Мексидол 100 45,54±7,06** 117

200 62,66±3,27***

Данные статистически значимы по отношению к значениям, полученным в контроле * - р<0,05; ** -р<0,01; *** -р< 0,001 - критерий Манна-Уитни.

На фоне действия изученных веществ РУ-254, РУ-185, РУ-891 уменьшалась смертность белых мышей при системном коллаген-адреналиновом тромбозе, вызванном совместным введением тромботических агентов в хвостовую вену животных (табл.4). Наибольшую антитромботическую активность при данном виде экспериментального тромбоза проявили соединения РУ-891 и РУ-185. Выживаемость животных при их введении составила по 90% соответственно, что в 3 раза превышает эффект препарата сравнения АСК. Антитромботическая активность соедине-

ния РУ-254 была менее выраженной, однако превосходила известный антиагрс-гант в 2,3 раза.

Таблица 4. Влияние соединений РУ-891, РУ-254, РУ-185 в дозах, изоэк-вимоляльных дозе ацетилсалициловой кислоты, на выживаемость белых беспородных мышей на модели коллаген (0,5 мг/кг) - адреналинового (0,06 мг/кг) тромбоза, (М±т).

N Название вещества Число тести- Число погибших Выжившие

п/п руемых Животных животных животные, %

1. Контроль 20 19 5

2. РУ-891 10 1 90**#

3. РУ-254 10 3 70**

4. РУ-185 10 1 90**#

5. АСК 10 7 30

*-(р<0,05); ** - (р<0,01) данные статистически значимы по отношению к контролю, точный критерий Фишера

#-(р<0,05)- данные статистически значимы по отношению к группе мышей, получавших ацетилсалициловую кислоту, точный критерий Фишера.

Наличие данного вида активности у изученных соединений подтверждается проведенными гистологическими исследованиями органов животных (табл.5). В образцах легких контрольных животных при микроскопическом исследовании в

Таблица 5. Влияние соединений РУ-891, РУ-254, РУ-185 на изменение некоторых морфометрических параметров тромбов в сосудах легких мышей.

(М±т, п=5)

N п/п Название вещества Относительная площадь тромбов, % Средняя площадь тромба на срезе, мкм

1. Контроль (физ. р-р) 3, 538 ± 1,982 1423,5 ± 0,328

2. РУ-891 1,047 ±0,290* 399,8 ± 185,2 **

3. РУ-254 0,838 ± 0,688 ** 1257± 881,5

4. РУ-185 0,670 ±0,334 ** 554,4 ±388,5 **

5. АСК 1,327 ± 0Д52 * 1337,7 ±888,5

*- (р<0,01); ** - (р<0,001) данные статистически значимы по отношению к контролю, критерий Манна-Уитни; п -число тестируемых животных

значительной части сосудов микроциркуляторного русла были обнаружены белые тромбы, адгезированные к сосудистой стенке и находящиеся в просвете сосуда.

Таким образом, высокая антитромботическая активность производных бен-зимидазола на различных моделях артериальных тромбозов позволяет предположить, что в основе этого вида активности лежит угнетение процессов агрегации

тромбоцитов, так как именно тромбоциты играют ключевую роль в инициации данных видов тромбозов.

При изучении влияния соединений РУ-891, РУ-254 и РУ-185 на время кровотечения из хвостовой вены мышей наблюдалось удлинение данного показателя. Однако по сравнению с АСК время кровотечения под влиянием соединений изменялось не сильно относительно контроля, что позволяет предположить в будущем отсутствие или наличие слабовыраженных побочных эффектов в виде кровотечений (рис. 4).

Контроль АСК РУ-185 РУ-891 РУ-254

Рис 4. Влияние соединений РУ-254, РУ-185 , РУ-891 и АСК на время кровотечения у мышей.

* - данные статистически значимы по отношению к значениям, полученным в контроле, критерий Манна-Уитни (р<0,05);

#- данные статистически значимы по отношению к значениям, полученным при изучении АСК, критерий Манна-Уитни (р<0,05)

Влияние на тромбоцитарно-сосудистый гемостаз при экспериментальном диабете. Исходя из того, что важным составляющим микроангиопатии при сахарном диабете (СД) является дисфункция тромбоцитов [Ambrosi, 2006; Lopes, 2011] было изучено влияние производных бензимидазола на тромбоцитарно-сосудистый гемостаз при экспериментальной аллоксановой интоксикации [Chougale, 2007].

В связи с тем, что при СД проводится длительная гипогликемическая терапия, оценку эффективности действия веществ и препарата сравнения на гемостаз проводили после семидневного внутрижелудочного введения животным с тяжелой формой аллоксановой интоксикации. Исследуемые вещества РУ-891 и РУ-185 после курсового введения практически не оказывали влияния на уровень глюкозы в крови. Соединение РУ-254 и гликлазид достоверно снижали количество глюкозы в

крови на 29 и 27 % соответственно. В эксперименте при аллоксановой интоксикации наблюдалось статистически значимое повышение агрегации тромбоцитов по сравнению с интактными животными. Уменьшение данного показателя под влиянием соединений РУ-254, РУ-185, РУ-891 и гликлазида у диабетных крыс было статистически значимым. При этом соединения РУ-891 и РУ-254 превосходили по своей активности препарат сравнения, а соединение РУ-185 незначительно уступало ему (рис.5).

интактные диабет РУ-891 РУ-254 РУ-185 Гликлазид

Рис.5. Действие соединений РУ-891, РУ-254, РУ-185 и гликлазида при курсовом пероральном введении на агрегацию тромбоцитов крыс с экспериментальным диабетом ex vivo в дозах равных ED50 , полученных на модели внутрисосудистой агрегации тромбоцитов.

*- р<0,05 - данные статистически значимы относительно агрегации крыс с экспериментальным диабетом, критерий Манна-Уитни.

U - р<0,05- статистическая значимость относительно интактных животных, критерий Манна-Уитни.

В области сосудистого дефекта нарушается геометрия потока крови с явлениями турбулентности, которые являются одним из основных гидродинамических факторов сосудистого тромбоза [Плотников, 2005]. Эти процессы могут усиливаться на фоне синдрома повышенной вязкости, который наблюдается при СД. Оценивая влияние исследуемых веществ на ВК у крыс с аллоксановым диабетом, было выявлено статистически значимое снижение этого показателя у всех препаратов при различных скоростях сдвига, превосходящее препарат сравнения пентокси-филлин. Следует отметить, что наибольшее действие изучаемые вещества оказывали при низкосдвиговых значениях ВК. Наибольшую активность в данном случае проявило соединение РУ-891. Активность исследуемых веществ в отношении

влияния на ВК при высоких скоростях сдвига оказалась ниже у всей группы препаратов.

Индекс агрегации эритроцитов больных животных составил 2,31 (рис.6), что на 33% больше данного показателя у интактных животных. Изученные соединения уменьшали значения индекса агрегации эритроцитов. Так, вещество РУ-891 снижало данный показатель на 31,6% а соединения РУ-254 и РУ-185 на 28,5% и 26,4% соответственно. Препарат сравнения пентоксифиллин уменьшал индекс агрегации эритроцитов больных животных на 10,4%.

пентоксифиллин РУ-891 РУ-185 РУ-254

' !

[I 1

0,5

1,5

2,5

Индекс агрегации эритроцитов

Рис.6. Влияние соединений РУ-891, РУ-254, РУ-185 и пентоксифиллина на индекс агрегации эритроцитов крыс с экспериментальным аллоксановым диабетом.

*-р<0,05 - данные статистически значимы относительно индекса агрегации эритроцитов крыс с экспериментальным диабетом

Нарушения гемостаза при СД обусловливают ускоренное прогрессирование атеросклероза, что сопровождается риском возникновения тромбозов [Апкалуа, 2006]. Поэтому нами была изучена антитромботическая активность соединений на модели артериального тромбоза, вызванного повреждением стенки артерий электрическим током при экспериментальном СД. В результате данного исследования установлена высокая антитромботическая активность производных бензимидазола (рис.7). Наибольшую способность пролонгировать время образования тромба проявили гипогликемическое соединение РУ-254 и гликлазид, что связано со способностью данных соединений не только устранять глюкозотоксичность, но и оказывать ингибирующее влияние на процессы агрегации тромбоцитов.

диабет РУ-254 РУ-185 РУ-891 Гликлазид

Рис.7 Влияние соединений РУ-891, РУ-254, РУ-185 и гликлазида при курсовом введении на время наступления полной окклюзии сонной артерии крыс с аллокса-новой интоксикацией на модели экспериментального тромбоза, индуцированного электрическим током.

*- р<0,05 - данные статистически значимы относительно времени наступления окклюзии сонной артерии у группы контрольных крыс с экспериментальным диабетом.

Таким образом, установленная способность производных бензимидазола улучшать состояние тромбогенного потенциала крови при СД имеет значение для создания на их основе новых лекарственных средств для лечения и предупреждения развития осложнений при СД II типа.

Изучение механизма действия. Важным аспектом создания лекарственных препаратов является изучение их механизма действия, так как в будущем это предполагает наличие у них побочных эффектов и токсического действия.

Анализ предполагаемых механизмов действия с помощью методов in silico. В системе PASS для соединений РУ-891, РУ-254 и РУ-185 были получены значения прогнозных показателей 79 видов биологической активности, релевантных ан-тиагрегантной. С учетом полученных значений можно предположить, что механизм антиагрегантной активности соединений РУ-891, РУ-254 и РУ-185 может реализовываться через ингибирование цГМФ- и цАМФ-зависимой фосфодиэстера-зы. Вместе с тем, для соединений РУ-891 и РУ-254 прогнозируется маловыражен-ная активность в отношении ингибирования кальмодулина и кальций-кальмодулин-зависимой протеинкиназы.

Прогноз уровня фармакологической активности соединений РУ-891, РУ-254 и РУ-185 в ИТ «Микрокосм» также показал наличие или отсутствие некоторых возможных механизмов антиагрегантного действия изученных соединений.

По результатам данного вида прогноза вещество РУ-891, вероятно, будет проявлять высокую антиагрегантную и кальций-блокирующую активности, так как имеет три положительных оценки по консервативной, нормальной и рисковой стратегиям прогноза в отношении данных видов действия. Механизм антиагре-гантной активности вещества РУ-254, согласно результатам прогноза в ИТ «Микрокосм», возможно, не должен быть связан с кальций-блокирующим и антикаль-модулиновым действием. Соединение РУ-185 предположительно должно проявлять высокую активность в отношении ингибирования кальмодулина, а также умеренную антиагрегантное и кальций-блокирующее действие. Согласно ранее проведенным исследованиям по изучению соединений РУ-254 и РУ-185 на активность ФДЭ цАМФ [Сибирякова, 1995], было показано, что вещество РУ-254 не оказывает ингибирующего действия ни на базовую активность ФДЭ, ни на активность ФДЭ цАМФ, зависимую от белка-кальмодулина. Соединение РУ-185 проявляет выраженную блокирующую активность в отношении кальмодулин-зависимой ФДЭ цАМФ, не оказывая влияние на ее базовую активность.

Экспериментальное изучение механизма действия производных бензимида-зола. Сложность проблемы избирательной фармакологической регуляции активности тромбоцитов заключается в том, что на их мембране экспрессированы рецепторы к различным агонистам агрегации. На начальном этапе изучения механизма действия производных бензимидазола было исследовано, не являются ли данные соединения конкурентными антагонистами индукторов агрегации тромбоцитов.

Величины антиагрегантной активности изученных соединений в отношении индукторов агрегации тромбоцитов, вызванной АДФ, адреналином, коллагеном, арахидоновой кислотой, Ш6619, тромбином и А23187, выраженные в ЕС50 представлены в таблице 6.

Соединение РУ-891 выраженно блокировало агрегацию тромбоцитов, вызванную всеми изученными индукторами, однако наибольшую активность веще-

ство проявило в отношении активации тромбоцитов, вызванной адреналином и кальциевым ионофором (А23187), что, с учетом механизма возникновения данных активаций, может указывать на способность соединения РУ-891 снижать уровень кальция в тромбоцитах.

Таблица 6. Влияние соединений РУ-254, РУ-185 и РУ-891 на агрегацию тромбоцитов кролика, вызванную различными индукторами.

n п/п Индукторы агрегации тромбоцитов Концентрация индуктора ес50,м

РУ-891 РУ-254 РУ-185

1. АДФ 5 мкМ 1,3 х 10"4 2,6 х 10" 3,3x10"4

2. Адреналин 5 мкМ 7,9 х Ю-6 2,5 х 10" 6,0x10"5

3. Арахидоновая к-та 50мкМ 7,9х 10"' 8,4 х 10° 7,2x10"'

4. Коллаген 20 мкг/мл 1,4х 10"' 1,8 хЮ"4 7,3x10"'

5. Тромбин 0,5 ед/мл 6,8 х 10"' 1,6 х Ю-" 1,0 хШ"

6. Ш6619 3 мкМ 9,6 х 10"' 1,2 х 10'3 8,3 х 10"'

7. А23187 3 мкМ 1,2 х 10"" 4,8 х 10"5 1,1 х Ю-4

Гипогликемическое соединение РУ-254 также блокировало агрегацию тромбоцитов, вызванную различными индукторами, проявив наибольшую ингибирующую способность в отношении активации красных кровяных пластинок, вызванной арахидоновой кислотой и кальциевым ионофором. Низкая активность данного вещества в отношении агрегации тромбоцитов, индуцированной тромбином, дает возможность предположить, что механизм его антиагрегантного действия, вероятно, не будет реализовываться через снижение активации фосфолипазы С и угнетения образования инозитол-1,4,5-трифосфата. Антиоксидантное вещество РУ-185 проявило ингибирующую активность в отношении всех изученных индукторов. Блокирование агрегации тромбоцитов, вызванной агонистом тромбоксаноых рецепторов и 46619, соединениями РУ-891 и РУ-185 может указывать на снижение уровня ТХА2 Относительно высокие концентрации веществ, необходимые для проявления их антиагрегантого эффекта в отношении изученных индукторов агрегации тромбоцитов, подтверждают, что

первичным местом воздействия данных соединений не являются мембранные ре-цепторные системы данных агонистов.

Ключевую роль в агрегации тромбоцитов играет P2YI2 рецептор тромбоцитов [Nawarskas,2011], При изучении влияния соединений РУ-891, РУ-254 и РУ-185 в концентрации 1 мкМ на данный подтип рецепторов методом малоуглового рассеяния, соединение РУ-891 ингибировало агрегацию тромбоцитов, вызванную активацией P2Y12 рецепторов на 98%, тогда как вещество-стандарт PPADS на 21,1%. Эффект соединений РУ-254 и РУ-185 оказался статистически незначимым относительно вещества сравнения. Выраженная способность соединения РУ-891 блокировать процесс агрегации тромбоцитов, вызванной активацией P2Yi2 рецепторов, предполагает возможное его влияние на активацию аденилатциклазного пути (рис. 8).

шт ру-185

l;:;-x>:;.::;:::;:;>:;:;xv:;.v:;j РУ-254

* мжжжтмжжжжж ™

-120 -100 -80 -60 -40 -20 0

% ингибирования агрегации тромбоцитов

Рис.8. Влияние изученных соединений в концентрации 1 мкМ на степень агрегации тромбоцитов кролика в кальциевой среде, индуцированной 200 нМ АДФ. р<0,001-данные статистически значимы по отношению к веществу сравнения, критерий Манна-Уитни.

Перспективным направлением в изучении механизма действия соединений с антиагрегантной активностью является воздействие на баланс между продуктами метаболизма арахидоновой кислоты - простациклином (ПГ12) и ТХА2. В результате проведенных исследований было показано, что стенка аорты крыс образует и высвобождает в инкубируемую среду сильный антиагрегационный фактор по действию, подобный простациклину. Внутривенное введение адреналина снижает ан-тиагрегационную активность стенки аорты, что ведет к повышению тромбогенного потенциала крови и увеличивает риск возникновения тромбоза. Хорошо известно,

что ацетилсалициловая кислота уменьшает синтез эндотелием простациклина [Лу-панов, 2009]. В отличие от нее производные бензимидазола не оказывают влияния на образование простациклино-подобной субстанции стенкой аорты у интактных животных и восстанавливают ее антиагрегационную функцию, сниженную адреналином (рис.9).

ТХА2 является мощным проагрегантом и вазоконстриктором. Доказательством повышения синтеза ТХА2 в тромбоцитах является обнаружение в них значительного количества малонового диальдегида (МДА) (Smith, 1976). В результате данной серии исследований было показано, что соединения РУ-891, РУ-254 и РУ-185 при внутрижелудочном введении крысам достоверно снижали уровень МДА в тромбоцитах, стимулированных тромбином, превосходя по своей активности ацетилсалициловую кислоту (рис. 10).

■ft £

§ 70

ä* so

■t? Ш

1 1 50

« i 40 -к ©

« S 301

i Ъ 20

I 5 10 1

я s

Ь 5 о

е- о

™ s

s А

т ^

< #

Рис. 9 Влияние соединений РУ-891, РУ-254 и РУ-185 на антиагрегационную активность сосудистой стенки, сниженную адреналином (М±т)

*- р<0,05 - данные статистически значимы по отношению к результатам, полученным в контроле; Ф - р<0,05 данные статистически значимы по отношению к показателю агрегации тромбоцитов крыс индуцированных адреналином, критерий Манна-Уитни.

Биохимические процессы, происходящие при активации, а в дальнейшем при агрегации красных кровяных пластинок, вызванные различными химическими и биологическими стимуляторами, отличаются по механизмам действия. Однако действие всех этих стимуляторов сводится к одному: повышению уровня кальция

в цитоплазме тромбоцитов [Colomer, 2010]. Поэтому можно полагать о том, что ионам Са2~ принадлежит ключевая роль в регуляции функциональной активности тромбоцитов, при этом особо важное значение имеют внутриклеточные ресурсы Са2+ [Harper, 2009].

< S а®

тромбин

АСК

Рис.Ю Влияние соединений РУ-254, РУ-185, РУ-891 и ацетилсалициловой кислоты (АСК) на изменение уровня малонового диальдегида (МДА) в тромбоцитах крыс в процессе агрегации, индуцированной тромбином.

Примечание: исход - содержание МДА в интактных тромбоцитах; тромбин - уровень МДА после стимуляции тромбоцитов тромбином

* -р<0,01 -данные статистически значимы относительно исхода (контроль) **-р<0,01 -данные статистически значимы относительно, агрегации тромбоцитов, индуцированной тромбином, критерий Манна-Уитни.

С целью уточнения некоторых механизмов антиагрегантного действия производных бензимидазола было исследовано их влияние на уровень внутриклеточного и мембраносвязанного Са2+ с использования флуоресцентных зондов. Для того, чтобы определить, является ли действительно действие изученных соединений на прирост цитоплазматической концентрации Са2+, индуцированный тромбином, результатом ингибирования входа и мобилизации Са2+ из внутриклеточных депо, эксперименты с использованием флуоресцентных зондов были выполнены в два этапа как в присутствии, так и в отсутствие физиологических концентраций Са2+. Прирост флуоресценции Рига-2/АМ, индуцированный тромбином, в присутствии внеклеточного Са2+ отражает суммарный прирост внутриклеточного Са2т за счет входа в клетку и мобилизации из внутренних источников. В то же время увеличение флуоресценции Бига-2/АМ, индуцированное тромбином в отсутствие внеклеточного Са2+, отражает высвобождение Са2+ из внутриклеточных депо.

Производные бензимидазола и веранамил статистически значимо снижали концентрацию внутриклеточного кальция в тромбоцитах в присутствии его физиологических концентраций. Наибольшую активность проявило соединение РУ-891 (рис.11).

300 1

250

200 -

5 150 х

'§100 • 50 0

Й и:

* у///а

Контроль РУ-891 РУ-254 РУ-185

АСК Верапамил

Рис.11 Влияние соединений РУ-891, РУ-254, РУ-185 и препаратов сравнения в дозе 100 мкМ на прирост уровня внутриклеточного кальция индуцированный тромбином.

*-р<0,05-данные статистически значимы относительно контроля, критерий Манна-Уитни

Препарат сравнения АСК оказалась не эффективной, так как снижала прирост внутриклеточного кальция всего на 1,7 % по сравнению с контролем. Полученные данные свидетельствуют о способности производных бензимидазола и ве-рапамила снижать суммарный прирост ионов Са2+ за счет его входа в клетку и мобилизации из внутренних источников. ЕБзо соединений при этом составила для РУ-891-3,6 мкМ, для РУ-254 - 34 мкМ и для РУ-185 - 100 мкМ (рис.12).

На втором этапе было изучено влияние соединений на уровень внутриклеточного кальция, высвобождаемого из внутриклеточных депо (эксперименты в бескальциевой среде). Антагонист ионов кальция верапамил, соединения РУ-254 и РУ-185 в данном исследовании показали свою неэффективность. Напротив, соединение РУ-891 проявило высокую активность на предмет ингибирования кальция, высвобождаемого из внутриклеточных депо тромбоцитов. ЕО50 вещества РУ-891 при этом составила 5,1 мкМ (рис.13).

Таким образом, проведенные исследования по влиянию производных бензимидазола на уровень внутриклеточного кальция в тромбоцитах, позволяют пола-

гать, что соединение РУ-891 обладает выраженной ингибирующей активностью в отношении данного показателя.

—♦-РУ-254 -ЕС50 -34 мкМ

- -#- - РУ-185-ЕС50-100МКМ —» - РУ-891-ЕС50-3.6 мкМ

1 10 100 Доза, мкМ

Рис.12 Влияние соединений РУ-891, РУ-254 и РУ-185 на прирост уровня внутриклеточного кальция в тромбоцитах, индуцированного тромбином (А % ингибирования) в кальциевой среде.

Доза, мкМ

' Рис.13 Влияние соединения РУ-891 на уровень внутриклеточного

кальция в тромбоцитах, индуцированный тромбином (без кальциевая среда)

* -р<0,01 * * -р<0,001 -данные статистически значимы относительно контроля, критерий Манна-Уитни.

Повышение содержания ионизированного кальция в плазме крови вызывает увеличение доли мембраносвязанного кальция. Он способен связываться с мембранными анионами (главным образом, с карбоксильными группами белков и кислыми фосфолипидами) [ Хапс1ег, 2005]. Мембраносвязанный кальций участвует в агрегатообразовании тромбоцитов, а также способен значительно изменять не только поверхностный заряд, но и свойства и структуру клеточной мембраны.

Также повышается вероятность входа ионов в клетку ^еГашт, 2010]. При изучении влияния производных бензимидазола на уровень мембраносвязанного кальция в тромбоцитах было показано, что из трех изученных соединений только вещество РУ-185 статистически значимо в дозе 100 мкМ ингибирует данный данный показатель (табл.7).

Таблица 7. Влияние соединений РУ-254, РУ-185, РУ-891 на уровень мембраносвязанного кальция в тромбоцитах (опыты in vitro) (M±m).

№ Название Доза, Д% ингибирования

п/п соединения мкМ уровня кальция

1. РУ-891 100 4,13±2,9

2. РУ-254 100 11,8±3,69

3. РУ-185 100 40,1±1,2*

*-р<0,001- данные статистически значимы по отношению к контролю, критерий Манна-

Уитни

Ввиду того, что соединение РУ-891 проявило высокую активность при влиянии на уровень внутриклеточного Са2+, представилось необходимым выяснить, не связан ли этот эффект вещества с действием на потенциал-зависимые кальциевые каналы. В связи с этим производные бензимидазола были изучены на модели гиперкалиевой контрактуры. В результате проведенных экспериментов на изолированной портальной вене было показано, что вещества РУ-891, РУ-254 и РУ-185 в диапазоне доз от 1 до 100 мкМ не снижали статистически значимо гиперкалиевую контрактуру. В отличие от них препарат сравнения верапамил практически полностью подавлял ее. Полученные результаты подтверждают, что ингибирова-ние соединением РУ-891 внутриклеточного кальция в тромбоцитах не связано с его влиянием на потенциал-зависимые кальциевые каналы.

Учитывая важную роль дисфункции эндотелия при повышении тромбогенного потенциала крови, также необходимо было выяснить, не влияют ли производные бензимидазола на функцию эндотелия. В результате проведенных исследований показано, что изученные соединения не оказывают какого-либо влияния на эндоте-лиальную функцию сосудов интактных животных. Учитывая, что важным составляющим микроангиопатий при сахарном диабете является ослабление эндотелий-зависимой релаксации, было исследовано действие веществ РУ-891, РУ-254 и РУ-185 на функцию эндотелия сосудов при семидневном введении крысам с экспери-

ментальным аллоксановым диабетом. Коэффициент эндотелиальной дисфункции (КЭД) у крыс с экспериментальным аллоксановым диабетом составил 3,1, что достоверно превышало контрольные значения в 2,6 раза. Данная разница в показателях свидетельствует о существенном нарушении функции эндотелия сосудов у животных с аллоксановой интоксикацией. Соединения РУ-891, РУ-254 и РУ-185 достоверно снижали КЭД относительно разницы контрольных значений, полученных на животных с аллоксановой интоксикацией по сравнению с контрольными значениями интактных крыс на 87,94 и 99% соответственно (рис.14).

интактные диабет РУ-891 РУ-254 РУ-165

Рис.14 Влияние соединений РУ-891, РУ-254 и РУ-185 при курсовом введении на коэффициент эндотелиальной дисфункции крыс с аллоксановым диабетом в дозах, равных ЕО50, полученных на модели внутрисосудистой агрегации тромбоцитов.

*- р<0,05 - данные статистически значимы относительно интактных животных **-р<0,001-данные статистически значимы относительно животных с экспериментальным диабетом.

При изучении действия производных бензимидазола на параметры свертывания крови статистически значимых изменений получено не было, что указывает на связь антитромбогенного действия изученных соединений с их влиянием на тромбоцитарно-сосудистый гемостаз.

Изучение возможных механизмов действия с использованием методов ш эШсо. С целью более детального анализа особенностей взаимодействия производных бензимидазола с различными мишенями патогенеза агрегации тромбоцитов, был выполнен анализ сходства структур изученных соединений со структурами 13 стандартных препаратов сравнения, проявляющих различные механизмы антиагре-гантного действия. В результате проведенного анализа было выявлено сходство молекулярной структуры соединений РУ-891 и РУ-254 с молекулярными структу-

рами ФДЭ цАМФ III типа и ТХАг-синтетазы, что позволяет предположить возможное влияние производных бензимидазола на данные биомишени. Структура вещества РУ-185 в большей степени была схожа со структурами препаратов с ан-тикальмодулиновым действием и структурами ингибиторов ФДЭ цАМФ III типа.

Также для анализа предполагаемого механизма взаимодействия изученных соединений с выбранными мишенями был выполнен докинг их молекулярных моделей в сайты связывания молекулярных моделей кальмодулина, аденилатциклазы I типа, ФДЭ цАМФ III типа и ТХАгсинтетазы. При локировании соединения РУ-891 в сайты связывания кальмодулина, аденилатциклазы I типа и ФДЭ цАМФ III типа было показано, что максимальные значения расчетной величины энергии связывания РУ-891 (7,1) выше, чем у препаратов сравнения хлорпромазина, фор-сколина и пентоксифиллина. При локировании в сайт связывания ТХАг-синтетазы значения энергии докинга соедкнения РУ-891 и препарата сравнения ридогреля были равны. В результате докинга соединения РУ-254 в структуры выбранных мишеней, наибольшая энергия связывания была получена для сайта ТХАгсинтетазы (6,1) уступающая, однако, значениям энергии связывания препарата сравнения ридогрела (7,9). При докировании соединения РУ-185 в сайты связывания выбранных молекул-мишеней были получены более высокие значения энергии докинга данного вещества в сравнении с энергиями докинга ингибиторов кальмодулина, ФДЭ цАМФ III типа и ТХАг-синтетазы. Анализируя результаты данного исследования, можно только предполагать, что возможный механизм действия изученных производных бензимидазола может быть реализован через взаимодействие с данными белками - мишенями.

Таким образом, на основании полученных экспериментальных данных возможный антиагрегантный механизм действия соединения РУ-891 может реализо-вываться через блокирование P2Yi2 рецепторов тромбоцитов, ингибирование синтеза тромбоксана Аг и снижения уровня внутриклеточного кальция в тромбоцитах. На способность данного соединения снижать синтез тромбоксана Аг, помимо снижения уровня МДА в тромбоцитах крыс, индуцированных тромбином ex vivo, указывает способность вещества РУ-891 выраженно ингибировать агрегацию тромбоцитов in vitro, вызванную арахидоновой кислотой, коллагеном и агонистом тром-боксановых рецепторов U46619.

Механизм антиагрегантного действия гипогликемического соединения РУ-254 связан со снижением синтеза ТХА2. Нарушение тромбоцитарной реактивности при СД связывают именно с нарушением баланса простагландинов, т.е. с повышением уровня проагреганта и вазоконстриктора ТХА2 и снижением концентрации антиагреганта и вазодилататора простациклина. Ингибирующее влияние соединения РУ-254 на синтез ТХА2, восстановление им антиагрегационной активности сосудистой стенки при патологии подтверждают способность данного вещества уменьшать гиперадгезивность и гиперагрегацию тромбоцитов, что может стать важным преимуществом в терапии сахарного диабета II типа.

Механизм действия антиоксидантного соединения РУ-185 также может реа-лизовываться через ингибирование кальмодулин-зависимой ФДЭ цАМФ и снижение синтеза ТХА2. Кроме того, все три соединения проявляют выраженное анти-тромботическое действие на различных моделях артериальных тромбозов и при экспериментальном сахарном диабете, превосходя по своей активности препарат сравнения ацетилсалициловую кислоту. Изученные вещества, в отличие от аспирина, не влияют на синтез простациклина сосудистой стенкой и в меньшей степени удлиняют время кровотечения, что является их важным преимуществом перед последним.

Фармокинетические исследования. На доклиническом этапе исследования соединения РУ-254 была разработана и изучена фармакокинетика субстанции таб-летированной лекарственной формы при пероральном использовании (Дудченко, 2001; Смирнова, 2004). Данный путь введения является наиболее оптимальным для исследуемого соединения, однако, учитывая наличие высокой антитромбоген-ной активности у гипогликемического соединения РУ-254 и, в связи с этим, возможность использования его при острых осложнениях сахарного диабета II типа, возникла необходимость изучения фармакокинетики и общетоксикологических свойств его внутривенной лекарственной формы. Тем более, что внутрисосудистый путь введения веществ является наиболее удобным для изучения процессов распределения и экскреции препарата, поскольку тот сразу и полностью попадает в системный кровоток.

Были исследованы основные фармакокинетические параметры соединения РУ-254 и установлены закономерности распределения, экскреции данного вещест-

ва в организме крыс при внугрисосудистом введении. Соединение РУ-254 после внутривенного введения крысам в дозе 25 мг/кг имеет максимальную концентрацию на 5 минуте эксперимента как в цельной крови (24,609мкг/мл), так и в плазме (21, 01мкг/мл). После этого наблюдается быстрое снижение концентраций. Соединение РУ-254 определяется в цельной крови и плазме до 12 часов. За это время концентрация вещества снижается в среднем более, чем в 20 раз (на пятой минуте определяется 21,006 мкг/мл, на 12 часу - 0,972 мкг/мл плазмы крови). Некоторые различия в определяемых концентрациях исследуемого вещества в цельной крови, по сравнению с плазмой, по-видимому, предполагают возможность его связывания с форменными элементами крови.

В организме соединение РУ-254 начинает обнаруживаться во всех органах и тканях с 5-ой минуты эксперимента, в то время как максимальные его концентрации фиксируются в них в различное время. Так, быстрее всего вещество достигает максимальных значений в сердце, печени и почках. Максимальное содержание исследуемого вещества в жировой и мышечной ткани отмечается к 30-ой минуте эксперимента. Наиболее высокие уровни содержания вещества были выявлены в органах с высоким уровнем кровотока - селезенке (тканевая доступность - 9,79) и легких (тканевая доступность - 6,02), а также органам элиминации - печени (тканевая доступность - 3,52) и почках (тканевая доступность - 3,89).

Полученные данные позволяют сделать вывод, что концентрация соединения в тканях превышает его содержание в плазме крови в несколько раз. При этом отмечается четкая зависимость между содержанием соединения и уровнем органного кровотока: наибольшие количества определяются в органах с сильной васкуляри-зацией - легких, селезенке, сердце. Одновременно высокие концентрации отмечаются в печени и почках, что свидетельствует об интенсивных процессах элиминации вещества в организме крысы. При изучении экскреции вещества РУ-254 с мочой было выявлено, что оно определяется в моче уже на первом часу исследования, выделение достигает максимального уровня к 8 часу и продолжается более 48 часов.

Изучение общетоксических свойств. По результатам исследований острой токсичности вещества РУ-254 при внутривенном введении крысам рассчитаны величины Ы)5о Ы>п, Ь084 и определен уровень его токсичности. ЬО50 для самок со-

ставила 230,4 мг/кг, а для самцов 271,0 мг/кг. Как видно из полученных данных, исследуемые величины зависят от пола животных. При этом пороги летальности (LD50, LD17, LD84) у вещества РУ-254 оказались выше для самок, чем для самцов. Обращает на себя внимание и факт незначительной корреляции доз в величинах (LDjo, LD¡7, LD84). Таким образом, по установленным величинам токсичности вещество РУ-254 можно отнести к малотоксичным.

На основании результатов, полученных при изучении хронической токсичности, можно заключить, что вещество РУ-254, вводимое крысам внутрибрюшин-но в течение 1 месяца в дозах 1/50; 1/10 и 1/3 от ЛДм, не вызывает патологических изменений со стороны ЦНС, сердечно сосудистой и выделительной систем. Выявлено, что токсикологический профиль вещества РУ-254 зависит как от его дозы, так и пола животных. Установленные изменения в состоянии и поведении, экскреторной, поглотительно-выделительной и обезвреживающей функциях почек и печени у крыс, получавших вещество в дозе 1/3 от ЛД5С, были обратимыми и нивелировались после отмены.

ВЫВОДЫ

1. Конденсированные производные бензимидазола являются новым химическим классом антитромбогенных веществ.

2. Из 14 классов гетероциклических азотсодержащих соединений наиболее перспективными по антиагрегантному действию in vitro и in vivo являются производные К9-2,3-дигидро-имидазо[1,2-а]бензимидазола и ЬГ'^-имидазола. При этом способность веществ данных классов ингибировать процессы агрегации тромбоцитов зависит от типа и характеристик гетероциклического ядра, липофиль-ных, стерических и электронных параметров заместителей.

3. Наиболее активное соединение РУ-891 по способности ингибировать процессы агрегации тромбоцитов превосходит препарат сравнения АСК в 5,5 раза, а по терапевтическому индексу в 10 раз. Антидиабетическое соединение РУ-254, по антиагрегантному действию активнее препарата сравнения в 2,7 раза, а по условному терапевтическому индексу в 2,6 раза, а антиоксидантное соединение РУ-185 в 2,2 и в 2,6 раз соответственно.

4. Производные бензимидазола РУ-891, РУ-254 и РУ-185 оказывают выраженное антитромботическое действие на различных моделях артериальных тромбозов. На моделях тромбозов, индуцированных аппликацией хлорида железа и электрического тока на сонную артерию крыс, соединение РУ -891 превосходит по активности АСК, соединение РУ-254 - гипогликемическое средство гликлазид, а соединение РУ-185- антиоксидантный препарат мексидол. Соединение РУ-891 и РУ-185 предотвращают гибель 90% , а соединение РУ-254 - 70% животных на модели генерализованного адреналин-коллагенового тромбоза на мышах.

5. Вещества РУ-891, РУ-254 и РУ-185 при пероральном курсовом введении животным с экспериментальным диабетом оказывают антитромботическое действие на модели артериального тромбоза, вызванного повреждением стенки артерий электрическим током, восстанавливают сниженную функцию эндотелия и снижают вязкость крови, превосходя препарат сравнения пентоксифиллин. Антитромбоген-ная активность антидиабетогенного соединения РУ-254 доказана в клинических испытаниях у больных с сахарным диабетом II типа.

6. В исследованиях in silico показано, что вещество РУ-891 может снижать уровень внутриклеточного кальция в тромбоцитах, ингибировать ФДЭ цАМФ и наряду с соединениями РУ-254 и РУ-185 ингибировать синтез ТХА2. Кроме того, вещество РУ-185 может обладать антикальмодулиновым действием.

7. Соединения РУ-891 и РУ-185 в различной степени выраженности блокируют агрегацию тромбоцитов, вызванную АДФ, коллагеном, адреналином, арахидоно-вой кислотой, тромбином, агонистом тромбоксановых рецепторов U46619. В отличие от данных веществ соединение РУ-254 оказывает слабое ингибирующее действия на агрегацию тромбоцитов, вызванную тромбином и U46619. Вещество РУ-891 блокирует агрегацию тромбоцитов, вызванную активацией P2Yi2 рецепторов тромбоцитов.

8. Вещества РУ-254, РУ-185 и РУ-891 не оказывают влияние на антиагрегаци-онную активность сосудистой стенки в норме, однако восстанавливают данную активность, сниженную адреналином.

9. Соединения РУ-891, РУ-254 и РУ-185 снижают уровень проагреганта и вазо-констриктора ТХА2, что подтверждается снижением количества МДА в условиях патологии ex vivo, вызванной тромбином. Механизм снижения уровня внутрикле-

точного кальция в тромбоцитах, индуцированных тромбином, под влиянием соединения РУ-891 не связан с влиянием на потенциал-зависимые кальциевые каналы. Вещество РУ-185 через ингибирование кальмодулин-зависимой ФДЭ цАМФ уменьшает уровень общего и мембраносвязанного кальция в тромбоцитах.

10. В результате проведенного фармакокинетического исследования были установлены закономерности распределения и экскреции соединения РУ-254 в организме крыс при внутривенном введении.

11. В соответствии с классификацией И.В. Саноцкого соединение РУ-254 при внутривенном введении относится к малотоксичным веществам. Изучение хронической токсичности соединения РУ-254 при данном способе введения в дозах 1/50; 1/10 и 1/3 от ЛД50 не выявило патологических изменений со стороны органов и систем у животных. Установленные изменения в поведении, экскреторной, поглотительно-выделительной и обезвреживающей функциях почек и печени, у крыс, получавших вещество в дозе 1/3 от ЛД50, были обратимыми и проходили после отмены вещества.

12. Доклиническое изучение безопасности соединения РУ-254 при внутривенном введении не выявило проявлений, препятствующих проведению клинических испытаний данной лекарственной формы.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Созданная методология поиска соединений с выраженной антиагрегантной активностью может быть использована при синтезе новых веществ и для проведения направленного поиска соединений, снижающих тромбогенный потенциал крови.

2. Рекомендовано проведение фармакокинетических, токсикологических и фармацевтических исследований соединений РУ-891 с целью завершения формирования пакета документов для получения разрешения на проведение клинических испытаний нового антитромботического средства.

3. Включить в протоколы клинических исследований нового противодиабети-ческого средства диабенол изучение его влияния на тромбогенный потенциал крови.

4. Антитромбогенное действие соединения РУ-185 вносит вклад в его анти-ишемическую активность. Поэтому при составлении протоколов клинических испытаний антиишемического действия соединения РУ-185, необходимо включить исследование показателей тромбогенного потенциала крови.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

Статьи в научных журналах и изданиях, рекомендованных ВАК РФ

1. Спасов A.A., Кучерявенко А.Ф., Чепурнова М.В., Ленская К.В. Антитромботическая активность гипогликемических средств// Журнал. Регионарное кровообращение и микроциркуляция.-2011 .-2(3 8).-С.95-98.

2. Спасов A.A., Анисимова В.А., Петров В.И., Кучерявенко А.Ф. Средство, проявляющее антиагрегантную активность (зЫ-828)//положительное решение о выдаче патента на изобретение по заявке № 2011131915/20(046992) от 2.08. 2011.

3. Анисимова В.А., Спасов A.A., Косолапое В.А., Кучерявенко А.Ф. Синтез и фармакологическая активность солей 3-ацетил-2-К-9-диалкиламиноэтилимидазо[1,2-а] бензимдазолов //Хим.-фарм. журнал, 20Ю.-Т.44.-№3.-С.8-13.

4. Спасов A.A., Кучерявенко А.Ф., Салазникова O.A. Влияние гипогликемических средств на гемостаз // Экспериментальная и клиническая фармакология.-2010.-№ 8,-С.26-28.

5. Спасов A.A., Анисимова В.А., Петров В.И., Кучерявенко А.Ф., Толпыгин И.Е., Минкин В.И Средство, проявляющее антитромбогенную активность (РУ-891)// положительное решение о выдаче патента на изобретение по заявке № 2010145884(066152) от 10.11.2010.

6. Спасов A.A., Анисимова В.А., Петров В.И., Кучерявенко А.Ф., Толпыгин И.Е., Минкин В.И.Средство, проявляющее антитромбогенную активность (Ру-185) // положительное решение о выдаче патента на изобретение по заявке № 2010145885(066153) от 10.11.2010.

7. Спасов A.A., Кучерявенко А.Ф., Майстренко Б.П. Антиагрегантная активность гипогликемических средств/Журнал Экспериментальная и клиническая фармаколо-гия.-2009,- Т.72,- № 6,- С.27-29.

8. Анисимова В.А., Спасов A.A., Толпыгин И.Е., Кучерявенко А.Ф. и др. Синтез и фармакологическая активность дигидрохлоридов 3-(2,2,2-трихлор-1-гидроксиэтил)имидазо [1,2-а]-бензимидазола // Хим-фарм. журнал,- 2009.- Т.43,-№9.-С 9-12.

9. Спасов A.A., Кучерявенко А.Ф., Салазникова O.A. Влияние гипогликемических средств на гемореологические параметры крови //Журнал Экспериментальная и клиническая фармакология,- 2009.-Т. 72.-№5,- С.31-34.

10. Анисимова В.А., Толпыгин И.Е., Спасов A.A., Кучерявенко А.Ф.и др. Синтез и биологическая активность N-ацилметил-замещенных 9Н-2,3 дигидроимидазо- и 10Н-2,36 4,10-тетрагидропиримидо (1,2-а) бензимидазолов и продуктов их восстановления //Хим.-фарм. журнал,- 2006.-Т.40.-№5 С.27-33.

11. Анисимова В.А., Спасов A.A., Косолапов В.А., Кучерявенко А.Ф. и др. Фармакологическая активность 2-метоксифенил-замещенных 9-диалкиламиноэтилимидазо (1,2-а) бензимидазолов// Хим.-фарм. журнал.- 2005.- Т.36.- N9.-C.26-32.

12. Анисимова В.А., Островский О.В., Дудченко Г.П. Кучерявенко А.Ф. и др.Синтез и фармакологическая активность З-(ароил)- и З-(гетароил) имидазо (1,2-а) бензимидазолов // Хим.-фарм. журнал,- 2002.-36.(12б).-С,3-8.

13. Анисимова В.А., Панченко Т.И., Островский О.В. Кучерявенко А.Ф. и др Синтез и фармакологическая активность 2-(гетарил) имидазо (1,2-а)-,бензимидазолов//Хим,-фарм. журнал,- 2002.-36(10).-С. 12-17.

14. Анисимова В.А. М.М.Осипова А.Ф.Кучерявенко, Г.П.Дудченко, Н.П.Ларионов, С.Г.Ковалев Синтез и фармакологическая активность 1 и lO-N-замещенных 1(10), 2,3,4-тетрагидропиримидо[1,2-а]-бензимидазолов // Хим.-фарм. журн.-2002,- 36( 9).-С.11-15.

15. Спасов A.A., Дудченко Г.П., Гаврилова Е.С., Кучерявенко А.Ф. и др Диабенол -новое противодиабетическое средство с гемобиологическими свойствами// Вестник BMA .-1997.-№3,- С.38-42.

16. Спасов A.A., Анисимова В.А., Кучерявенко А.Ф. и др Перспективы создания препаратов на основе конденсированных производных бензимидазола для лечения сахарного диабета, осложненного ангиопатиями// Вестник BMA .- №3.- 1997.- С.32-38.

17. Дудченко Г.П., Турчаева (Кучерявенко) А.Ф., Ковалев С.Г., Балаболкин М.И., Анисимова В.А. Создание гипогликемических препаратов с антиагрегантными свойствами на основе конденсированных производных бензимидазола // Вестник BMA -юбил. сб. науч. тр., 1995, т.51, №1, с.36-38.

18. Спасов A.A., Дудченко Г.П., Турчаева (Кучерявенко) А.Ф. Перспективы поиска ан-тиагрегантных и гипогликемических веществ, среди конденсированных производных бензимидазола //Вестник BMA. -1995,- №1,- С.33-36.

Статьи в журналах н сборниках материалов конференций

1. Кучерявенко А.Ф., Спасов А.А., Анисимова В.А. и др. Влияние антиоксидантного соединения на внутрисосудистую агрегацию тромбоцитов крыс // Тез. Докладов XVIII Российского Национального конгресса «Человек и лекарство».-Москва,-20П.-С.456.

2. Кучерявенко А.Ф., Спасов А.А., Анисимова В.А. и др. Влияние гипогликемическо-го вещества диабенол на агрегацию тромбоцитов, вызванную различными индукторами // Тез. Докладов XVIII Российского Национального конгресса «Человек и лекарство»." Москва,- 2011.- С.456.

3. Кучерявенко А.Ф., Майстренко Б.П., Салазникова О.А. и др. Антитромботические свойства нового гипогликемического средства диабенол// Тез. Докладов XVII Российского Национального конгресса «Человек и лекарство».-Москва,- 2010,- С.660.

4. Кучерявенко А.Ф., Майстренко Б.П., Салазникова О.А. и др. Влияние нового анти-агрегантного соединения на летальность белых беспородных мышей, вызванную тромботическими агентами// Тез. Докладов XVII Российского Национального конгресса «Человек и лекарство».- Москва,- 2010,- С.659-660.

5. Кучерявенко А.Ф. Антигромботическая активность антиоксидантного соединения РУ-185/ЛГез. Докладов 57-й региональной научно-практической ВолгГМУ «Инновационные достижения фундаментальных и прикладных медицинских исследований в развитии здравоохранения Волгоградской области».-2010 - С.29-31.

6. Кучерявенко А.Ф., Спасов А.А., Анисимова В.А., Лебедева С.А. Антитромботические свойства диабенола и гликлазида//Тез. Докладов V диабетологического кон-гресса.-Москва,- 2010.- С.334.

7. Кучерявенко А.Ф., Спасов А.А., Анисимова В.А., Лебедева С.А. Сравнительное изучение антитромботических свойств диабенола и гликлазида на модели артериального тромбоза у крыс с экспериментальным сахарным диабетом/Лез. Докладов V диабетологического конгресса, Москва 23-26 мая 2010 с.ЗЗЗ.

8. Anisimova V.A., Tolpygin I.E., Kosolapov V.A, Kucheryavenko A.F., Gurova N.A et al. Synthesis and pharmacological activity of l-dialkyl(alkyl)aminoetyl-2,3-dihydroimidazo[l,2-a] benzimidazoles // Pharmaceutical chemistry jomal - Vol. 44,

Num. 3, pp. 117-122, Translated from Khimiko-Farmatsevticheskii Zhurnal.-2010.-Vol.44.-No.3.-P. 8-13.

9. Спасов A.A., Васильев П.М., Кучерявенко А.Ф. и др.Скрининг in silico производных конденсированных азолов с высокой фармакологической активностью// Тез. Докладов 2 Международного Конгресс-Партнеринга и Выставки по биотехнологии и биоэнергетике «ЕвразияБио-2010,- Москва.- С.176.

10. Кучерявенко А.Ф., Салазникова O.A., Спасов A.A. Влияние гипогликемических средств на систему фибринолиза // Тез. Докладов XVI Российского Национального конгресса «Человек и лекарство».-Москва.-2009.-С.690.

11. Кучерявенко А.Ф., Салазникова O.A., Спасов A.A. Влияние нового гипогликемиче-ского средства диабенол на продукцию тромбоксана Аг //VII конференция «Гемо-реология и микроциркуляция (от функциональных механизмов в клинику) Ярославль.- 2009,- С.24.

12. Кучерявенко А.Ф., Салазникова O.A., Майстренко Б.П., Спасов А.А.Антиагрегантная активность нового гипогликемического средства диабенол на экспериментальной модели in vivo // VII конференция «Гемореология и микроцир-куляция.-Ярославль.-2009.- С.84.

13. Кучерявенко А.Ф., Анисимова В .А., Стуковина А.Ю., Майстренко Б.П Антитромбо-тическая активность конденсированных производных бензимидазола/.//Материалы 56-й региональной научно-практической конференции «Инновационные достижения фундаментальных и прикладных медицинских исследований в развитии здоавоохра-нения Волгоградской области.-2009.-С.242-244.

Н.Васильев П.М., Спасов A.A., Кучерявенко А.Ф. 3D-QSAR-aHanH3 азотсодержащих гетероциклических соединений с высокой антиагрегантной активностью // Тез. Докладов XV Российского Национального конгресса «Человек и лекарство».- Москва. -С.2008.

15. Васильев П.М., Кучерявенко А.Ф., Салазникова O.A., Анисимова В.А. Компьютерный поиск гетероциклических соединений с высокой антиагрегантной активно-стью//Фармакология-лрактическому здравоохранению: Матер. 111 съезд фармакологов России.-Санкт-Петербург.-2007.- Т. 7.-Ч. 1.-С. 1760.

16. Спасов A.A., Кучерявенко А.Ф., Салазникова O.A. Влияние гликлазида на гемо-реологические параметры крови лабораторных крыс//Бюллетень Волгоградского научного центра РАМН.- 2008.- №4.-С. 17-19.

17. Васильев П.М., Кучерявенко А.Ф., Салазникова O.A., Анисимова В.А. Компьютерный прогноз и экспериментальная проверка антиагрегантной активности производных бензимидазола//Тез. Докладов XIV Российского Национального конгресса «Человек и лекарство»,- Москва.-2007.-С.235.

18. Кучерявенко А.Ф., Салазникова O.A. Влияние гипогликемических препаратов при однократном введении на коагуляционное звено гемостаза крыс со стрептозотоци-новым диабетом// Материалы I межрегиональной научно-практической конференции с международным участием.-Санкт-Петербург.-2001.-С.28.

19. Спасов A.A., Салазникова O.A., Кучерявенко А.Ф., Дегтярев А.Н. Влияние гипогликемических соединений на реологические свойства крови доноров и больных сахарным диабетом 11 типа// Международный сборник научных трудов научно-практической конференции по созданию и апробации новых лекарственных

средств:"Лекарства-человеку".-Харьков.-2000.-С. 171-177.

20. Спасов A.A., Анисимова В.А., Островский О.В., Кучерявенко А.Ф. и др. Производные бензимидазола как основа создания лекарственных препаратов, влияющих на реологические свойства крови// Материалы Всероссийской конференции с международным участием «Актуальные проблемы экспериментальной и клинической фармакологии». - 1999.-Санкт-Петербург,- С. 120.

21. Кучерявенко А.Ф., Салазникова O.A. Изучение антикоагулянтных свойств новых конденсированных производных бензимидазола с гипогликемической активностью// Тез. Докл.У Российского национального конгресса «Человек илекарство»,-Москва,- 1998.-С.234.

22. Спасов A.A., Дудченко Г.П., Кучерявенко А.Ф, Новочадов В.В. Изучение влияния нового пшогликемического препарата диабенол на некоторые показатели системы гемостаза//Тез. ДоклЛУ Российского национального конгресса «Человек и лекарство».- Москва.- 1997,- С.254.

23. Спасов A.A., Островский О.В., Кучерявенко А.Ф. и др. Влияние антиоксидантных веществ на агрегационную активность тромбоцитов крыс// Тез. ДоклЛУ Российского национального конгресса «Человек и лекарство».- Москва.-1997.-С.295.

24. Кучерявенко А.Ф., Салазникова O.A. Антикоагулянтные свойства новых конденсированных производных бензимидазола// Тез Республиканской научно-практической конференции «Проблемы диагностики и лечения сердечно-сосудистых заболева-ний».-Саратов.-1997.-С.238.

25. Кучерявенко А.Ф., Гаврилова Е.С., Новочадов В.В. и др. Влияние на функциональную активность тромбоцитов и свертывающую систему крови гипогликемического препарата диабенол//Тез. Республиканской научно-практической конференции «Проблемы диагностики и лечения сердечно-сосудистых заболеваний».-Саратов.-1997.-С.12.

26. Кучерявенко А.Ф., Спасов A.A., Салазникова O.A. Влияние гипогликемических соединений на реологические свойства крови больных сахарным диабетом// Тез. Докл-V Российского национального конгресса «Человек и лекарство»,- Москва. -1997.-С.235.

27. Спасов A.A., Анисимова В.А., Кучерявенко А.Ф. и др. Перспективы создания гипогликемических препаратов на основе конденсированных гетероциклических структур/Лез. Докл.Ш Российского национального конгресса «Человек и лекарство»,-Москва.-1996,- С.275.

28. Спасов A.A., Дудченко Г.П., Кучерявенко А.Ф. и др. Диабенол - новое противодиа-бетическое вещество с гемобиологическими свойствами// Тез. Докл.Ш Российского национального конгресса «Человек и лекарство».-Москва.-1996.-С.276.

29. Спасов A.A., Ковалев С.Г., Дудченко Г.П., Турчаева (Кучерявенко) А.Ф. Конденсированные производные бензимидазола-ингибиторы агрегации тромбоцитов/ // Тез. Докл.Н Российского национального конгресса «Человек и лекарство».-Москва,-1995.-С.216.

30. Дудченко Г.П., Турчаева (Кучерявенко) А.Ф. Влияние новых конденсированных производных бензимидазола на продукцию тромбоксана А2// Сборник научных статей, «Новые материалы и методы в медицине».-Волгоград.- 1995,- Т.51,- вып.2,-0,22.

31. Анисимова В.А., Турчаева (Кучерявенко) А.Ф., Степанченко Е.А. Изучение действия новых конденсированных производных бензимидазола на функциолнальную активность тромбоцитов// Сборник научных статей, «Новые материалы и методы в медицине».- Волгоград,- 1995.- Т.51.- вып.2.- С.21.

32. Дудченко Г.П., Анисимова В.А., Балаболкин М.И., Ковалев С.Г.,.Турчаева (Кучерявенко) А.Ф. и др Экспериментальное изучение фармакологических свойств нового гипогликемического вещества диабенол// I съезд Рос. научн. общ. фармакологов «Фундаментальные исследования как основа создания лек. средств» - тез. докл.-Волгоград.-1995.-С.150.

33. Дудченко Г.П., Анисимова В.А., Балаболкин М.И., Ковалев С.Г.,.Турчаева (Кучерявенко) А.Ф. и др Изучение антиагрегантных свойств нового гипогликемического препарата диабенол// Тез. Докл.П Российского национального конгресса «Человек и лекарство».-Москва.-1995.-С. 235.

34. Спасов A.A., В.А.Анисимова, Кучерявенко (Кучерявенко) А.Ф. и др. Экспериментальное изучение фармакотоксикологических свойств нового гипогликемического препарата диабенол// Тез. I съезда Российского общества фармакологов «Фундаментальные исследования, как основа создания лекарственных средств».- Волгоград.-1995.-С.89.

35. Дудченко Г.П., Спасов A.A., Турчаева (Кучерявенко) А.Ф. Антиагрегантные свойства гипогликемического соединения диабенол// Тез. Докл.Н Российского национального конгресса «Человек и лекарство».-Москва.-1995.-С.254.

36. Сибирякова Т.Б., Турчаева (Кучерявенко) А.Ф., Беседина Э.В. Изучение антиагрега-ционной активности новых конденсированных гетероциклических соединений// Актуальные вопросы медицины: Тез. Докл. 49-й научной сессии.- Волгоград,- 1994.-С.79-80.

37. Ковалев С.Г., Турчаева (Кучерявенко) А.Ф. Антиишемическое влияние двух производных бензимидазола на модели тромбоза коронарных сосудов, вызванного введением АДФ// Актуальные вопросы медицины: Тез.докл. 47-научной сессии,-Волгоград,- 1992.-С.57.

38. Сибирякова Т.Е., Ковалев С.Г., Турчаева (Кучерявенко) А.Ф. и др. Антиагрегаци-онная активность новых ингибиторов кальмодулина// Экспериментальная фармако-логия-клинике:Тез.докл. Международного симпозиума - Винница,- 1992.-С.76.

39. Ковалев С.Г., Турчаева (Кучерявенко) А.Ф. Изучение влияния пяти производных бензимидазола на антиагрегационную акивность сосудистой стенки// Актуальные вопросы медицины: Тез. Докл. 46-й научной сессии. - Волгоград,-1991.- С.24

КУЧЕРЯВЕНКО Аида Фатиховна

КОНДЕНСИРОВАННЫЕ ПРОИЗВОДНЫЕ БЕНЗИМИДАЗОЛА-НОВЫЙ КЛАСС АНТИТРОМБОГЕННЫХ СРЕДСТВ

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени доктора медицинских наук

Подписано к печати 18.0S.20Hr. Формат 60x84/16. Бум офс. Усл.-печ. л. 2,8. Тираж 130 экз. Заказ 831. Отпечатано с готового оригинал-макета в типографии издательства «Перемена», 400131, г.Волгоград, пр.Ленина,27

Оглавление диссертации Кучерявенко, Аида Фатиховна :: 2012 :: Волгоград

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1. ИННОВАЦИОННЫЕ НАПРАВЛЕНИЯ ПОИСКА СРЕДСТВ, РЕГУЛИРУЮЩИХ ТРОМБОГЕННЫЙ ПОТЕНЦИАЛ КРОВИ (ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ).

1.1. Молекулярные основы тромбогенеза.

1.2. Основные направления фармакологической регуляции функциональной активности тромбоцитов.

1.3. Производные бензимидазола как основа для создания антитромбогенных препаратов.

ГЛАВА 2. ПОИСК ВЕЩЕСТВ С АНТИАГРЕГАНТНОЙ АКТИВНОСТЬЮ В РЯДУ ГЕТЕРОЦИКЛИЧЕСКИХ АЗОТСОДЕРЖАЩИХ СОЕДИНЕНИЙ.

2.1. Материалы и методы исследования.

2.2. Экспериментальный поиск веществ, проявляющих способность ингибировать процессы агрегации тромбоцитов.

2.3. Зависимость антиагрегантной активности производных бензимидазола от их структуры и физико-химических свойств.

2.4. Влияние производных бензимидазола на внутрисосудистую агрегацию тромбоцитов.

Введение диссертации по теме "Фармакология, клиническая фармакология", Кучерявенко, Аида Фатиховна, автореферат

Актуальность исследования. Ключевая роль в патогенезе ишемических нарушений в различных органах и системах человеческого организма отводится тромбообразованию [Суслина, 2006; Чазов, 2008; Мирзоян, 2009; Сушкевич,2009; Князева, 2009;]. Известные к настоящему времени данные позволяют, без сомнения, утверждать, что, используя антиагрегантные и другие средства при различных проявлениях активации тромбоцитарного звена гемостаза, можно существенно уменьшить риск развития сердечно-сосудистых осложнений [Макаров, 2006; Воронина, 2006; Maree, 2007; Andiolillo, 2010; Петров, 2010; Тюренков, 2011; Не до года, 2011]. Поэтому антиагрегантная терапия является краеугольной проблемой современной кардиологии. Данная терапия включает препараты с доказанным высоким уровнем активности, которые убедительно продемонстрировали в многоцентровых исследованиях способность снижать риск развития острого коронарного синдрома и острую коронарную смерть [Терещенко, 2008; Geraldo, 2010; Flieri, 2010]. Основу современной антитромбоцитарной терапии составляют ацетилсалициловая кислота-ингибитор циклооксигеназы тромбоцитов, тиенопиридины-блокаторы P2Yi2 рецепторов (клопидогрел, тиклопидин) и блокаторы гликопротеиновых рецепторов Ilb/IIIa тромбоцитов для внутривенного применения (абциксимаб, эптифибатид, тирофибан), а также комбинация ацетилсалициловой кислоты с клопидогрелем [Чарная, 2009]. В настоящее время расширяются показания для применения антитромбоцитарных препаратов, уточняются сведения о специфичности их воздействия на отдельные стороны функции тромбоцитов. Однако необходимо отметить, что современные антиагрегантные средства не всегда отвечают требованиям, предъявляемым к ним, так как проявляют недостаточную эффективность и имеют большое количество побочных эффектов. Среди побочных эффектов особенно следует отметить способность антиагрегантов вызывать гастропатии, кровотечения, тромбоцитопеническую пурпуру [De Luca, 2009; Morini, 2010]. Другим фактором, ограничивающим применение антиагрегантных средств, является наличие у части больных резистентности к препаратам, характеризующейся отсутствием депрессии функции тромбоцитов и снижением антитромботического эффекта [Santilli, 2009; Postula, 2010; Cattaneo 2011]. Поэтому поиск, изучение и создание новых антиагрегантных средств является актуальной задачей в решении проблемы предотвращения тромботических состояний.

Известно, что химический класс производных бензимидазола проявляет различные виды биологической активности и считается перспективным для разработки эффективных ингибиторов агрегации тромбоцитов [Спасов, 1997; Bandarage, 2009; Муляр, 2009; Анисимова, 2010]. В исследованиях, проведенных ранее в Волгоградском государственном медицинском университете, установлена способность замещенных гетероциклических азотосодержащих систем подавлять агрегацию тромбоцитов, и накоплен опыт изучения соединений с антиагрегантной активностью [Спасов, 2006, 2009, 2010; Дудченко, 1997; Островский, 1999; Анисимова, 2009; Кучерявенко, 2005, 2010;]. Поэтому поиск потенциальных антитромбогенных средств среди производных бензимидазола является достаточно обоснованным.

Задачи исследования:

5. Провести углубленное изучение влияния активных соединений на рецепторные и пострецепторные механизмы регуляции активности тромбоцитов.

6. Виртуально изучить механизмы действия производных бензимидазола с использованием ЗО-молекулярного моделирования методом сходства к препаратам-эталонам, а также с использованием докинга соединений-лидеров в сайты связывания биомишеней, отвечающих за антиагрегантную активность -кальмодулина, фосфодиэстеразы III типа, аденилатциклазы I типа и ТХА2-синтетазы.

7. Изучить фармакокинетику соединения РУ-254 при внутривенном введении.

Впервые показана способность соединения РУ-891 эффективно снижать тромбогенный потенциал крови на интактных животных и при экспериментальном диабете. Установлено, что основой антиагрегантной активности вещества РУ-891 является блокирование P2Y12 рецепторов тромбоцитов и снижение уровня ТХА2.

Впервые с использованием ЗО-молекулярного моделирования методом сходства к препаратам-эталонам, а также с использованием докинга проведен анализ особенностей взаимодействия соединений-лидеров с наиболее вероятными белками-мишенями, отвечающими за антиагрегантную активность -кальмодулином, фосфодиэстеразой III типа, аденилатциклазой I типа и ТХА2-синтетазой.

При составлении протоколов клинических исследований антиоксидантного соединения РУ-185 необходимо изучать показатели тромбогенного потенциала крови.

Положения, выносимые на защиту

1.Среди изученных 14 классов конденсированных и неконденсированных производных бензимидазола наиболее активные антиагрегантные соединения встречаются в рядах производных К1,ТЧ3-имидазола, и №-2,3-Дигидро-имидазо[1,2-а]-бензимидазола.

2.Соединения РУ-891, РУ-254 и РУ-185 по выраженности антиагрегантного действия in vitro превосходят препарат сравнения ацетилсалициловую кислоту (АСК) в 5,5, 2,7 и 2 раза соответственно, а в опытах in vivo в 8, 7,5 и 4,6 раза соответственно.

4. Механизм антитромбогеиного действия соединения РУ-891 определяется блокирующим влиянием на P2Y]2 рецепторы тромбоцитов, снижением синтеза тромбоксана А2 (ТХА2) и уровня внутриклеточного кальция. Соединения РУ-254 и РУ-185 по механизму действия являются ингибиторами синтеза ТХА2.

5.Методический подход in silico, включающий информационные технологии компьютерного прогноза биологической активности химических соединений «PASS» и «Микрокосм», анализ сходства структур и докинг с целью поиска и изучения механизма действия новых антиагрегантных веществ, значительно оптимизирует проводимые исследования по выявлению новых потенциальных антитромботических средств в ряду конденсированных производных бензимидазола.

Апробация работы. Основные результаты диссертационной работы докладывались и обсуждались на научно-практической конференции по созданию и апробации новых лекарственных средств: «Лекарства-человеку» Харьков, 2000, на I межрегиональной научно-практической конференции с международным участием, Санкт-Петербург, 2001, на III съезде фармакологов России «Фармакология - практическому здравоохранению» Санкт-Петербург, 2007, на VII конференции «Гемореология и микроциркуляция (от функциональных механизмов в клинику) Ярославль, 2009, на VII всероссийской конференции с молодежной научной школой, Уфа, 2009, на 56-й региональной научно-практической конференции «Инновационные достижения фундаментальных и прикладных медицинских исследований в развитии здравоохранения Волгоградской области», Волгоград, 2010, на V диабетологическом конгрессе, Москва, 2010 , на II Международном Конгресс-Партнеринге и Выставке по биотехнологии и биоэнергетике «ЕвразияБио-2010», Москва, 2010, на XIV, XV, XVI, XVII, XVIII Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство», Москва, 2007, 2008, 2009, 2010, 2011.

Заключение диссертационного исследования на тему "Конденсированные производные бензимидазола - новый класс антитромбогенных средств"

выводы

1. Конденсированные производные бензимидазола являются новым химическим классом антитромбогенных веществ.

2. Из 14 классов гетероциклических азотсодержащих соединений наиболее перспективными по антиагрегантному действию in vitro и in vivo являются производные N -2,3-дигидро-имидазо[1,2-а]бензимидазола и -имидазола. При этом способность веществ данных классов ингибировать процессы агрегации тромбоцитов зависит от типа и характеристик гетероциклического ядра, липофильных, стерических и электронных параметров заместителей.

3. Наиболее активное соединение РУ-891 по способности ингибировать процессы агрегации тромбоцитов превосходит препарат сравнения АСК в 5,5 раза, а по терапевтическому индексу в 10 раз. Антидиабетогенное соединение РУ-254, по антиагрегантному действию активнее препарата сравнения в 2,7 раза, а по условному терапевтическому индексу в 2,6 раза, а антиоксидантное соединение РУ-185 в 2,2 и в 2,6 раз соответственно.

5. Вещества РУ-891, РУ-254 и РУ-185 при пероральном курсовом введении животным с экспериментальным диабетом оказывают антитромботическое действие на модели артериального тромбоза, вызванное повреждением стенки артерий электрическим током, восстанавливают сниженную функцию эндотелия и снижают вязкость крови, превосходя препарат сравнения пентоксифиллин. Антитромбогенная активность антидиабетогенного соединения РУ-254 доказана в клинических испытаниях у больных с сахарным диабетом II типа.

6. В исследованиях in silico показано, что вещество РУ-891 может снижать уровень внутриклеточного кальция в тромбоцитах, ингибировать ФДЭ цАМФ и, наряду, с соединениями РУ-254 и РУ-185 ингибировать синтез ТХА2. Кроме того, вещество РУ-185 может обладать антикальмодулиновым действием.

7. Соединения РУ-891 и РУ-185 в различной степени выраженности блокируют агрегацию тромбоцитов, вызванную АДФ, коллагеном, адреналином, арахидоновой кислотой, тромбином, агонистом тромбоксановых рецепторов U46619. В отличие от данных веществ соединение РУ-254 оказывает слабое ингибирующее действия на агрегацию тромбоцитов, вызванную тромбином и U46619. Вещество РУ-891 блокирует агрегацию тромбоцитов, вызванную активацией P2Y12 рецепторов тромбоцитов.

8. Вещества РУ-254, РУ-185 и РУ-891 не оказывают влияние на антиагрегационную активность сосудистой стенки в норме, однако восстанавливают данную активность, сниженную адреналином.

9. Соединения РУ-891, РУ-254 и РУ-185 снижают уровень проагреганта и вазоконстриктора ТХА2, что подтверждается снижением количества МДА в условиях патологии ex vivo, вызванной тромбином. Механизм снижения уровня внутриклеточного кальция в тромбоцитах, индуцированных тромбином, под влиянием соединения РУ-891 не связан с влиянием на потенциал-зависимые кальциевые каналы. Вещество РУ-185 через ингибирование кальмодулин-зависимой ФДЭ цАМФ уменьшает уровень общего и мембранносвязанного кальция в тромбоцитах.

11.В соответствии с классификацией И.В.Саноцкого соединение РУ-254 при внутривенном введении относится к малотоксичным веществам. Изучение хронической токсичности соединения РУ-254 при данном способе введения в дозах 1/50; 1/10 и 1/3 от ЛД50 не выявило патологических изменений со стороны органов и систем у животных. Установленные изменения в поведении, экскреторной, поглотительно-выделительной и обезвреживающей функциях почек и печени, у крыс, получавших вещество в дозе 1/3 от ЛД50, были обратимыми и проходили после отмены вещества.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

3. Включить в протоколы клинических исследований нового противодиабетического средства диабенол изучение его влияния на тромбогенный потенциал крови.

4. Антитромбогенное действие соединения РУ-185 вносит вклад в его антиишемическую активность. Поэтому, при составлении протоколов клинических испытаний антиишемического действия соединения РУ-185, необходимо включить исследование показателей тромбогенного потенциала крови.

Список использованной литературы по медицине, диссертация 2012 года, Кучерявенко, Аида Фатиховна

1. Авдонин П.В., Ткачук В.А. Рецепторы и внутриклеточнй кальций// Наука.-Москва. -С.29-42.

2. Адиб Ал Амуш, Берест В.П., Гаташ C.B., Перский С.Е. Влияние катионов на агрегацию тромбоцитов//Вестник Харьковского национального университета.-2006.-3(729).-С.5-9.

3. Анисимова В.А., Панченко Т.И., Островский О.В. и др. Синтез и фармакологическая активность 2-(гетарил) имидазо (1,2-а)-,бензимидазолов// Хим.-фарм. Журнал,- 2002.-36-№10.- С. 12-17.

4. Анисимова В.А., Спасов A.A., Толпыгин И.Е. и др. Синтез и фармакологическая активность солей 3-ацетил-2-11-9-диалкиламиноэтилимидазо1,2-а. бензимдазолов// Хим.-фарм. Журнал.- 2010,- Т.44.- №3,- С.8-13.

5. Анисимова В.А., Спасов A.A., Толпыгин И.Е., Косолапов В.А., Кучерявенко А.Ф. и др., Дигидрохлориды 3-(2,2,2-трихлор-1-гидроксиэтил)имидазо 1,2-а.-бензимидазолов и их фармакологическая активность// Хим-фарм. журнал.- 2009.- Т.43.- №9.- С. 9-12.

6. Анисимова В.А.,.Спасов А.А, Косолапов В.А. и др. Фармакологическая активность 2-метоксифенил-замещенных 9-диалкиламиноэтилимидазо (1,2-а) бензимидазолов// Хим.-фарм. Журнал,- 2005,- Т.36- №9.- С.26-32.

7. Анисимова В.А.,.Спасов А.А,.Толпыгин И.Е и др. Синтез и фармакологическая активность дигидрохлоридов 3-(2,2,2-трихлор-1-гидроксиэтил)имидазо 1,2-а.-бензимидазола// Хим-фарм. Журнал.-2009,- Т.43,- №9.- С 9-12.

8. Бакшеев В.И., Коломоец Н.М. Ингибиторы фосфодиэстеразы-реалии и перспективы использования в клинической практике (прошлое, настоящее и будущее силденафила //Клиническая медицина.-2007.-№3.-С.4-11

9. Балаболкин М.И., Клебанова Е.М., Креминская В.М. Лечение сахарного диабета и его осложнений: Учеб. Пособие.-М.: ОАО Изд-во «Медицина».-2005.-512с.

10. П.Балуда В.П., Баркаган З.С., Гольберг Е.Д., Лакин K.M. и др., Лабораторные методы исследования системы гемостаза. /Под редакцией Е.Д. Гольберга. Томск:Медицина. -1980.-310с.

11. Березин А.Е., Седень B.B. Васкулярное ремоделирование и коронарный атеротромбоз. Клиническое и погностическое значение//Укр. Мед. Часопис.-2010.-4.-№78.-73-77.

12. Бокарев И.Н. Противотромбоцитарная терапия в клинической практике. Методические рекомендации. Под ред. проф.И.Н.Бокарева.-Москва.-2007.-34с.

13. Бубнова М.Г. Аспирин в профилактике атеротромбоза и коронарной болезни сердца// Российский кардиологический журнал.-2010.-№4.-С.115-120.

14. Буркерт У.,Эллинджер Н. Молекулярная механика / Пер. с англ. М.: Мир, 1986. - 364 с.

15. Васильев, П. М. Применение компьютерной информационной технологии для прогноза фармакологической активности структурно разнородных химических соединений / П. М. Васильев, А. А. Спасов // Вестник ВолГМУ. -2005.-№ 1(13).-С.23-30.

16. Воробьева E.H., Шумахер Г.И., Хорева М. А., Осипова И.В. Дисфункция эндотелия-ключевое звено в патогенезе атеросклерозаУ/Российский кардиологический журнал.- 2010.-№2.-С.84-88.

17. Воробьева E.H., Шумахер Г.И., Хорева М.А. и др. Дисфункция эндотелия-ключевое звено в патогенезе атеросклероза// Российский кардиологический журнал.-2010.-№2.-С.84-92.

18. Воронина E.H., Филиппенко M.JL, Сергеевичев Д.С., Пикалов И.В. Мембранные рецепторы тромбоцитов: функции и полиморфизм// Вестник ВОГиС.-2006.-Т10.-№3.-С.553-564.

19. Габбасов З.А., Попов Е.Г., Гаврилова И.Ю., Позин Е.Я., Маркосян P.A. Новый высокочувствительный метод анализа агрегации тромбоцитов //Лабораторное дело. 1989. -№10.-С.15-18.

20. Габриэлян Э.С., Акопов С.Э. Клетки крови и кровообращение, Айстан, Ереван -1985.-399с.

21. Гаврилов В.Б., Гаврилова А.Г., Мажуш JIM. Анализ методов определения продуктов перекисного окисления липидов в сыворотке крови по тесту с тиобарбитуровой кислотой. //Вопросы мед. химии. 1987. - №7. - С. 118-122.

22. Глотов Н. В., Животовский JI. А., Хованов Н. В., Хромов-Борисов Н. Н. Биометрия: Учеб. пособие / Под ред. М. М. Тихомировой. Л.: Изд-во Ленингр. ун-та, 1982. - 264 с.

23. Голендер В. Е., Розенблит А. Б. Вычислительные методы конструирования лекарств. -Рига: Зинатне, 1978. 238 с.

24. Горелик А. Л. Методы распознавания / А. Л. Горелик, В. А. Скрипкин. М.: Высш. шк., 1984.-208 с.

25. Дадашева М.Н., Подрезова JI.A., Каравашкина Е.А., Смирнова JI.A. Роль антиагрегантной терапии при цереброваскулярной патологии. Клинический опыт применения дипиридамолаУ/Журнал «Трудный пациент»,- 2011.-№4.-С.24-27.

26. Данилов И.П Тромбоциты: новый взгляд на их роль в организме//Медицинские новости.-№9.-2008.-С. 17-20.

27. Дедов И.И., Шестакова М.В. Значимость результатов исследования ADVANCE для контроля Сахарного диабета в РосВии// Журнал Сахарный диабетю-2009.-№2.-С.4-5.

28. Добровольский A.B. Клопидогрел в лечении заболеваний сердечно-сосудистой системы//Русский медицинский журнал.-2009.-№8.-С.558-570.

29. Добровольский, H.A. Анализатор вязкости крови / H.A. Добровольский, Ю.М. Лопухин, A.C. Парфенов и др. // Реологические исследования в медицине: Сб. науч. тр. М.: НЦХ РАМН, 1998. - С.45-51.

30. Дудченко Г.П. Поиск и изучение антидиабетических веществ среди новых производных бензимидазола. //Дисс. на соиск. уч. ст. к.б.н. 1989.

31. Иоффе Б. В. Рефрактометрические методы химии. Л.: Химия, 1983. - 352 с.

32. Катаев В.А., Клен Е.Э., Самородов A.B. и др. Скрининг соединений, обладающих антиагрегационной активностью среди производных бензимидазола и ксантина//Вестник Российского университета дружбы народов.-2008.-№4.-С.68-72.

33. Кларк Т. Компьютерная химия. М.: Мир, 1990. - 385 с.

34. Князева С.А., Мельник М.В., Шилов A.M. Антиагреганты в практике и профилактики лечения коронарных болезней сердца //Русский медицинский журнал.-2007.- № 9.-С.713-718.

35. Ковалев С.Г. Изучение влияния пяти производных бензимидазола на антиагрегационную акивность сосудистой стенки// Актуальные вопросы медицины:Тез. Докл. 46-й научной сессии -Волгоград, 1991, с.24

36. Ковалева О.Н., Беловая А.Н., Заика М.В. Роль оксидативного стресса в кардиоваскулярной патологии//Журнал АМФ Украины.-2005.-Т.11.-№4.-С.660-670.

37. Коздоба A.C., Коздоба O.A. Применение антитромботических средств у больных с атеросклеротическим поражением коронарных сосудов. Возможные осложнения и пути их преодоления.-2007.-№20.-С. 1449-1453.

38. Комарова А.П., Панченко Е.П. АСК основа антитромботической терапии у больных атеротромбозом// Русский медицинский журнал.-2007.-№ 6.-С.345-347.

39. Косолапов В.А. Антиоксидантные средства: стратегия отбора, перспективы применения.// Дисс. на соиск. уч. ст. д.м.н., 2005.

40. Косолапов В.А., Спасов A.A., Анисимова В.А Изучение антирадикальной активности новых соединений методами хемилюминесценции// Био-медицинская химия.-2005.-Т.51,-№3.-С.287-294.

41. Косолапов В.А., Спасов A.A., Анисимова В.А. Изучение антирадикальной активности новых соединений методами хемилюминесценции// Био-медицинская химия.-2005.-Т.51,-№3.-С.287-294.

42. Кудряшова М.В., Довгалик Ю.В., Мишина Л.Е. и др. Коррекция реологических свойств крови и свободно-радикальных процессов у пациентов с инфарктом миокарда в комбинации с сахарным диабетом II типа//Кардиология.-2010.-50(5).-С.9-12.

43. Латфуллин И.А., Подольская A.A. Антитромботическая терапия ишемической болезни сердца: от быстродействующих антиагрегантов к статинам и оксиду азота. Реально ли? //Рациональная фармакотерапия в кардиологии.-2006.-№3.-С.37-45.

44. Лукьянова, Л.Д. Новые подходы к созданию антигипоксантов метаболического действия // Вестн. Рос. Акад. Мед. Наук. -1999. -№3. -С. 18-25.

45. Люсов, В.А. Метод графической регистрации агрегации тромбоцитов и изменения ее при ишемической болезни сердца / В.А. Люсов, Ю.Б. Белоусов // Кардиология. 1971. -№8. - С.459-461.

46. Макаров В.А., Дрозд H.H., Белозерская Г.Г., Петрухина Г.Н. Характеристика лекарственных средств для коррекции системы гемостазаУ/Очерки по производственной и клинической трансфузиологии / под. ред. А.И.Воробьева — М. : Ньюдиамед., 2006. — С. 374-382.

47. Макаров В.А.,Горбунова H.A. Гемостаз и реология крови. М.: Триада-фарм.- 2003.

48. Максименко A.B., Тищенко Е.Г., Голубых В.Л. Антитромботическая активность комплексов супероксидисмутазы с хондроитинсульфатом при артериальном поражении у крыс// Вопросы медицинской химии.-1999.-№6.-С.27-32.

49. Мандель И. Д. Кластерный анализ / И. Д. Мандель. М.: Финансы и статистика, 1988. -176 с.

50. Минкин В. И., Симкин Б. Я., Миняев Р. М. Теория строения молекул. Ростов-на-Дону: Феникс, 1997.-560 с.

51. Минкин, В.И.Теория строения молекул / В.И. Минкин, Б.Я. Симкин, P.M. Миняев. -Ростов-на-Дону: Феникс, 1997. 560 с.

52. Мирзоян Р.С, Хайлов H.A., Цорин И.Б., Ганыиина Т.С. // Нимодипин и сочетанные нарушения мозгового и коронарного кровообращения в эксперимента // Эксперим. и клин, фармакол., 2009, т.72, №2, с.24-28.

53. Мирзоян P.C. Хайлов H.A., Ганыпина Т.С. Цереброваскулярные эффекты афобазола при сочетанной сосудисой патологии мозга и сердца //Экспериментальная и клиническая фармакология.-2010.-№5.-С.2-7.

54. Моисеев B.C. Польза и риск антитромботических средств в профилактике сердечнососудистых заболеваний//Клиническая фармакология и терапия.-2008.-№17(3).-С.19-24.

55. Муляр А.Г., Гасанов М.Т., Бочарникова Н.В, Колосов Ю.А. Результаты поиска антиагрегационных средств среди новых производных бензимидазола на модели с метаболическими нарушениями// Медицинская помощь.-2009.-№1.-С.45-46.

56. Муравьев A.B., Чепоров C.B. Гемореология (экспериментальные и клинические аспекты реологии крови): Монография.-Ярославль: Изд.-во ЯГПУ.-2009.-178с.

57. Мурина М.А., Фесенко О.Д., Сергиенко В.И. и др. Противотромботическая активность NjN-дихлортаурина in vivo на модели тромбоза у мышей// Бюллетень экспериментальной биологии и медицины.-2002.-Т. 134.-№7.-С.44-47.

58. Науменко JI.B. Поиск и изучение механизма действия производных ксантина, проявляющих гемореологические свойства // Дисс. на соиск. уч. ст. к.м.н., 2006.

59. Науменко J1.B., Кузнецова В.А., Спасов А.А. Гемореологические свойства нового ксантина на модели стрептозотоцин-индуцированного сахарного диабета//Клиническая и экспериментальная фармакология.-2010.-Т. 73.-№8.-С.29-31.

60. Недогода С.В. Аспирин, как «золотой стандарт» профилактики сердечно-сосудистых осложнеий// Российский кардиологический журнал.-2010.-№3.-С.86-90.

61. Никонов В.В., Киношенко Е.И. Тромбоцитарный гемостаз и антитромбоцитарная терапия при остром коронарном синдроме//Медицина неотложных состояний.-2008.-№3,-С.109-120.

62. Никонов В.В., Киношенко Е.И. Тромбоцитарный гемостаз и антитромбоцитарная терапия при остром коронарном синдроме// Медицина неотложных состояний.-2008,-№3(16)-С.109-119.

63. Осипова Н.А.,Береснев В.А., Петрова В.В. Мультимодальная системная фармакотерапия послеоперационного болевого синдрома// Consilium medicum.-2001.-3.-№9.-C.39-43.

64. Островский О.В. Фармакология антиоксидантов конденсированных производных бензимидазола // Дисс. на соиск. уч. ст. к.м.н., - 1996.

65. Островский О.В., Ивахненко И.В., Спасов А.А., Косолапов В.А. Влияние антиоксидантных соединений на функциональную активность тромбоцитов // Гипоксия: механизмы, адаптация, коррекция: Тезисы Всероссийской конференции. Москва. 1999. -С.55-56.

66. Панченко Е.П. Рекомендации по антитромботической терапии у больных со стабильными проявлениями атеротромбоза (подгоовлены Е.П.Панченко с участием Е.С.Кропачевой// Атеросклероз.-2009.-№1.-С. 38-54.

67. Парфенов A.C., Пешков A.B., Добровольский H.A. Анализатор крови реологический АКР-2. Определение реологических свойств крови (Метод. Рекомендации).// НИИ Физико-химической медицины. Москва.-1994.-С.15.

68. Парфенов В.А., Бутко Д.Ю., Белова А.Н., Котельникова Т.Н. Тиклопидин во вторичной профилактике ишемического инсульта//СопзШит medicum.-2006.-№8.-C.46-49.

69. Петров В.И. Рогова Н.В., Михайлова Д.О. Фармакоэкономический анализ эффективности комплексной терапии Сахарного Диабета 2-го типа//Вестник ВолГМУ.-2010.-Т,33.-№1.-С.28-32.

70. Рекомендации Европейской организации по борьбе с инсультом, ESO, 2008.

71. Рекомендации Российского Кардиологического сообщества для лечения острых коронарных синдромов без подъема сегмента ST.-2006.

72. Рекомендации Российского Кардиологического сообщества для лечения острых коронарных синдромов с подъемом сегмента ST.-2007.

73. Сакаев, М.Р. Изучение влияния некоторых синаптотропных веществ на тромбоцитарную активность: дис. канд. биол. наук: 14.00.25 / Сакаев Марат Рустамович. -СПб., 2000,- 115с.

74. Салазникова O.A. Влияние гипогликемических средств на гемостаз и реологию крови // Дисс. на соиск. уч. ст. к.м.н., 2001.

75. Сибирякова Т.Б. Фармакологические свойства новых ингибиторов кальмодулина производных бензимидазола. // Дисс. на соиск. уч. ст. к.м.н., 1995.

76. Смирнова О.М. Новые возможности эффективного и безопасного лечения сахарного диабета 2 типа. Диабетон MB: от физиологического механизма действия к сердечнососудистой защите//Русский медицинский журнал.-2003.-№6.-С.346-355.

77. Спасов A.A. Имидазо-(1,2-а)-бензимидазолы новый класс кардиотропных средств // Дисс. на соиск. уч. ст. д.м.н., - 1984.

78. Спасов A.A., Дудученко Г.П., Ковалев С.Г., Турчаева А.Ф. Создание гипогликемических препаратов с антиагрегантными свойствами на основе конденсированных производных бензимидазола// Вестник BMA.-1995.- №1. -С.33-36.

79. Спасов A.A., Дудученко Г.П., Турчаева А.Ф. Перспективы поиска антиагрегантных и гипогликемических веществ, среди конденсированных производных бензимидазола//Вестник ВМА.-1995.- №1.-С.11-13.

80. Спасов A.A., Дудченко Г.П., Кучерявенко А.Ф. Перспективы поиска антиагрегантных и гипогликемических веществ среди конденсированных производных бензимидазола// Вестник BMA, 1995,-№l.-C.33-36.

81. Спасов A.A., Косолапов В.А., Анисимова В.А. и др. Синтез и биологическая активность 9-диалкиламиноэтил-2-окси(диокси)фенилимидазо-1,2-а.бензимидазола// Химико-фармацевтический журнал.-2006.-№ 10.-C3-10.

82. Спасов A.A., Кучерявенко А.Ф., Майстренко Б.П Антиагрегантная активность гипогликемических средств// Экспериментальная и клиническая фаракология,- Т.72.-№ 6.-С 27-29.

83. Спасов A.A., Петров В.И., Анисимова В.А и др., Всероссийский диабетологический конгресс, Тезисы докладов, Москва(2008), С.336.

84. Суслина З.А., Варакин Ю.Я., Верещагин Н.В. Сосудистые заболевания головного мозга: Эпидемиология. Основы профилактики// М.: МЕДпресс-информ, 2006. 256 с.

85. Суслина 3. А., Танашян М. М., Ионова В. Г. Ишемический инсульт: кровь, сосудистая стенка и антитромботическая терапия. — М., 2005. .-248с.

86. Сушкевич Г.Н. Патогенез и лабораторная диагностика гемостатических нарушений при тромбофилиях различного генеза//Лабораторная медицина.-2009.- .-№10.-С.11-22.

87. Сычев Д.А., Зятенков A.B., Кукес В.Г. Клиническая фармакогенетика антиагрегантов: взгляд клинического фармаколога//Российский кардиологический журнал.- 2007.- №4.-С.9-13.

88. Терещенко С.Н., Джаиани H.A. Антитромботическая терапия как основа профилактики сердечно-сосудистых осложнений. Фокус на ацетилсалициловую кислоту// Трудный пациент.-2008.- 11.-№6.-С.5-10.

89. Турчаева А.Ф. Поиск и изучение антиагрегантных веществ среди новых конденсированных производных бензимидазола. // Дисс. на соиск. уч. ст. к.м.н. 1995.

90. Тюренков И.Н., Воронков A.B. Влияние лизиноприла на вазодилатирующую и антитромбическую функцию эндотелия при сахарном диабете // Врач. 2011. - №2. - с. 3537

91. Филимонов, Д.А. Прогноз спектра биологической активности органических соединений / Д.А. Филимонов, В.В. Поройков // Рос. хим. ж. (Ж. Рос. хим. об-ва им. Д. И. Менделеева) -2006 -Т.50.-№ 2.-С.66 75.

92. Филиппов А.Е., Ханджян A.M., Солодухин К.А. и др. Дисфункция эндотелия и факторы риска при ишемической болезни сердцаУ/Клиническая медицина.- 2006.-№2.-С.28-32.

93. Хабриев Р.У. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических средств//Под общей редакцией член-корр РАМН, проф. Р.У.Хабриева.-Москва.-2005.

94. Чазов Е.И. Пути снижения смертности от сердечно-сосудистых заболеваний// Терапевтический архив.-2008.- №8.-С.11-16.

95. Чарная М.А,.Морозов Ю.А Современные антиагрегантные препараты и их применение в клинике// Болезни аорты и ее путей.-2009.-№1-С.34-40.

96. Шумаков В.А.,.Бабий JI.H Антитромбоцитарная терапия у больных ИБС: клопидогрель и/или ацетилсалициловая кислота// Болезни аорты 2009.-№3.-С.4-7.

97. Яковлев Д.С. Поиск антагонистов серотониновых 5-НТЗ-рецепторов среди конденсированных и неконденсированных производных бензимидазола и бензимидазолина и изучение их фармакологических свойств // Дисс. на соиск. уч. ст. к.м.н., 2007.

98. Яровая Г.А., Блохина Т.Б., Нешкова Е.А. Рецепторы, активируемые протеиназами (PARs) сигнальный путь, инициируемый ограниченным протеолизом// Лабораторная медицина.-2009.-№10.-С.23-34.

99. Abbate R., Crea F.,De Servi S. et al Extent of platelet aggregation ingibition and clinical events: new evidence with prasugrel// G. Ital Cardiol (Rome)-2010.-11(2).-P.127-137

100. Abergel E., Nicolsky E. Ticagrelor: investigational oral antiplatelet treatment for reduction of major adverse cardiac events in patients with acute coronary syndrome//Vase. Health Risk Manag.-2010.-6.-P.963-977.

101. Adachi T. Modulation of vascular sarco/endoplasmic reticulum calcium ATPase in cardiovascular pathophysiology// Adv Pharmacol.- 2010.-59.-P.165-195.

102. Adewall S., Badimon L., Drouet L. et al, Oral antiplatelet agents in ACS: from pharmacology to clinical differences/ZFundam. Clin. Pharmacol.- 201 l.-25(5).-P.564-71.

103. Aktan I, Dunkel B, Cunningham FM. PKC isoenzymes in equine platelets and stimulus induced activation//Vet Immunol Immunopathol.- 201 l.-141(3-4).-P.276-282.

104. Alkava N., Karasawa A. Effect of KW-5617 (zaldarin maleat), a potent and selective calmodulin ingibitor, on secretory diarrhea and on gastrointestinal propulsion in rats// Jpn. J. Pharmacol.-1998.-2.-P. 199-206.

105. Ambrosi P., Villani P., Bouvenot G Antiplatelet therapy for primary prevention in diabetes//Diabetes Metab.- 2006.-2.-P.2952-2956.

106. Andiolillo D.J., Suryadevara S., Capranzano P. et al. Antiplatelet drug response variability and role of platelet function testing: a practical guide for interventional cardiologists// Catheter Cardiovasc. Interv.-2009 .-1.-P. 1-14.

107. Andiolillo D.J., Bhatt D.L., Montaiescot G. et al Antiplatelet therapy in acute cjrjnary syndrome (ACS0 and PCI: Practical Strategies to improve outcomes // Am. J. Cardiology.-2010.-№9.-P.2-3.

108. Andrews R.K, Berndt M.C. Platelet physiology and thrombosis, properties/// Hematol Oncol Clin North Am.- 2007.-4.-P. 633-638.

109. Andrews R.K., Bemdt M.C. Platelet physiology and thrombosis// Thromb. Res.- 2004.-114.-P.447-453.

110. Angiolillo D.J. Antiplatelet therapy in type 2 diabetes mellitus//Curr Opin. Endocrinol Diabetes Obes.-2007.-2.-P. 124-131.

111. Angiolillo D.J., Bhatt D.L., Gurbel P.A., Jennings L.K. Advances in antiplatelet therapy: agents in clinical development// Am.J.Cardiology.-2009.-3.-P.40-51.

112. Angiolillo D.J., Suryadevara S., Capranzano P. et al. Prasugrel: a novel platelet ADP P2Y12 receptor antagonist. A review on its mechanism of action and clinical development// Expert Opin Pharmacother.- 2008,- 16.-P.2893-2900.

113. Angiolillo DJ, Capodanno D, Goto S. Platelet thrombin receptor antagonism and atherothrombosis//.Eur Heart J.-2010.-31(1)-P. 17-28.

114. Ansar M, Zellou A, Faouzi ME et al. Synthesis, chemical and toxicological study of a new benzimidazol derivative//Ann Pharm Fr.-2009.-67(2).-P.78-83.

115. Archarov A., Aseev A., Bykov V. et al. Gene-centric view on the human proteome project: The example of the Russian roodmap for chromosome 18//Proteomics.-2011.-№1.-P.1853-1856.

116. Arikawa E, Cheung C., Sekirov I. et al. Effects of endothelin receptor blockade on hypervasoreactivity in streptozotocin-diabetic rats: vessel-specific involvement of thromboxane A2. //Can.J Physiol.Pharmacol.-2006.-84(8-9).-P.823-833.

117. Arora R.R., Rai F. Antiplatelet intervention in acute coronary syndrome//Am. J. Therapy.- 2009.- №5.-P.29-40.

118. Arora RR, Rai F. Antiplatelet intervention in acute coronary syndrome//Am J Ther.-2009.-16(5).-P.29-40.

119. AutoDock Vina: Официальный сайт разработчика О. Trott, Molecular Graphics Lab, The Scripps Research Institute Электронный ресурс. 2010. URL: http://vina.scripps.edu.

120. Ayhan-Kilsigil G., . Kas C., Ozdamar E.D. Synthesis and antioxidant capacities of some benzimidazole derivatives// Arch. Pharm.-2007.-340(l 1).-P.607-611.

121. Badimon L., Vilahur G. Coronary atherothrombotic diseases: progress in antiplatelet therapy// Rev. Esp. Cardiol.-2008.-61.-P.501-513.

122. Bandarage U., Hare В., Parsons J. et al. 4-(Benzimidazol-2-yl)-l,2,5-oxadiazol-3-ylamine derivatives: potent and selective p70S6 kinase ingibitors//Bioorg. Med. Chem.-2009.-17.-P.5191-5194.

123. Baracand A., Panza J.A. Mechanisms of decreased vascular function with aging // Hypertension.-2009.-53.-P.900-902.

124. Baruch D. Platelet-vessel wall interactions//Therapie.-2006.-5.-P.371-378.

125. Bergmeier W., Stefanini L. Novel molecules in calcium signaling in platekets// J. Thromb Yaemost.-2009.-1.-P. 187-190.

126. Bhatt D.L., Lincoff A.M., Gibson C.M.et al. For the CHAMPION PLATFORM investigators intravenous platelet blockade with cangrelor during PCI//N. Eng J.Med.- 2009.-361.-P.2330-2341.

127. Bhavaraju K., Kim S., Daniel J., Kunapuli S. Evaluation of 3-(l-methyl-lH-indol-3-yl-methylene)-2-oxo-2,3-dihydro-lH-indole-5-sulfonamide.(OXSI-2), as a Syk-selective ingibitor in platelets//- 2008.-3.-P.285-290.

128. Bigalke B, Langer H, Geisler T, et al. Platelet glycoprotein VI: of novel marker for'acute coronary syndrome// Thromb Hemost 2007; 33 (2): P.179-84.

129. Blackmore PF. Biphasic effects of nitric oxide on calcium influx in human platelets// Thromb Res.-2011.-127(1).-P.8-14.

130. Blech S., Blech S., Ebner T., Ludwig-Schwellinger E. et al. The metabolism and disposition of the oral direct thrombin ingibitor, dabigatran, in humans// Drug. Metab. Dispos.-2008.-2,-P.386-389.

131. Bousser M.G., Antithombotic strategy in stroke//Thromb. Haemost.-2001.-8.-P.61-67.

132. Brass . L. F.,.Zhu L, Stalker T.J. Novel therapeutic targets at the platelet vascular interfase// Arteriosclerosis, Thrombosis, and Vascular Biology.-2008.-P.43-50.

133. Bretner M., Najda-Bematowicz A., Lebska M. et al New inhibitors of protein kinase CK2, analogues of benzimidazole and benzotriazole// Mol. Cell Biochem.-2008.-316(1-2).-P.87-89.

134. Bretner M., Najda-Bernatowicz A., Lebska M. et al. New ingibitors of protein kinase CK2 analogues of benzimidazole and benzotriazole//Mol.Cel,Biochem.-2008 .-1-2 .-P.87-89.

135. Brito F.S.,Kummerle A.E.,Lugnier C et al. Novel thienylacylhydrazone derivatives ingibit platelet aggregation through cyclic nucleotides modulation and thromboxaneA2 synthesis ingibition// Eur. J. Pharmacol.-2010.-638(1-3).-P.5-12.

136. Broos K, Feys HB, De Meyer SF Platelets at work in primary hemostasis//Blood Rev.-2011.-25(4).-P155-67.

137. Burkert, U. Molecular Mechanics / U. Burkert, N.L. Allinger. Washington, D.C. (USA): ACS, 1982.-340 p.

138. Bynagari-Settipalli YS, Chari R., Kilpatrick L et al Protrin kinase C -possible therapeutic target to treat cardiovascular diseases// Cardiovasc. Hematol. Disord drug Targets.-2010.-10(4).-P.292-308.

139. Capranzano P., Ferreiro J.L., Angiolillo D.J. Prasugrel in acute coronary syndrome patients undergoing percutaneous coronary intervention//Expert. Rev. Cardiovasc. Ther.- 2009.-4.-P.361-369.

140. Catherine J., Pears K., Auger M. et al Differential roles of the PKC8 and e, in mouth and Human Platelets//PLoS ONE.-2008.-3(1 l).-P.37-43.

141. Cattaneo M., New P2Y12 blockers// J. Thromb. Haemost.- 2009.-1.-P.262-265.

142. Cattaneo M. Resistance to anti-platelet agents//Thromb Res.- 2011.-3.-P.61-63.

143. Cazenave J.P.,Gachet C., Lanza F et al Platelets and arterial thrombosis //Bull Acad Natl Med.- 2003.- 187(1).- P. 35-44.

144. Cattaneo M., Lecchi A. Ingibition of the platelet P2Y12 receptor for adenosine diphosphate potentiates the antiplatelet effect of prostacyclin//!. Thromb. Haemost.- 2007.-3.-P.577-582.

145. Cerecetto H., Gerpe A., Gonzales M. et al. Pharmacological properties of indazole derivatives; recent developments// Mini Rev. Med. Chem.-2005.-10.-P.869-878.

146. Chackalamanni S., Doller D., Eagen K. et al Potent low molecular weight thrombin receptor antagonists// Bioorg. Med. Chem Lett .-2001.-21.-P.2851-2853.

147. Charton J., Girault-Mizzi S., Debreu- Fontain M.A. et al. Synthesis and biological evaluation of benzimidazole derivatives as potent AMP-activated protein kinase activators// Bioorg Med Chem.-2006.-14(13).-P.4490-518

148. Chen J., Lopez J.A. Interaction of platelets with subendothelium and endothelium// Microcirculation.-2005.- 12(3).-P.235-246.

149. Chougale A., Panascar S., Gurao P. et al Optimization of alloxan dose is essential to induce stable diabetes for prolonged period // Asian J. of Biochemistry.-2007.-2.-P.402-408.

150. ClaphamDE. Calcium signaling//Cell.-2007.-131(6).-P.1047-1058.

151. Coccheri S., Antiplatelet drugs-do we need new options? With a reappraisal of direct thromboxane ingibitors//Drugs.-2010.-7.-P.887-908.

152. Collet J.P., Montaiescot G. Platelet function testing and implications for clinical practice//J. Cardiovasc. Pharmacol. Ther.-2009.-3-P. 157-169.

153. Colman R.W. Platelet cyclic adenosine monophosphate phosphodiesterases: targets for regulating platelet-related thrombosis// Semin. Thromb. Hemost.-2004.-4.-P.451-460.

154. Colomer J., Allison A., Schmitt E. et al Identification and inhibitory properties of a novel Ca2+/Calmodulin antagonist// Biochemistry.-2010.-49.- P.4244-4254.

155. Corbin J.D., Francis S.H. Cyclic GMP phosphodiesterase-5: target of sidenafiol// J. Biol Chem.-1999.-274(20).-P. 13729-32.

156. Cosem'ans M. E, Schols E.M., Stefanini L.et al Key role of glycoprotein Ib/V/IX and von Willebrand factor in platelet activation-dependent fibrin formation at low shear flow//Blood.-2011.-2.-P.651-650.

157. Cowda R.M., Khan I.A., Vasavada V.S., Sacchi T.J. Therapeutics of platelets glycoprotein Ilb/IIIa receptor antagonism// Am. J. Ther.-2004.-l 1.-4.-P.302-307.

158. D.Siluk, R.Kaliszan, P.Haber. et al. Antiaggregatory activity of hypoglycaemic sulphonylureas// Diabetologia.-2002.- 45.-P.1034-1037.

159. Dangel O, Mergia E, Karlisch K. et al. Nitric oxide-sensitive guanylyl cyclase is the only nitric oxide receptor mediating platelet inhibition//J.Thromb Haemost.- 2010.-6.-P. 1343-1352.

160. De Meyer S.F., Vanhoorelbeke K., Broos K. et al Antiplatelet drugs // Br. J. Haematol.-2008.-142.-P.515-528.

161. Dean W.L. Role of platelet plasma membrane Ca-ATPase in health and disease// World J Biol Chem.-2010.-l(9).-P:265-270.

162. Dejana E, Callioni A, Quintana A. et al Bleeding time in laboratory animals. II A comparison of different assay conditions// Lupus.- 1994.-3.-P. 247-251.

163. Dewar M.J.S., Zoebisch E.G., Healy E.F., Stewart J.J.P. AMI: a new general purpose quantum mechanical molecular model // J. Amer. Chem. Soc. 1985. - V. 107. - № 13. - P. 3902 - 3909.

164. Diener H., Cuncha L., Forbes C. et al. European Stroke Prevention Study 2: dipyridamol and acetylsalicylic acid in the prevention of stroke. J. Neurol. Sci.-1996.- 143.-P.1-13.

165. DiMinno G, Silver MJ. Mouse antithrombotic assay: a simple method for the evaluation of antithrombotic agents in vivo. Potentiation of antithrombotic activity by ethyl alcohol// J Pharmacol Exp Ther. -1983,- 225(1).- P.57-60.

166. Dimitrow P., Undas A., Bober M. Plasma biomarkers of endotelial disfunction in patients with hypertrophic cardiomyopathy//. Pharmacological Reports.-2007.- 59.-P.715-720.

167. Dogne JM., de Leval X., Kolx P et al. Pharmacological evaluation of the novel thromboxane modulator BM-567. Effects BM-567 on platelet function//Prostaglandins Leukot. Essent Fatty Acids.-2003.-68910.-P.49-54.

168. Dragani A., Pascale S., Recchiuti A. et al. The contribution of cyclooxygenase-1 and -2 to persistent thromboxane biosynthesis in aspirin-treated essential thrombocythemia: implications for antiplatelet therapy// Blood.- 2010.-5.-P.1054-1061.

169. Dragani A., Pascale S., Recchiuti A. et al. The contribution of cyclooxygenase-1 and -2 to persistent thromboxane biosynthesis in aspirin-treated essential thrombocythemia: implications for antiplatelet therapy// Blood.- 2010.-5.-P. 1054-1061.

170. Duerschmied D, Bode C. The role of serotonin in haemostasis// Hamostaseologie. -2009.-29(4).-P.356-359.

171. Eisert W.G., Hauel N., Stangier J. et al. Dabigatran: an oral novel potent reversible nonpeptide ingibitor of thrombin// A rterioscler. Thromb. Vase. Biol.- 2010.- 10.-P. 1885-1889.

172. Emomoto Y., Adachi S. Matsushima-Nashivaki R. et al. Tromboxane A2 promotes soluble CD40 ligand release from human platelets// Atherosclerosis.-2010.-2.-P.415-421.

173. Estrada-Soto S., Villalobos-Molina R., Aquierre-Crespo F. et al. Relaxant activity of 2-(substituted phenyl)-lH-benzimidazoles on isolated rat aortic rings: design and synthesis of 5-nitro derivatives//Life Sci.-2006.-5.-P.430-435.

174. Falker K, Haglund L, Gunnarsson P. et al. Protease-activated receptor 1 (PARI) signalling desensitization is counteracted via PAR4 signalling in human platelets//Biochem J.-2011.-436(2).-P.469-80.

175. Fantidis P. The role of intracellular 3'5'-cyclic adenosine monophosphate in atherosclerosis//Curr. Vase. Pharmacol.-2010.-4.-P.464-472.

176. Farid N.A., Payne C.D., Ernest C.S. et al. Prasugrel, a new thienopyridine antiplatelet drug, weakly ingibits cytochrome P450 2B6 in Humans// J.Clin.Pharmacol.-2008.-l.-P.53-59.

177. Farndale R.W., Sixma J.J., Barnes M.J., Groot G. The role of collagen in thrombosis and hemostasis// Thrombosis Hemostasis.- 2004.-2.-P.561-573.

178. Farrell D.H., Thiagarajan P., Chung D.W., Davie E.W. Role ot fibrinogen alpha and gamma chain sites in platelet aggregation // Proc. Natl. Acad. Sci. USA.-1992.-V. 89,- P. 1072910732.

179. Feher G., Feher A., Pusch G. et al. The genetics of antiplatelet drug resistence// Clin. Genet.-2009.-l.-P.l-18.

180. Feletou M., Vanhoutte P. Endothelial dysfunctionA a multifaceted disorder//Am. J. Physiol. Heart Circ Physiol .-2006.-291.-P.985-1002.

181. Fischer M.J., Paulussen J.J., Tolenaere J.P. et al Structure-activity relationships of astemizole derivatives for ingibition of store operated Ca2+ channels and exocytosis// Eur. J. Pharmacology.-1998.-350(2-3).-P.353-361.

182. Flieri U., Schopp C., Jaitner J. The novel P2Y12 antagonist AZD6140 rapidly and reversibly reduces platelet activation in diabetic rats// Throb.Res.-2010.-125(3).-P.93-99.

183. Flieri U., Schopp C., Jaitner J. et al. The novel P2Y12 antagonist AZD6140 rapidly and reversibly reduces platelet activation in diabetic rats//Thromb. Res.- 2010.-3.-P.93-99.

184. Florian K., Hae-young S., Volker K. Antiplatelet drugs in cardiolodical practice: Established strategies and new developments// Vase. Health Risk Manag.-2008.-3.-P.637-645.

185. Fontana P., Reny J.L. Pharmacogenetics and antiplatelet//Rev. Med. Interne.-2005.-26.-9.-P.25-732.

186. Forstermann U. Nitric oxide and oxidative stress in vascular disease//Pflugers Arch. 2010.-6.-P.923-39.

187. Francis SH, Busch JL, Corbin JD, Sibley D. cGMP-dependent protein kinases and cGMP phosphodiesterases in nitric oxide and cGMP action// Pharmacol Rev.-2010.-62(3).-P.525-563.

188. Freedman J.E. Oxidative stress and platelets// Arteriosclerosis, Thrombosis and Vascular Biology.-2008.-28.-P.l 1-16.

189. Gachet C. Regulation of platelet functions by P2 receptors//Annual Review of Pharmacology and Noxicolody.-2006.- Vol.46.-P. 277-300.

190. Galo L.C., Davel A.P., Xavier F.E. et al. Time-depended increases in ouabain-sensitive Na+, K+-ATPase activity in aortas from diabetic rats:The role of prostanoids and protein kinase C//Life Sci.-2010.-9-10.-P.302-308.

191. Garcia A., Kim S., Bhavaraju K. et al Role of phosphoinisitide 3-kinase beta in platelet aggregation and thromboxane A2 generation mediated by Gi signaling pathways// Pharmacology.-2010.-429 (2).-P.369-367.

192. Gardiner E.E., Arthur J.F., Bemdt M.C. et al Role of calmodulin in platelet receptor function// Curr. Med. Chem Cardiovasc. Hematol Agents.-2005.-3(4).-P.283-287.

193. Garuti L., Ghedini N., Leoni A. et al. Design and synthesis of 3-(benzimidasol-2-yl)-propionic acids as thromboxane A2 receptor antagonist/ZFarmaco.- 1993.-11.-P.1531-1546.

194. Genieser H.G., Winkler E., Butt E. et al. Derivatives of 1-beta-D-ribofuranosylbenzimidazole 3'5'-phosphate that mimic the actions of adenosine 3'5'- phosphate (cAMP) and guanosine 3'5'- phosphate (cGMP)// Carbohydr. Res.- 1992.-234.-P.217-235.

195. Geraldo R.B., Bello M.L., Dias L.R. et al Antiplatelet activity and structure-activity relationship study of Pyrazolopyridine Derivatives as potential series for treating thrombotic// J. Atheroscler. Throb.-2010.-17(7) .-P.730-739.

196. Geratz J.D.,Tidwell R.R., Brinkhous K.M. et al. Specific ingibition of platelet agglutination and aggregation by aromatic amidino compounds// J. Thromb. Haemost.-1978.-2.-P.411-425.

197. Gerbone A.M., Macarone-Paimieri N., Saidalamacchia G et al. Diabetes, vascular complicatioms and antiplatelet therapy: open problems//Acta Diabetol.-2009.- 46(4).-P.253-261.

198. Gerspacher M., Altmann E., Beerli R. et al. Penta-substituted benzimidazoles as potent antagonists of the calcium-sensing receptor (CaSR-antagonists)//Bioorg. Med. Chem. Lett.- 2010.-17.-P.5161-5164.

199. Ghofrani H.A., Osterloh I.H., Grimminger F. Sildenafil: from angina to erectile dysfunction to pulmonary hypertension and beyond// Nat. Rev Drug Disc 2006.-5.-P.689-702.

200. Giannarelli C, Zafar MU, Badimon JJ Prostanoid and TP-receptors in atherothrombosis: is there a role for their antagonism?// Thromb Haemost.-2010.- 104(5).-P.949-954.

201. Gianoncell A., Cozza G., Orzeszko A. et al Tetraiodobenzimidazoles are potent kinase CK2// Bioorg. Med. Chem.-2009.-17(20).-P.7281-7289.

202. Gibbins J.M. Platelet adhesion signaling and the regulation of thrombus formation// J. Cell Sci.-2004.-117.-P.3415-3424.

203. Gilbert J.C., DeFeo-Fraulini T., Hutabarat R.M. et al First-in-human evaluation of anti von Willebrand factor therapeutic aptamer ARC 1779 in healthy volunteers //Circulation.-2007.-116.-2678-2686.

204. Gilio K., Harper M.T., Cosemans J.M. et al. Functional divergence of pkateket protein kinase C (PKC) isoforms in thrombus formation on collagen//J. Biol. Chem.-2010.-30.-P.23410-23419.

205. Gkaliagkousi E., Passacquale G, Douma S. et al Platelet activation in essential hypertension: implications for antiplatelet treatment//Am. J.Hypertens.-2010.-23(3).-P.229-36.

206. Gnatenko D.V.,Perrotta P.L. Bahou W.F. Proteomic approaches to dissect platelet function: Half the story// Blood.- 2006,- 108(13).-P. 3983-3991.

207. Goodman T., Ferro A., Sharma P. Pharmacogenetics of aspirin resistance: a comprehensive systematic review// Br. J. Clin. Pharmacol.- 2008.-2.-P.222-232.

208. Granneman J.G., Whity C.J. CGP 12177A modulated brown fat adenylate cyclase activity by interacting with two distinct receptor sites//J. Pharmacol. Exp. Ther.-1991.-2.-P.421-425.

209. Gratacap M., Martin V., Valera M. et al The new tyrosine-kinase ingibitor and anticancer drug dasatinib reversibly affects platelet activation in vitro and in vivo// Blood.-2009.-№9.-P.1884-1892.

210. Grygiewski R.G., Prostacyclin among prostanoids// Pharmacol. Rep.- 2008.-1.-P.3-11.

211. Grygiewski R.J. Prostacyclin among prostanoids // Pharmacol Rep.-2008.- 60(1). P.3-11.

212. Guarneri L. A new model of pulmonary microembolism in the mouse// J. Pharmacol Methods,- 1988.-20.-P.161-167.

213. Guglielmi G, Vinuela F, Dion J, Duckwiler G. Electrothrombosis of saccular aneurysms via endovascular approach. Part 2: Preliminary clinical experience //J Neurosurg. -1991.- 75(1).-P.8-14.

214. Guidetti GF, Lova P, Bernardi B. et al. The Gi-coupled P2Y12 receptor regulates diacylglycerol-mediated signaling in human platelets//J Biol Chem.- 2008.-43.-P.28795-28805.

215. Gurbel P.A., Jeong Y.H., Tantry U.S. Vorapraxar: a novel proteaseOactivated receptor-1 ingibitor//Expert Opin Investig. Drugs.-201 l.-20(10).-P.1445-1453.

216. Hagedom I., Vogtle T., Nieswandt B. Arterial thrombus formation. Novel mechanisms and targets// Hemostaseologie.- 2010.- 30(3).- P.127-135.

217. Halkes P.S., van Gijn J., Kapelle L.J. et al. Aspirin plus dipyridamol versus aspirin alone after cerebral ischaemia of arterial origin (ESPRIT): randomized controlled trial//Lancet.-2006.-367(9523).-P. 1665-1673.

218. Hall R, Maser CD. Review article: antiplatelet drugs: a review of their pharmacology and management in the perioperative period// Anesth. Analg.-201 l.-l 12.-P.292-318.

219. Hanson J.,Rolin S.,Reynaud D. et al. In vitro and in vivo pharmacological characterization of BM-613, a novel dual thromboxane synthase ingibitor and thromboxane receptor antagonist// J. Pharmacol. Exp. Ther.-2005.-313(l).-P.293-301.

220. Harper M.T., Poole A.W. Diverse functions of protein kinase C isoforms in platelet activation and thrombus formation.//J. Thromb. Haemost.- 2010.-3.-P.454-462.

221. Harper A.G., Mason M.J., Sage S.O. A key role for dense granule secretion in potentiation of the Ca2+ signal arising from store-operated calcium entry in human// Cell Calcium.-2009.-45.-P.413-420.

222. Harper AG, Mason MJ, Sage SO. A key role for dense granule secretion in potentiation of the Ca2+ signal arising from store-operated calcium entry in human platelets//. Cell Calcium.-2009.-45(5).-P.413-420.

223. Harper M.T., Poole A.W. Isoform-specific functions of protein kinase C: the platelet paradism// Biochem Soc Trans.-2007.- 35.-P. 1005-1008.

224. Hass W.K., Easton J.D., Adams HP J. A randomized trial comparing ticlopidin hydrochloride with aspirin for the prevention of stroke in high risk patients. N Engl J Med.- 1989.-321.-P.501-507.

225. Hasted S., van Giezen J.J. Ticagrelor: the first reversibly binding oral P2Y12 receptor antagonist// Cardiovasc Ther.-2009.- 27(4) .-P.259-74.

226. Heldason C.M., Grossi E., Pandey D., et al. Platelet aggregation and recruitment with aspirin-clopidogrel therapy//Cerebrovasc. Dis. -2008.-25(5).-P.392-400.

227. Higashi Y., Noma K., Yoshizumi M. et al. Endothelial function and oxidative stress in cardiovascular diseases// Circ. J.- 2009,- 3.-P.411-480.

228. Holinstat M., Voss В., Bilodeau M.L., Hamm H.E. Protease-activated receptors differentially regulate human platelet activation through a phosphatidic acid-dependent pathway// Mol. Pharmacol.-2007.-3.-P.686-694.

229. Hunter R.W., Mackintosh C., Hers I. Protein kinase C-mediated phosphorylation and activation of PDE3A regulate cAMP levels in human platelets// J. Biol. Chem.-2009.-284(18).-P.12339-12348.

230. Hwu JR, Singha R, Hong SC et al. Synthesis of new benzimidazole-coumarin conjugates as anti-hepatitis С virus agents.// Antiviral Res.-2008.-77(2).-P.157-162.

231. HyperCube 1пс.:Официальный сайт компании Электронный ресурс. 2008. URL: http://www.hyper.com.

232. Iyu D, Juttner M, Glenn JR, White AE, Johnson AJ, Fox SC, Heptinstall S. PGE1 and PGE2 modify platelet function through different prostanoid receptors// Prostaglandins Other Lipid Mediat.-2011.-94(1-2).-P.9-16.

233. Iyu D.,GlennJ.R., White A.E et al. The role of prostanoid receptors in mediating the effects of PGE(2) on human platelet function// Platelets.-2010.-21(5).-P.329-342.

234. Jardin I, Lopez JJ, Pariente JA, Salido GM, Rosado JA. Intracellular calcium release from human platelets: different messengers for multiple stores//Trends Cardiovasc Med.-2008.-18(2)-P.57-61.

235. Jardin I., Lopes J.J., Pariente J.A. et al. Intracellular calcium release from human platelets: differents messenders for multiple stories// Trends Cardiovasc Med.-2008.-2.-P.57-81.

236. Jardine I., Redondo P.C., Salido G.M. et al. Endogenously generated reactive oxyden species reduce PMCA activity in platelets from patients with non-insulin-dependent diabetes mellitus//Platelets. 2006.-17.-P.283-288.

237. Jeng J.H.,Wu H.L., Lin B.R. Antiplatelet effect of sanguinarine is correlated to calcium mobilization, thromboxane and cAMP production//Atherosclerosis.-2007.-2.-P.250-258.

238. Jennings L.K. Mechanisms of platelet activation: need for new strategies to protect against platelet-mediated atherothrombosis//Thromb Haemost.-2009.- 102(2).-P.248-57.

239. Jennings LK. Role of platelets in atherothrombosis//Am J Cardiol. -2009.-103(3).-P. 410.

240. Jensen B.O., Kleppe R., Kopperud R. et al. Dipyridamole synergizes with nitric oxide to prolong ingibition of thrombin-induced platelet shape change//Platelets.-2011.-22(1).-P.7-18.

241. Johnston-Cox HA, Ravid K. Adenosine and blood platelets// Purinergic Signal.- 2011,-7(3).-P357-65.

242. Jung SM, Moroi M. Platelet glycoprotein VI//Adv Exp Med Biol.- 2008.-640.-P.53-63.

243. Kamata T., Handa M., Sato Y. Membrane-proximal a/p stalk interactions differentially regulate integrin activation// J.Biol. Chem.-2005.-280.-P.24775-24783.

244. Kas C., Ayhan-Kilsigil G., Osbey S. et al Synthesis and antioxidant properties of novel N-metyl-l,3,4,-thiadiazol-2-amine and 4-methyl-2H-l,2,4,-triazole-3(4H)-thione derivatives of benzimidazole class//Bioorg. Med Chem.-2008.-16(8).-P.4294-4303.

245. Kastrati A, Mehilli J, Neumann FJ, et al. Abciximab in patients with acute coronary syndromes undergoing percutaneous coroneous intervention after clopidogrel pretreatment: the ISAR(REACT 2 randomized trial. JAMA.- 2006.- 295 (13).-P.1531-1538.

246. Kawazu S., Suzuki M., Negishi R., Iskii A., Sando H., Katagiri H., Kanazawa Y., Yamanoucni S., et al. Intial phase II clinical studies of miglitazole (DG-5128). //Diabetes. 1987. - Vol.36. - №2,-P.221-226.

247. Kayama N.,Sakaguchi K., Kubota S. et al. Ingibition of platelet aggregation by 1-alkylimidazole derivatives, thromboxane a synthethase inhibitors/ZProstaglandins.-1981.-21.-P.543-554.

248. Kenngott S., Olze R., Kolmer M. et al. Clopidogrel and proton pump ingibitor (PPI) interaction: separate intake and a non omeprazole PPI the solution//Eur. J. Med. Res.-2010.-5.-P.220-224.

249. Kiliskiran A.B., Oto A., Ozcebe O. Thrombocytopenia associated with antithrombotic therapy in patients with cardiovascular diseases: diagnosis and treatment// Am J. Cardiovasc. Drugs.-2008.-5.-P.327-339.

250. Kim Hyuang-Hwan, Liao J.K. Translational therapeutics of dipiridamol//Arteriosclerosis, Thrombosis, and Vascular Biology.-2008.-28.-P.39-42.

251. Kim S, Kunapuli SP. P2Y12 receptor in platelet activation//Platelets.-2011.-1.-P.54-58.

252. Kochetkova M.N., Ozeretskovskaia N.N. Effect of benzimidazole derivatives and levamizole (phenylimidothiazole) on cyclic 3'5'-AMP phosphodiesterase from pig brain//Biokhimila.-1982.-7.-P. 1208-1211.

253. Kontogiorgis C., Hadjipavlou-Litina D. Tromboxane synthase ingibitors and tromboxane A2 receptors antagonists: a quantitative structure activity relationships (QSARs) analysis// Curr. Med. Chem.- 2010.-28.-P.3162-3214.

254. Krotz F., Sohn H.Y,.Klauss V. Antiplatelet drugs in cardiological practice: Established strategies and new developments// Vase. Health. Risk Manad.-2008.-4(3).-P.637-645.

255. Kumar A., Kao J. Platelet resistance to antiplatelet drugs// Resent. Pat. Cardiovasc. Drug. Discov.-2009.-2.-P.98-108.

256. Kuo H.L., Lien J.C., Chang C.H. et al. NP-1842-(5-methyl-2-fiiryl benzimidazole., a novel orally active antithrombotic agent with dual antiplatelet and anticoagulant activities//Naunyn Schmidebergs Arch Pharmacol.-2010.- 6.- P.495-505.

257. Kurz K.D., Main B.W., Sandusky G.E. Rat model of arterial thrombosis induced by ferric chloride//Thromb.Res. -1990. -15.- P.269-280.

258. Labinas M., Ho C., Banerjee S. et al. Meta-analysis of clinical efficacy and bleeding risk with intravenous glycopronein Ilb/IIIa antagonists for percutaneous coronary intervention// Can. J.Cardiol.- 2007.-12.-P.963-970.

259. Legate K.R., Wickstrom S.A., Fassler R. Genetic and cell biological analysis of integrin outside-in signaling// Genes & Dev.-2009.-23(4).-P.397-418.

260. Legrand D., Scheen A. Aspirin therapy for cardiovascular prevention in the diabetic patient: what have we learned from the evidence?// Rev. Med. Suisse.-2006.-76.-P.1904-1908.

261. Lemesle G., Maluenda G., Bonelto L. et al Dosing strategirs for antiplatelet therapy in percutaneous coronary intervention.//Hosp.Pract.-2010.-38(2).-P. 50-58.

262. Lenoci L., Duvemay M. Satchell S. et al. Mathematical model of PARl-mediated activation of human platekets// Mol. Biosyst.-201 l.-7(4).-P.l 129-37.

263. Leo R., Pratico D., Iuliano L. Et al. Platelet activation by Superoxide anion and hydroxyl radicals intrinsically generated by platelets that had undergone anoxia and then reoxygenated//Circulation.-l 997.-Vol.95.-№4.-P.885-891.

264. Leonardo J., Tamariz J., Hunter Y. Et al. Blood viscosity and hematocrit as risk factors for type 2 diabetes mellitus the atherosclerosis risk in communities study// Am. J. Epidemiol.-2008.-10.-P.1153-1160.

265. Li Z, Delaney MK, O'Brien KA, Du X. Signaling during platelet adhesion and activation//Arterioscler Thromb Vase Biol.- 2010.-30(12).-P.2341-2349.

266. Lo H.M., Huang T.F., Lin C.N. et al. 2-Ethoxy-5-methoxy-2-(5-methylthienyl)chalcone inhibits collagen-induced protein tyrosine phosphorylation and thromboxane formation during platelet aggregation and adhesion// Pharmacology.-2009.-84(3).-P.145-152.

267. Lombo B, Diez JG. Ticagrelor: the evidence for its clinical potential as an oral antiplatelet treatment for the reduction of major adverse cardiac events in patients with acute coronary syndromes//Core Evid.- 2011.-6.-P.31-42.

268. Lopes R. Antiplatelet agents in cardiovascular disease// J. Thromb. Thrombolysis.-2011.-3.-P.306-309.

269. Lowering E.C., Meijers J.C. Levi M. Platelet-vessel wall interaction in health and disease//Neth J. Med.-2010.-6.-P.242-251.

270. Lyu D., Glenn J.R., White A.E. et al. The role of prostanoid receptors in mediating the effects of PGE(20 on human platelet function.- 2010.-5.-P.329-342.

271. Ma H., Hara A., Xiao C.Y. et al Increased bleeding tendency and decreased susceptibility to thromboembolism in mice lacking the prostaglandin E receptor subtype EP(3)//Circulation .-2001.-104.-P. 1176-1180.

272. Ma T.K., Lam Y.Y., Tan V.P. et al. Impact of genetic and acquired alteration in cytochrome P450 system on Pharmacologic and clinical response to Clopidogrel// Pharmacol. Ther.-2010.-2.-P.249-259.

273. Macaulay T.E„ Allen C.,Ziada K.M. Trombin receptor antagonism the potential of antiplatelet medication SCH 530348// Expert Opin Pharmacother.- 2010.-6- P. 1015-1022.

274. Maclntyre D.E., Pearson J.D., Gordon J.L. Localisation and stimulation of prostacyclin production in vascular cells. //Nature. 1978. - Vol.271. - P.549-551.

275. Madan R., Gupta B., Saluja S. et al. Coagulation profile in diabetes and its association with diabetic microvascular complications//JAPI.-2010.-58.-P.481-484.

276. Mahaut-Smith MP, Evans RJ. The P2X1 receptor and platelet function//Purinergic Signal.-2011,- 7(3).-P.341-56.

277. Maloney S.F., Brass L.F., Diamond S.L. P2Y12 or P2Y1 inhibitors reduce platelet deposition in a microfluidic model of thrombosis while apyrase lacs efficacy under flow conditions// Integr.Biol.-2010.-2(4).-P. 183-192.

278. Mannucci .P. Platelet/von Willebrand Factor Ingibitors to the Rescue of Ischemic Stroke//Arteriosclerosis, Thrombosis and Vascular Biology.-2010.-30.-1882-1884.

279. Manrique C., Lastra G., Palmer J et al. Aspirin and diabetes Melitus: revisiting an old player//Ther. Adv. Cardiovasc. Dis.-2008.-l.-P.37-42.

280. Maree A.Q. , Fitzgerald D.J. Variable platelet response to aspirin and Clopidogrel in atherothrombotic disease// Circulation.-2007.-115.-P.2196-2207.

281. Margarucci L, Roest M, Preisinger C et al. Collagen stimulation of platelets induces a rapid spatial response of cAMP and cGMP signaling scaffolds//Mol Biosyst.-2011.-7(7).-P.2311-2319.

282. Margarucci L, Roest M, Preisinger C, Bleijerveld OB, van Holten TC, Heck AJ, Schölten A. Collagen stimulation of platelets induces a rapid spatial response of cAMP and cGMP signaling scaffolds// Mol Biosyst.-2011 ,-7(7).-P.2311-2319.

283. Mariappan D, Winkler J., Hescheler J., Sachinidis A. Cardiovascular genomics: a current overview of in vivo and in vivo studies// Stem Cell. Rev.- 2006.- 2(1).-P. 59-66.

284. May A.E., Seizer P., Gawaz M. Platelets: Inflammatory Fireburgs of Vascular Walls//Arteriosclerosis, Thrombosis, Vasc.Biol.-2008.-28.-P.5-9.

285. Michelson A. P2Y12 antagonism: promises and challenges // Artherioscler. Thromb. Vase. Biol.-2008.-V.28,- P.33-38.

286. Miyamoto M.,Yamada N., Ikezawa S et.al. Effects of TRA-418, a njvel TP-receptor antagonist, and IP-receptor agonist, on human platelet activation and aggregation.- 2003.-140(5).-P.889-894.

287. Miyata S., Miyata T., Kada A. et al. Aspirin resistance// Brain Nerve.-2008.-l 1.-P.1357-1364.

288. Miyata S., Miyata T., Kada A., Nagatsuka K. Aspirin resistans// Brain nerve.-2008.-11.-P.1357-1364.

289. Moharam B.A., Jantan I., Ahmad F., Jalil J. Antiplatelet aggregation and platelet activating factor (PAF) receptor antagonistic activies of the essential oils of five Goniothalamus species// Molecules.-2010.-8.-P.5124-5138.

290. Molecular Similarity in Drug Design/ Ed.: P.M. Dean. London: Blackie Academic & Professional, 1995.-360 p.

291. Morel O., Kessler L., Ohimann P. Diabetes and the platelet: toward new therapeutic paradigms for diabetic atherothrombosis//Atherosclerosis.-2010.-2.-P.367-376.

292. Morel O., Kessler L., Ohimann P., Bareiss P. Diabetes and the platelet: toward new therapeutic paradism for diabetic atherothrombosis// Atherosclerosis.-2010.-2.-P.367-376.

293. Morini S., Zollo A. Does dual antiplatelet therapy always require gastroprotection? Gastroprotection with proton pump ingibitors is advisable for all patients who need dual antiplatelet therapy// G Ital. Cardiol (Rome).-2010.-6.-P.488-492.

294. Morris, G.M. AutoDock4 and AutoDockTools4: Automated docking with selective receptor flexibility / G.M. Morris, R. Huey, W. Lindstrom, M.F. Sanner, RK. Belew, D.S. Goodsell, A.J. Olson // J. Comput. Chem. 2009. - V. 30. - № 16. - P. 2785 - 2791.

295. Moscardô A, Santos MT, Fuset MP, Ruano M, Vallès J. Residual cyclooxygenase-1 activity and epinephrine reduce the antiplatelet effect of aspirin in patients with acute myocardial infarction//Thromb.Haemost.-2011.-105(4).-P.663-669.

296. Moser M, . Bode S. Antiplatelet therapy for atherothrombotic disease how can we improve the outcomes?//J. Thromb. Thrombolysis.-.2010.-30(20).-P.240-249.

297. Mousa S.A., Jeske W.P., Fareed J. Antiplatelet therapy prasugrel: a novel platelet ADP P2Y12 receptor antagonist//Clin. Appl. Thromb.Hemost.-2010.-16(2).-P.170-176.

298. May A. E., P. Seizer, M. Gawaz Platelets: Inflammatory firebugs of Wascular Walls// Arteriosclerosis, Thrombosis, and Vascular Biology.- 2008.- 28.-P.5-10.

299. Muir A.R., McMullin, Patterson C. et al. Assesment of aspirin resistance varies on a temporal basis in patients with ichaemic heart disease// Heart.-2009.-15.-P.1225-1229.

300. Murugappan S., Kunapuli S.The role of ADP receptors in platelet function // Frontiers in Bioscience.- 2006.- V.l 1,- P. 1977-1986.

301. Musugappa S., Kunapuli SP. The role of ADP receptors in platelet function// Front Biosci.-2006.-11.-P.1977-1986.

302. Nagaya N. Orally active prostacyclin analogue for cardiovascular disease//Int Angiol. 2010 .-29(2).-14-18.

303. Nagy B Jr, Jin J, Ashby B, Reilly MP, Kunapuli SP. Contribution of the P2Y12 receptor-mediated pathway to platelet hyperreactivity in hypercholesterolemia//J Thromb Haemost.- 2011.-9(4).-P.810-819.

304. Najda-Bernatowicz A., Lebska M., Orzeszko A. et al. Synthesis of new analogs benzotriazole, benzotriazole and phthalimide- potential inhibitors of human protein kinase CK2// Bioorg. Med. Chem.-2009.-4.-P. 1573-1578.

305. Natarajan A., Zaman A.G., Marshall S.M. Platelet hyperactivity in type 2 diabetes: role of antiplatelet agents// Diab.Vasc. Dis. Res.-2008.-2.-P.138-144.

306. Natarajan A.,Zaman A.G. Marshal S.M. Platelet hyperactivity n type 2 diabetes: role of antiplatelet agents// Diab.Vasc. Dis Res.-2008.-5(2).-P.138-144.

307. Navarrete-Vazquez G., Hidalgo-Figueros S., Torres-Piedra et al. Synthesis, vasorelaxant activity and antihypertensiv effect of benzod.imidazole derivatives// Bioorg. Med. Chem.-2010.-11.-P.3985-3991.

308. Nawarskas JJ, Nawarskas JJ, Clark SM. Ticagrelor: a novel reversible oral antiplatelet agent//Cardiol Rev.- 2011 -2.-P.95-100.

309. Negro Alvares J.M., Miralies Lopes J.C., Ortiz Martinez J.L. et al. Platelet-activating factor antagonists//Allergol. Immunopathol.-1997.-5.-P.249-258.

310. Neuhaus R., Reber B.F. Inhibition of membrane currents and rises of intracellular Ca2+ in PC12 cells by CGS 9343B, a calmodulin inhibitor// Eur. J. Pharmacology.-1992.-226(20).-P.183-185.

311. Niitsu Y., Sugidachi A., Ogawa T. Repeat oral dosing of prasugrel, a novel P2Y12 receptor ingibitor, results in cumulative and potent antiplatelet and antithrombotic activity in several animal species//Europ. J. of Pharmacol.-2008.-28.-P.276-282.

312. Nilsson T., Mann M., Aebersold R. et al. Mass spectrometry in high-throughput proteomics ready for big time//Nature Methods.-2010.-№9.-P.681-685.

313. Nishiya Y., Hagihara K., Kurihara A. et al. Comparison of mechanism-dased inhibition of human cytochrome P450 1C19 by ticlopidine, clopidogrel, and prasugrel//Xenobiotica.-2009.-11.-P.836-843.

314. Nissinen L., Pentikainen O.T., Jouppila A. et al A small-molecule ingibitor of integrin alpha2 betal introduces a new strategy for antithrombotic therapy// Thromb. Haemost 2010 103(2) 387-397.

315. Noe L., Peeters K., Issi B. et al Regulators of platelet cAMP levels: clinical and therapeutic implications//Curr Med. Chem.-2010.-17(26).-P.2897-905.

316. Noe L., Peeters K., Issi B. et al. Regulators of platelets cAMP levels: clinical and therapeutic implications// Curr. Med. Chem.-2010.-26.-P.2897-2905.

317. Noe L., Peeters K., Izzi B et al. Regulators of platelet cAMP levels: clinical and therapeutic implications//Curr. Med. Chem.-2010.-17(26).-P.2897-2905.

318. Nofal ZM, Soliman EA, Abd El-Karim SS, El Zahar MI, Srour AM, Sethumadhavan S, Maher TJ. Novel benzimidazole derivatives as expected anticancer agents.// Acta Pol Pharm.-2011.-68(4).-P.519-534.

319. Norman J.A., AnsellJ., Stone G. A. et al. CGS 9343B, a novel, potent, and selective ingibitor of calmodulin activity//Mol. Pharmacol.-1987.-5.-P.535-540.

320. Nylander S., Mattsson C., Ramstrom S., Lindahl T.L. Synergistic action between inhibition of P2Y12/P2Yt and P2Y12/thrombin in ADP- and thrombin-induced human platelet activation// Br J Pharmacol.-2004.-142(8).-P. 1325-1331.

321. O'Brian J.J., Rav D.M., Spinelli et al. The platelet as a therapeutic targen for treating vascular diseases and the role of eicosanoid and synthetic PPARgamma ligands//Prostaglandins other lipid Mediat.-2007.- 82.-P.68-76.

322. Pagano M.A.,Bain J., Kazimierczuk Z et al. The selectivity of ingibitors of protein kinase CK2: an update// Biochem J.-2008.-2.-P.352-365.

323. Pagni C.A, Cossandi C, Fontanella M et al. Pharmacologic therapy of subarachnoid hemorrhage//Minerva Anestesiol.-1998.-64(5).-P.221-224.

324. Palin R, Bom A, Clark JK et al. Synthesis and evaluation of N-3 substituted phenoxypropyl piperidine benzimidazol-2-one analogues as NOP receptor agonists with analgesic and sedative properties.// Bioorg Med Chem.- 2007,-15(4).-P. 1828-1847.

325. Patrono C. Aspirin resistance: definition, mechanisms and clinical read-outs //J.Thromb. Haemost.- 2003.-1.-P. 1710-1713.

326. Patrono C., Rocca B. Aspirin: Promise and resistanse in the new millennium//Arteriosclerosis, Thrombosis, and Vascular Biology.-2008.-28.-P.25-32.

327. Peter Carmeliet*, Lieve Moons, De'sire' Collen Mouse models of angiogenesis, arterial stenosis, atherosclerosis and hemostasis// Cardiovascular Research .-1998.-39.- P.8-33.

328. Peter N. Walsh Platelets: yin and yang//Blood.-2010.-115(l).-P.l-2.

329. Petrucci G., De Cristofaro R., Rutella S. et al. Prostaglandin E2 differentially modulates human platelet function throught the prostanoid EP2 and EP3 receptors// J.Pharmacol. Exp.Ther.-2011.-2.-P.391-402.

330. Philipose S., Konya V., Sreckovic I.et al. The prostaglandin E2 receptor EP4 is expressed by human platelets and potently ingigdits platelet aggregation and thrpmbus// Arterioscler.Thromb.Vasc.Biol.-2010,- 12.-P.2416-2423.

331. Pierschbacher M.D., Ruoslahti E. Cell attachment activity of fibronectin can be duplicated by small synthetic fragments of the molecule //Nature.- 1984.-V. 309.- P. 30-33.

332. Pinon J.F . In vivo study platelet aggregaton in rats// J. Pharmacol. Meth. 1984. Vol.12. P.79-84.

333. Pinto A., Di Raimondo, Tuttolomondo A et al Antiplanelet treatment in ischemic stroke treatment// Curr Top Med Chem.-2009.-9(14).-P. 1298-316.

334. Postula M., Tarchaiska-Krynska B., Filipiak K.L. Factors responsible for «aspirin resistance» can we identify them?// Kardiol. Pol.- 2010.-№4.-P.403-411.

335. Pratico D., Pasin M., Barry O.P. et al. Iron-dependent human platelet activation and hydroxyl radical formation//Circulation is available at http://www.circulationaha.org.

336. Rajendran S., Chircov Y. Platelet hyperaggregability: impaired resposiveness to nitric oxide as a therapeutic target// Cardiovasc. Drugs Ther.-2008.-3.-P.193-220.

337. Randal J. Vestrick, Mary E. Winn, Daniel T. Eitzman Murine Models of Vascular Thrombosis// Arteriosclerosis, Thrombosis, and Vascular Biology, 27.-2007.-P.2079-2093.

338. Randal J. Vestrick, Mary E. Winn, Daniel T. Eitzman Murine Models of Vascular Thrombosis// Arteriosclerosis, Thrombosis, and Vascular Biology.-27.-2007.-P.2079-2093.

339. Ravipati G., McClung J.A., Aronow W.S. et al. Type 5 phosphodiesterase ingibitors in the treatment of erectile dysfunction and cardiovascular disease//Cardiol. Rev.-2007.-15(2).-P.76-86.

340. RCSB PDB: Официальный сайт Protein Data Bank of The Research Collaboratory for Structural Bioinformatics Электронный ресурс. -2010. URL: http://www.pdb.org.

341. Rehse K., Birkhofer G. New NO-donors with antithrombotic and vasodilating activities, XI:2-Nitrosiminobenzimidazoles//Arch Pharm .-1995.-1.-P.77-80.

342. Rivera J, Lozano ML, Navarro-Nunez L, Vicente V. Platelet receptors and signaling in the dynamics of thrombus formation//Haematologica.- 2009.- 94(5)-P.700-711.

343. Rivera J., Lozano M.L, Navarro-Nunes L. et al Platelets receptors and signaling in the dynamics of thrombus// Hematologica .-2009.-94(5).-P.700-711.

344. Roger S., Badier-Commander C.,Paysant J. et al. The anti-aggregating effects of BAY 41-2272, a stimulator of soluble guanylyl cyclase, requires the presence of nitrix oxide//Br J.Pharmacol.-2010.-161 (5).-P. 1044-1058.

345. Rognoni A, Lupi A, Secco GG, Cavallino С et al. Update on Glycoprotein Ilb/IIIa: Role in Primary Coronary InterventiorV/Cardiovasc Hematol Agents Med Chem.- 2011-9(2).-PI06-112.

346. Sabatine M.S., Cannon C.P., Gibson C.M., et al. Addition of clopidogrel to aspirin and fibrinolytic therapy for myocardial infarction with ST-segment evalution// N. Engl.J. Med.-2005.-12.-P.1179-1189.

347. Sanderson S., Emery J., Baglin T.,Kinmonth A.L. Narrative review: aspirin resistance and its clinical implications/ Ann Intern Med.- 2005.-142.-P.370-380.

348. Saniabadi A.R. Fisher T.C., McLaren M. et al Effect of dipyridamole alone and in combination with aspirin on whole blood platelet aggregation, PGI2 generation, and red cell deformability ex vivo in man. .//Cardiovasc. Res. -1991.-25(2).-P. 177-183.

349. Santilli F., Mucci L., Davi G TP receptor activation and ingibition in atherothrombosis: the paradigm of diabetes mellitus// Intrn. Emerg. Med.-2011 6(3).-P.203-212.

350. Santilli F., Rocca В., De Cristofaro R. Platelet cyclooxygenase ingibition by low-dose aspirin is not reflected consistently by function assays: implications for aspirin «resistance»// J, Am.Coll. Cardiol.- 2009.-8.-P.667-677.

351. Sato N. Phosphodiesterase III ingibitor-characteristics, mechanisms of action, pharacokinetics, indications, contraindications, clinical trials, and side effects// Nippon Rinsho.-2007.-5.-P.43-48.

352. Saw J., Madsen E.H., Chan S. Maurer-Spurej E. The ELAPSE (Evaluation of Long-Term Clopidogrel Antiplatelet and Systemic Antiinflammatory Effects) study // J. Am. Coll Cardiol.- 2008.-52(23).-P. 1826-1833.

353. Scott D.M., Norwood R.M., Parra D. P2Y12 ingibitors in cardiovascular disease: focus on prasugrel// Ann Pharmacother.-2009.-l.-P.64-67.

354. Serebruany V.L., Steinhubl S.R., Berger PB, et al. Analysis of risk of bleeding complications after different doses of aspirin in 192,036 patients enrolled in 31 randomized controlled trials//Thromb Res Am J Cardiol.- 2005.-10.-P.1218-1222.

355. Sessions E.H., Smolinski M., Wang B. et al The development of benzimidazoles as selective rho kinase ingibitors// Bioorg. Med. Chem.-2010.-20(6).-P.1939-1943.

356. Shancar H., Kahner B., Kunapule S.P. G-protein dependent platelet signaling perspectives for therapy//Curr. Drug Targets.-2006.-7.-P.1253-1263

357. Schumacher W.A., Heran C.H., Steinbacher T.E. et al.//Thrombos. Res.-1992.-68.-P.157-166.

358. Shankar H., Garcia A., Prabhakar J. et al. P2Y12 receptor-mediated potentiation of thrombineOinduced thromboxane A2 generation in platelets occurs through regulation of Erkl/2 activation//J.Thromb. Haemost.-2006.-4(3).-P.638-647.

359. Shimizu T., Lipid mediators in health and disease: enzymes and receptors as therapeutic targets for the regulation of immunity and inflammation//Annu. Rev. Pharmacol. Toxicol.- 2009.-49.-P.123-150.

360. Signorello M.G., Giacobbe E., Passalscqua M., Leoncini G. The anandamide effect on NO/cGMP pathway in human platelet//J.Cell.Biochem.-201 l.-l 12(3).-P.924-932.

361. Sikka P, Bindra VK. Newer antithrombotic drugs//Indian J Crit Care Med.-2010.-14(4).-P.188-195.

362. Siller-Matula J., Schor K., Wojta J. et al. Thienpyridines in cardiovascular disease: focus on clopidogrel resistance// Thromb. Haemost.-2007.-3.-P.385-393.

363. Sincholle D., Coquelet C., Bonne C. Inhibition of platelet thromboxane synthetase by 1-(3-benzyloxy-1 E.octenyl)imidazole//Arzneimittelforschangt.-1986.-1 .-P. 117-119.

364. Singh M, Shin S. Changes in erythrocyte aggregation and deformability in diabetes mellitus: a brief review//Indian J Exp Biol. -2009.-47(l).-P.7-15.

365. Singh M., Shin S. Changes in erythrocyte aggregation and deformability in diabetes mellitus: A brief review// Indian Journal of experimental biology.-2009.-47.-P.7-15.

366. Smith J.B., Ingerman C.M., Silver M.J. Malondialdehyde formation as an indicator of prostaglandin production by human platelet. //J. Lab. Clin. Med. 1976. - Vol.88. - №1. - P. 167176.

367. Smith J.P., Haddad E.V., Downey J.D. et al. PGE2 decreases reactivity of human platelets by activating EP2 and EP4// Thromb. Res.-2010.-l.-P.23-29.

368. Smyth S.S., Woulfe D.S., Weits J.I. et al. G-protein-coupled receptors as signaling targets for antiplatelet therapy// Arterioscler. Thromb. Vase. Biol.- 2009.-4.-P 449-457.

369. Standards of Medical Care in Diabetes-2008// Diabetes Care.- 2008.- 31 (l).-P. 12-54.

370. Stangier J., Clemens A., Pharmacology, pharmacokinetics, and pharmacodynamics of dabigatran etexilate, an oral direct thrombin ingibitor// Clin. Appl. Thromb. Hemost.- 2009.-1.-P.9-16.

371. Stefanini L, Roden RC, Bergmeier W. CalDAG-GEFI is at the nexus of calcium-dependent platelet activation//Blood.-2009.-114(12).-P.2506-14.

372. Stratmann В., Tschoepe D Pathobiolody and cell interaction of platelets in diabetes// Diabetes and vascular disease research.-2005.-2.-P.16-23.

373. Strehi A., Munnix I.C., Kuijpers M.J et al. Dual role of platelet protein kinase С in thrombus formation: stimulation of proaggregatory and suppression of procoagulant activity in platelets//J. Biol. Chem.-2007.-10.-P.7046-7055.

374. Strehi A., Munnix I.C., Kuijpers M.J. et al Dual role of platelet protein kinase С in thrombus formation: stimulation of proaggregatory and suppression of procoagulant activity in platelets// J Biol Chem.-2007.-282(10).-P.7046-55.

375. Suzuki A. The mechanism of enhanced platelet intracellular calcium mobilization stimulated by serotonin—in the pathophysiology of mood disorders// Hokkaido Igaku Zasshi.-200 l.-76(5)-P.277-288.

376. Suzuki T., Sakai H., Takeguchi N. Thromboxane A(2)-mediated Cl(-) secretion induced by platelet-activated factor in isolated rat colon//Eur. J. Pharmacol.-2000.-2-3.-P.297-303.

377. Symyx® МОЕЮфициальный сайт компании «Symyx Technologies Inc.» Электронный ресурс. 2008. URL: http://www.mdl.com/.

378. Takeuchi K., Bastian J.A. Gifford-Moore D.S. et al. 1,2-Disubstituted indole, azaindole and benzimidazole derivatives possessing amine moiety: a novel series of thrombin ingibitors//Bioorg. Med. Chem Lett.-2000.-20.-P.2347-2351.

379. Tanaka A., Ito K., Nishino S. et al. Stadies on antiplatelet agents. II. Synthesis and platelet-inhibitory activity of 5-methyl-4-(3-pyridil)-2-(substituted benzimidazol-5-yl)imidazoes//Chem. Pharm. Bull.-1994.-3.-P.560-569.

380. Tanaka T., Sato R., Kurimoto T. Z-335, a new thromboxane A2 receptor antagonist, prevents arterial thrombosis induced by ferric chloride in rats// Eur. J.Pharmacol.-2000.-401.-P.413-418.

381. Taubert D., Berkels R., Grosser N et al. Aspirin induces nitric oxide release from vascular endothelium: a novel mechanism of action//Br. J. Pharmacol.-2004.-l.-P.159-165.

382. Ting H. J., Khasawneh F.T. Glybenclamide: An antidiabetic with in vivo antithrombotic activity//Eur.J.Pharmacol.-2010.-649(1-3).-P.249-54.

383. Trott, O. AutoDock Vina: improving the speed and accuracy of docking with a new scoring function, efficient optimization and multithreading / O. Trott, A.J. Olson // J. Comp. Chem. 2010. - V. 31. - № 2. - P. 455 - 461.

384. Tseng M.T., Dozier A., Haribaby B. et al Transendothelial migration of ferric ion in FeCl3 injured murine common carotid artery// Thromb. Res.- 2006.-118.-P.275-280.

385. Tucker K. L., Sage T., Stevens J.M. A dual role for integrin-linked kinase in platelets:regulating integrin function and a-granule secretion.//Blood.-2008.-Vol.112.-№12.-P.4523-4531.

386. Uchiuama S., Demaerschalk B.M., Goto S. et al. Stroke prevention by cilostazol in patient with atherothrombosis: meta-analysis of placebo-controlled randomized trials//J. Stroke Cerebrovask. Dis. -2009.-6.-P.482-490.

387. Ueno M, Kodali M, Tello-Montoliu A, Angiolillo DJ. Role of Platelets and Antiplatelet Therapy in Cardiovascular Disease//J Atheroscler Thromb.-2011.-18(6).-P.431-42.

388. Ueno M, Kodali M, Tello-Montoliu A, Angiolillo DJ. Role of platelets and antiplatelet therapy in cardiovascular disease// J. Atheroscler. Thromb.- 2011.-18(6).-P.431-442.

389. Ueno M, Rao SV, Angiolillo DJ Elinogrel: pharmacological principles, preclinical and early phase clinical testing//Future Cardiol.- 2010.-6(4).-P.445-53.

390. Valgimigli M., Minarelli M Antiplatelet and antithrombotic treatment after primary percutaneous coronary intervention: balancing safety and efficacy///Am Heart J.-2010.- 160 (6 Suppl).-P36-41.

391. Vanhoutte P.M. Endothelial dysfunction: the first step toward coronary arteriosclerosis//Circ. J.- 2009.-4.-P.595-601.

392. Varga-Szabo D, Braun A, Nieswandt B. Calcium signaling in platelets//Thromb Haemost.-2009.-7(7).-P. 1057-1066.

393. Varga-Szabo D., Braun A., Nieswandt B. Calcium signaling in platelet// Thromb. Haemost.- 2009.-7.-P. 1057-1066.

394. Varga-Szabo D., Pleines I.,.Nieswandt B. Cell Adhesion Mechanisms in Platelets// Arteriosclerosis, Thrombosis, and Vascular Biology.-2008.-28.-P.403-412.

395. Vazzana I., Terranova E., Tasso B. Et al. Quinolizidinyl-benzimidazoles as platelet-antiaggregating agents// Chem.Biodivers.-2008.-5.-P.714-728.

396. Vekasl J., Koltai K., Gaal V.et al. The effect of aspirin on hemorheological parameters of patients with diabetic retinopathy//Clin. Hemorheol. Microcirc.-2008.-39.-P.385-389.

397. Waheed A., Koopmann I., Ammon H. P. Calmodulin antagonist W7 increases inositol phosphates in insulin secreting RINm5F cells// Exp. Clin. Endocrinol. Diabetes.-1995.-5.-P.280-284.

398. Walter U., Gambaryan S. Cgmp and c GMP-dependent protein kinase in platelets and blood cells//Handb. Exp. Pharmacol.-2009.-191.-P.533-548.

399. Wang L., Ostberg O., Wihlborg A.-K., Brogren H., Jern S., Erlinge D. Quantification of ADP and ATP receptor expression in human platelets // J. Thromb. Haemost.- 2003.- V.I.- P. 330336.

400. Watson S.P., Auger J.M., McCarty O.J GPVI and integrin alphallb beta3 signaling in platelets //J. Thromb Haemost.-2005.-3.-P.1752-1756.

401. Wehrens X., Lehnart S., Marks A. Intracellular calcium release and cardiac disease// Annual review of physiology.- 2005.-67.-P.69-98.

402. Weich E.J., Naikawadi R.P., Li Z. et al. Opposing effects of platelet-activating factor and lyso-platelet-ctivating factor on neutrophil and platelet activation// Mol. Pharmacol.-2009.-1.-P.227-234.

403. Wu C.C, Wang T.W., Wang W.Y 2-(2-Br-Phenyl)-8-methoxy-benzoxazinone (HPW-RX2), a direct thrombine ingibitor with a suppressive effect on thromboxane formation in platelets// Eur.J. of Pharmacol.-2005.-Vol.527.-P.37-43.

404. Wu CC, Wu SY, Liao CY rt al. The roles and mechanisms of PAR4 and P2Y12/phosphatidylinositol 3-kinase pathway in maintaining thrombin-induced platelet aggregation//Br J Pharmacol.- 2010.-161(3).-P.643-58.

405. Xiang Y.Z., Xia Y., Gao X.M. et al Platelet activation, and antiplatelet targets and agents: current and novel strategies// Drugs.-2008.-12.-P.1647-1664.

406. Yamamoto H., Takahashi K., Watanabe H. Et al. Evaluation of the antiplatelet effects ofcilostazol, a phosphodiesterase 3 inhibitor, by VASP phosphorylation and platelet aggregation//Circ.J.- 2008.-11 .-P. 1844-1851.

407. Yang Y.M., Wang X.X., Wang S.L. et al. Suppressive effect in vitro of resveratrol on Adp induced human platelet aggregation and its active mechanism//Yao Xue Xue Bao.-2008.-4,-P.356-360.

408. Yokochi A., Itoh H., Maruyama J. et al. Colforsin-induced vasodilation in chronic hypoxic pulmonary hypertension in rats// J. Anesth.-2010.-3.-P.432-440.

409. Yoshida S., Sudo T., Niimi M. et al Ingibition of collagen-induced platelet aggregation by anopheline antiplatelet proteinö a saliva protein from a malaria vector mosquito// Blood.-2008.-4.-P.2007-2014.

410. Young, D.C. Computational Chemistry: A Practical Guide for Applying Techniques to Real-World Problems / D.C. Young. New-York: Wiley-InterScience, 2001. - 408 p.

411. Yuhki K., Kashiwagi H., Kojima F Roles of prostanoids in the pathogenesis of cardiovascular diseases// Int. Angiol.-2010.- 29(2).- P. 19-27.

412. Yuhki K., Kashiwagi H., Kojima F. et al Roles of prostanoids in the pathogenesis of cardiovascular diseases// Int Angiol.-2010-29.-P. 19-27.

413. Yuhki K., Kojima F., Kashiwagi H., Ushikubi F. Prostaglandin 12 and its metabolites// Nippon Rinsho.-2010.-7.-P.29-32.

414. Zhang S., Hu L., Du H. BF0801, a novel adenine derivative, inhibits platelet activation via phosphodiesterase inhibition and P2Y12 antagonism//Thromb. Haemost.-2010.-4.-P.845-857.

415. Zhang S., Hu L., Guo Y. et al. BF0801, a novel adeninenderivative, ingibits platelet activation via phosphodiesterase ingibition and P2Y12 antagonism// Thromb. Haemost.-2010.-104(4).-P.845-857.

416. Zhang W., Colman R.W., Trombin regulates intracellular cyclic AMP concentration in human platelets through phosphorylation of phospodiesterase 3A// Blood.-2007.-5.-P.1475-1482.

417. Zhao XM, Qin SC. Oxidative stress of platelet and atherosclerosis//Sheng Li Ke Xue Jin Zhan.- 2011.-42(1).-P.33-38.

418. Ziegelstein R.C., Meuchel J.,Kim T.J. et al. Selective serotonin reuptake ingibitor use by patients with acute coronary syndromes// Am. J. Med.-2007.-120(6).-P.525-530.